KR102405455B1 - 우산이끼 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 - Google Patents
우산이끼 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 우산이끼 분획물, 특히 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 우산이끼 메탄올 추출물 또는 이의 분획물의 LPS에 의해 증가된 NO 생성 억제효과를 HaCaT 세포에서 확인한 결과, 우산이끼 메탄올 추출물, 우산이끼 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물은 LPS에 의해 증가된 NO 생성을 효과적으로 억제하며, HaCaT 세포에 대한 독성이 거의 없는 것을 확인하였다. 특히 우산이끼 메탄올 추출물에 비해 우산이끼 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물의 NO 생성 억제 효과가 현저하였으므로, 우산이끼 분획물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 항염증용 건강기능식품; 항염증용 화장품; 또는 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 의약품의 소재로 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 우산이끼 분획물, 특히 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증(inflammation)은 유해한 자극 즉, 물리적인 상처나 미생물에 감염되었을 때 일어나는 정상적인 생체반응이고, 생체 내 방어기전(defense mechanism)의 일종으로 면역세포, 혈관, 염증 매개체들이 관여하는 보호 반응이다. 이와 같은 염증반응의 목적은 세포의 손상을 초기 단계에서 억제하고 발병요인(pathogen)을 중화시키거나 제거함과 동시에, 손상된 조직을 재생시켜 정상적인 구조와 기능을 하도록 만든다. 그러나 염증을 동반하는 대부분의 질환은 열감, 붓기, 통증 및 가려움증 등과 같은 증상을 유발하여 삶의 질을 떨어뜨릴 수 있다. 또한, 감염, 물리화학적 손상 등에 의해 발생하는 급성염증 외에도 관절염, 천식, 자가면역질환, 심장질환 등을 비롯한 스트레스, 흡연, 음주 등의 생활습관으로 인하여 만성염증 상태가 지속될 수 있다.
급성 염증의 경우에는 주로 대식세포, 수지상 세포, 조직구, 쿠퍼세포 등의 면역세포가 자극을 인식함에 따라 면역 시스템이 활성화된다. 자극을 받은 세포들의 표면에는 병원체연관분자유형(PAMPs), 손상연관분자유형(DAMPs)이 있는데 조직이 손상을 받으면 이와 같은 분자를 상기 면역세포가 인식하면서 NF-κB 등의 전사인자를 통한 신호전달경로가 시작된다. 그 결과 종양괴사인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨-6(interleukin-6, IL-6), 인터루킨-1(interleukin-1, IL-1), 인터루킨-8(interleukin-8, IL-8) 등 전염증성(pro-inflammatory) 사이토카인(cytokine)이 분비되고 이어 염증 증상을 유발하는 염증전달물질들의 분비가 이루어진다. 특히, 대식세포에 의해 산화질소(nitric oxide, NO) 및 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, PGE2)와 같은 염증인자가 만들어지는데 염증반응이 과도하게 일어나는 경우에는 이와 같은 기전에 의해 많은 양의 iNOS가 세포들에서 생성되고 이어 NO가 많아진다. 이와 같이 NO가 과도하게 만들어지는 경우에는 DNA 구조 손상, 신경 손상, 부종 또는 상피세포암 등의 문제를 유발할 수 있다.
또한, 염증 반응이 있는 경우에는 염증 관련 인자와 함께 자유라디칼(free radical)이 생성되는데, 일반적으로는 세포의 분화, 성장, 생존 등의 항상성 유지에 관여하지만, 자유라디칼 중 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 호흡과 면역반응에 의해 산소의 산화와 환원 과정을 거쳐 지속적으로 생성되면서 그 반응성으로 인해 몸에 유해한 작용을 할 수 있기 때문에 체내 항산화 과정을 거쳐 그 제거가 이루어지도록 한다. 그러나 이러한 생성과 제거의 균형이 무너지면 산화적 스트레스가 발생하면서 염증, 노화, 조직손상, 암 등의 문제가 발생할 수 있다.
상기와 같은 이유로 인해, 염증의 긍정적인 작용에도 불구하고 경우에 따라 항염증 작용을 하는 약물이 필요한데, 대부분의 염증 치료제는 합성물이므로, 보다 인체에 안전한 천연물을 이용하여 염증을 치료하고자 하는 노력이 요구되고 있다.
