KR102499105B1 - 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬 유발 대사증후군 개선 및 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 개선용 식품 및 약학적 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 개선용 조성물에 관한 것으로, 의약품 및 식품 등 다양한 용도로서 활용 가능하다.
대사증후군(Metabolic Syndrome)은 고중성지방혈증, 고혈압, 당대사 이상, 혈액응고 이상 및 비만과 같은 위험 인자가 함께 나타나는 증후군을 지칭한다.
대사증후군의 증상 자체는 치명적이지 않지만 당뇨병이나 허혈성 심혈관계 질환과 같은 심각한 질병으로 발전할 소인이 있기 때문에 현대인의 건강을 크게 위협하고 있다.
과거에는 원인이 밝혀지지 않아 X증후군(Syndrome X)을 비롯한 여러 이름으로 불렸으나, 세계보건기구와 미국 국립보건연구원의 심-폐-혈액 연구소(NHLBI)가 제정한 성인 치료프로그램 Ⅲ(Adult Treatment Program Ⅲ)을 통해 대사증후군 또는 인슐린저항성증후군(Insulin resistance syndrome)이라 공식 명명되었다.
미국 NCEP(National Cholesterol Education Program)의 기준에 따르면, ① 허리둘레가 남자 40 인치(102 cm), 여자 35 인치(88 cm) 이상인 복부 비만, ② 중성지방(triglycerides) 150 mg/dL 이상, ③ HDL 콜레스테롤이 남자 40 mg/dL, 여자 50 mg/dL 이하, ④ 혈압 130/85 mmHg 이상, ⑤ 공복혈당(fasting glucose)이 110 mg/dL 이상 등의 다섯 가지 위험인자 중 한 환자가 세 개 이상을 나타낼 경우 대사증후군으로 판정하게 된다.
대사증후군의 원인으로는 인슐린 저항성이 먼저 지적된 바 있다.
상기 인슐린이 혈당을 낮추기 위해 분비된 후 혈당을 정상으로 조절하지 못하고 혈관세포 증식을 유도해 혈관 벽을 두껍게 하거나, 신장에서 나트륨의 재흡수를 촉진해 혈압을 높이거나, 지방분해를 촉진하여 혈액 내 중성지방을 높이는 동시에 고밀도 콜레스테롤을 낮추며 내장에 지방성분의 저장을 촉진시키는 등의 총체적인 작용으로 고혈압, 고지혈증, 복부 비만 등 대사 증후군을 유발하는 것으로 알려져 있다.
한편, 환경호르몬은 학술용어로 환경성 내분비계 교란물질(endocrine disruptors)이라고 하는데, 환경으로 방출된 유해한 화학물질이 생체 내에 유입되어 호르몬 작용을 방해하거나 교란시키는 물질을 총칭한다.
환경호르몬은 화학구조가 생체 호르몬과 비슷하여 몸속에서 마치 천연 호르몬인 것처럼 작용하는 경우가 많으며, 이와 같은 '모방(mimic)'을 통해 진짜 호르몬처럼 몸속의 세포 물질과 결합하여 비정상적인 생리작용을 한다.
환경호르몬으로 현재까지 약 87,000 여종이 알려져 있고, 이 중 인체에 독성을 보이는 환경호르몬은 약 67종이며, 대표적 맹독성 환경호르몬 물질로는 다이옥신류, 프탈레이트 가소제류, 비스페놀 등이 있다.
환경호르몬은 우리 몸의 지방조직 등에 침투한 뒤 잔류성 유기화학물질을 서서히 방출하면서 인슐린 저항성을 유발하므로, 이를 통해 지질대사이상 등의 대사증후군이 야기될 수 있다.
최근 내분비 교란물질에 의해 유발되는 질환에 대한 관심이 증가하고 있으며, 이를 개선하기 위한 다양한 연구가 수행되고 있다.
본 발명자들은 좁은잎천선과 추출물이 내분비 교란물질에 의해 유발되는 지질대사이상을 효과적으로 완화시키고 이로 인해 유발되는 대사증후군을 억제할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 생체 안전성이 우수한 천연 식물 유래의 기능성 식의약품을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 예방 또는 개선용 식품 조성물이 제공된다.
