KR102512550B1 - 패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 BN82002를 유효성분으로 포함하는 패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것이다. 본 발명의 BN82002는 패혈증 마우스 모델의 생존율을 증가시키며, 패혈증 마우스의 혈액 내 염증성 사이토카인을 감소시키며, 패혈증에 의해 염증이 발생한 폐 및 간 조직의 염증 증상 및 염증성 사이토카인을 감소시키는 바, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for treatment of sepsis and septic shock}

본 발명은 패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 BN82002를 유효성분으로 포함하는 패혈증 및 패혈성 쇼크 치료용 약학적 조성물 등에 관한 것이다.

패혈증(sepsis)은 병원성 그람 음성 세균이 생체에 감염된 경우 세포벽 성분인 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)가 독소로 작용하여 생체의 면역체계가 과도하게 활성화됨으로써 유발되는 염증 반응으로서, 전신에 감염증을 일으키거나 증상이 심할 경우 쇼크를 동반하기도 한다. 구체적으로 패혈증은 악성종양, 백혈병, 악성림프종, 후천성면역부전증후군(AIDS), 교원병, 신부전, 간질환, 뇌혈관장해, 당뇨병 등의 기초질환을 가진 환자나 고령자, 미숙아 같은 체액성면역부전 또는 세포성면역부전을 가진 저항력이 약한 숙주가 부신스테로이드나 항종양제의 화학요법, 코발트 조사 등의 방사선치료 또는 유치카테테르, 혈액투석, 장기 이식, 심장수술 등의 처치, 수술을 받은 경우에 주로 발병한다. 패혈증은 병원 중환자 병동에 입원한 환자가 사망하는 주요한 원인이 되며, 이에 의한 치사율이 보통 30% 이상인 매우 심각한 질병이다. 의학기술의 발전에도 불구하고 아직도 전 세계적으로 수술 후유증으로 감염이 되어 패혈증이 발생하는 경우가 많으며, 신생아나 노인들과 같이 체내의 면역력이 약한 사람이 감염되었을 경우 패혈증으로 진행되는 경우도 많다. 대표적으로, 신생아 패혈증의 경우 만삭아 1,000명 중 3명 정도가 발생하는 것으로 알려져 있고, 미숙아는 발병률이 3 내지 4배 증가하는 것으로 알려져 있다.

패혈증에 걸렸을 경우 대개 항생제 치료를 받게 되지만, 적절한 처치가 늦어져 균들이 많이 증식했을 경우나 항생제에 내성이 강한 균주에 의해 감염이 되었을 경우에는 항생제만으로는 효과적인 치료를 할 수 없으며, 다양한 항생제에 대한 내성을 갖는 병원균이 점차 증가하고 있어 새로운 패혈증 치료제의 개발이 시급한 실정이다.

또한, 상기 패혈증은 감염 원인균과 숙주의 면역, 염증 그리고 응고계통 사이의 복잡한 상호작용의 결과로 발생하는 것으로 이해되고 있다. 숙주의 반응 정도와 감염 원인균의 특성 모두 패혈증의 예후에 중대한 영향을 미친다. 패혈증에서 관찰되는 장기부전은 숙주의 감염 원인균에 대한 반응이 부적절한 경우에 발생하며, 만일 숙주의 감염 원인균에 대한 반응이 지나치게 증폭된다면 숙주 자체의 장기손상을 유발할 수 있다. 이러한 개념을 바탕으로 숙주의 염증 반응에 주도적인 역할을 수행하는 전염증 사이토카인(proinflammatory cytokines)인 TNF-α, IL-1β, IL-6등에 대한 길항 물질이 패혈증의 치료제로 시도되고 있으며, 기계환기치료, 활성단백질 C(activated protein C) 투여, 글루코코르티코이드 치료 등이 현재 시도되고 있으나 여러 가지 한계점이 지적되고 있다.

따라서, 높은 사망률을 보임에도 아직까지 뚜렷한 치료제가 개발되지 않은 패혈증 및 패혈증 쇼크를 예방 또는 치료하기 위한 새로운 치료제에 대한 필요성이 요구되고 있다.

