KR102415077B1 - 아네모네 리불라리스 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 조성물 - Google Patents
아네모네 리불라리스 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물을 포함하는 조성물 및 이의 피부 노화 방지 또는 염증성 피부 질환 예방 또는 개선 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 미백, 주름 개선, 아토피 및 가려움증 억제에 관한 것이다.
Description
본 발명은 피부 적용시 안전하고, 피부 개선 효과가 우수한 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
피부노화는 개인의 유전적 차이에 의해 발생하는 내재적 노화와 햇빛이나 대기오염 같은 외부 요인에 의해 발생하는 외재적 노화가 있다. 외재적 노화는 자외선에 의한 경우가 대부분이기 때문에 광노화(Photoaging)라고도 한다. 인간의 피부는 크게 표피층 (Epidermis)와 진피층 (Dermis)로 구성되어 있는데 피부 노화가 진행되면 진피층의 엘라스틴, 콜라겐이 감소되어 피부 탄력이 떨어지고 주름이 생기며 수분 손실이 증가한다. 따라서 엘라스틴, 콜라겐 합성을 증가시키고 분해를 억제하며 피부의 보습인자를 증가시키는 것은 피부노화 예방 할 수 있다. 예를 들면 Hyaluronan synthase(HAS), Hyaluronidase(Hyal)의 조절에 의해 천연 보습인자인 히알루론산(Hyaluronan)과 세포막에 존재하는 aquaglyceroporin인 Aquaporine3(AQP3)의 증가, 피부장벽을 이루는 보습성분인 Filaggrin(FLG) 증가 등으로 설명될 수 있다.
멜라닌은 갈색 세포내 소기관인 멜라노좀에서 일어나는 일종의 산화반응에 의해서 생성된다. 즉, 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)이 티로시나아제(tyrosinase)에 의해 디히드록시페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 산화되는 반응을 시작으로 일련의 산화과정을 거쳐 갈색이나 흑색의 중합체를 형성하게 된다. 멜라닌은 자외선을 흡수하여 표피 안쪽에 존재하는 여러 세포들을 자외선으로부터 보호하는 역할을 하는데 산화적 스트레스(Oxidative Stress)에 지속적으로 노출되면 체내의 자유라디칼(Free Radical)이 증가되고 그것은 멜라닌 형성과정에 관여하여 기미와 주근깨를 생성하는 원인이 된다. 따라서 피부에 기미, 주근깨 등의 반점 형성을 억제하고, 노화에 따른 탄력감소를 억제하기 위해서는 피부내 산화작용을 억제하고, 멜라닌의 형성을 억제할 수 있는 방안의 모색이 요구된다.
아토피 피부염(AD, Atopic Dermatitis)은 주로 유아기 혹은 소아기에 시작되는 만성적이고 재발성의 염증성 피부질환으로 소양증(가려움증)과 피부건조증, 습진의 증상이 생긴다. 현재 전세계적으로 약 20% 어린이와 3% 성인이 고통 받고 있는 것으로 추정되며, 그 발병율은 상승하고 있다. 아토피 피부염은 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의한 감염, 꽃가루 등과 같은 특정 물질, 음식물, 인공적 화합물질 등에 의하여 면역체계가 과민 반응하여 발생하는 것으로 알려져 있으며 일반적으로 혈청의 IgE 및 알레르겐-특이적 IgE 레벨의 차이로 외인성과 내인성 아토피 피부염으로 분류된다. 그리고 T세포, 대식세포 등의 신체 내 특정 면역세포들이 활성화하여 TNF-a를 비롯한 여러 사이토카인 및 가려움의 중재자인 히스타민의 분비를 유도한다. 이러한 가려움증이나 아토피성 피부염을 치료하기 위한 요법들로는 국소 및 전신 약제로 스테로이드, 항히스타민제, 면역억제제 등이 사용되고 있으나, 졸림, 면역력 저하, 국소 투여의 피부 불안전성, 피부 외용제 조성물의 불안전성 등의 문제점을 안고 있어, 그 사용이 제한되고 있다. 따라서, 인체에 부작용이 적으며 자극 완화 효과가 있는 새로운 물질이 지속적으로 요구되고 있다.
