KR102526433B1 - 표고버섯 품종 중 산조701호 판별용 snp 마커 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

표고버섯 품종 중 산조701호 판별용 snp 마커 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

표고버섯 품종 중 산조701호 또는 참아람 판별용 SNP 마커 조성물 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명은 표고버섯 품종 중 산조701 또는 참아람을 빠르고 정확하게 판별할 수 있는 것이다. 이에 따라 표고버섯 염기서열에 특이적으로 결합하는 프라이머 및 melt curve를 이용하여 curve의 헤테로타입 또는 호모타입인지 여부를 통해 표고버섯 중 산조701 또는 참아람을 판별할 수 있다.

Description

표고버섯 품종 중 산조701호 판별용 SNP 마커 조성물 및 이의 용도{Development of SNP markers and use thereof for discrimination of Pyogo mushroom cultivar Sanjo-701}
본 발명은 표고버섯 품종 중 산조701호 판별용 SNP 마커 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 산림조합중앙회 산림버섯연구센터에서 개발하여 국내에서 주력으로 재배되고 있는 표고버섯 품종 중 산조701호 또는 참아람 판별용 SNP 마커 및 이를 이용한 HRM-PCR 분석에 관한 것으로서, 산조701호 또는 참아람의 특이적인 SNP를 포함하는 마커 서열인 RL-LE-202, RL-LE-203을 중합효소 연쇄반응 (PCR)으로 중폭시킬 수 있는 프라이머 서열, 상기 마커 서열과 프라이머 서열을 이용한 HRM-PCR 분석방법을 통해 위의 품종을 판별하는 방법에 관한 것이다.
표고(Lentinula edodes)는 주름버섯목(Agaricales)에 속하는 백색부후균으로, 나무의 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스, 리그닌을 분해하며 자란다. 지난 20여 년간 표고의 재배는 크게 증가하여, 현재는 세계 버섯 생산량의 약 22%를 구성하며 가장 많이 재배되는 식용버섯으로 알려져 있다. 한국, 중국, 일본 등 아시아 국가에서 주로 재배되며, 미국, 캐나다, 네덜란드 등 서구 국가에서도 상업적으로 재배되고 있다. 2019년 기준 표고버섯은 국내 임산버섯 생산량의 약 98%를 차지하며 약 2,018억 원의 생산액을 기록하였다. 표고는 다양한 영양소와 다당류가 풍부하고 맛과 향이 독특하여 요리 재료로 사용되고 있을 뿐만 아니라 항암효과, 면역조절, 항바이러스효과 등의 의학적 가치도 입증되고 있다.
한국은 2002년 UPOV에 가입하였고, 2008년부터 종자산업법에 의거해 표고가 품종보호 대상 작물로 지정되었다. 그리고 2010년 유전자원 접근 및 이익공유에 관한 나고야 의정서가 채택되어 2017년에 국내에 발효됨에 따라, 신품종 및 개발된 품종들에 대한 구별성 확보의 중요성이 증대되고 있다. 현재까지 약 57여 개의 표고 품종이 개발되어 출원 및 등록되어 있고, 품종들의 구별은 산림청에서 제작한 표고버섯 특성조사요령에 의해 외부 형태적 특성에 기반하여 이루어지고 있어 정확한 판별이 매우 어렵다.
분자 마커는 DNA의 염기서열의 차이를 기반으로 개체간 다형성을 나타내기 때문에 재배 환경이나 발달 단계에 영향을 받지 않고 신속하게 판별할 수 있다는 장점이 있다. 또한 조기 선발 및 계통 분석을 통한 육종기간의 단축과 육성을 위한 비용 감축도 가능하다. UPOV에서는 재현성 및 품종별 다형성이 높은 SSR (simple sequence repeat)이나 SNP (single nucleotide polymorphism) 마커 활용을 권장하고 있는데, 일반적으로 SSR을 이용한 변이 분석은 비용이 많이 소요되고 증폭 산물의 길이를 측정하여 비교하기 때문에 SNP 등 길이 차이가 없는 염기서열 변화는 확인이 어렵다는 단점이 있다. HRM (high-resolurion melting)은 증폭산물의 해리 온도 변화를 측정함으로써 GC 비율, 길이, 염기서열의 차이를 분석하는 방법으로, 저렴한 비용으로 빠른 시간 내 다수의 샘플을 분석할 수 있다.
