KR102371420B1

KR102371420B1 - Tnfsf14 단백질을 포함하는 미백용 조성물

Info

Publication number: KR102371420B1
Application number: KR1020170081207A
Authority: KR
Inventors: 김규한; 김형준; 이태룡
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2017-06-27
Filing date: 2017-06-27
Publication date: 2022-03-08
Also published as: KR20190001346A; JP2019006775A; CN109125105A; US20180369114A1

Abstract

본 명세서는 피부 미백 효과를 발휘하는 새로운 물질을 발굴하고 이를 미백용 조성물에 응용하기 위한 것으로서, TNFSF14 단백질 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드을 포함하는 새로운 미백용 조성물, 키트 및 이를 이용하는 방법을 제공하여, 미백 분야와 관련된 시장 확장 및 산업 발전에 기여할 수 있을 것이다.

Description

TNFSF14 단백질을 포함하는 미백용 조성물{COMPOSITION FOR SKIN WHITENING COMRPISING TNFSF14 PROTEIN}

본 명세서는 TNFSF14 단백질을 포함하는 미백용 조성물에 관한 것이다.

멜라닌(melanin)은 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 지니는 페놀류의 생체 고분자 물질로서, 사과, 감자, 바나나의 잘린 표면이 공기 중에 노출될 때 발생하는 갈변 또는 동물의 외피 깃털, 피부, 머리, 눈 등에서 관찰된다. 멜라닌이 과잉 생산되는 경우 피부에 침착되어 기미, 주근깨 등이 형성되므로 피부 미백 등과 직결되고, 멜라닌으로 인해 피부 노화도 촉진되며 피부암도 유발될 수 있다.

자외선, 염증, 호르몬 등에 의해서 멜라닌 형성 세포 자극 호르몬(melanocyte stimulating hormone, MSH)이 분비되고, MSH는 수용체와 반응하여 멜라닌 형성 세포 내에 cAMP를 향상시켜 멜라닌을 합성하며, 합성된 멜라닌은 멜라닌 형성 세포의 외부로 분비되어 자외선 등으로부터 피부를 보호하는 역할을 하게 된다. 멜라닌의 합성은 주로 α-MSH에 의해 조절되고, 멜라닌의 합성에 관여하는 단백질로는 MITF, TYR, TRP1, TRP2 등이 알려져 있다.

TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질은 TNFRSF14(tumor necrosis factor receptor superfamily 14)에 대한 리간드이다. 이 단백질은 임파상 세포의 활성에 대한 보조 자극 요인으로 작용하고, 허피스 바이러스 감염을 제지하는 기능을 하기도 한다. 또한, T 세포의 증식을 자극하고 종양세포의 세포자살(apoptosis)를 일으키기도 하는 것으로 알려져 있다.

그러나, TNFSF14 단백질이 미백 효과나 멜라닌 생성에 관여한다는 연구는 아직 알려져 있지 않다.

대한민국 등록특허 제10-1735564호(2017.05.08.)

본 발명은 일 측면에서, 피부 미백 효과를 발휘하는 새로운 물질을 발굴하고 이를 미백용 조성물에 응용하기 위한 목적을 가진다.

본 발명은 일 측면에서 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질, 이와 90%이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질, 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명은 다른 측면에서, TNFSF14 단백질 발현을 증진시키는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명은 다른 측면에서, TNFSF14 단백질, 이와 90% 이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 체모 색상 조절용 조성물을 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 상기 조성물을 체모에 처리하는 단계를 포함하는 미용 목적의 체모 색상 조절 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 세포에 시험물질을 처리하는 단계; 및 상기 단계 이후 세포 내의 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 변동 여부를 확인하는 단계를 포함하는, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 시험 물질 처리 전과 후의 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상대적 발현 정도를 나타내는 측정부를 포함하는, 피부 미백 효능 물질 스크리닝을 위한 키트를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 개체에서 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양을 확인하는 단계를 포함하는, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

본 발명은 일측면에서, TNFSF14 단백질, 이와 90%이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질, 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드을 포함하는 새로운 미백용 조성물, 및 이를 이용하는 방법을 제공함으로써, 미백 분야와 관련된 시장 확장 및 산업 발전에 기여할 수 있을 것이다.

