KR20200008890A - 시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물 - Google Patents

시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물 Download PDF

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KR20200008890A KR1020180083131A KR20180083131A KR20200008890A KR 20200008890 A KR20200008890 A KR 20200008890A KR 1020180083131 A KR1020180083131 A KR 1020180083131A KR 20180083131 A KR20180083131 A KR 20180083131A KR 20200008890 A KR20200008890 A KR 20200008890A
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양시영
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주식회사 시노비젠
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Abstract

시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물에 관한 것으로, 케모카인의 발현 감소; 전-염증성 사이토카인의 발현 감소; 염증성 매개체의 생성 감소; COX2의 발현 감소; 또는 PEG2의 생성을 감소시킴으로써, 면역세포의 증식을 억제할 수 있는 바, 아토피성 피부염의 예방 또는 치료에 유용하다.

Description

시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물{Composition for inhibiting immune cell proliferation Comprising Siallylactose or Derivatives Thereof}
시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물에 관한 것이다.
아토피성 피부염은 주로 유아기 혹은 소아기에 시작되는 만성적이고 재발성의 염증성 피부질환으로 소양증과 피부건조증, 특징적인 습관을 동반한다. 아토피성 피부염의 발병 원인은 아직 확실하게 알려져 있지 않은 상태이다. 임상 증상도 다양하게 나타나기 때문에 발병 원인이 어느 한 가지로만 설명될 수는 없지만, 환경적인 요인과 유전적인 소인, 면역학적 반응 및 피부 보호막의 이상 등이 주요 원인으로 여겨지고 있다.
한편, 모유 올리고당 중 3'-시알릴락토오스(3'-sialyllactose)는 장에 존재하는 세균 활성에 영향을 주는 항염증 특성을 가지고 있으며, 장내의 유용한 세균이 잘 성장할 수 있도록 도와준다는 보고가 있다(Izquierdo-Useros N et al., Plos Biol, 2012, 10). 시알릭락토오스는 모유 내 존재하므로 복용에 대한 부작용이 이미 검증되어 다양한 기능에 관한 연구가 진행 중이며, 면역세포 조절 차원에서의 시알릴락토오스의 연구 개발이 필요하다.
일 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 증식 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 증식 억제용 조성물을 제공한다. 상기 시알릴락토오스는 3'-시알릴락토오스일 수 있으며, 상기 시알릴락토오스는 이의 유도체를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 용어 "유도체"란 상기 3'-시알릴락토오스의 작용기를 도입, 치환, 산화, 환원 등에 의해서 모체의 구조와 성질을 대폭적으로 변화시키지 않는 한도에서 변화시킨 화합물을 의미한다. 이러한 작용기의 종류에는 제한이 없으며, 예컨대 각각 독립적으로 히드록시기, 페녹시기, 티에닐기, 푸릴기, 피리딜기, 시클로헥실기, 알킬알코올기, 알킬디알코올기, 또는 치환 또는 비치환된 페닐로 치환 또는 비치환된 C1 내지 C20의 비사이클릭 탄화수소기; 히드록시기, 히드록시메틸기, 메틸기, 또는 아미노기로 치환 또는 비치환된 C3 내지 C30의 사이클릭 탄화수소기; 또는 당 잔기를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 "당 잔기"란 다당류 분자로부터 1개의 수소 원자가 제거된 기를 의미하며, 따라서 예를 들어 단당류 또는 올리고당으로부터 유래된 잔기를 의미할 수 있다.
본 명세서에서, “치환된”은 별도의 정의가 없는 한, 작용기 중 하나 이상의 수소 원자가 할로겐(F, Cl, Br 또는 I), 히드록시기, 니트로기, 시아노기, 이미노기(=NH, =NR, R은 C1 내지 C10의 알킬기이다), 아미노기(-NH2, - NH(R'), -N(R")(R"'), R', R",R"'은 각각 독립적으로 탄소수 C1 내지 C10의 알킬기이다), 아미디노기, 히드라진기, 히드라존기, 카르복시산기, C1 내지 C20의 알킬기, C6 내지 C30의 아릴기, C3 내지 C30의 시클로알킬기, C3 내지 C30의 헤테로아릴기, 또는 C2 내지 C30의 헤테로시클로알킬기로 치환되는 것을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 시알릴락토오스 또는 시알릴락토오스 유도체가 안정성을 나타내는 pH의 범위는 pH 4 내지 pH10인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 3'-시알릴락토오스의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 화학식 1의 구조를 가지는 것을 특징으로 할 수 있다.
