KR102457556B1 - Hsv 치료를 위한 수단 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 HSV에 대한 치료 또는 예방 접종을 위한 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus, HSV) 폴리펩티드의 다량체성 복합체를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HSV 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 백신 조성물을 생산하는 방법을 추가로 포함한다.

Description

HSV 치료를 위한 수단 및 방법

본 발명은 헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus, HSV)에 대한 치료 또는 예방 접종(vaccination)을 위하여 HSV 폴리펩티드의 다량체성 복합체(multimeric complex)를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HSV 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 상기 백신 조성물을 생산하는 방법을 추가로 포함한다.

헤르페스 심플렉스 바이러스는 헤르페스비리데(Herpesviridae)로 알려진 바이러스과의 바이러스속이다. 인간을 감염시키는 종은 일반적으로 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV-1) 및 헤르페스 심플렉스 바이러스 2(HSV-2)로 알려져 있고, 이들의 공식 명칭은 각각 인간 헤르페스 바이러스 1(Human herpesvirus 1, HHV-1) 및 인간 헤르페스 바이러스 2(Human herpesvirus 1, HHV-2)이다. HSV-1의 초기 감염은 일반적으로 아동기 또는 청소년기에 발생하며 평생 지속된다. HSV-1의 감염율은 전세계적으로 40%에서 80% 사이이며, 낮은 사회경제적 지위의 사람들 중에서 높다. 많은 경우 HSV-1에 노출된 사람들은 무증상의 혈청전환(seroconversion)을 나타낸다. 그러나 초기 감염도 심각할 수 있어, 탈수 시점까지 먹고 마시기를 방해하는 심각한 불편과 관련되고, 10일 내지 14일 동안 지속되며, 감염 후 1일 내지 26일 후에 발생할 수 있는 1 내지 2 mm의 수포(blister)가 발생할 수 있다. 재발성 구순 헤르페스(labial herpes)는 대략 미국 인구의 1/3에 영향을 미치며, 이 환자들은 전형적으로 1년에 1회 내지 6회 경험한다. 홍반 기반의 구진(papule)은 수시간 내에 소포(vesicle)가 되고, 그후 72 내지 96시간 내에 궤양화(ulcerated), 가피화(crusted) 및 치료의 단계로 진행된다(Cernik et al., 2008, Arch Intern Med., vol. 168, pp. 1137-1144). 2003년의 전세계 추정에 따르면 인구의 16.2%가 생식기 헤르페스(genital herpes)의 주요 원인인 HSV-2에 감염되어 있다. 잠복기(latency)로 알려진 비복제 상태로 들어가서 면역 체계에 의한 제거를 성공적으로 피할 수 있는 바이러스의 능력은 평생 감염에 이르게 한다. 잠복기로부터 주기적 재활성화가 가능하고, 초기 감염 부위에서 바이러스 발산(shedding)이 이루어진다. 헤르페스로 인한 생식기 병변은 종종 매우 고통스럽고, 상당한 심리적 병적상태(psychological morbidity)를 초래할 수 있다. 상기 바이러스는 또한 출생시 어머니로부터 아이에게 전달될 수 있다. 치료하지 않으면, 전달된 질병을 가진 유아의 80%가 죽고, 살아남은 유아는 종종 뇌손상을 입는다. 또한, 생식기 헤르페스는 2배 내지 3배의 HIV 감염의 증가된 위험, 성행위 상의 HIV 전염이 5배까지 증가된 위험과 관련이 있고, 높은 HSV-2 유병율 집단(prevalence populations)에서는 새로운 HIV 감염의 40% 내지 60%를 차지할 수 있다(Looker et al., 2008, Bulletin of the World Health Organization, vol. 86, pp. 805-812).

현재, 합성 비고리 퓨린-뉴클레오시드 유사체(acyclic purine-nucleoside analogue)인, 아시클로비르(acyclovir)는 HSV 감염의 표준 치료법이고, 증상 조절에 큰 도움이 된다. 전구체 약물, 발라시클로비르(valacyclovir)(아시클로비르로 전환) 및 팜시클로비르(famciclovir)(펜시클로비르(penciclovir)로 전환)가 허가되었으며, 각각 아시클로비르 및 펜시클로비르보다 더 우수한 경구 생체이용률(bioavailability)을 보인다. 상기 이용가능한 약물은 바이러스성 티미딘 키네이스(thymidine kinase)에 의해 바이러스 감염 세포 내에서만 활성 약물로 전환되기 때문에 안전성이 매우 우수하다. 그러나 HSV는 티미딘-키네이스-결핍 돌연변이의 생성 또는 아시클로비르를 인산화할 수 없는 티미딘 키네이스를 갖는 돌연변이를 선별함으로써 티미딘 키네이스를 코딩하는 바이러스 유전자의 돌연변이를 통해 아시클로비르에 내성을 개발할 수 있다. 아시클로비르에 저항성을 갖는 대부분의 임상 HSV 분리균(HSV isolates)은 일부에서 변형된 DNA 중합효소가 검출되었으나, 티미딘 키네이스가 결핍되어 있다. HSV는 활성화되기 전에 수개월 또는 수년 동안 뉴런에 잠복할 수 있으므로, HSV에 의해 유발되는 증상을 치료하기 위한 치료법이 사용될 수 있으나, 바이러스의 주기적 재활성화를 피할 수 없다.

따라서 HSV와 싸우기 위한 가장 효과적이고 경제적인 방법은 바이러스의 초기 감염 및/또는 주기적 재활성화를 예방하는 백신이다. 지난 수십년 동안 이러한 백신 개발에 많은 노력이 이루어져 왔다. 그러나 강력한 HSV 백신을 개발하려는 시도는 임상 시험에서 낮은 성과를 보이는 제한된 수의 항원에 초점이 맞추어져 있다. 따라서, HSV에 대한 백신이 시급히 필요하다.

백신 조성물(Vaccine composition)

본 발명은 이러한 요구를 해결하고, 헤르페스 심플렉스 바이러스 폴리펩티드 UL11, UL16 및 UL21의 다량체성 복합체, 헤르페스 심플렉스 바이러스 폴리펩티드 UL48, UL49 및 gE의 다량체성 복합체 또는 헤르페스 심플렉스 바이러스 폴리펩티드 UL31 및 UL34의 다량체성 복합체를 포함하는 신규한 백신 조성물을 제공한다.

용어 "다량체성 복합체(multimeric complex)" 또는 "복합체(complex)"는 본 명세서에서 상호교환적(interchangeably)으로 사용되고, 공유결합으로 부착된 임의의 분자(예를 들어 지질 앵커 또는 올리고당) 또는 비단백 보결기(prosthetic group)(예를 들어 뉴클레오티드 또는 금속 이온)와 함께 적어도 두 개의 폴리펩티드 서브유닛으로 이루어진 안정적인 폴리펩티드 복합체를 지칭한다. 본 명세서에서 보결기는 강하게 결합된 보조인자(cofactor)를 나타낸다. 따라서, 다량체성 복합체는 2개 폴리펩티드(즉, 이량체), 3개 폴리펩티드(즉, 삼량체) 또는 4개 폴리펩티드(즉, 사량체)를 포함할 수 있다. 본 발명의 다량체성 복합체는 생체 내(in vivo) 기능 단위로서 존재하는 것으로 밝혀진 상호작용 단백질의 세트에 관한 것이며, 본 발명의 다량체성 복합체의 폴리펩티드는 엄격한 단백질 정제 방법을 사용하여 공동-정제될(co-purified) 수 있다. 이러한 엄격한 단백질 정제 방법은 비특이적 및/또는 인공적 단백질 상호 작용을 강요하지 않는 완충액 및 용액을 사용하게 하고, 그러므로 엄격한 세척 조건에서 온전한 상태를 유지하는 (즉, 복합체의 폴리펩티드가 방출되지 않음) 복합체의 정제만을 야기한다. 따라서, 단지 세포 추출물로부터의 면역 침강 또는 풀-다운 실험(pull-down experiment)과 같은 폴리펩티드의 상호작용을 보여주는 방법은 본 발명의 복합체를 정제하는 적합한 방법으로 고려되지 않는다. 마찬가지로, 단지 폴리펩티드의 공동-위치(co-localization) 또는 폴리펩티드의 상호 작용을 나타내는 방법은, 특히 그러한 방법이 예를 들어, 효모-2-하이브리드 시스템과 같이 인위적으로 변형된 폴리펩티드를 사용하는 경우, 본 발명의 복합체를 나타내지 않는다. 따라서, 정제 후 본 발명의 복합체는 적절한 방법(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피)을 사용하여 검출될 수 있다. 결과적으로, 조성물 내에 생체 내에서 복합체로 존재할 수 있는 2 또는 그 이상의 폴리펩티드의 단순한 존재는 상기 복합체를 특정 정제 방법 및 조건을 사용해서만 형성할 수 있고, 특정 저장 조건에서 정제한 후에만 안정화되기 때문에 본 발명의 복합체로 간주되지 않는다. 따라서, 특정 폴리 펩타이드가 생체 내에서 복합체를 형성하는 것으로 보여지더라도, 상기 폴리펩티드는 용액에서 단량체로 존재할 수 있다. 하나의 구체예에서, 상기 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL11 및 UL16을 포함하는 이량체이다. 추가의 구체예에서, 상기 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL16 및 UL21을 포함하는 이량체이다. 바람직한 구체예에서, 상기 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL11, UL16 및 UL21을 포함하는 삼량체이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 상기 다량체성 복합체는 삼량체이고, HSV 폴리펩티드 UL11, UL16 및 UL21을 포함하거나 또는 이들로 이루어진다. 하나의 구체예에서, 상기 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL48 및 UL49를 포함하는 이량체이다. 추가의 구체예에서, 상기 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL49 및 gE를 포함하는 이량체이다. 바람직한 구체예에서, 상기 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL48, UL49 및 gE를 포함하는 삼량체이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 상기 다량체성 복합체는 삼량체이고, HSV 폴리펩티드 UL48, UL49 및 gE를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다. 추가의 바람직한 구체예에서, 상기 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL31 및 UL34를 포함하거나 또는 이들로 구성되는 이량체이다. 본 발명의 다량체성 복합체에서, 하나 또는 그 이상의 단백질은 추가의 B- 및/또는 T-세포 에피토프(epitope)를 포함할 수 있다. 상기 T 세포 에피토프는 CD4 T 세포 에피토프 또는 CD8 T 세포 에피토프일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 복합체는 상승 효과를 제공한다. 따라서, 본 발명의 복합체는 바람직하게는 단일 단백질과 비교하여 환자 PBMC를 사용한 ELISPOT 분석에서 보다 강한 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 발명의 복합체는 당업계에 공지된 적절한 수단 및 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 복합체는 숙주 세포에서 복합체의 단일 폴리펩티드를 공동-발현시킴으로써 생성되어 숙주 세포에서 복합체가 형성될 수 있다. 본 발명의 복합체는 또한 별도의 숙주 세포에서 복합체의 단일 폴리펩티드를 발현시키고, 숙주 세포로부터 단일 폴리펩티드를 정제하며, 복합체의 형성을 허용하는 조건으로 시험관 내에서 단일 폴리펩티드를 혼합합으로써 제조될 수 있다. 그러나 본 발명의 복합체는 또한 별도의 숙주 세포에서 복합체의 단일 폴리펩티드를 발현시키고, 숙주 세포로부터 단일 폴리펩티드를 정제하며, 생체 내에서 복합체가 형성되도록 단일 폴리펩티드를 개체에 투여함으로써 제조될 수 있다. 복합체의 단일 폴리펩티드를 개체에 투여한 후 복합체가 생체 내에서 형성되는지 여부는 생체 내 조건(즉, 37℃, 혈액, 혈청 및 생리 식염 농도)을 모방한 모델 시스템에서 결정될 수 있다.

상기 백신 조성물의 상기 폴리펩티드는 태그를 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 폴리펩티드 태그는 재조합 폴리펩티드와 유전적으로 융합된 아미노산 서열이며, 폴리펩티드의 정제 및/또는 검출을 제공한다. 상기 백신 조성물의 상기 폴리펩티드는 HA-태그, Flag-태그, Myc-태그, V5-태그, Strep-태그, StrepII-태그, Sof-태그, His-Strep-태그, Avi-태그, 칼모듈린-태그, E-태그, S-태그, SBP-태그, TC-태그, VSV-태그, Xpress-태그, Ty-태그, Halo-태그, Nus-태그, 티오레독신-태그, Fc-태그, 키틴 결합 단백질(CBP), 말토스 결합 단백질(MBP), 글루타티온-S-전이효소(GST), 녹색 형광 단백질(GFP)과 융합될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 상기 백신 조성물의 상기 폴리펩티드는 6개 또는 12개 His-잔기로 구성될 수 있는 폴리히스티딘-태그와 융합되며, 8개의 His-잔기가 바람직하다. 폴리펩티드 태그는 바람직하게는 폴리펩티드 링커를 통해 상기 백신 조성물의 폴리펩티드에 융합된다. 폴리펩티드 링커 및 8개 His- 태그의 바람직한 조합은 서열번호 10에 공개되어 있다.