산림조합 중앙회 산림버섯연구센터에서 개발된 산조701호와 참아람은 국내에서 가장 많이 선호되는 톱밥배지 종균으로, 2020년 두 종균의 선호율은 각각 45.2%, 25.2%였다. 산조701호는 버섯의 색이 밝고 육질이 매우 단단하며 개체중량이 무겁다는 특징을 지니고 있고, 참아람은 산조701호와 버섯수량이 비슷하면서도 낮은 온도에서 버섯생육 및 품질이 우수하여 출하시기 다변화가 가능하다는 장점을 가지고 있다.
본 발명자들은 표고버섯의 게놈 염기서열을 이용하여 국내에서 가장 많이 재배되고 있는 표고 품종인 산조701호 또는 참아람을 구분할 수 있는 SNP 마커 및 분석법을 개발하였다. 각 프라이머 쌍을 이용하여 증폭한 마커 서열의 해리 온도를 HRM 분석함으로써 상기 품종들을 간단하게 구분할 수 있는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 10-2032502
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본 발명은 표고버섯 품종인 산조701호 또는 참아람을 구분하기 위한 SNP 마커 조성물 및 이의 용도에 관한 것으로, 산조701호 또는 참아람을 빠르고 정확하게 판별할 수 있는 바이오 마커를 제공하는 것이다. 본 발명은 표고버섯 프라이머 쌍을 이용하여 증폭한 마커 서열의 해리 온도를 HRM 분석함으로써 상기 품종들을 간단하게 구분할 수 있는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 서열번호 2 및 서열번호 3의 각각의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는, 표고 품종 산조701호 판별용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 1로 표시되는 산조701호의 마커 서열 RL-LE-202에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 서열번호 5 및 서열번호 6의 각각의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는, 표고 품종 참아람 판별용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 4로 표시되는 참아람의 마커 서열 RL-LE-203에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 판별용 키트를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 산조701호 판별 방법:
(a) 표고버섯으로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 제1항에 따른 프라이머 세트를 포함하는 조성물을 이용하여, 상기 단계 (a)에서 분리된 DNA의 증폭반응을 수행하여 증폭 산물을 제조하는 단계;
(c) 상기 증폭 단계에서 melt curve를 측정하는 단계;
(d) 단계 (c)의 측정결과를 분석하는 단계; 및
(e) 측정결과가 Rl-LE-202 마커에 대해 헤테로 타입은 산조701로 판별하는 단계를 포함하는, 산조701호 판별 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 참아람 판별 방법:
(a) 표고버섯으로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 제2항에 따른 프라이머 세트를 포함하는 조성물을 이용하여, 상기 단계 (a)에서 분리된 DNA의 증폭반응을 수행하여 증폭 산물을 제조하는 단계;
(c) 상기 증폭 단계에서 melt curve를 측정하는 단계;
(d) 단계 (c)의 측정결과를 분석하는 단계; 및
(e) 측정결과가 Rl-LE-203 마커에 대해 헤테로 타입은 참아람으로 판별하는 단계를 포함하는, 참아람 판별 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 증폭 산물을 제조하는 단계 이후 95℃에서 7~13초간 가열한 뒤 60℃에서 95℃까지 초당 0.025℃씩 온도를 서서히 올리면서 melt curve를 측정하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 SNP 마커는 real-time PCR을 기반으로 HRM을 통해 분석하기 때문에 빠르고 간편하게 산조701호 및 참아람을 판별할 수 있고, 아가로즈 겔 확인 등의 PCR 산물을 확인하는 절차를 생략 가능하다. SNP를 동정하는데 있어서 특이적인 probe 없이 primer만 사용하므로 품종을 구분하는 데에 드는 비용을 줄일 수 있다.
