KR102393038B1 - OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도 - Google Patents

OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102393038B1
KR102393038B1 KR1020207035357A KR20207035357A KR102393038B1 KR 102393038 B1 KR102393038 B1 KR 102393038B1 KR 1020207035357 A KR1020207035357 A KR 1020207035357A KR 20207035357 A KR20207035357 A KR 20207035357A KR 102393038 B1 KR102393038 B1 KR 102393038B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ospa
disulfide bond
seq
bond type
borrelia
Prior art date
Application number
KR1020207035357A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20200141096A (ko
Inventor
패어 콤스텟트
얼반 룬드버그
안드레아스 마인케
마르쿠스 한너
볼프강 쉴러
벤자민 와이젤
크리스토프 라이니쉬
브리기테 그로만
로버트 쉬레글
Original Assignee
발네바 오스트리아 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 발네바 오스트리아 게엠베하 filed Critical 발네바 오스트리아 게엠베하
Publication of KR20200141096A publication Critical patent/KR20200141096A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102393038B1 publication Critical patent/KR102393038B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/20—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0225—Spirochetes, e.g. Treponema, Leptospira, Borrelia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
    • C07K16/1207—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

본 발명은 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산, 상기 폴리펩타이드 및/또는 핵산을 포함하는 약제학적 조성물(특히 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법에서 약제로서의 용도를 위한), 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법 및 대상체의 면역화 방법에 관한 것이다.