"폴리펩티드(polypeptide)"는 펩티드 결합에 의해 함께 연결된 아미노산의 중합체(polymer)를 포함하는 분자를 지칭한다. 상기 용어는 본 명세서에서 특정 길이의 분자를 나타내는 것을 의미하지 않으며, 따라서 본 명세서에서 용어 "단백질(protein)"과 상호교환적으로 사용된다. 본 명세서에 사용될 때, 용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 또한 발현 카세트 또는 벡터에 의해 발현되거나 또는 본 발명의 숙주 세포로부터 분리될 수 있는 "목적 폴리펩티드(polypeptide of interest)" 또는 "목적 단백질(protein of interest)"을 포함한다. 폴리펩티드는 아미노산 서열을 포함하고, 따라서 때때로 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드는 본 명세서에서 "폴리펩티드 서열을 포함하는 폴리펩티드(polypeptide comprising a polypeptide sequence)"로 지칭된다. 따라서, 본 명세서에서 용어 "폴리펩티드 서열"은 용어 "아미노산 서열"과 상호교환적으로 사용된다.

용어 "아미노산(amino acid)" 또는 "aa"는 자연 발생((naturally occurring) 아미노산 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체(amino acid analogs) 및 아미노산 모방체(amino acid mimetics)를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 아미노산뿐만 아니라 예를 들어, 하이드록시프롤린(hydroxyproline), γ-카복시글루타메이트(γ-carboxyglutamate) 및 O-포스포세린(O-phosphoserine)과 같이 후에 변형된 아미노산이다. 아미노산 유사체는 즉 수소와 결합한 탄소, 카르복실 그룹, 아미노 그룹 및 R 그룹, 예를 들어 호모세린(homoserine), 노르루신(norleucine), 메티오닌 술폭시드(methionine sulfoxide), 메티오닌 메틸 술포늄(methionine methyl sulfonium)과 같이 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 갖는 화합물을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 그룹(예를 들어, 노르루신) 또는 변형된 펩티드 백본(backbone)을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 갖는다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와는 다른 구조를 갖지만, 자연적으로 발생하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학적 화합물을 지칭한다.

"에피토프(epitope)"는 예를 들어, B 세포 또는 T 세포와 같은 면역 시스템에 의해 인식되는 항원의 일부이다. 상기 용어는 구조적 및 선형(linear) (또는 순차적(sequential)) 에피토프를 모두 포함한다. 구조적 에피토프(conformational epitope)는 항원의 아미노산 서열에서 불연속 부분(discontinuous section)을 포함하는 반면, 선형 에피토프는 항원의 아미노산 서열에서 연속 부분으로 이루어진다. 구조적 에피토프는 또한 2개 또는 그 이상의 항원의 아미노산 서열 부분을 포함할 수 있다. 상기 용어는 크립토토프(cryptotopes) 및 네오토프(neotopes)를 추가로 포함한다. "크립토토프"는 예를 들어, 바이러스와 같이 자연 발생 항원에 숨어있는 에피토프이며, 항원이 자연적 구조로 존재하지 않을 때 접근이 가능해진다 "네오토프"는 단백질의 4차 구조에서만 발견되고, 단백질 단량체에서는 발견되지 않는 에피토프이다.

B 세포 에피토프는 특정 막-결합 B 세포 수용체(BCR) 또는 항체에 의해 인식되는 항원(예를 들어, 천연 단백질)의 부분이다. X선 결정학, 어레이 기반 올리고 펩티드 스캐닝(array-based oligopeptide scanning), 위치-지시 돌연변이 유발, 돌연변이 유발 지도 작성(mutagenesis mapping) 및 파지 디스플레이뿐만 아니라, Sun et al. Comput Math Methods Med. 2013; 2013: 943636에 기재된 컴퓨터를 이용한 방법들을 포함하는 다수의 방법들이 B-세포 에피토프의 동정 또는 선별에 손쉽게 활용될 수 있다. 예를 들어, 적합한 방법은 기하학적 속성 및 특정 물리화학적 특성을 포함하고, 항원 및 에피토프-관련 경향성 척도(epitope-related propensity scales)의 3D 구조에 의존하는 구조-기반 예측 모델(structure-based prediction model)을 포함한다. 구조 기반 알고리즘(Structure-based algorithm)과 웹 서버(프로그램)는 예를 들어, EPSVR&EPMeta (http://sysbio.unl.edu/services/), EPCES (http://sysbio.unl.edu/services/EPCES/), 및 Epitopia (http://epitopia.tau.ac.il/)를 포함한다. 미모토프-기반 예측 방법(Mimotope-based prediction methods)은 항체 친화도-선별 펩티드(antibody affinity-selected peptide) 및 항원의 3D 구조를 입력값(input)으로 요구하는 조합 방법이다. 미모토프-기반 예측 모델에 기초한 예시적인 알고리즘 및 프로그램은 예를 들어, MimoPro (http://informatics.nenu.edu.cn/MimoPro), PepSurf (http://pepitope.tau.ac.il) 및 EpiSearch (http: //curie.utmb.edu/episearch.html)를 포함한다. 또한, 항원의 일차 서열에만 의존하는 서열-기반 예측 모델(sequence-based prediction models), 예를 들어, BEST 및 Zhang'의 방법(Sun et al. Comput Math Methods Med. 2013; 2013: 943636.)이 이용가능하다. 또한, 결합 부위 예측 모델은, 예를 들어, ProMate, ConSurf, PINUP, 및 PIER과 같이 단백질-단백질 상호 작용, 항원 및 항체 상호 작용의 결합 부위에 초점을 맞춘 방법을 추론하여 사용될 수 있다.

T 세포 에피토프는 전형적으로 가공된 단백질 항원(processed protein antigens)으로부터 유래한다. T 세포 에피토프는 CD4 T 세포 에피토프 또는 CD8 T 세포 에피토프일 수 있다. 세포 독성(CD8) T 세포는 MHC 클래스 I 분자에 의해 제시되는 세포 내 펩티드(CD8 T 세포 에피토프)를 인식하는 반면, T 도움 세포는 세포외 공간에서 포획되어 MHC 클래스 II 분자에 의해 제시되는 펩티드(CD4 T 세포 에피토프)를 인식한다. 펩타이드:MHC 복합체(pMHC)는 T 세포 수용체와 상호 작용하여 T 세포의 활성화 및 이후의 세포성 면역 반응의 유도에 이르게 한다. T 세포 에피토프 예측 및/또는 선별을 위한 다수의 인 실리코(in silico) 방법이 이용 가능하다. CD8+ T 세포 에피토프 예측을 위해, Larsen et al. BMC Bioinformatics 2007, 8:424에 기술된 바와 같이 tCTL-1.2 (http://www.cbs.dtu.dk/services/NetCTL/), EpiJen (http://www.ddg-pharmfac.net/epijen/EpiJen/EpiJen.htm), 또는 MAPPP (http://www.mpiib-berlin.mpg.de/MAPPP/)가 사용될 수 있다. CD4+ T 세포의 경우, 에피토프 예측을 위한 컴퓨터 이용 모델이 Oyarzan P et al. BMC Bioinformatics 2013, 14:52에 기술되어 있고, 예를 들어, Rankpep (http://imed.med.ucm.es/Tools/rankpep.html), TEPITOPE 및 NN-align (http://www.cbs.dtu.dk/services/NNAlign/)과 같이 결합 모티프를 동정하기 위해 펩티드 서열 비교에 의존하는 데이터-중심의 방법(data-driven method)뿐만 아니라, 예를 들어 NetMHCIIPan-2.0 (http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCIIpan-2.0/), TEPITOPEpan (http://www.biokdd.fudan.edu.cn/Service/TEPITOPEpan/) 및 Predivac (http: //predivac.biosci.uq.edu.au/)과 같이 결합 에너지를 추정하기 위한 분자 모델링 계산을 수행하고, 실험적 결합 데이터로부터 독립성을 제공하는 구조-기반 방법을 포함한다.

용어 "헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus)" 및 "HSV"라는 용어는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 일반적으로 헤르페스바이러스 심플렉스바이러스 속(herpesviral Genus Simplexvirus), 즉 아텔린 헤르페스바이러스 1(Ateline herpesvirus 1), 소 헤르페스바이러스 2(Bovine herpesvirus 2), 세르코피테신 헤르페스바이러스 1(Cercopithecine herpesvirus 1), 세르코피테신 헤르페스바이러스 2, 세르코피테신 헤르페스바이러스 16, 인간 헤르페스바이러스 1(human herpesvirus 1), 인간 헤르페스바이러스 2, 매크로포디드 헤르페스바이러스 1(Macropodid herpesvirus 1), 매크로포디드 헤르페스바이러스 2, 사이미린 헤르페스바이러스 1(Saimiriine herpesvirus 1)을 지칭한다. 심플렉스바이러스 속의 바람직한 바이러스 종은 사람을 감염시키는 바이러스이다. 더 바람직한 바이러스 종은 각각 인간 헤르페스 바이러스 1 및 2(HHV-1 및 HHV-2)로 알려진 헤르페스 심플렉스 바이러스 1(HSV-1) 및 헤르페스 심플렉스 바이러스 2(HSV-2)이다.

본 명세서에 사용된 용어 "백신 조성물(vaccine composition)"은 개체에서 HSV와 관련된 병리학적 상태의 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 본 발명의 다량체성 복합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 "백신 조성물"은 활성 성분의 면역 활성을 증진시키는 하나 또는 그 이상의 추가 성분 또는 예를 들어 완충제(buffers), 환원제(reducing agents), 안정화제(stabilizing agents), 킬레이트제(chelating agents), 벌킹제(bulking agents), 삼투압 조절제(osmotic balancing agents)(긴장성 제제(tonicity agents)); 계면활성제, 폴리올(polyols), 항산화제; 동결건조보호제(lyoprotectan); 소포제(anti-foaming agents), 방부제(preservatives); 및 착색제(colorants), 세제(detergents), 나트륨염 및/또는 항균제 등을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 상기 백신 조성물은 부가적으로 약학 조성물에 전형적인 추가 성분을 포함할 수 있다. 본 발명의 백신은 바람직하게는 인간 및/또는 동물용이다. 상기 백신 조성물은 살균 및/또는 무발열원(pyrogen-free)일 수 있다. 상기 백신 조성물은 인간에 대해 등장성(isotonic)일 수 있다.

상기 백신 조성물은 바람직하게는 본 발명의 방법에 의해 수득된 다량체성 복합체 또는 본 발명의 다량체성 복합체를 치료학적으로 유효한 양으로 포함한다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL11은 바람직하게는 서열번호 1의 아미노산 서열과 75% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL11은 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "UL11"은 HSV의 테구먼트 단백질(tegument protein)에 관한 것이다. 서열번호 1은 HSV-2 UL11의 아미노산 서열을 예시적으로 서술하며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54674.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL11"은 또한 서열번호 1에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL11 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기술된 바와 같이 서열번호 1에 기재된 참조 서열(reference sequence)에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL11"은 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 서열 동일성이 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 74%, 73%, 72%, 71% 또는 바람직하게는 75% 또는 그 이상인 폴리펩티드, 또는 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 25, 26, 27, 28, 29까지 또는 바람직하게는 24개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL11 단백질은 UL16, UL21 및/또는 gE 또는 gE의 세포질 말단(cytoplasmic tail)과 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 UL11 단백질은 UL16 또는 gE 또는 gE의 세포질 말단과 이량체를 형성할 수 있고, UL16 및 UL21 또는 UL16 및 gE 또는 gE의 세포질 말단과 삼량체를 형성할 수 있으며, 및/또는 UL16, UL21 및 gE 또는 gE의 세포질 말단과 사량체를 형성할 수 있다.

"서열 동일성(Sequence identity)" 또는 "% 동일성(% identity)"은 표준화된 알고리즘을 사용하여 정렬된(aligned) 적어도 2개의 폴리펩티드 서열 사이에서 잔기가 일치하는 백분율을 지칭한다. 상기 알고리즘은, 표준화되고 재현 가능한 방식으로, 두 서열 사이에서 정렬을 최적화하기 위해 비교되는 서열에 갭을 삽입할 수 있으며, 따라서 두 서열의 의미있는 비교를 달성할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 두 아미노산 서열 사이의 서열 동일성은 NCBI BLAST 프로그램 버전 2.3.0 (Jan-13-2016) (Altschul 등, Nucleic Acids Res. (1997) 25: 3389- 3402)으로 결정될 수 있다. 두 아미노산 서열의 서열 동일성은 다음 파라미터들로 설정된 blastp로 결정될 수 있다: Matrix: BLOSUM62, Word Size: 3; Expect value: 10; Gap cost: Existence = 11, Extension = 1; Compositional adjustments: Conditional compositional score matrix adjustment.

용어 "면역 반응(immune response)"은 바람직하게는 체내뿐만 아니라, 체액성(humoral) 및/또는 세포 매개 면역 반응(cell mediated immune response)을 유도하는 능력을 지칭한다. 체액성 면역 반응은 B 세포 매개 항체 반응을 포함한다. 세포 매개 면역은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 포함하나, 이에 한정되지 않는 T 세포 매개 면역 반응을 포함한다. 면역 반응을 이끌어내는 항원의 능력은 면역원성(immunogenicity)이라고 불리며, 이것은 체액성 및/또는 세포 매개 면역 반응일 수 있다. 본 발명의 면역 반응은 바람직하게는 HSV에 대한 면역 반응이고, 더욱 바람직하게는 개체에서 HSV 감염에 대한 면역 반응이다.