우산이끼(Marchantia polymorpha)는 우산이끼목 우산이끼과의 선태식물로, 전체적으로 잎처럼 넓은 엽상체와 헛뿌리로 이루어져 있다. 엽상체 너비는 7~20mm이고 짙은 녹색이며 2개씩 갈라진다. 또한, 표면에는 육각형의 구획이 생기고 각 중앙에 작은 구멍이 있다. 구멍은 기공구이며, 4개의 공변세포가 있다. 엽상체의 복면에는 털 같은 헛뿌리가 있으나 수분흡수와는 관계가 없다.
항염증 작용을 하는 천연물과 관련한 선행기술로는 한국등록특허 제1694662호에 항염증 효과가 있는 별꽃이끼 초음파 추출물 제조방법이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1093015호에 솔이끼 추출물 또는 분획물을 포함하는 항염 또는 항암 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 우산이끼 분획물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관하여 개시된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 본 발명은 우산이끼 분획물, 특히 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물을 제공하고, 상기 우산이끼 분획물이 우산이끼 메탄올 추출물에 비해 항염증 효과가 현저하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 우산이끼 분획물, 특히 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, HaCaT 세포에서 LPS에 의해 증가된 NO 생성 억제효과를 확인한 결과, 우산이끼 메탄올 추출물, 우산이끼 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물은 LPS에 의해 증가된 NO 생성을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. 특히 우산이끼 메탄올 추출물에 비해 우산이끼 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물의 NO 생성 억제 효과가 현저하였다.
도 1은 HaCaT 세포(인간 표피 섬유아세포)에서 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH), 메탄올 추출물의 헥산(Hex), 디클로로메탄(CH2Cl3), 에틸아세테이트(EA), 부탄올(BuOH) 및 물(DW) 분획물의 세포 독성을 확인한 결과이다. 도면 내 붉은 선은 세포 독성을 나타내는 기준(0.7)으로, 세포 생존율이 무처리 대조군(CON) 값 1을 기준으로 0.7 미만이면 처리된 시료는 세포 독성을 가진다는 것을 의미한다.
도 2는 HaCaT 세포에서 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH), 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 및 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올(BuOH) 분획물의 NO(nitric oxide) 생성 억제효과를 확인한 결과이다. LPS(Lipopolysaccharidelps)는 NO 생성 유도물질이다. 0은 우산이끼 추출물 또는 분획물을 대신하여 1%(v/v) 메탄올을 처리한 군이다. ###은 LPS를 처리하지 않은 대조군(0) 대비 LPS 단독 처리군(0+LPS)의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. ***은 LPS 단독 처리군(0+LPS) 대비 LPS 및 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH); LPS 및 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물; 및 LPS 및 부탄올(BuOH) 분획물 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 3은 HaCaT 세포에서 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물 처리에 의한 염증 관련 표지자(IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2)의 mRNA 생성 억제 효과를 확인한 결과이다. LPS를 처리하여 염증 관련 표지자의 발현을 유도하였다. 0은 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물을 대신하여 1%(v/v) 메탄올을 처리한 군이다. ###은 LPS를 처리하지 않은 대조군(0) 대비 LPS 단독 처리군(0+LPS)의 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2 mRNA 발현이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. * 및 ***은 LPS 단독 처리군(0) 대비 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물 처리군의 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2 mRNA 발현이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05이고, ***은 p<0.001이다.
도 2는 HaCaT 세포에서 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH), 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 및 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올(BuOH) 분획물의 NO(nitric oxide) 생성 억제효과를 확인한 결과이다. LPS(Lipopolysaccharidelps)는 NO 생성 유도물질이다. 0은 우산이끼 추출물 또는 분획물을 대신하여 1%(v/v) 메탄올을 처리한 군이다. ###은 LPS를 처리하지 않은 대조군(0) 대비 LPS 단독 처리군(0+LPS)의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. ***은 LPS 단독 처리군(0+LPS) 대비 LPS 및 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH); LPS 및 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물; 및 LPS 및 부탄올(BuOH) 분획물 처리군의 NO 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 3은 HaCaT 세포에서 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물 처리에 의한 염증 관련 표지자(IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2)의 mRNA 생성 억제 효과를 확인한 결과이다. LPS를 처리하여 염증 관련 표지자의 발현을 유도하였다. 0은 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물을 대신하여 1%(v/v) 메탄올을 처리한 군이다. ###은 LPS를 처리하지 않은 대조군(0) 대비 LPS 단독 처리군(0+LPS)의 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2 mRNA 발현이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. * 및 ***은 LPS 단독 처리군(0) 대비 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트(EA) 분획물 처리군의 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2 mRNA 발현이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, *은 p<0.05이고, ***은 p<0.001이다.