Description

OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도{MUTANT FRAGMENTS OF OspA AND METHODS AND USES RELATING THERETO}
본 발명은 보렐리아 감염의 예방 및 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산, 상기 폴리펩타이드 및/또는 상기 핵산을 포함하는 약제학적 조성물(특히 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법에서 약제로서의 용도를 위한), 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법 및 대상체의 면역화 방법에 관한 것이다.
라임 보렐리아증, 또는 라임병은 유럽 및 북아메리카에서 가장 일반적으로 보고되는 진드기 매개 질환이다. 이 질환은 절지동물 매개 그람-음성-유사 스피로케테인 보렐리아 부르그도르페리 센수 라토(B. burgdorferi s.l.)에 의해 야기되며, 다중 기관 또는 조직이 관여되어 피부, 심장, 근골격 및 신경학적 장애를 일으킬 수 있는 감염이다. 대부분의 국가에서 라임 보렐리아증은 신고대상 질환이 아니며, 연간 발생률에 대해 이용 가능한 정확한 데이터가 없다. 미국에서 원인 인자는 B. 부르그도르페리 센수 스트릭토(B. burgdorferi s.s.)이며, 라임 보렐리아증은 북동부, 대서양 중부 및 위쪽 북중부 주들에 편재되어 있다. 2010년에는 US에 대해 총 30,000여 건의 라임 보렐리아증이 질병 통제 및 예방 센터(CDC)에 보고되었다. 유럽에서는 B. 아프젤리이 및 B. 가리니이뿐만 아니라 B. 부르그도르페리 s.s. 및 B. 바바리엔시스가 라임 보렐리아증의 주요 원인 인자로, 후자는 지리적 위치에 따라 더 적게 기여한다. 라임 보렐리아증의 유행은 상이한 유럽 국가 별로 상당히 다르며, 서부에서 동부로 갈수록 전체적으로 유행이 증가된다. 상당수 유럽에서는 라임 보렐리아증의 보고 건수가 1990년대 초반 이래 증가되었으며(예를 들면, 체코 공화국, 에스토니아, 리투아니아; Lyme borreliosis in Europe, 2006년 WHO 보고서 참고), 사례의 지리적 분포도 확장되었다.
보렐리아는 스피로차에타세애 패밀리에 속하며, 이는 의학적으로 중요한 속인 트레포네마, 렙토스피라 및 보렐리아로 세분된다. B. 부르그도르페리 s.l.은 미세호기성 조건 하에 성장하는 약 10-20㎛ 길이 및 0.2-0.5㎛ 폭의 나선형 극운동성 그람-음성 박테리아이다. 스피로케테의 세포벽은 펩티도글리칸 및 몇 개의 편모에 의해, 그 다음은 느슨하게 연관된 외막에 의해 둘러싸인 세포질 막으로 이루어진다.
라임 보렐리아증은 일반적으로 차도 및 악화에 있어서 상이한 임상 징후를 특징으로 하는 단계로 일어난다. 단계 1의 초기 감염은 피부의 국재된 감염으로 이루어지며, 수 일 내지 수 주 내에 단계 2의 파종성 감염, 그리고 수 개월내지 수 년 후 단계 3의 지속적 감염이 뒤따른다. 그러나 감염은 가변적이다; 일부 환자는 국재된 피부 감염만을 갖는 반면, 다른 환자들은 병의 후기 징후, 예컨대 관절염만을 나타낸다. 라임 보렐리아증의 상이한 임상적 증상은 다양한 B. 부르그도르페리 s.l. 종의 감염에 의해서도 야기된다. B. 부르그도르페리 s.s.는 관절 징후(관절염) 및 심장 문제를 더 자주 일으키며, B. 아프젤리이는 주로 진피 증상(유주성 홍반; EM 및 말단피부염 만성 위축; ACA)을 일으키는 반면 B. 가리니이는 신경보렐리아증의 대부분의 사례에 연관된다.
국재된 감염 - 감염 단계 1의 가장 일반적인 증상은 유주성 홍반으로, 이는 감염자의 70-80%에서 발생한다. 상기 피부 병변에는 종종 독감-유사 증상, 예컨대 근육통, 관절통, 두통 및 열이 뒤따른다. 이들 비-특이적 증상은 유주성 홍반 환자의 50%에서 일어난다.
파종성 감염 - 단계 2 동안, 박테리아는 혈류 내에서 감염 부위로부터 원위 조직 및 기관으로 이동한다. 상기 단계에서 일어나는 신경학적, 심혈관 및 관절염 증상에는 수막염, 두개 신경병증 및 간헐적 염증성 관절염이 포함된다.
지속적 감염 - 감염 단계 3은 만성이며 진드기에 물린 뒤 수 개월 내지 수 년 후에 일어난다. 북아메리카에서 가장 일반적인 증상은 B. 부르그도르페리 감염으로 야기되는 류마티스성 관절염이다. B. 가리니이로 인한 중추신경계의 지속적 감염은 단계 3 동안 더 심각한 신경학적 증상을 일으키며, B. 아프젤리이로 인한 피부의 지속적 감염은 말단피부염 만성 위축으로 이어진다.
일부 위험군, 예컨대 농부, 임업 노동자, 도보여행자(hikers), 육상선수(runners) 또는 휴가자에서는 선호 성별 없이 15세 이하 소아 및 39 내지 59세 성인에서와 같이 유행혈청형 및 질환 발생률이 증가되었다. 라임 보렐리아증의 이러한 증가된 발생은 숲 거주지에서의 변화뿐만 아니라 사회적 요인에도 연결된다. 환경적인 변화, 예컨대 숲 붕괴는 설치류 포식자, 예컨대 여우 및 포식 조류의 급격한 감소로 이어져서 결국 마우스 모집단의 증가로, 진드기 모집단의 후속 증가로 이어졌다. 더욱 최근에는, 드물게 있는 재식림이 사슴의 수를, 이에 따라 진드기의 수를 증가시켰다. 교외의 군집 및 레크레이션, 예컨대 캠핑 및 하이킹을 위한 삼림 지역의 이용 증가는 인간이 더 많은 수의 진드기 보렐리아 벡터와 더 많이 접촉하게 만들었다. 이들 요인이 모두 함께 보렐리아의 더 넓은 분포와 라임 보렐리아증의 더 높은 발생에 기여하였다.
항미생물제는 보렐리아 감염을 치료하는 주요 방법이다. 사용되는 항생제는 질환 단계, 증상, 및 약물치료에 대한 환자의 알러지에 의존한다. 항생제 치료 과정의 길이도 질환 단계 및 증상의 중증도에 의존한다. 초기 라임 보렐리아증은 전형적으로 경구 테트라사이클린, 예컨대 독시사이클린, 및 세미-합성 페니실린, 예컨대 아목시실린 또는 페니실린 V로 치료된다. 관절염 및 신경학적 장애는 고-용량 정맥내 페니실린 G 또는 세프트리악손으로 치료된다. 최대 30%의 라임 보렐리아증 환자는 보렐리아 감염의 특징적인 초기 증상을 나타내지 않아 진단과 치료를 어렵게 만든다. 항생제 치료 과정은 길고(최대 수 개월) 때때로 비효과적일 수 있으므로, 특히 후기 단계 질환 동안 보렐리아 치료 분야에서 논쟁의 대상이 된다. 보렐리아의 효과적인 치료 사례에서도, 치료 후 라임병 증후군으로 불리는 쇠약하게 하는 피로, 통증, 또는 신경학적 증상이 수 년간 환자에게 남을 수 있다. 일반적으로 항생제 사용은 바람직하지 않은 결과, 예컨대 표적 미생물의 내성 개발로 이어질 수 있다. 마지막으로, 항생제 요법은 라임 보렐리아증을 효과적으로 근치할 수 있지만, 차후 감염에 대한 보호는 제공하지 않는다.
1가 혈청형 1-OspA-기반 백신(LYMErix™)은 보렐리아 부르그도르페리 s.s.에 의해 야기된 라임병의 예방을 위해 USA에서 승인되고 시판되었다. 그러나 유럽 및 다른 곳에서 상이한 혈청형에 걸친 OspA 서열의 이종성으로 인해 단일 혈청형의 OspA에만 기반한 백신을 이용해서는 효율적인 보호가 이루어지지 못한다.
모 폴리펩타이드의 항원 특성을 보유하면서도 하나의 OspA 혈청형으로부터의 근위부와 함께 또 하나의 OspA 혈청형으로부터의 원위부를 포함하는 키메라 OspA 분자가 라임병 또는 보렐리아증의 예방 및 치료에서 사용될 수 있다(WO2011/143617, WO2011/143623).
현재, 라임 보렐리아증에 대해 시판되는 예방적 약제는 존재하지 않으며, 따라서 당해분야에서 USA, 유럽 및 다른 곳에 존재하는 보렐리아에 대해 효과적인 보호를 제공할 수 있는 이러한 약제의 개발에 대한, 특히 몇몇 보렐리아 혈청형에 대해 동시에 효과적인 보호를 제공할 수 있는 약제의 개발에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 보렐리아 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드, 이를 인코딩하는 핵산, 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터, 및 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드의 제조 방법 및 상기 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 제조 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포, 상기 항체의 제조 방법, 상기 폴리펩타이드, 핵산 분자, 벡터 또는 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 상기 폴리펩타이드, 핵산 분자, 벡터 또는 항체의 약제 또는 약제학적 조성물(특히 백신으로 또는 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법에서의 사용을 위한)의 제조를 위한 용도, 감염 진단 방법 및 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법 그리고 대상체의 면역화 방법을 제공한다.
라임 보렐리아증의 예방을 위한 서브유닛 백신을 개발하려는 시도는 대부분 항원으로 보렐리아 외표면 단백질 A(OspA)의 사용에 집중되었다. OspA 단백질은 이것이 진드기 벡터의 소화관에 있는 경우에만 보렐리아에 의해 발현된다. 따라서 예방접종에 의해 생산된 OspA 항체는 체내에서 감염에 대항하지 않으며, 오히려 진드기가 흡혈하면 그 소화관으로 들어간다. 거기서 항체는 스피로케테를 중화시키고 보렐리아가 척추동물 숙주로 들어가는 경로인 진드기 중장에서 타액샘으로의 박테리아 이동을 차단한다. 따라서 OspA-특이적 항체는 보렐리아의 진드기 벡터로부터 인간 숙주로의 전파를 예방한다.
알루미늄 하이드록사이드와 함께 B. 부르그도르페리 s.s., 균주 ZS7 유래 OspA의 지질화 형태가 US 시장을 위해 SmithKline Beecham(현재는 GlaxoSmithKline(GSK))에 의해 보렐리아에 대한 백신으로 상업적으로 개발되었다(LYMErix™). 최적 보호를 위해서는 1년의 기간에 걸쳐 3용량의 LYMErix™가 필요하였다. 최초 2용량 후, 라임 보렐리아증에 대한 백신 효능은 49%였고, 세 번째 용량 후에는 76%였다. 그러나 LYMErix™는 시판 직후, 2002년에 시장에서 철수되었다. 언급된 이유는 백신의 실제 용도 문제, 예를 들면 매년 또는 매 2년마다의 추가접종 주사의 필요성뿐만 아니라 초기 감염의 항생제 치료에 비해 상기 예방적 접근의 상대적으로 높은 비용에 대한 것이었다. 또한, LYMErix™가 인간 단백질과의 서열 상동성으로 인해 모집단의 하위그룹에서 자가면역 반응을 야기할 수 있다는 우려가 있었으나, 이는 증명된 바 없었다. 또한, 다른 임상적으로 중요한 보렐리아 종에 대한 교차-보호가 상기 백신에 의해 제공되지 않았다.
따라서 일 구현예에서, 본 발명의 목적은 라임 보렐리아증의 예방을 위한 개선 백신을 제공하는 것이었다. 바람직하게는 백신은 보호성이고 안전하며 현존하는 치료법에 비해 더 효과적이고/이거나 1 초과의 보렐리아 종에 대한 보호를 제공하면서도 쉽게 생산된다.
본 발명의 근원적인 문제는 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드에 의해 해결되며, 여기서 상기 돌연변이체 단편은 보렐리아 OspA 단백질의 C-말단 도메인으로 이루어지며, 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입에 의해 적어도 상응하는 야생형 단편과 상이하다.
놀랍게도 감염의 생체내 모델에서 나타난 바와 같이, 돌연변이체 단편에서 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입은 야생형 OspA 단편을 포함하는 폴리펩타이드에 비해 돌연변이체 OspA 단편을 포함하는 폴리펩타이드의 보호능을 증가시키는 것으로 나타났다. 실시예에 나타낸 바와 같이, B. 아프젤리이 OspA C-말단 단편 내로의 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입은 디설파이드 결합이 없는 야생형 OspA 단편에 비해 그 보호능을 증가시켰다. 야생형 OspA 단편에 비해 돌연변이체 OspA 단편을 이용한 면역화 후 더 적은 동물이 감염되었으므로, 표 2 및 3은 야생형 OspA 단편("S2D0")에 비해 도입된 디설파이드 결합을 갖는 돌연변이체 단편("S2D1-5")의 보호능을 나타내는 데이터를 제공한다. 시험된 일부 돌연변이체 OspA 단편은 비지질화 전장 OspA 단백질인 양성 대조군 항원에 의해 제공되는 것에 필적하는 보호를 제공하였다.
따라서 제1 측면에서, 본 발명은 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드에 관한 것이며, 여기서 상기 돌연변이체 단편은 보렐리아 OspA의 C-말단 도메인으로 이루어지며, 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입에 의해 적어도 상응하는 야생형 단편과 상이하다.
용어 B. 부르그도르페리 s.l.은 적어도 13 보렐리아 종(표 A-1)을 포괄한다. 이들 종은 상이한 지리적 영역에서 나타나며, 익소데스 리시누스 콤플렉스(또한 소위 익소데스 페르술카투스 콤플렉스)의 진드기 및 광범위한 동물 숙주가 관여하는 풍토성 주기로 자연계에 생존한다. 다음 4 보렐리아 종이 대부분의 인간 감염에 관여된다: B. 부르그도르페리 s.s., B.　아프젤리이, B. 바바리엔시스 및 B.　가리니이. 다른 3종, B.　루시타니애, B. 비쎄티 및 B.　스피엘마니이는 때때로 인간에서 검출되지만, 라임 보렐리아증에서의 그 역할은 현재 명확하지 않다. 새로운 종의 보렐리아도 여전히 보고되고 있다.
[표 A-1]
Figure 112020133079616-pat00001
상술된 바와 같이, 보렐리아 외표면 단백질 A(OspA)는 백신 후보로서의 그 가능성으로 인해 특히 관심의 대상인 보렐리아의 풍부한 면역원성 지질단백질이다. B.　부르그도르페리 s.l.의 OspA는 대략 30kDa의 분자량을 가지며 선형 플라스미드 상에서 인코딩되는 염기성 지질단백질이다. OspA 단백질의 중요한 측면은 그 N-말단 지질화이다; 즉, N-말단 시스테인 잔기가 이중 결합을 갖거나 갖지 않고 C14 내지 C19의 사슬 길이를 갖는 지방산으로 치환되며, 이는 OspA 단백질의 면역원성을 증강시키는 특징이다. 면역원성이 낮은 합성 펩타이드는 지질화된 경우; 예를 들면, 지질 부착을 특정하는 신호 서열을 갖고 합성된 여러 박테리아 지질단백질의 아미노 말단에서 확인되는 지방산 치환인 Pam3Cys에 공유결합된 경우(Bessler and Jung, Research Immunology(1992) 143:548-552) 더 강한 항체 반응을 유도하는 것으로 나타났다. 추가로, Pam3Cys 모이어티는 부분적으로 TLR-2와의 그 상호작용을 통해 마우스에서 OspA에 대한 면역 반응을 증강시키는 것으로 나타났다(Yoder, 등(2003) Infection and Immunity 71:3894-3900). 따라서, OspA의 C-말단 단편의 지질화는 단편의 면역원성 및 보호능을 증강시킬 것으로 예측될 것이다.
북아메리카 및 유럽에서 수득된 B. 부르그도르페리 s.l.의 단리물 분석에서는 OspA가 항원 가변성을 가지며 혈청학에 근거하여 몇 개의 뚜렷이 다른 그룹으로 규정될 수 있음이 드러났다. 특이적 N- 및 C-말단 항원 결정기에 결합하는 항-OspA mAbs가 보고되었다. X-선 결정학 및 NMR 분석을 이용하여 OspA에서 면역학적으로 중요한 초가변 도메인을 동정하고 LA-2 에피토프를 C-말단 아미노산 203-257에 맵핑하였다(Ding 등, Mol. Biol. 302: 1153-64, 2000). 이전의 연구는 C-말단 에피토프 LA-2에 대한 항체 생산이 OspA를 이용한 예방접종 후 보호 면역성과 관련됨을 나타내었다(Van Hoecke 등, Vaccine(1996) 14(17-18):1620-6 및 Steere 등, N Engl J Med(1998) 339:209-215). LA-2에 대한 항체는 진드기에서 숙주로의 보렐리아 전파를 차단하는 것으로 나타났다(Golde 등, Infect Immun(1997) 65(3):882-889). 이들 연구는 OspA 단백질의 C-말단부가 보호 면역성을 유도하기 위해 충분할 수 있음을 제시하였다. OspA의 C-말단부 서열이 N-말단부에 비해 보렐리아 혈청형 간에 덜 보존된 것임이 주지되어야 한다(도 1 참고).
다른 것들과 함께 상기 개괄된 연구로부터의 정보에 근거하여, C-말단부를 포함하는 OspA의 끝이 잘린(truncated) 형태(본원에서 "OspA 단편" 또는 "단량체"로도 불림)가 본 발명에서 사용되었다. 이러한 OspA의 끝이 잘린 형태는 전장 OspA 단백질에 비해 보호성이 더 적은 것으로 입증되었다. 그러나 놀랍게도, 본 발명의 과정에서 끝이 잘린 형태로의 디설파이드 결합의 도입(본원에서 "돌연변이체 OspA 단편" 또는 "돌연변이체 단편"으로도 불림)이 상기 단점을 극복하는 것으로 나타났다. 특정 기전에 국한되지는 않지만, 개선된 보호는 열 안정성을 측정하는 검정에서 나타난 바와 같이 OspA 단편의 증가된 안정성에 기인하는 것으로 여겨진다.
본 발명에 따라, 돌연변이체 OspA 단편은 임의의 보렐리아 종에서 유도될 수 있다; 그러나 의료 분야에서, 특히 인간에 대한 그의 관련성으로 인해, B. 부르그도르페리 s.s., B.　아프젤리이, B. 바바리엔시스 및 B.　가리니이가 바람직하다. 이와 관련하여, 이들 4 보렐리아 종은 그의 OspA 혈청형에 따라 추가 분류될 수 있으며, 이는 각 OspA 단백질에 특이적인 모노클로날 항체로의 분석에 의해 결정되었다. 대부분의 인간 보렐리아 감염에 관여하는 혈청형 1-7을 그 유행률과 함께 아래 표 A-2에 나타낸다.
[표 A-2]
B. 부르도르페리 s.s., B. 아프젤리이, B.　바바리엔시스 및 B. 가리니이의 혈청형 명칭 및 유행. 인간 뇌척수액 또는 피부 또는 진드기 벡터에서 단리된 보렐리아를 각각 OspA의 특정한 에피토프에 특이적인 마우스 모노클로날 항체를 이용하여 전체-세포 용해물의 탐침검사로 혈청형을 분석하였다[(Wilske 등, J. of Clin Microbiol(1993) 31(2):340-350)에 의하여 기재되고 (Baxter Bioscience at "Climate change effect on ticks and tick-borne disease" Brussels, 06 Feb 2009)에 의하여 프리젠테이션된 바와 같이 수행됨].
Figure 112020133079616-pat00002
B. 부르그도르페리 s.s. 균주 B31의 OspA 단백질의 구조는 Li 등(Proc Natl Acad Sci(1997) 94:3584-3589)에 의해 결정되었다. 이는 N-말단(β-가닥 1 내지 4) 및 중심 β-시트(β-가닥 5 내지 14n[N-말단부]), 배럴 시트 1(β-가닥 14c[C-말단부] 내지 16), 배럴 시트 2(β-가닥 17 내지 21) 및 C-말단 β-나선으로 구성되었다. 본 명세서에 걸쳐 사용되는 OspA에 대한 용어 "OspA C-말단 도메인" 또는 "C-말단 도메인" 또는 "야생형 단편" 또는 "C-말단부"는 OspA의 C-말단 아미노산 서열, 즉 적어도 N-말단 β-시트(β-가닥 1 내지 4 포함)가 없는 OspA를 의미한다. B. 부르그도르페리 s.s. 균주 B31의 OspA에서, N-말단 시트는 아미노산 17 내지 70(16 aa 길이 지질화 신호 펩타이드의 번역 후 절단에 뒤이어)으로 이루어진다.
본 발명의 C-말단 OspA 단편에는 또한 N-말단에 지질화 신호 서열, 예를 들면 B.　부르그도르페리 s.s. 균주 B31의 OspA(서열번호: 14) 또는 OspB(서열번호: 15)의 아미노산 1 내지 16의 지질화 신호 서열, 본원에서 "lpp 지질화 신호"로 불리는 E. 콜라이의 지질화 신호 서열(서열번호: 16), 또는 예를 들면 아래에서 규정된 바와 같은 임의의 다른 신호 서열이 포함될 수 있다.
N-말단 지질화 신호 서열, 예컨대 초기 OspA 폴리펩타이드에 존재하는 것들을 이용한 단백질의 지질화는 각각 효소 디아실글리세릴 전이효소, 신호 펩티다아제 II 및 트랜스아실라아제의 단계식 작용에 의해 E. 콜라이 발현 벡터에서 일어난다. 첫 번째 단계는 비개질 전구지질단백질의 시스테인 설프하이드릴기로의 디아실글리세라이드의 전달이고, 그 다음 신호 펩티다아제 II에 의한 신호 펩타이드의 절단, 마지막으로 아포지질단백질의 N-말단 시스테인의 α-아미노기의 아실화이다. 그 결과는 폴리펩타이드의 N-말단 시스테인 잔기 상에 두 개의 추가 지질로 치환된 글리세롤기 및 하나의 지질의 배치이다. 지질화 동안 절단 제거되는 지질화 신호 서열은 최종 폴리펩타이드 서열에는 존재하지 않는다.
본 발명에 따라, 돌연변이체 OspA 단편은 지질화 단백질, 또한 지질단백질일 수 있고, 여기서 지질 모이어티는 글리세롤기와 함께 "Lip"으로도 불린다. 본 발명에 따라, Lip은 1 내지 3 지질, 예컨대 본 발명의 폴리펩타이드의 N-말단 시스테인 및 글리세롤에 부착된 C14-20 알킬 및/또는 C14-20 알케닐을 포함하거나, 또는 바람직하게는 Lip은 아래 화학식 I의 모이어티이고:
[화학식 I]
Figure 112020133079616-pat00003
식 중, 하나의 R1, R2 또는 R3은 C14-C20 알킬 또는 알케닐이고, 다른 것들은 각각 독립적으로 C14-C20 알킬 또는 C14-C20 알케닐이고, X는 화학식 I에 나타낸 시스테인 잔기에 부착된 아미노산 서열이다. 더 바람직하게는, Lip + 폴리펩타이드의 N-말단 시스테인은 N-팔미토일-S-(2RS)-2,3-비스-(팔미토일옥시)프로필 시스테인(본원에서 "Pam3Cys"로 불림)이며 본 발명의 상기 아미노산 서열에 대해 시스테인의 카보닐 C를 통해 연결된다. 상기 화학식 I에서, R1, R2 및 R3은 팔미토일 모이어티일 것이며, X는 시스테인 잔기에 부착된 아미노산 서열이다.
본 발명에 따르면, B. 부르그도르페리 s.s. B31 이외 균주의 OspA의 C-말단 도메인은 (i) 적어도 아미노산 17 내지 70이 없고/없거나 (ii) 적어도 B. 부르그도르페리 s.s. B31의 OspA의 아미노산 17 내지 70에 상동성이 있는 N-말단 도메인이 없는 것으로 규정된다. 추가로, 본 발명에 따른 OspA C-말단 도메인은 또한 Li와 공동 연구자들(Li 등, 상기)에 의해 규정된 바와 같은 중심 시트의 추가 부분, 특히 추가 가닥, 예컨대 임의 보렐리아, 특히 B. 부르그도르페리 s.s. B31의 아미노산 17 내지 82, 93, 105, 118 또는 119, 바람직하게는 17 내지 129, 더 바람직하게는 1 내지 125, 1 내지 129 또는 1 내지 130으로부터의 아미노산 부분 또는 B. 부르그도르페리 s.s. B31 이외의 보렐리아 종에서 유래된 OspA 단백질의 상동성 부분이 없을 수 있다.
본 발명의 문맥에서, OspA C-말단 도메인은 "OspA 단편" 또는 "OspA의 단편"으로도 불린다.
본 발명의 폴리펩타이드의 문맥에서 그리고 본 명세서에 걸쳐 사용되는 "돌연변이체 단편"은 상기에서 규정된 바와 같이 OspA C-말단 단편을 의미하며, 이는 디설파이드 결합을 형성할 수 있는 적어도 2 도입 시스테인으로 적어도 야생형 단편과 상이하다. 그 이론에 구애받지 않고, 디설파이드 결합은 항체 결합의 유도로 이어지는 입체형태로 단편을 안정화하는 것으로 추정된다. OspA의 야생형 C-말단 단편의 폴딩은 전장 단백질에 비해 감소된 온도 안정성을 나타낸다(Koide 등, Structure-based Design of a Second-generation Lyme Disease Vaccine Based on a C-terminal Fragment of Borrelia burgdorferi OspA, J. Mol. Biol.(2005) 350:290-299). 본 발명에 있어서, B. 부르그도르페리 s.s. B31 OspA의 C-말단 도메인의 서열은 상기 C-말단 도메인의 폴딩 안정성을 증강시킬 수 있는 도입된 디설파이드 가교를 위한 위치를 결정하기 위해 컴퓨터내 분석되었다. 분석 결과는 폴딩이 종에 걸쳐 보존되어 있다는 가정 하에 다른 보렐리아 종의 상동성 OspA 단편으로 이입되었다.
전형적으로 디설파이드 결합은 1 이상의 시스테인 잔기 도입에 의해 도입될 수 있으며, 여기서 디설파이드 결합(S-S 가교)은 2 시스테인 잔기의 티올기 간에 형성된다. 디설파이드 결합이 야생형 단편에 존재하는 시스테인 잔기와 형성되는 경우, 하나의 시스테인 잔기만 도입되면 된다. 1, 또는 바람직하게는 2 시스테인(들)이 아미노산 부가, 또는 바람직하게는 치환에 의해 도입될 수 있다.
OspA 돌연변이체 단편은 또한 야생형에 비해 추가 돌연변이를 포함할 수 있다. 상술된 바와 같이, OspA의 구조 및 표면 도메인은 당해분야에 공지되어 있다. 따라서 돌연변이체 단편은 돌연변이를, 특히 단백질의 표면이 아니고/아니거나 면역 반응에 연관되지 않은, 따라서 항원성에 영향을 미치지 않는 부위에 추가로 포함할 수 있다. 이들에는 1 이상의 아미노산 결실(들), 특히 작은(예로, 최대 10 아미노산) 결실, 1 이상의 아미노산 부가(들)(특히 C- 또는 N-말단), 1 이상의 아미노산 치환(들), 특히 1 이상의 보존적 아미노산 치환이 포함될 수 있다. 보존적 아미노산 치환의 예에는 비제한적으로 아래에 열거된 것들이 포함된다:
Figure 112020133079616-pat00004
바람직한 돌연변이에는 선택된 단편 부분의 변화가 포함된다, 예를 들면 B. 부르그도르페리 s.s.에 존재하는 인간 백혈구 기능-연관된 항원(hLFA-1)에 대한 서열 유사성을 갖는 서열은, 예를 들면 또 하나의 보렐리아 종으로부터의 OspA 단백질 유래 상동성 서열로 대체되어 개질된다. 상기 개질에 대한 근거는 인간 단백질과의 면역학적 교차-반응을 유도할 위험성을 감소시키기 위한 것이다. 최종 또는 중간체에서의 지질화를 위한 신호 서열의 부가, 단편 또는 마커 단백질의 부가(예로, 확인 또는 정제를 위한)도 가능하다.
일부 구현예에서, 돌연변이체 OspA 단편은 야생형 단편에 대해 60%, 바람직하게는 적어도 70%, 더 바람직하게는 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 또 하나의 구현예에서, 서열은 서열 부가, 결실 또는 치환으로 인해 최대 10%, 최대 9%, 최대 8%, 최대 7%, 최대 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 가장 바람직하게는 최대 1% 상이하다.
당해분야에 공지되고 본원에서 사용되는 동일성은 서열을 비교하여 결정되는 2 이상의 폴리펩타이드 서열 간 관계이다. 당해분야에서, 동일성은 또한 상기 서열 스트링 간 매치에 의해 결정될 수 있는 바와 같이, 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열 간 서열 관련성 정도를 의미한다. 동일성은 쉽게 계산될 수 있다. 2 폴리뉴클레오타이드 또는 2 폴리펩타이드 서열 간 동일성을 측정하기 위해 수많은 방법이 존재하며, 이 용어는 숙련가에게 잘 알려져 있다(예로, Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987). 동일성을 결정하기 위해 바람직한 방법은 시험 서열 간에 최대 매치를 제공하도록 설계된다. 동일성 결정 방법은 컴퓨터 프로그램에서 코드화된다. 2 서열 간 동일성을 결정하기 위해 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법에는 비제한적으로 GCG 프로그램 패키지(Devereux, J. 등, 1984), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA(Altschul, S. 등, 1990)가 포함된다.
돌연변이체 OspA 단편에 대조적으로, 본 발명의 문맥에서 "야생형 단편"은 보렐리아의 천연 생성 OspA의 단편에 관련된 것이다. 야생형 단편은 N-말단 결실에 의해 수득되지만, 이는 내부 결실(본원에 기재된 바와 같은 신호 서열을 제외하고) 또는 돌연변이를 포함하지 않는다. 돌연변이체 OspA 단편에 관해, 야생형 단편은 동일한 OspA 부분(동일한 길이 및 동일한 균주의 OspA 등)으로 이루어지며, 특히 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입 또는 인간 상동성을 갖는 서열, 예를 들면 hLFA-1(상기 참고)의 대체에서 상술된 돌연변이(들)만 상이하다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따라, 본 발명의 폴리펩타이드는 적어도 하나의 디설파이드 결합이 도입된 전장 OspA 폴리펩타이드를 포함하거나 이로써 이루어지지 않는다.
본 발명의 일 구현예에서, 돌연변이체 OspA 단편은 적어도 하나의, 바람직하게는 정확하게 하나의 디설파이드 결합의 도입에 의해서만 각 야생형 단편과 상이할 수 있다.
폴리펩타이드는 펩타이드 결합, 일부 경우에서 디설파이드 결합에 의해 연결된 아미노산의 단일 선형 폴리머이다. 본 발명에 따라, 폴리펩타이드는 또한 하나 이상의 번역 후 개질; 즉, 부착된 생화학적 관능기, 예컨대 부착된 아세테이트, 포스페이트, 지질 또는 탄수화물, 바람직하게는 글리세롤과 함께 N-말단 시스테인에 부착된 지질 또는 지질들, 더 바람직하게는 1 내지 3 C14-C20 알킬 또는 알케닐 모이어티, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 3 팔미토일기, 가장 바람직하게는 3 팔미토일기(Pam3)를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라, 본 발명의 폴리펩타이드는 상기-기재된 돌연변이체 OspA 단편을 포함한다. 본 발명에 따르면, 이것은 (i) 상기에서 규정된 바와 같은 N-말단 시트 및 (ii) 선택적으로 상기에서 규정된 바와 같이 중심 시트의 하나 이상의 추가 가닥을 포함하지 않는다. 그러나 폴리펩타이드는 하나 이상의 작용성 서열, 예컨대 신호 서열, 예로 지질화 신호 서열 또는 번역 후 개질, 예컨대 지질화를 포함할 수 있다.
본 발명의 추가 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 (i) 선택적으로 링커, 예로, 이하에서 규정된 바와 같은 링커로 연결된, 하나 이상의 돌연변이체 OspA 단편 및 (ii) 선택적으로 OspA에 대해 이종성인 하나 이상의 아미노산, 특히 신호 서열 및 (iii) 선택적으로 번역 후 개질, 예컨대 지질화로 이루어진다.
본 발명의 폴리펩타이드는 보호능을 갖는다. 상술된 바와 같이, 돌연변이체 OspA 단편 내로의 디설파이드 결합의 도입은 디설파이드 결합(들)이 없는 각 단편을 포함하는 폴리펩타이드에 비해 폴리펩타이드의 보호능을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 보호능은 디설파이드 결합(들)이 없는 각 단편을 포함하는 폴리펩타이드에 비해 적어도 10%, 더 바람직하게는 적어도 20%, 더 바람직하게는 적어도 30%, 더 바람직하게는 적어도 40%, 더 바람직하게는 적어도 50%, 더 바람직하게는 적어도 60%, 더 바람직하게는 적어도 70%, 더 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90% 증가된다.
용어 보호능은 보렐리아 감염에 대해 대상체를 보호하는 능력을 나타낸다. 본 발명의 폴리펩타이드에 대해, 보호능은 보렐리아 감염에 대해 대상체를 보호하는 면역 반응을 유도하는 폴리펩타이드의 능력에 관한 것이다. 보호능은 폴리펩타이드에 대해 면역 반응을 유도하는 방식으로 대상체에 폴리펩타이드를 투여함으로써 시험될 수 있다. 그 후에, 대상체에 보렐리아가 유발접종될 수 있다. 감염에 대한 대상체의 반응이 모니터링된다. 특히, 대상체에서 보렐리아의 존재가 결정될 수 있다. 예를 들면, 대상체에서 보렐리아가 검출될 수 없는 경우 폴리펩타이드는 보호성이다. 보렐리아의 존재는 보렐리아-특이적 핵산(예를 들면, PCR에 의해) 또는 보렐리아-특이적 항체(예를 들면, ELISA 또는 웨스턴 블롯)의 검출에 의해 또는 보렐리아 자체(예를 들면, 성장 배지에서 기관 또는 조직을 배양하고 현미경 검사에 의해 보렐리아의 존재를 확인하여)의 검출에 의해 결정될 수 있다. 특히, 구체 용량에 대해 백분율로 보고되는 보호능("pc")은 하기와 같이 규정된다:
pc(%) = [(총 시험 대상체의 수 - 보렐리아 감염 대상체의 수)/총 시험 대상체의 수] × 100
보호능 차이(Δpc)는, 예로 디설파이드 결합(들)을 갖는 돌연변이체 OspA 단편의 보호능(pc)(pc[결합 보유])을 디설파이드 결합(들)이 없는 OspA 단편의 보호능(pc[결합 미보유])과 비교하여 결정될 수 있다. 본 발명에 따라, 비교될 폴리펩타이드는 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입만 상이하다. 디설파이드 결합(들)의 도입에 의한 보호능 차이(Δpc)는 하기와 같이 결정된다:
Δpc =(pc[샘플] - pc[대조군])
예로, Δpc =(pc[결합 보유] - pc[결합 미보유])
Δpc가 0보다 큰 경우(>0), 모든 다른 파라미터(예로, 용량 및 검정)가 동일하다고 가정하면, 샘플(예로, 디설파이드 결합(들)을 갖는 돌연변이체 OspA 단편)의 보호능은 대조군(예로, 디설파이드 결합(들)이 없는 OspA 단편)의 보호능보다 높다. 반대로, Δpc가 0 미만이고(<0) 모든 다른 파라미터(예를 들면, 용량 및 검정)가 동일하다고 가정하면, 샘플(예로, 디설파이드 결합(들)을 갖는 돌연변이체 OspA 단편)의 보호능은 대조군(예로, 디설파이드 결합(들)이 없는 OspA 단편)의 보호능보다 낮다.
바람직하게는 본 발명의 폴리펩타이드는 생체내 유발접종 검정에 의해 그 보호능이 평가되며, 여기서 본 발명의 폴리펩타이드 또는 위약 대조군으로 면역화된 마우스는 피하 주사침(바늘 유발접종 방법)으로 또는 진드기 벡터에 의한 도입(진드기 유발접종 방법)으로 면역화된 대상체 내에 도입된 보렐리아로 유발접종된다.
바늘 유발접종 방법은 원하는 보렐리아 균주(예를 들면, B. 부르그도르페리, 균주 N40)에 대해 제1 측면의 상기 제1 폴리펩타이드 또는 적절한 위약(음성) 대조군, 예컨대 버퍼 또는 아쥬반트 단독으로 면역화된 마우스에 감염성 용량(ID)50의 20 내지 50배 용량으로 보렐리아를 피하 도입하고, 유발접종된 마우스의 감염률을 비교하여 수행된다. ID50은 유발접종된 마우스의 50%가 감염되는 용량으로 규정된다. 보렐리아의 용량은 박테리아의 수로 측정된다. 유발접종 용량은 크게 다를 수 있고 균주-의존적이다; 따라서 균주의 발병력은 먼저 ID50의 결정을 위해 유발접종 실험으로 평가되어야 한다. 바늘 유발접종 4주 후, 혈액 및 조직이 감염 상태를 결정하기 위한 판독 방법을 위해 수집된다. 이들 판독 방법은, 예로 본원에서 기재된 바와 같이 보렐리아의 확인을 위한 혈청 상의 VlsE ELISA 또는 수집된 조직 상의 qPCR 또는 다른 방법일 수 있다.
진드기 유발접종 방법은 제1 측면의 상기 제1 폴리펩타이드로 면역화된 마우스에 보렐리아(예로, B. 아프젤리이, 균주 IS1)로 감염된 적어도 하나의 진드기 약충(예로, I. 리시누스)을 적용하고; b) 제1 측면의 상기 제2 폴리펩타이드로 면역화된 두 번째 마우스에 적어도 하나의 감염된 진드기 약충을 적용하고; c) 일반적으로 유발접종 6주 후 두 마우스에서의 감염률을 비교하여 수행된다. 바람직하게는 검정 또는 시험은 시험될 폴리펩타이드 당 마우스 그룹으로 수행된다. 적당한 시험이 실시예에서도 기재되고 실증된다. 감염 상태의 평가는 혈청 상의 VlsE ELISA 또는 수집된 조직 상의 qPCR을 이용하여 또는 다른 적당한 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 산물, 예로 30㎍, 바람직하게는 10㎍, 바람직하게는 5.0㎍, 바람직하게는 1.0㎍, 바람직하게는 0.3㎍ 또는 그 미만의 용량으로 대상체에 3회 투여된 디설파이드 결합(들)을 갖는 돌연변이체 OspA 단편을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드는 50% 또는 그 초과, 바람직하게는 60% 또는 그 초과, 더 바람직하게는 70% 또는 그 초과, 더 바람직하게는 80% 또는 그 초과, 더 바람직하게는 90% 또는 그 초과, 더욱 더 바람직하게는 95% 또는 그 초과, 가장 바람직한 99% 또는 그 초과의 보호능을 갖는다. 일 구현예에서, 보호능은 생체내 유발접종 방법, 바람직하게는 진드기 유발접종 방법, 더 바람직하게는 바늘 유발접종 방법, 예로 실시예에 기재된 바와 같이 평가된다. 놀랍게도 하나의 혈청형의 OspA 돌연변이체 단편을 이용한 면역화가 다른 또 하나의 혈청에 대한 교차 보호를 제공할 수 있음이 관찰되었다(실시예 4, 표 4). 상기 발견에 근거하여, 본 발명의 폴리펩타이드의 용량이 더욱 더 감소될 수 있음이 기대될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 디설파이드 결합(들)을 갖는 돌연변이체 OspA 단편을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드 및 위약(음성) 대조군 간의 보호능 차이(Δpc)는 30㎍, 바람직하게는 10㎍, 바람직하게는 5.0㎍, 바람직하게는 1.0㎍, 바람직하게는 0.3㎍ 또는 그 미만의 용량으로 대상체에 3회 투여되는 경우, 적어도 50%, 특히 적어도 60%, 바람직하게는 적어도 70%, 더 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95%, 가장 바람직하게는 적어도 95%이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, C-말단 도메인은 OspA 단백질의 적어도 C-말단 150 아미노산으로 이루어진 단편으로 규정된다. 일 구현예에서, C-말단 도메인은 140 내지 152 아미노산 길이이다. 추가 구현예에서, C-말단 도메인은 OspA 단백질의 마지막 152 아미노산, 바람직하게는 마지막 151 아미노산, 더 바람직하게는 마지막 150 아미노산 이하로 이루어진다. 대안적인 구현예에서, C-말단 도메인은 OspA 단백질의 마지막 140 아미노산, 바람직하게는 마지막 141 아미노산, 바람직하게는 마지막 142 아미노산, 가장 바람직하게는 마지막 143 아미노산 이상으로 이루어진다. OspA 단백질의 마지막 아미노산은 본원에서 OspA 단백질의 가장 C-말단 인접 아미노산 서열로 규정된다.
또 하나의 구현예에서, 보렐리아 OspA 단백질의 C-말단 도메인은 (i) B. 아프젤리이, 균주 K78의 OspA의 위치 126, 131 또는 130 내지 위치 273의 아미노산 또는 (ii) B. 아프젤리이, 균주 K78 이외의 보렐리아 균주 OspA의 아미노산에 대한 상동성 도메인을 포함하거나, 이로써 이루어지거나 본질적으로 이루어진다.
본 발명의 폴리펩타이드는 (i) 선택적으로 링커, 예로 이하에서 규정된 바와 같이 연결된, 하나 이상의 상기 돌연변이체 단편 및 (ii) 선택적으로 OspA에 이종성인 하나 이상의 아미노산, 특히 번역 후 개질, 예컨대 지질화를 위한 신호 서열 또는 부위 및 (iii) 선택적으로 번역 후 개질, 예컨대 지질화를 포함하거나, 이로써 이루어지거나 본질적으로 이루어질 수 있다.
본 발명에 따라, 본 발명의 폴리펩타이드는 본원에서 규정된 바와 같은 성분, 특히 하나 이상의 돌연변이체 OspA 단편 및 선택적으로 하나 이상의 추가 성분, 예컨대 상동성 도메인, 링커 펩타이드, 신호 서열 또는 지질화 부위를 포함하거나 이로써 본질적으로 이루어지거나 이루어질 수 있다. 상기 문맥에서 "본질적으로 이루어진"이란 성분(들)이 상기 서열에 대해 일부 소소한 아미노산 변화, 예컨대 바람직하게는 본원에서 규정된 바와 같이 성분의 아미노산의 최대 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%에 대해, 아미노산 부가, 치환 또는 결실을 가질 수 있음을 의미한다.
본 발명에 따라, 적어도 하나의 디설파이드 결합이 OspA 단편 내로 도입된다. 이는 바람직하게는 적어도 하나의 디설파이드 결합의 형성을 허용하기 위해 단편 내에 적어도 1 또는 2 시스테인(들), 특히 2 시스테인을 도입하여 달성될 수 있다. 단편 내 또 하나의 시스테인이 디설파이드 결합에 이용가능한 경우, 하나의 시스테인만 도입될 수 있다. 그러나 바람직하게는 2 시스테인이 도입된다. 시스테인(들)은 아미노산 부가 또는 치환, 바람직하게는 치환에 의해 도입된다. 부가의 경우, 시스테인은 2 아미노산 간 아미노산 서열 내에 삽입되는 반면, 치환의 경우, 하나의 아미노산이 시스테인으로 대체된다.
본 발명에 따라, OspA는 임의의 보렐리아 균주, 특히 본원에 명시된 것들, 예컨대 B. 부르그도르페리 s.s., B. 가리니이, B. 아프젤리이, B. 안데르소니, B. 비쎄티, B. 발라이시아나, B. 루시타니애, B. 스피엘마니이, B. 자포니카, B. 타누키이, B. 투르디 또는 B. 시니카, B. 바바리엔시스, 바람직하게는 B. 부르그도르페리 s.s., B. 아프젤리이, B.　바바리엔시스 또는 B. 가리니이에서 유래될 수 있다. 바람직하게는 OspA는 B. 아프젤리이, 특히 균주 K78, OspA 혈청형 2(서열번호: 19); B. 부르그도르페리 s.s., 특히 균주 B31, OspA 혈청형 1(서열번호: 20); B. 가리니이, 특히 균주 PBr, OspA 혈청형 3(서열번호: 21); B. 바바리엔시스, 특히 균주 PBi, OspA 혈청형 4(서열번호: 22); B. 가리니이, 특히 균주 PHei, OspA 혈청형 5(서열번호: 23); B. 가리니이, 특히 균주 DK29, OspA 혈청형 6(서열번호: 24) 또는 B. 가리니이, 특히 균주 T25, OspA 혈청형 7(서열번호: 25)에서 유래된다. 이들 OspA 단백질(전장)의 아미노산 서열은 아래에 제공된다.
[표 A-3]
선택된 보렐리아 종 균주의 OspA 서열의 수납 번호. 약어: Baf=보렐리아 아프젤리이, Bbu=보렐리아 부르그도르페리 s.s., Bga=보렐리아 가리니이, Bsp=보렐리아 스피엘마니이, Bbi=보렐리아 비쎄티, Bva=보렐리아 발라이시아나, Btu=보렐리아 투리카태, Bdu=보렐리아 두토니, Blu=보렐리아 루시타니애, Bja=보렐리아 자포니카, gb=유전자은행, emb=EMBL, tr=UniProt/tremble, sp=UniProt/Swissprot, prf=단백질 연구 재단, dbj=일본 DNA 데이터뱅크(DDBJ), pdb=단백질 데이터 은행, db=데이터베이스
Figure 112020133079616-pat00005
Figure 112020133079616-pat00006
본 발명에 따라, 디설파이드 결합은 단편의 적절한 폴딩을 허용하거나 지지하는 OspA 단편의 임의 위치에 도입된 시스테인 간에 형성될 수 있다. 위치는 상술된 바와 같이, OspA의 공지된 구조에 근거하여 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 B. 아프젤리이, 특히 B. 아프젤리이 K78 혈청형 2 OspA, 또는 B. 아프젤리이 이외의 보렐리아 종, 예컨대 B. 부르그도르페리 s.s., 특히 균주 B31, 혈청형 1; B. 가리니이, 특히 균주 PBr, 혈청형 3; B. 바바리엔시스, 특히 균주 PBi, 혈청형 4; B. 가리니이, 특히 균주 PHei, 혈청형 5; B. 가리니이, 특히 균주 DK29, 혈청형 6 또는 B. 가리니이, 특히 균주 T25, 혈청형 7의 OspA의 상동성 아미노산의 임의의 위치 182 +/- 3 내지 임의의 위치 269 +/- 3(디설파이드 결합 유형 1); 임의의 위치 182 +/- 3 내지 임의의 위치 272 +/- 3(디설파이드 결합 유형 2); 임의의 위치 244 +/- 3 내지 임의의 위치 259 +/- 3(디설파이드 결합 유형 3); 임의의 위치 141 +/- 3 내지 임의의 위치 241 +/- 3(디설파이드 결합 유형 4); 임의의 위치 165 +/- 3 내지 임의의 위치 265 +/- 3(디설파이드 결합 유형 5); 임의의 위치 185 +/- 3 내지 임의의 위치 272 +/- 3(디설파이드 결합 유형 6); 임의의 위치 199 +/- 3 내지 임의의 위치 223 +/- 3(디설파이드 결합 유형 7); 임의의 위치 243 +/-3 내지 임의의 위치 262 +/- 3(디설파이드 결합 유형 8); 임의의 위치 184 +/- 3 내지 임의의 위치 204 +/- 3(디설파이드 결합 유형 9); 임의의 위치 201 +/- 3 내지 임의의 위치 214 +/- 3(디설파이드 결합 유형 10); 임의의 위치 246 +/-3 내지 임의의 위치 259 +/- 3(디설파이드 결합 유형 11); 및/또는 임의의 위치 167 +/- 3 내지 임의의 위치 178 +/-3(디설파이드 결합 유형 12)에 적어도 하나의 디설파이드 결합을 함유한다.
더 상세하게는, 본 발명의 폴리펩타이드는 B. 아프젤리이, 특히 B. 아프젤리이 K78 혈청형 2 OspA, 또는 B. 아프젤리이 이외의 보렐리아, 예컨대 B. 부르그도르페리 s.s., 특히 균주 B31, 혈청형 1; B. 가리니이, 특히 균주 PBr, 혈청형 3; B. 바바리엔시스, 특히 균주 PBi, 혈청형 4; B. 가리니이, 특히 균주 PHei, 혈청형 5; B. 가리니이, 특히 균주 DK29, 혈청형 6 또는 B. 가리니이, 특히 균주 T25, 혈청형 7의 OspA의 상동성 아미노산의 임의의 위치 182 내지 269(디설파이드 결합 유형 1); 위치 182 내지 272(디설파이드 결합 유형 2); 위치 244 내지 259(디설파이드 결합 유형 3); 위치 141 내지 241(디설파이드 결합 유형 4); 위치 165 내지 265(디설파이드 결합 유형 5); 위치 185 내지 272(디설파이드 결합 유형 6); 위치 199 내지 223(디설파이드 결합 유형 7); 위치 243 내지 262(디설파이드 결합 유형 8); 위치 184 내지 204(디설파이드 결합 유형 9); 위치 201 내지 214(디설파이드 결합 유형 10); 위치 246 내지 259(디설파이드 결합 유형 11); 및/또는 위치 167 내지 178(디설파이드 결합 유형 12)에 적어도 하나의 디설파이드 결합을 함유한다.
[표 A-4]
혈청형 2의 OspA 단백질에서 디설파이드 결합 유형과 명명법 및 시스테인 치환의 위치
Figure 112020133079616-pat00007
디설파이드 결합 유형 1 내지 5, 특히 디설파이드 결합 유형 1 내지 4가 더욱더 바람직하다.
다음과 같이 주지된다:
위치 182 +/- 3은 위치 179, 180, 181, 182, 183, 184 또는 185, 바람직하게는 182에 대한 약어이다.
위치 269 +/- 3은 위치 266, 267, 268, 269, 270, 271 또는 272, 바람직하게는 269에 대한 약어이다.
위치 272 +/- 3은 위치 269, 270, 271, 272, 273, 274 또는 275, 바람직하게는 272에 대한 약어이다.
위치 244 +/- 3은 위치 241, 242, 243, 244, 245, 246 또는 247, 바람직하게는 244에 대한 약어이다.
위치 259 +/- 3은 위치 256, 257, 258, 259, 260, 261 또는 262, 바람직하게는 259에 대한 약어이다.
위치 141 +/- 3은 위치 138, 139, 140, 141, 142, 143 또는 144, 바람직하게는 141에 대한 약어이다.
위치 241 +/- 3은 위치 238, 239, 240, 241, 242, 243 또는 244, 바람직하게는 241에 대한 약어이다.
위치 165 +/- 3은 위치 162, 163, 164, 165, 166, 167 또는 168, 바람직하게는 165에 대한 약어이다.
위치 265 +/- 3은 위치 262, 263, 264, 265, 266, 267 또는 268, 바람직하게는 265에 대한 약어이다.
위치 185 +/- 3은 위치 182, 183, 184, 185, 186, 187 또는 188, 바람직하게는 185에 대한 약어이다.
위치 199 +/- 3은 위치 196, 197, 198, 199, 200, 201 또는 202, 바람직하게는 199에 대한 약어이다.
위치 223 +/- 3은 위치 220, 221, 222, 223, 224, 225 또는 226, 바람직하게는 223에 대한 약어이다.
위치 243 +/- 3은 위치 240, 241, 242, 243, 244, 245 또는 246, 바람직하게는 143에 대한 약어이다.
위치 262 +/- 3은 위치 259, 260, 261, 262, 263, 264 또는 265, 바람직하게는 262에 대한 약어이다.
위치 184 +/- 3은 위치 181, 182, 183, 184, 185, 186 또는 187, 바람직하게는 184에 대한 약어이다.
위치 204 +/- 3은 위치 201, 202, 203, 204, 205, 206 또는 207, 바람직하게는 204에 대한 약어이다.
위치 201 +/- 3은 위치 198, 199, 200, 201, 202, 203 또는 204, 바람직하게는 201에 대한 약어이다.
위치 214 +/- 3은 위치 211, 212, 213, 214, 215, 216 또는 217, 바람직하게는 214에 대한 약어이다.
위치 246 +/- 3은 위치 243, 244, 245, 246, 247, 248 또는 249, 바람직하게는 246에 대한 약어이다.
위치 167 +/- 3은 위치 164, 165, 166, 167, 168, 169 또는 170, 바람직하게는 167에 대한 약어이다.
위치 178 +/- 3은 위치 175, 176, 177, 178, 179, 180 또는 181, 바람직하게는 178에 대한 약어이다.
바람직한 구현예에서, 돌연변이체 단편은 B. 아프젤리이 균주 K78, 혈청형 2의 OspA 야생형 서열(서열번호: 18)의 위치 126, 130 또는 131 내지 위치 273의 아미노산에서 유도되며, 적어도 하나의 디설파이드 결합의 도입에 의해서만 상이하고, 특히 여기서 적어도 하나의 디설파이드 결합은 위치 182 내지 269(디설파이드 결합 유형 1); 위치 182 내지 272(디설파이드 결합 유형 2); 위치 244 내지 259(디설파이드 결합 유형 3); 위치 141 내지 241(디설파이드 결합 유형 4); 위치 165 내지 265(디설파이드 결합 유형 5); 위치 185 내지 272(디설파이드 결합 유형 6); 위치 199 내지 223(디설파이드 결합 유형 7); 위치 243 내지 262(디설파이드 결합 유형 8); 위치 184 내지 204(디설파이드 결합 유형 9); 위치 201 내지 214(디설파이드 결합 유형 10); 위치 246 내지 259(디설파이드 결합 유형 11); 및/또는 위치 167 내지 178(디설파이드 결합 유형 12)에 있거나, 또는 B. 아프젤리이 이외의 보렐리아 종, 예컨대 B. 부르그도르페리 s.s., 특히 균주 B31, 혈청형 1; B. 가리니이, 특히 균주 PBr, 혈청형 3; B. 바바리엔시스, 특히 균주 PBi, 혈청형 4; B. 가리니이, 특히 균주 PHei, 혈청형 5; B. 가리니이, 특히 균주 DK29, 혈청형 6 또는 B. 가리니이, 특히 균주 T25, 혈청형 7의 OspA의 상동성 단편 및 위치에 있다.
더욱 더 바람직한 구현예에서, 돌연변이체 단편은 서열번호: 167, 서열번호: 168, 서열번호: 169, 서열번호: 170, 서열번호: 171, 서열번호: 172, 서열번호: 173, 서열번호: 174, 서열번호: 175, 서열번호: 176, 서열번호: 177, 서열번호: 178 및 서열번호: 2 내지 13의 적어도 하나의 서열에 대해 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 그룹에서 선택되는 아미노산 서열을 갖고, 여기서 상기 시스테인은 대체되지 않는다. 돌연변이 및 서열 동일성에 대한 추가 세부사항은 상기에 제공된다.
상술된 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드는 신호 서열을 포함할 수 있다. 지질화는 OspA에 아쥬반트 특성을 부여하는 것으로 나타났다. 따라서 본 발명의 폴리펩타이드의 지질화 형태 또는 지질화 신호를 포함하는 폴리펩타이드가 바람직하다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 지질화 신호, 바람직하게는 보렐리아 외표면 단백질, OspA 또는 OspB의 지질화 신호(각각 서열번호: 14 및 15) 또는 더 바람직하게는 E. 콜라이 lpp 지질화 신호 서열(서열번호: 16)을 포함한다. 지질화 신호를 포함하는 본 발명의 OspA 단편은 가공 동안 지질화되며 지질화 신호 펩타이드는 절단 제거된다. 따라서 신호 펩타이드는 성숙한 지질화 단백질에는 더 이상 존재하지 않는다.
본 발명에 따른 지질화 단백질은 N-말단에 "Lip"이 라벨링되어 폴리펩타이드에 대한 3 지방산기 및 글리세롤의 부가를 나타낸다(도 4 참고). 상기에서 기재된 바와 같이 적당한 지질화 신호에는
Figure 112020133079616-pat00008
(서열번호: 14),
Figure 112020133079616-pat00009
(서열번호: 15) 및
Figure 112020133079616-pat00010
(서열번호: 16)가 포함된다. 지질 모이어티 및 글리세롤이 전장 야생형 OspA 단백질에 존재하는 N-말단 시스테인 잔기에 부착되므로, 지질화를 위한 OspA C-말단 단편은 본원에서 "지질화 펩타이드" 또는 "LP"로 불리는 시스테인 잔기에 뒤따르는 추가 아미노산을 포함하는 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다(도 1 및 2 참고). 예를 들면, 지질화 신호 서열의 바로 C-말단의 서열, 예컨대 CSS 또는 CKQN(서열번호: 211)은 지질화 신호 펩타이드의 절단 시 지질화를 위한 N-말단 시스테인 잔기를 제공한다. 지질화 시스테인-함유 펩타이드는 본 발명의 최종 지질화 폴리펩타이드에 존재한다.
B. 부르그도르페리 s.s.의 OspA 단백질은 또한 인간 백혈구 기능-연관 항원(hLFA-1)(본원에서 "hLFA-1-유사 서열"로도 불림)에 결합하는 능력을 갖는 T-세포 수용체에 결합하는 능력을 갖는 서열을 포함하는 것으로 나타났다. 상기 OspA 영역의 hLFA-1에 대한 유사성은 B. 부르그도르페리 s.s. OspA의 인간 대상체로의 투여 시 교차 반응성을 갖는 면역 반응을 일으킬 수 있고, 감수성 개인에서 자가면역 질환, 특히 자가면역 관절염을 유도할 수 있다. 따라서 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드는 인간 백혈구 기능-연관 항원(hLFA-1)에 대한 결합능을 갖는 T-세포 수용체에 대한 결합능을 갖는 서열을 포함하지 않으며, 특히 아미노산 서열
Figure 112020133079616-pat00011
(서열번호: 17)를 포함하지 않는다. 이를 위해, hLFA-1-유사 서열, 특히 아미노산 서열
Figure 112020133079616-pat00012
(서열번호: 17)는 또 하나의 보렐리아 종의 OspA 단백질의 상동성 서열, 특히
Figure 112020133079616-pat00013
(서열번호: 18)로 대체될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 디설파이드 결합을 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드는 적어도 하나의 보렐리아 균주, 특히 B. 아프젤리이 K78, OspA 혈청형 2(서열번호: 19); B. 부르그도르페리 s.s., 특히 균주 B31, 혈청형 1(서열번호: 20); B. 가리니이, 특히 균주 PBr, 혈청형 3(서열번호: 21); B. 바바리엔시스, 특히 균주 PBi, 혈청형 4(서열번호: 22); B. 가리니이, 특히 균주 PHei, 혈청형 5(서열번호: 23); B. 가리니이, 특히 균주 DK29, 혈청형 6(서열번호: 24) 또는 B. 가리니이, 특히 균주 T25, 혈청형 7(서열번호: 25)에서 유도된 적어도 하나의 야생형 전장 OspA 단백질에 비해 보렐리아 감염에 대해 상기 폴리펩타이드로 본질적으로 동일한 보호능을 확립한다.
상이한 보렐리아 종 또는 OspA 혈청형에 대한 교차-보호를 제공하기 위해, 다가 백신의 개발이 바람직하다. 따라서 또 하나의 바람직한 구현예에서, 제1 측면의 폴리펩타이드는 상기에서 규정된 바와 같이 2 상이한 보렐리아 혈청형으로부터의 적어도 2 돌연변이체 단편을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 제1 측면의 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 2 돌연변이체 OspA 단편을 포함하며:
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편;
디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편 및 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편; 그리고
특히 여기서
- 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 단편은 서열번호: 2의 아미노산 서열 또는 서열번호: 2에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 2를 갖는 단편은 서열번호: 3의 아미노산 서열 또는 서열번호: 3에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
*- 디설파이드 결합 유형 3을 갖는 단편은 서열번호: 4의 아미노산 서열 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 단편은 서열번호: 5의 아미노산 서열 또는 서열번호: 5에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
*- 디설파이드 결합 유형 5를 갖는 단편은 서열번호: 6의 아미노산 서열 또는 서열번호: 6에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 6을 갖는 단편은 서열번호: 7의 아미노산 서열 또는 서열번호: 7에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
*- 디설파이드 결합 유형 7을 갖는 단편은 서열번호: 8의 아미노산 서열 또는 서열번호: 8에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 8을 갖는 단편은 서열번호: 9의 아미노산 서열 또는 서열번호: 9에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
*- 디설파이드 결합 유형 9를 갖는 단편은 서열번호: 10의 아미노산 서열 또는 서열번호: 10에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 10을 갖는 단편은 서열번호: 11의 아미노산 서열 또는 서열번호: 11에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고;
- 디설파이드 결합 유형 11을 갖는 단편은 서열번호: 12의 아미노산 서열 또는 서열번호: 12에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않고; 그리고/또는
- 디설파이드 결합 유형 12를 갖는 단편은 서열번호: 13의 아미노산 서열 또는 서열번호: 13에 대해 적어도 80%, 더 바람직하게는 85%, 더 바람직하게는 90%, 더욱 더 바람직하게는 95% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지며, 여기서 시스테인은 대체되지 않는다.
돌연변이 및 서열 동일성에 대한 추가 세부사항은 전술된 것을 주지하라.
[표 A-5]
본 발명에 기재된 비-지질화 및 지질화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 명명법 및 서열번호.
Figure 112020133079616-pat00014
*S=혈청형(1-6)(표 A-2 참고); D=디설파이드 결합 유형(표 A-4 참고); Lip=지질화: 글리세롤 및 지방산 잔기의 N-말단 부가.
또 하나의 바람직한 구현예에서, 제1 측면에 따른 폴리펩타이드는 하나 이상의 링커를 통해 연결된 적어도 2 또는 3 돌연변이체 단편을 포함한다. 링커는 두 단편을 연결하기 위해 이용되는 다소 짧은 아미노산 서열이다. 이것은 단편 상, 치료받거나 또는 백신접종될 대상체에서의 그 상호작용 또는 그 보호능에 대한 임의의 부정적 영향을 배제하도록 설계되어야 한다. 최대 21 아미노산, 특히 최대 15 아미노산, 특히 최대 12 또는 8 아미노산의 짧은 링커가 바람직하다. 더 바람직하게는 하나 이상의 링커는 단편과의 상호작용을 감소시키거나 최소화하기 위해 작은 아미노산, 예컨대 글리신, 세린 및 알라닌으로 이루어진다. 예시적인 또는 바람직한 링커에는 폴리G를 포함하거나 이로써 이루어진 링커, 예컨대(G)8(서열번호: 36), (G)12(서열번호: 37), GAGA(서열번호: 38), (GAGA)2(서열번호: 39), (GAGA)3(서열번호: 40), (GGGS)2(서열번호: 41), 또는 (GGGS)3(서열번호: 42)이 포함된다. 더 바람직한 링커는 하기 서열을 갖는 B. 부르그도르페리 s.s., 균주 B31의 OspA의 N-말단 절반의 두 개별 루프 영역(aa 65-74 및 aa 42-53, 위치 53에 D53S의 아미노산 교환을 가짐)의 융합인 "LN1" 펩타이드 링커이다:
Figure 112020133079616-pat00015
(서열번호: 184).
또 하나의 바람직한 구현예에서, 제1 측면에 따른 폴리펩타이드는 제1 측면의 바람직한 구현예에서 규정된 2 또는 3 상이한 돌연변이체 단편을 포함하는 최대 500 아미노산의 전체 크기를 갖는 폴리펩타이드; 또는 본질적으로 2 또는 3 상이한 돌연변이체 단편, 1 또는 2 링커, 그리고 선택적으로 N-말단 시스테인으로 이루어진 폴리펩타이드; 및/또는 본질적으로 2 또는 3 상이한 돌연변이체 단편, 최대 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 또는 11 아미노산, 바람직하게는 최대 10, 9, 8, 7 또는 6 아미노산, 더욱 더 바람직하게는 최대 5, 4, 3, 2 또는 1 아미노산(들)으로 이루어진 단편의 N-말단 연장부(상기 N-말단 연장부는 각 보렐리아 OspA 단편으로부터 바로 N-말단에 위치함), 및 선택적으로 N-말단 시스테인으로 이루어진 폴리펩타이드를 포함한다. N-말단 시스테인에는 선택적으로 1-10 아미노산 길이의 짧은 펩타이드 링커가 뒤따를 수 있고, 바람직하게는 N-말단 CSS 펩타이드 또는 CKQN 펩타이드(서열번호: 211)의 형태를 취한다.
제2 측면에서, 본 발명은 제1 측면에 따른 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산을 제공한다. 본 발명을 위한 용어 "핵산(들)"은 일반적으로 임의의 폴리리보뉴클레오타이드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오타이드를 나타내며, 이는 단일 및 이중-가닥 영역/형태를 포함하는 비개질 RNA 또는 DNA 또는 개질 RNA 또는 DNA일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산"은 본 발명의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포괄한다. 이 용어는 또한 코딩 및/또는 비코딩 서열을 함유할 수 있는 추가 영역과 함께, 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 단일 연속 영역 또는 불연속 영역(예를 들면, 통합 파아지, 통합 삽입 서열, 통합 벡터 서열, 통합 트랜스포존 서열에 의해 또는 RNA 편집 또는 게놈 DNA 재구성으로 인해 단속된 폴리뉴클레오타이드)을 포함하는 폴리뉴클레오타이드도 포괄한다.
당해분야의 숙련가는 유전 암호의 축중(degeneracy), 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩타이드를 인코딩하는 여러 뉴클레오타이드 서열이 존재함을 이해할 것이다. 일부 이러한 폴리뉴클레오타이드는 임의의 원상태(즉 천연 생성) 유전자의 뉴클레오타이드 서열에 대해 최소 유사성을 보유한다. 그럼에도 불구하고, 코돈 용법의 차이로 인해 변하는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들면 인간 및/또는 영장류 및/또는 E. 콜라이 코돈 선택에 대해 최적화된 폴리뉴클레오타이드가 본 발명에 의해 특히 고려된다.
원하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열은 전체적으로 또는 부분적으로 당해분야에서 잘 알려진 화학적 방법(Caruthers, M. H. 등, Nucl. Acid Res. Symp. Ser. pp. 215-223(1980), Horn 등, Nucl. Acid Res. Symp. Ser. pp. 225-232(1980))을 이용하여 합성될 수 있다. 대안적으로, 단백질 자체는 폴리펩타이드 또는 이들의 일부의 아미노산 서열을 합성하기 위해 화학적 방법을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들면, 펩타이드 합성은 다양한 고체상 기술을 이용하여 수행될 수 있고(Roberge 등, Science 269:202-204(1995)) 자동화된 합성은, 예를 들면 ASI 431 A 펩타이드 합성기(Perkin Elmer, Palo Alto, CA)를 이용해서 달성될 수 있다.
또한, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 서열은 비제한적으로 유전자 산물의 클로닝, 가공 및/또는 발현을 개질하는 변경을 포함하여, 다양한 이유로 폴리펩타이드 인코딩 서열을 변경하기 위해 당해분야에 일반적으로 공지된 방법을 이용하여 가공될 수 있다. 예를 들면, 랜덤 단편화에 의한 DNA 셔플링 및 유전자 단편 및 합성 올리고뉴클레오타이드의 PCR 재어셈블리가 뉴클레오타이드 서열을 가공하기 위해 이용될 수 있다. 또한, 부위 지향적 돌연변이유발이 신규 제한효소 부위, 당화 패턴의 변경, 코돈 선호의 변화, 스플라이스 변이체의 제조 또는 돌연변이의 도입 등을 위해 이용될 수 있다.
본 발명의 추가 측면에서, 본 발명은 프로모터가 유도되는 경우 핵산에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드가 발현되도록 유도성 프로모터에 연결된 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 바람직한 구현예에서, 벡터는 pET28b(+)이다.
본 발명의 측면 측면은 상기 벡터를 포함하며, 여기서 유도성 프로모터는 바람직하게는 성장 배지에 대한 충분한 양의 IPTG(이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노사이드)의 첨가에 의해 활성화된다. 선택적으로 이것은 0.1 내지 10mM, 0.1 내지 5mM, 0.1 내지 2.5mM, 0.2 내지 10mM, 0.2 내지 5mM, 0.2 내지 2.5mM, 0.4 내지 10mM, 1 내지 10mM, 1 내지 5mM, 2.5 내지 10mM, 2.5 내지 5mM, 5 내지 10mM의 농도이다. 대안적으로 프로모터는 온도 또는 pH 변화에 의해 유도될 수 있다.
본원에서 사용되는 핵산 분자는 일반적으로 임의의 리보핵산 분자 또는 데옥시리보핵산 분자를 나타내며, 이는 비개질 RNA 또는 DNA 또는 개질 RNA 또는 DNA일 수 있다. 따라서, 예를 들면 본원에서 사용되는 핵산 분자는 적어도 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일가닥, 또는 더욱 전형적으로, 이중-가닥, 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자를 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 핵산 분자에는 하나 이상의 개질 염기를 함유하는 상기에서 기재된 바와 같은 DNA 또는 RNA 분자가 포함된다. 따라서 안정성 또는 다른 이유를 위해 개질된 골격을 갖는 DNA 또는 RNA 분자는 본원에서 의도되는 용어인 "핵산 분자"이다. 또한, 드문 염기, 예컨대 2 예만을 들어보면 이노신, 또는 개질 염기, 예컨대 트리틸화 염기를 포함하는 DNA 또는 RNA종도 본원에서 규정된 바와 같은 핵산 분자이다. 당해분야의 숙련가에게는 공지된 여러 유용한 목적을 위해 작용하는 매우 다양한 개질이 DNA 및 RNA 분자에 대해 수행되었음이 이해될 것이다. 본원에서 사용되는 용어 핵산 분자는 핵산 분자의 이러한 화학적으로, 효소적으로 또는 대사작용으로 개질된 형태뿐만 아니라 무엇보다도 단순 및 복합 세포를 포함하는 바이러스 및 세포의 특징인 화학적 형태의 DNA 및 RNA를 또한 포괄한다. 용어 핵산 분자는 또한 종종 올리고뉴클레오타이드(들)로 불리는 짧은 핵산 분자를 포괄한다. 용어 "폴리뉴클레오타이드" 및 "핵산" 또는 "핵산 분자"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본 발명에 따른 핵산은 화학적으로 합성될 수 있다. 대안적으로, 핵산은 보렐리아에서 단리되고 당해분야의 숙련가에게 공지된 방법에 따라 개질될 수 있다. 이는 본 발명에 따른 폴리펩타이드에도 적용된다.
또한, 본 발명의 핵산은 융합 유전자를 생성하기 위해 보렐리아 조절 서열 또는 이종기원 조절 서열, 이종기원 선도 서열, 이종기원 마커 서열 또는 이종기원 코딩 서열이건 간에, 임의의 원하는 서열(들)로 표준 기술, 예컨대 클로닝을 이용하여 작용성으로 연결될 수 있다.
본 발명의 핵산 분자는 RNA의 형태, 예컨대 mRNA 또는 cRNA, 또는 DNA의 형태, 예를 들면 클로닝에 의해 수득되거나 화학적 합성 기술에 의해 또는 이들의 조합에 의해 제조되는 cDNA 및 게놈 DNA일 수 있다. DNA는 삼중-가닥, 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있다. 단일가닥 DNA는 센스 가닥으로도 공지되는 코딩 가닥일 수도 있고, 또는 안티-센스 가닥으로도 불리는 비-코딩 가닥일 수도 있다.
본 발명의 핵산은 벡터 또는 세포 내에 포함될 수 있다. 벡터는 벡터가 복제 가능하고 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열로 인코딩되는 단백질을 발현할 수 있도록 상기-언급된 핵산을 포함할 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드의 재조합적 제조를 위해, 숙주 세포는 본 발명의 발현 시스템 또는 그의 일부 또는 핵산을 도입하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 숙주 세포 내로의 핵산 도입은 여러 표준 실험실 매뉴얼, 예컨대 [Davis 등, BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY(1986) 및 Sambrook 등, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989)]에 기재된 방법, 예컨대 칼슘 포스페이트 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 트랜스벡션(transvection), 미세주입, 양이온성 지질-매개 형질감염, 전기천공, 콘주게이션, 형질도입, 스크레이퍼 로딩, 탄도 도입 및 감염에 의해 시행될 수 있다.
적절한 숙주의 대표적인 예에는 그람 음성 박테리아 세포, 예컨대 E. 콜라이, 아시네토박터, 악티노바실러스, 보데텔라, 브루셀라, 캠필로박터, 시아노박테리아, 엔테로박터, 어위니아, 프란시셀라, 헬리코박터, 헤모필러스, 클렙시엘라, 레지오넬라, 모락셀라, 나이세리아, 파스튜렐라, 프로테우스, 슈도모나스, 살모넬라, 세라티아, 시겔라, 트레포네마, 비브리오, 예르시니아의 세포가 포함된다. 일 구현예에서, 숙주 세포는 에스케리치아 콜라이 세포이다. 바람직한 구현예에서, 숙주 세포는 E. 콜라이 BL21(DE3) 세포 또는 E. 콜라이 BL21 Star™(DE3) 세포이다.
대안적으로 그람 양성 박테리아 세포가 또한 사용될 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드를 제조하기 위해 매우 다양한 발현 시스템이 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 벡터는 박테리아 플라스미드에서 유도된다. 일반적으로 숙주 내 폴리뉴클레오타이드의 유지, 증식 또는 발현 및/또는 폴리펩타이드의 발현에 적당한 임의의 시스템 또는 벡터가 이와 관련하여 발현을 위해 사용될 수 있다. 적절한 DNA 서열은 임의의 다양한 공지된 일상적 기술, 예컨대 [Sambrook 등, MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL(상기)]에 나타낸 것에 의해 발현 시스템 내로 삽입될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 세포는 선택적 압력, 예컨대 항생제, 바람직하게는 카나마이신의 존재 하에 성장된다. 또 하나의 구현예에서, 세포는 항생제의 부재 하에 성장된다.
매우 다양한 발현 벡터가 본 발명에 따른 폴리펩타이드를 발현하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로 숙주 내에서 핵산을 유지, 증식 또는 발현하거나 폴리펩타이드를 발현하기 위해 적당한 임의 벡터가 이와 관련하여 발현을 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 상기 측면에 따르면, 벡터는, 예를 들면 플라스미드 벡터, 단일- 또는 이중-가닥 파아지 벡터 또는 단일- 또는 이중-가닥 RNA 또는 DNA 바이러스 벡터일 수 있다. 본원에 개시된 원료 플라스미드는 시판되거나, 공공연하게 이용가능하거나, 또는 널리 공지된 공개 절차의 일상적 적용에 의해 이용가능한 플라스미드로부터 구성될 수 있다. 특정 측면에서, 벡터 중에 바람직한 것은 본 발명에 따른 핵산 분자 및 폴리펩타이드의 발현을 위한 것들이다. 숙주 세포에서의 핵산 구축물은 재조합 서열에 의해 인코딩되는 유전자 산물을 제조하기 위해 종래의 방식으로 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 종래의 펩타이드 합성기에 의해 합성적으로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 적절한 숙주 세포의 대표적인 예에는 박테리아, 예컨대 스트렙토코쿠스, 스타필로코쿠스, E. 콜라이, 스트렙토마이세스 및 바실러스 서브틸리스; 진균, 예컨대 효모 및 아스페르길루스; 곤충 세포, 예컨대 드로소필라 S2 및 스포도프테라 Sf9 세포; 포유동물 세포, 예컨대 CHO, COS, HeLa, C127, 3T3, BHK, 293 또는 Bowes 흑색종 세포; 및 식물 세포가 포함된다. 본 발명의 DNA 구조체에서 유도된 RNA를 이용하여 이러한 단백질을 제조하기 위해 무세포 번역 시스템도 이용될 수 있다.
실제로 숙주 세포 내에 본 발명에 따른 벡터를 도입하여 원하는 아미노산 서열을 발현하기 위해, 벡터는 본 발명에 따른 핵산 서열에 부가하여, 발현 조절을 위한 다른 서열(예를 들면 프로모터 서열, 종결자 서열 및 인핸서 서열) 및 미생물, 곤충 세포, 동물 배양 세포 등을 선택하기 위한 유전자 마커(예를 들면, 네오마이신 내성 유전자 및 카나마이신 내성 유전자)를 함유할 수 있다. 또한, 벡터는 반복 형태로(예를 들면 일렬로) 본 발명에 따른 핵산 서열을 함유할 수 있다. 벡터는 유전공학 분야에서 종래 사용된 절차 및 방식에 근거하여 구성될 수 있다.
숙주 세포는 적절한 배지 중에 배양될 수 있고, 본 발명에 따른 단백질은 배양 산물로부터 수득될 수 있다. 본 발명에 따른 단백질은 종래 방식으로 배양 배지에서 회수되고 정제될 수 있다.
본 발명의 근원적인 문제는 또한 하기 단계를 특징으로 하는, 상기에서 규정된 바와 같은 폴리펩타이드의 제조 방법에 의해 해결된다:
a) 폴리펩타이드를 인코딩하는 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계,
b) 숙주 세포를 상기 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 성장시키는 단계,
c) 상기 숙주 세포를 균질화하는 단계, 및
d) 숙주 세포 균질물에 정제 단계를 행하는 단계.
본 발명은 또한, 하기 단계를 특징으로 하는, 상기에서 규정된 바와 같은 폴리펩타이드의 제조 방법에 관한 것이다:
a) 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산을 벡터 내로 도입하는 단계,
b) 상기 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계,
c) 상기 숙주 세포를 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 성장시키는 단계,
d) 상기 숙주 세포를 균질화하는 단계,
e) 상 분리에 의해 폴리펩타이드를 지질상에 농축하는 단계, 및
f) 겔 여과 칼럼에 걸쳐 추가 정제하는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 특징으로 하는, 상기에서 규정된 바와 같은 폴리펩타이드의 제조 방법에 관한 것이다:
a) 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산을 벡터 내로 도입하는 단계,
b) 상기 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계,
c) 상기 숙주 세포를 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 성장시키는 단계,
d) 상기 숙주 세포를 균질화하는 단계,
e) 상 분리에 의해 폴리펩타이드를 지질상에 농축하는 단계,
g) 겔 여과 칼럼에 걸쳐 추가 정제하는 단계, 및
h) 선택적으로, 버퍼 교환 칼럼을 통해 추가 가공하는 단계.
본 발명의 근원적인 문제는 추가 측면에서 항체, 또는 이들의 적어도 효과적인 부분에 의해 해결되며, 이는 상기에서 규정된 바와 같이 폴리펩타이드의 적어도 선택적인 부분에 특이적으로 결합한다.
바람직한 구현예에서, 항체는 모노클로날 항체이다.
또 하나의 바람직한 구현예에서, 상기 효과적인 부분은 Fab 단편, F(ab) 단편, F(ab)N 단편, F(ab)2 단편 또는 Fv 단편을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 구현예에서, 항체는 키메라 항체이다.
또 하나의 구현예에서, 항체는 인간화 항체이다.
바람직한 측면에서, 본 발명의 항체는 본 발명의 돌연변이체 OspA 단편 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하지만 상응하는 야생형 OspA 단편 폴리펩타이드에는 결합하지 않는다. 더 바람직한 측면에서, 항체는 본 발명의 돌연변이체 OspA 단편의 디설파이드 결합에 특이적으로 결합한다.
용어 "특이성"은 특정한 항원-결합 분자 또는 항원-결합 단백질(예컨대 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩타이드) 분자가 결합할 수 있는 여러 상이한 유형의 항원 또는 항원 결정기를 나타낸다. 항원-결합 단백질의 특이성은 친화도 및/또는 결합능에 근거하여 결정될 수 있다. 항원-결합 단백질과의 항원 해리에 대한 평형 상수(KD)로 나타내는 친화도는 항원-결합 단백질에서 항원-결합 부위 및 항원 결정기 간 결합 강도의 척도이다: KD값이 적을수록, 항원 결정기 및 항원-결합 분자 간 결합 강도가 강하다(대안적으로 친화도는 1/KD인 친화도 상수(KA)로도 표현될 수 있다).
숙련가에게 자명할 바와 같이(예를 들면 본원의 추가 개시내용에 근거하여), 친화도는 특정 관심 항원에 따라 자체 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 결합능은 항원-결합 분자(예컨대 본 발명의 항체 또는 이들의 효과적인 부분) 및 관련 항원 간 결합 강도의 척도이다. 결합능은 항원-결합 분자 상 그의 항원 결합 부위 및 항원 결정기 간의 친화도 그리고 항원-결합 분자 상에 존재하는 관련 결합 부위의 수 둘 다에 관련된다. 전형적으로, 항원-결합 단백질(예컨대 본 발명의 항체 또는 이들의 효과적인 부분)은 그의 항원에 10-5 내지 10-12 몰/리터 이하, 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/리터 이하, 더 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/리터의 해리 상수(KD)(즉 105 내지 1012 리터/몰 이상, 바람직하게는 107 내지 1012 리터/몰 이상, 그리고 더 바람직하게는 108 내지 1012 리터/몰의 결합 상수(KA))로 결합할 것이다. 104 몰/리터 초과의 임의의 KD 값(또는 104 M-1 미만의 임의의 KA 값) 리터/몰은 일반적으로 비-특이적 결합을 시사하는 것으로 간주된다. 바람직하게는 본 발명의 1가 면역글로불린 서열은 원하는 항원에 500nM 미만, 바람직하게는 200nM 미만, 더 바람직하게는 10nM 미만, 예컨대 500pM 미만의 친화도로 결합할 것이다. 항원-결합 단백질의 항원 또는 항원 결정기에 대한 특이적 결합은, 예를 들면 Scatchard 분석 및/또는 경쟁적 결합 검정, 예컨대 방사선면역검정(RIA), 효소 면역검정(EIA) 및 샌드위치 경쟁 검정, 그리고 당분야에 자체 공지된 이들의 상이한 변형뿐만 아니라 본원에 언급된 다른 기술을 포함하는 자체 공지된 임의의 적당한 방식으로 결정될 수 있다.
해리 상수는 숙련자에게 명확할 것과 같이, 실제 또는 겉보기 해리 상수 일 수 있다. 해리 상수의 결정 방법은 숙련가에게 명확할 것이며, 예를 들면 본원에 언급된 기술이 포함된다. 이런 점에서, 10-4 몰/리터 또는 10-3 몰/리터 초과(예를 들면, 10-2 몰/리터)의 해리 상수를 측정하는 것이 불가능할 수 있음이 또한 명확할 것이다. 선택적으로 숙련가에게 명확할 바와 같이, (실제 또는 겉보기) 해리 상수는 관계식 [KD = 1/KA]에 의해 (실제 또는 겉보기) 결합 상수(KA)에 근거하여 계산될 수 있다.
친화도는 분자 상호작용의 강도 또는 안정성을 나타낸다. 친화도는 통상적으로 KD, 또는 해리 상수로 주어지며, 이는 몰/리터(또는 M)의 단위를 갖는다. 친화도는 또한 결합 상수, KA로 표현될 수 있고, 이는 1/KD과 같으며 (몰/리터)-1(또는 M-1)의 단위를 갖는다. 본 명세서에서, 2 분자(예컨대 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 또는 폴리펩타이드 및 그의 의도된 표적) 간 상호작용의 안정성은 주로 그 상호작용의 KD 값에 관하여 표현될 것이다; 숙련가에게는 KA = 1/KD의 관계의 견지에서 그 KD 값에 의한 분자 상호작용 강도의 특정이 또한 상응하는 KA 값을 계산하는 데에도 사용될 수 있음이 명확하다. KD 값은 잘 알려진 관계 DG = RT.ln(KD)(DG = -RT.ln(KA)와 동일함)(식 중, R은 기체 상수와 같고, T는 절대 온도와 같으며, ln은 자연 로그를 나타냄)에 의해 결합의 자유 에너지(DG)와 관련되므로, 또한 열역학적 관점에서 분자 상호작용의 강도를 나타낸다.
유의미한(예로, 특이적인) 것으로 간주되는 생물학적 상호작용에 대한 KD는 전형적으로 10-10 M(0.1nM) 내지 10-5 M(10000nM)의 범위이다. 상호작용이 더 강할수록, 그 KD는 더 낮다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체의 KD는 10-12 M 내지 10-5 M, 바람직하게는 10-6 미만, 바람직하게는 10-7 미만, 바람직하게는 10-8 M 미만, 바람직하게는 10-9 M 미만, 더 바람직하게는 10-10 M 미만, 더욱 더 바람직하게는 10-11 M 미만, 가장 바람직하게는 10-12 M 미만이다.
KD는 또한 kon으로 표시되는 그 회합 속도에 대해 koff로 표시되는 복합체의 해리 속도 상수의 비로 표현될 수 있다(따라서 KD = koff/kon 및 KA = kon/koff). 오프율 koff는 s-1의 단위를 가진다(식 중, s는 초에 대한 SI 단위 표기법임). 회합 속도 kon은 M-1s-1의 단위를 갖는다. 회합 속도는 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1로 변할 수 있고, 2분자 상호작용에 대한 확산-한계 회합 속도 상수에 접근한다. 오프율은 관계 t1/2 = ln(2)/koff에 의해 주어진 분자 상호작용의 반감기에 관련된다. 오프율은 10-6 s-1(수 일의 t1/2을 갖는 거의 비가역적인 복합체) 내지 1 s-1(t1/2 = 0.69s)로 변할 수 있다.
2분자 간 분자 상호작용의 친화도는 자체 공지된 상이한 기술, 예컨대 하나의 분자가 바이오센서 칩 상에 고정되고 다른 분자가 유동 조건 하에 고정된 분자에 걸쳐 통과되어 kon, koff 측정치, 그리고 이에 따라 KD(또는 KA) 값을 산출하는 잘 알려진 표면 플라즈몬 공명(SPR) 바이오센서 기술(예를 들면 Ober 등, Intern. Immunology, 13, 1551-1559, 2001 참고)을 통해 측정될 수 있다. 이는, 예를 들면 널리 공지된 BIACORE 기기를 이용해서 수행될 수 있다.
숙련가에게는 측정 공정이 어떻게든, 예를 들면 하나의 분자의 바이오센서 상 코팅에 관련된 인공물에 의해 관련 분자의 고유 결합 친화도에 영향을 미치는 경우, 측정된 KD가 겉보기 KD에 상응할 수 있음이 또한 명확할 것이다. 또한, 겉보기 KD는 하나의 분자가 다른 분자에 대해 1 초과의 인식 부위를 함유하는 경우 측정될 수 있다. 이러한 상황에서, 측정된 친화도는 2분자에 의한 상호작용의 결합능에 의해 영향받을 수 있다.