생체 내에서 체액성 및/또는 세포 매개성 면역 반응을 유도하는 능력은 인간의 질병을 정확하게 반영하고, 병인(pathogenesis) 및 후보 항바이러스성 물질과 백신의 치료 효능을 제시하는 시스템인 생식기 HSV-2 감염의 기니아 피그 모델을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 그것은 생식기-상주(genital-resident) 및 신경 조직-상주 면역 기억(neural tissue-resident immune memory)의 특성을 모두 다루는 이상적인 시스템 역할을 한다. 기니아 피그의 생식기 감염은 인간 질병에서 발견되는 신경학적 징후를 갖는 자기-제한적인 외음부 질염(self-limiting vulvovaginitis)을 초래한다. 암컷 기니아 피그의 최초 질병은 일반적으로 8일로 제한되는 생식기 상피 세포에서의 바이러스 복제를 수반한다. 이 기간 동안, 바이러스는 감각 신경 말단(sensory nerve endings)에 도달하고, 역행 수송(retrograde transport)에 의해 척수의 감각 신경절과 자율 신경세포의 세포체로 운반된다. 이 부위에서 짧은 기간의 급성 복제 후, 면역계는 대개 접종 후 15일까지 급성 바이러스 복제를 해결하고, 바이러스는 감각 뉴런의 평생, 잠복 감염으로 유지된다. 최초 HSV-2 생식기 감염에서 회복된 후 기니피그는 가끔씩 자발적으로 재발하는 감염과 질병을 경험한다. HSV-2 재발은 회음부에서 홍반성(erythematous) 및/또는 소포 병변이 있는 임상적으로 명백한 질병 또는 생식관에서의 바이러스 발산(shedding)을 특징으로 하는 무증상 재발로 나타날 수 있다. 백신 유효성은 예를 들어 기니아 피그 생식기 감염 모델을 사용하여 평가할 수 있다. 동물은 5x10¹ PFU, 5x10² PFU, 5x10³ PFU, 5x10⁴ PFU, 5x10⁶ PFU, 5x10⁷ PFU, 5x10⁸ PFU, 또는 5x10⁹ PFU 및 바람직하게는 5x10⁵ PFU의 HSV-2(예를 들어, MS 균주)로 질내(intravaginally)로 감염될 수 있다. 동물은 감염 전후에 1, 2, 3, 4, 5회 또는 그 이상 면역화될 수 있다. 바람직하게는, 감염 후 15일차에, 동물을 15일 간격으로 2회 면역화시켰다. 일반적으로, 임의의 적합한 투여 경로가 면역화를 위해 사용될 수 있다. 그러나 동물은 바람직하게는 근육 내에 면역화된다. 가능한 대조 그룹은 보조제만 (예를 들어, CpG 100 ㎍/Alum 150 ㎍) 또는 PBS (음성 대조군 모두), 또는 HSV-2 dI5-29 돌연변이 바이러스 균주(양성 대조군)를 사용하여 모의-면역화(mock-immunized)한다. 보조제와 결합된 백신 후보 물질로 면역화된 그룹은 0.1 ㎍, 0.5 ㎍, 1 ㎍, 2 ㎍, 3 ㎍, 4 ㎍, 5 ㎍, 10 ㎍, 15 ㎍, 25 ㎍, 30 ㎍, 35 ㎍, 40 ㎍, 50 ㎍, 60 ㎍, 70 ㎍, 80 ㎍, 90 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍ 및 바람직하게는 20 ㎍의 각각의 항원을 각각의 면역화 라운드에서 투여한다. 재발성 바이러스 발산의 빈도 및 규모를 평가하기 위해 예를 들어, 감염 후 0 일부터 200일까지, 감염 후 1일부터 180일까지, 감염 후 3일부터 160일까지, 감염 후 5일부터 140일까지, 감염 후 7일부터 120일까지, 감염 후 10일부터 100일까지, 감염 후 12일부터 90일까지, 질 면봉 판독(read out vaginal swab)을 수집할 수 있다. 질 면봉은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 10일마다 수집할 수 있다. 바람직하게는, 질 면봉은 감염 후 15일부터 85일까지 매일 수집된다. 동일한 시간 간격으로 심각도 (점수 0-4) 및 재발성 생식기 헤르페스 병변의 지속 기간을 매일 기록한다. 바람직하게는, 연구 종료시 항체 반응뿐만 아니라 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응이 결정된다.

경구, 국소, 경피, 피하, 정맥 내, 복강 내, 근육 내 또는 안구 내를 포함하고, 이에 제한되지 않는 다양한 경로가 본 발명의 백신 조성물의 투여에 적용가능하다. 그러나 필요한 경우 임의의 다른 경로가 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다.

개체에 투여되는 본 발명의 백신 조성물의 정확한 투여량은 치료 목적(예를 들어, 급성 질환 vs. 예방 백신), 투여 경로, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이 요법, 투여 시간, 약물 상호 작용 및 증상의 중증도에 좌우되며, 당업자에 의한 통상적인 실험으로 확인될 수 있다. 투여량은 바람직하게는 유효량, 즉 면역 반응을 유도하는데 효과적인 양이다.

본 발명의 백신 조성물은 개체에 1회 또는 그 이상, 예를 들어, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 또는 그 이상 투여될 수 있다.

본 명세서에서 "개체(subject)"는 동물, 바람직하게는 예를 들어, 생쥐, 랫트, 기니아 피크, 햄스터, 토끼, 개, 고양이 또는 영장류일 수 있는 포유동물이다. 바람직하게, 상기 개체는 인간이다. 그러나 "개체"라는 용어는 또한 세포, 바람직하게는 포유동물 세포, 더욱 바람직하게는 인간 세포를 포함한다. 상기 세포는 면역 세포, 바람직하게는 림프구일 수 있다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL16은 바람직하게는 서열번호 2의 아미노산 서열과 75% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL16은 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 용어 “UL16”은 HSV의 테구먼트 단백질에 관한 것이다. 서열번호 2는 HSV-2 UL16의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54679.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL16"은 또한 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL16 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 2에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL16"은 서열번호 2의아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 74%, 73%, 71% 70%, 69%, 68%, 67% 또는 바람직하게는 72% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 2의아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123개까지 또는 바람직하게는 104개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL16 단백질은 UL11, UL21 및/또는 gE 또는 gE의 세포질 말단과 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 UL16 단백질은 UL21 또는 UL11과 이량체를 형성할 수 있고, UL11 및 UL21과 삼량체를 형성할 수 있으며, 및/또는 UL11, UL21 및 gE 또는 gE의 세포질 말단과 사량체를 형성할 수 있다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL21은 바람직하게는 서열번호 3의 아미노산 서열과 80% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL21은 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "UL21"은 HSV의 테구먼트 단백질에 관한 것이다. 서열번호 3은 HSV-2 UL21의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54684.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL21"은 또한 서열번호 3에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL21 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 3에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL21"은 서열번호 3의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 또는 바람직하게는 80% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 3의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166개까지 또는 바람직하게는 134개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL21 단백질은 UL11, UL21 및/또는 gE 또는 gE의 세포질 말단과 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 UL21 단백질은 UL16과 이량체를 형설할 수 있고, UL11 및 UL16과 삼량체를 형성할 수 있으며, 및/또는 UL11, UL16 및 gE 또는 gE의 세포질 말단을 갖는 사량체를 형성할 수 있다.

본 명세서에 언급된 바와 같이, 본 발명의 백신 조성물에 포함된 다량체성 복합체는 또한 4개의 폴리펩티드(즉, 사량체)를 포함하는 폴리펩티드 복합체일 수 있다. 따라서, HSV 폴리펩티드 UL11, UL16, UL21을 포함하는 본 발명의 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 gE를 추가로 포함할 수 있다. 이 경우, 본 발명의 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL11, UL16, UL21, 및 gE를 포함한다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 gE는 바람직하게는 서열번호 4의 아미노산 서열과 70% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 gE는 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 용어 "gE"는 종종 "당단백질 E(glycoprotein E)"로 지칭될 수 있다. 서열번호 4는 HSV-2 gE의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54732.1로 등록되었다. 그러나 용어 "gE"는 또한 서열번호 4에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 gE 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 4에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "gE"는 서열번호 4의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 74%, 73%, 72%, 71%, 69%, 68%, 67%, 66%, 65%, 또는 바람직하게는 70% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 4의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180개까지 또는 바람직하게는 165개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 gE 단백질은 UL11, UL16 및 UL21과 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 gE 단백질은 UL11과 이량체, UL11 및 UL16과 삼량체 및 UL11, UL16 및 UL21과 사량체를 형성할 수 있다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 백신 조성물에 포함 된 HSV 폴리펩티드 UL11, UL16, UL21을 포함하는 다량체성 복합체는 또한 HSV 폴리펩티드 gE의 세포질 도메인을 포함하는 사량체가 될 수 있다. 이 경우, 본 발명의 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL11, UL16, UL21 및 gE의 세포질 도메인을 포함한다.

본 발명의 백신 조성물에서 gE의 세포질 도메인은 바람직하게는 서열번호 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 그러나 본 명세서에서 gE의 세포질 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75% 또는 바람직하게는 80% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 5의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 27까지 또는 바람직하게는 23개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 것으로 보여진다. 바람직한 gE의 세포질 도메인은 UL11, UL16 및 UL21과 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 gE의 세포질 도메인은 UL11과 이량체, UL11 및 UL16과 삼량체, 및 UL11, UL16 및 UL21과 사량체를 형성할 수 있다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL48은 바람직하게는 서열번호 6의 아미노산 서열과 80% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL48은 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 용어 "UL48"은 HSV의 VP16 테구먼트 단백질에 관한 것이다. 서열번호 6은 HSV-2 UL48의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54712.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL48"은 또한 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL48 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 6에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL48"은 서열번호 6의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 또는 바람직하게는 80% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 6의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123개까지 또는 바람직하게는 98개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL48 단백질은 UL49와 이량체를 형성할 수 있고, 또는 UL49 및 gE 또는 gE의 세포질 말단과 삼량체를 형성할 수 있다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL49는 바람직하게는 서열번호 7의 아미노산 서열과 62% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL49는 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 용어 "UL49"는 HSV의 VP22 테구먼트 단백질에 관한 것이다. 서열번호 7은 HSV-2 UL49의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AKC42813.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL49"는 또한 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL49 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 7에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL49"는 서열번호 2의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 74%, 73%, 72%, 71%, 69%, 68%, 67%, 66%, 65%, 64%, 63%, 61%, 60%, 59%, 58%, 57%, 또는 바람직하게는 62% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 7의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130개까지 또는 바람직하게는 115개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL49 단백질은 UL48 및/또는 gE 또는 gE의 세포질 말단과 이량체를 형성할 수 있다. 따라서, 바람직한 UL49 단백질은 UL48 또는 gE 또는 gE의 세포질 말단과 이량체를 형성할 수 있고, 또는 UL48 및 gE 또는 gE의 세포질 말단과 삼량체를 형성할 수 있다.

본 발명의 또 다른 바람직한 구체예에서, 본 발명의 백신 조성물에 포함된 HSV 폴리펩티드 UL48, UL49를 포함하는 다량체성 복합체는 또한 HSV 폴리펩티드 gE의 세포질 말단을 포함하는 삼량체일 수 있다. 이 경우, 본 발명의 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 UL48, UL49 및 gE의 세포질 말단을 포함한다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL31은 바람직하게는 서열번호 8의 아미노산 서열과 85% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL31은 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 용어 "UL31"은 HSV의 비리온 방출 단백질(virion engress protein)에 관한 것이다. 서열번호 8은 HSV-2 UL31의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54695.1.로 등록되었다. 그러나 용어 "UL31"은 또한 서열번호 8에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL31 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 8에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL31"은 서열번호 1의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 또는 바람직하게는 85% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 8의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61개까지 또는 바람직하게는 46개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL31 단백질은 UL34와 이량체를 형성할 수 있다.

본 발명에서 백신 조성물의 HSV 폴리펩티드 UL34는 바람직하게는 서열번호 9의 아미노산 서열과 70% 또는 그 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 상기 HSV 폴리펩티드 UL34는 개체에 백신 조성물의 형태로 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 용어 "UL34"는 HSV의 비리온 방출 단백질에 관한 것이다. 서열번호 9는 HSV-2 UL34의 아미노산 서열을 예시적으로 나타내며, 또한 NCBI GenBank에 등록번호 AHG54698.1로 등록되었다. 그러나 용어 "UL34"는 또한 서열번호 9에 기재된 아미노산 서열과 일정 수준의 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 UL34 폴리펩티드를 포함하고, 또한 본 명세서에 기재된 서열번호 9에 제시된 참조 서열에 관하여 돌연변이를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, 용어 "UL34"는 서열번호 2의 아미노산 서열과 비교하여 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75% 74%, 73%, 72%, 71%, 69%, 68%, 67%, 66%, 65% 또는 바람직하게는 70% 또는 그 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 서열번호 9의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88개까지 또는 바람직하게는 75개 아미노산의 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 UL34 단백질은 UL31과 이량체를 형성할 수 있다.