한국 공개특허 10-2020-0105423호

이에 본 발명자들은 BN82002가 패혈증 마우스 모델의 생존율을 증가시키며, 패혈증 마우스의 혈액 내 염증성 사이토카인을 감소시키며, 패혈증에 의해 염증이 발생한 폐 및 간 조직의 염증 증상 및 염증성 사이토카인을 감소시킴을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 BN82002 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 BN82002 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 BN82002는 하기 화학식 1로 표시될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

[화학식 1]

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 BN82002는 TNF-α, IL-1β, 또는 IL-6의 발현을 억제하는 효과가 있는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 BN82002는 패혈증에 의한 장기의 손상을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 BN82002가 0.001~50중량%로 포함되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조성물의 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료 약제를 생산하기 위한 용도를 제공한다.

본 발명의 BN82002는 패혈증 마우스 모델의 생존율을 증가시키며, 패혈증 마우스의 혈액 내 염증성 사이토카인을 감소시키며, 패혈증에 의해 염증이 발생한 폐 및 간 조직의 염증 증상 및 염증성 사이토카인을 감소시키는 바, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료에 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 BN82002 (20 mg/kg)의 처치에 따른 세균내독소 유도 급성 염증 반응에 대한 치료 효과를 실험동물의 생존율을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 BN82002의 내독소(LPS)/Poly(I:C)에 의해 급성 패혈증이 유도된 실험동물의 혈액을 채취하여, 혈액 내 염증성 사이토카인인 TNF-α(tumor necrosis factor-α)의 양을 측정한 ELISA 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 BN82002의 내독소(LPS)/Poly(I:C)에 의해 급성 패혈증이 유도된 실험동물의 혈액을 채취하여, 혈액 내 염증성 사이토카인인 IL-1β(Interleukin 1 beta)의 양을 측정한 ELISA 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 BN82002의 내독소(LPS)/Poly(I:C) 유도 급성 패혈증에 의해 동반되는 간 손상의 억제 효과를 확인한 것으로, ELISA를 통해 혈액 내 아스파르테이트아미노전달효소(AST)와 알라닌아미노전이효소(ALT)의 농도를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 BN82002의 내독소(LPS)/Poly(I:C) 유도 급성 패혈증 모델의 폐와 간에서, 염증성 사이토카인인 TNF-α의 유전자 발현을 Real-time PCR로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 BN82002의 내독소(LPS)/Poly(I:C) 유도 급성 패혈증 모델의 폐와 간에서, 염증성 사이토카인인 IL-6(interleukin-6)의 유전자 발현을 Real-time PCR로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 BN82002에 의한 내독소(LPS)/Poly(I:C) 유도 폐 손상 억제 효능을 확인하기 위해, 폐 조직을 H&E 염색을 통해 조직학적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 BN82002에 의한 내독소(LPS)/Poly(I:C) 유도 간 손상 억제 효능을 확인하기 위해, 간 조직을 H&E 염색을 통해 조직학적으로 분석한 결과를 나타낸 것이다.

본 발명은 본 발명은 BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 상기 조성물은 BN82002를 유효성분으로 포함하는 조성물일 수도 있고, 유효성분으로서 BN82002로 이루어진 조성물일 수도 있으며, 또는 유효성분으로서 BN82002가 필수적으로 구성되는 조성물일 수도 있다.

본 발명에서, “BN82002”는 CDC25 포스파테이즈 억제제로 알려져 있다. BN82002는 C₁₉H₂₅N₃O₄의 분자식(몰질량 359.4g/mol)으로 표시되며, 화학식 1의 구조를 갖는 화합물이다. 또한, BN82002는 IUPAC 이름 4-(dimethylamino)-2-methoxy-6-[[methyl-[2-(4-nitrophenyl)ethyl]amino]methyl]phenol으로 명명된다. 본 발명의 BN82002은 상업적으로 구입하여 사용하거나 또는 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조할 수 있다.

본 발명에서, 상기 BN82002는 하기 화학식 1로 표시될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

[화학식 1]