미나리아재비과(Ranunculaceae)에 속하는 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis)는 중국, 네팔, 인도 및 베트남에 널리 분포하는 다년생 식물로 염증성 질환, 호흡기 질환 및 암을 치료하는 전통적인 치료제로 사용되고 있다. 최근 여러 선행연구에서 식물 화학성분, 약리학적 활성 및 항암 활성을 보여주고 있다. 트리테르페노이드 사포닌(triterpenoid saponin), 사포닌 글리코 사이드(saponin glycosides) 및 세레브로사이드(cerebroside) 등 다른 여러 화학성분을 포함하며 그 중 여러가지 올레난형(oleanane-type) 트리테르페노이드 사포닌이 항종양제로 보고되었다.
본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis) 추출물을 포함하는 주름개선, 미백, 피부노화, 아토피 가려움증을 개선하는 목적의 조성물에 대한 것으로, 기존 연구결과에서 α-MSH가 유도된 마우스유래 흑색종 세포(B16F10)에서 Tyrosinase, TRP1(Tyrosinase related protein 1), TRP2(Tyrosinase related protein 2) 발현저해로 인한 멜라닌 합성 저해함으로써 미백 개선 효능과 HAS(Hyaluronan synthase) 발현 조절로 인한 주름, 여러 사이토카인 및 케모카인 저해로 인한 아토피 피부염 개선 효과에 대한 선행 보고된 바가 없다.
따라서 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis) 추출물은 미백, 주름, 아토피 가려움증 완화에 대한 표적 분자를 조절하여 효율을 증가시킴으로써 우수한 효과를 가지고 있어 기미, 주근깨와 같은 색소 침착을 비롯한 피부노화, 아토피 가려움증 예방과 치료를 위한 의약품, 기능성 식품 또는 화장품으로서의 개발 가능성이 있으며, 이에 대한 특허를 신청하고자 한다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis) 추출물을 포함하는 조성물의 피부 노화 방지 또는 염증성 피부질환 예방 또는 개선, 특히 보습, 주름개선, 미백, 항산화, 아토피 또는 가려움증에 대한 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 물, C1-C6 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것에 관한 것이다.
상기 피부 노화 방지는 미백 또는 주름 개선인 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 약학 조성물, 건강기능식품 조성물 및 화장료 조성물에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 조성물의 형태에 관한 것이다.
또한 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone rivularis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
상기 염증성 피부질환은 아토피 또는 가려움증인 것을 특징으로 하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
추가적으로, 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)을 용매에 침지(soaking)시키는 단계; 잔사(residue)를 제거한 추출물을 여과지로 여과시키는 단계; 및 동결건조하는 단계;를 포함하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법을 제공한다.
여기에서 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)와 용매의 혼합 비율은 1:10일 수 있고, 용매로 95%(v/v) 에탄올을 사용하여 4시간 동안 침지시키는 것을 특징으로 하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물을 포함하는 조성물은 미백, 주름 및 아토피 가려움증에 대한 효과가 있으므로 피부 노화 또는 염증성 피부질환에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물 제조방법에 대한 순서도를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 세포독성을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 미백 효과로서 멜라닌 함량 및 티로시나아제 활성에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 미백 효과로서 티로시나아제 및 관련 단백질의 발현에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 주름 개선 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 아토피 가려움증에 대한 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 세포독성을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 미백 효과로서 멜라닌 함량 및 티로시나아제 활성에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 미백 효과로서 티로시나아제 및 관련 단백질의 발현에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 주름 개선 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 구현 예에 따른 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 아토피 가려움증에 대한 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명의 바람직한 구현예에 대하여 상세히 설명한다. 또한, 하기의 설명에서는 구체적인 구성요소 등과 같은 많은 특정 사항들이 도시되어 있는데, 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐 이러한 특정 사항들 없이도 본 발명이 실시될 수 있음은 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 자명하다 할 것이다. 그리고, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 혹은 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 발명에서 용어, "예방" 또는 "방지"라 함은 질환의 원인으로부터 발생을 억제하거나 지연시키는 것을 의미한다.