언급한 바와 같이, 본 발명의 각 단백질은 본 발명의 백신 조성물에서 상기 단백질의 항원으로서의 사용에 돌연변이들이 해롭지 않는 한, 서열번호 1(UL11), 서열번호 2(UL16), 서열번호 3(UL21), 서열번호 4(gE), 서열번호 5(gE의 세포질 도메인), 서열번호 6(UL48), 서열번호 7(UL49), 서열번호 8(UL31) 및 서열번호 9(UL34)에 제시된 참조 서열에 관하여 예를 들어, 삽입, 결실 및 치환과 같은 돌연변이를 포함할 수 있다. 또한, 이러한 돌연변이는 단백질이 본 발명의 다량체성 복합체를 형성하는 능력을 방해해서는 않된다. 본 발명의 다량체성 복합체의 형성은 단백질 정제 수행, 및 예를 들어, 비-환원 PAGE, 웨스턴 블롯 및/또는 크기 배제 크로마토 그래피와 같은 단백질 분석에 의하여 테스트될 수 있다. 특히, 각 단백질은 예를 들어, 검출, 정제 및/또는 용해도를 향상시키는 태그를 포함할 수 있다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 백신 조성물에서 다량체성 복합체의 폴리펩티드는 HSV-1 폴리펩티드이다.

본 발명의 추가의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 백신 조성물에서 다량체성 복합체의 폴리펩티드는 HSV-2 폴리펩티드이다.

본 발명의 백신 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "담체(carrier)" 및 "부형제(excipient)"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 약학적으로 허용가능한 담체에는 희석제(충전제, 벌크제, 예를 들어, 락토스, 미정질 셀룰로스(microcrystalline cellulose)), 붕해제(예를 들어, 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate), 크로스카멜로스 나트륨(croscarmellose sodium)), 결합제(예를 들어, PVP, HPMC), 윤활제(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate)), 활택제(glidants)(예를 들어, 콜로이드성 SiO₂(colloidal SiO₂)), 용제/공-용제(solvents/co-solvents)(예를 들어, 수성 비히클(aqueous vehicle), 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 글리세롤), 완충제(예를 들어, 시트르산(citrate), 글루코네이트(gluconates), 락테이트), 보존제(예를 들어, 나트륨 벤조에이트(Na benzoate), 파라벤(parabens) (Me, Pr 및 Bu), BKC), 항-산화제(예를 들어, BHT, BHA, 아스코르브산), 습윤제(wetting agents)(예를 들어, 폴리소르베이트(polysorbates), 소르비탄 에스터(sorbitan esters)), 소포제(예를 들어, 시메디콘(Simethicone)), 점도제(예를 들어, 메틸셀룰로스(methylcellulose) 또는 히드록시에틸셀룰로스(hydroxyethylcellulose)), 감미제(예를 들어, 소르비톨, 사카린, 아스파탐, 아세설팜(acesulfame)), 향미제(예를 들어, 페퍼민트, 레몬 오일, 버터스카치 등), 보습제(예를 들어, 프로필렌, 글리콜, 글리세롤, 소르비톨)가 있다. 추가의 약학적으로 허용가능한 담체는 (생분해성) 리포좀; 생분해성 중합체 폴리(D,L)-락틱-코글리콜산(PLGA)으로 제조된 마이크로스피어(microsphere), 알부민 마이크로스피어; 합성 고분자(수용성): 나노섬유, 단백질-DNA 복합체; 단백질 컨쥬게이트(protein conjugates); 적혈구; 또는 비로좀(virosomes)이다. 제형(dosage form)에 기반한 다양한 담체는 고형 지질 나노입자(solid lipid nanoparticles, SLNs), 중합체성 나노입자, 세라믹 나노입자(ceramic nanoparticles), 하이드로겔 나노입자, 공중합체성 펩티드 나노입자, 나노크리스탈(nanocrystal) 및 나노현탁액(nanosuspension), 나노크리스탈, 나노튜브 및 나노와이어, 기능화된 나노캐리어(functionalized nanocarrier), 나노스피어(nanosphere), 나노캡슐, 리포좀, 지질 에멀젼(lipid emulsion), 지질 마이크로튜불/마이크로실린더, 지질 마이크로버블, 리포스피어(liposphere), 리포폴리플렉스(lipopolyplex), 인버스 지질 미셀, 덴드리머(dendrimers), 에토좀(ethosomes), 복합조성 초박 캡슐(multicomposite ultrathin capsules), 아쿠아좀(aquasome), 파마코좀(pharmacosomes), 콜로이도좀(colloidosome), 니오좀(niosome), 디스콤(discome), 프로니오좀(proniosome), 마이크로스피어(microspheres), 마이크로에멀젼(microemulsion) 및 중합체성 미셀(polymeric micelle)을 포함한다. 다른 적합한 약학적으로 허용가능한 부형제는 그 중에서도 Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991) 및 Bauer et al., Pharmazeutische Technologie, 5th Ed., Govi-Verlag Frankfurt(1997)에 기술되어 있다. 본 기술 분야의 당업자는 예를 들어, 약학적 조성물의 제형 및 투여 경로에 따라 적절한 약학적으로 허용가능한 담체를 쉽게 선택할 수 있을 것이다.

본 명세서에서 용어 "보조제(adjuvant)"는 항원 또는 그의 단편에 대한 숙주의 면역 반응(항체 및/또는 세포 매개)을 향상, 증가 또는 강화시키는 물질을 지칭한다. 본 발명에 부합하는 사용을 위한 위한 예시적인 보조제는 비유기성 물질, 예를 들어, 명반(alum), 알루미늄 수산화물(aluminum hydroxide), 인산 알루미늄(aluminum phosphate), 인산 칼슘 수산화물(calcium phosphate hydroxide), TLR9 작용제 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(TLR9 agonist CpG oligodeoxynucleotide), TLR4 작용제 모노 포스포릴 지질(TLR4 agonist monophosphoryl lipid, MPL), TLR4 작용제 글루코피라노실 지질(TLR4 agonist glucopyranosyl lipid, GLA), 유중 수적 에멀젼(water in oil emulsion) Montanide ISA 51 및 720, 미네랄 오일, 예를 들어 파라핀 오일, 비로좀, 박테리아성 물질, 예를 들어, 죽은 박테리아 보르데텔라 퍼튜시스(Bordetella pertussis), 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 톡소이드(toxoid), 비박테리아성 유기물, 예를 들어, 스쿠알렌, 티메로살(thimerosal), 세제(Quil A),사이토카인, 예를 들어, IL-1, IL-2, IL-10 및 IL-12 및 예를 들어, 프로인트 완전 보조제(Freund's complete adjuvant), 프로인트 불완전 보조제(Freund's incomplete adjuvant)와 같은 복합 조성물을 포함한다. 일반적으로, 본 발명에 따라 사용되는 보조제는 바람직하게는 본 발명의 다량체성 복합체에 대한 면역 반응을 강화시키고 및/또는 원하는 면역 반응으로 조절한다.

용어 "약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은 본 발명에 따른 다량체성 복합체의 생물학적 활성의 유효성을 방해하지 않는 비-독성 물질을 의미한다.

정제(Purification)

모든 문법적 형태의 "정제(Purifying)"는 바람직하지 않은 물질, 예를 들어, 세포, 세포 데브리스(cell debris), 배양 배지, 바큘로바이러스, 온전한(intact) 또는 온전하지 않은 바큘로바이러스 등을 제거하는 것을 포함한다. 발현 시스템, 수율 등에 의존하는 적합한 정제 방법은 선행 기술에서 용이하게 이용가능하다. 예를 들어, 정제는 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피 및/또는 혼합-모드 크로마토그래피를 포함할 수 있으며, 이들 모두는 이전에 광범위하게 기술되어 있다. 상기 언급된 바와 같이, 정제 단계는, 그 중에서도, 바큘로바이러스를 제거하는 것을 포함한다. 상기 바큘로바이러스는 배양 배지 및/또는 바큘로바이러스 벡터 또는 BacMam 벡터에 감염된 숙주세포로부터 수득 가능한 상층액에 함유될 수 있다. 상기 바큘로바이러스는 본 발명의 다량체성 복합체를 정제할 때 제거되는 것이 바람직하다.

본 명세서에서 사용된 정제는 또한 배양 배지로부터 HSV 단백질을 공동 발현하는 숙주 세포가 제거되는 것을 포함한다. 상기 배양 배지는 상기 숙주 세포가 상기 다량체성 복합체를 분비할 수 있으므로, 바람직하게는 본 발명의 다량체성 복합체를 포함한다. 배양 배지로부터 숙주 세포를 제거하는 것은 원심분리 또는 여과와 같은 기계적 힘에 의해 수행될 수 있다. 여과는 바람직하게는 미세여과 필터 또는 뎁스-필터(depth-filter)와 같은 여과 수단을 사용하여 수행된다. 미세여과 필터는 폴리에테르설폰 또는 재생된 셀룰로스로 이루어질 수 있다. 뎁스-필터는 폴리프로필렌 또는 유리 섬유로 이루어질 수 있다.

그러나, 또한, 상기 숙주 세포는 반드시 상기 다량체성 복합체를 분비할 필요는 없는 것으로 보여진다. 만일 그렇다면, 상기 숙주 세포는 수거될 수 있다. 수거 후, 상기 숙주 세포는 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이 이후에 정제될 수 있는 다량체성 복합체를 방출시키기 위하여 효소적으로 또는 기계적으로 파쇄될 수 있다.

정제 후, 상기 다량체성 복합체에 킬레이트제가 첨가되는 것이 고려된다.

저장(storage)

모든 문법적 형태의 "저장(storing)"은 바람직하게는 본 발명의 다량체성 복합체가 온전한 또는 기능적 형태를 유지하는 조건, 즉, 다량체성 복합체가 바람직하게는 자연적으로 발생하는 형태와 유사한 조건에서 보존(이후의 사용을 위해)되는 것을 의미한다. 그러므로 저장 조건은 본 발명의 다량체성 복합체의 분해를 촉진하지 못하는(또는 심지어 예방한다) 것으로 보여진다. 용어 "분해(disintegration)"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 이해되어야 하며 "해체(disassembly)" 및/또는 "변성(denaturation)"을 의미할 수 있다. 본 발명의 다량체성 복합체의 저장은 킬레이트제 및/또는 안정화제를 포함하는 완충 용액인 것으로 보여진다.

일반적으로, 임의의 킬레이트제 및/또는 안정화제는 본 발명의 다량체성 복합체의 저장을 가능하게 하고, 분해를 촉진시키지 않는한 적합하다.

본 발명에 따른 완충액은 트리스 완충액, NaCl, KCl, PBS, HEPES 완충액을 포함할 수 있다.

백신 조성물의 용도(Use of the Vaccine composition)

본 발명은 또한 개체에서 HSV에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에서 백신 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 백신 조성물은 HSV 감염의 치료, 예방 또는 개선 또는 HSV의 재활성화 예방을 위해 사용된다.

따라서, 상기 백신 조성물은 HSV 및/또는 관련 증상에 의해 유발된 질환을 퇴치하는 것에 사용될 수 있다. 본 발명의 백신 조성물은, 즉 치료 후 개체로부터 수득된 적절한 샘플에서 기술 분야의 당업자에게 공지된 적절한 방법, 예를 들어, PCR, ELISA 등을 사용하여 HSV가 검출되지 않는 것과 같이 개체에서 바이러스를 제거하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 백신 조성물은 최초(primary) 감염 차단, 최초 질병 중단, 바이러스 재활성화 및 재-감염 차단, 및 잠복(latency) 차단에 사용될 수 있다.

생식기 헤르페스의 가능성을 줄이기 위해 모체의 첫 번째 HSV 감염을 예방하는 예방 백신이 바람직하지만, 모체가 활동성 HSV 감염으로 진단되는 경우 효과적인 치료법이 필요하다. 본 발명의 다량체성 복합체는 예를 들어, 모체 또는 소아의 예방을 위해, 또는 출산(delivery)시 혈청양성 여성에서 잠재적 재발(subclinical reactivation)을 예방하기 위한 치료 백신과 같이 예방 백신으로서 활용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 바람직한 구체예에서, 백신 조성물은 개체에서 HSV-1 또는 HSV-2에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 사용된다.

벡터(Vector)

본 발명은 또한 UL11, UL16 및 UL21 및 선택적으로 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 상기 벡터는 또한 UL11 및 UL16을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 상기 벡터는 또한 UL16 및 UL21을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명은 추가로 UL48, UL49 및 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 상기 벡터는 또한 UL48 및 UL49를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 벡터는 또한 UL49 및 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 UL31 및 UL34를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 일반적으로, 본 발명의 복합체의 HSV 단백질을 코딩하는 유전자는 예를 들어, 두 개 벡터와 같이 하나 이상의 벡터상에 존재할 수 있다. 따라서, 한 개, 두 개 또는 세 개의 유전자가 첫 번째 벡터에 있고, 나머지 유전자(들)는 두 번째 벡터에 있다. 그러나 각각의 유전자는 별도의 벡터에 존재할 수도 있다. 그러나 바람직하게는, 상기 유전자는 단일 벡터 상에 존재한다. 유전자는 또한 폴리제닉 형태로 존재할 수 있다(EP1945773).

본 명세서에 사용된 용어 "벡터(vector)"는 목적 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 발현 카세트가 삽입되거나 복제될 수 있는 핵산 서열을 지칭한다. 또한, 상기 벡터는 숙주 세포의 선택을 부여하는 항생제 내성 유전자를 코딩할 수 있다. 바람직하게는, 상기 벡터는 발현 벡터이다.