균사 생장 단계에서도 정확한 판별이 가능하기 때문에 특정 품종 내지 계통을 굳이 재배하지 않아도 조기에 판별할 수 있고, 불법 유통된 종균으로 인한 품종혼입 예방과 상기 표고 균주들의 유통 시 품종인증 기술로의 활용이 가능하다.
도 1은 표고버섯 품종 중 산조701호 및 참아람의 염기서열과 프라이머에 관한 것이다.
도 2는 프라이머 서열을 이용하여 PCR을 수행하고 시퀀싱하여 변이를 나타낸 것이다.
도 3은 표고버섯 품종 중 산조701호 및 참아람을 PCR을 수행하고, HRM-PCR 분석을 수행한 결과에 대해 나타낸 것이다.
본 발명은 서열번호 2 및 서열번호 3의 각각의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는, 표고 품종 산조701호 판별용 바이오마커 조성물에 대해 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 서열번호 5 및 서열번호 6의 각각의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는, 표고 품종 참아람 판별용 바이오마커 조성물에 대해 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 상기 조성물 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 판별용 키트에 대해 제공하는 것이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 있어서, ‘뉴클레오타이드’는 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재하는 디옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드이며, 다르게 특별하게 언급되어 있지 않은 한 자연의 뉴클레오타이드의 유사체를 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990))
본 발명에 있어서, ‘단일염기다형성(SNP)’은 게놈에서 단일염기(A, T, C 또는 G)가 종의 멤버들 간 또는 한 개체(Individual)의 쌍 염색체 간에 다른 경우에 발생하는 DNA 서열의 다양성을 의미한다. 단일염기는 폴리뉴클레오타이드 서열에 변화(대체), 제거(결실) 또는 첨가(삽입)될 수 있다. SNP는 번역 프레임의 변화를 유발할 수 있다. 단일염기다형성은 유전자의 코딩 서열, 유전자의 비-코딩 부위 또는 유전자 사이의 내부 지역(Intergenic regions)에 포함될 수 있다. 유전자의 코딩 서열 내의 SNP는 유전암호의 중복성(Degeneracy)으로 인해 반드시 타겟 단백질의 아미노산 서열상에 변화를 일으키지는 않는다. 동일한 폴리펩타이드 서열을 형성하는 동의적(Synonymous)이라 하고 침묵 돌연변이라고도 불리는 SNP는 다른 폴리펩타이드 서열을 형성하는 SNP의 경우 비-동의적(Non-synonymous)이라고 한다. 비-동의적 SNP는 미스센스 또는 넌센스일 수 있으며, 미스센스 변화는 다른 아미노산을 발생시키는 반면에 넌센스 변화는 비성숙 종결코돈을 형성한다. 단백질-코딩부위가 아닌 곳에 존재하는 SNP는 유전자 사일런싱, 전사인자 결합 또는 비-코딩 RNA 서열을 유발시킬 수 있다.
본 발명에 있어서, ‘프라이머’는 올리고뉴클레오타이드를 의미하는 것으로, 핵산쇄(주형)에 상보적인 프라이머 연장 산물의 합성이 유도되는 조건, 즉, 뉴클레오타이드와 DNA 중합효소와 같은 중합제의 존재, 그리고 적합한 온도와 pH의 조건에서 합성의 개시점으로 작용할 수 있다. 구체적으로는, 프라이머는 디옥시리보뉴클레오타이드이며 단일쇄이다. 본 발명에서 이용되는 프라이머는 자연(Naturally occurring) dNMP(즉, dAMP, dGMP, dCMP 및 dTMP), 변형 뉴클레오타이드 또는 비-자연 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 또한, 프라이머는 리보뉴클레오타이드도 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, ‘프라이머‘는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(Complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 수 있다. 상기 프라이머로서 이용된 올리고뉴클레오티드는 또한 뉴클레오티드 유사체(Analogue), 예를 들면, 포스포로티오에이트(Phosphorothioate), 알킬포스포로티오에이트 또는 펩티드 핵산(Peptide nucleic acid)을 포함할 수 있거나 또는 삽입 물질(Intercalating agent)을 포함할 수 있다.