일 실시예에 있어서, 상기 대사증후군은 환경호르몬 유발 지질대사이상일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 환경호르몬은 비스페놀류, 파라벤류, 또는 프탈레이트류일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 식품 조성물이 제공된다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬 유발 활성산소종을 억제할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
일 실시예에 있어서, 상기 대사증후군은 환경호르몬 유발 지질대사이상일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 포함하여 생체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 내분비 교란물질에 의한 지질대사이상을 개선함으로써 건강기능식품뿐만 아니라 이로 인해 유발되는 질환의 치료 용도로서 유용하게 활용할 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 좁은잎천선과 추출물의 세포 독성을 평가한 결과이다.
도 2는 대조군(MDI) 및 비스페놀 A, 좁은잎천선과 추출물 처리량을 달리한 실험군(좌측)의 지질축적량과 해당 결과를 그래프(우측)로 도시한 것이다.
도 3은 대조군(MDI) 및 비스페놀 A, 좁은잎천선과 추출물 처리량을 달리한 실험군(좌측)의 활성산소종 생성량과 해당 결과를 그래프(우측)로 도시한 것이다.
도 2는 대조군(MDI) 및 비스페놀 A, 좁은잎천선과 추출물 처리량을 달리한 실험군(좌측)의 지질축적량과 해당 결과를 그래프(우측)로 도시한 것이다.
도 3은 대조군(MDI) 및 비스페놀 A, 좁은잎천선과 추출물 처리량을 달리한 실험군(좌측)의 활성산소종 생성량과 해당 결과를 그래프(우측)로 도시한 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다.
또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군 예방 또는 개선용 식품 조성물이 제공된다.
상기 “좁은잎천선과(Ficus erecta var. sieboldii)”는 무화과과에 속하는 식물로서 가는잎천선과나무라고도 하며 우리나라에서도 제주도와 남해안 지방, 특히, 제주도에 주로 자라는 나무이다.
상기 좁은잎천선과는 바닷가 산기슭에서 자라며 높이 2 내지 4m이고, 나무껍질은 잿빛이 섞인 흰색이며 어두운 갈색 피목이 있고 털이 없다. 상기 좁은잎천선과 잎은 어긋나고 천선과 보다 좁은 바소꼴이며 길이 10 내지 20cm이다.
상기 좁은잎천선과의 곁맥은 5 내지 6쌍이고, 잎자루는 길이가 1 내지 4cm이다. 상기 좁은잎천선과는 민간에서는 오래전부터 보중, 익기, 건비, 화습, 강근장골, 소종, 활혈, 해독의 효능으로 알려져 있다.
또한, 상기 좁은잎천선과는 류마티스 관절염, 중기허약, 기혈쇠미, 사디산언, 근골분리, 타박상, 경폐, 산후유즙결핍 등의 치료에 이용되어 왔다.
그러나, 상기 좁은잎천선과의 환경호르몬 유발 질환 또는 관련 작용 기전은 현재까지 알려진 바 없으며, 본 발명자들은 비스페놀 A와 같은 환경호르몬뿐만 아니라, 그 유사체인 비스페놀 S, 비스페놀 F가 오비소겐(obesogen)으로써 이상지질대사를 유도함을 확인하고, 상기 좁은잎천선과가 환경호르몬으로 유도된 이상지질대사를 효과적으로 억제할 수 있음을 규명하였다.
상기 대사증후군은 당뇨, 비만, 인슐린 저항성, 지방간, 고지혈증, 동맥경화 또는 이들의 합병증 등 사망의 위험인자들이 함께 존재하는 상태를 의미하며, 구체적으로 환경호르몬에 의해 유발되는 지질대사이상일 수 있다.
상기 환경호르몬으로 널리 알려진 내분비 교란물질은 정상적인 체내 호르몬으로 작용하거나 기능을 방해하는 화학 물질일 수 있고, 상기 교란물질은 인공적으로 합성되어 사용되며, 일상생활 속에서 쉽게 노출될 수 있다.