상기 벡터는 박테리아(예를 들어, E. coli), 효모 (예를 들어, S. cerevisiae), 곤충 세포 및/또는 포유동물 세포에서 증식을 위한 요소(element)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 벡터는 바큘로바이러스 벡터 또는 바큘로바이러스 BacMam 벡터이다. 상기 벡터는 선형, 원형 또는 슈퍼코일 형태(configuration)일 수 있고, 특정 목적을 위해 다른 벡터 또는 다른 재료와 복합될 수 있다. 상기 벡터는 또한 숙주 세포 게놈에 통합될(integrated) 수 있다.

상기 BacMam 시스템에서, 바큘로바이러스 벡터는 포유동물 세포에 유전자를 전달하기 위해 사용된다. 상기 BacMam 시스템은 숙주세포로서 광범위한 세포주 및 일차배양 세포(primary cell)에의 유전자 전달에 사용될 수 있으며, 이의 예시적인 목록은 본원의 다른 곳에 포함된다. 변형되지 않은 바큘로바이러스는 포유동물 세포에 진입할 수 있지만, 목적 유전자의 상부에 포유동물이 인식가능한 프로모터가 삽입되지 않는 이상 상기 유전자는 발현되지 않는다. 따라서, 본 발명의 BacMam 벡터는 본 발명의 다량체성 복합체의 단백질을 코딩하는 유전자의 상류에 포유동물 프로모터를 포함하는 것으로 보여진다. 상기 벡터는 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 부가적인 요소, 예를 들어, 항생제 내성 유전자, E. coli, S. cerevisiae 등의 증식을 위한 요소를 포함할 수 있다.

상기 벡터는 예를 들어, 복제 기점, 프로모터, 클로닝 사이트, 유전 마커, 항생제 내성 유전자, 에피토프, 리포터 유전자, 표적 서열 및/또는 단백질 정제 태그를 포함하는 하나 또는 그 이상의 추가 요소를 포함할 수 있다. 본 기술 분야의 당업자는 특정 발현 시스템에 어떤 요소가 적절한지 쉽게 알 것이다.

특히, 본 발명에 따른 상기 벡터는 예를 들어 복제 기점, 선별 마커 등과 같이 박테리아(E. coli), 효모(S. cerevisiae), 곤충 세포 및/또는 포유동물 세포의 증식을 위한 요소를 추가로 포함할 수 있다.

상기 벡터는 유전자 발현을 위한 프로모터를 포함하는 것으로 고려된다. 본 명세서에 기술된 본 발명의 단백질을 코딩하는 각각의 유전자는 프로모터에 의해 유도된다. 상기 프로모터는 바람직하게는 polh, p10 및 p_XIV 말기 바큘로바이러스 프로모터(very late baculoviral promoters), vp39 바큘로바이러스 후기 프로모터(baculoviral late promoter), vp39polh 바큘로바이러스 후기/말기 하이브리드 프로모터(baculoviral late/very late hybrid promoter), pca/polh, pcna, etl, p35, egt, da26 바큘로바이러스 초기 프로모터(baculoviral early promoter); CMV-IE1, UBc, EF-1, RSVLTR, MT, 시미안 바이러스(Simian virus) 40 프로모터, CAG 프로모터(CMV-IE1 인핸서를 갖는 베타-액틴 프로모터), B형 간염 바이러스 프로모터/인핸서, 인간 유비퀴틴 C 프로모터, 하이브리드 뉴로날 프로모터(hybrid neuronal promoter), p_DS47, Ac5, 및 P_GAL 및 P_ADH로 이루어진 군에서 선택된다. 각각의 유전자 다음에는 HSVtk 종결자(terminator), SV40 종결자 또는 소 성장 호르몬(BGH) 종결자와 같은 종결자 서열이 뒤따른다.

용어 "폴리뉴클레오티드(polynucleotide)", "뉴클레오티드 서열(nucleotide sequence)" 또는 "핵산 분자(nucleic acid molecule)"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 보통 하나의 데옥시리보스 또는 리보스가 다른 것과 연결된 뉴클레오티드의 중합체 형태(polymeric form)를 지칭한다. 용어 "폴리뉴클레오티드"는 바람직하게는 DNA 또는 RNA의 단일 및 이중 가닥 형태를 포함한다. 본 발명의 핵산 분자는 RNA(리보뉴클레오타이드 함유)의 센스 및 안티센스 가닥, cDNA, 게놈 DNA, 및 상기의 합성 형태 및 혼합된 중합체 모두를 포함할 수 있다. 이들은 당업자가 쉽게 알 수 있듯이 화학적으로 또는 생화학적으로 변형되거나 또는 비-천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어, 표지, 메틸화, 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드의 아날로그로의 하나 또는 그 이상의 치환, 비하전 결합과 같은 인터뉴클레오티드(internucleotide) 변형 (예를 들어, 메틸 포스포네이트(methyl phosphonates), 포스포트리에스터(phosphotriesters), 포스포라미데이트(phosphoramidates), 카바메이트(carbamates), 등), 하전 결합 (예를 들어, 포스포로티오에이트 (phosphorothioates), 포스포로디티오에이트 (phosphorodithioates), 등), 펜던트 모이어티(pendent moieties)(예를 들어, 폴리펩티드), 인터칼레이터 (intercalators) (예를 들어, 아크리딘(acridine), 소랄렌(psoralen)), 킬레이터, 알킬레이터(alkylators), 및 변형된 결합 (예를 들어, 알파 아노머 핵산(alpha anomeric nucleic acids))을 포함한다. 또한 수소 결합 및 다른 화학적 상호 작용을 통해 지정된 서열에 결합하는 능력에서 폴리뉴클레오티드를 모방하는 합성 분자를 포함한다. 상기 분자는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 분자의 백본에서 펩티드 결합이 인산 결합을 치환하는 분자를 포함한다.

이와 관련하여, 발현 산물인 핵산은 RNA인 것이 바람직하지만, 세포 내로 도입되는 핵산은 예를 들어, 합성 DNA, 게놈 DNA 또는 cDNA와 같이 DNA 또는 RNA인 것이 바람직하다.

또한, 본 명세서에 개시된 다량체성 복합체를 코딩하는 핵산 또는 벡터를 포함하는 백신 조성물도 고려된다. 상기 핵산 또는 벡터는 DNA- 또는 RNA-기반일 수 있다. 백신 조성물에 따라 사용하기에 적합한 벡터는 예를 들어 바큘로바이러스 벡터, BacMam 벡터, 아데노바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, AAV 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터 및 엡스타인-바 바이러스(EBV) 벡터와 같은 DNA-기반 벡터를 포함한다. 노출된(naked) DNA의 사용; 예를 들어, 플라스미드의 형태, 및 선택적으로 복합된 및/또는 안정화된 형태 (예를 들어, 리포플렉스, 폴리플렉스, 덴드리머, 비로좀 및 무기 나노 입자를 갖는 복합체)가 또한 고려된다. 적절한 RNA 기반 벡터는 레트로바이러스 벡터(retroviral vector), 셈리키 삼림열 바이러스(Semliki forest virus, SFV), 신드비스 바이러스(Sindbis virus, SIN) 및 베네주엘라 이콰인 뇌염 바이러스(Venezuelan equine encephalitis virus, VEE) 벡터를 포함한다.

다량체성 복합체를 포함하는 백신 조성물 및 다량체성 복합체를 코딩하는 핵산 또는 벡터를 포함하는 백신 조성물은 프라임 부스트 요법(prime boost regimen)에 사용될 수 있다. 프라임 부스트 요법에서, 최초 예방 접종(프라임 또는 프라이밍)에 사용되는 백신 및 부스터 예방 접종(부스트 또는 부스팅)에 사용되는 백신을 포함하는 2 또는 그 이상의 백신으로 구성된 프라임/부스트 백신이 사용된다. 최초 면역화에 사용되는 백신과 부스터 면역화에 사용되는 백신은 서로 다를 수 있다. 최초 면역화 및 부스팅 면역화는 순차적으로 수행될 수 있지만, 이것은, 그러나, 필수 사항은 아니다. 상기 프라임/부스트 요법은 제한없이, 예를 들어. DNA 프라임/단백질 부스트를 포함한다. 그러나 상기 부스팅 조성물은 프라이밍 조성물로 사용될 수 있고, 상기 프라이밍 조성물은 부스팅 조성물로 사용된다.

숙주 세포(Hose cell)

본 발명은 또한 UL11, UL16 및 UL21, 및 선택적으로 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 숙주 세포는 또한 UL11 및 UL16을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 숙주 세포는 또한 UL16 및 UL21을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 UL48, UL49 및 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 숙주 세포는 또한 UL48 및 UL49를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 숙주 세포는 또한 UL49 및 gE 또는 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 UL31 및 UL34를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.

상기 숙주 세포는 곤충 세포 또는 포유동물 세포일 수 있다. 상기 숙주 세포는 또한 박테리아(예를 들면, E.coli) 또는 효모(예를 들어 S.cerevisiae)일 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 다량체성 복합체를 생산하기 위한 핵산 분자를 발현시키기에 적합한 임의의 숙주 세포가 사용될 수 있다. 그러나 바람직한 것은 곤충 및 포유동물 숙주 세포이다. 더욱 바람직한 것은 곤충 숙주 세포이다.

본 발명에 따라 사용되는 숙주 세포는 예를 들어, Sf9, Sf21, Super Sf9-1 (VE-1), Super Sf9-2 (VE-2), Super Sf9-3 (VE-3), Hi-5, Express Sf+ 및 S2 Schneider 세포와 같은 곤충 세포일 수 있으며, Hi-5가 선호된다[Oxford Expression Technologies, Cat. No. 600103, Oxford, UK; Fath-Goodin et al. (2006), Adv. Virus Res. 68, 75-90; Kroemer et al. (2006), J. Virol. 80 (24), 12291-12228 및 US20060134743]. 사용될 수 있는 예시적인 포유동물 숙주 세포는 당업계에 공지되어 있으며, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection, ATCC)으로부터 이용가능한 불멸화된 세포주, HEK293, HEK293F, CHO, HeLa, HUVEC, HUAEC, Huh7, HepG2, BHK, MT-2, Cos-7, Cos-1, C127, 3T3, 인간 포피 섬유아세포(HFF), 골수 섬유아세포, 보우스 흑색종(Bowes melanoma), 일차배양 신경 세포, 또는 상피 세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상기 BacMam 시스템에서, 바큘로바이러스 발현 벡터는 포유동물 세포에 유전자를 전달하는 데 사용된다.

생산 방법(Method for production)

본 발명은 또한 상기 다량체성 복합체를 포함하는 백신 조성물을 생산하는 방법을 제공하며, 상기 방법은

(i) 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계;

(ii) 다량체성 복합체를 얻는 단계;

(iii) 및 상기 다량체성 복합체를 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 보조제와 혼합하는 단계를 포함한다.

본 발명의 다량체성 복합체에 대해 본 명세서에 기술된 구체예는 본 발명의 방법에 또한 준용되어(mutatis mutandis) 적용되는 것을 유의해야 한다.

상기 다량체성 복합체는 바큘로바이러스, 예를 들어 바큘로바이러스 발현 시스템 또는 BacMam 발현 시스템을 사용하여 숙주 세포, 바람직하게는 곤충 세포 또는 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. "발현 벡터(expression vector)"는 본 명세서에서 유전 물질이 발현될 수 있는 표적 숙주 세포에 유전 물질을 전달하는데 사용되는 비히클(vehicle)로 정의된다. "발현 시스템(expression system)"은 발현 벡터, 및 숙주 세포에서 외래 유전자 발현을 허용하는 컨텍스트(context)를 제공하는 상기 벡터를 위한 숙주 세포의 조합이다. 본 발명의 복합체는 일시적으로 또는 지속적으로(stably) 발현될 수 있다. 따라서, 본 발명의 숙주 세포는 발현 벡터로 일시적으로 형질감염될 수 있고 또는 발현 벡터로 지속적으로 형질감염될 수 있으며, 예를 들어, 숙주 세포 게놈에 벡터의 통합을 통해 영구 세포주(stable cell line)를 만들 수 있다.

상기 바큘로바이러스 발현 시스템은 전형적으로 예를 들어, 표적 유전자를 포함하는 전달 벡터와의 상동성 재조합을 통해, 외래 유전자를 비필수 바이러스 게놈 영역에 도입하는 것에 기반한다. 생성된 재조합 바큘로바이러스는 적절한 숙주 세포에서 발현될 수 있는 이종 단백질을 코딩하는 외래 유전자로 대체되어 비필수 유전자(예를 들어, polh, v-cath, chiA) 중 하나가 결실될 수 있다. 이러한 기술은 일반적으로 본 기술의 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어, Kosta et al. Nat Biotechnol. 2005; 23 (5): 567-75에 기술되어 있다. 재조합 바큘로바이러스 벡터를 제조하기 위한 특정 접근법은 Bac-to-Bac® 바큘로바이러스 시스템(Invitrogen)이다.

상기 재조합 바큘로바이러스 발현 벡터는 숙주 세포 및 선택적으로 예를 들어, 대장균과 같은 원핵 세포에서 복제가 가능할 수 있다. 본 발명에 따르면, 바큘로바이러스로부터 유래되어 단백질의 재조합 발현에 일반적으로 사용되는 임의의 바큘로바이러스 발현 벡터가 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 바큘로바이러스 벡터는 예를 들어, AcMNPV, 누에나방(Bombyx mori, Bm) NPV, 왕담배나방(Helicoverpa armigera, Hear) NPV 또는 파밤나방(Spodoptera exigua, Se) MNPV로부터 유래될 수 있다. 상기 바큘로바이러스 벡터는 백미드(bacmid)일 수 있다.