본 발명에 이용되는 ‘프라이머’로서, 상기 SNP를 포함하는 서열에 완전하게(Perfectly) 상보적인 서열이 이용될 수 있으나, 특이적 혼성화를 방해하지 않는 범위 내에서 실질적으로 상보적인 서열이 이용될 수도 있다. 구체적으로는, 본 발명에 이용되는 프로브는 본 발명의 SNP를 포함하는 10-30개의 연속 뉴클레오타이드 잔기를 포함하는 서열에 혼성화 될 수 있는 서열을 포함한다. 보다 구체적으로는, 상기 프로브의 3’-말단 또는 5’-말단은 상기 SNP 염기에 상보적인 염기를 갖는다. 일반적으로, 혼성화에 의해 형성되는 듀플렉스의 안정성은 말단의 서열의 일치에 의해 결정되는 경향이 있기 때문에, 3’-말단 또는 5’-말단에 SNP 염기에 상보적인 염기를 갖는 프로브에서 말단 부분이 혼성화 되지 않으면, 이러한 듀플렉스는 엄격한 조건에서 해체될 수 있다.
본 발명의 ‘키트’가 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우에는, 본 발명의 키트는 선택적으로 PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대 완충액, DNA 중합효소, DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.
또한, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 산조701호 판별 방법:
(a) 표고버섯으로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 제1항에 따른 프라이머 세트를 포함하는 조성물을 이용하여, 상기 단계 (a)에서 분리된 DNA의 증폭반응을 수행하여 증폭 산물을 제조하는 단계;
(c) 상기 증폭 단계에서 melt curve를 측정하는 단계;
(d) 단계 (c)의 측정결과를 분석하는 단계; 및
(e) 측정결과가 Rl-LE-202 마커에 대해 헤테로 타입은 산조701로 판별하는 단계를 포함하는, 산조701호 판별 방법에 대해 제공하는 것이다.
마지막으로, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 참아람 판별 방법:
(a) 표고버섯으로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 제2항에 따른 프라이머 세트를 포함하는 조성물을 이용하여, 상기 단계 (a)에서 분리된 DNA의 증폭반응을 수행하여 증폭 산물을 제조하는 단계;
(c) 상기 증폭 단계에서 melt curve를 측정하는 단계;
(d) 단계 (c)의 측정결과를 분석하는 단계; 및
(e) 측정결과가 Rl-LE-203 마커에 대해 헤테로 타입은 참아람으로 판별하는 단계를 포함하는, 참아람 판별 방법에 대해 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서, ‘HRM-PCR‘은 real-time PCR 기법을 기반으로 한 PCR 방법 중 하나이며, PCR 산물(product) 고유의 녹는 온도(melting temperature) 차이를 실시간으로 감지하여 PCR product의 서열 하나의 차이까지 구분하는 PCR 방법에 해당한다.
구체적으로 PCR product 가 만들어지면 그 PCR product 는 DNA 서열에 따라 고유의 Tm 값을 갖고, 이중가닥에 끼어들어가는 intercalating dye 는 PCR product 에 끼어들어가게 되고 형광 파장을 방출하게 된다. 이때 온도를 낮은 온도에서 높은 온도로 서서히 올리면, PCR 산물(product)은 고유의 Tm 값(특정온도) 에서 denaturation, 즉 이중 가닥 에서 단일 가닥으로 바뀌게 되고 형광 값이 급격히 떨어지게 된다. 이때의 온도를 녹는 온도(melting temperature)라 하며 이 녹는 온도(melting temperature)의 차이를 탐지하여 PCR product 에서 서열 하나의 차이까지 구분해 내는 기술을 나타낸다.
본 발명의 방법은 상기 키트와 동일한 방식, 프라이머를 이용하고 PCR 산물(product)의 녹는 온도(melting temperature)를 측정하기에, 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
<실시예 1> 표고버섯 염기서열 RL-LE-202 및 RL-LE-203과 프라이머
도면 1은 프라이머 서열을 이용한 PCR 방법으로 표고버섯 품종 산조701호, 참아람에서 증폭되는 마커 염기서열을 나타낸 것이다. 표 1의 표고균주들의 genomic DNA를 resequencing하여 표고버섯의 표준유전체 B17의 서열과 비교했다. DNA 추출 방법은 다음과 같다.
PDB배지에서 배양한 표고버섯 균사체를 미라클로스에 여과시킨 후 PBS버퍼(NaCl 135mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM)를 부어 씻어내고 키친타올로 물기를 제거하고, 건조된 균사를 액체질소에 얼려 막자사발로 곱게 갈은 후 GeneAll® GenEx™ Plant kit를 이용해 Genomic DNA를 추출하였다. 튜브에 옮겨 담은 균사에 PL버퍼 500ul를 넣고 65℃에서 10분간 가열해준 후 파이펫을 이용해 잘 섞어주고, 13000rpm으로 1분간 원심분리한 후 상층액을 분리하여 새 튜브로 옮겨준 후 PP버퍼를 상층액의 1/3만큼 넣고 볼텍서를 이용해 잘 섞어준다. 얼음에서 5분간 방치 후 13000rpm으로 5분간 원심분리하며 상층액을 분리하여 새 튜브로 옮기고 동량의 PCI(phenol : Chloroform : isoamylalcohol = 25 : 24: 1)를 넣어준 후 뒤집어 섞어준다. 13000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 분리하여 새 튜브에 옮기고, 동량의 isopropanol을 넣어준 후 뒤집어 섞어 준다. 얼음에 10분간 방치 후 13000rpm에서 1분간 원심분리하여, 상층액을 제거한 후 70% 에탄올 1ml를 넣어 DNA 펠렛을 살짝 띄우고 13000rpm에서 1분간 원심분리한다. 상층액을 제거한 후 13000rpm에서 1분간 한 번 더 원심분리한다. 남은 에탄올을 전부 제거하고 DNA 펠렛을 상온에서 5분간 건조시킨 후, RE버퍼 100ul를 넣어 DNA 펠렛을 녹인다.
서열 비교를 통해 산조701호, 참아람에 특이적인 변이가 생긴 염기서열을 찾았고, 이를 이용하여 프라이머를 제작한다.
번호 품종명 지리적 기원
1 산림10호 한국
2 가을향 한국
3 천장2호 한국
4 산마루1호 한국
5 산마루2호 한국
6 산백향 한국
7 수향고 한국
8 KFRI 31 일본
9 산조101호 한국
10 산조102호 한국
11 산조103호 한국
12 산조109호 한국
13 산조111호 한국
14 산조502호 한국
15 산조701호 한국
16 산조704호 한국
17 산조705호 한국
18 산조706호 한국
19 산조707호 한국
20 산조708호 한국
21 산조709호 한국
22 산조710호 한국
23 참아람 한국
<실시예 2> 시퀀싱을 통한 표고버섯 ‘산조701 및 참아람’의 SNP 확인
도면 2에서는 도면 1의 프라이머 서열을 이용하여 PCR을 수행하고 시퀀싱을 하여 변이를 확인한 결과를 나타낸 것이다. 표고버섯 표준유전체 균주인 B17과 표고버섯 품종 산조701호, 그리고 참아람에서 추출한 20ng의 genomic DNA를 이용하여 PCR을 수행하였다. PCR 조건으로는 95℃에서 3분, 다시 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 20초로 35사이클을 증폭한 후, 추가로 72℃에서 5분간 반응시킴으로써 수행되었다.
시퀀싱 결과를 대조하여 비교한 결과, 산조701호 또는 참아람에 특이적인 변이가 존재하는 것을 확인할 수 있었다. RL-LE-202 마커서열 부위의 경우 B17은 호모타입의 G, 산조701호는 헤테로타입의 GA가 확인되었고, RL-LE-203 마커서열 부위의 경우에는 B17에서 호모타입의 A, 참아람에서 헤테로타입의 AC가 확인되었다.