상기 내분비계 교란물질은 체내로 흡수되어 번식, 발달, 대사 및 면역과 관련된 정상적인 호르몬의 혼란을 유발할 수 있고, 호르몬의 합성, 저장, 분비, 수송, 결합 및 대사를 방해함으로써 다양한 질병을 유발할 수 있다.
상기 환경호르몬은 비만에 영향을 미치는 환경호르몬이라는 의미의 오비소겐(obesogen)이라는 단어가 적용될 수 있고, 구체적으로, 비스페놀류(BPA, BPF, BPS), 파라벤류(메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤), 프탈레이트류(DEHP, DBP, BBP, DEP, DNOP, DIDP, DINP) 일 수 있다.
상기 “지질대사(Lipid metabolism)”는 콜레스테롤 대사 또는 중성지질 대사를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 "콜레스테롤"은 동물세포의 세포막을 구성하는 데 필요한 기본 물질로, 식물에서는 합성되지 않고 동물에서만 합성된다. 상기 콜레스테롤은 여러 생물학적 스테로이드 물질의 전구체(precursor) 역할을 하므로 생체 내에 필수적이다.
상기 콜레스테롤은 식이로부터의 외인성 콜레스테롤과 체내에서 합성되는 내인성 콜레스테롤로부터 공급되며, 간에서 최종 대사산물인 담즙산으로 변하고, 장을 통해 배설될 수 있다.
상기 콜레스테롤의 수준이 체내에서 일정하게 유지되지 못하고, 세포에 의해 원활히 이용되지 못하는 경우 콜레스테롤은 체내에 축적되고, 죽상동맥경화증이나 관상동맥질환과 같은 여러가지 심혈관 질환의 일차적인 원인이 될 수 있다.
상기 "중성지질"은 물에 녹지 않는 지방을 의미하며, 콜레스테릴 에스테르와 트리글리세라이드를 포함한다.
상기 중성지방은 물에 용해되지 않으므로 혈액 속에서 단독으로 존재할 수 없어 운반체인 지단백이 필수적이다.
체내 지방은 콜레스테롤과 중성지방으로 구성되고, 상기 중성지방은 LDL, 즉 나쁜 콜레스테롤의 생성을 돕고 좋은 콜레스테롤인 HDL의 분해를 촉진할 수 있다.
상기 지질대사이상은 상기 지질이 생성 및 축적되는 대사과정이 적절히 조절되지 않아 체내에 지질이 축적되거나, 비만, 당뇨병, 고콜레스테롤증, 고중성지질혈증, 저지질증, 지방단백질증 또는 동맥경화 등의 질병을 야기할 수 있다.
상기 “유효성분으로 포함하는”은 투여하고자 하는 개체에 대한 치료적 또는 예방적 효과를 제공하기에 충분한 양을 포함하는 것을 의미하며, 상기 좁은잎천선과 추출물은 생체 안전성이 우수하므로 당업자가 양적 상한을 적절히 조정할 수 있다.
상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.
상기 추출물은 좁은잎천선과를 건조 후 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득할 수 있다.
상기 추출물은 물, 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 핵산, 디클로로메탄 또는 이들의 혼합 용매로 추출될 수 있고, 바람직하게는 60 내지 90%(w/w) 농도의 에탄올에 의해 추출될 수 있다.
상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으므로, 용매에 따른 생리 활성 물질의 선택성을 고려하여 달리할 수 있다.
상기 추출물은 추출 원료를 물로 수세한 후 건조 및 분쇄하여, 원료 중량의 8 내지 12배에 달하는 부피의 용매로 약 1 내지 24시간 동안 환류 순환 추출, 가압 추출, 초음파 추출 등 통상적인 방법으로 추출 및 여과하여 제조할 수 있다.
상기 추출물은 감압 증류 또는 동결 건조 등과 같은 추가적인 공정에 의해 분말 상태로 수득할 수 있다.
상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 식품 조성물이 제공된다.
상기 “항산화”는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉 진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발할 수 있다.
산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다.
따라서, 상기 활성산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬 유발 활성산소종을 억제할 수 있다.