친화도 평가를 위해 사용될 수 있는 또 하나의 접근법은 Friguet 등의 2-단계 ELISA(효소-결합 면역흡착 검정) 절차(J. Immunol. Methods, 77, 305-19, 1985)이다. 상기 방법은 용액상 결합 평형 측정을 확립하고 지지체, 예컨대 플라스틱 상 하나의 분자의 흡착에 관해 가능한 인공물을 배제한다. 그러나, KD의 정확한 측정은 상당히 노동 집약적일 수 있다; 따라서 2분자의 결합 강도를 평가하기 위해 겉보기 KD 값이 종종 결정된다. 모든 측정이 일치된 방식으로(예를 들면 검정 조건을 변화 없이 유지하여) 수행되는 한, 겉보기 KD 측정은 실제 KD의 근사치이며 따라서 본 문서에서 KD로 사용될 수 있으며, 겉보기 KD가 동일한 중요성 또는 관련성으로 취급되어야 함이 주지되어야 한다.
마지막으로 여러 상황에서, 숙련된 과학자는 이것이 일부 참조 분자에 대한 결합 친화도를 결정하기 편리하다고 판단할 수 있음이 주지되어야 한다. 예를 들면, 분자 A 및 B 간의 결합 강도를 평가하기 위해, 예로 B에 결합하는 것으로 공지되어 있고 ELISA 또는 유세포측정 또는 다른 포맷에서 용이한 검출을 위해 형광단 또는 발색단기 또는 다른 화학적 모이어티, 예컨대 바이오틴(형광 검출을 위한 형광단, 흡광 검출을 위한 발색단, 스트렙타비딘-매개된 ELISA 검출을 위한 바이오틴)으로 적당히 라벨링된 참조 분자 C를 사용할 수 있다. 전형적으로, 참조 분자 C는 고정 농도로 유지되며, A의 농도는 B의 주어진 농도 또는 양에 대해 변한다. 그 결과, 억제 농도(IC)50 값은 A의 부재 시 C에 대해 측정된 신호가 절반이 되는 A의 농도에 상응하여 수득된다. 참조 문자의 KD인 제공되는 KDref는 공지되어 있을 뿐만 아니라 참조 분자의 총 농도 cref, 상호작용 A-B에 대한 겉보기 KD는 다음 공식에서 수득될 수 있다: KD = IC50/(1 + cref/KDref). cref << KDref인 경우, KD
Figure 112020133079616-pat00016
IC50임을 주지하라. IC50의 측정이 비교되는 결합제에 대해 일치된 방식으로 수행되는 경우(예로, cref가 고정 유지되면), 분자 상호작용의 강도 또는 안정성이 IC50에 의해 평가될 수 있고, 상기 측정은 본 텍스트를 통해 KD 또는 겉보기 KD와 동등하게 판단된다.
본 발명의 또 하나의 측면은 하이브리도마 세포주에 관한 것으로, 이는 상기에서 규정된 바와 같이 항체를 제조한다.
본 발명의 근원적인 문제는 또한 하기 단계를 특징으로 하는, 상기에서 규정된 바와 같은 항체의 제조 방법에 의해 해결된다:
a) 상기에서 규정된 바와 같은 폴리펩타이드를 상기 동물에 투여하여 비인간 동물에서 면역 반응을 개시하는 단계,
b) 항체 함유 체액을 상기 동물에서 제거하는 단계, 및
c) 상기 항체 함유 체액에 추가 정제 단계를 행하여 항체를 제조하는 단계.
본 발명은 또한 하기 단계를 특징으로 하는, 상기에서 규정된 바와 같은 항체의 제조 방법에 관한 것이다:
a) 상기에서 규정된 바와 같은 폴리펩타이드를 비인간 동물에 투여하여 상기 동물에서 면역 반응을 개시하는 단계,
b) 비장 또는 비장 세포를 상기 동물에서 제거하는 단계,
c) 상기 비장 또는 비장 세포의 하이브리도마 세포를 제조하는 단계,
d) 상기 폴리펩타이드에 특이적인 하이브리도마 세포를 선택하고 클로닝하는 단계,
e) 상기 클로닝된 하이브리도마 세포를 배양하여 항체를 제조하는 단계, 및
f) 선택적으로 추가 정제 단계를 수행하는 단계.
본 발명의 또 하나의 측면은 상기 명시된 바와 같은 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관련된 것이다.
또 하나의 측면은 보렐리아 종, 더 바람직하게는 B. 부르그도르페리 s.s., B. 아프젤리이, B. 바바리엔시스 및 B. 가리니이를 포함하는 본원에서 개시된 바와 같은 병원체 보렐리아 종의 감염의 치료 또는 예방을 위한 상기에서 규정된 바와 같은 항체 또는 상기에서 규정된 바와 같은 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
또 하나의 측면에서 본 발명의 근원적인 문제는 보렐리아 종, 더 바람직하게는 B. 부르그도르페리 s.s., B. 아프젤리이, B. 바바리엔시스 및 B. 가리니이를 포함하는 본원에서 개시된 바와 같은 병원체 보렐리아 종의 감염의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물의 제조를 위해 상기에서 규정된 바와 같은 항체의 사용에 의해 해결된다.
제3 측면에서, 본 발명은 제1 측면에 따른 폴리펩타이드 및/또는 제2 측면에 따른 핵산을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 약제학적 조성물은 선택적으로 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제, 예컨대 버퍼 물질, 안정제 또는 추가 활성 성분, 특히 약제학적 조성물 및/또는 백신 제조에 연관되어 공지된 성분을 함유할 수 있다. 바람직하게는 약제학적 조성물은 약제, 특히 백신으로서 또는 보렐리아 종, 더 바람직하게는 B. 부르그도르페리 s.s., B. 아프젤리이, B. 바바리엔시스 및 B. 가리니이를 포함하는 본원에서 개시된 바와 같은 병원체 보렐리아 종 및/또는 백신에 그 항원이 포함된 다른 병원체에 의해 야기된 감염의 예방 또는 치료를 위해 사용된다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은 추가로 아쥬반트를 포함한다. 본 발명의 공정을 이용하여 제조되는 박테리아 독소 또는 콘주게이트와 혼합될 적당한 아쥬반트의 선택은 당해분야 숙련가의 지식 내에 속한다. 적당한 아쥬반트에는 알루미늄 염, 예컨대 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트가 포함되지만, 또한 다른 금속 염, 예컨대 칼슘, 마그네슘, 철 또는 아연의 염일 수 있거나 또는 아실화된 티로신, 또는 아실화된 당, 양이온성으로 또는 음이온성으로 유도체화 당류, 또는 폴리포스파젠의 불용성 현탁액일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 약제학적 조성물은 알루미늄 하이드록사이드를 아쥬반트로 포함한다.
추가 구현예에서, 약제학적 조성물은 바람직하게는 다중양이온성 폴리머, 특히 다중양이온성 펩타이드, 면역자극 올리고데옥시뉴클레오타이드(ODNs), 특히 올리고(dIdC)13(서열번호: 32), 적어도 2 LysLeuLys 모티프를 함유하는 펩타이드, 특히 펩타이드
Figure 112020133079616-pat00017
(서열번호: 33), 신경활성 화합물, 특히 인간 성장 호르몬, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트, 프로인트 완전 또는 불완전 아쥬반트, 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 면역자극 물질을 추가로 포함한다. 바람직하게는 면역자극 물질은 다중양이온성 폴리머 및 면역자극 데옥시뉴클레오타이드 또는 적어도 2 LysLeuLys 모티프를 함유하는 펩타이드 및 면역자극 데옥시뉴클레오타이드의 조합, 바람직하게는
Figure 112020133079616-pat00018
(서열번호: 33) 및 올리고(dIdC)13(서열번호: 32)의 조합이다. 더 바람직하게는 상기 다중양이온성 펩타이드는 폴리아르기닌이다.
추가 구현예에서, 약제학적 조성물은 나트륨 포스페이트, 염화나트륨, L-메티오닌, 수크로오스 및 pH 6.7 +/- 0.2의 Tween-20을 포함한다. 바람직하게는 약제학적 조성물은 또한 바람직하게는 0.15% 농도의 알루미늄 하이드록사이드를 포함한다.
일 구현예에서, 제형은 5mM 내지 50mM 나트륨 포스페이트, 100 내지 200mM 염화나트륨, 5mM 내지 25mM L-메티오닌, 2.5% 내지 10% 수크로오스, 0.01% 내지 0.1% Tween 20 및 0.1% 내지 0.2%(w/v) 알루미늄 하이드록사이드를 포함한다. 더 바람직하게는, 제형은 10mM 나트륨 포스페이트, 150mM 염화나트륨, 10mM L-메티오닌, 5% 수크로오스, 0.05% Tween 20 및 0.15%(w/v) 알루미늄 하이드록사이드(pH 6.7 ± 0.2)를 포함한다. 더욱 더 바람직하게는, 제형은 본 발명에 따른 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3 돌연변이체 OspA 이종이량체를 포함한다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은 3 이종이량체, 바람직하게는 Lip-S1D1-S2D1(서열번호: 186), Lip-S4D1-S3D1(서열번호: 194) 및 Lip-S5D1-S6D1(서열번호: 190)을 포함한다. 바람직하게는, 3 이종이량체는 1:2:1, 1:3:1, 1:1:2, 1:1:3, 1:2:2, 1:2:3, 1:3:2, 1:3:3, 2:1:1, 2:1:2, 2:1:3, 2:2:3, 2:2:1, 2:3:1, 2:3:2, 2:3:3, 3:1:1, 3:1:2, 3:1:3, 3:2:1, 3:2:2, 3:2:3, 3:3:1, 3:3:2, 가장 바람직하게는 1:1:1의 몰비로 혼합된다.
추가 구현예에서, 약제학적 조성물은 2 이종이량체, 바람직하게는 Lip-S1D1-S2D1(서열번호: 186) 및 Lip-S5D1-S6D1(서열번호: 190), Lip-S1D1-S2D1(서열번호: 186) 및 Lip-S4D1-S3D1(서열번호: 194) 또는 Lip-S4D1-S3D1(서열번호: 194) 및 Lip-S5D1-S6D1(서열번호: 190)을 1:2, 1:3, 2:1, 3:1, 2:3, 3:2, 바람직하게는 1:1의 몰비로 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물 또는 백신은 적어도 하나의 추가 항원을 추가로 포함한다(본원에서 "조합 백신"으로 통칭됨). 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 추가 항원은 라임 보렐리아증을 야기하는 보렐리아 종에서 유도된다. 다양한 측면에서, 적어도 하나의 추가 항원은 또 하나의 병원체, 바람직하게는 진드기 매개 병원체에서 유도된다. 추가 측면에서, 병원체는 록키산 홍반열, 인간 과립구성 에르리히증(HGE), 센네츠 열병, 인간 단구성 에를리히증(HME), 아나플라즈마증, 부톤뇌즈열, 리케차 파르케리 리케차병, 남부 진드기-연관 발진병(STARI), 헬베티카 홍반열, 364D 리케차병, 아프리카인 홍반열, 재발성 열병, 야토병, 콜로라도 진드기 열병, 진드기 매개 뇌염(TBE, FSME로도 알려짐), 크림-콩고 출혈열, Q 열병, 옴스크 출혈열, 키아사누르 포레스트 질환, 포와산 뇌염, 하트랜드 바이러스 질환 또는 바베스열원충증을 일으킨다. 추가 측면에서, 질환은 일본 뇌염이다.
추가 구현예에서, 적어도 하나의 추가 항원은 보렐리아 헤름시이, 보렐리아 파르케리, 보렐리아 두토니, 보렐리아 미야모토이, 보렐리아 투리카태, 리케차 리케트시, 리케차 아우스트랄리스, 리케차 코노리, 리케차 헬베티카, 프란시셀라 툴라렌시스, 아나플라즈마 파고사이토필럼, 에를리히아 센네츠, 에를리히아 챠페엔시스, 콕시엘라 부르네티이 및 보렐리아 로네스타리, 진드기 매개 뇌염 바이러스(TBEV aka FSME 바이러스), 콜로라도 진드기열 바이러스(CTFV), 크림-콩고 출혈열 바이러스(CCHFV), 옴스크 출혈열 바이러스(OHFV), 일본 뇌염 바이러스(JEV) 및 바베시아 spp.을 포함하는 군으로부터 선택된 벡터 매개, 바람직하게는 진드기 매개 병원체에서 유도된다.
또 하나의 측면에서, 본 발명의 조합 백신은 적어도 제2 백신 조성물과 조합된 본원에서 논의된 임의의 백신 조성물을 포함한다. 일부 측면에서, 제2 백신 조성물은 벡터 매개 질환, 바람직하게는 진드기 매개 질환에 대해 보호한다. 다양한 측면에서, 제2 백신 조성물은 보렐리아 감염 또는 라임 보렐리아증에 대한 면역화에 상용성인 계절성 면역접종 일정을 갖는다. 다른 측면에서, 조합 백신은 이들 질환이 우세한 지리적 위치에서 사용하기 위한 다중 질환의 예방에 유용하다.
일 측면에서, 제2 백신 조성물은 진드기 매개 뇌염 백신, 일본 뇌염 백신, 및 록키산 홍반열 백신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 백신이다. 바람직한 측면에서, 백신 조성물은 FSME-IMMUN®(Baxter), Encepur®(Novartis Vaccines), EnceVir®(Microgen NPO) 또는 TBE Moscow 백신®(Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides of Russian Academy of Medical Sciences)이다. 또 하나의 바람직한 측면에서, 백신 조성물은 IXIARO®/JESPECT®(Valneva SE), JEEV®(Biological E, Ltd.) 또는 IMOJEV®(Sanofi Pasteur)이다.
추가로, 약제학적 조성물을 포함하는 백신이 제공되며, 상기 백신은 약제학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 부형제는 L-메티오닌이다.
본 발명에는 또한 면역원성 조성물이 포함된다. 일부 측면에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 본원에서 논의된 임의의 조성물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 다양한 측면에서, 면역원성 조성물은 외표면 단백질 A(OspA) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 생산을 유도하는 특성을 갖는다. 어떤 측면에서, 면역원성 조성물은 보렐리아에 특이적으로 결합하는 항체의 생산을 유도하는 특성을 갖는다. 특정한 측면에서, 면역원성 조성물은 보렐리아를 중화시키는 항체의 생산을 유도하는 특성을 갖는다. 일부 측면에서, 항체는 동물에 의해 생산된다. 추가 측면에서, 동물은 포유동물이다. 추가 측면에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 약제학적 조성물을 함유하는 백신 제제는 보렐리아 감염에 민감한 포유동물을 보호하기 위해 또는 보렐리아 감염된 포유동물을 치료하기 위해, 상기 백신을 전신 또는 점막 경로를 통해 투여하여 사용될 수 있다. 이들 투여에는 근육내, 복강내, 진피내 또는 피하 경로를 통한; 또는 경구/영양, 호흡 또는 비뇨생식기에 대한 점막 투여를 통한 주사가 포함될 수 있다. 본 발명의 백신은 단회 용량으로 투여될 수 있지만, 이들의 성분은 함께 동시에 또는 상이한 시간에 공-투여될 수도 있다.
본 발명의 일 측면에서, 선택적으로 동결건조된 형태로 본 발명의 약제학적 조성물을 함유하는 바이알, 및 본원에서 기재된 바와 같은 아쥬반트를 함유하는 바이알을 추가로 포함하는 백신 키트가 제공된다. 본 발명의 상기 측면에서, 아쥬반트는 동결건조된 면역원성 조성물을 재구성하기 위해 사용될 것임이 구상된다. 추가 측면에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 바이알, 바람직하게는 주사기에서 사전-혼합될 수 있다.
본 발명의 추가 측면은 숙주에 본 발명의 약제학적 조성물 또는 백신 또는 키트의 면역보호량을 투여하는 것을 포함하는, 보렐리아 감염의 예방 또는 치료 방법이다. 일 구현예에서, 숙주에 본 발명의 약제학적 조성물 또는 백신 또는 키트의 면역보호량을 투여하는 것을 포함하는, 보렐리아 감염의 일차 및/또는 재발 에피소드의 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 추가 측면은 보렐리아 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 약제학적 조성물이다. 일 구현예에서, 보렐리아 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 추가 측면은 보렐리아 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 본 발명의 약제학적 조성물 또는 백신 또는 키트의 용도이다. 일 구현예에서, 보렐리아 감염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에서 사용하기 위한 본 발명의 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명에는 또한 대상체에서 면역학적 반응을 유도하기 위한 방법이 포함된다. 다양한 측면에서, 이러한 방법은 면역학적 반응을 유도하는데 효과적인 양으로 상기 대상체에게 본원에서 논의된 임의의 면역원성 조성물 또는 백신 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 어떤 측면에서, 면역학적 반응은 항-OspA 항체의 생산을 포함한다.
본 발명에는 대상체에서 보렐리아 감염 또는 라임 보렐리아증의 예방 또는 치료 방법이 포함된다. 다양한 측면에서, 이러한 방법은 보렐리아 감염 또는 라임 보렐리아증을 예방하거나 치료하는데 효과적인 양으로 대상체에 본원에서 논의된 임의의 백신 조성물 또는 본원에서 논의된 임의의 백신 조합을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명에는 약제의 제조를 위한 본 발명의 폴리펩타이드, 핵산, 항체, 약제학적 조성물 또는 백신의 용도가 포함된다. 다른 관련된 측면도 본 발명에서 제공된다.
본원에서 용어 "포함하고", "포함한다(복수형)(comprise)" 및 "포함한다(단수형)(comprises)"는 본 발명자들에 의해 모든 경우 각각 용어 "이루어진", "이루어진다(복수형)(consist of)" 및 "이루어진다(단수형)(consists of)"와 선택적으로 치환가능하도록 의도된다. 용어 "포함한다(comprises)"는 "함유한다(includes)"를 의미한다. 따라서 문맥 상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함한다(단수형)" 및 변형, 예컨대 "포함한다(복수형)" 및 "포함하고"는 언급된 화합물 또는 조성물(예를 들면, 핵산, 폴리펩타이드, 항체) 또는 단계, 또는 화합물 또는 단계의 그룹의 포함을 시사하지만 임의의 다른 화합물, 조성물, 단계, 또는 이들의 그룹의 배제를 시사하지는 않음이 이해될 것이다. 약어 "예로(e.g.)"는 라틴어 exempli gratia에서 유도되며, 본원에서 비-제한적인 예를 나타내기 위해 사용된다. 따라서 약어 "예로"는 용어 "예를 들면"의 동의어이다.
본 발명의 "백신 조성물"에 관련된 구현예는 또한 본 발명의 "약제학적 조성물"에 관련된 구현예에 적용 가능하며, 그 반대도 마찬가지이다.
달리 설명되지 않는 경우, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 개시내용이 속하는 당해분야의 숙련가에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 분자 생물학에서 일반적인 용어들의 정의는 [Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994(ISBN 0-19-854287-9); Kendrew 등(eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994(ISBN 0-632-02182-9); 및 Robert A. Meyers(ed.), Molecular Biology and Biotechnology; a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995(ISBN 1-56081-569-8)]에서 확인할 수 있다.
단수 용어들에는 문맥 상 명확히 달리 나타내지 않는 한 복수의 지시대상이 포함된다. 유사하게, 단어 "또는"은 문맥 상 명확히 달리 나타내지 않는 한 "및"이 포함되는 것이다. 용어 "복수"는 2 이상을 나타낸다. 또한, 핵산 또는 폴리펩타이드에 있어서 제공되는 모든 염기 크기 또는 아미노산 크기, 및 모든 분자량 또는 분자 질량 값은 근사치이며 설명을 위해 제공됨이 또한 이해되어야 한다. 추가로, 물질, 예컨대 항원의 농도 또는 수준에 대해 제공되는 수치 한계는 근사치일 수 있다.
그 다양한 구현예에서 본 발명에 따른 폴리펩타이드, 또는 본 발명에 따른 핵산 분자를 위해 바람직한 담체 또는 부형제는 면역자극 화합물, 예컨대 본 발명에 따른 폴리펩타이드 또는 이들의 코딩 핵산 분자에 대한 면역 반응을 추가 자극하기 위한 아쥬반트이다.
본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 아쥬반트에는 비제한적으로 하기가 포함된다:
A. 미네랄-함유 조성물
본 발명의 아쥬반트로 사용하기 적당한 미네랄 함유 조성물에는 미네랄 염, 예컨대 알루미늄 염 및 칼슘 염이 포함된다. 본 발명에는 미네랄 염, 예컨대 하이드록사이드(예를 들면, 옥시하이드록사이드), 포스페이트(예를 들면, 하이드록시포스페이트, 오르토포스페이트), 설페이트 등 또는 상이한 미네랄의 혼합물이 포함되며, 화합물은 임의 형태(예를 들면, 겔, 결정형, 비결정형 등)를 취하고 흡착된 것이 바람직하다. 미네랄 함유 조성물은 또한 금속 염의 입자로 제형화될 수 있다.
유용한 알루미늄 포스페이트 아쥬반트는 PO4/Al 몰비 0.84 내지 0.92의 비결정형 알루미늄 하이드록시포스페이트이다. 또 하나의 유용한 알루미늄-기반 아쥬반트는 알루미늄 하이드록사이드 + 모노포스포릴 지질 A(MPL)의 조합인 AS04이다.
B. 오일 에멀젼
본 발명에서 아쥬반트로 사용하기 적당한 오일 에멀젼 조성물에는 수중 스쿠알렌 에멀젼, 예컨대 MF59(5% 스쿠알렌, 0.5% Tween 80, 및 0.5% Span 85, 미세유동화기를 이용하여 서브마이크론 입자로 제형화됨), AS03(스쿠알렌, DL-α-토코페롤 및 Tween 80) 및 AF03(스쿠알렌, Montane®80 및 Eumulgon®B1 PH)이 포함된다. 완전 프로인트 아쥬반트(CFA) 및 불완전 프로인트 아쥬반트(IFA)도 사용될 수 있다.
유용한 수중유 에멀젼에는 전형적으로 적어도 하나의 오일 및 적어도 하나의 계면활성제가 포함되며, 오일(들) 및 계면활성제(들)은 생분해성(대사가능) 및 생체적합성이다. 에멀젼 중 오일 소적은 일반적으로 1㎛ 직경 미만이며, 이러한 작은 크기는 안정한 에멀젼을 제공하기 위한 미세유동화기로 달성된다. 220nm 미만 크기의 소적은 필터 멸균을 거칠 수 있으므로 바람직하다.
에멀젼은 오일, 예컨대 동물(예컨대 어류) 또는 식물성 공급원 유래의 것들을 포함할 수 있다. 식물성 오일에 대한 공급원에는 넛, 종자 및 알갱이가 포함된다. 가장 통상적으로 이용가능한 땅콩 오일, 대두 오일, 코코넛 오일, 및 올리브 오일이 넛 오일을 예시한다. 호호바 오일, 예를 들면 호호바 콩에서 수득된 것이 사용될 수 있다. 종자 오일에는 잇꽃 오일, 목화씨 오일, 해바라기씨 오일, 참깨씨 오일 등이 포함된다. 알갱이 그룹에서는 옥수수 오일이 가장 쉽게 이용가능하지만, 다른 곡물 알갱이, 예컨대 밀, 귀리, 호밀, 쌀, 테프, 라이밀 등의 오일도 사용될 수 있다. 종자 오일로 천연 생성되는 것은 아니지만 글리세롤 및 1,2-프로판디올의 6-10탄소 지방산 에스테르가 넛 및 종자 오일을 원료로 하는 적절한 물질의 가수분해, 분리 및 에스테르화에 의해 제조될 수 있다. 포유동물 모유로부터의 지방 및 오일은 대사가능하며 따라서 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다. 동물 공급원으로부터 순수 오일을 수득하기 위해 필요한 분리, 정제, 비누화 및 다른 수단을 위한 절차는 당해분야에 공지되어 있다. 대부분의 어류는 쉽게 회수될 수 있는 대사가능한 오일을 함유한다. 예를 들면, 대구 간 오일, 상어 간 오일, 및 고래 오일, 예컨대 경랍이 본원에서 사용될 수 있는 몇몇 어류 오일을 예시한다. 여러 분지쇄 오일이 5-탄소 이소프렌 단위로 생화학적으로 합성되며, 일반적으로 테르페노이드로 불린다. 상어 간 오일은 본원에서 특히 바람직한, 스쿠알렌으로 공지된 분지형 불포화 테르페노이드, 2,6,10,15,19,23-헥사메틸-2,6,10,14,18,22-테트라코사헥사엔을 함유한다. 스쿠알렌에 대한 포화 유사체인 스쿠알란도 바람직한 오일이다. 스쿠알렌 및 스쿠알란을 포함하는 어류 오일은 상업적 공급원에서 쉽게 이용가능하거나, 또는 당해분야에서 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 다른 바람직한 오일은 토코페롤(하기 참고)이다. 오일 혼합물이 사용될 수 있다.
계면활성제는 그의 'HLB'(친수성/친유성 밸런스)에 의해 분류될 수 있다. 본 발명의 바람직한 계면활성제는 적어도 10, 바람직하게는 적어도 15, 더 바람직하게는 적어도 16의 HLB를 갖는다. 본 발명은 비제한적으로 하기를 포함하는 계면활성제와 함께 이용될 수 있다: 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 계면활성제(통상적으로 Tween으로 불림), 특히 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80; DOWF AX™ 상표명 하에 판매되는 에틸렌 옥사이드(EO), 프로필렌 옥사이드(PO), 및/또는 부틸렌 옥사이드(BO)의 코폴리머, 예컨대 선형 EO/PO 블록 코폴리머; 반복 에톡시(옥시-1,2-에탄디일)기의 수가 변할 수 있는 옥톡시놀(옥톡시놀-9(Triton X-100, 또는 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올)이 특히 관심의 대상임); (옥틸페녹시) 폴리에톡시에탄올(IGEPAL CA-630/NP-40); 인지질, 예컨대 포스파티딜콜린(레시틴); 노닐페놀 에톡실레이트, 예컨대 Tergitol™ NP 시리즈; 라우릴, 세틸, 스테아릴 및 올레일 알코올에서 유도된 폴리옥시에틸렌 지방 에테르(Brij 계면활성제로 알려져 있음), 예컨대 트리에틸렌글리콜 모노라우릴 에테르(Brij 30); 및 소르비탄 에스테르(일반적으로 SPANs으로 알려져 있음), 예컨대 소르비탄 트리올레이트(Span 85) 및 소르비탄 모노라우레이트. 비-이온성 계면활성제가 바람직하다. 에멀젼에 포함시키기 위해 바람직한 계면활성제는 Tween 80(폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트), Span 85(소르비탄 트리올레이트), 레시틴 및 Triton X-100이다.
계면활성제 혼합물, 예로 Tween 80/Span 85 혼합물이 사용될 수 있다. 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트(Tween 80) 및 옥톡시놀, 예컨대 t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올 (Triton X-100)의 조합도 적당하다. 또 하나의 유용한 조합은 라우레쓰 9 + 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 및/또는 옥톡시놀을 포함한다.
계면활성제의 바람직한 양(중량%)은 다음과 같다: 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르(예컨대 Tween 80) 0.01 내지 1%, 특히 약 0.1%; 옥틸- 또는 노닐-페녹시 폴리옥시에탄올(예컨대 Triton X-100, 또는 Triton 시리즈의 다른 세제) 0.001 내지 0.1%, 특히 0.005 내지 0.02%; 폴리옥시에틸렌 에테르(예컨대 라우레쓰 9) 0.1 내지 20%, 바람직하게는 0.1 내지 10%, 특히 0.1 내지 1% 또는 약 0.5%.
바람직하게는, 실질적으로 모든(예로 적어도 90% 수의) 오일 소적은 l㎛ 미만, 예로 <750nm, <500nm, <400nm, <300nm, <250nm, <220nm, <200nm, 또는 그 미만의 직경을 갖는다. 하나의 특히 유용한 서브마이크론 에멀젼은 스쿠알렌, Tween 80, 및 Span 85로 이루어진다. 에멀젼 조성물의 용적은 약 5% 스쿠알렌, 약 0.5% 폴리소르베이트 80 및 약 0.5% Span 85일 수 있다. 중량 관점에서는 이들 비가 4.3% 스쿠알렌, 0.5% 폴리소르베이트 80 및 0.48% Span 85가 된다. MF59 에멀젼에는 유리하게는 시트레이트 이온, 예로 10mM 나트륨 시트레이트 버퍼가 포함된다.
C. 사포닌 제형
사포닌 제형이 또한 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다. 사포닌은 광범위한 식물 종의 나무껍질, 잎, 줄기, 뿌리 및 심지어 꽃에서 발견되는 스테롤 글리코사이드 및 트리테르페노이드 글리코사이드의 이종성 그룹이다. 퀼라이아 사포나리아 몰리나 나무의 나무껍질로부터의 사포닌이 아쥬반트로 널리 연구되었다. 사포닌은 또한 스밀락스 오르나타(사르사프릴라), 집소필라 파니컬라타(브리딜 베일) 및 사포나리아 오피시아날리스(소프 루트)에서 상업적으로 수득될 수도 있다. 사포닌 아쥬반트 제형에는 정제된 제형, 예컨대 QS21뿐만 아니라 지질 제형, 예컨대 ISCOMs이 포함된다. QS21은 Stimulon™으로 시판된다.
사포닌 조성물은 HPLC 및 RP-HPLC를 이용하여 정제되었다. QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B 및 QH-C를 포함하여 이들 기술을 이용한 특정한 정제 분획이 확인되었다. 바람직하게는 사포닌은 QS21이다. 사포닌 제형은 또한 스테롤, 예컨대 콜레스테롤을 포함할 수 있다.
사포닌 및 콜레스테롤 조합을 사용하여 면역자극 복합체(ISCOMs)로 불리는 독특한 입자를 형성할 수 있다. ISCOMs에는 전형적으로 인지질, 예컨대 포스파티딜에탄올아민 또는 포스파티딜콜린이 포함된다. 임의의 공지된 사포닌이 ISCOMs에 사용될 수 있다. 바람직하게는 ISCOM에는 하나 이상의 QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B 및 QH-C가 포함된다. 선택적으로 ISCOMS에는 추가 세제가 없을 수 있다.
D. 바이로좀 및 바이러스-유사 입자
바이로좀 및 바이러스-유사 입자(VLPs)가 또한 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다. 이들 구조는 일반적으로 인지질과 선택적으로 조합되거나 제형화된 바이러스로부터의 하나 이상의 단백질을 함유한다. 이들은 일반적으로 비-병원성, 비-복제성이고, 일반적으로 임의의 원상태 바이러스 게놈을 함유하지 않는다. 바이러스 단백질은 재조합적으로 생산되거나 또는 전체 바이러스에서 단리될 수 있다. 바이로좀 또는 VLPs에서 사용하기 적당한 이들 바이러스 단백질에는 인플루엔자 바이러스(예컨대 HA 또는 NA), B형 간염 바이러스(예컨대 코어 또는 캡시드 단백질), E형 감염 바이러스, 홍역 바이러스, 신드비스 바이러스, 로타바이러스, 구제역 질환 바이러스, 레트로바이러스, 노워크 바이러스, 인간 유두종 바이러스, HIV, RNA-파아지, Qβ-파아지(예컨대 피막 단백질), GA-파아지, fr-파아지, AP205 파아지, 및 Ty(예컨대 레트로트랜스포존 Ty 단백질 pi)에서 유도된 단백질이 포함된다.
E. 박테리아 또는 미생물 유도체
본 발명에서 사용하기 적당한 아쥬반트에는 박테리아 또는 미생물 유도체, 예컨대 엔테로박테리아 리포폴리사카라이드(LPS)의 비독성 유도체, 지질 A 유도체, 면역자극 올리고뉴클레오타이드 및 ADP-리보실화 독소 및 탈독화된 그의 유도체가 포함된다.
LPS의 비독성 유도체에는 모노포스포릴 지질 A(MPL) 및 3-O-탈아실화 MPL(3dMPL)이 포함된다. 3dMPL은 3 데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A와 4, 5 또는 6 아실화 사슬의 혼합물이다. 그와 같은 3dMPL의 "작은 입자"는 0.22㎛ 막을 통해 멸균 여과되기에 충분히 작다. 다른 비독성 LPS 유도체에는 모노포스포릴 지질 A 모사체, 예컨대 아미노알킬 글루코스아미니드 포스페이트 유도체, 예로 RC-529 및 합성 인지질 이량체, E6020이 포함된다.
지질 A 유도체에는 에스케리치아 콜라이의 지질 A의 유도체, 예컨대 OM-174가 포함된다. 본 발명에서 아쥬반트로 사용하기 적당한 면역자극 올리고뉴클레오타이드에는 CpG 모티프(구아노신에 대해 포스페이트 결합에 의해 연결된 비메틸화 시토신을 함유하는 디뉴클레오타이드 서열)를 함유하는 뉴클레오타이드 서열이 포함된다. 회문 또는 폴리(dG) 서열을 함유하는 이중-가닥 RNA 및 올리고뉴클레오타이드도 면역자극성인 것으로 나타났다.
CpG에는 뉴클레오타이드 개질/유사체, 예컨대 포스포로티오에이트 개질이 포함될 수 있고 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있다. CpG 서열은 TLR9, 예컨대 모티프 GTCGTT 또는 TTCGTT로 지정될 수 있다. CpG 서열, 예컨대 CpG-A ODN은 Th1 면역 반응을 유도하는데 특이적일 수 있고, 또는 예컨대 CpG-B ODN은 B 세포 반응을 유도하는데 더 특이적일 수 있다. 바람직하게는 CpG는 CpG-A ODN이다.
바람직하게는 CpG 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단이 수용체 인식을 위해 접근가능하도록 구성된다. 선택적으로 2 CpG 올리고뉴클레오타이드 서열이 그 3' 말단에 부착되어 "이뮤노머"를 형성할 수 있다. 면역자극 올리고뉴클레오타이드에 기반하여 특히 유용한 아쥬반트는 IC31®로 알려져 있다. 따라서 본 발명에 사용되는 아쥬반트는 (i) 적어도 하나의(그리고 바람직하게는 다중의) CpI 모티프(즉 이노신에 연결되어 디뉴클레오타이드를 형성하는 시토신)를 포함하는 올리고뉴클레오타이드(예를 들면 15-40 뉴클레오타이드), 및 (ii) 다중양이온성 폴리머, 예컨대 적어도 하나의(그리고 바람직하게는 다중의) Lys-Arg-Lys 트리펩타이드 서열(들)을 포함하는 올리고펩타이드(예를 들면 5-20 아미노산)의 혼합물을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 26-머 서열 5'-(dIdC)13-3'(서열번호: 32)을 포함하는 데옥시뉴클레오타이드일 수 있다. 다중양이온성 폴리머는 11-머 아미노산 서열 KLKLLLLLKLK(서열번호: 33)를 포함하는 펩타이드일 수 있다.
천연 공급원에서 유도된 다중양이온성 화합물에는 HIV-REV 또는 HIV-TAT(유도된 양이온성 펩타이드, 안테나페디아 펩타이드, 키토산 또는 키틴의 다른 유도체) 또는 생화학적 또는 재조합적 제조에 의한 이들 펩타이드 또는 단백질에서 유도된 다른 펩타이드가 포함된다. 다른 바람직한 다중양이온성 화합물은 카텔린 또는 카텔린에 관련거나 유도된 물질이다. 예를 들면, 마우스 카텔린은 펩타이드로, 아미노산 서열 NH2-
Figure 112020133079616-pat00019
-COOH(서열번호: 31)을 갖는다. 관련되거나 유도된 카텔린 물질은 적어도 15-20 아미노산 잔기를 갖는 카텔린 서열의 전체 또는 부분을 함유한다. 유도에는 20 표준 아미노산 중에 속하지 않는 아미노산에 의한 천연 아미노산의 치환 또는 개질이 포함될 수 있다. 또한, 추가 양이온성 잔기가 이러한 카텔린 분자 내로 도입될 수 있다. 이들 카텔린 분자는 항원과 조합되기에 바람직하다. 이들 카텔린 분자는 놀랍게도 추가 아쥬반트의 첨가 없이 항원에 대한 아쥬반트로 효과적인 것으로 나타났다. 따라서 추가 면역 활성화 물질과 함께 또는 이것이 없이 백신 제형에서 효율적인 아쥬반트로 이러한 카텔린 분자를 사용하는 것이 가능하다.
박테리아 ADP-리보실화 독소 및 탈독화된 그의 유도체가 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다. 바람직하게는 단백질은 E. 콜라이(E. 콜라이 열 불안정 장독소 "LT"), 비브리오 콜레라에(콜레라 독소 "CT"), 또는 보데텔라 페르투스시스(백일해 독소 "PT")에서 유도된다. 점막 아쥬반트로서 및 비경구 아쥬반트로서 탈독화 ADP-리보실화 독소의 사용은 공지되어 있다. 독소 또는 변성독소는 바람직하게는 A 및 B 서브유닛을 모두 포함하는 전독소의 형태이다. 바람직하게는, A 서브유닛은 탈독화 돌연변이를 함유하며; 바람직하게는 B 서브유닛은 돌연변이되지 않는다. 바람직하게는 아쥬반트는 탈독화 LT 돌연변이체, 예컨대 LT-K63, LT-R72, LT-G192 또는 dmLT이다. 유용한 CT 돌연변이체는 CT-E29H이다.
F. 인간 면역조절물질
본 발명에서 아쥬반트로 사용하기 적당한 인간 면역조절물질에는 사이토카인, 예컨대 인터루킨(예를 들면 IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, 등), 인터페론(예를 들면 인터페론-γ), 대식세포 콜로니 자극 인자 및 종양 괴사 인자가 포함된다. 바람직한 면역조절물질은 IL-12이다.
G. 생체접착제 및 점막접착제
생체접착제 및 점막접착제가 또한 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다. 적당한 생체접착제에는 에스테르화된 히알루론산 마이크로구형체 또는 점막접착제, 예컨대 폴리아크릴산, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 다당류 및 카복시메틸셀룰로오스의 가교결합된 유도체가 포함된다. 키토산 및 그의 유도체도 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다.
H. 마이크로입자
마이크로입자가 또한 본 발명에서 아쥬반트로 사용될 수 있다. 마이크로입자(즉 직경 ~100nm 내지 ~150㎛, 더 바람직하게는 직경 ~200nm 내지 ~30㎛, 가장 바람직하게는 직경 ~500nm 내지 ~10㎛의 입자)는 생분해성 및 비독성 물질(예로, 폴리(α-하이드록시산), 폴리하이드록시부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리무수물, 폴리카프로락톤, 폴리(락타이드-코-글리콜라이드) 등)로부터 형성되며, 여기서 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)가 바람직하며, 선택적으로 음으로 하전된 표면(예를 들면 SDS로) 또는 양으로 하전된 표면(예를 들면 양이온성 세제, 예컨대 CTAB으로)를 갖도록 처리된다.
I. 리포좀
아쥬반트로 사용하기 적당한 리포좀 제형의 예는 공지되어 있다.
J. 폴리옥시에틸렌 에테르 및 폴리옥시에틸렌 에스테르 제형
본 발명에 사용하기 적당한 아쥬반트에는 폴리옥시에틸렌 에테르 및 폴리옥시에틸렌 에스테르가 포함된다. 그와 같은 제형에는 옥톡시놀과 조합된 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 계면활성제뿐만 아니라 적어도 하나의 추가 비-이온성 계면활성제, 예컨대 옥톡시놀과 조합된 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 또는 에스테르 계면활성제가 추가로 포함된다. 바람직한 폴리옥시에틸렌 에테르는 하기 그룹으로부터 선택된다: 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르(라우레쓰 9), 폴리옥시에틸렌-9-스테오릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-8-스테오릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-4-라우릴 에테르, 폴리옥시에틸렌-35-라우릴 에테르, 및 폴리옥시에틸렌-23-라우릴 에테르.
K. 뮤라밀 펩타이드
본 발명에서 아쥬반트로 사용하기 적당한 뮤라밀 펩타이드의 예에는 N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라닐-L-알라닐-D-이소글루타민(노르-MDP), 및 N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-5n-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민 MTP-PE)이 포함된다.
L. 이미다조퀴놀론 화합물.
본 발명에서 아쥬반트로 사용하기 적당한 이미다조퀴놀론 화합물의 예에는 이미퀴모드 및 그의 동족체(예를 들면, "레시퀴모드 3M")가 포함된다.
본 발명은 또한 상기에서 확인된 하나 이상의 아쥬반트 측면의 조합을 포함할 수 있다.
바람직하게는 본 발명에 따른 약제학적 제제에서의 면역자극 화합물은 다중양이온성 물질, 특히 다중양이온성 펩타이드, 면역자극 핵산 분자, 바람직하게는 면역자극 데옥시뉴클레오타이드, 수중유 또는 유중수 에멀젼, MF59, 알루미늄 염, 프로인트 완전 아쥬반트, 프로인트 불완전 아쥬반트, 신경활성 화합물, 특히 인간 성장 호르몬, 또는 이들의 조합의 그룹으로부터 선택된다.
알루미늄 하이드록사이드 및/또는 알루미늄 포스페이트 아쥬반트의 사용이 특히 바람직하며, 항원은 일반적으로 이들 염에 흡착된다.
또한, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 적어도 임의의 하기 화합물 또는 이들의 조합을 포함하는 약제학적 조성물이다: 본 발명에 따른 핵산 분자, 그의 다양한 구현예에서의 본 발명에 따른 폴리펩타이드, 본 발명에 따른 벡터, 본 발명에 따른 세포 및 본 발명에 따른 항체. 이와 관련하여, 임의의 이들 화합물은 세포, 조직 또는 개체와 사용하기 위한 비-멸균 또는 멸균 담체 또는 담체들, 예컨대 대상체에 투여하기 적당한 약제학적 담체와의 조합으로 사용될 수 있다. 그와 같은 담체에는 비제한적으로 염수, 완충 염수, 덱스트로오스, 물, 글리세롤, 에탄올 및 이들의 조합이 포함될 수 있다. 제형은 투여 방식에 적합해야 한다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물은 안정제를 포함한다. 용어 "안정제"는 부정적인 조건, 예컨대 가열 또는 냉동 동안 일어나는 조건에서 백신의 면역원성 조성물을 보호하고/하거나 안정한 면역원성 조건 또는 상태에서 면역원성 조성물의 안정성 또는 저장수명을 연장시키는 물질 또는 백신 부형제를 나타낸다. 안정제의 예에는 비제한적으로, 당, 예컨대 수크로오스, 락토오스 및 만노스; 당 알코올, 예컨대 만니톨; 아미노산, 예컨대 글리신 또는 글루탐산; 및 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민 또는 젤라틴이 포함된다.
본 발명의 약제학적 조성물은, 예를 들면 다른 것들 중에서 국소, 경구, 항문, 질, 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 비강내, 기관내 또는 진피내 경로에 의한 투여를 포함하는 임의 효과적이고 편리한 방식으로 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 약제학적 조성물은 피하로 또는 근육내로, 가장 바람직하게는 근육내로 투여된다.
치료법에서 또는 예방제로서, 본 발명의 약제학적 조성물의 활성제는 개인에게 주사가능 조성물, 예를 들면 바람직하게는 등장성인, 멸균 수성 분산액로 투여될 수 있다.
대안적으로 조성물, 바람직하게는 약제학적 조성물은 국소 적용을 위해, 예를 들면 연고, 크림, 로션, 눈 연고, 안약, 귀물약, 구강청결제, 습포 드레싱 및 봉합사 및 에어로졸의 형태로 제형화될 수 있고, 예를 들면 보존제, 약물 침투를 보조하기 위한 용매, 및 연고 및 크림에서의 완화제를 포함하는 적절한 종래의 첨가물을 함유할 수 있다. 그와 같은 국소 제형은 또한 종래의 상용성 담체, 예를 들면 크림 또는 연고 기재, 및 로션을 위한 에탄올 또는 올레일 알코올을 함유할 수 있다. 그와 같은 담체는 제형의 약 1중량% 내지 약 98중량%를 구성할 수 있다; 보다 일반적으로, 이들은 제형의 최대 약 80중량%를 구성할 것이다.
상기 기재된 치료법에 부가하여, 본 발명의 조성물은 상처 조직에서 노출된 매트릭스 단백질에 대한 박테리아 부착을 예방하기 위한 상처 치료제로서 그리고 항생제 예방에 대안으로 또는 이와 함께 치과 치료에서 예방 용도를 위해 일반적으로 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 약제학적 조성물은 백신 조성물이다. 바람직하게는 이러한 백신 조성물은 편리하게는 주사가능 형태이다. 종래의 아쥬반트를 사용하여 면역 반응을 증강시킬 수 있다. 단백질 항원을 이용한 예방접종에 대해 적당한 단위 투여량은 성인에 있어서 0.02㎍ 내지 3㎍ 항원/체중kg이고, 소아에 있어서 0.2㎍ 내지 10㎍ 항원/체중kg이며, 이러한 용량은 바람직하게는 2 내지 24주 간격으로 1 내지 3회 투여된다.
명시된 용량 범위에서는 적당한 개인에 대해 그 투여를 배제할 본 발명의 화합물의 부정적인 독성학적 효과가 예상되지 않는다.
추가 측면으로서, 본 발명에는 대상체에 투여를 위한 그의 사용을 촉진하는 방식으로 포장된 대상체에 투여하기 위한 하나 이상의 약제학적 제형을 포함하는 키트가 포함된다. 바람직한 구현예에서, 키트는 최종 용적 2mL, 더 바람직하게는 최종 용적 1mL로 제형을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명에는 단회 용량 투여 단위를 생성하기 위한 키트가 포함된다. 다양한 측면에서, 키트는 각각 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제형을 갖는 제2 용기를 모두 함유한다. 또한, 본 발명의 범위 내에는 단일 및 다중-챔버 사전-충전 주사기(예를 들면, 액체 주사기 및 냉동건조 주사기)를 함유하는 키트가 포함된다.
또 하나의 구현예에서, 이러한 키트에는 용기, 예컨대 밀봉된 병 또는 그릇에 포장되고, 방법의 실시에서 화합물 또는 조성물의 사용을 설명하는 용기에 부착되거나 패키지에 포함된 라벨을 갖는 본원에서 기재된 약제학적 제형(예로, 치료적 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 조성물)이 포함된다. 일 구현예에서, 약제학적 제형은 용기에서 상부공간의 양(예로 액체 제형 및 용기의 상부 간 공기의 양)이 매우 적도록 용기에 포장된다. 바람직하게는 상부공간의 양은 무시해도 좋다(즉, 거의 없다).
일 측면에서, 키트는 치료적 단백질 또는 펩타이드 조성물을 갖는 제1 용기 및 조성물을 위해 생리적으로 허용가능한 재구성 용액을 갖는 제2 용기를 함유한다. 일 측면에서, 약제학적 제형은 단위 투여 형태로 포장된다. 키트에는 선택적으로 특정 투여 경로에 따라 약제학적 제형을 투여하기 적당한 장치가 추가로 포함된다. 일부 측면에서, 키트는 약제학적 제형의 용도를 설명하는 라벨을 함유한다.
약제학적 조성물은 다양한 상이한 항원을 함유할 수 있다. 항원의 예는 전체 사멸 또는 약독화 개체, 이들 개체의 하위분획, 단백질 또는 그의 가장 단순한 형태인 펩타이드이다. 항원은 또한 당화된 단백질 또는 펩타이드의 형태로 면역계에 의해 인식될 수도 있고, 또는 다당류 또는 지질이거나 이를 함유할 수도 있다. 세포독성 T-세포(CTL)는 주조직 적합 복합체(MHC)와 함께 짧은, 보통 8-11 아미노산 길이의 펩타이드 형태로 항원을 인식하므로, 짧은 펩타이드가 사용될 수 있다. B 세포는 4 내지 5 아미노산만큼 짧은 선형 에피토프뿐만 아니라 3차원 구조(입체형태 에피토프)를 인식할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 제3 측면의 약제학적 조성물은 보렐리아 단백질 또는 이들의 활성 단편 또는 변이체, 예컨대 WO 2008/031133에 기재된 항원, 단편 및 변이체에 대한 과면역 혈청-반응성 항원을 포함한다.
본 발명에 따라, 제3 측면에 따른 약제학적 조성물은 약제, 특히 백신으로, 특히 보렐리아에 의해 야기된, 관련된 또는 연관된 질환 또는 질병 상태와 함께 사용될 수 있다.
*본 발명의 약제학적 조성물은 약제, 특히 백신으로, 특히 보렐리아, 더 바람직하게는 임의의 병원체 보렐리아 종에 의해 야기된, 관련된 또는 연관된 질환 또는 질병 상태와 함께, 그리고 더 바람직하게는 보렐리아 감염, 특히 B. 부르그도르페리 s.s., B. 가리니이, B. 아프젤리이, B. 안데르소니, B. 바바리엔시스, B. 비쎄티, B. 발라이시아나, B. 루시타니애, B. 스피엘마니이, B. 자포니카, B. 타누키이, B. 투르디 또는 B. 시니카 감염, 바람직하게는 a B. 부르그도르페리 s.s., B. 아프젤리이 또는 B. 가리니이 감염의 치료 또는 예방을 위한 방법에서 사용될 수 있다.
이와 관련하여, B. 부르그도르페리 s.l.를 포함하는 다양한 보렐리아 종은 본원에 개시된 것들을 포함하는 몇 개의 종 및 균주를 포함함이 주지되어야 한다. 본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료될 박테리아 감염에 관련된, 야기된 또는 연관된 질환에는 라임 보렐리아증(라임병)이 포함된다. 라임 보렐리아증의 추가 측면, 증상, 단계 및 하위그룹뿐만 아니라 도입 부분을 포함하여 본원에서 또한 개시된 바와 같은 질환을 겪는 특정 환자 그룹이 본원에 참조로 편입된다. 더 구체적으로, 라임 보렐리아증은 일반적으로 각 단계에 상이한 임상 징후를 갖는 단계, 차도 및 악화로 일어난다. 초기 감염 단계 1은 피부의 국재된 감염으로 이루어지며, 수 일 또는 수 주의 단계 2의 파종성 감염, 그리고 수 개월 내지 수 년 후의 단계 3의 지속적 감염이 뒤따른다. 그러나 감염은 가변적이다; 일부 환자는 피부의 국재된 감염만을 갖는 반면, 다른 환자들은 병의 후기 징후, 예컨대 관절염만을 나타낸다.
제4 측면에서, 본 발명은 제3 측면에 따른 약제학적 조성물의 치료적으로 효과적인 양을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 그것을 필요로 하는 대상체에서 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
용어 "대상체"는 명세서 전반에 걸쳐, 본 발명에 따른 치료 또는 방법이 제공되는 동물, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 인간을 나타내기 위해 사용된다. 특정 동물, 예컨대 인간 환자에 대해 특이적인 이들 감염, 상태 또는 질환 상태의 치료를 위해, 용어 환자는 이러한 특정 동물을 나타낸다. 바람직하게는 대상체는 인간이다; 그러나 조성물의 의학적 용도에는 또한 동물, 예컨대 닭, 칠면조, 오리 또는 거위를 포함하는 가금, 가축, 예컨대 말, 소 또는 양, 또는 반려 동물, 예컨대 개 또는 고양이가 포함될 수 있다.
용어 "효과적인 양"은 명세서 전반에 걸쳐 본 발명의 방법에서 사용되는 경우 의도된 결과를 유도하기 위해 사용될 수 있는 본 발명의 약제학적 조성물의 양을 나타내기 위해 사용된다. 본 발명의 수많은 측면에서, 용어 효과적인 양은 치료 또는 예방과 함께 사용된다. 어떤 다른 측면에서, 용어 효과적인 양은 단순히 보렐리아 감염의 치료 또는 예방을 추구하는 본 발명에 따른 방법을 포함하여, 유익하거나 유용하게 보이는 결과를 나타내는 제제의 양을 나타낸다.
본 발명에 기재된 화합물 및 조성물에 대한 용어 효과적인 양은 명세서 전반에 걸쳐 보렐리아 감염을 감소시키거나 저해하기 위해 특히 보렐리아-연관된 질환을 겪는 인간 환자를 포함하는, 포유동물 환자에게 투여되는 본 발명에 따른 화합물의 양을 나타내기 위해 사용된다.
바람직한 구현예에서, 제4 측면에 따른 대상체의 면역화 방법은 상기 대상체에게 본 발명의 제3 측면의 약제학적 조성물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함한다.
이 방법은 질환이 개인에서 이미 확립되었는지와 무관하게 상기 개인을 질환에서 보호하기 위해 사이토카인-생산 T 세포이건 세포독성 T 세포이건 세포-매개된 T 세포 반응 또는 항체를 생산하기 위한 면역학적 반응을 자극하기 위해, 본 발명에 따른 폴리펩타이드 또는 핵산을 생체내 투여함으로써 유전자 치료법을 통해 또는 다르게 개인에서 면역학적 반응을 유도하는 것을 포함한다.
본 발명의 산물, 특히 폴리펩타이드 및 핵산은 바람직하게는 단리된 형태로 제공되며, 동질하게 정제될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "단리된"은 그 천연 상태에서 "인간의 손에 의해" 분리되었음을 의미한다; 즉, 천연 생성되는 경우, 그 최초 환경에서 변경되거나 제거되거나, 또는 둘 다인 것이다. 예를 들면, 천연 상태의 생명체에서 자연적으로 존재하는 천연 생성 핵산 분자 또는 폴리펩타이드는 "단리된" 것이 아니지만, 그 천연 상태의 공존 물질로부터 분리된 동일한 핵산 분자 또는 폴리펩타이드는 "단리된" 것으로서 이 용어가 본원에서 이용된다. 단리의 일부로 또는 이에 뒤따라, 상기 핵산 분자는, 예를 들면 돌연변이유발을 위해, 융합 유전자를 형성하기 위해, 그리고 숙주에서의 증식 또는 발현을 위해 다른 핵산 분자, 예컨대 DNA 분자에 연결될 수 있다. 단독으로 또는 다른 핵산 분자, 예컨대 벡터에 연결된 단리된 핵산 분자는 숙주 세포, 배양 또는 전체 개체에 도입될 수 있다. 배양 중인 숙주 세포 내로 또는 전체 개체로 도입되면, 상기 DNA 분자는 그 천연 생성 형태 또는 환경이 아니므로 본원에서 사용되는 용어와 같이 여전히 단리된 것이다. 유사하게, 핵산 분자 및 폴리펩타이드는 조성물, 예컨대 배지 제형, 예를 들면 세포 내로의 핵산 분자 또는 폴리펩타이드의 도입을 위한 용액, 예를 들면 천연 생성 조성물이 아닌 화학적 또는 효소 반응을 위한 조성물 또는 용액에서 생성될 수 있고, 거기에서 유지되는 단리된 핵산 분자 또는 폴리펩타이드는 본원에서 이용되는 용어의 의미 내에 있다.
본 발명은 본원에 기재된 특정한 방법론, 프로토콜 및 시약이 변할 수 있으므로, 이에 제한되지 않는다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 특정 구현예를 설명하기 위한 목적만을 위한 것이며 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다. 본원에서 그리고 부가된 특허청구범위에서 사용되는 단수 형태에는 문맥 상 명확히 달리 나타내지 않는 한 복수의 참조물이 포함된다. 유사하게, 단어 "포함한다", "함유한다" 및 "포괄한다"는 배타적이 아니라 포괄적으로 해석되어야 한다.
달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어 및 임의의 접두어는 본 발명의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 균등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시에 사용될 수 있으나, 바람직한 방법, 및 물질이 본원에 기재된다.
본 발명은 추가 특징, 구현예 및 이점을 취할 수 있는 하기 도, 표, 실시예 및 서열목록에서 추가로 실증된다. 이와 같이, 논의되는 특정 개질이 본 발명의 범위의 제한으로 간주되어서는 안 된다. 당해분야 숙련자에게는 본 발명의 범위에서 벗어나지 않고 다양한 균등부, 변화 및 개질이 수행될 수 있음이 분명할 것이며, 따라서 이러한 균등한 구현예가 본원에 포함됨이 이해되어야 한다.
본 발명에 따라, 외표면 단백질 A(OspA)의 돌연변이체 단편을 포함하는 폴리펩타이드, 이를 코딩하는 핵산, 상기 폴리펩타이드 및/또는 핵산을 포함하는 약제학적 조성물(특히 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법에서 약제로서의 용도를 위한), 보렐리아 감염의 치료 또는 예방 방법 및 대상체의 면역화 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서,
도 1은 보렐리아 유래 OspA 혈청형 1-6의 아미노산 정렬을 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 제조를 도식적으로 나타낸다.
도 3은 상이한 3 돌연변이체 OspA 이종이량체 "조합 백신"을 포함하는 본 발명의 하나의 가능한 약제학적 조성물의 폴리펩타이드 성분을 도식적으로 나타낸다.
도 4는 지방산 치환된 시스테인의 한 예인 Pam3Cys의 화학 구조, 예컨대 본 발명의 지질화 폴리펩타이드의 N-말단에서 확인될 화학 구조를 나타낸다.
도 5는 OspA 혈청형 1-6의 보렐리아의 세포 표면에 대한 본 발명의 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체 폴리펩타이드로 면역화된 마우스 유래 항체의 결합을 나타낸다
표 1은 디설파이드 결합(D0)이 없는 야생형 혈청형 2 OspA 단편에 비해 D1 내지 D5(명명법에 대해서는 표 A-4를 참고)의 디설파이드 결합 유형을 갖는 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편 폴딩의 열 안정성을 나타낸다.
표 2는 PBS, 전장 OspA 또는 야생형 혈청형 2 OspA 단편(S2D0-His)으로 면역화된 마우스의 대조군 그룹을 포함하여, D1 내지 D5(명명법에 대해서는 표 A-4를 참고)의 디설파이드 결합 유형을 갖는 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 이용한 면역화 후 진드기 유발접종 방법에 의한 B. 아프젤리이(균주 IS1) 감염으로부터의 마우스 보호를 나타낸다.
표 3은 PBS 또는 전장 OspA 단백질로 면역화된 마우스의 대조군 그룹을 포함하여, 디설파이드 결합 유형 D1, D3 및 D4(Lip-S2D1-His, Lip-S2D3-His 및 Lip-S2D4-His)를 갖는 지질화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 이용한 면역화 후 진드기 유발접종 방법에 의한 B. 아프젤리이(균주 IS1) 감염으로부터의 마우스 보호를 나타낸다.
표 4는 생체내 보렐리아 유발접종 모델에서 본 발명의 돌연변이체 OspA 이종이량체의 보호능을 나타낸다. 마우스는 Lip-S1D1-S2D1-His, Lip-S4D1-S3D1-His, Lip-S4D1-S3D1 또는 Lip-S5D1-S6D1-His로 면역화되고 명시된 바와 같은 진드기 또는 바늘 유발접종 방법을 통해 명시된 보렐리아 OspA 혈청형으로 유발접종되었다. 각 실험에서 대조군 그룹은 Al(OH)3 아쥬반트만으로 면역화되었다.
표 5는 OspA 혈청형 1 보렐리아(바늘 유발접종 방법에서 균주 N40) 및 OspA 혈청형 2 보렐리아(진드기 유발접종 방법에서 균주 IS1)를 이용한 생체내 유발접종에 대한 본 발명의 조합 백신의 보호능을 나타낸다. 마우스는 1:1:1 비의(조합 백신) 3 항원 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 및 Lip-S5D1-S6D1로 함께 또는 명시된 대조군 항원으로 면역화되고, 명시된 바와 같은 진드기 또는 바늘 유발접종 방법을 통해 보렐리아로 유발접종되었다. 각 실험에서 대조군 그룹은 Al(OH)3 아쥬반트만으로 면역화되었다.
명세서에서 참조되는 도 및 표를 아래에 더 상세히 기재한다.
도 1 OspA 혈청형 1 내지 6의 아미노산 서열 정렬. 정렬은 단백질의 막-연관된 N-말단부가 더 노출된 C-말단부에 비해 더 고도로 보존된 아미노산 서열을 가짐을 나타낸다.
도 2 보렐리아 종의 상이한 2 OspA 혈청형 유래의 돌연변이체 OspA C-말단 단편을 포함하는 본 발명의 돌연변이체 OspA 이종이량체의 제조. (A) 지질화 돌연변이체 OspA 이종이량체를 인코딩하는 핵산의 도식적 묘사. 5'에서 3'으로의 성분은 지질화 신호 서열(Lip 신호), N-말단 지질화를 위한 작은 시스테인-함유 펩타이드(지질화 펩타이드 = LP), 2 비-원상태 시스테인을 갖는 OspA의 돌연변이체 C-말단 단편, 짧은 링커 펩타이드(LN1)에 이어, 2 비-원상태 시스테인을 갖는 제2 돌연변이체 OspA C-말단 단편에 대한 코딩 서열을 포함한다. (B) 중간체 돌연변이체 OspA 이종이량체 폴리펩타이드는 핵산 구축물의 번역에 바로 뒤따른 초기 생성물을 포함한다. N-말단에서 C-말단으로, 상기 폴리펩타이드는 지질화 신호 서열(Lip 신호), 지질화를 위한 시스테인-함유 펩타이드(LP), 비-원상태 디설파이드 결합을 갖는 돌연변이체 OspA 단편, 짧은 링커 펩타이드(LN1)에 이어, 비-원상태 디설파이드 결합을 갖는 제2 돌연변이체 OspA 단편으로 이루어진다. (C) 번역 후 개질 후 최종 지질화 돌연변이체 OspA 이종이량체 폴리펩타이드. 이종이량체는 N-말단에서 C-말단으로 지질화 N-말단 시스테인을 갖는 짧은 시스테인-함유 펩타이드("Lip"으로 나타냄), 디설파이드 결합으로 안정화된 돌연변이체 OspA 단편, 링커 펩타이드(LN1), 및 디설파이드 결합으로 안정화된 제2 돌연변이체 OspA 단편으로 이루어진다. 지질화 신호 서열은 나타낸 바와 같이 폴리펩타이드의 번역 후 개질 동안 절단 제거된다.
도 3 본 발명에 따른 바람직한 약제학적 조성물의 예. 상이한 2 보렐리아 OspA 혈청형 유래의 돌연변이된 OspA 단편을 각각 포함하는 3 돌연변이체 OspA 이종이량체가 조성물에 존재하며, 상이한 6 보렐리아 OspA 혈청형 유래의 OspA 항원을 함께 제공한다. 그와 같은 약제학적 조성물은 6 보렐리아 혈청형에 대한 동시 면역화를 가능케 한다.
도 4 본 발명의 전장 야생형 OspA 단백질뿐만 아니라 지질화 돌연변이체 OspA 단편 모노머 및 이종이량체의 N-말단 시스테인의 지방산 치환의 예인 화학 구조 Pam3Cys의 예시. 본 발명의 전장 OspA 단백질 또는 폴리펩타이드의 번역 후 개질 동안, N-말단 지질화 신호 서열이 절단 제거되고 지방산, 가장 통상적으로 3 팔미토일 모이어티("Pam3")가 N-말단 시스테인 잔기(황 원자, "S"가 화살표로 명시됨)에 효소적으로 공유 결합된다. Pam3Cys 잔기에서 C-말단에 위치하는 폴리펩타이드 사슬의 잔여 잔기는 "Xn"으로 나타낸다(Bouchon 등(1997) Analytical Biochemistry 246: 52-61에서 변형함).
도 5 보렐리아 스피로케테스 세포 표면에 대한 면역화된 마우스 유래 항체의 결합. 마우스를 각각의 1㎍의 명시된 항원(OspA 혈청형 1-6의 지질화 및 His-태그화 전장 OspA 단백질; Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 또는 Lip-S5D1-S6D1 단독, 또는 1:1:1비의 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 및 Lip-S5D1-S6D1을 함께("조합 백신")으로 3회 2주 간격으로 면역화하고 혈청을 마지막 용량 1주 후에 수집하였다. 몇 개의 혈청 희석액을 세포 염색 및 유세포측정을 통해 보렐리아 세포 표면으로의 결합에 대해 시험하였다. 비특이적 결합을 나타내는 Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 면역화된 대조군 마우스에서 수집된 혈청으로의 염색을 감산하여 형광 세기 값을 관찰하였다(사용된 보렐리아는 다음과 같았다: B. 부르그도르페리, OspA 혈청형 1, 균주 N40; B. 아프젤리이, OspA 혈청형 2, 균주 "C"; B. 가리니이, OspA 혈청형 3, 균주 "D"; B. 바바리엔시스, OspA 혈청형 4, 균주 Fin; B. 가리니이, OspA 혈청형 5, 균주 "E"; B. 가리니이, OspA 혈청형 6, 균주 "B").
[표 1]
상이한 배치의 디설파이드 결합을 갖는 비-지질화, His-태그화 B. 아프젤리이 K78 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편의 열 안정성. 상이한 시스테인 결합 유형(표 A-4 참고)을 갖는 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl(pH 8.0) 중에 용해시키고 야생형 혈청형 2 OspA 단편(S2D0) 대비 열 안정성에 대해 시험하였다. 디설파이드 결합의 존재는 야생형 혈청형 2 OspA 단편 대비 용융 온도를 증가시켰다.
[표 1]
Figure 112020133079616-pat00020
*명명법에 대해서는 표 A-4 및 A-5 참고.
[표 2]
진드기 유발접종 방법에 의한 B. 아프젤리이 (혈청형 2) 감염에 대한 비-지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편의 감소 용량의 보호능. 5 비-지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 2 상이한 용량(30㎍ 및 5㎍)에서의 보호능에 대해 시험하고 야생형 혈청형 2 OspA 단편과 비교하였다. Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 또는 비-지질화 전장 혈청형 2 OspA로 면역화된 마우스 그룹이 각각 음성 및 양성 대조군으로 작용하였다. 모든 항원은 His-태그화 및 비-지질화되었다. 나타낸 데이터는 동일한 조건 하에 수행된 몇 개의 실험 결과를 조합하여 나타내었다.
[표 2]
Figure 112020133079616-pat00021
[표 3]
진드기 유발접종 방법에 의한 B. 아프젤리이 감염에 대한 지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편의 감소 용량의 보호능. 상이한 디설파이드 결합 유형을 갖는 3 지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 3 상이한 용량(3.0㎍, 1.0㎍ 및 0.3㎍)에서의 보호능에 대해 시험하였다. Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 또는 비-지질화 전장 혈청형 2 OspA로 면역화된 마우스 그룹이 각각 음성 및 양성 대조군으로 작용하였다. 나타낸 데이터는 동일한 조건 하에 수행된 몇 개의 실험 결과를 조합하여 나타내었다.
[표 3]
Figure 112020133079616-pat00022
[표 4]
바늘 또는 진드기 유발접종 방법에 의한 생체내 보렐리아 유발접종에 대한 돌연변이체 OspA 이종이량체의 보호능. 마우스 그룹을 명시된 용량의 OspA 이종이량체 또는 Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 2주 간격으로 3회 면역화하였다. 사용된 면역원은 Lip-S1D1-S2D1-His(보렐리아 OspA-ST1로 유발접종, 실험 1-3), 각각 Lip-S1D1-S2D1-His, Lip-S4D1-S3D1-His 및 Lip-S5D1-S6D1-His(보렐리아 OspA-ST2로 유발접종, 실험 4-6), Lip-S4D1-S3D1(보렐리아 OspA-ST4로 유발접종, 실험 7 및 8) 및 Lip-S5D1-S6D1-His(보렐리아 OspA-ST5로 유발접종, 실험 9 및 10; 보렐리아 OspA-ST6으로 유발접종, 실험 11 및 12)였다. 면역화된 마우스를 명시된 바와 같이 진드기 또는 바늘 유발접종 모델을 통해 마지막 면역화 2주 후 유발접종하였다.
[표 4]
Figure 112020133079616-pat00023
Figure 112020133079616-pat00024
P-값; Fisher의 정확 시험, 양측 검정(two tailed). *유의미함(< 0.05), **크게 유의미함(< 0.01), ***극도로 유의미함(< 0.001).
[표 5]
OspA 혈청형 1 및 혈청형 2 보렐리아 유발접종에 대한 본 발명의 돌연변이체 OspA 이종이량체 조합 백신의 보호능. 마우스 그룹을 명시된 용량의 면역원 또는 Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 2주 간격으로 3회 면역화하였다. 사용된 면역원은 돌연변이체 OspA 이종이량체 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 및 Lip-S5D1-S6D1의 1:1:1 조합(조합 백신), Lip-S1D1-S2D1, Lip-OspA1-His 및 키메라 OspA ST1/ST2였다. 면역화된 마우스를 진드기 유발접종 방법(ST2, 실험 13 및 14) 또는 바늘 유발접종 방법(ST1, 실험 15 및 16)을 통해 마지막 면역화 2주 후 유발접종하였다.
[표 5]
Figure 112020133079616-pat00025
Figure 112020133079616-pat00026
P-값; Fisher의 정확 시험, 양측 검정. *유의미함(< 0.05), **크게 유의미함(< 0.01), ***극도로 유의미함(< 0.001).
실시예
실시예 1. 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편의 열 안정성 평가
실험 절차
열 안정성
비-지질화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편 모노머의 용융 온도(Tm)를 Pantoliano 등(J. Biomol Screen 6:429-440(2001))에 기재된 형광-기반 열 전이 검정에 의해 결정하였다. 형광 염료 SYPRO® 오렌지 단백질 겔 염색(Sigma, U.S.A.에서 DMSO 중 5000x 농도로 공급됨)을 이용하여 단백질 비-폴딩을 모니터링하였다. 각 웰에 버퍼 중 7.5㎕의 SYPRO® 오렌지(모액에서 1:1000 희석됨) 및 17.5㎕의 단백질 용액(1㎍ 또는 2㎍)을 조합하였다. 단백질 샘플을 CFX96 실시간 검출 시스템(Bio-Rad, USA)에서 0.2/10초의 속도로 25 내지 95로 가열하고 형광 변화를 모니터링하였다. 형광 세기를 여기 및 방출 파장 490 및 575nm에서 각각 측정하였다. Bio-Rad CFX Manager 2.0 프로그램을 이용하여 Tm을 결정하였다. 비-지질화 His-태그화 혈청형 2 OspA 돌연변이체 단편의 Tm값을 대조군으로 비-지질화 혈청형 2 OspA 야생형 단편(S2D0)을 이용하여 하기 상이한 4 완충계에서 측정하였다: 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl(pH 9.0); 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl(pH 8.0); PBS(pH 7.4); 및 25mM HEPES, 150mM NaCl(pH 6.5).
결과
모든 경우에, 시스테인 결합이 도입된 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편이 야생형 혈청형 2 OspA 단편(S2D0)보다 높은 Tm을 가졌다(표 1 참고). Tm을 상이한 4 완충계에서 시험하여 유사한 결과를 얻었으며(50mM Tris-HCl, 150mM NaCl(pH 8.0) 중에 용해된 단백질에 대한 데이터를 표 1에 나타냄), 단백질의 안정성이 넓은 pH 범위에 걸쳐 유사함을 나타내었다. 상기 결과는 도입된 디설파이드 결합이 OspA 단편을 안정화한다는 가설을 뒷받침한다.
실시예 2.
진드기 유발접종 방법(ST2, B. 아프젤리이 )에서 비-지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편 모노머의 보호능 평가
실험 절차
재조합 단백질의 클로닝 및 발현
야생형 혈청형 2 OspA 단편뿐만 아니라 시스테인 결합 유형 1-5를 갖는 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편(각각 서열번호: 1, 2, 3, 4, 5 및 6)을 GenScript, USA에서 E. 콜라이 발현을 위해 코돈-최적화하였다. 비-지질화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편을 정제 목적으로 C-말단에 His-태그화하였다. 유전자 단편을 카나마이신 내성 카세트뿐만 아니라 T7 프로모터를 함유하는 벡터인 pET28b(+) 벡터(Novagen, USA) 내로 클로닝하였다. 모노머를 IPTG의 첨가에 의해 37에서 BL21 Star™(DE3) 세포(Invitrogen, USA)에서 발현하였다. 세포를 4h 후 원심분리에 의해 수집하고 펠렛을 추가 처리 전 최대 12개월 동안 -70에 보관하였다.
비-지질화 His-태그화 야생형 및 돌연변이체 OspA 단편 모노머 단백질의 정제
세포를 고압 균질화에 의해 기계적으로 파열시키고 His-태그화 OspA 단편을 함유하는 가용성 분획을 Ni-세파로오스 칼럼(Ni 세파로오스™ 6 Fast Flow; GE Healthcare, United Kingdom)에 적용하고 His-태그화 OspA 단편을 이미다졸 구배(0-250mM) 상에 용출시켰다. 풀링된 분획을 겔 여과 칼럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 이어 버퍼 교환 칼럼(Sephadex G-25, GE Healthcare)에 걸쳐 추가 정제하였다. His-태그화 OspA 단편 피크를 분석적 크기 배제 칼럼 및 역상 크로마토그래피에 근거하여 풀링하였다. 멸균 여과 후, 정제된 단백질을 제형화 전까지 -20에서 보관하였다.
마우스의 면역화
자성 C3H/HeN(H-2 k ) 마우스를 모든 연구에 이용하였다(Harlan, Italy). 각각의 유발접종 전에 5마리 8-주령 마우스 그룹을 꼬리 정맥을 통해 채혈하여 면역-전 혈청을 제조 및 풀링하였다. 5 비-지질화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편 단백질(S2D1-5, 각각 서열번호: 2, 3, 4, 5 및 6)을 별도의 15 실험에서 시험하였다. 100㎕의 3회 피하(s.c.) 면역화를 2주 간격으로 투여하였다. 각각 11 및 4 실험에서 시험된 각 단백질 30 및 5㎍의 용량을 사용하였다. 모든 제형은 알루미늄 하이드록사이드(Al(OH)3)를 최종 농도 0.15%로 함유하였다. 세 번째 면역화 1주 후, 혈액을 수집하고 초강력 면역 혈청을 제조하였다. 각 실험에서 Al(OH)3와 함께 제형화된 PBS가 주입된 한 그룹이 음성 대조군으로 포함되었고, 한 그룹의 마우스는 B. 아프젤리이 균주 K78의 야생형 C-말단 OspA 단편인 S2D0(서열번호: 1)로 면역화하였다. 0.15% Al(OH)3와 함께 제형화된 B. 아프젤리이, 균주 K78의 비-지질화 전장 야생형 OspA 단백질(서열번호: 209)로 면역화한 또 하나의 그룹이 각 동물 연구에서 양성 대조군으로 포함되었다. 모든 동물 실험은 오스트리아법(BGB1 Nr. 501/1989)에 따라 수행하였고 "Magistratsabteilung 58"에서 승인받았다.
면역화된 마우스의 진드기 유발접종 및 혈청과 조직 수집(본원에서 "진드기 유발접종 방법"으로도 불림)
면역화된 마우스의 진드기 유발접종을 마지막 면역화 2주 후에 수행하였다. 면역화된 마우스를 B. 아프젤리이로 유발접종하기 위해, 각 마우스의 등쪽 털을 Veet® 크림(Reckitt Benckiser, United Kingdom)으로 제거하고, 작은 환기 용기를 초강력 접착제(Pattex, Germany)로 피부에 접착시켰다. 그 후에, 마우스 당 B. 아프젤리이, 균주 IS1로 감염된 1 또는 2마리의 I. 리시누스 약충을 적용하고 부착하도록 두어 최대한 흡혈시켰다. 각각의 개별 진드기에 대한 흡혈 상태를 매일 모니터링하고 적어도 하나의 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스만 최종 판독에 포함시켰다. 1 또는 2마리의 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스 간에는 구별하지 않았다.
진드기 적용 6주 후, 안와 출혈에 의해 혈액을 수집하고 VlsE ELISA 분석을 위해 최종 혈청을 제조하고 이용하여 감염 상태를 결정하였다. 이어서 마우스를 경부 탈구에 의해 희생시키고, 각 마우스 당 하나의 귀를 수집하여 DNA를 추출하고 네스티드 PCR 분석을 수행하여 조직에서 보렐리아를 확인하였다.
감염 판독
적용한 진드기(들)이 충분히 흡혈하고 수집될 수 있는 마우스만 실험의 최종 판독에 포함되었다. 마우스를 진드기 적용 6주 후에 희생시키고, 기관뿐만 아니라 최종 혈청을 수집하였다. 최종 감염 판독은 2 상이한 분석(아래에 상세히 기재된 바와 같은 16S-23S 유전자간 스페이서를 표적으로 하는 네스티드 PCR 및 VlsE(IR6) ELISA)에 근거하였다.
16S-23S 유전자간 스페이서를 표적으로 하는 네스티드 PCR
각 마우스의 하나의 귀에서 하기 변형을 포함하여 제조업체의 설명에 따라 DNeasy 혈액 및 조직 키트(Qiagen, Germany)를 이용하여 DNA를 추출 및 정제하였다. 각각의 귀를 PCR 등급 재조합 프로테이나제 K(Roche, 14-22mg/mL) 중 60에서 밤새 소화시켰다. DNA를 50㎕ 탈이온수에 용출시키고 추가 분석 시까지 -20에서 보관하였다. 음성 대조군으로 하나의 빈 정제 칼럼을 각각의 DNA 추출 및 정제 그리고 네스티드 PCR을 수행하는 용출액에 포함시켰다. 모든 DNA 추출물을 하기 프라이머를 이용하여 94에서 30s, 56에서 30s 그리고 72에서 60s 동안의 40사이클을 포함하는 네스티드 PCR 절차로 보렐리아 DNA의 존재에 대해 스크리닝하였다; 전방 5'-
Figure 112020133079616-pat00027
-3'(서열번호: 26) 및 후방 5'-
Figure 112020133079616-pat00028
-3'(서열번호: 27). 반응 용적 10㎕에서 1㎕를 네스티드 PCR 반응을 위한 주형으로 사용하였다. 네스티드 PCR 단계는 하기 프라이머를 이용하여 94에서 30s, 60에서 30s 그리고 72에서 60s 동안의 25사이클로 이루어졌다; 전방 네스티드 5'-
Figure 112020133079616-pat00029
-3'(서열번호: 28) 및 후방 네스티드 5'-
Figure 112020133079616-pat00030
-3'(서열번호: 29). 최종 반응 용적 중 5㎕를 에티듐 브로마이드 함유 1% 아가로스 겔 상에서 분리하고 밴드를 UV-광으로 가시화하였다.
각각의 PCR 분석에서, B. 아프젤리이 균주 K78의 시험관내 성장 배양물에서 정제된 DNA를 양성 대조군 주형으로 사용하였다. 또한, PBS를 추출된 DNA 대신 음성 대조군으로 사용하였다. 5㎕의 최종 산물을 에티듐 브로마이드 함유 1% 아가로스 겔 상에서 분리하고 밴드를 UV-광으로 가시화하였다.
주요 가변 단백질-유사 서열 E 단백질(VlsE)의 비가변 영역(IR6)을 이용한 ELISA
B. 가리니이 균주 IP90의 서열에서 유도된 바이오티닐화 25-머 펩타이드(
Figure 112020133079616-pat00031
)(서열번호: 30)를 분석에 사용하였다(Liang FT 등(1999) J Immunol. 163:5566-73). 스트렙타비딘이 사전-코팅된 96-웰 ELISA 플레이트(Nunc, Denmark)를 0.1% Tween 20이 보강된 PBS(PBS/0.1T) 중 100㎕/웰(1㎍/mL) 바이오티닐화 펩타이드로 코팅하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 펩타이드로 코팅 후, 플레이트를 PBS/0.1T로 1회 세정하였다. 그 뒤, 플레이트를 1시간 동안 실온(RT)에서 PBS + 2% BSA 100㎕/웰로 차단한 뒤 PBS/0.1T로 다시 세정하였다. 펩타이드에 대한 유발접종-후 혈청의 반응성을 PBS + 1% BSA 중 1:200, 1:400 및 1:800 희석액으로 시험하였다. 플레이트를 90분 동안 RT에서 인큐베이션한 뒤 PBS/0.1T로 3회 세정하였다. 이어서 각각의 웰에 PBS + 1% BSA 중 HRP(Dako, Denmark)에 접합된 1.3㎍/mL 폴리클로날 토끼 항-마우스 IgG 50㎕를 넣었다. 그 다음 플레이트를 1h 동안 RT에서 인큐베이션하였다. PBS/0.1T로 3회 세정 후, ABTS(50㎕/웰)를 기질로서 첨가하고(Sigma-Aldrich, USA) 30분 동안 발색시켰다. 흡광도를 405nm에서 측정하였다. 모든 혈청을 2개씩 시험하였다; 음성 대조군은 혈청 대신 PBS를 포함하였을 뿐만 아니라 플레이트에 펩타이드가 코팅되지 않았다. B. 아프젤리이 감염에 대해 양성 배양으로 나타난 마우스 혈청을 양성 대조군으로 사용하였다.
결과
진드기 유발접종 방법에서의 보호 수준
시험된 두 용량(30㎍ 및 5㎍, 표 2 참고)에서 모든 5개의 안정된 OspA B. 아프젤리이 단편에 대해 높은 보호 수준이 관찰되었다. PBS 대조군 그룹에서의 높은 감염률은 진드기가 고빈도로 감염되었음을 시사한다. 추가로, B. 아프젤리이 균주 K78로부터의 비-지질화 전장 OspA인 양성 대조군은 매우 보호성이 높았다. 전체적으로 이들 대조군 그룹은 높은 실험 판독 신뢰도를 시사하였다.
30㎍ 용량(총 11 실험) 및 5㎍ 용량(총 4 실험)을 시험하는 실험의 보호 결과를 표 2에 요약한다. 감염을 확인하기 위해 채용된 2 방법, 즉 VlsE ELISA 및 네스티드 PCR은 사실상 동일한 결과(데이터는 도시되지 않음)를 나타내어, 진드기 유발접종 방법에서 감염 평가를 위한 이들 판독 방법의 강건성을 드러내었다.
실시예 3. 진드기 유발접종 방법(ST2, B. 아프젤리이 )을 통해 생체내 보렐리아 유발접종에 대한 지질화 His-태그화 돌연변이체 혈청형 2 OspA 단편 모노머의 보호능 평가
실험 절차
지질화 His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 단백질의 클로닝 및 발현
시스테인 결합 유형 1, 3 및 4(각각 서열번호: 141, 143 및 144)를 갖는 혈청형 2 돌연변이체 OspA 단편에 OspA에서 유도된 지질화 신호 서열(서열번호: 14), 그리고 바로 C-말단에 CKQN 펩타이드(서열번호: 211)를 부가하여 개질함으로써 지질화를 위한 N-말단 시스테인을 제공하였다. 모든 돌연변이체 OspA 단편은 정제 목적을 위해 C-말단이 히스티딘-태그화되었다. 유전자 단편을 카나마이신 내성 카세트뿐만 아니라 T7 프로모터를 함유하는 벡터인 pET28b(+) 벡터(Novagen) 내로 클로닝하였다. 지질화 모노머를 BL21 Star™(DE3) 세포(Invitrogen)에서 발현하고 IPTG에 의해 유도 후, 세포의 성장 온도를 37에서 25로 낮춰서 단백질의 효율적 번역 후 가공을 촉진하였다. 세포를 4h 후 원심분리로 수집하고, 펠렛을 추가 가공 전 최대 12개월 동안 -70에서 보관하였다.
지질화 His-태그화 야생형 및 돌연변이체 OspA 단편 모노머 단백질의 정제
세포를 고압 균질화에 의해 기계적으로 파열시키고 지질화 His-태그화 OspA 단편 모노머 폴리펩타이드를 세제로 Triton X-114를 이용한 상 분리에 의해 지질상에 농축하였다. 그 뒤, 희석된 세제상(20 내지 30배)을 Ni-세파로오스 칼럼(Ni 세파로오스™ 6 Fast Flow; GE Healthcare)에 적용하고 지질화 His-태그화 OspA 단편을 이미다졸 구배(0-250mM)로 용출시켰다. 풀링된 분획을 겔 여과 칼럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 이어 버퍼 교환 칼럼(Sephadex G-25, GE Healthcare)에 걸쳐 추가 정제하였다. 지질화 His-태그화 OspA 단편 피크를 분석적 크기 배제 칼럼 및 역상 크로마토그래피에 근거하여 풀링하였다. 멸균 여과 후, 정제된 단백질을 제형화 전까지 -20에서 보관하였다.
마우스의 면역화
3 지질화 돌연변이체 OspA 단백질(Lip-S2D1-His, Lip-S2D3-His 및 Lip-S2D4-His)을 상기에서 기재된 바와 같이 발현하고 정제하였다. 생체내 보호 연구는 각각 음성 및 양성 대조군으로 Al(OH)3-아쥬반트 단독 및 비지질화 전장 혈청형 2 OspA를 이용하여 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행하였다. 모든 면역원은 0.15% Al(OH)3 중에 제형화되었다. 마우스에 2주 간격으로 3회 3.0㎍, 1.0㎍ 또는 0.3㎍ 항원을 함유하는 제형을 피하 주사하고 마지막 면역화 2주 후 B. 아프젤리이-감염된 진드기(균주 IS1)로 유발접종하였다. 마우스를 진드기 유발접종 6주 후 희생시키고 감염을 평가하였다.
결과
진드기 유발접종 방법에서의 보호 수준
모든 3 지질화 돌연변이체 OspA 단편은 최저 시험 용량에서도(표 3) B. 아프젤리이 유발접종에 대해 매우 높은 보호 수준을 부여하였다. Al(OH)3-아쥬반트 단독으로 면역화된 마우스에서의 감염률이 높아서 진드기가 고빈도로 감염되었음을 시사한다. B. 아프젤리이 균주 K78로부터의 전장 비-지질화 OspA인 양성 대조군 항원은 매우 보호성이 높았다. 전체적으로 이들 대조군 그룹은 감염 방법의 높은 신뢰도를 시사하였으므로, 지질화 돌연변이체 OspA 단편을 이용한 면역화 후 관찰된 결과에 대해 높은 신뢰도를 제공한다.
실시예 4. 바늘 또는 진드기 유발접종 방법을 통해 생체내 보렐리아 유발접종에 대한 본 발명의 돌연변이체 OspA 이종이량체의 보호능 평가
실험 절차
지질화 His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 클로닝 및 발현
B.　부르그도르페리 s.s. 균주 B31, B.　아프젤리이 균주 K78, B.　가리니이 균주 PBr, B.　바바리엔시스 균주 PBi, B.　가리니이 균주 PHEi 및 B.　가리니이 균주 DK29로부터의 돌연변이체 OspA 단편 모노머를 GenScript, USA에서 E. 콜라이 발현을 위해 코돈-최적화하였다. B.　부르그도르페리 s.s. 균주 B31 유래 OspA의 hLFA-1-유사 에피토프(aa 164-174, 서열번호: 17)를 B.　아프젤리이 균주 K78 유래 비-hLFA-1-유사 서열
Figure 112020133079616-pat00032
(서열번호: 18)로 대체하였다. 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체에 부가된 지질화 신호 서열은 E. 콜라이 주요 외막 지질단백질, Lpp에서 유도되었고, C-말단에 바로 CSS 펩타이드가 뒤따라서 지질화를 위한 N-말단 시스테인을 제공하였다. 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 B.　부르그도르페리 s.s. 균주 B31 유래 OspA의 N-말단 절반의 별도의 2 루프 영역에서 유래되는 21 아미노산 링커 서열("LN1"; aa 65-74 및 aa 42-53, D53S의 아미노산 교환 포함, 서열번호: 184)을 통해 상기에서 기재된 바와 같이 상이한 돌연변이체 OspA 단편 모노머의 융합에 의해 생성하였다. 이종이량체를 정제 목적으로 His-태그를 포함하여 구성하였다. 유전자 단편을 카나마이신 내성 카세트뿐만 아니라 T7 프로모터를 함유하는 벡터인 pET28b(+) 벡터(Novagen) 내로 클로닝하였다. 안정화된 이종이량체의 지질단백질을 BL21 Star™(DE3) 세포(Invitrogen)에서 발현하고, IPTG로 유도한 뒤, 세포의 성장 온도를 37에서 25로 낮춰서 단백질의 효율적인 번역 후 가공을 촉진하였다. 세포를 4h 후 원심분리에 의해 수집하고 펠렛을 추가 처리 전 최대 12개월 동안 -70에 보관하였다.