[화학식 1]
Figure pat00001
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"이란, 화합물이 투여되는 유기체에 심각한 자극을 유발하지 않고 화합물의 생물학적 활성과 물성들을 손상시키지 않는 화합물의 제형을 의미한다. 상기 약학적 염은, 약학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산, 예를 들어, 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 등과 같은 무기산, 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플로로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산, 살리신산 등과 같은 유기 카본산, 메탄설폰산, 에탄술폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산부가염이 포함된다. 예를 들어, 약학적으로 허용되는 카르복실산 염에는, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등에 의해 형성된 금속염 또는 알칼리 토금속 염, 라이신, 아르지닌, 구아니딘 등의 아미노산 염, 디시클로헥실아민, N-메틸-D-글루카민, 트리스(히드록시메틸) 메틸아민, 디에탄올아민, 콜린 및 트리에틸아민 등과 같은 유기염 등이 포함된다.
본 발명에 있어서, 상기 시알릴락토오스의 약학적으로 허용 가능한 염은 Na일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용한 시험 단일화합물은 3'-시알릴락토오스(3'-sialyllactose)로 화학구조식은 C23H38NO19Na이며, 모유에 많이 함유되어 있는 천연 유래의 단일화합물(single compound)이다.
일 구체예에 다른 조성물은 하기 하기 특성 중 하나 이상을 가질 수 있다:
1) 케모카인의 발현 감소;
2) 전-염증성 사이토카인의 발현 감소;
3) 염증성 매개체의 생성 감소;
4) COX2의 발현 감소; 및
5) PEG2의 생성 감소.
본 발명에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다. "제약상(약학적으로) 허용되는 담체"는 제제를 제제화하거나 또는 안정화시키는 것을 돕기 위해서 활성 성분에 추가될 수 있는 물질이고, 환자에게 유의한 해로운 독성 효과를 야기하지 않는다.
상기 담체는 환자를 자극하지 않고 본 발명에 따른 3'-시알릴락토오스의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 다른 담체는 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (E. W. Martin)]에 기재 되어 있다.
제약상 허용되는 담체는 멸균 주사 가능한 용액제 또는 분산액제를 즉각 투여용(extemporaneous)으로 제조하기 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 제약 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 조성물은 바람직하게는 비경구 주사용으로 제제화된다. 조성물은 용액제, 마이크로 에멀젼제, 리포좀제, 또는 높은 약물 농도에 적합한 기타 주문된 구조물로서 제제화될 수 있다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이것들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 일부 경우에, 조성물 중에 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함시킬 수 있다. 멸균 주사 가능한 용액제는 필요한 양의 6'-시알릴락토오스를 필요에 따라 상기 기재된 성분들 중 1 종 또는 이것들의 조합물과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후에 멸균 마이크로여과를 수행하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액제는 활성 화합물을 기본적인 분산 매질 및 상기 기재된 것들로부터의 기타 필요한 성분을 함유하는 멸균 비히클로 혼입시켜 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액제를 제조하기 위한 멸균 분말의 경우, 일부 제조 방법은 활성 성분 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 이것의 미리 멸균-여과시킨 용액으로부터 생성하는 진공 건조 및 냉동-건조(동결건조)이다.
본 발명은 면역세포의 증식을 억제하기에 유효한 양의 상기 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 면역세포 증식을 억제하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 아토피성 피부염의 예방 또는 치료하기에 유효한 양의 상기 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 아토피성 피부염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 고통받는 환자의 중증도에 따라 달라질 수 있는 투여량 및 빈도로 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 조성물은 필요에 따라 볼루스로서 또는 연속 주입에 의해 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.
다른 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 상기 시알릴락토오스의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
일 구체예에 따른 조성물은 하기 특성 중 하나 이상일 가질 수 있다;
1) 피부 표피 두께의 감소;
2) 피부 진피 두께의 감소; 및
3) 비만세포의 수 감소.
일 실시예에서 시알릴락토오스를 경구 투여한 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께가 감소하였고, 구체적으로, 피부 표피 및 진피의 두께가 감소하는 것을 확인하였다. 또한, 마우스 귀에서 비만세포의 수가 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 시알릴락토오스는 아토피성 피부염의 알레르기 반응 또는 염증을 완화시킴으로써, 피부의 두께를 감소시킬 수 있다.