본 발명에서, 상기 BN82002는 TNF-α, 또는 IL-6의 발현을 억제하는 효과가 있는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 BN82002는 패혈증에 의한 장기의 손상을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 장기는 간, 신장, 폐, 및 심장으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 BN82002는 패혈증에 의한 폐 손상 또는 간 손상을 개선하는 효과가 있는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서의 용어 "패혈증"이란 미생물에 감염되어 전신에 심각한 염증 반응이 나타나는 상태를 말한다. 체온이 38℃ 이상으로 올라가는 발열 증상 혹은 36℃ 이하로 내려가는 저체온증, 호흡수가 분당 24회 이상으로 증가(빈호흡), 분당 90회 이상의 심박수(빈맥), 혈액 검사상 백혈구 수의 증가 혹은 현저한 감소 중 두 가지 이상의 증상을 보이는 경우, 이를 전신성 염증 반응 증후군(systemic inflammatory response syndrome; SIRS)이라고 부른다. 이러한 전신성 염증 반응 증후군이 미생물의 감염에 의한 것일 때 패혈증이라고 한다. 신체의 감염병소에서 병원균이 지속적 또는 단속적으로 혈류에 들어와 여러 장기조직에 정착하여 병소를 만들고 심한 전신 증상을 보이는 것으로, 유약자, 고령자, 쇠약자가 걸리기 쉽다. 원인균으로는 포도상구균, 연쇄상구균, 대장균, 녹농균, 결핵균, 폐렴간균, 진균, 혐기성균군 등이 있다. 현재까지 이에 대한 명확한 치료제가 없는 실정이다.

상기 “패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료”란, 패혈증에 연관된 임상 증상 및 다기관 기능부전 증후군에 연관된 상태(예를 들어 다양한 정도의 열, 저독소혈증, 사성, 빈맥, 내피염, 심근경색증, 고도착란, 변화성 정신 상태, 혈관 허탈 및 기관 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 응고장애, 심부전증, 신부전증, 쇼크 및(또는) 혼수상태 등)의 전부 또는 일부 증상을 감소, 개선 또는 제거하는 것을 의미한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 혈액 내 ALT(alanine aminotransferase), AST(aspartate aminotransferase) 활성 분석을 통한 장기손상 지표를 분석한 결과, BN82002가 간의 손상을 억제하는 것을 확인하였다 (본 발명의 실시예 5 참조).

본 발명에서 사용되는 용어 "AST(aspartate aminotransferase)"란 아스파테이트 아미노전이효소라고도 하며, 간 손상을 알아내는 일차적인 효소로 정상 상태에서는 AST가 간세포 내에 존재한다. 그러나 간이 손상을 받게 되면 상기 효소는 혈중으로 유입되어 혈액내 AST 수치가 높아진다. AST의 정상 범위는 혈청 1 리터당 5~40 단위이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "ALT(alanine aminotransferase)"란 알라닌 아미노전이효소라고도 하며, 간세포에 다량 존재하는 효소로 간질환에 특이적인 지표가 되는 효소이다. ALT의 정상범위는 혈청 1 리터당 7~56 단위이다. 상기 두 효소 모두 아미노 그룹을 공여 분자에서 수여분자로 전이시키는 세포내의 화학반응을 촉매하며, AST의 경우 정상적으로 간, 근육, 심장, 뇌를 포함한 다양한 조직에서 발견되나, ALT의 경우 간세포에 다량 존재하므로 간 상태를 나타내는 특이적인 지표가 된다.

본 발명은 또한, BN82002의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 허용 가능한 염"이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.

적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명의 조성물 내의 BN82002의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 메틸셀룰로오스나트륨, 메틸셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메틸셀룰로오스, 정제 쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메틸셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에틸셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 4000, 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에틸렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에틸렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에틸렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에틸, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에틸아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메틸아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에틸렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에틸렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

아울러, 본 발명은 BN82002을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서 식품은 기능성 식품 및 건강기능성 식품을 포함한다.

본 발명의 BN82002을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 BN82002을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 BN82002은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다.그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. BN82002 약물의 제조

BN82002는 Merck Millipore에서 구입하였으며, 10% DMSO, 40% PEG300, 5% 트윈-80, 45% 인산완충생리식염수 (PBS) 용액에 각각 10 mg/kg, 20 mg/kg 농도로 녹여 준비하였다. 약물 음성대조군(control)으로는 10% DMSO, 40% PEG300, 5% 트윈-80, 45% 인산완충생리식염수 (PBS) 혼합 용액을 사용하였다.

실시예 2. 급성패혈증 마우스 모델의 제작

급성 패혈증을 유도하기 위해 선천성 면역반응을 활성화 시키는 리포폴리사카라이드(LPS) 및 Poly(I:C)를 투여하여 급성 패혈증을 유발하였다. 먼저, Poly(I:C) 10 mg/kg를 복강 내 주사하고, 6시간 후에 LPS 54 mg/kg를 복강 내 주사하여 급성패혈증을 유발하였다. 대조군의 경우 동량의 PBS를 마우스의 복강 내에 주사하여 사용하였다.

실시예 3. 급성 패혈증에 대한 마우스의 생존율 확인

6주령의 C57BL/6마우스를 1주일간 실험실에 적응시킨 후에, 각 마우스에 준비된 BN82002를 200 μl씩 12시간 간격으로 3회 복강 내에 주사하였다. 마지막 약물 주사 후 12시간 후에 Poly(I:C) 10 mg/kg를 주사하고, 6시간 후에 LPS 54 mg/kg를 주사하여 급성 패혈증을 유도하였다. 24시간 간격으로 실험동물의 생존율을 확인하였다. 급성 패혈증을 유도하지 않은 군과 비교하여, Kaplan-Meier 생존 분석법을 활용해 그래프를 그렸다.

도 1에 나타난 바와 같이, BN82002은 Poly(I:C) 10mg/kg와 LPS 54mg/kg에 의해 활성화된 패혈증의 증상을 완화시키며, 마우스의 생존율을 높이는 것을 확인하였다. BN82002의 처치에 따라 Poly(I:C) 10mg/kg와 LPS 54mg/kg에 감소하던 실험동물의 생존율이 유의하게 증가됨을 확인하였다.

실시예 4. 급성 패혈증 동물모델의 혈액에서 염증성 사이토카인 단백질 발현 확인

TNF-α, IL-1β와 같은 염증성 사이토카인은 패혈증을 매개하는 중요한 인자로 알려져 있는 바, 패혈증 유도된 마우스의 혈액에서 BN82002가 상기 염증성 사이토카인의 발현에 미치는 영향을 확인하였다.

먼저, 6주령의 C57BL/6마우스를 1주일간 실험실에 적응시킨 후에, 각 마우스에 준비된 BN82002를 200 μl씩 12시간 간격으로 3회 복강 내 주사하였다. 마지막 약물 주사 후 12시간 후에 Poly(I:C) 10 mg/kg를 주사하고, 6시간 후에 LPS 54 mg/kg를 주사하여 급성 패혈증을 유도하였다. 2시간 후에 실험동물을 안락사 시켜, 혈액을 분석하였다. 염증 발생정도를 측정하기 위해서, 마우스의 혈액 내에서 사이토카인 (TNF-α, IL-1β)의 농도를 ELISA를 통해서 측정하였다. 마우스의 혈액은 안락사 시킨 마우스의 심장에서 채취하였으며, 패혈증 관련 사이토카인(TNF-α, IL-1β)의 변화를 ELISA(R&D system) 법으로 측정하였다. ELISA 실험법은 제조사에서 제공하는 방법으로 수행하였다.

그 결과, 도 2 및 도 3에 나타난 바와 같이, BN82002의 처리에 따라 농도 의존적으로 혈액 내 사이토카인 (TNF-α, IL-1β)의 농도가 감소하는 것을 확인하였다.

실시예 5. 급성 패혈증 동물모델의 혈액에서 간 독성 관련 효소 확인

급성 패혈증 발생시 수반되는 간 독성 및 간 손상 정도를 확인하기 위하여, 마우스의 혈액 내 AST 및 ALT의 농도를 측정하였다. 혈액은 안락사 후 대정맥에서 채취하였다. 마우스의 혈액내 AST 및 ALT 농도는 Biovision사의 AST, ALT activity Colorimetric Assay kit을 이용하여 측정하였으며, 실험법은 제조사에서 제공하는 방법으로 수행하였다.

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, BN82002 10mg/kg, 20mg/kg의 처리에 따라 급성 패혈증에 의해 증가된 AST 및 ALT의 농도가 유의하게 억제되었다.

실시예 6. 급성 패혈증 동물모델의 간 및 폐에서의 염증성 사이토카인 유전자 발현 확인

급성 패혈증은 마우스의 조직 내 염증을 유발하며, 특히 폐와 간에서 주요한 손상을 일으키게 된다. 이 때, 폐와 간 조직 내 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-6)의 유전자 발현이 증가되게 되는 바, BN82002가 상기 염증성 사이토카인의 폐 및 간에서의 발현에 미치는 영향을 확인하였다.

6주령의 C57BL/6마우스를 1주일간 실험실에 적응시킨 후에, 각 마우스에 준비된 BN82002를 200 μl씩 12시간 간격으로 3회 복강 내 주사하였다. 마지막 약물 주사 후 12시간 후에 Poly(I:C) 10 mg/kg를 주사하고, 6시간 후에 LPS 54 mg/kg를 주사하여 급성 패혈증을 유도하였다. 2시간 후에 실험동물을 안락사 시켜, 폐 및 간 조직을 분석하였다. 적출된 조직은 액체 질소로 급속 냉동시킨 후, 파쇄하여, 조직 내 mRNA를 추출하였다. 조직 내 mRNA는 TRIzol을 이용하여 추출하였으며, 표 1에 기재된 프라이머를 사용한 역전사 중합효소 연쇄 반응 및 실시간 중합효소 연쇄반응을 이용하여 유전자 발현을 측정하였다.