본 명세서에서, "치료"라 함은 완전히 치유하지 않아도 증상의 진전 및/또는 악화를 억제하여 손상의 진행을 멈추거나, 또는 증상의 일부 혹은 전부를 개선하여 치유의 방향으로 유도하는 것을 의미한다.
본 발명에서 용어 “개선”은 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따른 조성물에서, 상기 추출물은 물 또는 유기 용매를 사용하여 추출할 수 있는데, 추출한 액은 액체 형태로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 상기 유기용매는 반드시 이로 제한되는 것은 아니지만, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매이며, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 부탄올, 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합용매이고, 추출물의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 추출물의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 상기 유기용매로 추출 방법이 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다.
상기 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)의 꽃, 줄기, 잎, 뿌리를 포함하는 모든 부위를 사용할 수 있고, 바람직하게는 뿌리줄기 부위를 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 피부 노화 방지는 피부 노화로 인해 발생할 수 있는 모든 현상을 포함하는 것이고, 바람직하게는 미백, 주름 개선 또는 보습이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 일 구현예에 따른 조성물에서, 상기 조성물은 피부 노화 방지에 유용한 추가 성분을 포함할 수 있고, 추가성분은 화합물, 천연물을 포함하는 피부 개선에 효과가 공지된 모든 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함하여 모든 형태의 조성물로 제조될 수 있고, 바람직하게는 약학 조성물, 건강기능식품 조성물 또는 화장료 조성물의 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화될 수 있으며, 산제, 정제, 캡슐제, 주사제 및 액제가 보다 바람직하다. 이러한 제제화는 약제학 분야에서 통상적으로 행하여지는 방법으로 수행될 수 있으며, Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 광물유 등을 포함한다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 추가로 사용하여 조제될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween), 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서 본 발명의 추출물은 1 일 0.01 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 99 중량%로 포함될 수 있다. 일일 투여량은 약 0.1 내지 1,000 mg/kg으로, 바람직하게는 100~300 mg/kg일 수 있다.
상기 추출물을 첨가할 수 있는 건강기능식품으로는 예를 들어, 각종 일반식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 등이 있다.
또한, 상기 추출물은 질환의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 g을 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강기능음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 함유할 수 있다. 상술한 천연탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 솔비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제인 타우마틴, 스테비아 추출물, 예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등; 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등을 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스, 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이때, 첨가제의 비율은 그다지 중요하지는 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
추가적으로, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
상기 염증성 피부질환은 이 분야에서 인식되는 염증으로 인해 발생하는 모든 피부 질환을 의미하며, 구체적으로는 다양한 자극 요인들로 인해 가려움(소양증), 부종, 홍반, 벗겨짐 등과 같은 염증반응이 동반된 피부질환을 말한다. 이러한 염증성 피부 질환에는 다양한 원인에 의한 알레르기성 피부염, 동물 또는 곤충에 의해 물려서 발생된 교상, 피부 진균증, 여드름, 아토피, 두드러기, 접촉성 피부염, 식품 알레르기, 약품 알레르기 등이 있고, 바람직하게는 아토피 또는 가려움증 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 예로, 본 발명은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)을 용매에 침지(soaking)시키는 단계; 잔사(residue)를 제거한 추출물을 여과지로 여과시키는 단계; 및 동결건조하는 단계;를 포함하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법을 제공한다.