도 1은 멜라노사이트에 TNFSF14 단백질을 처리한 경우의 색상 변화에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 멜라노사이트에 TNFSF14 단백질을 처리한 군과 처리하지 않은 군의 멜라닌 생성량을 상대적으로 비교한 것이다.
도 3은 TNFSF14 단백질을 농도별로 다르게 처리했을 때의 멜라닌 생성량을 상대적으로 비교한 것이다.

이하, 본 명세서를 상세히 설명한다.

본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.

본 명세서에서 “TNFSF14”는 종양괴사인자 수퍼 패밀리 멤버 14(tumor necrosis factor superfamily member 14)를 말하며, LIGHT(lymphotoxins, exhibits inducible expression, and competes with HSV glycoprotein D for HVEM, a receptor expressed by T lymphocytes)로 기재되기도 한다.

본 명세서에서 “재조합 단백질”은 유전자 재조합 단백질이라고도 하며, 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 유전자를 재조합 기술에 의해 처리한 뒤, 이를 통해 코딩하여 만들어낸 단백질을 지칭한다.

TNFSF14 단백질은 종양괴사인자 수용체와 관련이 있어, 일반적으로 종양 관련 연구나 염증 관련 연구의 대상이 되던 단백질이다. 그러나, TNFSF14 단백질 및 이에 관련된 유전자 등이 피부에 관련된 효과, 특히 미백 및 체모 색상 조절에 관한 효과를 나타내는지 여부에 대해서는 전혀 알려진 바가 없었다.

본 명세서는 TNFSF14 단백질, 이와 90%이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질, 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 억제함을 실험적으로 규명하여, 상기 단백질 및 폴리뉴클레오티드를 미백용 조성물, 체모 색상 조절용 조성물, 체모 색상 조절 방법, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법, 피부 미백 효능 물질 스크리닝을 위한 키트, 피부 상태 진단 방법 또는 이를 위해 필요한 정보를 제공하는 방법 등에 이용할 수 있음을 입증하였다.

본 발명은 일 측면에서, TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질, 이와 90%이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질, 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에 개시된, 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질은 TNFSF14 단백질과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질을 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 단백질은, 서열번호 1을 포함하는 단백질 또는 그 단편들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 단백질을 포함할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 상기 단백질은 표지물질과 컨쥬게이트된 형태로 조성물에 포함될 수 있다. 다른 측면에 따르면, 상기 표지물질은 형광물질 또는 조영물질일 수 있다. 본 발명의 다른 측면에서 상기 형광물질은 FITC(fluorescein isothiocyanate)일 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 아미노산 변화는 펩티드 또는 단백질의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.

본 명세서에서 "아미노산"이라 함은 자연적으로 펩티드 또는 단백질로 통합되는 22개의 표준 아미노산들 뿐만 아니라 D-아이소머 및 변형된 아미노산들을 포함한다. 이에 따라, 본 발명의 일측면에서 펩티드는 D-아미노산을 포함하는 펩티드일 수 있다. 한편, 본 발명의 다른 측면에서 펩티드 또는 단백질은 번역 후 변형 (post-translational modification)된 비표준 아미노산 등을 포함할 수 있다. 번역 후 변형의 예는 인산화 (phosphorylation), 당화 (glycosylation), 아실화(acylation) (예컨대, 아세틸화 (acetylation), 미리스토일화 (myristoylation) 및 팔미토일화 (palmitoylation)를 포함), 알킬화 (alkylation), 카르복실화 (carboxylation), 히드록실화 (hydroxylation), 당화반응 (glycation), 비오티닐화 (biotinylation), 유비퀴티닐화 (ubiquitinylation), 화학적 성질의 변화 (예컨대, 베타-제거 탈이미드화, 탈아미드화) 및 구조적 변화 (예컨대, 이황화물 브릿지의 형성) 를 포함한다. 또한, 펩티드 컨쥬게이트를 형성하기 위한 가교제 (crosslinker)들과의 결합과정에서 일어나는 화학 반응들에 의해 생기는 아미노산의 변화, 예컨대 아미노기, 카르복시기 또는 사이드 체인에서의 변화와 같은 아미노산의 변화를 포함한다.