지질화 His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 정제
세포를 고압 균질화에 의해 기계적으로 파열시키고 지질화 His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 세제로 Triton X-114를 이용한 상 분리에 의해 지질상에 농축하였다. 그 뒤, 희석된 세제상(20 내지 30배)을 Ni-세파로오스 칼럼(Ni 세파로오스™ 6 Fast Flow; GE Healthcare)에 적용하고 지질화 His-태그화 OspA 단편을 이미다졸 구배(0-250mM) 용출에 의해 용출시켰다. 풀링된 분획을 겔 여과 칼럼(Superdex 200, GE Healthcare)에 이어 버퍼 교환 칼럼(Sephadex G-25, GE Healthcare)에 걸쳐 추가 정제하였다. 지질화 His-태그화 돌연변이체 OspA 이종이량체 피크를 분석적 크기 배제 칼럼 및 역상 크로마토그래피에 근거하여 풀링하였다. 멸균 여과 후, 정제된 이종이량체를 제형화 전까지 -20에서 보관하였다.
지질화 비-His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 클로닝 및 발현
상술된 바와 같이 제조된 구조체를 PCR 증폭에 의한 정지 코돈의 도입에 의해 His-태그를 포함하지 않는 구축물의 생성을 위해 사용하였다. 유전자 단편을 카나마이신 내성 카세트뿐만 아니라 T7 프로모터를 함유하는 벡터인 pET28b(+) 벡터(Merck Millipore) 내로 클로닝하였다. 안정화된 이종이량체의 지질단백질을 BL21 Star™(DE3) 세포(Invitrogen)에서 발현하고, IPTG로 유도한 뒤, 세포의 성장 온도를 37에서 25로 낮춰서 단백질의 효율적인 번역 후 가공을 촉진하였다. 세포를 4h 후 원심분리에 의해 수집하고 펠렛을 추가 처리 전 최대 12개월 동안 -70℃에 보관하였다.
지질화 비-His-태그화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체의 정제
세포를 고압 균질화에 의해 기계적으로 파열시키고 지질화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 세제로 Triton X-114를 이용한 상 분리에 의해 지질상에 농축하였다. 그 뒤, 희석된 세제상을 비결합 모드로 작동되는 음이온 교환 크로마토그래피에 거쳤다. 수득한 통과액을 하이드록시 인회석 칼럼(Bio-rad) 상에 로딩하고 지질화 단백질을 선형 염 구배에 의해 칼럼에서 용출하였다. 용출액에 버퍼 교환을 위해 비결합 모드로 DEAE-세파로오스 칼럼(GE Healthcare), 이어서 겔 여과 칼럼(Superdex 200, GE Healthcare)을 거쳐 추가 정제하였다. 지질화 돌연변이체 OspA 이종이량체 피크를 분석적 크기 배제 칼럼 및 SDS-PAGE에 근거하여 풀링하였다. 멸균 여과 후, 정제된 이종이량체를 제형화 전까지 -20에서 보관하였다.
마우스의 면역화
자성 C3H/HeN 마우스(Janvier, France)를 모든 연구에 이용하였다. 각각의 유발접종 전에 10마리 8-주령 마우스 그룹을 얼굴 정맥을 통해 채혈하여 면역-전 혈청을 제조 및 풀링하였다. 각각 100㎕의 3회 피하(s.c.) 면역화를 2주 간격으로 투여하였다. 각각의 용량은 최종 농도 0.15%의 알루미늄 하이드록사이드(Al(OH)3)를 포함하여 제형화된 표 4에 명시된 양(용량)의 면역원을 함유하였다. 세 번째 면역화 1주 후, 얼굴 정맥에서 혈액을 수집하고 초강력 면역 혈청을 제조하였다. 각 실험에서 Al(OH)3 단독으로 제형화된 하나의 그룹이 음성 대조군으로 포함되었다. 모든 동물 실험은 오스트리아법(BGB1 Nr. 501/1989)에 따라 수행하였고 "Magistratsabteilung 58"에서 승인받았다.
면역화된 마우스의 진드기 유발접종 및 혈청과 조직 수집(본원에서 "진드기 유발접종 방법"으로도 불림)
면역화된 마우스를 B. 아프젤리이로 유발접종하기 위해, 각 마우스의 등쪽 털을 Veet® 크림(Reckitt Benckiser)으로 제거하고, 작은 환기 용기를 초강력 접착제(Pattex)로 피부에 접착시켰다. 그 후에, 마우스 당 B. 아프젤리이, 균주 IS1로 감염된 1 또는 2마리의 I. 리시누스 약충을 적용하고 부착하여 완전 충혈되어 떨어져 나갈 때까지 흡혈하도록 두었다. 각각의 개별 진드기에 대한 흡혈 상태를 매일 모니터링하고 적어도 하나의 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스만 최종 판독에 포함시켰다.
시험관내 성장시킨 보렐리아로 면역화된 마우스의 바늘 유발접종
최종 면역화 2주 후, 마우스를 100㎕의 보렐리아 성장 배지(BSK　II) 중에 희석된 보렐리아로 s.c.로 유발접종하였다. 유발접종 용량은 균주-의존적이며, 개별 균주의 발병력을 ID50의 결정을 위한 유발접종 실험으로 평가하였다. 바늘 유발접종 실험을 위해 이용된 용량은 ID50의 20 내지 50배 범위였다.
마우스 희생 및 물질 수집
명시된 보렐리아 spp.으로의 바늘 유발접종 4주 후 또는 B. 아프젤리이로의 진드기 유발접종 6주 후, 마우스를 경부 탈구로 희생시켰다. 혈액을 안와 출혈로 수집하고 VlsE ELISA를 위한 최종 혈청을 제조하고 사용하여 감염 상태를 결정하였다. 또한, 각 마우스 당 하나의 귀를 수집하여 DNA를 추출하고 보렐리아의 확인을 위해 정량적 PCR(qPCR)을 거쳤다. 최종 감염 판독은 2 상이한 분석(VlsE ELISA 및 recA를 표적으로 하는 qPCR)에 근거하였다.
VlsE의 비가변 영역 6(IR6)을 이용한 ELISA
B. 가리니이 균주 IP90의 서열에서 유도된 바이오티닐화 25-머 펩타이드(
Figure 112020133079616-pat00033
)를 분석에 사용하였다(Liang FT, Alvarez AL, Gu Y, Nowling JM, Ramamoorthy R, Philipp MT. An immunodominant conserved region within the variable domain of VlsE, the variable surface antigen of Borrelia burgdorferi. J Immunol. 1999;163:5566-73). 스트렙타비딘이 사전-코팅된 96-웰 ELISA 플레이트(Nunc)를 0.1% Tween이 보강된 PBS(PBS/0.1T) 중 100㎕/웰(1㎍/mL)의 펩타이드로 코팅하였다. 플레이트를 4에서 밤새 인큐베이션하였다. 펩타이드로 코팅 후, 플레이트를 PBS/0.1T로 1회 세정하였다. 그 뒤, 플레이트를 1시간 동안 실온(RT)에서 PBS + 2% BSA 100㎕/웰로 차단한 뒤 PBS/0.1T로 다시 세정하였다. 펩타이드에 대한 유발접종-후 혈청의 반응성을 PBS + 1% BSA 중 1:200, 1:400 및 1:800 희석액으로 시험하였다. 플레이트를 90분 동안 실온에서 인큐베이션한 뒤 PBS/0.1T로 3회 세정하였다. 이어서 각각의 웰에 PBS + 1% BSA 중 HRP(Dako)에 접합된 1.3㎍/mL 폴리클로날 토끼 항-마우스 IgG 50㎕를 넣었다. 그 다음 플레이트를 1h 동안 RT에서 인큐베이션하였다. PBS/0.1T로 3회 세정 후, ABTS(50㎕/웰)를 기질로 첨가하고(Sigma-Aldrich) 30분 동안 발색시켰다. 흡광도를 405nm에서 측정하였다. 모든 혈청을 2개씩 시험하였다. 음성 대조군은 혈청 대신 PBS를 포함하였을 뿐만 아니라 플레이트에 펩타이드가 코팅되지 않았다. B. 아프젤리이 감염에 대해 양성 배양으로 나타난 마우스 혈청을 양성 대조군으로 사용하였다.
recA를 표적으로 하는 qPCR
라임 보렐리아증을 일으키는 모든 관련 보렐리아 종을 확인하기 위한 qPCR에서 사용될 수 있도록 하는 방식으로 올리고뉴클레오타이드 프라이머가 recA 유전자에 대해 설계되었다(전방:
Figure 112020133079616-pat00034
, 후방:
Figure 112020133079616-pat00035
). recA 단편을 B.　부르그도르페리 s.s. 균주 N40에서 pET28b(+) 내로 클로닝하여 각 반응에서 표준으로 사용하였다. 마우스 귀에서 추출된 염색체 DNA를 미희석 DNA에서 관찰된 매트릭스 효과를 감소시키기 위해 수중 1:8로 희석하였다. 10㎕ SSoAdvanced™ SYBR® Green Supermix, 0.3㎕의 각 프라이머(10μM), 및 7.4㎕ 물로 이루어진 마스터 혼합물을 각 실험을 위해 제조하였다. 18㎕의 마스터 혼합물을 마이크로타이터 플레이트에서 방광 또는 귀에서 추출된 희석 DNA 2㎕과 혼합하고 DNA를 CFX96 실시간 PCR 검출 시스템(Bio-Rad, USA)을 이용하여 증폭하였다. DNA를 95에서 3분 동안 변성시킨 다음 95에서 15초 및 55에서 30초의 50사이클을 수행하였다. 증폭 후, 95에서 30초, 그 다음 55에서 2분 동안의 변성에 의해 용융 곡선 분석을 위해 DNA를 제조하였다. 사이클 당 0.5씩 증가시키면서 55에서 5초 인큐베이션하고 95에서 5초에 의해 용융 곡선 분석을 수행하였다. 각 플레이트 상에 4 무주형 대조군(NTC)뿐만 아니라 2개씩의 10 내지 10,000 범위의 주형 복제수를 이용하여 표준 곡선을 포함시켰다.
결과
지질화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 별도의 12 실험에서 보호능에 대해 시험하였다. 마우스를 3 실험에서 각각 B.　부르그도르페리 s.s., 균주 N40, OspA 혈청형 1(ST1, 바늘 유발접종) 또는 B.　아프젤리이 균주 IS1, OspA 혈청형 2(ST2, 진드기 유발접종)로, 또는 2 실험에서 각각 B. 바바리엔시스, 균주 Scf, OspA 혈청형 4(ST4, 바늘 유발접종), B. 가리니이, 균주 "A", OspA 혈청형 5(ST5, 바늘 유발접종) 또는 B. 가리니이, 균주 "B", OspA 혈청형 6(ST6, 바늘 유발접종)으로 유발접종하였다. 모든 실험에서, Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 면역화된 마우스 그룹은 음성 대조군 그룹으로 작용하였다. 진드기를 이용한 유발접종을 위해, 마우스 당 1-2마리의 진드기를 적용하고, 완전 충혈될 때까지 흡혈시킨 적어도 하나의 진드기를 갖는 마우스만 최종 판독에 포함시켰다. 그러나 1 또는 2마리의 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스 간에는 구별하지 않았다. 12 실험으로부터의 보호 데이터를 표4에 요약한다.
지질화 His-태그화 OspA 이종이량체(Lip-S1D1-S2D1-His)는 음성 대조군 그룹에 비해 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2 유발접종 모두에 대해 모든 6 실험에서 매우 통계적으로-유의미한 보호(Fisher의 정확 시험, 양측 검정)를 나타내었다. 놀랍게도, Lip-S4D1-S3D1-His 및 Lip-S5D1-S6D1-His를 이용한 면역화는 또한 OspA 혈청형 2 유발접종에 대해 높은 보호능을 부여하여(실험 4-6), 돌연변이체 OspA 단편의 다른 혈청형을 이용한 면역화의 교차 보호 효과가 있을 수 있음을 시사하였다. 또한, Lip-S4D1-S3D1을 이용한 면역화는 OspA 혈청형 4 보렐리아를 이용한 바늘 유발접종에 대해(실험 7 및 8) 통계적으로-유의미한 보호를 부여하였다. 마지막으로, Lip-S5D1-S6D1-His를 이용한 면역화는 OspA 혈청형 5(실험 9 및 10) 및 OspA 혈청형 6(실험 11 및 12) 모두를 이용한 바늘 유발접종에 대해 보호를 부여하였다. 각 마우스의 감염 상태를 recA qPCR과 조합하여 VlsE ELISA를 이용해서 결정하였다. 마우스는 적어도 하나의 방법에서 양성 결과를 얻으면 감염된 것으로 간주하였다.
결론적으로, 본 발명의 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체 폴리펩타이드를 이용한 면역화는 시험된 모든 보렐리아 혈청형에 대한 보호를 부여하고 또한 일부 경우에서 교차-보호를 제공할 수 있다.
지질화 His-태그화 OspA 이종이량체(Lip-S1D1-S2D1-His)는 음성 대조군 그룹에 비해 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2 유발접종 모두에 대해 모든 6 실험에서 매우 통계적으로-유의미한 보호(Fisher의 정확 시험, 양측 검정)를 나타내었다. 놀랍게도, Lip-S4D1-S3D1-His 및 Lip-S5D1-S6D1-His를 이용한 면역화는 OspA 혈청형 2 유발접종에 대해서도 높은 보호능을 부여하여(실험 4-6), 돌연변이체 OspA 단편의 다른 혈청형을 이용한 면역화의 교차 보호 효과가 있을 수 있음을 시사하였다. 또한, Lip-S4D1-S3D1을 이용한 면역화는 OspA 혈청형 4 보렐리아를 이용한 바늘 유발접종에 대해(실험 7 및 8) 통계적으로-유의미한 보호를 부여하였다. 마지막으로, Lip-S5D1-S6D1-His를 이용한 면역화는 OspA 혈청형 5(실험 9 및 10) 및 OspA 혈청형 6(실험 11 및 12) 모두를 이용한 바늘 유발접종에 대해 보호를 부여하였다. 각 마우스의 감염 상태를 recA qPCR과 조합하여 VlsE ELISA를 이용해서 결정하였다. 마우스는 적어도 하나의 방법에서 양성 결과를 얻으면 감염된 것으로 간주하였다.
결론적으로, 본 발명의 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체 폴리펩타이드를 이용한 면역화는 시험된 모든 보렐리아 혈청형에 대한 보호를 부여하고 또한 일부 경우에서 교차-보호를 제공할 수 있다.
실시예 5. 바늘 유발접종 또는 진드기 유발접종 방법을 통한 생체내 OspA 혈청형 1 및 혈청형 2 보렐리아 유발접종에 대한 본 발명의 돌연변이체 OspA 이종이량체의 1:1:1 조합 백신의 보호능 평가
실험 절차
마우스의 면역화
자성 C3H/HeN(Janvier, France) 마우스를 모든 연구에 이용하였다. 각각의 유발접종 전에 10마리 8-주령 마우스 그룹을 얼굴 정맥을 통해 채혈하여 면역-전 혈청을 제조 및 풀링하였다. 각각 100㎕의 3회 s.c. 면역화를 2주 간격으로 투여하였다. 마우스 그룹을 각각 1㎍의 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 및 Lip-S5D1-S6D1로 이루어진 조합 백신으로 면역화하였다. 하기 3 다른 OspA-기반 항원이 유발접종 실험에 포함되었다: Lip-OspA1-His(전장 혈청형 1 OspA, 지질화 및 his-태그화), 지질화 키메라 OspA ST1/ST2* 및 Lip-S1D1-S2D1 단독. 음성(위약) 대조군은 Al(OH)3-아쥬반트 단독이었다. 모든 항원은 최종 농도 0.15%의 알루미늄 하이드록사이드(Al(OH)3)를 포함하여 PBS 중에 제형화되었다.
*(키메라 OspA ST1/ST2(서열번호: 212)는 OspB(균주 B31)의 N-말단부의 최초 10 아미노산, 혈청형 1 OspA의 아미노산 11-200이 혈청형 2 OspA의 C-말단부 마지막 201-255 아미노산에 융합되어 이루어진 OspA 키메라이며, 여기서 혈청형 1 OspA hLFA-1-유사 서열(146-170)은 혈청형 2 OspA의 상동성 서열로 대체된다. 그 다음, 혈청형 2 OspA 서열에는 벡터 내의 정지 코돈 앞 클로닝 부위(XhoI)로 인해 부가된 2 아미노산이 뒤따른다).
세 번째 면역화 1주 후, 얼굴 정맥에서 혈액을 수집하고 초강력 면역 혈청을 제조하였다. 모든 동물 실험은 오스트리아법(BGB1 Nr. 501/1989)에 따라 수행하였고 "Magistratsabteilung 58"에서 승인받았다.
시험관내 성장시킨 보렐리아로 면역화된 마우스의 바늘 유발접종
최종 면역화 2주 후, 마우스를 100㎕의 성장 배지(BSKII) 중에 희석된 보렐리아 스피로케테스로 s.c.로 유발접종하였다. 유발접종 용량은 균주-의존적이며, 개별 균주의 발병력을 ID50의 결정을 위한 유발접종 실험으로 평가하였다. 바늘 유발접종 실험을 위해 이용된 용량은 ID50의 20 내지 50배 범위였다. 바늘 유발접종 4주 후, 마우스를 희생시키고, 감염 상태를 결정하기 위한 판독 방법을 위해 혈액 및 조직을 수집하였다.
면역화된 마우스의 진드기 유발접종 및 혈청과 조직 수집(본원에서 "진드기 유발접종 방법"으로도 불림)
면역화된 마우스를 B. 아프젤리이로 유발접종하기 위해, 각 마우스의 등쪽 털을 Veet® 크림(Reckitt Benckiser, United Kingdom)으로 제거하고, 작은 환기 용기를 초강력 접착제(Pattex, Germany)로 피부 상에 접착시켰다. 그 후에, 마우스 당 B. 아프젤리이, 균주 IS1로 감염된 1 또는 2마리의 I. 리시누스 약충을 적용하고 부착하도록 두고 이들이 완전히 충혈되어 떨어져 나갈 때까지 흡혈시켰다. 각각의 개별 진드기에 대한 사육 상태를 모니터링하고 적어도 하나의 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스만 최종 판독에 포함시켰다.
결과
His-태그화되지 않은 지질화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 1:1:1비로 조합하고 보렐리아 유발접종에 대한 보호능을 시험하였다. 면역화된 마우스를 2 실험에서 각각 B.　아프젤리이(ST2, 균주 IS1, 진드기 유발접종) 또는 B.　부르그도르페리 s.s.(ST1, 균주 ZS7, 바늘 유발접종)로 유발접종하였다. 다른 OspA-기반 항원에는 모든 4 실험에서 Lip-S1D1-S2D2 및 실험 15 및 16에서 Lip-OspA1-His 및 지질화 키메라 OspA ST1/ST2가 포함되었다. Al(OH)3 아쥬반트 단독으로 면역화된 마우스 그룹이 각 실험에서 음성 대조군 그룹으로 작용하였다. 진드기를 이용한 유발접종을 위해, 마우스 당 1-2 진드기를 적용하고, 적어도 하나의 진드기를 완전 충혈될 때까지 먹인 마우스만을 최종 판독에 포함시켰다. 그러나 1 또는 2 완전 흡혈 진드기가 수집된 마우스 간에는 구별하지 않았다. 4 실험으로부터의 보호 데이터를 표5에 요약한다.
1:1:1의 비로 3 지질화 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체를 함유하는 조합 백신은 음성 대조군 그룹에 비해 모든 4 유발접종 실험에서 통계적으로-유의미한 보호(Fisher의 정확 시험, 양측 검정)를 부여하였다. 각 마우스의 감염 상태는 recA qPCR과 조합하여 VlsE ELISA를 이용해서 결정하였다. 마우스는 적어도 하나의 방법에서 양성 결과를 얻으면 감염된 것으로 간주하였다.
실시예 6 보렐리아 세포 표면에 대한 돌연변이체 OspA 단편 이종이량체로 면역화된 마우스 혈청 유래 항체의 결합
실험 절차
마우스의 면역화
자성 C3H/HeN 마우스를 모든 연구에 이용하였다. 각각의 유발접종 전에 20마리 8-주령 마우스 그룹을 얼굴 정맥을 통해 채혈하여 면역-전 혈청을 제조 및 풀링하였다. 각각 100㎕의 3회 피하(s.c.) 면역화를 2주 간격으로 투여하였다. 각각의 용량은 각각 1㎍의 하기 각 단백질을 함유하였다: 최종 농도 0.15%의 알루미늄 하이드록사이드를 아쥬반트로 포함하는 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 및 Lip-S5D1-S6D1(조합 백신), 또는 1㎍ 지질화 전장 OspA 단백질(명시된 바와 같은 ST1-ST6) 또는 1㎍ OspA 이종이량체 단독(명시된 바와 같은 Lip-S1D1-S2D1, Lip-S4D1-S3D1 또는 Lip-S5D1-S6D1). 음성(위약) 대조군은 Al(OH)3-아쥬반트 단독이었다. 세 번째 면역화 1주 후, 얼굴 정맥에서 혈액을 수집하고 초강력 면역 혈청을 제조하였다. 모든 동물 실험은 오스트리아법(BGB1 Nr. 501/1989)에 따라 수행하였고 "Magistratsabteilung 58"에서 승인받았다.
보렐리아에 대한 결합을 평가하기 위한 유세포측정
스피로케테스(1x106)를 동등 용적의 4% 파라포름알데하이드와 혼합하고 96-웰 플레이트(Nunclon 96U, Nunc)에서 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 5분 동안 2,000g에서 원심분리하고 상청액을 경사분리하였다. 세포를 2% BSA를 포함하는 HBSS(HBSS-B) 150㎕로 세정하고 상술된 바와 같이 원심분리하고 상청액을 경사분리하였다. 마우스 혈청을 35분 동안 56℃에서 인큐베이션하여 열로 불활성화하였다. 열 불활성화된 혈청을 HBSS-B 중에 희석하고 Costar spin-X 원심관 필터(0.22㎛, Corning, USA)를 이용하여 3분 동안 4,000g에서 원심분리에 의해 멸균 여과하였다. 스피로케테스를 100㎕ 혈청 중에 용해시키고 실온에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 15분 동안 2,000g에서 원심분리하고 상청액을 경사분리하였다. 세포를 HBSS-B 150㎕로 1회 세정한 다음 100㎕ HBSS-B 중에 용해시켰다. 1㎕의 2차 항체(PE 접합된 염소 항-마우스 IgG, Beckman Coulter, USA)를 세포에 첨가하고 실온에서 45분 동안 암소에서 인큐베이션하였다. 스피로케테스를 1회 150㎕의 HBSS-B로 세정한 뒤 2.5㎕ SYTO-17 DNA 염료를 함유하는 200㎕의 HBSS 중에 용해하고 10분 동안 실온에서 암소에서 인큐베이션하였다. 염색된 스피로케테스를 5분 동안 2000g에서 원심분리하여 펠렛화한 뒤 200㎕의 HBSS 중에 용해시켰다. 라벨링된 스피로케테스를 SYTO-17 양성 이벤트에 대해 관문화된 FC500(Beckman Coulter) 유세포 분석기로 측정하였다. 비특이적 결합을 조절하기 위해 위약-면역화 그룹의 혈청으로 수득된 값을 이종이량체-면역화 그룹의 혈청으로 관찰된 값에서 감산하였다.
결과
모든 6 OspA 혈청형을 발현하는 상이한 보렐리아에서 과면역 마우스 혈청 유래 항체의 결합이 관찰되어, 모든 항원에 반응하여 생성된 항체가 기능적으로 활성을 가지며 원위치에서 원상태 OspA에 결합할 수 있음을 시사하였다. 형광 세기는 넓은 혈청 희석 범위에 걸쳐 선형이었다. 대부분의 OspA 혈청형에 있어서, 이종이량체-생성 혈청으로 관찰된 형광 세기는 지질화 전장 OspA로 생성된 혈청에서 나타난 형광 세기에 필적하였다.
실시예 7 제형 연구
안정성을 최적화하기 위해 본 발명의 조합 백신의 제형에 관한 연구를 수행하였다. 상이한 유형의 버퍼 및 안정제를 알루미늄 하이드록사이드 및 항원과 조합하여 다양한 농도에서 시험하였다. 각각 40㎍/mL의 3 이종이량체(120㎍ 총 단백질), 10mM 나트륨 포스페이트, 150mM 염화나트륨, 10mM L-메티오닌, 5% 수크로오스, 0.05% Tween 20(폴리소르베이트 20) 및 0.15%(w/v) 알루미늄 하이드록사이드(pH 6.7±0.2)의 최적 제형이 결정되었다.
서열
서열번호: 1
S2D0-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2, 야생형 서열의 위치 131-273의 아미노산, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00036
서열번호: 2
S2D1-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 1(aa 182 및 269) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00037
서열번호: 3
S2D2-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 2(aa 182 및 272) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00038
서열번호: 4
S2D3-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 3(aa 244 및 259) 보유 , C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00039
서열번호: 5
S2D4-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 4(aa 141 및 241) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00040
서열번호: 6
S2D5-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 5(aa 165 및 265) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00041
서열번호: 7
S2D6-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 6(aa 185 및 272) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00042
서열번호: 8
S2D7-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 7(aa 199 및 223) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00043
서열번호: 9
S2D8-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 8(aa 243 및 262) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00044
서열번호: 10
S2D9-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 9(aa 184 및 204) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00045
서열번호: 11
S2D10-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 10(aa 201 및 214) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00046
서열번호: 12
S2D11-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 11(aa 246 및 259) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00047
서열번호: 13
S2D12-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 디설파이드 결합 유형 12(aa 167 및 178) 보유, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00048
서열번호: 14
보렐리아 OspA 지질화 신호
Figure 112020133079616-pat00049
서열번호: 15
보렐리아 OspB 지질화 신호
Figure 112020133079616-pat00050
서열번호: 16
E. 콜라이 lpp 지질화 신호
Figure 112020133079616-pat00051
서열번호: 17
B. 부르그도르페리 s.s. 균주 B31 유래 hLFA-1-유사 서열
Figure 112020133079616-pat00052
서열번호: 18
B. 아프젤리이 균주 K78 유래 비-hLFA-1-유사 서열
Figure 112020133079616-pat00053
서열번호: 19
B. 아프젤리이(균주 K78; OspA 혈청형 2)
Figure 112020133079616-pat00054
서열번호: 20
B. 부르그도르페리 s.s.(균주 B31, OspA 혈청형 1)
Figure 112020133079616-pat00055
서열번호: 21
B. 가리니이(균주 PBr, OspA 혈청형 3)
Figure 112020133079616-pat00056
서열번호: 22
B. 바바리엔시스(균주 PBi, OspA 혈청형 4)
Figure 112020133079616-pat00057
서열번호: 23
B. 가리니이(균주 PHei, OspA 혈청형 5)
Figure 112020133079616-pat00058
서열번호: 24
B. 가리니이(균주 DK29, OspA 혈청형 6)
Figure 112020133079616-pat00059
서열번호: 25
B. 가리니이(균주 T25, OspA 혈청형 7)
*
Figure 112020133079616-pat00060
서열번호: 26
전방 프라이머
Figure 112020133079616-pat00061
서열번호: 27
후방 프라이머
Figure 112020133079616-pat00062
서열번호: 28
전방 네스티드 프라이머
Figure 112020133079616-pat00063
서열번호: 29
후방 네스티드 프라이머
Figure 112020133079616-pat00064
서열번호: 30
25-머 펩타이드
Figure 112020133079616-pat00065
서열번호: 31
마우스 카텔린
Figure 112020133079616-pat00066
서열번호: 32
5'-(dIdC)13-3'
Figure 112020133079616-pat00067
서열번호: 33
KLK 펩타이드
Figure 112020133079616-pat00068
서열번호: 34
B. 아프젤리이(균주 K78, 혈청형 2), OspA aa 126-273
Figure 112020133079616-pat00069
서열번호: 35
B. 아프젤리이(균주 K78, 혈청형 2), OspA aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00070
서열번호: 36
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00071
서열번호: 37
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00072
서열번호: 38
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00073
서열번호: 39
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00074
서열번호: 40
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00075
서열번호: 41
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00076
서열번호: 42
펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00077
서열번호: 43
S1D4-S2D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 2의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00078
서열번호: 44
Lip-S1D4-S2D4_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 2의 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00079
Figure 112020133079616-pat00080
서열번호: 45
Lip-S1D4-S2D4_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00081
서열번호: 46
Lip-S1D4-S2D4_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 2의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00082
서열번호: 47
S1D1-S2D1_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00083
서열번호: 48
Lip-S1D1-S2D1_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, 디설파이드 결합 유형 1, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00084
서열번호: 49
Lip-S1D1-S2D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00085
서열번호: 50
Lip-S1D1-S2D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, 디설파이드 결합 유형 1, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00086
서열번호: 51
S3D4-S4D4_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00087
Figure 112020133079616-pat00088
서열번호: 52
Lip-S3D4-S4D4_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 OspA 혈청형 4의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00089
서열번호: 53
Lip-S3D4-S4D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00090
서열번호: 54
Lip-S3D4-S4D4_His_nt: OspA 혈청형 3 및 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, 디설파이드 결합 유형 4, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH) 보유
Figure 112020133079616-pat00091
서열번호: 55
S3D1-S4D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 4의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00092
서열번호: 56
Lip-S3D1-S4D1_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 4의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00093
서열번호: 57
Lip-S3D1-S4D1_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 4의 이종이량체 융합 단백질, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00094
서열번호: 58
Lip-S3D1-S4D1_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 4의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00095
Figure 112020133079616-pat00096
서열번호: 59
S5D4-S6D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 6의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00097
서열번호: 60
Lip-S5D4-S6D4_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 6의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00098
서열번호: 61
Lip-S5D4-S6D4_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00099
서열번호: 62
Lip-S5D4-S6D4_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 6의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00100
Figure 112020133079616-pat00101
서열번호: 63
S5D1-S6D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00102
서열번호: 64
Lip-S5D1-S6D1_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00103
서열번호: 65
Lip-S5D1-S6D1_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00104
서열번호: 66
Lip-S5D1-S6D1_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00105
Figure 112020133079616-pat00106
서열번호: 67
S2D4-S1D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00107
서열번호: 68
Lip-S2D4-S1D4_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00108
서열번호: 69
Lip-S2D4-S1D4_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00109
서열번호: 70
Lip-S2D4-S1D4_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00110
Figure 112020133079616-pat00111
서열번호: 71
S2D1-S1D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00112
서열번호: 72
Lip-S2D1-S1D1_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00113
서열번호: 73
Lip-S2D1-S1D1_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00114
서열번호: 74
Lip-S2D1-S1D1_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00115
서열번호: 75
S4D4-S3D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00116
서열번호: 76
Lip-S4D4-S3D4_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 중간체 및 최종 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00117
서열번호: 77
Lip-S4D4-S3D4_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00118
서열번호: 78
Lip-S4D4-S3D4_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00119
서열번호: 79
S4D1-S3D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00120
서열번호: 80
Lip-S4D1-S3D1_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00121
서열번호: 81
Lip-S4D1-S3D1_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00122
서열번호: 82
Lip-S4D1-S3D1_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00123
서열번호: 83
S6D4-S5D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00124
서열번호: 84
Lip-S6D4-S5D4_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00125
Figure 112020133079616-pat00126
서열번호: 85
Lip-S6D4-S5D4_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00127
서열번호: 86
Lip-S6D4-S5D4_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00128
서열번호: 87
S6D1-S5D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00129
서열번호: 88
Lip-S6D1-S5D1_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00130
Figure 112020133079616-pat00131
서열번호: 89
Lip-S6D1-S5D1_His_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00132
서열번호: 90
Lip-S6D1-S5D1_His_nt: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00133
서열번호: 91
S1D4-S2D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00134
서열번호: 92
Lip-S1D4-S2D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00135
Figure 112020133079616-pat00136
서열번호: 93
Lip-S1D4-S2D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00137
서열번호: 94
Lip-S1D4-S2D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00138
서열번호: 95
S1D1-S2D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00139
서열번호: 96
Lip-S1D1-S2D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00140
서열번호: 97
Lip-S1D1-S2D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00141
서열번호: 98
Lip-S1D1-S2D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00142
서열번호: 99
S3D4-S4D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00143
서열번호: 100
Lip-S3D4-S4D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00144
서열번호: 101
Lip-S3D4-S4D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00145
서열번호: 102
Lip-S3D4-S4D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00146
서열번호: 103
S3D1-S4D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00147
Figure 112020133079616-pat00148
서열번호: 104
Lip-S3D1-S4D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00149
서열번호: 105
Lip-S3D1-S4D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00150
서열번호: 106
Lip-S3D1-S4D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00151
서열번호: 107
S5D4-S6D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00152
서열번호: 108
Lip-S5D4-S6D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00153
서열번호: 109
Lip-S5D4-S6D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00154
서열번호: 110
Lip-S5D4-S6D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00155
Figure 112020133079616-pat00156
서열번호: 111
S5D1-S6D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00157
서열번호: 112
Lip-S5D1-S6D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00158
서열번호: 113
Lip-S5D1-S6D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00159
서열번호: 114
Lip-S5D1-S6D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00160
Figure 112020133079616-pat00161
서열번호: 115
S2D4-S1D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00162
서열번호: 116
Lip-S2D4-S1D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00163
서열번호: 117
Lip-S2D4-S1D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00164
서열번호: 118
Lip-S2D4-S1D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00165
Figure 112020133079616-pat00166
서열번호: 119
S2D1-S1D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00167
서열번호: 120
Lip-S2D1-S1D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00168
서열번호: 121
Lip-S2D1-S1D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00169
서열번호: 122
Lip-S2D1-S1D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00170
서열번호: 123
S4D4-S3D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00171
서열번호: 124
Lip-S4D4-S3D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00172
서열번호: 125
Lip-S4D4-S3D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00173
Figure 112020133079616-pat00174
서열번호: 126
Lip-S4D4-S3D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00175
서열번호: 127
S4D1-S3D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00176
서열번호: 128
Lip-S4D1-S3D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00177
서열번호: 129
Lip-S4D1-S3D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00178
서열번호: 130
Lip-S4D1-S3D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00179
서열번호: 131
S6D4-S5D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00180
서열번호: 132
Lip-S6D4-S5D1_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00181
서열번호: 133
Lip-S6D4-S5D1_His_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00182
서열번호: 134
Lip-S6D4-S5D1_His_nt: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00183
서열번호: 135
S6D1-S5D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00184
서열번호: 136
Lip-S6D1-S5D4_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열
Figure 112020133079616-pat00185
Figure 112020133079616-pat00186
서열번호: 137
Lip-S6D1-S5D4_His_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00187
서열번호: 138
Lip-S6D1-S5D4_His_nt: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, E. 콜라이 lpp 지질화 신호, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00188
서열번호: 140
Lip-S2D0-His: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2, 야생형 서열의 위치 131-273의 아미노산, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00189
서열번호: 141
Lip-S2D1-His: 디설파이드 결합 유형 1(aa 182 및 269)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00190
서열번호: 142
Lip-S2D2-His: 디설파이드 결합 유형 2(aa 182 및 272)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00191
서열번호: 143
Lip-S2D3-His: 디설파이드 결합 유형 3(aa 244 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00192
서열번호: 144
Lip-S2D4-His: 디설파이드 결합 유형 4(aa 141 및 241)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00193
서열번호: 145
Lip-S2D5-His: 디설파이드 결합 유형 5(aa 165 및 265)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00194
서열번호: 146
Lip-S2D6-His: 디설파이드 결합 유형 6(aa 185 및 272)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00195
서열번호: 147
Lip-S2D7-His: 디설파이드 결합 유형 7(aa 199 및 223)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00196
서열번호: 148
Lip-S2D8-His: 디설파이드 결합 유형 8(aa 243 및 262)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00197
서열번호: 149
Lip-S2D9-His: 디설파이드 결합 유형 9(aa 184 및 204)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00198
서열번호: 150
Lip-S2D10-His: 디설파이드 결합 유형 10(aa 201 및 214)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00199
서열번호: 151
Lip-S2D11-His: 디설파이드 결합 유형 11(aa 246 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00200
서열번호: 152
Lip-S2D12-His: 디설파이드 결합 유형 12(aa 167 및 178)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN, C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00201
서열번호: 153
Lip-S2D0: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2, 야생형 서열의 위치 131-273의 아미노산, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00202
서열번호: 154
Lip-S2D1: 디설파이드 결합 유형 1(aa 182 및 269)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00203
서열번호: 155
Lip-S2D2: 디설파이드 결합 유형 2(aa 182 및 272)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00204
서열번호: 156
Lip-S2D3: 디설파이드 결합 유형 3(aa 244 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00205
서열번호: 157
Lip-S2D4: 디설파이드 결합 유형 4(aa 141 및 241)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00206
서열번호: 158
Lip-S2D5: 디설파이드 결합 유형 5(aa 165 및 265)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00207
서열번호: 159
Lip-S2D6: 디설파이드 결합 유형 6(aa 185 및 272)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00208
서열번호: 160
Lip-S2D7: 디설파이드 결합 유형 7(aa 199 및 223)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00209
서열번호: 161
Lip-S2D8: 디설파이드 결합 유형 8(aa 243 및 262)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00210
서열번호: 162
Lip-S2D9: 디설파이드 결합 유형 9(aa 184 및 204)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00211
서열번호: 163
Lip-S2D10: 디설파이드 결합 유형 10(aa 201 및 214)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00212
서열번호: 164
Lip-S2D11: 디설파이드 결합 유형 11(aa 246 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00213
서열번호: 165
Lip-S2D12: 디설파이드 결합 유형 12(aa 167 및 178)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273, 지질 부가를 위한 N-말단 CKQN
Figure 112020133079616-pat00214
서열번호: 166
S2D0: 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2, 야생형 서열의 위치 131-273의 아미노산
Figure 112020133079616-pat00215
서열번호: 167
S2D1: 디설파이드 결합 유형 1(aa 182 및 269)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00216
서열번호: 168
S2D2: 디설파이드 결합 유형 2(aa 182 및 272)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00217
서열번호: 169
S2D3: 디설파이드 결합 유형 3(aa 244 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00218
서열번호: 170
S2D4: 디설파이드 결합 유형 4(aa 141 및 241)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00219
서열번호: 171
S2D5: 디설파이드 결합 유형 5(aa 165 및 265)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00220
서열번호: 172
S2D6: 디설파이드 결합 유형 6(aa 185 및 272)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00221
서열번호: 173
S2D7: 디설파이드 결합 유형 7(aa 199 및 223)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00222
서열번호: 174
S2D8: 디설파이드 결합 유형 8(aa 243 및 262)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00223
서열번호: 175
S2D9: 디설파이드 결합 유형 9(aa 184 및 204)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00224
서열번호: 176
S2D10: 디설파이드 결합 유형 10(aa 201 및 214)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00225
서열번호: 177
S2D11: 디설파이드 결합 유형 11(aa 246 및 259)을 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00226
서열번호: 178
S2D12: 디설파이드 결합 유형 12(aa 167 및 178)를 갖는 보렐리아 아프젤리이 균주 K78, OspA 혈청형 2의 aa 131-273
Figure 112020133079616-pat00227
서열번호: 179
B. 부르그도르페리 s.s.(균주 B31, 혈청형 1), OspA_aa 126-273은 혈청형 1 OspA의 hLFA-유사 서열로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00228
서열번호: 180
B. 가리니이(균주 PBr, 혈청형 3), OspA_aa 126-274
Figure 112020133079616-pat00229
서열번호: 181
B.바바리엔시스(균주 PBi, 혈청형 4), OspA_aa 126-273
Figure 112020133079616-pat00230
서열번호: 182
B. 가리니이(균주 PHei, 혈청형 5), OspA_aa 126-273
Figure 112020133079616-pat00231
서열번호: 183
B. 가리니이(균주 DK29, 혈청형 6), OspA_aa 126-274
Figure 112020133079616-pat00232
서열번호: 184
B. 부르그도르페리 s.s. 균주 B31(aa 65-74 및 aa 42-53, 위치 53에서 아미노산 교환: D53S) 유래 OspA의 N-말단 절반의 별도의 2 루프 영역으로 구성된 LN1 펩타이드 링커
Figure 112020133079616-pat00233
서열번호: 185
Lip-S1D4-S2D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨
Figure 112020133079616-pat00234
Figure 112020133079616-pat00235
서열번호: 186
Lip-S1D1-S2D1_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00236
서열번호: 187
Lip-S3D4-S4D4_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00237
서열번호: 188
Lip-S3D1-S4D1_aa:
둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00238
서열번호: 189
Lip-S5D4-S6D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00239
서열번호: 190
Lip-S5D1-S6D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00240
서열번호: 191
Lip-S2D4-S1D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00241
서열번호: 192
Lip-S2D1-S1D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00242
서열번호: 193
Lip-S4D4-S3D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00243
서열번호: 194
Lip-S4D1-S3D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00244
서열번호: 195
Lip-S6D4-S5D4_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00245
서열번호: 196
Lip-S6D1-S5D1_aa: 둘 다 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00246
서열번호: 197
Lip-S1D4-S2D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00247
서열번호: 198
Lip-S1D1-S2D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00248
서열번호: 199
Lip-S3D4-S4D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00249
서열번호: 200
Lip-S3D1-S4D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00250
서열번호: 201
Lip-S5D4-S6D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00251
서열번호: 202
Lip-S5D1-S6D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00252
서열번호: 203
Lip-S2D4-S1D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00253
Figure 112020133079616-pat00254
서열번호: 204
Lip-S2D1-S1D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 2 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 1의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, OspA 혈청형 1의 aa 164-174는 비-hLFA-1-유사 서열 NFTLEGKVAND로 대체됨, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00255
서열번호: 205
Lip-S4D4-S3D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 3의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00256
서열번호: 206
Lip-S4D1-S3D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 4 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 3의 중간체 및 최종 이종이량체 융합 단백질에 대한 코딩 서열, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00257
서열번호: 207
Lip-S6D4-S5D1_aa: 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00258
서열번호: 208
Lip-S6D1-S5D4_aa: 디설파이드 결합 유형 1을 갖는 OspA 혈청형 6 및 디설파이드 결합 유형 4를 갖는 OspA 혈청형 5의 이종이량체 융합 단백질, 지질 부가를 위한 N-말단 CSS, LN1 링커 서열, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00259
서열번호: 209
B. 아프젤리이(균주 K78; OspA 혈청형 2) aa 17-273, 지질화 신호 서열이 제거됨(aa 1-16: MKKYLLGIGLILALIA), C-말단 His 태그(GLEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00260
Figure 112020133079616-pat00261
서열번호: 210
B. 부르그도르페리(OspA 혈청형 1, 균주 ZS7) aa 17-273, 지질화 신호 서열이 제거됨(aa 1-16: MKKYLLGIGLILALIA), C-말단 His 태그(LEHHHHHH)
Figure 112020133079616-pat00262
서열번호: 211
OspA 유래 시스테인-함유 펩타이드
Figure 112020133079616-pat00263
서열번호: 212
키메라 OspA 혈청형 1/혈청형 2, N-말단 지질화
Figure 112020133079616-pat00264
서열번호: 213
B. 가리니이 균주 T25, OspA 혈청형 7의 위치 126-274의 아미노산
Figure 112020133079616-pat00265
서열번호: 214
보렐리아 RecA 유전자에 대한 전방 올리고뉴클레오타이드 프라이머
Figure 112020133079616-pat00266
서열번호: 215
히스티딘 태그
Figure 112020133079616-pat00267
서열번호: 216
보렐리아 RecA 유전자에 대한 후방 올리고뉴클레오타이드 프라이머
Figure 112020133079616-pat00268
본 출원에 걸쳐 언급된 모든 참조(문헌 참조, 허여 특허, 공개 특허 출원, 및 공동 계류 중인 특허 출원 포함)의 전체 내용은 본원에 명확히 참조로 편입된다.
LP: 지질화 펩타이드
LN1: 링커 펩타이드
SEQUENCE LISTING <110> Intercell AG <120> Mutant Fragments of OspA and Methods and Uses Relating Thereto <130> I68663PC <150> US 61/668,627 <151> 2012-07-06 <160> 216 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D0-His <400> 1 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 2 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D1-His <400> 2 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 3 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D2-His <400> 3 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Cys Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 4 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D3-His <400> 4 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Cys Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 5 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D4-His <400> 5 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 6 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D5-His <400> 6 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Cys Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Cys Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 7 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D6-His <400> 7 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Cys Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Cys Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 8 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D7-His <400> 8 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Cys Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Cys Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 9 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D8-His <400> 9 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Cys Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Cys Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 10 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D9-His <400> 10 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Cys Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Cys Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 11 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D10-His <400> 11 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Cys Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Cys Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 12 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D11-His <400> 12 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Cys Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 13 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D12-His <400> 13 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Cys Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Cys 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly 130 135 140 Leu Glu His His His His His His 145 150 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Borrelia burgdorferi <400> 14 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Borrelia burgdorferi <400> 15 Met Arg Leu Leu Ile Gly Phe Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ile Gly 1 5 10 15 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 16 Met Lys Ala Thr Lys Leu Val Leu Gly Ala Val Ile Leu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Leu Leu Ala Gly 20 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hLFA-1-like sequence <400> 17 Gly Tyr Val Leu Glu Gly Thr Leu Thr Ala Glu 1 5 10 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Non-hLFA-1-like sequence <400> 18 Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 1 5 10 <210> 19 <211> 273 <212> PRT <213> Borrelia afzelii <400> 19 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Ala Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Lys Ala Thr Val Asp Lys Ile Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Asp Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Thr Lys 65 70 75 80 Asp Asp Lys Ser Lys Ala Lys Leu Thr Ile Ala Asp Asp Leu Ser Lys 85 90 95 Thr Thr Phe Glu Leu Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Arg 100 105 110 Lys Val Ser Ser Lys Asp Lys Thr Ser Thr Asp Glu Met Phe Asn Glu 115 120 125 Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val 165 170 175 Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala 180 185 190 Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln 195 200 205 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 210 215 220 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln 225 230 235 240 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 245 250 255 Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 260 265 270 Lys <210> 20 <211> 273 <212> PRT <213> Borrelia burgdorferi <400> 20 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asn Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Asp Leu Ile Ala Thr Val Asp Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Val Lys 65 70 75 80 Ala Asp Lys Ser Lys Val Lys Leu Thr Ile Ser Asp Asp Leu Gly Gln 85 90 95 Thr Thr Leu Glu Val Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys 100 105 110 Lys Val Thr Ser Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Glu 115 120 125 Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Gly Tyr Val Leu Glu Gly Thr Leu Thr Ala Glu Lys Thr 165 170 175 Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 180 185 190 Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala 195 200 205 Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 210 215 220 Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu 225 230 235 240 Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu 245 250 255 Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu 260 265 270 Lys <210> 21 <211> 274 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 21 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Gly Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Met Ala Thr Val Glu Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Ser Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Glu Lys 65 70 75 80 Ala Asp Lys Ser Lys Ala Lys Leu Thr Ile Ser Gln Asp Leu Asn Gln 85 90 95 Thr Thr Phe Glu Ile Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Arg 100 105 110 Lys Val Asn Ser Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Asp 115 120 125 Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu 165 170 175 Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 180 185 190 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr 195 200 205 Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu 210 215 220 Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu 245 250 255 Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala 260 265 270 Leu Lys <210> 22 <211> 273 <212> PRT <213> Borrelia bavariensis <400> 22 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Met Ala Thr Val Asp Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Ser Asn Gly Ser Gly Thr Leu Glu Gly Glu Lys 65 70 75 80 Ser Asp Lys Ser Lys Ala Lys Leu Thr Ile Ser Glu Asp Leu Ser Lys 85 90 95 Thr Thr Phe Glu Ile Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys 100 105 110 Lys Val Asn Ser Lys Asp Lys Ser Ser Ile Glu Glu Lys Phe Asn Ala 115 120 125 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 165 170 175 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 180 185 190 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 195 200 205 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 210 215 220 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 225 230 235 240 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 245 250 255 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 260 265 270 Lys <210> 23 <211> 273 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 23 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Gly Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Met Ala Thr Val Glu Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Thr Leu Glu Gly Glu Lys 65 70 75 80 Thr Asp Lys Ser Lys Val Lys Leu Thr Ile Ala Glu Asp Leu Ser Lys 85 90 95 Thr Thr Phe Glu Ile Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys 100 105 110 Lys Val Thr Leu Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Glu 115 120 125 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 165 170 175 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 180 185 190 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 195 200 205 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 210 215 220 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 225 230 235 240 Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 245 250 255 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 260 265 270 Lys <210> 24 <211> 274 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 24 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Gly Met Thr Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Glu Ala Thr Val Asp Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Thr Leu Glu Gly Glu Lys 65 70 75 80 Thr Asp Lys Ser Lys Val Lys Ser Thr Ile Ala Asp Asp Leu Ser Gln 85 90 95 Thr Lys Phe Glu Ile Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys 100 105 110 Lys Val Thr Leu Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Gly 115 120 125 Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 165 170 175 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile 180 185 190 Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr 195 200 205 Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu 210 215 220 Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu 245 250 255 Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala 260 265 270 Leu Lys <210> 25 <211> 274 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 25 Met Lys Lys Tyr Leu Leu Gly Ile Gly Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ala 1 5 10 15 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Val Ser Val 20 25 30 Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 35 40 45 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Glu Ala Thr Val Asp Lys Leu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Val Lys 65 70 75 80 Ala Ala Lys Ser Lys Ala Lys Leu Thr Ile Ala Asp Asp Leu Ser Gln 85 90 95 