여기에서 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)와 용매의 혼합 비율의 혼합 비율은 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 1:10으로 혼합할 수 있고, 용매는 물, C1-C6 알코올 또는 이들의 혼합 용매일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 용매로 95%(v/v) 에탄올을 사용하여 22 ℃에서 4시간 동안 침지시키는 것을 특징으로 하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법일 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
<실시예>
1. 아네모네 리불라리스(
Anemone Rivularis
) 추출물의 제조
아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물은 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 잎 100 g을 95%(v/v) 에탄올 1 L에 22℃에서 4시간 동안 침지시키고, 잔사를 제거하였다. 획득한 에탄올 추출물은 여과지를 사용하여 여과하였으며, 건조 및 동결건조 후에 보관하였다. 실험 전 증류수에 희석하여 필요한 농도로 조절하여 사용하였다.
<시험예>
1. 세포독성 평가
B16F10(5×104cells/well)세포에 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis: AR) 추출물을 각 농도별(1~1000ng/ml)로 24시간 처리하고, 그리고 또 하나는 6well에 5×104cells/well로 배양후, 아네모네 리불라리스 추출물을 동일한 농도별 첨가하고 1시간 후에 α-MSH(100nM)를 처리하였다. 각각 1일과 3일뒤, Griess 반응후 MTT용액(2mg/ml)을 각 웰에 투여하였다. 2시간 이상 37℃의 세포 배양기에서 반응시킨후 상등액을 제거하고 생존 세포에 생성된 formazan을 540nm의 흡광도로 측정하였다. 세포의 생존율은 대조군에 대한 %로 계산하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 아네모네 리불라리스 추출물은 모든 농도에서 유의성 있는 독성이 확인되지 않았다.
2. 피부 미백: 멜라닌 함량, Tyrosinase 활성 및 mRNA 발현
B16F10(5×104cells/well)세포를 배양한 다음, AR(1~1000ng/ml)과 α-MSH(100nM)를 처리한 후 3일간 phenol-red가 없는 DMEM배지에서 배양함. 배양세포를 PBS로 두번 세척하고 10% dimethyl sulfoxide(DMSO)와 1N NaOH의 Melanin 용액 200μl을 넣어 80℃에서 2시간 동안 반응하여 microplate reader에서 475nm의 흡광도에서 멜라닌 생합성 저해 활성을 측정하였다.
B16F10 세포(5×104cells/well)에 AR(1~1000ng/ml)과 α-MSH(100nM)를 48시간 처리한 후, PBS 2번 세척하고 1% Triton X-100과 0.1mM phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF)이 포함된 100mM sodium phosphate buffer(pH 6.8)에 lysis한 후 4℃, 10,000rpm에서 20분간 원심분리하였다. 96well plate에 5mM DOPA 100μl와 샘플 100μl을 37℃ 인큐베이터에서 2시간 반응한 후 475nm 파장에서 세포내에서 tyrosinase 활성 저해율 측정하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, AR이 농도의존적으로 유의성있게 멜라닌 합성과 세포내 tyrosinase 활성을 점차적으로 저해하는 것을 확인하였다.
B16F10 세포에 α-MSH(100nM)과 AR을 각각 10, 50 100ng/ml 처리후 48시간 지난 다음, RNA를 추출하여 TYR, TRP1, TRP2의 각 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로 mRNA 발현량을 확인하였다. 증폭된 DNA를 전기 영동하여 자외선(UV) 하에서 촬영한 후 그림으로 나타내었으며, 각 유전자의 발현량과 대조표준인 GAPDH의 발현량을 비교 대조하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, AR은 100ng/ml에서 의미있게 TYR, TRP1과 TRP2의 발현이 줄어드는 것을 확인하였다.