상기 활성산소종(Reactive Oxygen Species, ROS)은 지방세포의 분화를 유도하거나 세포 주변 대식세포를 자극하기 때문에 당뇨와 같은 대사성 질환의 원인이 될 수 있으며, 상기 조성물은 활성산소종의 발생을 효과적으로 억제함으로써 환경호르몬에 의해 유발될 수 있는 대사증후군의 예방 또는 개선할 수 있다.
상기 식품 조성물은 환경호르몬 관련 질환, 예컨대 지질대사이상 개선을 위한 건강기능식품으로서 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, 상기 기능성은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미할 수 있다.
상기 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 식품 첨가물은 다른 규정이 없는 한 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 적합성 여부를 판단할 수 있다.
상기 식품 첨가물 공전에 기재된 품목은 예컨대 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류를 들 수 있다.
상기 식품 조성물은 건강 개선을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있으며, 예컨대, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 보조 식품, 식품 첨가제 등에 사용될 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 건강 개선을 목적으로 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조 및 가공될 수 있다.
구체적으로 상기 정제 형태의 건강기능식품은 좁은잎천선과 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와의 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 후, 활택제 등을 넣어 압축 성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수 있으며, 필요에 따라 적당한 제피제로 제피할 수도 있다.
상기 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질캅셀제는 통상의 경질캅셀에 좁은잎천선과 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캅셀제는 좁은잎천선과 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 솔비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
상기 환 형태의 건강기능식품은 좁은잎천선과 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.
상기 과립형태의 건강기능식품은 좁은잎천선과 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
또한, 상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 대사증후군의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
상기 “예방”은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 염증에 의해 발생되는 증상이 상기 조성물을 사용 하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.
상기 “치료”는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.
상기 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화하여 사용할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 좁은잎천선과 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다. 상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양이 대상체에 투여될 수 있다. 상기 “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.
실시예 : 좁은잎천선과 추출물(HR1902-W) 제조
파쇄한 좁은잎천선과 건조물에 40배의 정제수를 넣고 약 100℃에서 4시간 동안 가열한 후 여과하였다.
수득한 액상 추출물을 회전감압농축기로 농축(15 brix)한 후 동결건조기를 이용하여 좁은잎천선과 추출물을 수득하였다.
분말화하여 수득한 추출물의 수율은 건조물 대비 37.5%였다.
실험예 1 : 세포 배양
세포주인 RAW264.7 macrophage cell은 American Type Culture Collection(ATCC, Manassas. USA)에서 구입하여 사용하였다.
세포의 배양을 위하여 10% Fetal Bovin Serum(FBS, Hyclone USA), 100 units/mL penicillin/Streptoycin(Hyclone, USA)이 함유된 DMEM(Dulbecco's modified of Eagle's medium, Hyclone,USA) 배지를 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 존재하의 incubator(Thermo, Forma, Germany)에서 배양하였다.
실험예 2 : 독성 평가(MTT assay)
살아있는 세포 내 미토콘드리아의 탈수소효소에 의해 Tetrazolium salt(WST-1)에서 formazan으로 변화하는 것을 이용하여, 생성된 formazan의 농도를 spectrophotometer로 측정함으로써 세포 생존률을 측정하였다.
Ez-cytox(Dozen, Korea)을 이용하여 프로토콜에 따라 MTT assay를 수행하였다.
Raw264.7 세포를 5x103 cells/100μL로 96 well에 분주한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다.
농도별로 시료를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10% MTT 시약이 포함된 배지로 교체하고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 450nm 파장에서 microplate reader(Epoch, Biotek)로 측정하였다.
각 시료에 대한 세포생존율에 의한 독성 평가는 3회 반복하여 측정하였으며, 그에 대한 평균값과 표준편차를 산출하였다.
도 1을 참조하면, 좁은잎천선과 추출물(제조예 1)은 모든 농도(10, 100, 1000 μg/mL) 범위에서 세포 독성이 나타나지 않았다.
실험예 3 : 환경호르몬에 의한 지질축적 유도 효과 확인
환경호르몬에 의해 유도된 지질축적 확인을 위하여 환경호르몬으로 유도된 3T3-L1 지방세포 분화유도조건을 설정하였다.