Thr Lys Phe Glu Ile Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys 100 105 110 Lys Val Thr Leu Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Asp 115 120 125 Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg 130 135 140 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Gln Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu 145 150 155 160 Val Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Gly Thr Leu Thr Ala Asp Gly Glu 165 170 175 Thr Lys Leu Thr Val Glu Ala Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 180 185 190 Ser Glu Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Lys Asp Thr Glu Thr Thr 195 200 205 Pro Ala Asp Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu 210 215 220 Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asn Thr Ala Gly Thr Lys Leu 245 250 255 Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ala Leu Lys Ala Ala 260 265 270 Leu Lys <210> 26 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 26 gtatgtttag tgaggggggt g 21 <210> 27 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 27 ggatcatagc tcaggtggtt ag 22 <210> 28 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 28 aggggggtga agtcgtaaca ag 22 <210> 29 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 29 gtctgataaa cctgaggtcg ga 22 <210> 30 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 25-mer peptide <400> 30 Met Lys Lys Asp Asp Gln Ile Ala Ala Ala Met Val Leu Arg Gly Met 1 5 10 15 Ala Lys Asp Gly Gln Phe Ala Leu Lys 20 25 <210> 31 <211> 36 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 31 Arg Leu Ala Gly Leu Leu Arg Lys Gly Gly Glu Lys Ile Gly Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asn Phe Phe Gln Lys Leu Val 20 25 30 Pro Gln Pro Glu 35 <210> 32 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> immunostimulatory oligodeoxynucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(26) <223> n=inosine <400> 32 ncncncncnc ncncncncnc ncncnc 26 <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> immunostimulatory peptide <400> 33 Lys Leu Lys Leu Leu Leu Leu Leu Lys Leu Lys 1 5 10 <210> 34 <211> 148 <212> PRT <213> Borrelia afzelii <400> 34 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn 1 5 10 15 Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn 65 70 75 80 Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys 145 <210> 35 <211> 143 <212> PRT <213> Borrelia afzelii <400> 35 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 36 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 37 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 37 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 38 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 38 Gly Ala Gly Ala 1 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 39 Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala 1 5 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 40 Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala 1 5 10 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 41 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 42 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 42 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 43 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S1D4-S2D4_aa <400> 43 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 65 70 75 80 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 115 120 125 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu 165 170 175 Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val 210 215 220 Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val 290 295 300 Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 44 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D4_nt <400> 44 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc tcggaaaaaa tcattacccg tgcttgcggc 120 acccgtctgg aatacaccgg cattaaatcg gatggcagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaga ccaccctggt ggtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aagtccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaaaaag acggcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaattc caaaaagacc aaagatctgg tcttcacgaa agaatgcacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaacggt accaaactgg aaggctctgc ggtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatcaa aaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga atgcggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaagaaggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaacagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca atgtacgatc accgtgcaga aatacgatag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcaccgctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgaaaaa cgccctgaaa 1020 <210> 45 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 45 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 46 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D4_His_nt <400> 46 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc tcggaaaaaa tcattacccg tgcttgcggc 120 acccgtctgg aatacaccgg cattaaatcg gatggcagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaga ccaccctggt ggtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aagtccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaaaaag acggcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaattc caaaaagacc aaagatctgg tcttcacgaa agaatgcacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaacggt accaaactgg aaggctctgc ggtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatcaa aaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga atgcggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaagaaggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaacagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca atgtacgatc accgtgcaga aatacgatag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcaccgctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgaaaaa cgccctgaaa 1020 ggcctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 47 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S1D1-S2D1_aa <400> 47 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 65 70 75 80 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 115 120 125 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu 165 170 175 Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val 210 215 220 Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val 290 295 300 Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 48 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D1_nt <400> 48 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc agcgaaaaaa tcattacccg cgcagacggc 120 acccgcctgg aatacaccgg catcaaatcg gacggcagcg gcaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaaa ccaccctggt ggtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aaatccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaagaaa accgcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaatag caagaaaacc aaagatctgg tcttcacgaa agaaaacacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaatggt accaaactgg aaggctccgc tgtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatctg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga aaacggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaatgcggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaatagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca agatacgatc accgtgcaga aatacgacag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcacggctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgtgtaa cgccctgaaa 1020 <210> 49 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 49 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 50 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D1_His_nt <400> 50 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc agcgaaaaaa tcattacccg cgcagacggc 120 acccgcctgg aatacaccgg catcaaatcg gacggcagcg gcaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaaa ccaccctggt ggtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aaatccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaagaaa accgcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaatag caagaaaacc aaagatctgg tcttcacgaa agaaaacacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaatggt accaaactgg aaggctccgc tgtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatctg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga aaacggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaatgcggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaatagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca agatacgatc accgtgcaga aatacgacag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcacggctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgtgtaa cgccctgaaa 1020 ggcctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 51 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S3D4-S4D4_aa <400> 51 Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp 35 40 45 Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly 115 120 125 Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu 130 135 140 Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu 165 170 175 Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala 290 295 300 Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 52 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D4_nt <400> 52 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcagaaaaag tggtcacccg cgcttgtggc 120 acccgcctgg aatacaccga aatcaaaaac gacggctcgg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 gaaggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc cccggctgaa 480 atcaaggacc tggcggaact gaaggcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg 660 gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt 960 accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc aaaaccctgg acgaactgaa aaatgctctg 1020 aag 1023 <210> 53 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 53 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 54 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D4_His_nt <400> 54 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcagaaaaag tggtcacccg cgcttgtggc 120 acccgcctgg aatacaccga aatcaaaaac gacggctcgg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 gaaggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc cccggctgaa 480 atcaaggacc tggcggaact gaaggcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg 660 gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt 960 accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc aaaaccctgg acgaactgaa aaatgctctg 1020 aagggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 55 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S3D1-S4D1_aa <400> 55 Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp 35 40 45 Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly 115 120 125 Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu 130 135 140 Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu 165 170 175 Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala 290 295 300 Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 56 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D1_nt <400> 56 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcggaaaaag tggtcacccg cgcaaatggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaaaaac gatggtagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 tgcggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaaaac 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc accggctgaa 480 atcaaggacc tggctgaact gtgtgcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc 660 gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc 960 accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc aaaaccctgg atgaactgtg taatgctctg 1020 aag 1023 <210> 57 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 57 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 58 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D1_His_nt <400> 58 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcggaaaaag tggtcacccg cgcaaatggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaaaaac gatggtagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 tgcggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaaaac 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc accggctgaa 480 atcaaggacc tggctgaact gtgtgcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc 660 gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc 960 accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc aaaaccctgg atgaactgtg taatgctctg 1020 aagggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 59 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5D4-S6D4_aa <400> 59 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr 65 70 75 80 Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr 165 170 175 Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 60 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D4_nt <400> 60 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc 120 acccgtctgg aatataccga catcaagagc gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggactcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg 420 atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgaa gaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagt 600 gaaaaaacga ttgttcgcgc ctgtggcacc cgcctggaat acacggatat caagtcggat 660 ggttcgggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggacagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaatgcacg atcaccgttc aacgctatga tagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 61 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 61 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 62 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D4_His_nt <400> 62 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc 120 acccgtctgg aatataccga catcaagagc gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggactcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg 420 atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgaa gaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagt 600 gaaaaaacga ttgttcgcgc ctgtggcacc cgcctggaat acacggatat caagtcggat 660 ggttcgggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggacagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaatgcacg atcaccgttc aacgctatga tagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 63 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5D1-S6D1_aa <400> 63 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr 65 70 75 80 Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr 165 170 175 Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 64 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D1_nt <400> 64 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc 120 acccgcctgg aatacaccga catcaaatca gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggattcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg 420 atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgtg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagc 600 gaaaagacca tcgtgcgtgc gaacggtacc cgcctggaat atacggacat taaatcggac 660 ggcagcggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggatagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaagatacg atcaccgttc aacgctatga cagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 65 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 65 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 66 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D1_His_nt <400> 66 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc 120 acccgcctgg aatacaccga catcaaatca gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggattcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg 420 atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgtg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagc 600 gaaaagacca tcgtgcgtgc gaacggtacc cgcctggaat atacggacat taaatcggac 660 ggcagcggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggatagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaagatacg atcaccgttc aacgctatga cagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 67 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D4-S1D4_aa <400> 67 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys 1 5 10 15 Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn 65 70 75 80 Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val 165 170 175 Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val 210 215 220 Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val 290 295 300 Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 68 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D4_nt <400> 68 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaatgcggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaacag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaatgtacg 420 atcaccgtgc agaaatacga tagtgcgggt accaacctgg aaggcaccgc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtctcg 600 gaaaaaatca ttacccgtgc ttgcggcacc cgtctggaat acaccggcat taaatcggat 660 ggcagcggca aagcgaagga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataagacca ccctggtggt gaaagaaggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaag 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caaaaagacg 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaattccaa aaagaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga atgcaccatc acggtgcagc aatatgacag caacggtacc 960 aaactggaag gctctgcggt ggaaatcacg aaactggatg aaatcaaaaa tgcactgaaa 1020 <210> 69 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 69 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 70 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D4_His_nt <400> 70 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaatgcggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaacag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaatgtacg 420 atcaccgtgc agaaatacga tagtgcgggt accaacctgg aaggcaccgc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtctcg 600 gaaaaaatca ttacccgtgc ttgcggcacc cgtctggaat acaccggcat taaatcggat 660 ggcagcggca aagcgaagga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataagacca ccctggtggt gaaagaaggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaag 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caaaaagacg 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaattccaa aaagaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga atgcaccatc acggtgcagc aatatgacag caacggtacc 960 aaactggaag gctctgcggt ggaaatcacg aaactggatg aaatcaaaaa tgcactgaaa 1020 ggtctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 71 <211> 316 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D1-S1D1_aa <400> 71 Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys Glu 145 150 155 160 Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser 165 170 175 Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly 180 185 190 Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe 195 200 205 Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys 210 215 220 Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val 225 230 235 240 Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr 245 250 255 Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser 260 265 270 Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val 275 280 285 Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu 290 295 300 Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 72 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D1_nt <400> 72 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaaaacggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaatag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaagatacg 420 atcaccgtgc agaaatacga cagtgcgggt accaacctgg aaggcacggc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgtg taacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtcagc 600 gaaaaaatca ttacccgcgc agacggcacc cgcctggaat acaccggcat caaatcggac 660 ggcagcggca aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataaaacca ccctggtggt gaaatgcggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaaa 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caagaaaacc 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaatagcaa gaaaaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga aaacaccatc acggtgcagc aatatgacag caatggtacc 960 aaactggaag gctccgctgt ggaaatcacg aaactggatg aaatctgtaa tgcactgaaa 1020 <210> 73 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 73 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 74 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D1_His_nt <400> 74 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaaaacggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaatag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaagatacg 420 atcaccgtgc agaaatacga cagtgcgggt accaacctgg aaggcacggc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgtg taacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtcagc 600 gaaaaaatca ttacccgcgc agacggcacc cgcctggaat acaccggcat caaatcggac 660 ggcagcggca aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataaaacca ccctggtggt gaaatgcggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaaa 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caagaaaacc 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaatagcaa gaaaaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga aaacaccatc acggtgcagc aatatgacag caatggtacc 960 aaactggaag gctccgctgt ggaaatcacg aaactggatg aaatctgtaa tgcactgaaa 1020 ggtctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 75 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S4D4-S3D4_aa <400> 75 Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys 50 55 60 His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn 65 70 75 80 Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu 165 170 175 Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly 195 200 205 Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro 290 295 300 Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 76 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D4_nt <400> 76 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgctaa aggtgaactg tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtca 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc ttgtggcacc cgcctggaat acaccgaaat caaaaacgac 660 ggctcgggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacggaa ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaatgcacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcccc ggctgaaatc aaggacctgg cggaactgaa ggcggcactg 1020 aaa 1023 <210> 77 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 77 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 78 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D4_His_nt <400> 78 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgctaa aggtgaactg tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtca 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc ttgtggcacc cgcctggaat acaccgaaat caaaaacgac 660 ggctcgggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacggaa ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaatgcacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcccc ggctgaaatc aaggacctgg cggaactgaa ggcggcactg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 79 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S4D1-S3D1_aa <400> 79 Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys 50 55 60 His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn 65 70 75 80 Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu 165 170 175 Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly 195 200 205 Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro 290 295 300 Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 80 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D1_nt <400> 80 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaatgctaa gggcgaactg agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc 120 acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc 480 aaaaccctgg atgaactgtg taacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtcg 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc aaatggcacc cgcctggaat acacggaaat caaaaacgat 660 ggtagcggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacgtgc ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaaaacacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcacc ggctgaaatc aaggacctgg ctgaactgtg tgcggcactg 1020 aaa 1023 <210> 81 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 81 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 82 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D1_His_nt <400> 82 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaatgctaa gggcgaactg agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc 120 acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc 480 aaaaccctgg atgaactgtg taacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtcg 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc aaatggcacc cgcctggaat acacggaaat caaaaacgat 660 ggtagcggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacgtgc ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaaaacacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcacc ggctgaaatc aaggacctgg ctgaactgtg tgcggcactg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 83 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S6D4-S5D4_aa <400> 83 Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser 65 70 75 80 Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly 115 120 125 Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu 130 135 140 Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu 165 170 175 Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu 210 215 220 Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser 225 230 235 240 Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys 245 250 255 Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 84 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D4_nt <400> 84 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agtgaaaaaa cgattgttcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga tatcaagtcg gatggttcgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 gaaggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggacag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgatagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gaagaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc acccgtctgg aatataccga catcaagagc 660 gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggactcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 85 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 85 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 86 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D4_His_nt <400> 86 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agtgaaaaaa cgattgttcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga tatcaagtcg gatggttcgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 gaaggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggacag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgatagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gaagaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc acccgtctgg aatataccga catcaagagc 660 gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggactcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 87 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S6D1-S5D1_aa <400> 87 Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser 65 70 75 80 Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly 115 120 125 Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu 130 135 140 Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu 165 170 175 Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu 210 215 220 Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser 225 230 235 240 Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys 245 250 255 Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 88 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D1_nt <400> 88 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agcgaaaaga ccatcgtgcg tgcgaacggt 120 acccgcctgg aatatacgga cattaaatcg gacggcagcg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 tgcggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggatag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaagat 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgacagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gtgtaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc acccgcctgg aatacaccga catcaaatca 660 gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggattcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 89 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 89 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 90 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D1_His_nt <400> 90 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agcgaaaaga ccatcgtgcg tgcgaacggt 120 acccgcctgg aatatacgga cattaaatcg gacggcagcg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 tgcggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggatag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaagat 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgacagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gtgtaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc acccgcctgg aatacaccga catcaaatca 660 gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggattcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 91 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S1D4-S2D1_aa <400> 91 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 65 70 75 80 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 115 120 125 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu 165 170 175 Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val 210 215 220 Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val 290 295 300 Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 92 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D1_nt <400> 92 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc tcggaaaaaa tcattacccg tgcttgcggc 120 acccgtctgg aatacaccgg cattaaatcg gatggcagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaga ccaccctggt ggtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aagtccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaaaaag acggcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaattc caaaaagacc aaagatctgg tcttcacgaa agaatgcacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaacggt accaaactgg aaggctctgc ggtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatcaa aaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga aaacggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaatgcggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaatagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca agatacgatc accgtgcaga aatacgacag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcacggctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgtgtaa cgccctgaaa 1020 <210> 93 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 93 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 94 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D1_His_nt <400> 94 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc tcggaaaaaa tcattacccg tgcttgcggc 120 acccgtctgg aatacaccgg cattaaatcg gatggcagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaga ccaccctggt ggtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aagtccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaaaaag acggcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaattc caaaaagacc aaagatctgg tcttcacgaa agaatgcacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaacggt accaaactgg aaggctctgc ggtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatcaa aaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga aaacggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaatgcggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaatagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca agatacgatc accgtgcaga aatacgacag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcacggctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgtgtaa cgccctgaaa 1020 ggcctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 95 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S1D1-S2D4_aa <400> 95 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 65 70 75 80 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 115 120 125 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu 165 170 175 Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val 210 215 220 Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val 290 295 300 Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 96 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D4_nt <400> 96 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc agcgaaaaaa tcattacccg cgcagacggc 120 acccgcctgg aatacaccgg catcaaatcg gacggcagcg gcaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaaa ccaccctggt ggtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aaatccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaagaaa accgcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaatag caagaaaacc aaagatctgg tcttcacgaa agaaaacacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaatggt accaaactgg aaggctccgc tgtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatctg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga atgcggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaagaaggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaacagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca atgtacgatc accgtgcaga aatacgatag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcaccgctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgaaaaa cgccctgaaa 1020 <210> 97 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 97 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 98 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D4_His_nt <400> 98 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaagtc agcgaaaaaa tcattacccg cgcagacggc 120 acccgcctgg aatacaccgg catcaaatcg gacggcagcg gcaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgca aatgataaaa ccaccctggt ggtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgagcaa aaacattagt aaatccggtg aagtctctgt ggaactgaat 300 gataccgaca gctctgcggc caccaagaaa accgcagctt ggaactcagg cacctcgacg 360 ctgaccatta cggttaatag caagaaaacc aaagatctgg tcttcacgaa agaaaacacc 420 atcacggtgc agcaatatga cagcaatggt accaaactgg aaggctccgc tgtggaaatc 480 acgaaactgg atgaaatctg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaactgtcg 600 gcgaaaacga tgacgcgtga atgcggcacc aaactggaat atacggaaat gaaaagcgat 660 ggcaccggta aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgccaat 720 gacaaagtca ccctggaagt gaaagaaggc accgttacgc tgtcaaaaga aattgcaaaa 780 tcgggtgaag tgaccgttgc tctgaacgat acgaatacca cgcaagcgac caagaaaacc 840 ggcgcctggg acagcaaaac ctctacgctg accattagtg ttaacagcaa gaaaaccacg 900 cagctggtct tcaccaaaca atgtacgatc accgtgcaga aatacgatag tgcgggtacc 960 aacctggaag gcaccgctgt tgaaatcaaa accctggacg aactgaaaaa cgccctgaaa 1020 ggcctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 99 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S3D4-S4D1_aa <400> 99 Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp 35 40 45 Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly 115 120 125 Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu 130 135 140 Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu 165 170 175 Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala 290 295 300 Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 100 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D1_nt <400> 100 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcagaaaaag tggtcacccg cgcttgtggc 120 acccgcctgg aatacaccga aatcaaaaac gacggctcgg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 gaaggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc cccggctgaa 480 atcaaggacc tggcggaact gaaggcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc 660 gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc 960 accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc aaaaccctgg atgaactgtg taatgctctg 1020 aag 1023 <210> 101 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 101 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 102 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D1_His_nt <400> 102 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcagaaaaag tggtcacccg cgcttgtggc 120 acccgcctgg aatacaccga aatcaaaaac gacggctcgg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 gaaggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc cccggctgaa 480 atcaaggacc tggcggaact gaaggcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc 660 gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc 960 accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc aaaaccctgg atgaactgtg taatgctctg 1020 aagggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 103 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S3D1-S4D4_aa <400> 103 Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp 35 40 45 Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly 115 120 125 Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu 130 135 140 Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu 165 170 175 Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala 290 295 300 Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 104 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D4_nt <400> 104 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcggaaaaag tggtcacccg cgcaaatggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaaaaac gatggtagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 tgcggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaaaac 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc accggctgaa 480 atcaaggacc tggctgaact gtgtgcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg 660 gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt 960 accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc aaaaccctgg acgaactgaa aaatgctctg 1020 aag 1023 <210> 105 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 105 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 106 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D4_His_nt <400> 106 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcaaactg tcggaaaaag tggtcacccg cgcaaatggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaaaaac gatggtagcg gcaaagcgaa ggaagttctg 180 aaaggctttg ccctggaagg taccctgacg gatggcggtg aaaccaaact gaccgtgacg 240 tgcggcaccg ttacgctgtc taaaaacatt agcaagtctg gtgaaatcac ggtcgcactg 300 aatgataccg aaaccacgcc ggctgacaaa aagaccggcg aatggaaaag tgacacctcc 360 acgctgacca tttcaaagaa ctcgcagaaa ccgaagcaac tggtcttcac caaagaaaac 420 acgatcaccg tgcagaacta taatcgtgcc ggtaatgctc tggaaggctc accggctgaa 480 atcaaggacc tggctgaact gtgtgcggca ctgaaaggca ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgctaa aggtgaactg 600 tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg 660 gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg aaagattttg ctctggaagg taccctggcg 720 gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg 780 aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag 840 acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc 900 aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt 960 accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc aaaaccctgg acgaactgaa aaatgctctg 1020 aagggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 107 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5D4-S6D1_aa <400> 107 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr 65 70 75 80 Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr 165 170 175 Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 108 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D1_nt <400> 108 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc 120 acccgtctgg aatataccga catcaagagc gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggactcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg 420 atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgaa gaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagc 600 gaaaagacca tcgtgcgtgc gaacggtacc cgcctggaat atacggacat taaatcggac 660 ggcagcggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggatagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaagatacg atcaccgttc aacgctatga cagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 109 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 109 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 110 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D1_His_nt <400> 110 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc 120 acccgtctgg aatataccga catcaagagc gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggactcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg 420 atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgaa gaatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagc 600 gaaaagacca tcgtgcgtgc gaacggtacc cgcctggaat atacggacat taaatcggac 660 ggcagcggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggatagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaagatacg atcaccgttc aacgctatga cagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 111 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5D1-S6D4_aa <400> 111 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr 65 70 75 80 Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr 165 170 175 Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 112 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D4_nt <400> 112 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc 120 acccgcctgg aatacaccga catcaaatca gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggattcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg 420 atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgtg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagt 600 gaaaaaacga ttgttcgcgc ctgtggcacc cgcctggaat acacggatat caagtcggat 660 ggttcgggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggacagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaatgcacg atcaccgttc aacgctatga tagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 113 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 113 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 114 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D4_His_nt <400> 114 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa gggcgaaatc tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc 120 acccgcctgg aatacaccga catcaaatca gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc 240 tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg 300 gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag agcggtacct gggattcagg cacctcgacg 360 ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg 420 atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt 480 accacgctga aagaactgtg taatgctctg aaaggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acggcaaagg tgaaacgagt 600 gaaaaaacga ttgttcgcgc ctgtggcacc cgcctggaat acacggatat caagtcggat 660 ggttcgggca aagcaaagga agtcctgaaa gattttacgc tggaaggtac cctggcagca 720 gacggtaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa ggcaccgtgg ttctgtcaaa aaacattctg 780 aagtcgggtg aaatcaccgc agctctggat gacagcgata ccacgcgtgc tacgaaaaag 840 accggtaaat gggacagcaa gacctctacg ctgaccatta gtgtcaactc ccagaaaacg 900 aagaatctgg tgttcaccaa agaatgcacg atcaccgttc aacgctatga tagtgcgggc 960 accaacctgg aaggcaaagc cgttgaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 115 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D4-S1D1_aa <400> 115 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys 1 5 10 15 Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn 65 70 75 80 Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val 165 170 175 Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val 210 215 220 Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val 290 295 300 Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 116 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D1_nt <400> 116 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaatgcggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaacag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaatgtacg 420 atcaccgtgc agaaatacga tagtgcgggt accaacctgg aaggcaccgc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtcagc 600 gaaaaaatca ttacccgcgc agacggcacc cgcctggaat acaccggcat caaatcggac 660 ggcagcggca aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataaaacca ccctggtggt gaaatgcggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaaa 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caagaaaacc 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaatagcaa gaaaaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga aaacaccatc acggtgcagc aatatgacag caatggtacc 960 aaactggaag gctccgctgt ggaaatcacg aaactggatg aaatctgtaa tgcactgaaa 1020 <210> 117 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 117 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 118 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D1_His_nt <400> 118 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaatgcggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaagaa 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaacag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaatgtacg 420 atcaccgtgc agaaatacga tagtgcgggt accaacctgg aaggcaccgc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtcagc 600 gaaaaaatca ttacccgcgc agacggcacc cgcctggaat acaccggcat caaatcggac 660 ggcagcggca aagcgaaaga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataaaacca ccctggtggt gaaatgcggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaaa 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caagaaaacc 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaatagcaa gaaaaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga aaacaccatc acggtgcagc aatatgacag caatggtacc 960 aaactggaag gctccgctgt ggaaatcacg aaactggatg aaatctgtaa tgcactgaaa 1020 ggtctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 119 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D1-S1D4_aa <400> 119 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn 1 5 10 15 Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn 65 70 75 80 Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val 165 170 175 Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn 195 200 205 Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val 210 215 220 Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu 225 230 235 240 Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys 245 250 255 Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn 260 265 270 Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr 275 280 285 Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val 290 295 300 Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 120 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D4_nt <400> 120 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaaaacggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaatag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaagatacg 420 atcaccgtgc agaaatacga cagtgcgggt accaacctgg aaggcacggc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgtg taacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtctcg 600 gaaaaaatca ttacccgtgc ttgcggcacc cgtctggaat acaccggcat taaatcggat 660 ggcagcggca aagcgaagga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataagacca ccctggtggt gaaagaaggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaag 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caaaaagacg 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaattccaa aaagaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga atgcaccatc acggtgcagc aatatgacag caacggtacc 960 aaactggaag gctctgcggt ggaaatcacg aaactggatg aaatcaaaaa tgcactgaaa 1020 <210> 121 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 121 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 Gly Leu Glu His His His His His His 325 <210> 122 <211> 1047 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D4_His_nt <400> 122 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgaaaa aggcgaactg tcggcgaaaa cgatgacgcg tgaaaacggc 120 accaaactgg aatatacgga aatgaaaagc gatggcaccg gtaaagcgaa agaagttctg 180 aaaaacttta ccctggaagg caaagtcgcc aatgacaaag tcaccctgga agtgaaatgc 240 ggcaccgtta cgctgtcaaa agaaattgca aaatcgggtg aagtgaccgt tgctctgaac 300 gatacgaata ccacgcaagc gaccaagaaa accggcgcct gggacagcaa aacctctacg 360 ctgaccatta gtgttaatag caagaaaacc acgcagctgg tcttcaccaa acaagatacg 420 atcaccgtgc agaaatacga cagtgcgggt accaacctgg aaggcacggc tgttgaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgtg taacgccctg aaaggcacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattca acgaaaaagg cgaagtctcg 600 gaaaaaatca ttacccgtgc ttgcggcacc cgtctggaat acaccggcat taaatcggat 660 ggcagcggca aagcgaagga agttctgaaa aactttaccc tggaaggcaa agtcgcaaat 720 gataagacca ccctggtggt gaaagaaggc accgttacgc tgagcaaaaa cattagtaag 780 tccggtgaag tctctgtgga actgaatgat accgacagct ctgcggccac caaaaagacg 840 gcagcttgga actcaggcac ctcgacgctg accattacgg ttaattccaa aaagaccaaa 900 gatctggtct tcacgaaaga atgcaccatc acggtgcagc aatatgacag caacggtacc 960 aaactggaag gctctgcggt ggaaatcacg aaactggatg aaatcaaaaa tgcactgaaa 1020 ggtctcgagc accaccacca ccaccac 1047 <210> 123 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S4D4-S3D1_aa <400> 123 Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys 50 55 60 His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn 65 70 75 80 Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu 165 170 175 Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly 195 200 205 Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr 210 215 220 Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro 290 295 300 Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 124 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D1_nt <400> 124 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgctaa aggtgaactg tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtcg 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc aaatggcacc cgcctggaat acacggaaat caaaaacgat 660 ggtagcggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacgtgc ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaaaacacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcacc ggctgaaatc aaggacctgg ctgaactgtg tgcggcactg 1020 aaa 1023 <210> 125 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 125 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 126 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D1_His_nt <400> 126 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacgctaa aggtgaactg tcggaaaaaa ccatcctgcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga aatcaagtcg gacggcacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacggaa 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc gaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaatgcacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ttccgcaggt accaacctgg aaggcaacgc tgtggaaatc 480 aaaaccctgg acgaactgaa aaacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtcg 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc aaatggcacc cgcctggaat acacggaaat caaaaacgat 660 ggtagcggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacgtgc ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaaaacacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcacc ggctgaaatc aaggacctgg ctgaactgtg tgcggcactg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 127 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S4D1-S3D4_aa <400> 127 Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys 50 55 60 His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn 65 70 75 80 Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys 145 150 155 160 Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu 165 170 175 Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr 180 185 190 Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly 195 200 205 Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr 210 215 220 Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly 225 230 235 240 Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys 245 250 255 Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro 290 295 300 Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 128 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D4_nt <400> 128 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaatgctaa gggcgaactg agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc 120 acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc 480 aaaaccctgg atgaactgtg taacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtca 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc ttgtggcacc cgcctggaat acaccgaaat caaaaacgac 660 ggctcgggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacggaa ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaatgcacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcccc ggctgaaatc aaggacctgg cggaactgaa ggcggcactg 1020 aaa 1023 <210> 129 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 129 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 130 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D4_His_nt <400> 130 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaatgctaa gggcgaactg agcgaaaaaa cgatcctgcg tgcgaatggc 120 acccgtctgg aatacaccga aatcaaatcc gatggtacgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagattttg ctctggaagg taccctggcg gccgacaaaa ccacgctgaa ggtgacgtgc 240 ggcaccgtgg ttctgagcaa acatattccg aactctggtg aaatcaccgt tgaactgaac 300 gatagcaatt ctacgcaggc aaccaaaaag acgggcaaat gggacagtaa tacctccacg 360 ctgaccattt cagtcaactc gaaaaagacc aaaaatattg tgttcacgaa ggaagatacg 420 atcaccgttc aaaaatatga ctccgcgggc accaacctgg aaggcaatgc cgtcgaaatc 480 aaaaccctgg atgaactgtg taacgccctg aagggtacta gtgacaaaaa caatggctct 540 ggtagcaaag agaaaaacaa agatggcaag tactcattta acgataaggg caaactgtca 600 gaaaaagtgg tcacccgcgc ttgtggcacc cgcctggaat acaccgaaat caaaaacgac 660 ggctcgggca aagcgaagga agttctgaaa ggctttgccc tggaaggtac cctgacggat 720 ggcggtgaaa ccaaactgac cgtgacggaa ggcaccgtta cgctgtctaa aaacattagc 780 aagtctggtg aaatcacggt cgcactgaat gataccgaaa ccacgccggc tgacaaaaag 840 accggcgaat ggaaaagtga cacctccacg ctgaccattt caaagaactc gcagaaaccg 900 aagcaactgg tcttcaccaa agaatgcacg atcaccgtgc agaactataa tcgtgccggt 960 aatgctctgg aaggctcccc ggctgaaatc aaggacctgg cggaactgaa ggcggcactg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 131 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S6D4-S5D1_aa <400> 131 Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser 65 70 75 80 Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly 115 120 125 Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu 130 135 140 Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu 165 170 175 Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu 210 215 220 Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser 225 230 235 240 Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys 245 250 255 Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 132 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D1_nt <400> 132 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agtgaaaaaa cgattgttcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga tatcaagtcg gatggttcgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 gaaggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggacag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgatagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gaagaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc acccgcctgg aatacaccga catcaaatca 660 gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggattcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 133 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D1_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 133 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 134 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D1_His_nt <400> 134 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agtgaaaaaa cgattgttcg cgcctgtggc 120 acccgcctgg aatacacgga tatcaagtcg gatggttcgg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 gaaggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggacag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaatgc 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgatagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gaagaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 tcagaaaaaa ccatcgtccg cgctaacggc acccgcctgg aatacaccga catcaaatca 660 gacaagaccg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc tgcggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggattcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaagatacg atcaccgtgc aaaactatga cagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgtg taatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 135 <211> 318 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S6D1-S5D4_aa <400> 135 Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser 65 70 75 80 Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly 115 120 125 Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu 130 135 140 Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu 165 170 175 Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr 180 185 190 Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys 195 200 205 Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu 210 215 220 Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser 225 230 235 240 Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys 245 250 255 Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys 260 265 270 Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile 275 280 285 Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala 290 295 300 Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 <210> 136 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D4_nt <400> 136 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agcgaaaaga ccatcgtgcg tgcgaacggt 120 acccgcctgg aatatacgga cattaaatcg gacggcagcg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 tgcggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggatag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaagat 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgacagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gtgtaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc acccgtctgg aatataccga catcaagagc 660 gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggactcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaa 1023 <210> 137 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D4_His_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 137 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 325 330 <210> 138 <211> 1050 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D4_His_nt <400> 138 atgaaagcta ctaaactggt actgggcgcg gtaatcctgg gttctactct gctggcaggt 60 tgctcaagct tcaacggcaa aggtgaaacg agcgaaaaga ccatcgtgcg tgcgaacggt 120 acccgcctgg aatatacgga cattaaatcg gacggcagcg gcaaagcaaa ggaagtcctg 180 aaagatttta cgctggaagg taccctggca gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacg 240 tgcggcaccg tggttctgtc aaaaaacatt ctgaagtcgg gtgaaatcac cgcagctctg 300 gatgacagcg ataccacgcg tgctacgaaa aagaccggta aatgggatag caagacctct 360 acgctgacca ttagtgtcaa ctcccagaaa acgaagaatc tggtgttcac caaagaagat 420 acgatcaccg ttcaacgcta tgacagtgcg ggcaccaacc tggaaggcaa agccgttgaa 480 attaccacgc tgaaagaact gtgtaatgct ctgaaaggta ctagtgacaa aaacaatggc 540 tctggtagca aagagaaaaa caaagatggc aagtactcat tcaacgaaaa aggcgaaatc 600 agtgaaaaaa ccattgtgcg tgcgtgtggc acccgtctgg aatataccga catcaagagc 660 gataaaacgg gtaaagcgaa ggaagttctg aaagatttta cgctggaagg taccctggca 720 gcagacggta aaaccacgct gaaggtgacc gaaggtaccg ttacgctgtc caaaaacatt 780 agtaagtccg gcgaaatcac ggtcgccctg gatgacaccg atagctctgg caacaaaaag 840 agcggtacct gggactcagg cacctcgacg ctgaccattt ctaaaaatcg tacgaaaacc 900 aagcagctgg tcttcacgaa agaatgcacg atcaccgtgc aaaactatga tagcgcaggt 960 accaatctgg aaggcaaagc tgtggaaatt accacgctga aagaactgaa gaatgctctg 1020 aaaggtctcg agcaccacca ccaccaccac 1050 <210> 139 <400> 139 000 <210> 140 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D0-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 140 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 141 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 141 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 142 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D2-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 142 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Cys Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 143 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D3-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 143 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Cys Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 144 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 144 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 145 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D5-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 145 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Cys Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Cys Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 146 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D6-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 146 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Cys Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Cys Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 147 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D7-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 147 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Cys Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Cys Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 148 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D8-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 148 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Cys Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Cys Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 149 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D9-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 149 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Cys Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Cys Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 150 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D10-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 150 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Cys Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Cys Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 151 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D11-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 151 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Cys Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 152 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D12-His <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 152 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Cys Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Cys Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys Gly Leu Glu His His His His His His 145 150 155 <210> 153 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D0 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 153 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 154 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 154 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 155 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D2 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 155 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Cys Lys 145 <210> 156 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D3 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 156 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Cys Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 157 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 157 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 158 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D5 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 158 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Cys Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Cys Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 159 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D6 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 159 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Cys Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Cys Lys 145 <210> 160 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D7 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 160 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Cys Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Cys Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 161 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D8 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 161 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Cys Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Cys Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 162 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D9 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 162 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Cys Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Cys Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 163 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D10 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 163 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Cys Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Cys Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 164 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D11 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 164 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Cys Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 165 <211> 147 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D12 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 165 Cys Lys Gln Asn Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly 1 5 10 15 Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala 20 25 30 Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Cys Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp 35 40 45 Lys Val Thr Cys Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu 50 55 60 Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr 65 70 75 80 Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr 100 105 110 Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn 115 120 125 Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn 130 135 140 Ala Leu Lys 145 <210> 166 <211> 143 <212> PRT <213> Borrelia afzelii <400> 166 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 167 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D1 <400> 167 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 168 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D2 <400> 168 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Cys Lys 130 135 140 <210> 169 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D3 <400> 169 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Cys Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 170 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D4 <400> 170 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 171 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D5 <400> 171 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Cys Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Cys Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 172 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D6 <400> 172 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Cys Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Cys Lys 130 135 140 <210> 173 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D7 <400> 173 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Cys Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Cys Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 174 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D8 <400> 174 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Cys Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Cys Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 175 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D9 <400> 175 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Cys Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Cys Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 176 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D10 <400> 176 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Cys Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Cys Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 177 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D11 <400> 177 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Cys Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Cys Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 178 <211> 143 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S2D12 <400> 178 Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu 1 5 10 15 Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu 20 25 30 Lys Asn Phe Thr Cys Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Cys 35 40 45 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser 50 55 60 Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr 65 70 75 80 Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 100 105 110 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 115 120 125 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 130 135 140 <210> 179 <211> 148 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B. burgdorferi s.s. (strain B31, serotype 1), OspA_aa 126-273 with replaced hLFA-like sequence from serotype 1 OspA <400> 179 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 50 55 60 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 65 70 75 80 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 115 120 125 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys 145 <210> 180 <211> 149 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 180 Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp 35 40 45 Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly 115 120 125 Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu 130 135 140 Lys Ala Ala Leu Lys 145 <210> 181 <211> 148 <212> PRT <213> Borrelia bavariensis <400> 181 Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys 50 55 60 His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn 65 70 75 80 Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys 145 <210> 182 <211> 148 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 182 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr 65 70 75 80 Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe 100 105 110 Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr 115 120 125 Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys 130 135 140 Asn Ala Leu Lys 145 <210> 183 <211> 149 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 183 Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala 35 40 45 Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser 65 70 75 80 Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly 115 120 125 Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu 130 135 140 Lys Asn Ala Leu Lys 145 <210> 184 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LN1 peptide linker constructed from two separate loop regions of the N-terminal half of OspA from B. burgdorferi s.s. strain B31 (aa 65-74 and aa 42-53, amino acid exchange at position 53: D53S) <400> 184 Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys 1 5 10 15 Asp Gly Lys Tyr Ser 20 <210> 185 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 185 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 186 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 186 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 187 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 187 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 188 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 188 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 189 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 189 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 190 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 190 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 191 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 191 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 192 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 192 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 193 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 193 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 194 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 194 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 195 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 195 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 196 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 196 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 197 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D4-S2D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 197 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 198 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S1D1-S2D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 198 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp 130 135 140 Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val Thr 210 215 220 Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly 290 295 300 Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 199 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D4-S4D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 199 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 200 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S3D1-S4D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 200 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys 85 90 95 Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys 100 105 110 Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn 115 120 125 Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu 130 135 140 Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Ala 165 170 175 Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys His Ile Pro 225 230 235 240 Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn Asp Ser Asn Ser Thr Gln 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Asn Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn Ile Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 201 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D4-S6D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 201 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 202 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S5D1-S6D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 202 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Thr Asp Ser Ser Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser 85 90 95 Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Gly Lys 165 170 175 Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr 210 215 220 Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg 245 250 255 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 203 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D4-S1D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 203 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Cys Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Asn 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Cys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 204 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S2D1-S1D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 204 Cys Ser Ser Phe Asn Glu Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr 1 5 10 15 Arg Glu Asn Gly Thr Lys Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys 35 40 45 Val Ala Asn Asp Lys Val Thr Leu Glu Val Lys Cys Gly Thr Val Thr 50 55 60 Leu Ser Lys Glu Ile Ala Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn 65 70 75 80 Asp Thr Asn Thr Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser 85 90 95 Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln 100 105 110 Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu Lys 165 170 175 Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr 210 215 220 Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser Lys 225 230 235 240 Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala 245 250 255 Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr Ile 260 265 270 Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys 275 280 285 Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Lys Leu Glu Gly 290 295 300 Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys Asn Ala Leu Lys 305 310 315 320 <210> 205 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D4-S3D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 205 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asn Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Cys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 206 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S4D1-S3D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 206 Cys Ser Ser Phe Asn Ala Lys Gly Glu Leu Ser Glu Lys Thr Ile Leu 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Thr Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Ala Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Val 50 55 60 Leu Ser Lys His Ile Pro Asn Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Asn 65 70 75 80 Asp Ser Asn Ser Thr Gln Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp Ser 85 90 95 Asn Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asn 100 105 110 Ile Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser 115 120 125 Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Asn Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp 130 135 140 Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser 145 150 155 160 Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Asp Lys 165 170 175 Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu 180 185 190 Glu Tyr Thr Glu Ile Lys Asn Asp Gly Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val 195 200 205 Leu Lys Gly Phe Ala Leu Glu Gly Thr Leu Thr Asp Gly Gly Glu Thr 210 215 220 Lys Leu Thr Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile Ser 225 230 235 240 Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Glu Thr Thr Pro 245 250 255 Ala Asp Lys Lys Thr Gly Glu Trp Lys Ser Asp Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Pro Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asn Arg Ala Gly Asn Ala Leu Glu 290 295 300 Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Ala Glu Leu Lys Ala Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 207 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D4-S5D1_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 207 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Cys Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Cys Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Asn Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Asp Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 208 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lip-S6D1-S5D4_aa <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 208 Cys Ser Ser Phe Asn Gly Lys Gly Glu Thr Ser Glu Lys Thr Ile Val 1 5 10 15 Arg Ala Asn Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Gly 20 25 30 Ser Gly Lys Ala Lys Glu Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr 35 40 45 Leu Ala Ala Asp Gly Lys Thr Thr Leu Lys Val Thr Cys Gly Thr Val 50 55 60 Val Leu Ser Lys Asn Ile Leu Lys Ser Gly Glu Ile Thr Ala Ala Leu 65 70 75 80 Asp Asp Ser Asp Thr Thr Arg Ala Thr Lys Lys Thr Gly Lys Trp Asp 85 90 95 Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser Val Asn Ser Gln Lys Thr Lys 100 105 110 Asn Leu Val Phe Thr Lys Glu Asp Thr Ile Thr Val Gln Arg Tyr Asp 115 120 125 Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Leu Cys Asn Ala Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly 145 150 155 160 Ser Gly Ser Lys Glu Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Ser Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Gly Glu Ile Ser Glu Lys Thr Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Arg 180 185 190 Leu Glu Tyr Thr Asp Ile Lys Ser Asp Lys Thr Gly Lys Ala Lys Glu 195 200 205 Val Leu Lys Asp Phe Thr Leu Glu Gly Thr Leu Ala Ala Asp Gly Lys 210 215 220 Thr Thr Leu Lys Val Thr Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Asn Ile 225 230 235 240 Ser Lys Ser Gly Glu Ile Thr Val Ala Leu Asp Asp Thr Asp Ser Ser 245 250 255 Gly Asn Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Gly Thr Ser Thr Leu Thr 260 265 270 Ile Ser Lys Asn Arg Thr Lys Thr Lys Gln Leu Val Phe Thr Lys Glu 275 280 285 Cys Thr Ile Thr Val Gln Asn Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 290 295 300 Gly Lys Ala Val Glu Ile Thr Thr Leu Lys Glu Leu Lys Asn Ala Leu 305 310 315 320 Lys <210> 209 <211> 266 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B. afzelii (strain K78; OspA serotype 2) aa 17-273, lipidation signal sequence removed, C-terminal His tag <400> 209 Cys Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Tyr Ser Leu Lys Ala Thr Val Asp Lys Ile Glu Leu Lys 35 40 45 Gly Thr Ser Asp Lys Asp Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Thr Lys 50 55 60 Asp Asp Lys Ser Lys Ala Lys Leu Thr Ile Ala Asp Asp Leu Ser Lys 65 70 75 80 Thr Thr Phe Glu Leu Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Arg 85 90 95 Lys Val Ser Ser Lys Asp Lys Thr Ser Thr Asp Glu Met Phe Asn Glu 100 105 110 Lys Gly Glu Leu Ser Ala Lys Thr Met Thr Arg Glu Asn Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Tyr Thr Glu Met Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Glu 130 135 140 Val Leu Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Val 145 150 155 160 Thr Leu Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys Glu Ile Ala 165 170 175 Lys Ser Gly Glu Val Thr Val Ala Leu Asn Asp Thr Asn Thr Thr Gln 180 185 190 Ala Thr Lys Lys Thr Gly Ala Trp Asp Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr 195 200 205 Ile Ser Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln 210 215 220 Asp Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu 225 230 235 240 Gly Thr Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu 245 250 255 Lys Gly Leu Glu His His His His His His 260 265 <210> 210 <211> 268 <212> PRT <213> Borrelia burgdorferi <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 210 Cys Ser Ser Phe Lys Gln Asn Val Ser Ser Leu Asp Glu Lys Asn Ser 1 5 10 15 Val Ser Val Asp Leu Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu 20 25 30 Lys Asn Lys Asp Gly Lys Tyr Asp Leu Ile Ala Thr Val Asp Lys Leu 35 40 45 Glu Leu Lys Gly Thr Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu 50 55 60 Gly Val Lys Ala Asp Lys Ser Lys Val Lys Leu Thr Ile Ser Asp Asp 65 70 75 80 Leu Gly Gln Thr Thr Leu Glu Val Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu 85 90 95 Val Ser Lys Lys Val Thr Ser Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys 100 105 110 Phe Asn Glu Lys Gly Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Arg Ala Asp 115 120 125 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Ser Gly Lys 130 135 140 Ala Lys Glu Val Leu Lys Gly Tyr Val Leu Glu Gly Thr Leu Thr Ala 145 150 155 160 Glu Lys Thr Thr Leu Val Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Lys 165 170 175 Asn Ile Ser Lys Ser Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp 180 185 190 Ser Ser Ala Ala Thr Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Gly Thr Ser 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Val Asn Ser Lys Lys Thr Lys Asp Leu Val Phe 210 215 220 Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Gly Thr 225 230 235 240 Lys Leu Glu Gly Ser Ala Val Glu Ile Thr Lys Leu Asp Glu Ile Lys 245 250 255 Asn Ala Leu Lys Leu Glu His His His His His His 260 265 <210> 211 <211> 4 <212> PRT <213> Borrelia afzelii <400> 211 Cys Lys Gln Asn 1 <210> 212 <211> 257 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric OspA Serotype1/Serotype2 <220> <221> LIPID <222> (1)..(1) <223> LIPIDATION <400> 212 Cys Ala Gln Lys Gly Ala Glu Ser Ile Gly Ser Val Ser Val Asp Leu 1 5 10 15 Pro Gly Glu Met Lys Val Leu Val Ser Lys Glu Lys Asp Lys Asn Gly 20 25 30 Lys Tyr Asp Leu Ile Ala Thr Val Asp Lys Leu Glu Leu Lys Gly Thr 35 40 45 Ser Asp Lys Asn Asn Gly Ser Gly Val Leu Glu Gly Val Lys Thr Asn 50 55 60 Lys Ser Lys Val Lys Leu Thr Ile Ser Asp Asp Leu Gly Gln Thr Thr 65 70 75 80 Leu Glu Val Phe Lys Glu Asp Gly Lys Thr Leu Val Ser Lys Lys Val 85 90 95 Thr Ser Lys Asp Lys Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe Asn Glu Lys Gly 100 105 110 Glu Val Ser Glu Lys Ile Ile Thr Met Ala Asp Gly Thr Arg Leu Glu 115 120 125 Tyr Thr Gly Ile Lys Ser Asp Gly Thr Gly Lys Ala Lys Tyr Val Leu 130 135 140 Lys Asn Phe Thr Leu Glu Gly Lys Val Ala Asn Asp Lys Thr Thr Leu 145 150 155 160 Glu Val Lys Glu Gly Thr Val Thr Leu Ser Met Asn Ile Ser Lys Ser 165 170 175 Gly Glu Val Ser Val Glu Leu Asn Asp Thr Asp Ser Ser Ala Ala Thr 180 185 190 Lys Lys Thr Ala Ala Trp Asn Ser Lys Thr Ser Thr Leu Thr Ile Ser 195 200 205 Val Asn Ser Lys Lys Thr Thr Gln Leu Val Phe Thr Lys Gln Asp Thr 210 215 220 Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Gly Thr Asn Leu Glu Gly Thr 225 230 235 240 Ala Val Glu Ile Lys Thr Leu Asp Glu Leu Lys Asn Ala Leu Lys Leu 245 250 255 Glu <210> 213 <211> 149 <212> PRT <213> Borrelia garinii <400> 213 Phe Asn Asp Lys Gly Lys Leu Ser Glu Lys Val Val Thr Arg Ala Asn 1 5 10 15 Gly Thr Arg Leu Glu Tyr Thr Glu Ile Gln Asn Asp Gly Ser Gly Lys 20 25 30 Ala Lys Glu Val Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Gly Thr Leu Thr Ala 35 40 45 Asp Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Glu Ala Gly Thr Val Thr Leu Ser 50 55 60 Lys Asn Ile Ser Glu Ser Gly Glu Ile Thr Val Glu Leu Lys Asp Thr 65 70 75 80 Glu Thr Thr Pro Ala Asp Lys Lys Ser Gly Thr Trp Asp Ser Lys Thr 85 90 95 Ser Thr Leu Thr Ile Ser Lys Asn Ser Gln Lys Thr Lys Gln Leu Val 100 105 110 Phe Thr Lys Glu Asn Thr Ile Thr Val Gln Lys Tyr Asn Thr Ala Gly 115 120 125 Thr Lys Leu Glu Gly Ser Pro Ala Glu Ile Lys Asp Leu Glu Ala Leu 130 135 140 Lys Ala Ala Leu Lys 145 <210> 214 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 214 catgctcttg atcctgttta 20 <210> 215 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C-terminal His tag <400> 215 Gly Leu Glu His His His His His His 1 5 <210> 216 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pcr primer <400> 216 cccatttctc catctatctc 20