프라이머 서열
TYR(236 bp) Forward: CCTCCTGGCAGATCATTTGT
TYR(236 bp) Reverse: GGCAAATCCTTCCAGTGTGT
TRP1(260 bp) Forward: AGACTCCCGACCCCACAGCC
TRP1(260 bp) Reverse: GGTGAGTTGTGCGCTTCGCC
TRP2(311 bp) Forward: AGGAAGACTGGCGAGAAGCTCCC
TRP2(311 bp) Reverse: CGGCGTCCCACCTGGTTTCTG
GAPDH(203 bp) Forward: GGAGCCAAAAGGGTCATCAT
GAPDH(203 bp) Reverse: GTGATGGCATGGACTGTGGT
3. 피부 주름개선 효과: HAS2 유전자 발현
HaCaT (1.5×105cells/well)세포에 serum-free media로 교환하여 24시간 동안 starvation을 하고 AR(5μg)를 3시간 처리한 후, RNA를 추출하여 HAS2의 특이적인 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로 mRNA 발현량을 확인하였다. 증폭된 DNA를 전기 영동하여 자외선(UV) 하에서 촬영한 후 그림으로 나타내었으며, 각 유전자의 발현량과 대조 표준인 β-actin의 발현량을 비교 대조하였다.
도 5에 나타낸 바와 같이, AR(5μg)이 HAS2의 발현을 증가시킴을 확인하였다.
프라이머 서열
HAS2(257 bp) Forward: TGTCGAGTTTACTTCCCGCC
HAS2(257 bp) Reverse: CAGCGTCAAAAGCATGACCC
β-actin(275 bp) Forward: CAAGAGATGGCCACGGCTGCT
β-actin(275 bp) Reverse: TCCTTCTGCATCCTGTCGGCA
4. 아토피 및 피부 가려움증 억제 효과: IL-6, IL-8, CCL17(TARC), IL-1β, TNF-α 발현
HaCaT (1.5×105cells/well)세포에 AR(5μg)를 1시간 전처리한 후, TNF-α(10ng/ml)와 IFNγ(10ng/ml)를 24시간 동안 반응하였다. RNA를 추출하여 CCL17(TARC)의 특이적인 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로 mRNA 발현량을 확인하였다. 증폭된 DNA를 전기 영동하여 자외선(UV) 하에서 촬영한 후 그림으로 나타내었으며, 각 유전자의 발현량과 대조 표준인 β-actin의 발현량을 비교 대조하였다.
도6에 나타낸 바와 같이, AR(5μg)가 유의하게 아토피 및 아토피성 가려움에 관여하는 염증성 사이토카인 CCL17(TARC)의 발현을 감소시킴을 확인하였다.
프라이머 서열
CCL17(229 bp) Forward: TCGGACCCCAACAACAAGAG
CCL17(229 bp) Reverse: GCTCCAGTTCAGACAAGGGG
β-actin(275 bp) Forward: CAAGAGATGGCCACGGCTGCT
β-actin(275 bp) Reverse: TCCTTCTGCATCCTGTCGGCA
Claims (12)
- 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 피부 노화 방지는 미백인 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 피부 노화 방지는 주름 개선인 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
- 삭제
- 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물.
- 삭제
- 제6항에 있어서, 상기 염증성 피부질환은 아토피 또는 가려움증인 것을 특징으로 하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물, 건강기능식품 조성물 및 화장료 조성물에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 피부질환 예방 또는 개선용 조성물.
- 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)를 95%(v/v) 에탄올에 4시간 동안 침지(soaking)시키는 단계;
잔사(residue)를 제거한 추출물을 여과지로 여과시키는 단계; 및
동결건조하는 단계;를 포함하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법 - 제10항에 있어서, 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis)와 95%(v/v) 에탄올의 혼합 비율은 1:10인 것을 특징으로 하는 아네모네 리불라리스(Anemone Rivularis) 추출물의 제조방법
- 삭제
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|---|---|---|---|
| KR1020200100573A KR102415077B1 (ko) | 2020-08-11 | 2020-08-11 | 아네모네 리불라리스 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 조성물 |
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| KR101533213B1 (ko) * | 2015-03-18 | 2015-07-10 | 주식회사 바이오에프디엔씨 | 아네모네 식물 태좌 세포 배양 추출물을 함유한 항노화, 항염, 항산화 화장료 조성물 |
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