본 명세서에서 사용된, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥에 명백히 다르게 명시되지 않는 한 복수 언급(reference)을 포함하는 것을 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "발현 카세트"에 대한 언급은 본 명세서에 개시된 하나 또는 이상의 발현 카세트를 포함하고, "상기 방법"에 대한 언급은 본 명세서에 기재된 방법을 위해 변형 또는 치환될 수 있는 당업자에게 공지된 동등한 단계 및 방법에 대한 언급을 포함한다.

본 명세서 및 후속하는 청구범위 전반에 걸쳐, 문맥상 다르게 요구하지 않는 한, "포함하다(comprise)"라는 단어 및 "포함하다(comprises)" 및 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 정수(integer) 또는 단계 또는 정수 그룹 또는 단계를 포함하는 것을 의미하는 것으로 이해되나, 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 그룹 또는 단계를 제외하는 것을 의미하는 것으로 이해되지 않는다. 본 명세서에서 사용될 때 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는(containing)" 또는 때로는 본 명세서에서 사용될 때 용어 "갖는(having)"과 대체될 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때 "이루어지는(consisting of)"은 청구범위 요소(claim element)에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. 본 명세서에서 사용될 때, "필수적으로 이루어지는(consisting essentially of)"은 상기 청구범위의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않는 물질 또는 단계를 배제하지 않는다. 본원의 각 예시에서, "포함하는", "필수적으로 이루어지는" 및 "구성되는(consisting of)"과 같은 임의의 용어는 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 주어진 값(value) 또는 범위(range)의 20% 이내(within), 바람직하게는 10% 이내, 그리고 더 바람직하게는 5% 이내를 의미한다. 또한 구체적인 숫자(concrete number)를 포함하며, 예를 들어 "약 20"은 20을 포함한다.

본 명세서에서 다르게 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 또한, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수의 용어는 복수를 포함하고 복수의 용어는 단수를 포함한다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 수행된다. 일반적으로, 본 명세서에 기술된 생화학, 효소학, 분자 및 세포 생물학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 하이브리드화 기술과 관련하여 사용된 용어(nomenclature)는 당업계에 잘 공지되어 있고 통상적으로 사용된다.

본 발명의 방법 및 기술은 달리 언급되지 않는 한 일반적으로 당해 기술 분야에서 널리 공지되고, 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반 및 보다 구체적인 참고 문헌에 기재된 바와 같이 통상적인 방법에 따라 수행된다. 예를 들어, Sambrook 등, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 제 3 판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001); Ausubel 등, Current Protocols in Molecular Biology, J, Greene Publishing Associates (1992, Supplement to 2002); 생화학 핸드북: Section A Proteins, Vol I 1976 CRC Press; 생화학 핸드북: Section A Proteins, Vol II 1976 CRC Press를 볼 수 있다.

본 명세서에서 실험 과정 및 기술, 분자 및 세포 생물학, 단백질 생화학, 효소학 및 의약 및 약학 화학과 관련되어 사용되는 용어는 당업계에 잘 공지되어 있고 통상적으로 사용된다.

도 1은 본 발명의 HSV 단백질의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 2는 UL21/UL16/UL11-His 삼량체를 보여주는 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯의 예를 나타낸다.
도 3은 UL48-His/UL49-His 이량체를 보여주는 SDS-PAGE의 예를 나타낸다.
도 4는 UL48-His/UL49-His 이량체를 보여주는 크기 배제 크로마토그래피를 나타낸다.
도 5는 UL31-His/UL34 이량체를 보여주는 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯의 예를 나타낸다.
도 6은 UL31/UL34-His 이량체를 보여주는 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯의 예를 나타낸다.
도 7은 UL31/UL34-His 이량체를 보여주는 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯의 예를 나타낸다.
도 8은 감염된 기니아 피그에서 UL31/UL34 이량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 9는 환자 PBMC에서 UL31/UL34 이량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 10은 환자 PBMC에서 UL48/UL49 이량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 11은 환자 PBMC에서 UL48/UL49 이량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 12는 환자 PBMC에서 UL11/UL16/UL21 삼량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 13은 환자 PBMC에서 UL11/UL16/UL21 삼량체의 ELISPOT를 나타낸다.
도 14는 환자 PBMC에서 UL31/UL34 이량체의 루미넥스 어세이(luminex assay)를 나타낸다.
도 15는 환자 PBMC에서 UL48/UL49 이량체의 루미넥스 어세이를 나타낸다.
도 16은 환자 PBMC에서 UL11/UL16/UL21 삼량체의 루미넥스 어세이를 나타낸다.

하기 실시예들은 본 발명을 예시하지만, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1

UL21/UL16/UL11-His 삼량체는 Hi-5 곤충세포에서 발현시키고, 적절한 용해 후 세포 펠렛으로부터 방출시켰다. 삼량체는 이후 IMAC 및 0 내지 500 mM 이미다졸 완충액 시스템 (50 mM 히피스(Hepes), 500 mM NaCl, pH 7.0, 1 mM TCEP, 10% 글리세롤)을 사용하여 순차적으로 정제하였다. 불순물(Impurities)은 25 mM 이미다졸을 컬럼에 가하여 제거하였다. 삼량체를 250 mM 이미다졸로 용출시킨 후, 이미다졸이 없는 히피스 완충액(50 mM Hepes, 150 mM NaCl, pH 7.0, 0.5 mM TCEP, 10% 글리세롤)으로 투석하였다. 도 2(A)는 SDS-PAGE의 예시를 보여준다. 그러나 UL11-His는 항-His 항체를 사용하여 노출된 이 블랏에서 희미한 밴드(faint band)로 나타난다. 도 2(B)는 UL11-His를 검출하기 위해 항-His 항체를 사용하여 수행된 웨스턴 블랏의 예시를 보여준다. 두 예시 모두에서의 라벨링: 1. 표준(Standards), 2. 여과된 상층액(Filtrated supernatant), 3. 세포 펠렛(Cell pellet), 4. 통과액(Flowthrough), 5-10. 분획물(Fractions) A5, B9, B11, C3, C6, E6, 11. B9-C3 분획물의 풀(Pool of fractions B9-C3), 12. 투석 후 펠렛, 13. 투석 후 상층액, 14. 필터된 단백질.

실시예 2

UL48-His/UL49-His 이량체는 Hi-5 곤충세포에서 발현시키고, 적절한 용해 후 세포 펠렛으로부터 방출시켰다. 이어서 이량체를 IMAC 및 0 내지 500 mM 이미다졸 완충 시스템(TBS 완충액, 500 mM NaCl, pH 7.4)을 사용하여 정제하였다. 불순물은 50 mM 이미다졸을 컬럼에 가하여 제거하였다. 그 다음, 이량체를 350 mM 이미다졸로 용출시킨 후, 이미다졸이 없는 TBS 완충액(TBS 완충액, 500 mM NaCl, pH 7.4, 10 % 글리세롤)으로 투석하였다. 투석 산물은 이량체의 존재를 증명하기 위해 크기 배제 크로마토 그래피(SEC)에 추가로 주입하였다. UL48-His/UL49-His 이량체의 예상 크기에 상응하는 피크가 존재하였다. 도 3(A)는 SEC 이전 SDS-PAGE의 예시를 보여준다. 라벨링: 1. 표준-a, 2. 상층액, 3. 데브리스 펠렛(Debris pellet), 4. 여과된 상층액, 5. 비결합 분획의 세척액(Wash of unbound fraction), 6-14. 분획 2A9, 2A12, 2C4, 2C10, 2C12, 2C12 여과, 2D2, 2D6, 2D7. 도 3(B) 및 (C)는 샘플의 SEC 및 아세톤 침전 이후의 SDS-PAGE의 예시를 보여준다. 패널 (C)는 (B)와 동일한 젤을 보여주지만, 저강도 밴드(low intensity band)를 더 잘 시각화하기 위하여 과도하게 노출되어 있다. 라벨링: 1. 표준-b, 2-9. 분획 SEC 아세톤 침전 A8, A12, B1, B2, B3, B4, B5, B6. 10. 표준-a, 11. 분획 2C11, 2D1 및 2D2의 풀(pool) IMAC, 12. 투석물(dialysate)의 풀 IMAC, 13. 투석물의 풀 IMAC 상층액, 14. 풀 IMAC 펠렛, 15. 여과 단백질의 풀 IMAC.

실시예 3

크기 배제 크로마토 그래피(SEC)는 TBS 완충액, 500 mM NaCl, pH 7.4 중의 UL48-His/UL49-His 산물의 분석을 위해 수행되었다. 실험은 Superdex 200 Increase 10/300 GL SEC 컬럼 및 유속 0.5 ㎖/분을 사용하여 수행하였다. 상기 컬럼은 표준으로서 3 ㎎/㎖ BSA를 사용하여 보정하였다(calibrated). 도 4(A)에서, 12.36 및 14.21 ㎖ 머무름 부피(retention volumes)에서의 피크는 각각 BSA 보정 표준(BSA calibration standard)의 이량체 및 단량체(66 kDa)에 상응한다. 도 4(B)에서, 12.93 ㎖의 주 피크(main peak)는 UL48/UL49 이량체를 나타내고, 반면 12.16 ㎖의 피크는 UL48 및 UL49 서브 유닛의 테트라머 형성에 상응할 것이다. 도 4(C)는 (A)와 (B)에 표시된 두 개의 독립 실행의 오버레이(overlay)를 나타낸다. 삽입도(inlet)은 8.5 내지 18 ㎖ 머무름 부피 사이 영역을 확대한 것을 나타낸다.

실시예 4

UL31-His/UL34 이량체는 Hi-5 곤충세포에서 발현시키고, 적절한 용해 후 세포 펠렛으로부터 방출시켰다. 이어서 이량체를 IMAC 및 0 내지 500 mM 이미다졸 연속 구배 완충 시스템 (50 mM Hepes, 500 mM NaCl, pH 7.0, 1 mM TCEP)을 사용하여 정제하였다. 도 5(A)는 SDS-PAGE의 예시이다. 두 개의 가장 농축된 분획 중의 하나에 별표를 표시하였다. 도 5(B)는 UL31-His를 검출하기 위해 항-His 항체를 사용하여 수행된 웨스턴 블럿의 예시이다. 두 예시 모두에서의 라벨링: 1. 표준, 2. 상층액, 3. 여과된 상층액, 4. 세포 펠렛, 5. 통과액, 6. 비결합 단백질의 세척액, 7-13. 분획물 A8, A10, B4, B8, B11, C2, C7.

실시예 5

UL31/UL34-His 이량체는 Hi-5 곤충세포에서 발현시키고, 적절한 용해 후 세포 펠렛으로부터 방출시켰다. 이어서 이량체를 IMAC 및 25 내지 500 mM 이미다졸 연속 구배 완충 시스템 (50 mM Hepes, 500 mM NaCl, pH 7.0, 1 mM TCEP)을 사용하여 정제하였다. 도 6(A)는 SDS-PAGE의 예시이다. 두 개의 가장 농축된 분획 중의 하나에 별표를 표시하였다. 도 6(B)는 UL34-His를 검출하기 위해 항-His 항체를 사용하여 수행된 웨스턴 블럿의 예시이다. 두 예시 모두에서의 라벨링: 1. 표준, 2. 상층액, 3. 여과된 상층액, 4. 세포 펠렛, 5. 통과액, 6. 비결합 단백질의 세척액, 7-13. 분획 A8, A10, B4, B8, B11, C2, C7.

실시예 6

UL31/UL34-His 이량체는 Hi-5 Hi-5 곤충세포에서 발현시키고, 적절한 용해 후 세포 펠렛으로부터 방출시켰다. 이어서 이량체를 IMAC 및 0 내지 500 mM 이미다졸 완충 시스템 (50 mM Hepes, 500 mM NaCl, pH 7.0, 1 mM TCEP, 10 % 글리세롤)을 사용하여 정제 하였다. 불순물은 컬럼에 50 mM 및 75 mM 이미다졸을 가하여 2 단계로 세척하였다. 이량체를 350 mM 이미 다졸로 용출시킨 후, 이미 다졸 (50 mM Hepes, 500 mM NaCl, pH 7.0, 0.5 mM TCEP, 10 % 글리세롤)없이 Hepes 완충액에서 투석 하였다. 도 7(A)는 SDS-PAGE의 예시이다. 도 7(B)는 UL34-His를 검출하기 위해 항-His 항체를 사용하여 수행된 웨스턴 웨스턴 블럿의 예시이다. 두 예시 모두에서의 라벨링: 1. 표준, 2. 배양 세포 펠렛, 3. 용해물(Lysate), 4. 상층액, 5. 조 펠렛(Crude pellet), 6. 여과된 상층액, 7. 통과액, 8-16. 분획 B12, C2, C5, C7, C11 및 F1, 17. 분획 C3-C7의 풀, 18. 투석 물질 총량(Dialysis material total), 19. 투석 후 상층액, 20. 투석 후 펠렛, 21. 여과된 단백질.

실시예 7

HSV-2 감염 기니아 피그 및 대조 기니아 피그의 비장 세포(Splenocyte)(1x10⁵ 세포)를 20 ㎍/㎖의 HSV-2 UL31/UL34 복합체와 혼합하였다. 이어서 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마(IFN-γ) 항체가 코팅된 플레이트(Multiscreen HTS 플레이트; Millipore)에 옮기고, 20시간 동안 배양하였다. 이후 표준 ELISPOT 프로토콜에 따라 플레이트를 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점(spot)으로 정량화하였다. 자극되지 않은 세포 및 20 ㎍/㎖의 PHA를 각각 음성 대조군 및 양성 대조군으로 사용하였다. 결과는 도 8에 나타내었다.

