KR102504441B1 - 코스모스 유래 유산균 및 세이지 추출물을 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법 - Google Patents
코스모스 유래 유산균 및 세이지 추출물을 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 코스모스를 준비하는 단계, 준비된 코스모스를 한천 배지에 도말하여 30 내지 40℃에서 40 내지 55시간 배양하는 단계, 배양된 배지에서 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)을 분리하는 단계, 세이지잎, 정제수 및 부틸렌글리콜을 포함하는 세이지 추출물을 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)과 혼합하여 혼합액을 제조하는 단계, 상기 혼합액을 상온에서 1.5 내지 2.5 시간 에이징하는 단계 및 상기 에이징된 혼합액에 베타인을 첨가하는 단계를 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법을 제공한다.
Description
본 발명은 코스모스 유래 유산균 및 세이지 추출물을 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
우리 나라에도 이미 300 여종이 존재하고 있는 것으로 알려져 있는 국화과(Compositae) 식물은 현화 식물 중 세계에서 가장 넓게 분포하고 쌍자엽 식물 중에서도 진화된 식물 분류군에 속하며, 민간에서는 약용 및 식용 소재로 오래전부터 다양하게 사용되어 왔다.
특히, 코스모스는 한의학에서 약재로도 사용되고 있음에도 불구하고 관상용이라는 인식이 강한 편에 속한다. 몇몇 연구에서 코스모스의 각 부위에 따라 DPPH radical 소거활성, ABTS radical 소거활성, tyrosianase 활성 억제 효과, 항염증 활성 효과에 대한 연구가 진행되어 생리적 활성과 약리적 효능에서 관심을 가질 만한 소재로 여겨지기도 했다.
코스모스는 여름에서 가을까지 장시간에 걸쳐 재배 공간에 구애받지 않고 발육이 좋으며 생육기간 동안 관리가 필요하지 않는 특성이 있어 저비용의 청정 식물로서 원료 공급에서 장점을 가진다. 코스모스 유래 유익 성분의 피부 적용에 대한 연구가 다양하게 이루어지고 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 코스모스 유래 유산균을 추출하여, 효과적인 화장료 조성물의 첨가제로 이용할 수 있는 코스모스 유래 유산균 및 세이지 추출물을 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 코스모스를 준비하는 단계, 준비된 코스모스를 한천 배지에 도말하여 30 내지 40℃에서 40 내지 55시간 배양하는 단계, 배양된 배지에서 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)을 분리하는 단계, 세이지잎, 정제수 및 부틸렌글리콜을 포함하는 세이지 추출물을 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)과 혼합하여 혼합액을 제조하는 단계, 상기 혼합액을 상온에서 1.5 내지 2.5 시간 에이징하는 단계 및 상기 에이징된 혼합액에 베타인을 첨가하는 단계를 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기에서 제조된 유산균 첨가제를 1액으로 준비하는 단계, 정제수, 다이소듐이디티에이, 글리콜계 화합물, 디올계 화합물 및 글리세린을 혼합하여 2액으로 준비하는 단계, 잔탄검, 카보머 및 알지닌을 혼합하여 3액으로 준비하는 단계 및 상기 1액 내지 3액을 혼합하는 단계를 포함하는 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 코스모스 유래 유산균 및 세이지 추출물을 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법은 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)이 항산화 및 피부 보습효과에 유리하면서, 세이지 추출물과 혼합하여 첨가제를 제조시에 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)이 세이지 추출물에 존재하는 자극 성분을 효과적으로 줄이면서도, 항산화 및 보습 효과를 가져올 수 있다.
또한, 이를 이용한 화장료의 제조방법은 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)이 화장료 조성물에 효과적으로 혼합되어 마스크팩 또는 앰플에 적용하여 이용 시, 피부에 존재하는 유익 미생물을 활성화시켜서 탄력 및 주름이 개선될 수 있다.
도 1은 본 발명 실시예 1의 유산균 첨가제를 촬영한 사진이다.
도 2는 본 발명 제조예 1 내지 4의 플라보노이드 분석 그래프이다.
도 3은 본 발명 제조예 1 내지 4의 폴리페놀 분석 그래프이다.
도 4는 본 발명 제조예 1 내지 4의 항산화 효과 측정 그래프이다.
도 5는 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물의 사용 전 및 사용 후(4주 후)의 눈가 주름을 촬영한 사진이다.
도 6은 본 발명 실시예 1 내지 9 및 비교예 1의 α-thujone 함량을 측정한 그래프이다.
도 7은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 앰플에 적용시 피부내 유익균 변화를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 마스크팩에 적용시 피부내 유익균 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명 제조예 1 내지 4의 플라보노이드 분석 그래프이다.
도 3은 본 발명 제조예 1 내지 4의 폴리페놀 분석 그래프이다.
도 4는 본 발명 제조예 1 내지 4의 항산화 효과 측정 그래프이다.
도 5는 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물의 사용 전 및 사용 후(4주 후)의 눈가 주름을 촬영한 사진이다.
도 6은 본 발명 실시예 1 내지 9 및 비교예 1의 α-thujone 함량을 측정한 그래프이다.
도 7은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 앰플에 적용시 피부내 유익균 변화를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 마스크팩에 적용시 피부내 유익균 변화를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명의 다양한 실시예가 첨부된 도면을 참조하여 기재된다. 본 발명은 특정 실시예에 대해 한정되지 아니며, 본 발명의 실시예들의 다양한 변경(Modification), 균등물(Equivalent) 및/또는 대체물(Alternative)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 도면의 설명과 관련하여, 유사한 구성요소에 대해서는 유사한 참조 부호가 사용될 수 있다.
본 문서에서, "가진다", "가질 수 있다", "포함한다", 또는 "포함할 수 있다" 등의 표현은 해당 특징(예: 수치, 기능, 동작, 또는 부품 등의 구성요소)의 존재를 가리키며, 추가적인 특징의 존재를 배제하지 않는다.
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이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 명세서에 기재된 실시예의 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일부 실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이하에서는 본 발명에 대하여, 구체적으로 설명한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 유산균 첨가제의 제조방법은 코스모스를 준비하는 단계, 준비된 코스모스를 한천 배지에 도말하여 30 내지 40℃에서 40 내지 55시간 배양하는 단계, 배양된 배지에서 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)을 분리하는 단계, 세이지잎, 정제수 및 부틸렌글리콜을 포함하는 세이지 추출물을 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)과 혼합하여 혼합액을 제조하는 단계, 상기 혼합액을 상온에서 1.5 내지 2.5 시간 에이징하는 단계 및 상기 에이징된 혼합액에 베타인을 첨가하는 단계를 포함한다.
상기 코스모스는 학명으로 Cosmos bipinnatus이며, 영어로는 garden cosmos 또는 Mexican aster로서 멕시코가 원산지인 코스모스속의 한해살이풀이다. 한국 고유어로는 살사리꽃이라고도 부른다. 코스모스의 높이는 약 1.5m에서 2m이다. 줄기는 곧게 서며 털 없이 가지가 많이 갈라진다. 잎은 마주나고 2회 깃꼴겹잎이며 갈라진 조각은 선 또는 바소 모양이다. 꽃은 6월부터 10월까지 피며 줄기와 가지 끝에 한 개씩 달린다. 두화의 지름은 약 6cm이며 설상화는 6에서 8개이고 색상은 품종에 따라 흰색, 분홍색, 보라색으로 다양하다. 열매는 수과로 털이 없다.
상기 코스모스의 잎과 줄기를 분쇄한 후, 멸균한 생리 식염수에 현탁 및 세척하여 준비한다.
상기 준비한 코스모스를 한천 배지에 도말하는 것은 세척한 코스모스 분쇄물의 물기를 털어내는 것이고, 디프코 락토바실리 MRS 아가®(Difco Lactobacilli MRS Agar®) 배지에 배양하는 것일 수 있다. 이때 배양은 30 내지 40℃에서 40 내지 55시간 혐기 조건의 챔버에서 배양하는 것일 수 있다.
배양된 배지에서 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)을 분리하는 단계는 상기 배지에 배양된 백색 집락을 보이는 콜로니를 취하는 것일 수 있다.
상기 세이지 추출물은 세이지잎, 정제수 및 부틸렌글리콜을 포함하여 제조하는 것일 수 있다.
상기 세이지는 꿀풀과 뱀차조기속의 아관목 중 하나로 학명은 Salvia officinalis라 칭한다. 세이지는 잎을 말려 사용하는데, 강장작용 외에 신경계통이나 소화기계통에 뛰어난 약효가 있다. 방부, 항균, 항염 등 살균·소독작용도 해서 각종 염증의 소염제로도 쓰인다. 중풍이나 손발이 저려서 고생할 때, 심한 운동 후 피로와 통증이 몰려올 때 먹으면 효과가 있다. 세이지의 잎과 꽃은 향기가 좋으며 줄기는 나무 같고, 잎은 부드럽고 폭신하다.
상기 세이지 추출물은 정제수, 부틸렌 글리콜에 세이지의 잎을 분쇄하여 1 내지 2일 상온에서 추출하여 얻어지는 것일 수 있다. 상기 추출물을 와트만 여과지로 여과하고 나서, 냉각 콘덴서가 달리 추출장치를 이용하여 30 내지 40℃에서 감압 농축할 수 있다.
상기 정제수는 당 업계에 통상적으로 사용되는 정제수, 초순수 정제수를 이용할 수 있으며, 바람직하게는 초순수 정제수를 이용할 수 있다. 일반 정제수는 제약, 화장품 등에 일반적으로 사용되는 물로서, 순도를 나타내는 용존 고형분이 1.0 내지 0.5ppm이고, 정제수 제조 시 미립자 및 미생물의 제거를 위해 사용하는 필터의 사이즈가 0.2 내지 0.45㎛이며, pH는 약산으로부터 약알칼리까지 다양하다. 상기 초순수 정제수는 용존 고형분이 0.03ppm으로 순도가 매우 높고, 초순수 정제수 제조 시 사용되는 필터의 사이즈는 0.001㎛로서 이를 이용하여 미생물이 99.99% 제거된 것이다. 특히, 초순수 정제수는 금속이온의 제거로 조성물의 자동산화 반응을 방지할 뿐만 아니라 금속 이온에 의한 폴리머 뭉침 현상을 방지할 수 있어, 저자극이면서도 제형이 고르게 도포될 수 있도록 한다.
이렇게 하여 얻어진 세이지 추출물의 일부를 덜어내어, 상기 배지에서 얻어진 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)과 혼합하여 혼합액을 제조한다.
세이지 추출물은 유효 성분으로서 α-thujone, 1,8-cineole 및 camphor을 포함하고 있다. 상기 α-thujone, 1,8-cineole 및 camphor는 통상적인 세이지 추출물 내에서 중량비로서, 17.2 내지 27.4 : 11.9 내지 26.9 : 12.8 내지 21.4의 비율을 가질 수 있다.
여기서, α-thujone은 근육을 마비하는 소재나 사용하고 마취제로도 이용되는 성분으로 피부 자극을 유발할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus)을 상기 세이지 추출물과 혼합하고, 에이징 단계를 진행할 시에 이 α-thujone의 함량을 줄일 수 있는 효과를 가질 수 있다. 여기서, 상기 혼합액의 에이징은 상온에서 1.5 내지 2.5 시간 에이징하는 것으로, 상기 유산균이 세이지 추출물의 α-thujone 성분을 모노테르펜인 cineole로 변환시켜 자극 성분을 감소시킬 수 있다.
상기 에이징된 혼합액에 베타인을 첨가하는 단계는 유산균 첨가제의 접착성을 확보하여, 화장료 조성물에 적용시 피부 흡착성을 높기 위함이다. 상기 베타인은 화학식 C5H11NO2 흰색의 결정으로서 약간의 냄새와 단맛이 있으며, 식품첨가물로 이용 시 명아주과 사탕무의 당밀을 분리·정제하여 얻어진다. 물에 잘 녹으며, 수용액의 pH는 약 5.0 내지 7.0이다.
상기 베타인을 유산균 첨가제에 추가함으로써, 유산균의 생육 및 세이지 추출물의 유효 성분을 유지하면서도, 겔화를 진행하여 피부에 적용시의 접착성을 보다 유효하게 확보할 수 있다.
상기 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus), 세이지 추출물 및 베타인은 중량비로 1 : 0.4 내지 0.8 : 0.2 내지 0.4인 것이 바람직하다.
상기 세이지 추출물이 상기 범위 미만이면 자극 완화 성분의 감소로 화장료 조성물 효과 발휘가 어려울 수 있고, 상기 범위 초과이면 세이지 추출물의 향균성으로 인하여 코스모스 유래 유산균의 농도가 감소할 수 있다.