다른 양상은 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방또는 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다. 상기 시알릴락토오스의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 발명의 식품은, 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태로 제조할 수 있다. 예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 시알릴락토오스를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지, 콘비프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치츠 등), 식용식물유지, 마가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 시알릴락토오스를 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 건강 기능식품 또한, 식품 조성물로서 기능성 식품, 영양보조제, 건강식품, 식품 첨가제 등의 다양한 형태를 포함하는 것이며, 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태, 예컨대, 앞서 언급한 시알릴락토오스를 차, 쥬스, 드링크의 형태로 제조하거나, 과립화, 캡슐화, 분말화 하거나, 이러한 화합물 또는 추출물을 음료, 과실 및 가공식품, 어류, 육류 및 그 가공식품, 빵류, 면류, 조미료 등 각종 식품에 첨가하여 제조함으로써 제공될 수 있다.
상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 3'-시알릴락토오스는 FLS, 대식세포 및 호중구의 증식을 유의적으로 감소시키고, 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현을 유의적으로 감소시킬뿐만 아니라, 염증성 매개체의 생성을 감소시킴으로써 면역세포의 증식을 억제할 수 있으므로 면역세포 활성을 조절할 수 있다. 또한, 비만세포의 수를 감소시킴으로써 알레르기 반응을 억제할 수 있는바 아토피성 피부염의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 발명의 시알릴락토오스는 케모카인의 발현 감소; 전-염증성 사이토카인의 발현 감소; 염증성 매개체의 생성 감소; 또는 COX2의 발현을 감소시킴으로써, 면역세포의 증식을 억제할 수 있다. 또한, 아토피성 피부염의 알레르기 반응 또는 염증을 완화시킬 수 있는바, 아토피성 피부염의 예방 또는 치료에 유용하다.
도 1a는 마우스 발목 및 무릎 관절의 활액조직에서 증식된 FSL(A), 대식세포(B) 및 호중구(C)를 항-CD90.2, -CD68 및 알라스타제(elastase)로 염색한 사진이고, 도 1b는 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절에서 FLS(A), 대식세포(B), 및 호중구(C)의 증식을 정량화한 그래프이다.
도 2a는 계대수별 마우스 FLS 표면에서의 마커 발현을 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이고(A: CD90.2; B: CD14), WST-1 assay를 통해 세포 독성을 확인한 그래프이며(C), 도 2b는 IL-1β로 처리한 마우스 FLS에서 락토오스, 시알릴락산 및 3'-시알릴락토오스에 의한 Mmp3, Mmp13 및 COX2의 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 3a는 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에서의 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토사인의 발현 여부를 나타낸 것이다. (A) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 1ng/mL를 처리하고 0, 12, 및 24시간 후에 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현을 관찰한 것이다. (B) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 1ng/mL 및 0, 100, 및 250 μM의 3'-시알릴락토오스를 처리하고, 24시간 후 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현을 관찰한 것이다. (C) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 및 3'-시알릴락토오스를 처리한 후, PGE2 생성을 확인한 그래프이다. (D) 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절의 활막 조직에서 대표적인 케모카인, 전-염증성 사이토카인 및 COX2의 면역조직화학적 염색 결과를 나타낸 것이다. (E) 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절에서의 CCL2, CXCL1, IL-6, 및 COX2 발현을 정량화한 그래프이다.
도 3b는 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에서 IL-1β, IL-6, IL-17 및 TNF-a에 의해 증가된 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 3'-시알릴락토오스에 의한 억제 여부를 나타낸 것이다. (A) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 1ng/mL를 처리한 후, 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현이 억제를 확인한 그래프이다. (B) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-6 50ng/mL를 처리한 후, 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현 억제를 확인한 결과이다. (C) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-17 10ng/mL를 처리한 후, 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현 억제를 확인한 그래프이다. (D) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 TNF-a 50ng/mL를 처리한 후, 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현 억제를 확인한 그래프이다.
도 4a는 3'-시알릴락토오스를 경구 투여하기 전 및 투여 후 28일 째에 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께 변화를 나타낸 사진이고, 도 4b는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께 변화를 나타낸 그래프이다. 도 4c는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 피부를 H&E 염색한 후 현미경으로 관찰한 사진이고, 도 4d는 톨루이딘블루(toluidine blue)로 염색한 후 현미경으로 관찰한 사진이다. 도 4e는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 표피 및 진피의 두께를 측정한 그래프이고, 도 4f는 톨루이딘불루로 염색한 후 귀 피부에서 비만세포(mast cell)의 수를 확인한 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 3'-시알릴락토오스에 의한 면역 세포 활성 조절 확인
1-1. FLS 및 면역세포의 증식 억제
3'-시알릴락토오스의 면역세포 증식 억제 효과를 확인하기 위하여, 류마티스 관절염 모델 마우스의 발목 및 무릎 관절을 hematoxylin 및 사프라닌-O로 염색하였다.
도 1a는 마우스 발목 및 무릎 관절의 활액조직에서 증식된 FSL(A), 대식세포(B) 및 호중구(C)를 항-CD90.2, -CD68 및 알라스타제(elastase)로 염색한 사진이고, 도 1b는 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절에서 FLS(A), 대식세포(B), 및 호중구(C)의 증식을 정량화한 그래프이다.
도 1a 및 도 1b에 나타난 바와 같이, 3'-시알릴락토오스의 처리에 의해 FLS, 대식세포 및 호중구의 증식이 유의적으로 감소하였음을 확인할 수 있었다. 즉, 3'-시알릴락토오스는 면역세포의 증식을 감소시킬 수 있다.
1-2. 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현 감소
3'-시알릴락토오스에 의한 항-케모카인 및 항-염증 효과를 확인하였다. 이에 앞서, FACS 분석을 통해 마우스 FLS의 순도를 확인한 후, WST-1 분석을 사용하여 FLS에 대한 3'-시알릴락토오스의 증식 및 세포독성의 부재를 확인했다(도 2a 참조). 또한, in vitro 분석에서 3'-시알릴락토오스에 대한 대조군으로서 시알릴락산 및 락토오스를 사용하였으며, 결과에 유의적 차이가 없음을 확인하였다(도 2b 참조). 따라서, 이후의 in vitro 실험에서 3'-시알릴락토오스는 0-250μM의 농도로 사용하였다. IL-1
Figure pat00002
-, IL-6-, IL-17-, 및 TNF-α-에 의해 유발된 케모카인(예를 들어, CCL2, CCL5, CCL7, CXCL1, CXCL2, 및 CXCL5), 전-염증성 사이토카인(IL-1, IL-6, 및 TNF-α), 및 COX2 발현에 대한 3'-시알릴락토오스의 효과를 조사하기 위해, IL-1-, IL-6-, IL-17-, 및 TNF-α로 자극시킨 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS를 24시간 동안 3'-시알릴락토오스(100 또는 250 μM)로 처리하였다.
도 2a는 계대수별 마우스 FLS 표면에서의 마커 발현을 FACS로 분석한 결과를 나타낸 것이고(A: CD90.2; B: CD14) WST-1 assay를 통해 세포 독성을 확인한 그래프이며(C), 도 2b는 IL-1β로 처리한 마우스 FLS에서 락토오스, 시알릴락산 및 3'-시알릴락토오스에 의한 Mmp3, Mmp13 및 COX2의 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 3a은 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에서의 3'-시알릴락토오스에 의한 케모카인 및 전-염증성 사이토사인의 발현 여부를 나타낸 것이다. (A) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 1ng/mL를 처리하고 0, 12, 및 24시간 후에 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현을 관찰한 것이다. (B) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 1ng/mL 및 0, 100, 및 250 μM의 3'-시알릴락토오스를 처리하고, 24시간 후 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 발현을 관찰한 것이다. (C) 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에 IL-1β 및 3'-시알릴락토오스를 처리한 후, PGE2 생성을 확인한 그래프이다. (D) 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절의 활막 조직에서 대표적인 케모카인, 전-염증성 사이토카인 및 COX2의 면역조직화학적 염색 결과를 나타낸 것이다. (E) 발목(왼쪽) 및 무릎(오른쪽) 관절에서의 CCL2, CXCL1, IL-6, 및 COX2 발현을 정량화한 그래프이다.
도 3b는 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에서 IL-1β, IL-6, IL-17 및 TNF-a에 의해 증가된 케모카인 및 전-염증성 사이토카인의 3'-시알릴락토오스에 의한 억제 여부를 나타낸 것이다.
도 3b에 나타난 바와 같이, 3'-시알릴락토오스는 IL-1β- (A), IL-6- (B), IL-17- (C), 및 TNF-α (D)로 자극시킨 인간 RA-FLS 및 마우스 FLS에서 케모카인, 전-염증성 사이토카인 및 COX2의 발현 수준을 현저하게 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 3'-시알릴락토오스는 케모카인, 염증성 사이토카인 및 IL-1β-, IL-6-, IL-17-, 및 TNF-α로 자극시킨 FLS에 의해 분비되는염증성 매개체의 생성을 감소시킬 수 있다.
실시예 2. 시알릴락토오스에 의한 아토피 억제 확인
3'-시알릴락토오스의 아토피 억제 효능을 확인하기 위하여, 3'-시알릴락토오스 100㎎/㎏ 또는 500㎎/㎏를 경구 투여한 후, 28일 경과 후의 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께를 관찰하였다. 또한, 상기 마우스의 왼쪽 귀 피부를 얇게 섹션하여 hematoxylin 및 eosin (H&E)로 염색, toluidine blue로 염색하였다.
도 4a는 3'-시알릴락토오스를 경구 투여하기 전 및 투여 후 28일 째에 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께 변화를 나타낸 사진이고, 도 4b는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 두께 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4a 및 4b에 나타난 바와 같이, 아토피성 피부염 모델 마우스에 3'-시알릴락토오스를 경구 투여한 경우, 마우스의 귀 두께가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 3'-시알릴락토오스는 아토피성 피부염의 염증을 완화시킴으로써, 피부의 두께를 감소시킬 수 있다.
도 4c는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 피부를 H&E 염색한 후 현미경으로 관찰한 사진이고, 도 4d는 톨루이딘블루(toluidine blue)로 염색한 후 현미경으로 관찰한 사진이다.
도 4e는 아토피성 피부염 모델 마우스의 귀 표피 및 진피의 두께를 측정한 그래프이다.
도 4e에 나타난 바와 같이, 아토피성 피부염 모델 마우스에 3'-시알릴락토오스를 경구 투여한 경우, 귀 표피 및 진피의 두께가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 3'-시알릴락토오스의 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
도 4f는 톨루이딘불루로 염색한 후 귀 피부에서 비만세포(mast cell)의 수를 확인한 그래프이다.
도 4f에 나타난 바와 같이, 3'-시알릴락토오스의 농도 의존적으로 비만세포의 수가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 3'-시알릴락토오스는 아토피성 피부염에서 비만세포의 수를 감소시킴으로써, 알레르기 반응을 억제할 수 있다.
통계분석
본 발명의 모든 실시예의 결과들은 만킨 스코어(Mankin score) 같은 서수 등급 시스템에 기반하여 정량된 데이터로 비모수(non-parametric) 통계학적 방법들을 이용하여 분석하였다. 상대적인 배수 변화(fold changes)로 표시된 qRT-PCR 데이터는 먼저 샤피로-윌크(Shapiro-wilk) 검정을 이용하여 정규 분포(normal distribution)을 확인한 후 쌍대 비교(pair-wisecomparisons) 및 다중 비교(multi-comparisons)를 위해 각각 Student's t-검정 및 사후검정(post hoc test)을 포함하는 ANOVA(analysis of variance)를 이용하였다. 통계적으로 유의성은 0.05 레벨의 확률로 받아들여졌다 (P < 0.05).
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (10)

  1. 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 면역세포 증식 억제용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 시알릴락토오스는 3'-시알릴락토오스인 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 3'-시알릴락토오스의 염은 하기 화학식 1의 구조를 가지는 것인 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00003
    .
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 하기 특성 중 하나 이상을 가지는 것인 조성물:
    1) 케모카인의 발현 감소;
    2) 전-염증성 사이토카인의 발현 감소;
    3) 염증성 매개체의 생성 감소;
    4) COX2의 발현 감소; 및
    5) PEG2의 생성 감소.
  5. 청구항 1에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  6. 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 시알릴락토오스는 3'-시알릴락토오스인 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 3'-시알릴락토오스의 염은 하기 화학식 1의 구조를 가지는 것인 조성물:
    [화학식 1]
    Figure pat00004
    .
  9. 청구항 6에 있어서, 하기 특성 중 하나 이상을 가지는 것인 조성물:
    1) 피부 표피 두께의 감소;
    2) 피부 진피 두께의 감소; 및
    3) 비만세포의 수 감소.
  10. 시알릴락토오스(sialyllactose) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염의 예방 또는 개선용 건강기능성 식품 조성물.
KR1020180083131A 2018-07-17 2018-07-17 시알릴락토오스 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 면역세포의 증식 억제용 조성물 KR20200008890A (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN114886119A (zh) * 2022-06-10 2022-08-12 江南大学 3’-唾液酸乳糖在制备缓解食物过敏的功能性食品中的应用
WO2023085741A1 (ko) * 2021-11-10 2023-05-19 충남대학교산학협력단 3'-시알릴락토오스, 6'-시알릴락토오스 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 감염에 의한 다발성 장기부전의 예방 또는 치료용 조성물

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