일반적으로 3T3-L1 지방세포를 분화시키기 위해 칵테일(methylisobutylxanthine, dexamethasone, insulin; MDI)을 사용할 수 있다.
본 실험에서 MDI칵테일 및 비스페놀 A를 동시에 처리하였을 때, MDI에 의한 지질축적으로 인해 비스페놀 A의 지질축적을 확인할 수 없어 전지방세포에서 6일 간 비스페놀 A에 노출시킨 뒤 dexamethasone을 제외한 칵테일과 분화시켜 실험하였다.
분화는 8일 동안 진행되었으며, MDI 처리군과 대비한 결과값을 산출하였다.
환경호르몬의 3T3-L1 세포 분화 및 지질축적 유도를 확인하기 위하여 중성지방만을 적색으로 염색하는 Oil Red O 염색법을 통해 3T3-L1 지방세포 내 생성된 중성지방의 양을 측정하였다.
실험은 다양한 농도의 비스페놀 A, 비스페놀 S 및 비스페놀 F를 지방세포 분화 전 전지방세포에서 6일간 처리하였으며, 분화시 MI 칵테일과 함께 처리하여 환경호르몬으로 유도된 지질축적을 확인하였다.
결과값은 MDI칵테일로 분화를 유도한 군과 비교하여 나타내었다.
측정 결과 처리한 모든 농도에서 농도 유의적으로 지질축적이 MI 칵테일 처리군보다 증가하였다.
비스페놀 A의 대체제인 비스페놀 S 및 비스페놀 F에서도 지질축적이 증가하였다.
실험예 4 : 환경호르몬 유도 지질축적 억제능 평가
일반적으로 3T3-L1 지방세포를 분화시키기 위해 hormonal 칵테일 MDI(Dexamethasone, IBMX, Insulin)를 사용한다.
본 실험에서 환경호르몬의 비만 유발(obesogenic) 효과를 확인하기 위해 전지방세포를 24-well plate에 10106의 농도로 seeding하고, 분화 전 6일 동안 비스페놀 A(20 μM)를 처리하였다.
세포가 밀집(confluent) 상태가 되면 MDI 처리군에는 1 μM dexamethasone, 0.5 mM 3-Isobutyl-1-methylxanthine(IBMX), 1 μg/mL insulin을 첨가해 분화를 유도하였으며, 그 외에는 dexamethasone을 제외한 IBMX 및 insulin을 처리하였다.
또한 MI 처리군을 제외한 후 20 μM 환경호르몬(비스페놀 A, 비스페놀 S, 비스페놀 F)을 처리하였으며, 5 mM NAC 및 200 μg/mL의 시료를 DMSO에 녹여 분화 10일 동안 처리하고 효능을 평가하였다.
분화 과정에 따른 지방세포 내 지방 축적량을 측정하고자 각각의 시료를 처리하여 10일 동안 분화된 3T3-L1 세포에 10% 포르말린(formalin) 용액 500 μL를 첨가하여 5분간 실온에서 방치한 후 제거하였다.
동량의 포르말린 용액으로 분화된 3T3-L1 세포 1시간 이상 실온에서 방치하여 plate에 고정시켰다.
60% 아이소프로판올(isopropanol) 용액 500 μL로 세척하여 세포를 완전히 건조시킨 후, 미리 제조해 둔 Oil Red O working solution(ORO : DDW=6:4)으로 세포 내 축적된 지방성분들을 충분히 염색하였다.
증류수를 이용하여 세포를 3 내지 4회 세척하고, 세포 내 축적된 지방 성분과 결합한 ORO는 100% 아이소프로판올을 이용하여 모두 용출시킨 후 microplate reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다(표 1).