실시예 8

14명의 HSV-2에 감염된 개체 및 6명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마 항체가 코팅된 플레이트에 2x10⁵ 세포/웰로 분주하였다. 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL31/UL34 복합체로 48시간 동안 자극하였다. 그 후 플레이트를 제조자의 지시에 따라 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점으로 계수하였다. 각각의 웰로부터 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 2×10⁵ PBMC 당 SFU(스팟 형성 단위)로 나타내었다. 결과는 도 9에 나타내었다. HSV-2 단백질 UL31 및 UL34는 단량체로 발현될 수 없고, 이량체(개인 관찰, 데이터는 제시하지 않음)로만 발현될 수 있다. 따라서 UL48/UL49 및 UL11/UL16/UL21 복합체(도 10 및 12 참조)와 같이 UL31/UL34 복합체 및 이들의 단량체는 비교될 수 없다.

실시예 9

4명의 HSV-2에 감염된 개체 및 2명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마 항체가 코팅된 플레이트에 2x10⁵ 세포/웰로 분주하였다. 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL48/UL49 복합체, 또는 복합체 내 단일 단백질의 양에 대해 정규화된 각각의 단량체로 세포를 48 시간 동안 자극하였다. 그 후 플레이트를 제조자의 지시에 따라 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점으로 계수하였다. 각각의 웰로부터 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 2×10⁵ PBMC 당 SFU(스팟 형성 단위)로 나타내었다. 결과는 도 10에 나타내었다. 감염되지 않은 개인의 반응은 여기에 평균값으로 나타내었다.

실시예 10

14명의 HSV-2에 감염된 개체 및 6명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마 항체가 코팅된 플레이트에 2x10⁵ 세포/웰로 분주하였다. 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 HSV-2 UL48/UL49 복합체로 48시간 동안 자극하였다. 그 후 플레이트를 제조자의 지시에 따라 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점으로 계수하였다. 각각의 웰에서 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 2×10⁵ PBMC 당 SFU(스팟 형성 단위)로 나타내었다. 결과는 도 11에 나타내었다.

실시예 11

4명의 HSV-2에 감염된 개체 및 2명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마 항체가 코팅된 플레이트에 2x10⁵ 세포/웰로 분주하였다. 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 HSV-2 UL11/UL16/UL21 복합체, 또는 복합체 내 단일 단백질의 양에 대해 정규화된 각각의 단량체로 세포를 48 시간 동안 자극하였다. 그 후 플레이트를 제조자의 지시에 따라 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점으로 계수하였다. 각각의 웰로부터 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 2×10⁵ PBMC 당 SFU(스팟 형성 단위)로 나타내었다. 결과는 도 12에 나타내었다. 감염되지 않은 개인의 반응은 여기에 평균값으로 나타내었다.

실시예 12

14명의 HSV-2에 감염된 개체 및 6명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 ELISPOT 항-인터페론 감마 항체가 코팅된 플레이트에 2x10⁵ 세포/웰로 분주하였다. 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL11/UL16/UL21 복합체로 48시간 동안 자극하였다. 그 후 플레이트를 제조자의 지시에 따라 개발하고, 자동화 판독기를 사용하여 IFN-γ분비 세포를 점으로 계수하였다. 각각의 웰에서 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 2×10⁵ PBMC 당 SFU(스팟 형성 단위)로 나타내었다. 결과는 도 13에 나타내었다.

실시예 13

4명의 HSV-2에 감염된 개체 및 2명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 플레이트에 5x10⁵ 세포/웰로 분주하고, 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL31/UL34 복합체로 세포를 48 시간 동안 자극하였다. 그후 상층액을 수거하고, 루미넥스 장비로 인터페론 감마의 분비를 분석하였다. 각각의 웰에서 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 pg/㎖로 표시하였다. 결과는 도 14에 나타내었다.

실시예 14

4명의 HSV-2에 감염된 개체 및 2명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 플레이트에 5x10⁵ 세포/웰로 분주하고, 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL48/UL49 복합체로 세포를 48 시간 동안 자극하였다. 그후 상층액을 수거하고, 루미넥스 장비로 인터페론 감마의 분비를 분석하였다. 각각의 웰에서 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 pg/㎖로 표시하였다. 결과는 도 15에 나타내었다.

실시예 15

4명의 HSV-2에 감염된 개체 및 2명의 감염되지 않은 개체의 PBMC를 해동시키고, 밤새 놔두었다. 세포를 플레이트에 5x10⁵ 세포/웰로 분주하고, 이어서, 세포를 5 ㎍/㎖의 HSV-2 UL11/UL16/UL21 복합체로 세포를 48 시간 동안 자극하였다. 그후 상층액을 수거하고, 루미넥스 장비로 인터페론 감마의 분비를 분석하였다. 각각의 웰에서 백그라운드 신호(완충액-자극된 세포로부터 생성됨)를 빼고, 결과는 pg/㎖로 표시하였다. 결과는 도 16에 나타내었다.

<110> Redbiotec AG <120> Means and methods for treating HSV <130> I18O10C0106PDE <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 96 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL11 protein of HSV-2 <400> 1 Met Gly Leu Ala Phe Ser Gly Ala Arg Pro Cys Cys Cys Arg His Asn 1 5 10 15 Val Ile Ile Thr Asp Gly Gly Glu Val Val Ser Leu Thr Ala His Glu 20 25 30 Phe Asp Val Val Asp Ile Glu Ser Glu Glu Glu Gly Asn Phe Tyr Val 35 40 45 Pro Pro Asp Met Arg Val Val Thr Arg Ala Pro Gly Pro Gln Tyr Arg 50 55 60 Arg Ala Ser Asp Pro Pro Ser Arg His Thr Arg Arg Arg Asp Pro Asp 65 70 75 80 Val Ala Arg Pro Pro Ala Thr Leu Thr Pro Pro Leu Ser Asp Ser Glu 85 90 95 <210> 2 <211> 372 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL16 protein of HSV-2 <400> 2 Met Ala Gln Arg Ala Leu Trp Arg Pro Gln Ala Thr Pro Gly Pro Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ala Ala Pro Pro Gly His Arg Gly Ala Pro Pro Asp Ala Arg 20 25 30 Ala Pro Asp Pro Gly Pro Glu Ala Asp Leu Val Ala Arg Ile Ala Asn 35 40 45 Ser Val Phe Val Trp Arg Val Val Arg Gly Asp Glu Arg Leu Lys Ile 50 55 60 Phe Arg Cys Leu Thr Val Leu Thr Glu Pro Leu Cys Gln Val Ala Leu 65 70 75 80 Pro Asp Pro Asp Pro Glu Arg Ala Leu Phe Cys Glu Ile Phe Leu Tyr 85 90 95 Leu Thr Arg Pro Lys Ala Leu Arg Leu Pro Ser Asn Thr Phe Phe Ala 100 105 110 Ile Phe Phe Phe Asn Arg Glu Arg Arg Tyr Cys Ala Thr Val His Leu 115 120 125 Arg Ser Val Thr His Pro Arg Thr Pro Leu Leu Cys Thr Leu Ala Phe 130 135 140 Gly His Leu Glu Ala Ala Ser Pro Pro Glu Glu Thr Pro Asp Pro Ala 145 150 155 160 Ala Glu Gln Leu Ala Asp Glu Pro Val Ala His Glu Leu Asp Gly Ala 165 170 175 Tyr Leu Val Pro Thr Glu Pro Pro Pro Asn Pro Gly Ala Cys Cys Ala 180 185 190 Leu Gly Pro Gly Ala Trp Trp His Leu Pro Gly Gly Arg Ile Tyr Cys 195 200 205 Trp Ala Met Asp Asp Asp Leu Gly Ser Leu Cys Pro Pro Gly Ser Arg 210 215 220 Ala Arg His Leu Gly Trp Leu Leu Ser Arg Ile Thr Asp Pro Pro Gly 225 230 235 240 Gly Gly Gly Ala Cys Ala Pro Thr Ala His Ile Asp Ser Ala Asn Ala 245 250 255 Leu Trp Arg Ala Pro Ala Val Ala Glu Ala Cys Pro Cys Val Ala Pro 260 265 270 Cys Met Trp Ser Asn Met Ala Gln Arg Thr Leu Ala Val Arg Gly Asp 275 280 285 Ala Ser Leu Cys Gln Leu Leu Phe Gly His Pro Val Asp Ala Val Ile 290 295 300 Leu Arg Gln Ala Thr Arg Arg Pro Arg Ile Thr Ala His Leu His Glu 305 310 315 320 Val Val Val Gly Arg Asp Gly Ala Glu Ser Val Ile Arg Pro Thr Ser 325 330 335 Ala Gly Trp Arg Leu Cys Val Leu Ser Ser Tyr Thr Ser Arg Leu Phe 340 345 350 Ala Thr Ser Cys Pro Ala Val Ala Arg Ala Val Ala Arg Ala Ser Ser 355 360 365 Ser Asp Tyr Lys 370 <210> 3 <211> 532 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL21 protein of HSV-2 <400> 3 Met Glu Leu Ser Tyr Ala Thr Thr Leu His His Arg Asp Val Val Phe 1 5 10 15 Tyr Val Thr Ala Asp Arg Asn Arg Ala Tyr Phe Val Cys Gly Gly Ser 20 25 30 Val Tyr Ser Val Gly Arg Pro Arg Asp Ser Gln Pro Gly Glu Ile Ala 35 40 45 Lys Phe Gly Leu Val Val Arg Gly Thr Gly Pro Lys Asp Arg Met Val 50 55 60 Ala Asn Tyr Val Arg Ser Glu Leu Arg Gln Arg Gly Leu Arg Asp Val 65 70 75 80 Arg Pro Val Gly Glu Asp Glu Val Phe Leu Asp Ser Val Cys Leu Leu 85 90 95 Asn Pro Asn Val Ser Ser Glu Arg Asp Val Ile Asn Thr Asn Asp Val 100 105 110 Glu Val Leu Asp Glu Cys Leu Ala Glu Tyr Cys Thr Ser Leu Arg Thr 115 120 125 Ser Pro Gly Val Leu Val Thr Gly Val Arg Val Arg Ala Arg Asp Arg 130 135 140 Val Ile Glu Leu Phe Glu His Pro Ala Ile Val Asn Ile Ser Ser Arg 145 150 155 160 Phe Ala Tyr Thr Pro Ser Pro Tyr Val Phe Ala Leu Ala Gln Ala His 165 170 175 Leu Pro Arg Leu Pro Ser Ser Leu Glu Pro Leu Val Ser Gly Leu Phe 180 185 190 Asp Gly Ile Pro Ala Pro Arg Gln Pro Leu Asp Ala Arg Asp Arg Arg 195 200 205 Thr Asp Val Val Ile Thr Gly Thr Arg Ala Pro Arg Pro Met Ala Gly 210 215 220 Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Lys Arg Ala Thr Val Ser Glu Phe 225 230 235 240 Val Gln Val Lys His Ile Asp Arg Val Val Ser Pro Ser Val Ser Ser 245 250 255 Ala Pro Pro Pro Ser Ala Pro Asp Ala Ser Leu Pro Pro Pro Gly Leu 260 265 270 Gln Glu Ala Ala Pro Pro Gly Pro Pro Leu Arg Glu Leu Trp Trp Val 275 280 285 Phe Tyr Ala Gly Asp Arg 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Ala Gly Ala Ala Gly Arg Thr Arg Thr Ala 500 505 510 Gly Tyr Leu Asp Ala Leu Leu Thr Val Cys Leu Ala Arg Ala Gln His 515 520 525 Gly Gln Ser Val 530 <210> 4 <211> 548 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> gE protein of HSV-2 <400> 4 Met Ala Arg Gly Ala Gly Leu Val Phe Phe Val Gly Val Trp Val Val 1 5 10 15 Ser Cys Leu Ala Ala Ala Pro Arg Thr Ser Trp Lys Arg Val Thr Ser 20 25 30 Gly Glu Asp Val Val Leu Leu Pro Ala Pro Ala Gly Pro Glu Glu Arg 35 40 45 Thr Arg Ala His Lys Leu Leu Trp Ala Ala Glu Pro Leu Asp Ala Cys 50 55 60 Gly Pro Leu Arg Pro Ser Trp Val Ala Leu Trp Pro Pro Arg Arg Val 65 70 75 80 Leu Glu Thr Val Val Asp Ala Ala Cys Met Arg Ala Pro Glu Pro Leu 85 90 95 Ala Ile Ala Tyr Ser Pro Pro Phe Pro Ala Gly Asp Glu Gly Leu Tyr 100 105 110 Ser Glu Leu Ala Trp Arg Asp Arg Val Ala Val Val Asn Glu Ser Leu 115 120 125 Val Ile Tyr Gly Ala Leu Glu Thr Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser 130 135 140 Val Val Gly Leu Ser Asp Glu Ala Arg Gln Val Ala Ser Val Val Leu 145 150 155 160 Val Val Glu Pro Ala Pro Val Pro Thr Pro Thr Pro Asp Asp Tyr Asp 165 170 175 Glu Glu Asp Asp Ala Gly Val Ser Glu Arg Thr Pro Val Ser Val Pro 180 185 190 Pro Pro Thr Pro Pro Arg Arg Pro Pro Val Ala Pro Pro Thr His Pro 195 200 205 Arg Val Ile Pro Glu Val Ser His Val Arg Gly Val Thr Val His Met 210 215 220 Glu Thr Pro Glu Ala Ile Leu Phe Ala Pro Gly Glu Thr Phe Gly Thr 225 230 235 240 Asn Val Ser Ile His Ala Ile Ala His Asp Asp Gly Pro Tyr Ala Met 245 250 255 Asp Val Val Trp Met Arg Phe Asp Val Pro Ser Ser Cys Ala Glu Met 260 265 270 Arg Ile Tyr Glu Ala Cys Leu Tyr His Pro Gln Leu Pro Glu Cys Leu 275 280 285 Ser Pro Ala Asp Ala Pro Cys Ala Val Ser Ser Trp Ala Tyr Arg Leu 290 295 300 Ala Val Arg Ser Tyr Ala Gly Cys Ser Arg Thr Thr Pro Pro Pro Arg 305 310 315 320 Cys Phe Ala Glu Ala Arg Met Glu Pro Val Pro Gly Leu Ala Trp Leu 325 330 335 Ala Ser Thr Val Asn Leu Glu Phe Gln His Ala Ser Pro Gln His Ala 340 345 350 Gly Leu Tyr Leu Cys Val Val Tyr Val Asp Asp His Ile His Ala Trp 355 360 365 Gly His Met Thr Ile Ser Thr Ala Ala Gln Tyr Arg Asn Ala Val Val 370 375 380 Glu Gln His Leu Pro Gln Arg Gln Pro Glu Pro Val Glu Pro Thr Arg 385 390 395 400 Pro His Val Arg Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ser Ala Arg Gly Pro Leu 405 410 415 Arg Leu Gly Ala Val Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Leu Gly 420 425 430 Leu Ser Ala Trp Ala Cys Met Thr Cys Trp Arg Arg Arg Ser Trp Arg 435 440 445 Ala Val Lys Ser Arg Ala Ser Ala Thr Gly Pro Thr Tyr Ile Arg Val 450 455 460 Ala Asp Ser Glu Leu Tyr Ala Asp Trp Ser Ser Asp Ser Glu Gly Glu 465 470 475 480 Arg Asp Gly Ser Leu Trp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Pro Asp Ser Pro 485 490 495 Ser Thr Asn Gly Ser Gly Phe Glu Ile Leu Ser Pro Thr Ala Pro Ser 500 505 510 Val Tyr Pro His Ser Glu Gly Arg Lys Ser Arg Arg Pro Leu Thr Thr 515 520 525 Phe Gly Ser Gly Ser Pro Gly Arg Arg His Ser Gln Ala Ser Tyr Ser 530 535 540 Ser Val Leu Trp 545 <210> 5 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cytoplasmic tail of gE protein of HSV-2 <400> 5 Arg Arg Arg Ser Trp Arg Ala Val 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Ser Ala Ala Ala Glu Glu Pro Gly Ala Pro Leu Thr Thr Pro 305 310 315 320 Pro Val Leu Gln Gly Asn Gln Ala Arg Ser Ser Gly Tyr Phe Met Leu 325 330 335 Leu Ile Arg Ala Lys Leu Asp Ser Tyr Ser Ser Val Ala Thr Ser Glu 340 345 350 Gly Glu Ser Val Met Arg Glu His Ala Tyr Ser Arg Gly Arg Thr Arg 355 360 365 Asn Asn Tyr Gly Ser Thr Ile Glu Gly Leu Leu Asp Leu Pro Asp Asp 370 375 380 Asp Asp Ala Pro Ala Glu Ala Gly Leu Val Ala Pro Arg Met Ser Phe 385 390 395 400 Leu Ser Ala Gly Gln Arg Pro Arg Arg Leu Ser Thr Thr Ala Pro Ile 405 410 415 Thr Asp Val Ser Leu Gly Asp Glu Leu Arg Leu Asp Gly Glu Glu Val 420 425 430 Asp Met Thr Pro Ala Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Glu Met Leu 435 440 445 Gly Asp Val Glu Ser Pro Ser Pro Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser 450 455 460 Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr 465 470 475 480 Asp Ala Met Gly Ile Asp Asp Phe Gly Gly 485 490 <210> 7 <211> 302 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL49 protein of HSV-2 <400> 7 Met Thr Ser Arg Arg Ser Val Lys Ser Cys Pro Arg Glu Ala Pro Arg 1 5 10 15 Gly Thr His Glu Glu Leu Tyr Tyr Gly Pro Val Ser Pro Ala Asp Pro 20 25 30 Glu Ser Pro Arg Asp Asp Phe Arg Arg Gly Ala Gly Pro Met Arg Ala 35 40 45 Arg Pro Arg Gly Glu Val Arg Phe Leu His Tyr Asp Glu Ala Gly Tyr 50 55 60 Ala Leu Tyr Arg Asp Ser Ser Ser Ser Glu Asp Asn Asp Glu Ser Arg 65 70 75 80 Asp Thr Ala Arg Pro Arg Arg Ser Ala Ser Val Ala Gly Ser His Gly 85 90 95 Pro Gly Pro Ala Arg Ala Pro Pro Pro Pro Gly Gly Pro Val Gly Ala 100 105 110 Gly Gly Arg Ser His Ala Pro Pro Ala Arg Thr Pro Lys Met Thr Arg 115 120 125 Gly Ala Pro Lys Ala Pro Ala Thr Pro Ala Thr Asp Pro Ala Arg Gly 130 135 140 Arg Arg Pro Ala Gln Ala Asp Ser Ala Val Leu Leu Asp Ala Pro Ala 145 150 155 160 Pro Thr Ala Ser Gly Arg Thr Lys Thr Pro Ala Gln Gly Leu Ala Lys 165 170 175 Lys Leu His Phe Ser Thr Ala Pro Pro Ser Pro Thr Ala Pro Trp Thr 180 185 190 Pro Arg Val Ala Gly Phe Asn Lys Arg Val Phe Cys Ala Ala Val Gly 195 200 205 Arg Leu Ala Ala Thr His Ala Arg Leu Ala Ala Val Gln Leu Trp Asp 210 215 220 Met Ser Arg Pro His Thr Asp Glu Asp Leu Asn Glu Leu Leu Asp Leu 225 230 235 240 Thr Thr Ile Arg Val Thr Val Cys Glu Gly Lys Asn Leu Leu Gln Arg 245 250 255 Ala Asn Glu Leu Val Asn Pro Asp Ala Ala Gln Asp Val Asp Ala Thr 260 265 270 Ala Ala Ala Arg Gly Arg Pro Ala Gly Arg Ala Ala Ala Thr Ala Arg 275 280 285 Ala Pro Ala Arg Ser Ala Ser Arg Pro Arg Arg Pro Leu Glu 290 295 300 <210> 8 <211> 305 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL31 protein of HSV-2 <400> 8 Met Tyr Asp Ile Ala Pro Arg Arg Ser Gly Ser Arg Pro Gly Pro Gly 1 5 10 15 Arg Asp Lys Thr Arg Arg Arg Ser Arg Phe Ser Ala Ala Gly Asn Pro 20 25 30 Gly Val Glu Arg Arg Ala Ser Arg Lys Ser Leu Pro Ser His Ala Arg 35 40 45 Arg Leu Glu Leu Cys Leu His Glu Arg Arg Arg Tyr Arg Gly Phe Phe 50 55 60 Ala Ala Leu Ala Gln Thr Pro Ser Glu Glu Ile Ala Ile Val Arg Ser 65 70 75 80 Leu Ser Val Pro Leu Val Lys Thr Thr Pro Val Ser Leu Pro Phe Ser 85 90 95 Leu Asp Gln Thr Val Ala Asp Asn Cys Leu Thr Leu Ser Gly Met Gly 100 105 110 Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Gly Cys Cys Pro Ala Cys Ser Ala Gly Asp 115 120 125 Gly Arg Leu Ala Thr Val Ser Arg Glu Ala Leu Ile Leu Ala Phe Val 130 135 140 Gln Gln Ile Asn Thr Ile Phe Glu His Arg Thr Phe Leu Ala Ser Leu 145 150 155 160 Val Val Leu Ala Asp Arg His Ser Thr Pro Leu Gln Asp Leu Leu Ala 165 170 175 Asp Thr Leu Gly Gln Pro Glu Leu Phe Phe Val His Thr Ile Leu Arg 180 185 190 Gly Gly Gly Ala Cys Asp Pro Arg Phe Leu Phe Tyr Pro Asp Pro Thr 195 200 205 Tyr Gly Gly His Met Leu Tyr Val Ile Phe Pro Gly Thr Ser Ala His 210 215 220 Leu His Tyr Arg Leu Ile Asp Arg Met Leu Thr Ala Cys Pro Gly Tyr 225 230 235 240 Arg Phe Ala Ala His Val Trp Gln Ser Thr Phe Val Leu Val Val Arg 245 250 255 Arg Asn Ala Glu Lys Pro Ala Asp Ala Glu Ile Pro Thr Val Ser Ala 260 265 270 Ala Asp Ile Tyr Cys Lys Met Arg Asp Ile Ser Phe Asp Gly Gly Leu 275 280 285 Met Leu Glu Tyr Gln Arg Leu Tyr Ala Thr Phe Asp Glu Phe Pro Pro 290 295 300 Pro 305 <210> 9 <211> 250 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> UL34 protein of HSV-2 <400> 9 Met Ala Gly Met Gly Lys Pro Tyr Gly Gly Arg Pro Gly Asp Ala Phe 1 5 10 15 Glu Gly Leu Val Gln Arg Ile Arg Leu Ile Val Pro Thr Thr Leu Arg 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Glu Ser Gly Pro Tyr Ser Pro Ser Asn Pro Pro Ser 35 40 45 Arg Cys Ala Phe Gln Phe His Gly Gln Asp Gly Ser Asp Glu Ala Phe 50 55 60 Pro Ile Glu Tyr Val Leu Arg Leu Met Asn Asp Trp Ala Asp Val Pro 65 70 75 80 Cys Asn Pro Tyr Leu Arg Val Gln Asn Thr Gly Val Ser Val Leu Phe 85 90 95 Gln Gly Phe Phe Asn Arg Pro His Gly Ala Pro Gly Gly Ala Ile Thr 100 105 110 Ala Glu Gln Thr Asn Val Ile Leu His Ser Thr Glu Thr Thr Gly Leu 115 120 125 Ser Leu Gly Asp Leu Asp Asp Val Lys Gly Arg Leu Gly Leu Asp Ala 130 135 140 Arg Pro Met Met Ala Ser Met Trp Ile Ser Cys Phe Val Arg Met Pro 145 150 155 160 Arg Val Gln Leu Ala Phe Arg Phe Met Gly Pro Glu Asp Ala Val Arg 165 170 175 Thr Arg Arg Ile Leu Cys Arg Ala Ala Glu Gln Ala Leu Ala Arg Arg 180 185 190 Arg Arg Ser Arg Arg Ser Gln Asp Asp 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Claims (23)

1. HSV-1 또는 HSV-2 감염의 치료, 예방 또는 개선, 또는 HSV-1 또는 HSV-2의 재활성화 예방을 위한, 하기의 다량체성 복합체를 포함하는 백신 조성물:
   헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus, HSV) 폴리펩티드 UL11, UL16 및 UL21.
2. 제1항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 UL11은 서열번호 1의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HSV 폴리펩티드 UL11은 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 것인, 백신 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 UL16은 서열번호 2의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HSV 폴리펩티드 UL16은 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 것인, 백신 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 UL21은 서열번호 3의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HSV 폴리펩티드 UL21은 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 것인, 백신 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 UL11, UL16 및 UL21을 포함하는 다량체성 복합체는 HSV 폴리펩티드 gE를 포함하는 것인, 백신 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 gE는 서열번호 4의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 HSV 폴리펩티드 gE는 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 것인, 백신 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 gE는 HSV 폴리펩티드 gE의 세포질 도메인(cytoplasmic domain)인 것인, 백신 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 HSV 폴리펩티드 gE의 세포질 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 gE의 세포질 도메인은 백신 조성물의 형태로 개체에 투여될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 것인, 백신 조성물.
9. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 HSV-1 폴리펩티드인 것인, 백신 조성물.
10. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 HSV-2 폴리펩티드인 것인, 백신 조성물.
11. 제1항에 있어서, 핵산에 의해 코딩되는 것인, 백신 조성물.
12. 제1항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 보조제를 추가로 포함하는 것인, 백신 조성물.
13. 제1항에 있어서, 상기 HSV는 HSV-1인 것인, 백신 조성물.
14. 제1항에 있어서, 상기 HSV는 HSV-2인 것인, 백신 조성물.
15. (i) UL11, UL16 및 UL21, 및 선택적으로 gE 또는 상기 gE의 세포질 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드;를 포함하는 벡터.
16. 제15항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
17. 하기 단계를 포함하는 제1항의 백신 조성물을 생산하는 방법:
    (i) 제16항의 숙주세포를 배양하는 단계;
    (ii) 다량체성 복합체를 수득하는 단계; 및
    (iii) 상기 다량체성 복합체와 약학적으로 허용가능한 담체 또는 보조제를 혼합하는 단계.
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