본 명세서에 개시된 단백질 또는 펩티드는 자연 그대로의 공급원으로부터 동정 및 분리된 야생형 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 한편, 본 명세서에 개시된 단백질 또는 펩티드는 서열번호 1의 아미노산 서열 전체 또는 그 단편과 비교하여 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하는, 변이체일 수 있다. 변이체에서 뿐만 아니라 야생형 단백질 또는 야생형 폴리펩티드에서의 아미노산 변화는 단백질의 폴딩 (folding) 및/또는 활성에 유의한 영향을 미치지 않는 보존성 아미노산 치환을 포함한다. 보존성 치환의 예들은 염기성 아미노산 (아르기닌, 리신 및 히스티딘), 산성 아미노산 (글루탐산 및 아스파르트산), 극성 아미노산 (글루타민 및 아스파라긴), 소수성 아미노산 (루신, 이소로이신, 발린 및 메티오닌), 방향족 아미노산 (페닐알라닌, 트립토판 및 티로신), 및 작은 아미노산 (글리신, 알라닌, 세린 및 트레오닌)의 군의 범위 내에 있다. 일반적으로 특이적 활성을 변경시키지 않는 아미노산 치환이 본 분야에 공지되어 있다. 가장 흔하게 발생하는 교환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, 및 Asp/Gly, 그리고 이들과 반대인 것들이다. 보존적 치환의 다른 예는 다음 표와 같다.

원래 아미노산	예시적인 잔기 치환	바람직한 잔기 치환
Ala (A)	val; leu; ile	Val
Arg (R)	lys; gln; asn	Lys
Asn (N)	gln; his; asp, lys; arg	Gln
Asp (D)	glu; asn	Glu
Cys (C)	ser; ala	Ser
Gln (Q)	asn; glu	Asn
Glu (E)	asp; gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	asn; gln; lys; arg	Arg
Ile (I)	leu; val; met; ala; phe; norleucine	Leu
Leu (L)	norleucine; ile ; val; met; ala; phe	Ile
Lys (K)	arg; gln; asn	Arg
Met (M)	leu; phe; ile	Leu
Phe (F)	leu; val; ile; ala; tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	thr	Thr
Thr (T)	Ser	Ser
Trp (W)	tyr; phe	Tyr
Tyr (Y)	trp; phe ; thr; ser	Phe
Val (V)	ile; leu; met; phe; ala; norleucine	Leu

단백질 또는 펩티드의 생물학적 특성에 있어서의 실재적인 변형은 (a) 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면 시트 또는 나선 입체 구조를 유지하는데 있어서의 이들의 효과, (b) 표적 부위에서의 상기 분자의 전하 또는 소수성을 유지하는데 있어서의 이들의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데 있어서의 이들의 효과가 상당히 상이한 치환부를 선택함으로써 수행된다. 천연 잔기는 통상의 측쇄 특성에 기준하여 다음 그룹으로 구분된다:

(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및

(6) 방향족: trp, tyr, phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류로 교환함으로써 이루어질 것이다. 단백질 또는 펩티드의 적당한 입체 구조를 유지하는 것과 관련이 없는 어떠한 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환되어 상기 분자의 산화적 안정성을 향상시키고 이상한 가교결합을 방지할 수 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 상기 단백질 또는 펩티드에 가하여 그의 안정성을 향상시킬 수 있다

단백질 또는 펩티드의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변화된 것이다. 변화란 의미는 펩티드에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및(또는) 단백질 또는 펩티드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 나타낸다.

단백질 또는 펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된 것이다. N-연결된이란 탄수화물 잔기가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 잔기를 아스파라긴 측쇄에 효소적으로 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써, 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.

단백질 또는 펩티드로의 글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 언급된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변화시킴으로써 편리하게 수행된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 이러한 변화는 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 최초 항체의 서열에 부가하거나 이들 잔기로 치환함으로써 이루어질 수도 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).

일 구현 예로서, 상기 TNFSF14 단백질은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 서열 번호 1의 서열을 갖는 단백질, 서열 번호 1의 서열의 단편인 펩티드, 상기 단백질 또는 펩티드 서열과 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 단백질 또는 펩티드는 합성하거나 재조합하여 만든 것을 포함한다.

다른 구현 예로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열로 이루어진 것일 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 TNFSF14 유전자의 mRNA일 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제하는 것이거나 멜라닌의 발현을 감소시키는 것일 수 있다. 멜라닌(melanin)은 동물의 외피 깃털, 피부, 머리, 눈 등에서 관찰되는데, 멜라닌이 과잉 생산되는 경우 피부에 침착되어 기미, 주근깨 등이 형성되고 피부 노화도 촉진되며, 피부암도 유발될 수 있다. 상기 멜라닌 과다 생성으로 인한 질환 또는 증상은 기미, 주근깨, 검버섯, 잡티, 표피 멜라닌세포성 병변(Epidermal melanocytic lesion), 밀크커피 반점(Cafe's au lait macules), 모반, 베커 모반(Becker's Nevus), 반문상 모반(Nevus Spilus), 흑자(Lentigines), 흑색점, 진피 멜라닌세포성 병변(Dermal melanocytic lesions), 몽고반(Mongolian spot), 오타 모반(Nevus of Ota), 후천성 양측성 오타 모반양 반(Acquired bilateral nevus of Ota-like macules), 이토 모반(Nevus of Ito), 청색 모반(Blue nevus), 멜라닌형성세포성 모반(Melanocytic nevus), 경계 모반(Junctional nevus), 복합 모반(Compound nevus), 진피내 모반(Intradermal nevus), 운륜모반(Halo nevus), 선천성 멜라닌세포성 모반(Congenital nevocytic nevus), 스피츠 모반(Spitz nevus), 이형성 모반(Dysplastic nevus), 흑색종(Melanoma), 악성 흑자 흑색종(Lentigo maligna melanoma), 표재 확장성 흑색종(Superficial spreading melanoma), 선단 흑자성 흑색종(Acral lentiginous melanoma), 결절성 흑생종(Nodular melanoma), 색소성 기저세포암(pigment basal cell carcinoma), 색소성 피부섬유종(dermatofibromas), 색소성 피부낭종(dermoid cyst), 색소성 켈로이드(keloid), 자외선에 의한 색소 침착, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 색소 침착, 및 색소성 각질극세포종(keratoacanthomas)으로 구성된 군에서 선택되는 1 이상인 것으로 알려져 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 TNFSF14 단백질 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 세포에서 멜라닌 형성을 억제시킬 수 있는 바, 멜라닌 생성을 억제시킬 경우 상기 질환 또는 증상을 개선할 수 있으므로, 본 발명은 일 측면에서 상기 질환 또는 증상을 개선할 수 있는 것이다(실험예 1 참조).

또 다른 구현 예로서, 상기 미백은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 흑색종, 자외선에 의한 색소 침착, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 색소 침착으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 개선 또는 완화하는 것일 수 있다.

또 다른 구현 예로서, 상기 단백질의 함량은 상기 조성물 총중량 대비 0.00001 중량% 내지 10 중량%일 수 있다. 일 측면에서, 상기 함량은 0.00001 중량% 이상, 0.00005 중량% 이상, 0.0001 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.005 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.05 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 또는 8 중량% 이상일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 함량은 10 중량% 이하, 8 중량% 이하, 5 중량% 이하, 3 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.5 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.05 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.005 중량% 이하, 0.001 중량% 이하, 0.0005 중량% 이하, 0.0001 중량% 이하, 0.00005 중량% 이하, 또는 0.00003 중량% 이하일 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 단백질의 투여량은 0.00001mg/kg/일 내지 20mg/kg/일일 수 있다. 일 측면에서, 상기 투여량은 0.00001mg/kg/일 이상, 0.00005mg/kg/일 이상, 0.0001mg/kg/일 이상, 0.0005mg/kg/일 이상, 0.001mg/kg/일 이상, 0.005mg/kg/일 이상, 0.01mg/kg/일 이상, 0.05mg/kg/일 이상, 0.1mg/kg/일 이상, 0.5mg/kg/일 이상, 1mg/kg/일 이상, 3mg/kg/일 이상, 5mg/kg/일 이상, 8mg/kg/일 이상, 10mg/kg/일 이상, 14mg/kg/일 이상, 16mg/kg/일 이상, 또는 18mg/kg/일 이상일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 투여량은 20mg/kg/일 이하, 18mg/kg/일 이하, 16mg/kg/일 이하, 14mg/kg/일 이하, 12mg/kg/일 이하, 10mg/kg/일 이하, 8mg/kg/일 이하, 6mg/kg/일 이하, 4mg/kg/일 이하, 2mg/kg/일 이하, 1mg/kg/일 이하, 0.5mg/kg/일 이하, 0.1mg/kg/일 이하, 0.05mg/kg/일 이하, 0.01mg/kg/일 이하, 0.005mg/kg/일 이하, 0.001mg/kg/일 이하, 0.0005mg/kg/일 이하, 0.0001mg/kg/일 이하, 또는 0.00005mg/kg/일 이하일 수 있다. 상기 성분의 투여량 결정은 통상의 기술자의 수준 내에 있으며, 1일 투여량은 투여하고자 하는 대상의 진행 정도, 발병 시기, 연령, 건강상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

일 구현 예로서, 상기 조성물의 투여경로는 경피, 피하, 피내, 근육내, 혈관 내, 또는 경구일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 경피 투여가 바람직하다.

다른 구현 예로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 벡터에 포함되어 투여되는 것일 수 있다. 상기 벡터는 통상의 기술자가 이용할 수 있고, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있는 것이면 어느 것이든 사용할 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 미백용 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명은 다른 측면에서, TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 발현을 증진시키는 물질을 포함하는 피부 미백용 조성물일 수 있다. TNFSF14 단백질 발현을 증진시킬 경우, TNFSF14 단백질의 증가된 양으로 인해 멜라노사이트의 멜라닌 함량을 감소시킬 것이므로, TNFSF14 단백질 발현을 증진시키는 물질은 곧 미백용 조성물로 사용될 수 있을 것이기 때문이다.

본 발명은 다른 측면에서, TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질, 이와 90% 이상의 아미노산 서열 상동성을 가지는 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 체모 색상 조절용 조성물일 수 있다.

일 구현 예로서, 상기 체모는 신체의 모(毛)는 모두 포함하나 바람직하게는 모발일 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 색상 조절은 백화(白化), 회색화(灰色化), 갈화(褐化), 황화(黃化), 및 적화(赤化)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 상기 조성물 및 설명서를 포함하는 미백용 키트일 수 있다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 상기 조성물 및 설명서를 포함하는 체모 색상 조절용 키트일 수 있다.

일 측면상, 본 발명은 본 발명의 일 측면에 따른 조성물을 체모에 처리하는 단계를 포함하는 미용 목적의 체모 색상 조절 방법일 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 세포에 시험물질을 처리하는 단계; 및

상기 단계 이후 세포 내의 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 변동 여부를 확인하는 단계를 포함하는, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법일 수 있다.

일 구현 예로서, 본 발명은 상기 시험 물질 처리 후에 발현된 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 처리 전의 발현양에 비해 많을 경우 상기 시험 물질을 피부 미백 효능 물질로 판단하는 단계를 더 포함하는, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법일 수 있다.

본 발명은 다른 측면에서, 시험 물질 처리 전과 후의 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상대적 발현 정도를 나타내는 측정부를 포함하는, 피부 미백 효능 물질 스크리닝을 위한 키트일 수 있다.

일 구현 예로서, 상기 키트는 멜라노사이트 및 지시서를 더 포함하고, 상기 지시서에는 상기 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법이 기재되어 있는 것일 수 있다.

본 발명은 또 다른 측면에서, 개체에서 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양을 확인하는 단계를 포함하는, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법일 수 있다.

일 구현 예로서, 상기 피부 상태는 멜라닌과 관련된 피부 상태일 수 있다.

본 명세서에서 '멜라닌과 관련된 피부 상태'는 멜라닌 색소 또는 멜라닌 형성 세포와 직접적 또는 간접적으로 관계가 있는 피부 상태를 뜻하는 것이며, 예를 들어 상기 피부 상태는 멜라닌을 형성시키는 자극에 대하여 민감도가 높거나 낮은 피부, 향후 멜라닌이 더 침착될 가능성이 있거나 억제될 가능성이 있는 피부, 멜라닌과 관련된 피부질환에 걸릴 위험이 높거나 낮은 피부, 색이 어둡거나 밝은 피부를 포함한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 상기 자극은 외인성 자극 및 내인성 자극 중 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 의하면, 상기 외인성 자극은 자외선, 물리적 압력, 상처, 중금속에 의한 자극, 화학 물질에 의한 자극, 미생물에 의한 감염, 및 스트레스를 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 다른 구현예에 의하면, 상기 내인성 자극은 체내 산화적 스트레스 변화, 노화, 염증, 호르몬 변화, 간을 포함한 소화기관 기능 이상, 유전자 이상, 대사기능 이상, 영양상태 이상, 비타민 및 무기질의 과부족을 포함하는 것일 수 있다.

다른 구현 예로서, 상기 발현양의 확인은, 멜라닌을 형성시키는 특정 자극이 가해지기 전과 후의 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현 정도를 비교하는 것일 수 있다.

일 구체예에서, 상기 발현양의 확인 또는 발현 정도의 비교는, 공지의 기술, 예컨대, 면역형광 분석, 웨스턴 블롯(western blot), 닷 블롯(dot blot), ELISA, 노던 블롯(northern blot), PCR, RT-qPCR, GC-MS, LC-MS, NMR 등 당업자가 적절히 선택할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

예를 들어, 상기 발현양의 확인 또는 발현 정도의 비교는 멜라닌 형성 세포를 채취하거나, 세포를 분리하지 않고 개체로부터 직접 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현 정도를 측정하여 비교하는 것일 수 있다. 상기 채취 또는 측정은 당업자에게 알려진 어떠한 방법으로도 가능하다.

본 발명의 또 다른 구현예에 의하면, 상기 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 확인 또는 발현 정도 비교는, 특정한 두 시점에, 한 개체의 피부 전체 또는 특정 피부 부위에서 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 또는 발현 정도를 비교하는 것일 수 있다. 예를 들어, 피부 전체 또는 특정 피부 부위에서 멜라닌 형성 세포를 채취하거나, 세포를 분리하지 않고 개체로부터 직접 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 또는 발현 정도를 측정하여 비교하는 것일 수 있다. 상기 채취 또는 측정은 당업계에 알려진 어떠한 방법으로도 가능하다.