구분 | 상대적 지질축적량(%) | |||
비스페놀 A
처리군 |
비스페놀 S
처리군 |
메틸파라벤 처리군 |
DEHP
처리군 |
|
실시예(50 μg/mL) | 29.66 | 33.52 | 37.08 | 38.85 |
실시예(100 μg/mL) | 14.49 | 16.37 | 18.11 | 18.98 |
MDI(음성대조군) | 100 | 100 | 100 | 100 |
NAC(양성대조군) | 13.07 | 14.77 | 16.34 | 17.12 |
표 1 및 도 2를 참조하면, 좁은잎천선과 추출물(HR1902-W) 소재는 환경호르몬에 의해 축적되는 지질의 양을 농도의존적으로 감소시켰다. 100 μg/mL 좁은잎천선과 추출물에서는 항산화 및 항비만 활성이 있는 것으로 알려진 5 mM n-acetylcysteine(NAC)와 유사한 수준(14.49±1.19%)으로 나타났다.
실험예 5 : 환경호르몬 유도 ROS 생성 억제능 평가
분화 과정에 따른 지방세포 내 ROS 생성량을 측정하고자 각각의 시료를 처리하여 10일 동안 분화된 3T3-L1 세포에 PBS를 이용하여 2회 세척하였다.
0.2% NBT 용액 200 μL를 첨가하여 CO2 incubator에서 90분간 반응시킨 후 DMSO 및 1N KOH 7:3 혼합 용액으로 dark blue formazan을 용출시켰다.
용출물은 microplate reader를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
구분 | 상대적 활성산소종 생성량(%) | |||
비스페놀 A
처리군 |
비스페놀 S
처리군 |
메틸파라벤 처리군 |
DEHP
처리군 |
|
실시예(50 μg/mL) | 39.57 | 44.32 | 48.67 | 50.25 |
실시예(100 μg/mL) | 38.53 | 41.15 | 43.39 | 44.93 |
MDI(음성대조군) | 100 | 100 | 100 | 100 |
NAC(양성대조군) | 14.51 | 16.98 | 22.72 | 17.59 |
표 2 및 도 3을 참조하면, NBT(nitroblue tetrazoliu)와 ROS가 반응하여 형성된 dark blue formazan의 흡광도를 측정한 결과 환경호르몬은 지방세포의 분화시 활성산소의 생성을 유도하였으며, H2-DCFDA 형광염색을 통해 ROS를 측정한 결과 환경호르몬 처리로 인해 형광도가 증가하였다.반면, 좁은잎천선과추출물(HR1902-W)을 처리한 실험군에서 환경호르몬에 의해 유발된 ROS의 생성이 효과적으로 억제되었다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (7)
- 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 유발 지질대사이상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 환경호르몬은 비스페놀류, 파라벤류, 또는 프탈레이트류인, 식품 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서,
환경호르몬 유발 활성산소종을 억제하는, 식품 조성물. - 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 포함하는 환경호르몬 유발 지질대사이상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 삭제
Priority Applications (1)
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KR1020200137439A KR102499105B1 (ko) | 2020-10-22 | 2020-10-22 | 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬 유발 대사증후군 개선 및 치료용 조성물 |
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KR1020200137439A KR102499105B1 (ko) | 2020-10-22 | 2020-10-22 | 좁은잎천선과 추출물을 유효성분으로 함유하는 환경호르몬 유발 대사증후군 개선 및 치료용 조성물 |
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KR20220053232A KR20220053232A (ko) | 2022-04-29 |
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KR101706649B1 (ko) | 2014-10-29 | 2017-02-14 | 한국식품연구원 | 글루코시놀레이트를 포함하는 비스페놀-에이에 의한 독성 억제용 조성물 |
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- 2020-10-22 KR KR1020200137439A patent/KR102499105B1/ko active IP Right Grant
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KR101706649B1 (ko) | 2014-10-29 | 2017-02-14 | 한국식품연구원 | 글루코시놀레이트를 포함하는 비스페놀-에이에 의한 독성 억제용 조성물 |
Non-Patent Citations (2)
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Joerin L et al., Ficus carica leaf extract modulates the lipid profile of rats.... Phytother Res, 2014,28(2), 261-267. 1부.* |
권희연 외 8인, 좁은잎천선과 및 조릿대 혼합 추출물의 항산화 성분과 항산화 활성, 한국식품과학회지, 2020년 8월, 52(4), 369-376. 1부.* |
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