프라이머	시퀀스	서열번호
TNF-α_F	TGCCTATGTCTCAGCCTCTT	1
TNF-α_R	GAGGCCATTTGGGAACTTCT	2
IL-6_F	GACAAAGCCAGAGTCCTTCAGAGA	3
IL-6_R	CTAGGTTTGCCGAGTAGATCTC	4

그 결과, 도 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 마우스의 폐 및 간에서 염증 유도 유전자인 TNF-α, IL-6의 발현이 급성 패혈증 발생시에 증가하였다가, BN82002의 처리에 따라 농도 의존적으로 감소하는 결과를 나타내었다.

실시예 7. 급성 패혈증에 의한 폐 손상 및 간 손상 확인

폐와 간은 급성패혈증에 의해 손상되는 장기로서, 조직 내 염증 발생 및 조직의 파괴가 일어나게 된다. 급성패혈증 유도 2시간 후 안락사 시킨 마우스에서, 폐와 간을 즉시 적출하고, 이를 포르말린 용액에 1일간 고정 시킨 후 조직침투기(tissue processor), 및 포매 장치(paraffin embedder)를 사용하여 파라핀 블럭을 제조하였다. 만들어진 파라핀 블럭은 염색을 위하여 4 μm의 두께로 잘라 절편을 제작하였다. 그 다음 자일렌 용액에 3분간 세 번씩 담가 파라핀을 제거하고, 잔류하는 자일렌 제거를 위해 100 %의 고농도에서 70 %의 저농도 에탄올 용액 순으로 세척하였다. 10 분간 흐르는 물에 세척한 후 헤마톡실린 용액에 5분 간 염색하였다. 헤마톡실린 세척을 위하여 흐르는 물, 1% HCl/70% 에탄올 용액, 흐르는 물, 1% 암모니아/70% 에탄올, 흐르는 물 순으로 세척하였다. 에오신 용액에서 2분 간 염색한 후, 70 %의 저농도에서 100 %의 고농도 에탄올 순으로 탈수하였다. 자일렌에 3분 간 담가 투명화를 거친 후 봉입하여, 현미경으로 관찰하였다.

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, Poly(I:C) 및 LPS에 의해 유도된 폐 조직의 손상이 BN82002의 처리에 따라 완화되는 것을 확인하였다.

또한, 도 8에 나타난 바와 같이, Poly(I:C) 및 LPS에 의한 간 손상에 따라 증가되었던 면역세포의 침윤이 BN82002의 처리를 통해 억제된 것을 확인할 수 있었다.

이상의 실시예를 종합하여, 본 발명자들은 BN82002가 패혈증 마우스 모델의 생존율을 증가시키며, 패혈증 마우스의 혈액 내 염증성 사이토카인을 감소시키며, 패혈증에 의해 염증이 발생한 폐 및 간 조직의 염증 증상 및 염증성 사이토카인을 감소시킴을 확인하였다.

따라서, BN82002를 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 조성물로서, 의약품과 이들의 개발을 위한 물질에 이용할 수 있음을 알 수 있다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> Research & Business Foundation SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY <120> Pharmaceutical composition for treatment of sepsis and septic shock <130> MP21-020 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-alpha_F <400> 1 tgcctatgtc tcagcctctt 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-alpha_R <400> 2 gaggccattt gggaacttct 20 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6_F <400> 3 gacaaagcca gagtccttca gaga 24 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-6_R <400> 4 ctaggtttgc cgagtagatc tc 22

Claims (7)

1. BN82002 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서.
   상기 BN82002는 하기 화학식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   [화학식 1]
   

   

   
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 BN82002는 TNF-α, IL-1β, 또는 IL-6의 발현을 억제하는 효과가 있는 것을 특징으로 하는, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 BN82002는 패혈증에 의한 장기의 손상을 억제하는 것을 특징으로 하는, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 약학적 조성물은 BN82002가 0.001~50중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
6. BN82002 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   
7. 제6항에 있어서.
   상기 BN82002는 하기 화학식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는, 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   [화학식 1]
   

   

   
   

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