본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 분획물은 우산이끼 추출물의 분획물일 수 있고, 상기 우산이끼 추출물의 추출 용매는 C1~C4의 저급 알코올, 물 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올을 추출 용매로 사용한 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 농도는 50~100㎍/mL이고, 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올 분획물의 농도는 80~120㎍/mL일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 우산이끼 에틸아세테이트 분획물은
1) 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물에 헥산(hexane)을 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있고,
바람직하게는
1) 우산이끼 시료 100g에 대하여, 메탄올 1.5~2.5L를 첨가한 다음 80~120rpm의 속도로 18~30시간 동안 추출하는 과정을 1~3회 반복한 후, 불순물을 제거한 다음 농축한 뒤 물을 첨가하여 용해한 다음 동결건조한, 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물 10g에 헥산(hexane) 80~120mL를 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 80~120mL의 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 80~120mL의 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있으며,
더 바람직하게는
1) 우산이끼 시료 100g에 대하여, 메탄올 2L를 첨가한 다음 100rpm의 속도로 24시간 동안 추출하는 과정을 2회 반복한 후, 불순물을 제거한 다음 농축한 뒤 물을 첨가하여 용해한 다음 동결건조한, 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물 10g에 헥산(hexane) 100mL를 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 100mL의 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 100mL의 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 우산이끼 부탄올 분획물은
1) 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물에 헥산(hexane)을 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계;
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 분리하는 단계; 및
4) 상기 단계 3) 이후 남은 시료에 부탄올을 첨가한 후 부탄올 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있고,
바람직하게는
1) 우산이끼 시료 100g에 대하여, 메탄올 1.5~2.5L를 첨가한 다음 80~120rpm의 속도로 18~30시간 동안 추출하는 과정을 1~3회 반복한 후, 불순물을 제거한 다음 농축한 뒤 물을 첨가하여 용해한 다음 동결건조한, 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물 10g에 헥산(hexane) 80~120mL를 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 80~120mL의 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계;
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 80~120mL의 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 분리하는 단계; 및
4) 상기 단계 3) 이후 남은 시료에 80~120mL의 부탄올을 첨가한 후 부탄올 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있으며,
더 바람직하게는
1) 우산이끼 시료 100g에 대하여, 메탄올 2L를 첨가한 다음 100rpm의 속도로 24시간 동안 추출하는 과정을 2회 반복한 후, 불순물을 제거한 다음 농축한 뒤 물을 첨가하여 용해한 다음 동결건조한, 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물 10g에 헥산(hexane) 100mL를 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 100mL의 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계;
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 100mL의 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 분리하는 단계; 및
4) 상기 단계 3) 이후 남은 시료에 100mL의 부탄올을 첨가한 후 부탄올 분획물을 획득하는 단계를 통해 추출된 것일 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 우산이끼 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 용어 염증성 질환이란 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 요도염, 방광염, 화상 염증, 피부염, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경 염증 중에서 선택된 하나 이상인 것을 의미하지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 농도는 치료 목적, 환자의 상태, 필요기간 등을 고려하여 결정할 수 있으며, 특정 범위의 농도로 한정되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 주사제, 크림, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 우산이끼 추출물의 제조
우산이끼 시료 100g에 대하여, 2L의 메탄올을 첨가한 다음 100rpm의 속도로 24시간 동안 추출하는 과정을 2회 반복하였다. 그 후, 추출된 용액을 두겹의 종이 여과지(Whatman #2)에 투과시켜 불순물을 모두 제거한 다음 회전감압농축기(EYELA, NE-1101)를 이용하여 농축하였다. 상기 메탄올이 제거된 농축물은 증류수를 첨가하여 용해시킨 다음 동결건조기(ILSHIN LAB FD5505)를 이용하여 완전 건조한 뒤, 4℃ 암조건에서 보관하였다.
제조예 2. 우산이끼 분획물의 제조
상기 제조예 1의 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물 10g에 각각 100mL의 헥산(hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 부탄올(butanol) 및 증류수(distilled water)를 이용하여 순차 분획하였다. 상기 획득된 각각의 분획층은 농축한 후 증류수를 첨가하여 용해한 뒤 동결건조기를 이용하여 동결건조하였다. 동결건조된 우산이끼 분획물은 1%(v/v) 메탄올에 희석하여 세포 독성 및 항염증 활성을 확인하기 위한 실험의 시료로 사용하였다.
실시예 1. 세포 생존율(cell viability) 분석
우산이끼 추출물 및 이의 분획물에 대한 세포 독성 실험을 진행하였다. 세포 독성 실험에 사용된 세포는 인간 표피 섬유아세포(HaCaT cells)이며, 100unit/mL의 페니실린-스트렙토마이신(penicililin-streptomycin, P/S) 및 10%(v/v)의 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)을 혼합한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 37℃의 온도 및 5% CO2 조건 하에 배양되었다.
세포 독성은 MTT(3-(4,5-dimeth-ylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 정량분석을 통하여 확인하였다. 100㎍/mL의 우산이끼 추출물 또는 이의 분획물을 세포에 처리한 후 24시간 동안 배양한 다음, MTT 용액을 처리하고 37℃ 온도 하에 4시간 동안 반응시켜, 보라색 포마잔(formazan)이 세포 내에 생기는 것을 확인하였다. 그 후, 각 웰(well)에 있는 용액을 완전히 제거하고 보라색 포마잔 결정체를 DMSO(dimethyl sulfoxide) 및 이소프로필 알코올(isopropyl alcohol)이 1:1(v/v)로 혼합된 용액(100㎕/well)에 용해시키고, 540nm에서 용해물의 흡광도를 측정하였으며, 1%(v/v) 메탄올을 처치한 군(CON)의 생존율 100%를 기준으로 우산이끼 추출물 및 이의 분획물 처리군의 상대적 세포 생존율을 계산하였다.
그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH), 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EA) 및 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올 분획물(BuOH)에서는 세포 독성이 거의 나타나지 않았으나, 우산이끼 메탄올 추출물의 헥산(Hex), 디클로로메탄(CH2Cl3) 및 물(DW) 분획물에서는 비교적 세포 독성이 강하게 나타났다. 따라서 우산이끼 메탄올 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물에 대해서만 항염 효과를 확인하는 실험을 진행하였다.
실시예 2. NO(nitric oxide) 생성 억제효과
항염 효과를 검증하기 위해 HaCaT 세포에 30, 50, 100㎍/mL의 우산이끼 메탄올 추출물(MeOH), 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EA) 또는 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올 분획물(BuOH)을 처리하고 1시간 후 1㎍/mL의 LPS(lipopolysaccharide)를 처리한 다음 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양 배지에 있는 아질산염 축적 정도를 그리스 시약(griess reagent)을 이용해 측정하였다. 배양액의 상등액(100㎕)을 그리스 시약(100㎕)과 10분 동안 혼합한 후 540nm에서 흡광도를 측정하였고, 배지 내에 있는 아질산염의 양은 아질산나트륨(sodium nitrite, NaNO2) 표준 그래프를 참조하여 결정하였다.
그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 본 발명의 우산이끼 추출물 및 분획물들은 LPS 처리에 의해 증가된 NO의 생성을 농도 의존적으로 억제하는 효과가 있었으며, 우산이끼 메탄올 추출물 대비 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 또는 부탄올 분획물의 NO 생성 억제효과가 현저하였다. 특히 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물은 저농도에서도 NO의 생성을 억제하는 효과가 우산이끼 메탄올 추출물 또는 우산이끼 메탄올 추출물의 부탄올 분획물에 비해 현저하였다.
실시예 3. 염증 표지자 생성 억제효과
NO 생성 억제효과가 우수한 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 염증 표지자 생성 억제효과를 확인하기 위해 역전사중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerase chain reaction)을 실시하였다.
HaCaT 세포에 12.5, 25 또는 50㎍/mL의 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 처리하고 1시간 후 1㎍/mL의 LPS(lipopolysaccharide)를 처리한 다음 24시간 동안 배양하였다. 그 후 RT-PCR을 통해 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 mRNA 발현을 확인하였다.
전체 RNA(1㎍)를 HaCaT 세포에서 추출(RNAiso PLUS 이용)한 다음, 역전사 반응으로 cDNA를 합성하고(All-in-One first-Strand cDNA Synthesis SuperMix 이용), 합성된 cDNA를 qRT-PCR에 대한 주형으로 사용하여 RT-PCR을 진행하였다(QuantStudio 3 이용).
IL-6, IL-1β, iNOS, COX-2, β-actin에 대한 해리곡선분석(dissociation curve analysis)을 시행한 결과, 단일 피크를 확인하였으며, 각 목표 유전자에 대한 발현량은 중복 측정하여 정량화한 후 β-actin에 대하여 2ΔΔCT 방법을 이용해 보정하였다.
그 결과, 도 3에 개시된 바와 같이 우산이끼 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 처리한 군에서 IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 발현이 감소한 것을 확인하였다.
Claims (12)
1) 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물에 헥산(hexane)을 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 획득한 우산이끼(Marchantia polymorpha) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물로서,
상기 분획물은 NO 생성을 억제하고, IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 발현을 감소시키고, 상기 분획물의 농도는 50㎍/mL인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 획득한 우산이끼(Marchantia polymorpha) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 건강기능식품 조성물로서,
상기 분획물은 NO 생성을 억제하고, IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 발현을 감소시키고, 상기 분획물의 농도는 50㎍/mL인 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 항염증용 건강기능식품 조성물.
1) 우산이끼 메탄올 추출물의 동결건조물에 헥산(hexane)을 첨가한 후 헥산 분획물을 분리하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 획득한 우산이끼(Marchantia polymorpha) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물로서,
상기 분획물은 NO 생성을 억제하고, IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 발현을 감소시키고, 상기 분획물의 농도는 50㎍/mL인 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물.
2) 상기 단계 1) 이후 남은 시료에 디클로로메탄(dichloromethane)을 첨가한 후 디클로로메탄 분획물을 분리하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후 남은 시료에 에틸아세테이트를 첨가한 후 에틸아세테이트 분획물을 획득하는 단계를 통해 획득한 우산이끼(Marchantia polymorpha) 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 화장료 조성물로서,
상기 분획물은 NO 생성을 억제하고, IL-6, IL-1β, iNOS 및 COX-2의 발현을 감소시키고, 상기 분획물의 농도는 50㎍/mL인 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물.
제8항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 항염증용 화장료 조성물.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020210054007A KR102405455B1 (ko) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 우산이끼 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
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| KR1020210054007A KR102405455B1 (ko) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 우산이끼 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
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| KR102405455B1 true KR102405455B1 (ko) | 2022-06-08 |
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ID=81981683
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| KR1020210054007A KR102405455B1 (ko) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 우산이끼 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 |
Country Status (1)
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|---|---|
| KR (1) | KR102405455B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2817262C1 (ru) * | 2022-12-12 | 2024-04-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Иркутский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ИГУ") | Способ получения смеси биогенных аминов дофамина, тирамина и триптамина |
-
2021
- 2021-04-27 KR KR1020210054007A patent/KR102405455B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Rana et al., IN-VITRO ANTI-INFLAMMATORY AND ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ETHANOLIC EXTRACT OF MARCHANTIA POLYMORPHA IN KUMAUN REGION. World Journal of Pharmaceutical Research. 2018, Vol. 7, Issue 9, pp. 864-875 1부.* * |
| Tosun et al., Phytochemical investigations and bioactivity evaluation of liverworts as a function of anti-inflammatory and antinociceptive properties in animal models. Pharmaceutical Biology. Early Online: 1-6, DOI: 10.3109/13880209.2013.774028(2013) 1부.* * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2817262C1 (ru) * | 2022-12-12 | 2024-04-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Иркутский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ИГУ") | Способ получения смеси биогенных аминов дофамина, тирамина и триптамина |
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