Claims (35)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 서열번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로써 이루어진, 폴리펩타이드.
  8. 청구항 7에 따른 상기 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 분자.
  9. 청구항 8에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  10. 청구항 8의 핵산 분자 또는 청구항 9에 정의된 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  11. 청구항 7에 따른 폴리펩타이드를 제조하는 방법으로서,
    a) 폴리펩타이드를 인코딩하는 벡터를 숙주 세포 내로 도입하는 단계,
    b) 숙주 세포를 상기 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 성장시키는 단계,
    c) 상기 숙주 세포를 균질화하는 단계, 및
    d) 숙주 세포 균질물에 정제 단계를 행하는 단계에 의해 특징지어지는, 폴리펩타이드 제조 방법.
  12. 청구항 7에 따른 폴리펩타이드 또는 청구항 8에 따른 핵산 분자, 및 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 보렐리아 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 보렐리아 감염은 B. 부르그도르페리 s.s., B. 가리니이, B. 아프젤리이, B. 안데르소니, B. 바바리엔시스, B. 비쎄티, B. 발라이시아나, B. 루시타니애, B. 스피엘마니이, B. 자포니카, B. 타누키이, B. 투르디 또는 B. 시니카 감염인, 약제학적 조성물.
  13. 청구항 7에 따른 폴리펩타이드, 및 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  14. 청구항 12에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 부형제가 L-메티오닌을 포함하는, 약제학적 조성물.
  15. 청구항 12에 있어서, 적어도 하나의 추가 병원체를 추가로 포함하고, 상기 병원체는 라임 보렐리아증 또는 보렐리아 이외의 항원을 유발하는 보렐리아 종으로부터 유래되는, 약제학적 조성물.
  16. 청구항 12에 있어서, 면역자극 물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 약제학적 조성물.
  17. 청구항 12에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 백신인, 약제학적 조성물.
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 청구항 7에 있어서, 상기 아미노산 서열은 서열번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 85%의 서열 동일성을 갖는, 폴리펩타이드.
  26. 청구항 7 또는 25에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 보렐리아 바늘 유발접종 방법(Borrelia Needle Challenge Method)에서 위약 대조군에 비해 적어도 50%의 보호능 차이(Δpc)를 갖는, 폴리펩타이드.
  27. 보렐리아 감염을 치료 또는 예방하기 위한 청구항 7 또는 25에 따른 폴리펩타이드.
  28. 청구항 27에 있어서, 상기 보렐리아 감염은 B. 부르그도르페리 센수 스트릭토(B. burgdorferi s.s.), B. 가리니이(B. garinii), B. 아프젤리이(B. afzelii), B. 안데르소니(B. andersoni), B. 바바리엔시스(B. bavariensis), B. 비쎄티(B. bissettii), B. 발라이시아나(B. valaisiana), B. 루시타니애(B. lusitaniae), B. 스피엘마니이(B. spielmanii), B. 자포니카(B. japonica), B. 타누키이(B. tanukii), B. 투르디(B. turdi) 또는 B. 시니카(B. sinica) 감염인, 폴리펩타이드.
  29. 청구항 10에 있어서, 상기 숙주 세포는 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli)인, 숙주 세포.
  30. 청구항 15에 있어서, 상기 병원체는 진드기 매개 병원체인, 약제학적 조성물.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 진드기 매개 병원체는 보렐리아 헤름시이, 보렐리아 파르케리, 보렐리아 두토니, 보렐리아 미야모토이, 보렐리아 투리카태, 리케차 리케트시, 리케차 아우스트랄리스, 리케차 코노리, 리케차 헬베티카, 리케차 파르케리, 프란시셀라 툴라렌시스, 아나플라즈마 파고사이토필럼, 에를리히아 센네츠, 에를리히아 챠페엔시스, 콕시엘라 부르네티이, 보렐리아 로네스타리, 진드기 매개 뇌염 바이러스(TBEV), 콜로라도 진드기열 바이러스(CTFV), 크림-콩고 출혈열 바이러스(CCHFV), 키아사누르 포레스트 질환 바이러스(KFDV), 포와산 바이러스, 하트랜드 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스(OHFV) 및 바베시아 spp.을 포함하는 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  32. 청구항 16에 있어서, 상기 면역자극 물질은 다중양이온성 폴리머, 면역자극 올리고데옥시뉴클레오타이드(ODNs), 적어도 두 개의 LysLeuLys 모티프를 함유하는 펩타이드, 신경활성 화합물, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트, 프로인트 완전 아쥬반트, 프로인트 불완전 아쥬반트, 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  33. 청구항 32에 있어서,
    (a) 다중양이온성 폴리머는 다중양이온성 펩타이드이고,
    (b) ODN는 올리고(dIdC)13(서열번호 32)이고,
    (c) 적어도 두 개의 LysLeuLys 모티프를 함유하는 펩타이드는 KLKLLLLLKLK(서열번호 33)를 포함하고/하거나,
    (d) 신경활성 화합물은 인간 성장 호르몬인, 약제학적 조성물.
  34. 청구항 7에 있어서, 상기 아미노산 서열은 서열번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는, 폴리펩타이드.
  35. 청구항 7에 있어서, 상기 아미노산 서열은 서열번호: 190의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는, 폴리펩타이드.
KR1020207035357A 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도 KR102393038B1 (ko)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261668627P 2012-07-06 2012-07-06
US61/668,627 2012-07-06
US13/802,991 2013-03-14
US13/802,991 US8986704B2 (en) 2012-07-06 2013-03-14 Mutant fragments of OspA and methods and uses relating thereto
PCT/EP2013/064403 WO2014006226A1 (en) 2012-07-06 2013-07-08 MUTANT FRAGMENTS OF OspA AND METHODS AND USES RELATING THERETO
KR1020157001969A KR102190981B1 (ko) 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157001969A Division KR102190981B1 (ko) 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200141096A KR20200141096A (ko) 2020-12-17
KR102393038B1 true KR102393038B1 (ko) 2022-04-29