<실시예 3> 키트를 사용한 표고버섯 중 ‘산조701호 또는 참아람’ 품종 판별
도 3은 산조701호, 참아람을 마커 서열인 RL-LE-202, RL-LE-203에 결합하는 프라이머를 이용하여 PCR을 수행하고, melting curve를 측정한 결과이다. HRM 분석은 Applied Biosystems® MeltDoctor™ HRM Master Mix를 사용하여 수행하였다. 20ng의 genomic DNA 1㎕, 2X HRM Master Mix 10㎕, 10pmole/㎕의 프라이머 F, R 각 1㎕씩, DW 7㎕의 조성으로 총 20㎕의 혼합물을 이용하여 real-time PCR을 수행하였다. PCR 조건으로는 95℃에서 10분, 다시 95℃에서 15초, 54℃에서 30초, 72℃에서 30초로 40사이클을 수행하였고, 이후 95℃에서 10초간 가열한 뒤 60℃에서 95℃까지 초당 0.025℃씩 온도를 서서히 올리면서 melt curve를 측정하였다.
산조701호, 참아람을 포함하는 23개 균주를 대상으로 HRM-PCR 분석을 수행한 결과, Rl-LE-202 마커에 대해 산조701호의 경우 헤테로 타입으로 나타났고 나머지 균주들의 경우 호모타입으로 나타났다. RL-LE-203 마커에 대해서는 참아람의 경우 헤테로 타입, 나머지 균주들의 경우 호모타입으로 나타났다.
<110> Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Development of SNP markers and use thereof for discrimination of Pyogo mushroom cultivar Sanjo-701 or Chamaram <130> 21P151 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 104 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-202 <220> <221> mutation <222> (36) <223> Y is G or A <400> 1 gcttgatcaa ttcgttggaa gacaaygtca tccaaaccat tattcttcca agtgacagat 60 aatctgaacg ttgtcctctt tcaagatgtc caactttcca ttgc 104 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-202 F <400> 2 gcttgatcaa ttcgttggaa 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-202 R <400> 3 gcaatggaaa gttggacatc 20 <210> 4 <211> 104 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-203 <220> <221> mutation <222> (69) <223> Y is A or C <400> 4 gcttgatcaa ttcgttggaa gacaaygtca tccaaaccat tattcttcca agtgacagat 60 aatctgaacg ttgtcctctt tcaagatgtc caactttcca ttgc 104 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-203 F <400> 5 actcgttcgt gaagccatag 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RL-LE-203 R <400> 6 tcgggaatga agctgactta 20

Claims (9)

  1. 서열번호 1의 26번째 염기서열에 위치하는 단일염기다형성(SNP)를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 표고 품종 산조701호 판별용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제제는 서열번호 2 및 서열번호 3의 각각의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트인 것을 특징으로 하는, 표고 품종 산조701호 판별용 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항 또는 제2항의 표고 품종 산조701호 판별용 조성물 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약을 포함하는 표고 품종 산조 701호 판별용 키트.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함하는 것을 특징으로 하는 판별용 키트.
  7. 다음의 단계를 포함하는 표고 품종 산조701호 판별 방법:
    (a) 표고버섯으로부터 DNA를 추출하는 단계;
    (b) 서열번호 2 및 3의 염기서열로 표시되는 프라이머 세트를 이용하여, 상기 단계 (a)에서 분리된 DNA를 주형으로 증폭반응을 수행하여 증폭 산물을 제조하는 단계;
    (c) 상기 증폭 단계에서 melt curve를 측정하는 단계;
    (d) 단계 (c)의 측정결과를 분석하는 단계; 및
    (e) 서열번호 1의 26번째 염기서열에 위치하는 표고 품종 산조701호 판별용 단일염기다형성(SNP)에 대해 단계 (d)의 측정결과가 헤테로 타입인 경우 산조701호로 판별하는 단계;
  8. 삭제
  9. 제7항에 있어서, 상기 증폭 산물을 제조하는 단계 이후 95℃에서 7~13초간 가열한 뒤 60℃에서 95℃까지 초당 0.025℃씩 온도를 서서히 올리면서 melt curve를 측정하는 것을 특징으로 하는 판별 방법.
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