상기 베타인이 상기 범위 미만이면 유산균 첨가제의 접착성 확보가 어려울 수 있고, 상기 범위 초과이면 유산균 첨가제의 접착성이 너무 높아져, 이후 화장료 조성물에 적용시 혼합에 어려움이 발생할 수 있다. 상술한 바와 같이 제조된 유산균 첨가제는 이후 화장료 조성물의 제조방법의 원료로서 이용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 제조방법은 상기에서 제조된 유산균 첨가제를 1액으로 준비하는 단계, 정제수, 다이소듐이디티에이, 글리콜계 화합물, 디올계 화합물 및 글리세린을 혼합하여 2액으로 준비하는 단계, 잔탄검, 카보머 및 알지닌을 혼합하여 3액으로 준비하는 단계 및 상기 1액 내지 3액을 혼합하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 실시예 따른 화장료 조성물의 제조방법이 3액 방식을 취하는 것은 유산균 첨가제인 1액의 겔화의 진행을 유도하기 위함이고, 1액의 충분한 반응을 통해 유산균 및 세이지 추출물의 안정화를 도모하고자 함이다. 앰플 성분인 2액이나, 점증 성분인 3액이 혼용되어 1용기에 혼합될 경우, 안정된 겔화의 진행이 어려워 화장료 조성물의 접착성을 고르게 확보하지 못하고, 층분리, 결정화 또는 백탁 현상이 발생될 수 있다.
상기 글리콜게 화합물은 부틸렌 글리콜 또는 디프로필렌 글리콜 중 적어도 하나 이상을 포함하고, 상기 디올계 화합물은 1,2-헥산 디올 또는 프로판 디올 중 적어도 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 1액의 중량부를 기준으로, 1액 2 내지 5 중량부, 2액 0.3 내지 0.5 중량부 및 3액 95 내지 97 중량부로 포함하는 것일 수 있다.
상기 1액이 상기 범위 미만이면 유산균 첨가제의 양이 너무 적어 본 발명 고유의 효과인 항산화, 보습 확보 및 탄력과 주름 개선의 효과를 발휘하기 어렵고, 상기 범위 초과이면 세이지 성분의 과다 함량으로 오히려 피부에 자극을 발생시킬 수 있다.
상기 2액이 상기 범위 미만이면 보습효과 확보 측면에서 바람직하지 못하고 상기 범위 초과이면 과량의 다가알코올로 인하여 피부에 자극을 유발할 수 있는 면에서 바람직하지 못하다.
상기 3액이 상기 범위 미만이면 점증제가 너무 적어져 침전이나 부유가 발생될 수 있고, 상기 범위 초과이면 점도가 너무 높아져 유산균의 효능을 피부에 전달하기 어려울 수 있다.
상기의 제조방법으로 제조된 본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 화장료(의약외용제, 의약외품을 포함함)에 사용될 수 있는 기타 성분을 본 발명에 의해 제조된 유산균 첨가제의 효과를 저해하지 않는 범위에서 추가로 더 포함할 수 있다. 기타 성분으로서는, 예를 들어, 계면활성제, 아미노산, 아미노산 유도체, 저급 알코올(예를 들어, 에탄올), 다가 알코올(예를 들어, 글리세린, 부틸렌글리콜), 당 알코올 및 이의 알킬렌 옥사이드 부가물, 수용성 고분자(예를 들어, 하이드록시 에틸셀룰로오스), 피막 형성성 고분자, 수지 분체(예를 들어, 나일론 파우더), (디메티콘/비닐디메티콘)크로스폴리머 파우더), 점토 광물(예를 들어, 쿼터늄-18 헥토라이트, 쿼터늄-18 벤토나이트), 겔화제(예를 들어, 디부틸라우로일 글루타미드, 디부틸에틸헥사노일 글루타미드), 보습제(예를 들어, 피롤리돈 카르복실산 나트륨), 살균제 및 항균제, 항염증제, 진통제, 항진균제, 각질 연화 박리제, 피부 착색제, 호르몬제, 자외선 흡수제, 육모제, 발한 방지제 및 수렴 활성 성분(예를 들어, 피롤리돈 카르복실산 아연염), 땀 방취제, 비타민제, 혈류 촉진제(혈관 확장제, 혈행 촉진제), 생약, 식물 추출물, pH 조정제, 점도 조정제, 펄화제, 천연 향료, 합성 향료, 색소 및 안료(예를 들어, 적202호, 청1호), 산화방지제(예를 들어, 토코페롤, 아세트산 토코페롤, 펜타갈로일 글루코사이드), 방부제(예를 들어, 메틸파라벤, 부틸파라벤, 프로필파라벤, 페녹시에탄올), 유화제, 증점제, 지방 및 왁스, 실리콘 화합물, 향유 등을 들 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
코스모스에서
Lactobacillus Fructosus
유산균의 분리
제조예 1
코스모스 200g을 1차 증류수에 2회 세척하여 이물질을 제거하였다. 세척한 코스모스 물기를 털어내고 분쇄한 뒤, 코스모스 중량의 8%에 해당하는 생리 식염수에 혼합하여 현탁 및 희석한 후 3시간 동안 실온에 방치하였다. 이를 취해 디프코 락토바실리 MRS 아가®(Difco Lactobacilli MRS Agar®) 배지에 배양하였다. 이때 배양은 35℃ 혐기 조건의 챔버에서 48시간 동안 배양한 후 백색 집락을 보이는 콜로니를 취했다. 위와 같은 방법으로 Lactobacillus Fructosus를 코스모스로부터 분리하였다.
제조예 2
제조예 1과 동일하되 배양 시간을 12시간으로 하였다.
제조예 3
제조예 1과 동일하되 배양 시간을 24시간으로 하였다.
제조예 4
제조예 1과 동일하되 배양 시간을 60시간으로 하였다.
유산균 첨가제의 제조
세이지잎을 정제수로 세척하고 음지에서 자연 건조한 후 분쇄기를 이용하여 2~3 cm의 크기로 분쇄한다. 분쇄된 세이지 10g을 50g 및 부틸렌글리콜 40g에 넣고 상온에서 48시간 동안 추출하였다. 상기 추출물을 와트만 3번 여과지로 여과하여, 세이지 추출물을 얻었다.
상기 제조예 1에서 얻어진 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus) 10g 및 아래 표 1 함량의 세이지 추출물을 혼합하여 상온에서 교반하면서 에이징을 진행하였다. 이후, 아래 함량의 베타인을 혼합 후, 상온에서 교반하여 겔화를 진행하였다. 이를 유산균 추출물로 하였다.
| 비고 | 코스모스 유래 유산균(g) | 세이지 추출물(g) | 베타인(g) | 교반 시간(h) |
| 실시예 1 | 10 | 5 | 2.5 | 2 |
| 실시예 2 | 10 | 4 | 2.5 | 2 |
| 실시예 3 | 10 | 8 | 2.5 | 2 |
| 실시예 4 | 10 | 3 | 2.5 | 2 |
| 실시예 5 | 10 | 10 | 2.5 | 2 |
| 실시예 6 | 10 | 5 | 2.5 | 0.5 |
| 실시예 7 | 10 | 5 | 2.5 | 1 |
| 실시예 8 | 10 | 5 | 2.5 | 3 |
| 비교예 1 | 10 | 5 | 2.5 | 교반 진행 X |
화장료 조성물의 제조
실시예 1에서 제조된 유산균 추출물 3.5g을 칭량하여 1액으로 하고, 나머지 구성 성분의 함량을 아래 표 2 내지 3과 같이 하여 2 내지 3액을 별도로 제조한 후, 상온에서 혼합하여 화장료 조성물을 제조하였다.
| 비고 | 종류 | 실시예 9(g) | 실시예 10(g) | 실시예 11(g) | 실시예 12(g) |
| 1액 | 코스모스유래 유산균 |
2.0 | 1.5 | 2.5 | 1.0 |
| 세이지 추출물 | 1.0 | 0.75 | 1.25 | 0.5 | |
| 베타인 | 0.5 | 0.375 | 0.625 | 0.25 | |
| 2액 | 다이소듐 이디티에이 |
0.02 | 0.02 | 0.02 | 0.02 |
| 부틸렌글리콜 | 6.53 | 6.53 | 6.53 | 6.53 | |
| 디프로필렌글리콜 | 6.50 | 6.50 | 6.50 | 6.50 | |
| 글리세린 | 4.70 | 4.70 | 4.70 | 4.70 | |
| 1,2-헥산디올 | 1.08 | 1.08 | 1.08 | 1.08 | |
| 프로판디올 | 0.85 | 0.85 | 0.85 | 0.85 | |
| 정제수 | 76.40 | 77.275 | 75.525 | 78.15 | |
| 3액 | 잔탄검 | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 카보머 | 0.20 | 0.20 | 0.20 | 0.20 | |
| 알지닌 | 0.17 | 0.17 | 0.17 | 0.17 |
| 비고 | 종류 | 실시예 13(g) | 비교예 2(g) |
| 1액 | 코스모스유래 유산균 |
3.0 | - |
| 세이지 추출물 | 1.5 | - | |
| 베타인 | 0.75 | - | |
| 2액 | 다이소듐 이디티에이 |
0.02 | 0.02 |
| 부틸렌글리콜 | 6.53 | 6.53 | |
| 디프로필렌글리콜 | 6.50 | 6.50 | |
| 글리세린 | 4.70 | 4.70 | |
| 1,2-헥산디올 | 1.08 | 1.08 | |
| 프로판디올 | 0.85 | 0.85 | |
| 정제수 | 74.65 | 79.90 | |
| 3액 | 잔탄검 | 0.05 | 0.05 |
| 카보머 | 0.20 | 0.20 | |
| 알지닌 | 0.17 | 0.17 |
비교예 3
상기 실시예 9의 모든 구성 성분을 액상의 구분없이 1개의 용기에 혼합 후, 상온에서 화장료 조성물을 제조하였다.
실험예
실험예 1 ; 유산균 첨가제의 겔화 확인
실시예 1의 유산균 첨가제를 육안으로 확인하였다. 겔화가 완료된 사진을 촬영하여 도 1에 나타내었다.
실험예 2 : 플라보노이드 분석
제조예 1 내지 4에서 분리한 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus) 시료 각 1.5 mL에 2% AlCl3·6H2O 1.5 mL를 혼합하여 상온에서 10 min 반응시킨 후, UV-VIS spectrophotometer (Evolution 201, Thermo scientific, USA) 367 nm에서 흡광도를 측정하였다. 지표물질로는 Quercetin을 사용하여 27, 81, 242, 725 ppm을 367 nm에서 측정된 값으로 표준곡선을 작성한 뒤, 시료들의 값을 대입하였다. Control로는 물 0.2 mL를 사용하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
실험예 3 : 폴리페놀 분석
제조예 1 내지 4에서 분리한 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus) 시료 0.2 mL에 물 1.8 mL과 2 N Folin-ciocalteu phenol reagent 0.2 mL를 혼합한 뒤 실온에서 3 min 반응시킨 후, 7% Na2CO3 0.4 mL와 물 1.4 mL을 추가하여 1시간 동안 실온에서 반응시킨다. 푸른색 혼합물이 생성되면 UV-VIS spectrophotometer (Evolution 201, Thermo scientific, USA) 765 nm에서 흡광도를 측정하였다. 지표물질로는 Gallic acid를 사용하여 10, 100, 125, 250, 500, 1000 ppm을 765 nm에서 측정된 값으로 표준곡선을 작성한 뒤, 시료들의 값을 대입하였다. Control로는 물 0.2 mL를 사용하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
실험예 4 : 항산화 효과
제조예 1 내지 4에서 분리한 코스모스 유래 유산균(Lactobacillus Fructosus) 시료 0.2ml을 취한 후, Xanthine/xanthine oxidase 반응에서 형성된 superoxide radical 소거효과를 nitroblue tetrazolium(NBT)를 이용하여 측정하였다. 3mM Xanthine과 3mM EDTA, 0.72mM NBT와 시료를 20mM Sodium phosphate buffer (pH 6.8)과 혼합하여 25℃에서 10 min 반응시킨다. 최종농도가 0.25 U/ml가 되도록 xanthine oxidase를 첨가하여 25℃에서 25 min 반응이 완료된 후 spectro photometer를 이용하여 565 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
실험예 5 : 피부 보습 확인
25℃ 상대습도 45%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 건강한 여성 20명을 대상으로 하기 실시예 및 비교예에서 얻어진 화장료 조성물을 팔의 상박에 도포한 후, Tewameter TM 210(C+K Electonic GmbH)을 이용하여 경피수분 손실량(TEWL)을 측정하고, Corneometer CM 820 PC(C+K Electronic GmbH)를 이용하여 표피 수분량에 따른 전기전도도의 변화로 0에서 150까지 피부의 수분량을 수치화하여 보습효과를 측정하였다. 측정결과는 하기 표 4에 표기하였다.
| 비고 | 경피수분손실량(TEWL) | 표피수분보유량(A.U) | ||||
| 도포 전 | 도포 직후 | 도포 후 2시간 | 도포 전 | 도포 직후 | 도포 후 2시간 | |
| 5.20 | 57.5 | |||||
| 실시예 9 | 5.30 | 5.25 | 3.20 | 57.6 | 83.05 | 75.33 |
| 실시예 10 | 5.28 | 5.22 | 3.38 | 58.9 | 82.11 | 72.51 |
| 실시예 11 | 5.35 | 5.30 | 3.15 | 58.4 | 84.23 | 76.32 |
| 실시예 12 | 5.38 | 5.32 | 4.08 | 57.9 | 80.07 | 68.02 |
| 실시예 13 | 5.22 | 5.16 | 3.08 | 57.3 | 85.06 | 75.66 |
| 비교예 2 | 5.20 | 5.20 | 4.88 | 57.7 | 74.15 | 62.32 |
| 비교예 3 | 5.27 | 5.24 | 4.32 | 57.9 | 77.67 | 65.27 |
실험예 6 : 화장료 조성물의 경시 확인
실시예 9 내지 13 및 비교예 2 내지 3의 화장료 조성물을 제조 후 10ml의 원형 용기에 담아 각각 상온 조건에서 10일 이상 동안, 45℃의 고온 조건에서 5일 이상 동안, -4℃의 저온 조건에서 5일 이상 동안 두고, 경시 안정성을 관찰하였다. 결과를 표 5에 나타냈다.
O 양호(외관 변화 없음, 투명), △ 변화 있음(외관이 미약하게 불투명, 소량의 불순물 확인), Х : 불량(외관이 불투명하며, 다량의 불순물 확인)
| 시험항목 및 조건 |
실시예9 | 실시예10 | 실시예11 | 실시예12 | 실시예13 | 비교예2 | 비교예3 | |
| 25℃ | 12개월 | O | O | O | O | O | O | X |
| -4℃ | 1개월 | O | O | O | O | X | O | X |
| 40℃ | 1개월 | O | O | O | O | X | O | X |
실험예 7: 주름 개선 측정
상온, 습도 40 내지 60%의 항온 항습 조건에서 건강한 만 25 내지 55세의 여성 20명(평균연령 40.30세)을 선정하여, 시험대상자가 실시예 및 비교예의 화장료 조성물을 사용하기 전에 눈가 주름 및 피부 점탄성 측정 (Cutometer MPA 580 (C+K, Germany))을 수행한 후, 그 결과를 표 6에 나타내었다.
피부 점탄성 값 = 피부 변화 패턴 영역(Uv)/피부 회복 패턴 영역(Ue)로서 그 값이 낮을수록 탄성이 좋은 것이다.
피실험자 1명을 선정하고, 주름 측정 촬영 장치(aram ASM-300)을 이용하여 본 발명의 실시예 9의 화장료 조성물의 사용 전 및 사용 후(4주 후)의 눈가 주름을 촬영하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. 사용 후의 주름의 면적이 줄어든 것을 보아 주름 개선이 유의하게 개선된 것을 볼 수 있다.
| 비고 | 피부 점탄성(Uv/Ue) | |||
| 최초 | 1주 | 2주 | 4주 | |
| 실시예 9 | 0.91 | 0.81 | 0.75 | 0.69 |
| 실시예 10 | 0.90 | 0.82 | 0.77 | 0.72 |
| 실시예 11 | 0.93 | 0.80 | 0.73 | 0.68 |
| 실시예 12 | 0.90 | 0.83 | 0.77 | 0.75 |
| 실시예 13 | 0.91 | 0.81 | 0.77 | 0.72 |
| 비교예 2 | 0.93 | 0.90 | 0.89 | 0.88 |
| 비교예 3 | 0.92 | 0.89 | 0.87 | 0.86 |
실험예 8: α-thujone 함량 측정
실시예 1 내지 9 및 비교예 1의 유산균 첨가제에서 α-thujone의 함량을 Agilent Technologies사 Agilent 1200 Infinity Series LC 모델을 사용하여 측정하였다. 비교예 1은 교반을 진행하지 않고, 혼합 즉시 함량을 측정하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
실험예 9: 피부미생물 분포도 측정
Skin microbiome 분포도를 측정하기 위해 식염수가 함유되어 있는 swab pipette(3M, USA)를 구입하여 사용하였다. 샘플링은 피검자의 안면 T zone과 U zone에 swab pipette를 이용하여 수회 반복하여 채취한 후, 즉시 동결 및 당일 DNA 추출 공정을 진행하여 피부전체의 미생물을 동시에 분석하는 방법을 통해 분포도를 확인하였다.
도 7은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 앰플 또는 마스크팩으로 피부에 도포하여 이를 3일 단위로 4회 반복하였다. 2주간의 변화를 관찰한 것으로 사용 전(위쪽 그래프)과 2주 후(아래쪽 그래프)를 대비하여 보면, 피부 내 유익균인 Lactobalcillus Bifidus, S. epidermidis은 전반적으로 상승하였고, 피부 내 유해균인 Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes은 전반적으로 줄어 든 것으로 확인되었다.
도 8은 본 발명 실시예 9의 화장료 조성물을 통상적인 마스크팩의 원료로 침지하고, 10분간 피부에 적용하여, 이를 3일 단위로 4회 반복하였다. 2주간의 변화를 관찰한 것으로 사용 전(위쪽 그래프)과 2주 후(아래쪽 그래프)를 대비하여 보면, 피부 내 유익균인 Lactobalcillus Bifidus, S. epidermidis은 전반적으로 상승하였고, 피부 내 유해균인 Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes은 전반적으로 줄어 든 것으로 확인되었다.
Claims (5)
- 코스모스를 준비하는 단계,
준비된 코스모스를 한천 배지에 도말하여 30 내지 40℃에서 40 내지 55시간 배양하는 단계,
배양된 배지에서 Lactobacillus Fructosus의 코스모스 유래 유산균을 분리하는 단계,
세이지잎, 정제수 및 부틸렌글리콜을 포함하는 세이지 추출물을 Lactobacillus Fructosus의 코스모스 유래 유산균과 혼합하여 혼합액을 제조하는 단계,
상기 혼합액을 상온에서 1.5 내지 2.5 시간 에이징하는 단계 및
상기 에이징된 혼합액에 베타인을 첨가하는 단계를 포함하는 유산균 첨가제의 제조방법.
- 청구항 1에 있어서,
상기 Lactobacillus Fructosus의 코스모스 유래 유산균, 세이지 추출물 및 베타인은 중량비로 1 : 0.4 내지 0.8 : 0.2 내지 0.4인 것인 유산균 첨가제의 제조방법.
- 청구항 1 내지 2 중 어느 한 항에서 제조된 유산균 첨가제를 1액으로 준비하는 단계,
정제수, 다이소듐이디티에이, 글리콜계 화합물, 디올계 화합물 및 글리세린을 혼합하여 2액으로 준비하는 단계,
잔탄검, 카보머 및 알지닌을 혼합하여 3액으로 준비하는 단계 및
상기 1액 내지 3액을 혼합하는 단계를 포함하고,
상기 글리콜계 화합물은 부틸렌 글리콜 또는 디프로필렌 글리콜 중 적어도 하나 이상을 포함하고,
상기 디올계 화합물은 1,2-헥산 디올 또는 프로판 디올 중 적어도 하나 이상을 포함하는 것인 화장료 조성물의 제조방법.
- 청구항 3에 있어서,
상기 화장료 조성물은 1액의 중량부를 기준으로,
1액 2 내지 5 중량부, 2액 0.3 내지 0.5 중량부 및 3액 95 내지 97 중량부로 포함하는 것인 화장료 조성물의 제조방법.
- 삭제
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Citations (5)
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| JP2004269430A (ja) * | 2003-03-10 | 2004-09-30 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 毛髪処理用組成物及び損傷毛用毛髪化粧料 |
| KR20170029105A (ko) * | 2015-09-07 | 2017-03-15 | 이상수 | 유산균 발효 허브 추출물을 함유하는 미백, 주름개선, 자외선 차단, 항아토피 및 무좀 예방 또는 개선 기능성 화장료 조성물 |
| KR20180096094A (ko) | 2017-02-20 | 2018-08-29 | 스킨큐어 주식회사 | 코스모스 추출물을 포함하는 피부주름 개선용 조성물 |
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| KR20210046195A (ko) * | 2019-10-18 | 2021-04-28 | 주식회사 코리아나화장품 | 클레마티스 꽃 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물 |
-
2022
- 2022-03-04 KR KR1020220028335A patent/KR102504441B1/ko active
Patent Citations (5)
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