Family

ID=49878705

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207035357A KR102393038B1 (ko) 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도
KR1020157001969A KR102190981B1 (ko) 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157001969A KR102190981B1 (ko) 2012-07-06 2013-07-08 OspA의 돌연변이체 단편 및 이에 관련된 방법 및 용도

Country Status (24)

Country Link
US (9) US8986704B2 (ko)
EP (3) EP2869839B1 (ko)
JP (1) JP6276258B2 (ko)
KR (2) KR102393038B1 (ko)
CN (2) CN107602676B (ko)
AU (2) AU2013285364B2 (ko)
CA (1) CA2876541C (ko)
CY (1) CY1120772T1 (ko)
DK (1) DK2869839T3 (ko)
EA (2) EA033007B1 (ko)
ES (2) ES2688883T3 (ko)
HK (4) HK1248244A1 (ko)
HR (1) HRP20181689T1 (ko)
HU (1) HUE041286T2 (ko)
LT (1) LT2869839T (ko)
MX (1) MX364623B (ko)
NZ (2) NZ703597A (ko)
PL (1) PL2869839T3 (ko)
PT (1) PT2869839T (ko)
RS (1) RS57847B1 (ko)
SI (1) SI2869839T1 (ko)
TR (1) TR201815419T4 (ko)
WO (1) WO2014006226A1 (ko)
ZA (1) ZA201409222B (ko)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8986704B2 (en) * 2012-07-06 2015-03-24 Valneva Austria Gmbh Mutant fragments of OspA and methods and uses relating thereto
CN105980398B (zh) * 2014-01-09 2019-11-26 瓦尔尼瓦奥地利有限责任公司 OspA的突变片段以及其相关方法和用途
RU2689315C2 (ru) * 2014-06-27 2019-05-27 Убе Индастриз, Лтд. Соль гетероциклического соединения, замещенного галогеном
WO2016022958A2 (en) * 2014-08-07 2016-02-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tick-associated virus sequences and uses thereof
WO2017108902A1 (en) * 2015-12-23 2017-06-29 Novartis Ag Oil-in-water emulsions including retinoic acid
WO2017139715A1 (en) * 2016-02-11 2017-08-17 The Translational Genomics Research Institute Systems and methods for the detection of infectious diseases
WO2018189372A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Valneva Austria Gmbh Multivalent ospa polypeptides and methods and uses relating thereto
KR20190001421U (ko) 2019-05-26 2019-06-13 이준형 노크형 내부 수납식 칫솔
CN110483624B (zh) * 2019-08-22 2021-02-09 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 伽氏疏螺旋体OspA蛋白C端肽段及其应用
CN111269919B (zh) * 2020-03-19 2021-07-13 四川农业大学 玉米基因ZmLIP2及其应用
JP2023522170A (ja) 2020-04-09 2023-05-29 バルネバ オーストリア ゲーエムベーハ― 医学的使用のための３つのＯｓｐＡ融合タンパク質を含む組成物
US20230398210A1 (en) 2020-04-09 2023-12-14 Valneva Austria Gmbh Improvements in vaccine formulations for medical use
KR20240055810A (ko) * 2021-09-02 2024-04-29 박사이트, 인코포레이티드 보조 백신 조성물의 안정화 및 이들의 용도

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4810428B2 (ja) 2003-09-30 2011-11-09 セントカー・インコーポレーテツド ヒトｅｐｏ模倣ヒンジコアミメティボディ、組成物、方法および使用
JP2019070007A (ja) 2006-09-26 2019-05-09 インフェクティアス ディジーズ リサーチ インスティチュート 合成アジュバントを含むワクチン組成物

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7008625B2 (en) * 1993-11-01 2006-03-07 Research Foundation Of The State University Of New York Recombinant constructs of Borrelia burgdorferi
US6248562B1 (en) 1993-11-01 2001-06-19 Research Foundation State University Of New York Chimeric proteins comprising borrelia polypeptides and uses therefor
DK1311540T3 (da) * 2000-08-18 2008-04-28 Brookhaven Sciences Ass Llc Ændret OspA af Borrelia Burgdorferi
WO2008031133A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Intercell Ag Borrelia antigens
AU2011252850B2 (en) 2010-05-14 2016-03-17 Baxalta GmbH OspA chimeras and use thereof in vaccines
TWI507413B (zh) 2010-11-15 2015-11-11 Nat Health Research Institutes 脂質化多抗原表位疫苗
TW201221642A (en) 2010-11-15 2012-06-01 Nat Health Research Institutes Method of producing lipidated polypeptides
US8986704B2 (en) * 2012-07-06 2015-03-24 Valneva Austria Gmbh Mutant fragments of OspA and methods and uses relating thereto
CN105980398B (zh) 2014-01-09 2019-11-26 瓦尔尼瓦奥地利有限责任公司 OspA的突变片段以及其相关方法和用途
CZ2014320A3 (cs) 2014-05-09 2015-11-18 VÝZKUMNÝ ÚSTAV VETERINÁRNÍHO LÉKAŘSTVÍ, v.v.i. Polyepitopový antigen, vakcinační konstrukt a vakcína pro prevenci lymeské boreliózy
WO2018189372A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 Valneva Austria Gmbh Multivalent ospa polypeptides and methods and uses relating thereto

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4810428B2 (ja) 2003-09-30 2011-11-09 セントカー・インコーポレーテツド ヒトｅｐｏ模倣ヒンジコアミメティボディ、組成物、方法および使用
JP2019070007A (ja) 2006-09-26 2019-05-09 インフェクティアス ディジーズ リサーチ インスティチュート 合成アジュバントを含むワクチン組成物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
INFECTION AND IMMUNITY, (2001), Vol.69, 4799~4807 1부.*
JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, (2005), Vol.350, 290~299 1부.*

Also Published As

Publication number Publication date
EA201991059A1 (ru) 2020-01-31
ZA201409222B (en) 2016-08-31
KR102190981B1 (ko) 2020-12-15
US20140010835A1 (en) 2014-01-09
US20170101446A1 (en) 2017-04-13
CY1120772T1 (el) 2019-12-11
US20150250865A1 (en) 2015-09-10
CN107602676B (zh) 2021-06-04
CN104487084A (zh) 2015-04-01
EP2869839B1 (en) 2018-09-05
US10544194B2 (en) 2020-01-28
HK1207982A1 (en) 2016-02-19
EP3689372A1 (en) 2020-08-05
PL2869839T3 (pl) 2018-12-31
DK2869839T3 (en) 2018-10-15
AU2017218974A1 (en) 2017-09-07
US11466058B2 (en) 2022-10-11
ES2800873T3 (es) 2021-01-04
AU2013285364A1 (en) 2015-01-29
NZ733026A (en) 2019-09-27
EA033007B1 (ru) 2019-08-30
EP2869839A1 (en) 2015-05-13
WO2014006226A1 (en) 2014-01-09
US11208439B2 (en) 2021-12-28
HK1257893A1 (zh) 2019-11-01
MX364623B (es) 2019-05-03
HRP20181689T1 (hr) 2018-12-28
US20180327460A1 (en) 2018-11-15
CA2876541A1 (en) 2014-01-09
AU2017218974B2 (en) 2019-05-30
CN107602676A (zh) 2018-01-19
MX2015000013A (es) 2015-06-04
TR201815419T4 (tr) 2018-11-21
NZ703597A (en) 2017-06-30
ES2688883T3 (es) 2018-11-07
US9926343B2 (en) 2018-03-27
JP2015522270A (ja) 2015-08-06
AU2013285364B2 (en) 2017-06-15
EA201590162A1 (ru) 2015-06-30
AU2017218974C1 (en) 2020-02-20
KR20200141096A (ko) 2020-12-17
HUE041286T2 (hu) 2019-05-28
SI2869839T1 (sl) 2018-11-30
US20200239525A1 (en) 2020-07-30
LT2869839T (lt) 2018-11-12
JP6276258B2 (ja) 2018-02-07
CA2876541C (en) 2022-03-01
HK1248244A1 (zh) 2018-10-12
KR20150036191A (ko) 2015-04-07
CN104487084B (zh) 2017-09-22
RS57847B1 (sr) 2018-12-31
EP3360568B1 (en) 2020-03-04
EP3360568A1 (en) 2018-08-15
US8986704B2 (en) 2015-03-24
US20230295245A1 (en) 2023-09-21
US20150232517A1 (en) 2015-08-20
HK1209370A1 (en) 2016-04-01
US20170107263A1 (en) 2017-04-20
PT2869839T (pt) 2018-11-12
US20220185851A1 (en) 2022-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11466058B2 (en) Mutant fragments of OspA and methods and uses relating thereto
US20230322869A1 (en) Mutant fragments of ospa and methods and uses relating thereto

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant