KR102026988B1 - 용암해수 숙성 백년초 분말의 제조 방법과 그 분말의 추출물을 이용한 피부 보습용 조성물 - Google Patents

Abstract

용암해수 숙성 백년초 분말의 제조 방법과 그 분말의 추출물을 이용한 피부 보습용 조성물과 아토피성 피부염 조성물 등을 개시한다.

Description

용암해수 숙성 백년초 분말의 제조 방법과 그 분말의 추출물을 이용한 피부 보습용 조성물{Method for Preparing Aged Opuntia Ficusindica Fruit Powder Using Magma Seawater and a Composition for Moisturizing Skin Using an Extract of the Powder}

본 발명은 용암해수 숙성 백년초 분말의 제조 방법과 그 분말의 추출물을 이용한 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.

신체의 최외곽층을 형성하고 있는 피부는 온도변화, 습기, 먼지 각종 미생물 등의 기타 인위적인 요인과 불가항력적인 스트레스에 의해 계속적으로 영향을 받고 있으며, 그러한 외적 유해 요인들로부터 몸을 보호해 주고 있는 가장 큰 기관이다. 피부는 표피(epidermis), 진피(dermis) 피하지방층(subcutaneous fat tissue)의 3개의 층으로 지칭하고 있다. 표피는 상피조직(epithelial tissue)으로 구성되어 있으며, 주 구성세포인 각질형성세포(keratinocyte)는 여러 단계의 분화과정을 통해 계속적인 새로운 세포를 교체해줌으로써 각질층을 형성하고, 각질층은 피부의 가장 바깥에 위치한 것으로 미생물의 침입, 장력 등의 외부자극으로부터 보호 및 수분손실을 막는 장벽(barrier)역할을 함으로 인체의 항상성을 유지해 준다.

진피는 표피 아래의 결합조직(connective tissue)으로 피부의 90%이상을 차지하고 있으며 교원섬유(collagenous fiber)와 탄력섬유(elastic fibers)로 구성되어 있는 세포외 기질(extracellular matrix)로 이루어져 주로 피부의 탄력과 장력을 유지할 수 있게 하는 역할을 하고 있다. 이 세포외 기질은 주로 섬유아세포에서 만들어지며, 콜라겐, 엘라스틴 등의 섬유성 단백질로 이루어져 있어, 질기면서도 탄력성을 가지고 있다. 또한 교원섬유와 탄력섬유 사이에는 히알루론산 등의 기질물질(ground substance)로 채워져 있으며, 이는 기질 주위의 다른 조직을 지탱하면서 결합조직에 영양공급 및 수분의 균형에 관여하고 있다.

섬유성분으로서 콜라겐은 피부 수분을 유지하고 피부 유연성과 탄력을 유지하는 데 가장 중요한 단백질로 피부에 강도와 장력을 주고, 외부의 자극으로부터 피부를 보호하는 역할을 하며 진피층의 90%를 차지하고 있으며, 엘라스틴은 진피층의 3~4%를 차지하며 콜라겐과 마찬가지로 피부의 탄력에 있어 중요한 인자이다(J Am Acad Dermatol, 17(4):610-613, 2001). 콜라겐은 대부분이 Type I 콜라겐으로 섬유아세포에 의해 합성되며 MMP-1 등의 콜라게나아제(collagenase) 등에 의해 분해된다. 다당체로서는 수분 보유능이 강한 히알루론산(Hyaluronic acid), 뮤코다당체, 프로테오클리칸 등의 고분자물질 등을 들 수 있다.

피부노화는 나이가 들거나 자외선 등에 노출되면 각질형성세포와 섬유아세포는 활성산소종을 생성하고, 활성산소종은 세포내의 DNA, 세포막, 단백질, 지방, 핵산 등을 산화시켜 피부노화를 일으킨다(Bhawan et al. 1992; Brenneisen et al. 1997;Scharfferrs-Kochaneketal.1997). 특히 일정량 이상의 UVB는 피부에서 다량의 활성산소종에 의해 단백질분해효소가 활성화되며 콜라겐 및 엘라스틴의 분해로 인한 진피의 결합조직의 손상과 함께 피부장벽을 붕괴시켜 유분 및 수분감소와 피부노화를 일으킨다. 또한 UVB에 의한 활성산소종은 산화적스트레스를 유발하고, 각종 사이토카인의 분비를 촉진시켜 염증 반응을 활성화시켜, 각종 피부질환 및 피부암을 일으킬 수 있다.

세포외 기질 성분으로 알려진 히알루론산은 수분을 보유하고 있는 것으로 알려져 있으며, 인체 피부 내에서 히알루론산은 노화가 진행될수록 수분과 함께 감소하는 것으로 알려져 있다(김진화, 충북대학교 박사 학위 논문, 2014).

또 피부장벽은 피부의 최외각에 존재하는 각질층으로 이루어지며, 이를 만들기 위해 기저층으로 부터 각질형성세포가 분화하여 최종적으로 각질과 이를 감싸는 지질 물질이 생성되게 된다. 피부장벽은 수분 손실을 억제하는 기능과 수분을 보유하는 기능을 동시에 지님으로써 보습력을 유지하게 된다(Kim et al, Kor. J. Soc. Cosmet. 34(2):93-99, 2008; Jang et al, Ph.D. dissertation, University of Konkuk, Seoul, Korea, 2013)

현재 피부 노화를 억제하기 위해 많은 연구가 진행되고 있으며, 시중에 많은 기능성 화장품이 판매되고 있다. 하지만, 일부 물질들은 안정성이 낮거나 피부 자극을 일으켜 안전성에 문제가 있기 때문에 사용에 제한이 있다. 이에 따라 우수한 생리활성 효과와 안전성을 지닌 물질의 탐색이 지속되고 있다.

한편, 화장품 업계에서는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품이 다수 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

그러나 통상의 방법으로 추출한 천연물 추출물을 사용하는 조성물들은 원하는 미백, 주름 개선, 항산화 등의 효과가 미미할 뿐 아니라, 이러한 추출물의 활성을 지속적으로 유지, 제어하기가 어려워 실용성이 높지 않았다.

제주에서도 동부지역(구좌읍, 성산읍 및 표선면)에만 분포하는 용암해수는 청정하고 수온이 연중 일정한 특성을 갖고 있으며 일반 염지하수나 해수에서 볼 수 없는 다양한 미네랄을 다량으로 함유하고 있으며, 일반해수와 용암해수의 미네랄 함량 비교는 아래의 [표 1]과 같다.

상기 [표 1]로부터 용암해수는 염분, 마그네슘, 칼슘, 브롬 등의 항목에서는 일반해수와 유사한 점을 나타내지만, 게르마늄, 바나듐, 셀레늄 등의 미량원소 항목에서는 뚜렷한 차이를 보이고 있다.

본 발명은 용암해수를 이용하여 천연물을 숙성시킬 경우 유효 성분의 함량이 증가하고, 더불어 숙성시킨 추출물이 항염 활성, 히알루론산 생성 촉진 활성 등의 피부 생리활성의 증진됨을 확인함으로써 완성된 것이다.

본 발명의 목적은 용암해수를 이용한 숙성 백년초 분말의 제조 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 용암해수 숙성 백년초 분말 추출물을 이용한 피부 보습용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 용암해수에 백년초 분말을 침지시켜 7일~14일 숙성(그대로 방치)한 경우 그 추출물이 숙성하지 아니한 백년초 분말 추출물에 비해, 쿼서틴(Quercetin), 캠프페롤(Kampferol) 등의 플라보노이드 함량이 뚜렷하게 높고 항염 활성(NO 생성 억제 활성)이 우수할 뿐만 아니라, 피부 장벽 강화 효능이 우수하며 히알루론산 생성 촉진 활성이 우수함을 확인하였다. 더불어 INF-γ와 TNF-α로 처리된 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에서도 TARC(Thymus & activation-regulated chemokine)의 생성 억제 활성이, 숙성하지 아니한 백년초 분말 추출물에 비해 뚜렷하게 우수함을 확인하였다. 상기 TARC는 MDC(macrophage-derived chemokine)와 함께 Th2 세포에 작용하는 대표적인 CC 케모카인으로, Th2 세포의 CCR4(CC chemokine receptor 4)에 작용하여 염증 병변으로 Th2 세포의 이동과 침윤을 유도한다고 알려져 있으며(J Clin Invest. 113(5):651-7, 2004; Curr Allergy Asthma Rep. 5(4):284-90, 2005), 아토피 피부염 환자에서 TARC와 MDC의 혈청 농도가 현저히 증가한다는 보고가 있고(J Allergy Clin Immunol., 113(2):334-340), 아토피 피부염의 치료 물질로 사용되는 사이크로스포린 A나 코르티코스테로이드를 아토피 피부염 환자에게 투여하였을 때는 MDC 및 TARC의 혈청 농도가 감소한다는 보고가 있으며(J Dermatol Sci., 34:201-208, 2004), 또한 시험관내 실험에서 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에 INF-γ나 TNF-α를 처리하였을 때 MDC 및 TARC가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제안된 바 있다(Int Immunol., 14(7):767-773, 2002).

전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 일 측면에 있어서 용암해수 숙성 백년초 분말의 제조방법에 관한 것이고, 다른 측면에 있어서는 그 분말 추출물을 유효성분으로 이용한 피부 보습용 조성물, 항염증 조성물 또는 아토피성 피부염 개선용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 용암해수 숙성 백년초 분말의 제조방법은 용암해수에 백년초 분말을 침지시키는 단계, 및 침지 후 7일 이상 숙성(방치)하는 단계를 포함하여 구성된다.

본 발명의 방법에서, 상기 백년초는 아래의 실시예를 참조할 때 그 부위가 열매인 것이 바람직하다. 백년초(Opuntia ficusindica)는 선인장과 오픈티아속(Opuntia)에 속하는 다년생 초본으로, 원산지는 열대지방인데, 우리나라에서는 제주도에 관상용으로 처음 들어와, 지금은 제주도 지방기념물 제35호로 지정되어 있으며, 거제도와 제주도 등 남해안 지방에 널리 분포되어 있다.

또 본 발명의 방법에서, 상기 용암해수는 원수, 부유물질을 제거한 정제 원수, 역삼투압법나 전기투석법 등의 담수화 방법에 의한 담수화시 부산물로 발생하는 염분과 미네랄 함유 용암해수일 수 있으며, 특히 역삼투압법에 의한 담수화시 부산물로 발생하는 용암해수일 수 있다. 역삼투압법(RO)은 물에 용해되어 있는 염 등 이온성 물질을 멤브레인으로 이용하여 배제하시키고, 순수한 물만 통과시키는 방법이기 때문에 그 부산물로 발생하는 용암해수는 염분과 이온성 미네랄 등을 함유한다.

또 본 명세서에서, "용암해수"는 발명의 명칭이 "미네랄 조성물의 제조 방법 및 그 방법에 의하여 얻어진 미네랄 조성물"인 한국 특허 제0853244호(출원번호: 제10-2008-0027861호)에서 정의되고 설명된 바의 "제주도 동부지역에 부존하고 있는 염지하수"와 같은 의미이다. 구체적으로 "제주도 동부지역"은 행정구역상 제주도 구좌읍, 성산읍 및 표선면을 의미하며, "염지하수"는 일정량 이상 염분이 함유된 지하수를 의미하는데, 구체적으로는 고기원 등의 논문(고기원 등, 제주도 동부지역의 수문지질에 관한 연구(Ⅱ), 2003, 경원대학교; 본 명세서의 일부로서 간주된다)에서 사용한 염분 농도에 의거 제주도 지하수를 분류한 기준에 따라 저염지하수(전기전도도가 1,700㎲/cm ~17,350㎲/cm)와 염수지하수(전기전도도가 17,350㎲/cm 이상)를 모두를 포함하는 의미로서 이해될 수 있지만, 바람직하게는 전기전도도가 17,350 ㎲/cm 이상 또는 염의 농도가 30‰(permilliage) 이상(통상 해수의 염분 농도가 32 내지 35‰임)인 염수지하수를 의미하는 것으로 이해될 수 있다.

또 본 발명의 방법에서, 숙성 시 온도는 특별한 제한이 없으나 아래의 실시예를 참조할 때 15℃ 이하의 저온, 특히 4℃~15℃인 것이 바람직하다.

또 본 발명의 방법에서, 숙성 기간은 아래의 실시예를 참조할 때 7일 이상 14일 이하인 것이 바람직하다.

본 발명의 피부 보습용 조성물, 항염증 조성물 또는 아토피성 피부염 개선용 조성물(이하 통칭하여 "본 발명의 조성물")에서 그 유효성분은 상기 용암해수 숙성 백년초 분말의 추출물인데, 그 추출물은 추출 대상인 백년초 분말을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료, 개선을 의도하는 보습 활성, 항염증 활성, 아토피부염 개선 활성 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 또는 피부 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 보습 효과, 항염증 효과 등 의도한 피부학적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분 이외에, 피부 보습 효과의 상승·보강 등을 위하여 또는 피부 과민 반응 억제 활성, 피부 보호 활성(피부 미백, 자외선에 의한 피부 손상 억제, 피부 보습 등) 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취, 사용의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임), 각국 기능성화장품공전(한국에서는 식약처 고시인 "기능성화장품 기준 및 시험방법") 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물, 기능성 화장품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「화장품법」임)에 따라 기능성이 인정된 화합물 또는 추출물이 포함된다. 예컨대 피부 미백 성분으로서는 알부틴, 나이아신아마이드, 아스코빌글루코사이드, 알파-비사보롤, 유용성 감초 추출물(Oil Soluble Licorice(Glycyrrhiza) Extract) 등을 들 수 있으며, 또 피부 주름 개선 성분으로서는 레티놀, 레티닐팔미테이트, 아데노신, 폴리에톡실레이티드아마이드 등을 들 수 있고, 자외선 보호 성분으로서는 드로메트리졸, 드로메트리졸트리실록산, 디갈로일트리올리에이트, 디메치코디에칠벤잘말로네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 소나무 껍질 추출물 등의 복합물, 포스파티딜세린, 핑거루트 추출 분말, 홍삼과 산수유 등의 복합 추출물 등을 들 수 있다. 또 보습 성분으로서는 AP 콜라겐 효소 분해 펩타이드, Collactive 콜라겐 펩타이드, N-아세틸글루코사민, 곤약 감자 추출물, 민들레 등의 복합 추출물, 쌀겨 추출물, 옥수수 배아 추출물, 저분자 콜라겐 펩타이드, 지초 추출 분말, 포스파티딜세린, 히알루론산 등을 들 수 있으며, '과민피부상태 개선' 기능성 성분으로서는 L. sakei Probio 65, 감마리놀렌산 함유 유지, 과채 유래 유산균인 L.plantarum CJLP133, 프로바이오틱스 ATP 등을 들 수 있다. 이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 식품 조성물로 파악될 경우 항염증 용도는 염증성 피부 자극 완화의 용도로 이해될 수 있으며, 아토피성 피부염 개선 활성은 피부 과민 반응 억제 활성으로도 이해될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.

약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우 항염증 용도는 염증성 피부 자극 완화의 용도로 이해될 수 있으며, 아토피성 피부염 개선 활성은 피부 과민 반응 억제 활성으로도 이해될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 개선 활성을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바의 본 발명에 따르면, 플라보노이드 등의 유용성분의 함량이 증가하고 항염 활성, 히알루론산 생성 촉진 활성 등 각종 피부 생리활성이 증진된 용암해수 숙성 백년초 분말을 제조할 수 있는 방법을 제공할 수 있다.

용암해수 숙성 백년초 분말 추출물은 피부 보습, 아토피성 피부염 개선, 염증성 피부염 개선, 염증성 피부 자극 완화 등의 기능성으로 화장품 등에 함유되어 사용될 수 있다.

도 1은 표준물질의 HPLC 분석 결과이다.
도 2는 숙성 전후 백년초 열매 추출물의 HPLC 분석 결과이다.
도 3은 세포독성 실험 결과이다.
도 4는 일산화질소(NO) 생성 억제 활성 실험 결과이다.
도 5는 TARC 생성 억제 활성 실험 결과이다.
도 6은 CE Formation 생성 촉진 실험 결과이다.
도 7은 PPARa 발현 촉진 실험 결과이다.
도 8은 HA(Hyaluronic acid) 생성 촉진 실험 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예> 용암해수 숙성 백년초 열매 추출물의 제조

<실시예 1> 용암해수 숙성 백년초 열매 제조

백년초 열매를 반으로 가른 뒤, 55℃의 열풍건조기에 2일 간 열풍건조하고 분쇄하여 백년초 열매 분말을 준비하였다. 여기에 10배 중량의 용암해수(원수의 농축수, 역삼투압법에 의하여 탈염 용암해수 제조시 생성되는 부산물로 염분과 이온성 미네랄을 포함하고 있음)를 가하고 4℃ 내지 15℃의 온도를 유지하여 백년초 열매 건조분말을 7일 내지 14일간 숙성시켰다.

백년초 열매 분말과 용암해수 혼합물을 120 메쉬 나일론 여과포로 여과하여 숙성한 백년초 열매 분말을 얻은 후, 그 백년초 열매 분말에 10배 중량의 정제수를 가하여 혼합하고 120 메쉬 나일론 여과포에 여과하는 과정을 5번 반복하여 숙성한 백년초 열매 분말에 남아있는 염분을 제거하였다. 염분을 제거한 백년초 열매 분말을 55℃ 열풍건조기에서 1일간 건조한 후 건식분쇄기를 이용하여 분말화하여 이를 추출에 사용하였다.

<실시예 2> 용암해수 숙성 백년초 열매 추출물의 제조

상기 실시예 1에서 얻어진 숙성 백년초 열매 분말에 10배 중량의 70% 에탄올을 가하고 3시간 동안 초음파 추출하고 여과지(1㎛ 공극도)로 여과한 후 그 여액을 감압농축하고 동결건조하여 분말상의 숙성 백년초 열매 추출물을 제조하였다.

<비교예> 일반 백년초 열매 추출물의 제조

숙성하지 않은, 일반 백년초 열매 분말을 추출 대상으로 하여 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 백년초 열매 추출물을 제조하였다.

<실험예 1> 용암해수 숙성 백년초 열매 추출물과 일반 백년초 열매 추출물의 성분비교

유효성분의 함량분석의 실험조건은 다음과 같다.

고성능액체크로마토그래피(Waters Alliance 2695 HPLC)를 사용하여 용암해수 숙성한 백년초 열매 추출물을 숙성 주기별 샘플을 채취하여 분석시료로 사용하였다.

여기에 사용된 컬럼(column)은 마이티실(Mightysil, 등록상표) RP 18GP 5㎛(4.6×250mm)이며, 이동상은 100% 아세토니트릴, 물(1% 인산)을 사용하였으며, 흡광도 200 내지 400nm(Waters 2996 PAD)에서 검출하였다. 이때 이동상의 유속(Flow rate)은 분당 1.0mL을 유지하였다.

시료분석은 30mg/mL의 농도로 시료를 메탄올에 희석시키고 이를 0.45㎛ 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 필터로 여과하여 고성능액체크로마토그래피에 주입하였으며, 이외 고성능액체크로마토그래피의 조건은 아래와 같다.

1. 표준물질

쿼세틴 : 12.5, 25, 50, 100ppm(sigma 제품)

3-O-메틸쿼세틴 : 12.5, 25, 50, 100ppm(sigma 제품)

캠페롤 : 12.5, 25, 50, 100ppm(sigma 제품)

이소람네틴 : 12.5, 25, 50, 100ppm(sigma 제품)

2. 플라보노이드의 분석

플라보노이드 분석을 수행하기 위해, 문헌[Park et al. J Korean Soc Food Sci Nutr, dentification of Flavonoids from Extracts of Opuntia ficus-indica var. saboten and Content Determination of Marker Components Using HPLC-PDA, 2017, 46(2), 210219]의 방법에 따라 분석을 진행하였으며, 그 결과를 아래의 [표 2]와 [도 1]내지 [도 2]에 나타내었다.

HPLC 분석결과, 기존 백년초 열매추출물보다 용암해수 숙성한 백년초 열매 추출물의 플라보노이드의 함량이 크게 증가하였으며, 특히 7일 숙성시 플라보노이드의 함량이 크게 증가하였다.

<실험예 2> 용암해수 숙성 백년초 열매 추출물의 피부 관련 활성 실험

1. 실험 방법

1.1 세포 배양

Human Keratinocyte인 HaCaT과 Mouse macrophage cell인 Raw 264.7을 배양접시의 바닥에 접종한 후, 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지를 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기내에서 배양하였다.

1.2 세포독성(Cell toxicity) 실험

96 well plate에 Human Keratinocyte인 HaCaT을 1.5 × 10⁴cells/well, Mouse macrophage cell인 Raw 264.7을 6 × 10⁴cells/well씩 분주한 후, 24시간 동안 세포가 plate에 잘 붙도록 37℃, 5% CO₂ 세포 배양기에 배양하였다.

24시간 후, HaCaT, Raw264.7을 FBS를 포함하지 않은 DMEM배지(serum free 배지)를 사용하여 기아상태로 만들어 준 후, 다음 날 시료를 농도별로 처리하여 배양하였다. 세포에 WST-1 solution(DoGen, EZ-3000)을 처리하여 반응시키고, ELISA reader(Thermo, 51119300)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

1.3 NO(Nitric oxide) 정량

염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하지만, 특히 대식세포(Macrophage)는 화학적 자극 등에 의하여 산화질소(NO)와 여러 염증성 사이토카인을 생성하여 염증반응에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있다(Ito T., et al., Curr Drug Traget Inflamm Allergy, 2(3):257-265, 2003). NO는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증 반응을 유발한다고 알려져 있어(Gupta SC et al., Exp Biol Med., 236:658-671, 2011; Riehemann et al., FEBS Lett., 442:89-94, 1999;Stamleret al., Science, 258:1898-1902, 1992), NO 정량 실험을 수행하였다.

96 well plate에 Raw264.7을 6 × 10⁴cells/well씩 분주한 후, 상기 세포 배양조건에서 24시간 배양하였다. Raw264.7을 FBS를 포함하지 않은 배지(serum free 배지)를 사용하여 기아상태로 만들어 준 후, 다음 날 LPS(㎍/mL)와 함께 일정농도의 시료를 처리하여 배양하였다. 세포 배양액과 Griess reagent를 1:1로 반응시킨 후, ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정하였다. NO의 농도는 Sodium nitrite의 표준곡선을 이용하여 결정하였고, 결과를 시료 무처리군(대조군) 대비 백분율로 나타내었다.

1.4 TARC 정량

시험관내 실험에서 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포에 INF-γ나 TNF-α를 처리하였을 때 MDC(macrophage-derived chemokine) 및 TARC(Thymus & activation-regulated chemokine)가 다량 발현되는데 이러한 발현을 억제할 수 있는 물질은 아토피 피부염 치료제로 사용될 수 있음이 제안되어 있어(Int Immunol., 14(7):767-773, 2002), TARC를 정량 실험을 수행하였다.

96 well plate에 HaCaT을 1.5 × 10⁴cells/well씩 분주한 후, 상기 세포 배양조건에서 24시간 배양하였다. HaCaT을 FBS를 포함하지 않은 배지(serum free 배지)를 사용하여 기아상태로 만들어 준 후, 다음 날 IFN-γ와 TNF-α를 혼합하여 자극제로 사용하였으며 일정농도의 시료와 함께 처리하여 배양하였다. TARC ELISA kit(R&D System, DY364)를 이용하여 실험 후, ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과를 시료 무처리군(대조군) 대비 백분율로 나타내었다.

1.5 CE(Cornified envelope) assay

각질형성 세포는 분화과정을 통해 각질 세포막(cornified envelope)을 형성하고, 이 막은 지질 성분과 결합함으로써 물리적인 피부 장벽을 구성하여 외부 환경으로부터 신체를 보호하게 된다. 각질형성 세포의 증식과 분화를 조절하여 항상성을 유지하는 대표적인 인자인 칼슘을 양성대조군으로 사용하여 피부 장벽강화 효능을 확인하고자 CE assay를 수행하였다.

96 well plate에 HaCaT을 2.5 × 10⁵ells/well씩 분주한 후, 상기 세포 배양조건에서 24시간 배양하였다. HaCaT을 calcium이 포함되지 않은 DMEM배지를 사용하여 배양 후, 일정농도의 시료를 처리하여 7일간 배양하였다. 이 때 배지는 2일에 한 번씩 교체해주었다. 7일 배양 후, 세포를 회수하기위해 PBS로 세척하고 2% sodium dodecyl sulphate (SDS), 20 mM dithiothreitol (DTT)가 포함된 buffer을 처리해주었다. 100℃에서 5분간 끓인 후, ELISA reader로 340nm에서 흡광도를 측정하였다.

1.6 Weatern blot

96 well plate에 HaCaT을 2.5 × 10⁵ells/well씩 분주한 후, 상기 세포 배양조건에서 24시간 배양하였다. HaCaT을 calcium과 FBS가 포함되지 않은 배지를 사용하여 배양 후, 일정농도의 시료를 처리하여 배양하였다.

세포를 회수하기위해 PBS로 세척하고 RIPA buffer를 사용하여 세포를 용해시킨 후, 15000rpm에서 30분간 원심분리를 하여 세포 용해액을 얻었다. 단백질 정량을 통해 얻은 일정량의 단백질과 4× sample buffer를 혼합한 후, 100℃에서 5분간 가열하였다. Bis-Tris Plus Gel gel(invitrogen, NW04122BOX)에서 전기영동을 하여 단백질을 분리킨 후, 분리된 단백질을 nitrocellulose membrane (invitrogen, IB23002)에 전이시켰다.

Membrane을 blocking buffer (5% fat-free dried milk powder in TBST)를 사용하여 4℃에서 16시간 blocking을 하였다. 일차 항체로 human PPAR-α(Santa Cruz)를 blocking buffer에 희석하여 상온에서 3시간 반응시켜 준 후, peroxidase에 결합된 이차 항체를 상온에서 1시간 반응시켰다. Enhanced chemiluminescence 기기를 사용하여 분석하였다.

1.7 HA(Hyaluronic acid) 정량

96 well plate에 HaCaT을 1.5 × 10⁴cells/well씩 분주한 후, 상기 세포 배양조건에서 24시간 배양하였다. HaCaT을 FBS를 포함하지 않은 배지(serum free 배지)를 사용하여 기아상태로 만들어 준 후, 다음 날 일정농도의 시료를 처리하여 배양하였다. Hyaluronic acid (R&D System, DY3614) ELISA kit를 이용하여 실험 후, ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과를 시료 무처리군(대조군) 대비 백분율로 나타내었다.

1.8 단백질 정량

단백질 정량은 세포 내에 포함된 단백질의 양을 측정하는 것으로, 배지를 회수하고 PBS로 세척 후, 1N NaOH를 처리하여 세포를 용해시켜주었다. 단백질 정량법 중 하나인 Lowry assay를 하였으며, Bio-Rad의 DC Protein Assay(500-0116) 제품을 사용하였다.

Reagent A: Reagent S = 50 : 1로 하여 반응시켜준 후, Reagent B를 처리하여 상온에서 20분간 반응시켜주었다. ELISA reader로 750nm에서 흡광도를 측정하여 단백질 양을 확인하였다. 단백질의 양은 소혈청알부민 (Bovine serum albumin)으로부터 얻은 표준곡선을 이용하여 결정하였다.

2. 실험 결과

2.1 세포독성

각 추출물을 Dimethyl sulfoxide(DMSO)에 용해시킨 후, 최고농도를 800㎍/ml로 하여 HaCaT과 Raw 264.7세포에서 세포독성 시험을 진행하였다. 그 결과를 아래의 [표 3]과 [도 3]에 나타냈었다. 세포 독성 시험결과를 바탕으로 세포독성이 없는 농도에서 시료를 처리하여 효능 시험을 진행하였다.

2.2 NO 정량

NO 측정 결과를 아래의 [표 4]와 [도 4]에 나타내었다. 시료 무처리군 대비 LPS 처리군은 NO 생성량이 57.52% 증가하였으며, 용암해수로 숙성한 백년초 열매 추출물이 숙성을 하지 않은 백년초 열매 추출물보다 NO 생성 억제 효과가 더 우수한 것을 확인할 수 있었다. 이 때 숙성 추출물은 400㎍/mL에서 숙성하지 아니한 백년초 열매 추출물과 비교하여 29.41% 더 높은 NO 생성 억제량을 나타내었다.

2.3 TARC 정량

TARC 정량 결과를 아래의 [표 5]와 [도 5]에 나타내었다. 시료 무처리군 대비 TNF-α와 IFN-γ 처리군은 TARC 생성량이 173.00% 증가하였으며, 용암해수로 숙성한 백년초 열매 추출물은 숙성을 하지 않은 일반 백년초 열매 추출물보다 TARC 생성 억제 효과가 더 우수한 것을 확인할 수 있었다. 이 때 숙성 추출물은 400㎍/mL에서 숙성 전과 비교하여 119.12% 더 높은 TARC 생성 억제량을 나타내었다.

2.4 CE 정량

CE 정량 결과를 아래의 [표 6]과 [도 6]에 나타내었다. 숙성을 하지 않은 일반 백년초 열매추출물은 각질형성세포의 분화(Differentiation) 촉진 효과를 확인할 수 없는데 반해, 용암해수로 숙성한 백년초 열매 추출물은 농도의존적으로 각질형성세포의 분화를 촉진하는 것을 확인할 수 있었으며 이를 통해 피부장벽 강화효과를 간접적으로 확인할 수 있었다. 이 때 숙성 추출물은 400㎍/mL에서 숙성 전과 비교하여 27.15% 더 높은 CE 생성량을 나타내었다.

2.5 PPAR 정량

PPAR 발현량 결과를 아래의 [표 7]과 [도 7]에 나타내었다. 용암해수로 숙성한 백년초 열매 추출물의 400㎍/ml의 농도에서 PPARα 발현량이 증가하는 것을 확인하였다. 이 때 숙성 추출물은 400㎍/mL에서 숙성 전과 비교하여 62.5% 더 높은 PPAR 발현량을 나타내었다.

2.6 HA 정량

HA 정량 결과를 아래의 [표 8]과 [도 8]에 나타내었다. 숙성을 하지 않은 일반 백년초 열매추출물은 HA 생성 촉진 효과를 확인할 수 없는데 반해, 용암해수로 숙성한 백년초 열매 추출물은 농도의존적으로 HA 생성 촉진 효과가 있는 것을 확인하였다. 이때 숙성 백년초 열매 추출물은 400㎍/mL에서 숙성 전과 비교하여 240.63% 더 높은 HA 생성 증가량을 나타내었다.

Claims (12)

1. 삭제
2. 삭제
3. 용암해수에 백년초 열매 분말을 침지시키는 단계, 및 침지 후 7일 내지 14일 동안 4℃ 내지 15℃의 온도 범위에서 방치하여 숙성하는 단계를 포함하는, 백년초 분말의 플라보노이드 함량을 증가시키는 방법으로서,
   상기 용암해수는 원수, 부유물질을 제거한 정제 원수, 또는 용암해수 원수의 담수화시 부산물로 발생하는 염분과 미네랄 함유하는 용암해수이고,
   상기 플라보노이드는 쿼세틴, 3-O-메틸쿼세틴, 캠페롤 및 이소람네틴 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
   
4. 용암해수에 백년초 열매 분말을 침지시키는 단계, 및 침지 후 7일 내지 14일 동안 4℃ 내지 15℃의 온도 범위에서 방치하여 숙성하는 단계를 포함하는, 백년초 분말의 항염 활성 증가시키는 방법으로서,
   상기 용암해수는 원수, 부유물질을 제거한 정제 원수, 또는 용암해수 원수의 담수화시 부산물로 발생하는 염분과 미네랄 함유하는 용암해수인 것을 특징으로 하는 방법.
   
5. 용암해수 숙성 백년초 분말의 물과 에탄올 혼합용매 추출물을 유효성분으로 포함하되,
   상기 용암해수 숙성 백년초 분말은 (a) 용암해수에 백년초 열매 분말을 침지시키는 단계, (b) 침지 후 7일 내지 14일 동안 4℃ 내지 15℃의 온도 범위에서 방치하여 숙성하는 단계, 및 (c) 숙성 후 염분을 제거하여 용암해수 숙성 백년초 분말을 회수하는 단계를 거쳐 얻어지는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 조성물.
   
6. 제5항에 있어서,
   상기 혼합용매는 70% 에탄올인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
7. 제5항에 있어서,
   상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
8. 제5항에 있어서,
   상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
9. 용암해수 숙성 백년초 분말의 물과 에탄올 혼합용매 추출물을 유효성분으로 포함하되,
   상기 용암해수 숙성 백년초 분말은 (a) 용암해수에 백년초 열매 분말을 침지시키는 단계, (b) 침지 후 7일 내지 14일 동안 4℃ 내지 15℃의 온도 범위에서 방치하여 숙성하는 단계, 및 (c) 숙성 후 염분을 제거하여 용암해수 숙성 백년초 분말을 회수하는 단계를 거쳐 얻어지는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선용 조성물.
   
10. 제9항에 있어서,
    상기 혼합용매는 70% 에탄올인 것을 특징으로 하는 조성물.
    
11. 제9항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
    
12. 제9항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
    
    
    

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