또 다른 구현 예로서, 상기 피부 상태 진단은 피부 전체 또는 특정 피부 부위에서 멜라닌 침착이 증가 또는 감소하여 피부 흑화 또는 백화가 진행될 가능성이 있는 피부로 판정하는 것일 수 있다. 본 명세서에서 '피부 흑화'는 다양한 원인 또는 자극이 발생하거나 없어져서 전체 피부 또는 특정 부위의 피부가 어둡거나 검게 변하는 현상을 포함한다. 또한 본 명세서에서 '피부 백화'는 다양한 원인 또는 자극이 발생하거나 없어져서 전체 피부 또는 특정 부위의 피부가 밝거나 희게 변하는 현상을 포함한다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 피부 상태 진단은 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 발현된 정도에 따라 피부의 흑화 또는 백화 가능성에 관한 등급을 판정하는 것일 수 있다.

일 구현예에 따르면, 상기 등급은 일정한 수의 개체에게서 구한 피부 시료로부터 얻은 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 발현 정도에 관한 자료를 기초로 정한 기준값, 및 이를 근거로 구간을 나누어 정한 등급일 수 있다.

상기 조성물이 약학 조성물일 경우, 약학 조성물은 보존제, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.

상기 조성물의 투여경로가 경구투여일 경우, 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 분제, 산제, 세립제, 과립제, 펠렛제 등의 제형을 취할 수 있으며, 이러한 제형은 유효성분 이외에 계면 활성제, 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 조성물의 투여경로가 비경구일 경우, 비경구 투여 형태로는 경피 투여형 제형일 수 있으며, 예를 들어 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 약학 조성물은 비경구, 직장, 국소, 경피, 피하 등으로 투여될 수 있다.

상기 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있으며, 상기 피부 외용제는 피부 외부에서 도포되는 어떠한 것이라도 포함될 수 있는 총칭으로서 다양한 제형의 의약품 또는 의약외품이 여기에 포함될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 상기 조성물은 화장료 조성물인 피부 미백용 조성물일 수 있다.

상기 화장료 조성물에는 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 조성물은 식품 또는 건강식품 조성물인 피부 미백용 조성물일 수 있다.

상기 식품 또는 건강식품 조성물은 액상 또는 고체 상태의 제형일 수 있고, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품류, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

본 명세서에 개시된 유효성분 외에 함유할 수 있는 액체 성분에는 특별한 제한점이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올 등이 있다. 상기의 향미제로는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(예를 들어 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 명세서에 개시된 조성물 100ml 또는 100g 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 일측면에서 약 5 내지 12g일 수 있다.

상기 식품 조성물은 일 측면에서 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그 염, 알긴산 및 그 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 다른 측면에서 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 상기 성분들은 독립적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 다양할 수 있으나, 본 명세서에 개시된 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

피부 색소침착과 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 간의 관계에 대해서는 현재까지 알려진 바가 없는데, 본 발명은 일 측면에서 그러한 관계를 규명한 것이다. 본 발명은 이러한 관계를 이용하여 피부 미백 효능을 발휘하는 물질을 스크리닝하는 방법을 찾아냈다. 또한, 이러한 점을 응용하여 TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현 정도를 확인할 수 있거나 나타낼 수 있는 측정부를 포함하는 키트의 제작이 가능하다. 아울러, TNFSF14 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현 정도를 확인하여 멜라닌과 관련된 피부 상태를 평가하거나 진단하는데 필요한 정보를 제공할 수 있는 것이다.

이하, 실시예, 실험예를 통하여, 본 발명 일측면의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1] 실험 재료 준비

TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14)는 라이간드 유전자로서, 상기 유전자가 코딩하는 단백질에 관한 실험은 재조합 단백질(recombinant protein)로 실시하는 경우가 일반적이다. 본 발명의 일 측면에 따른 용도 및 효과를 확인하기 위해 TNFSF14의 재조합 단백질을 입수하였다.

구체적으로 R&D systems사(614 McKinley Place NE, Minneapolis, MN 55413, US)에서 재조합 인간 TNFSF14 단백질(recombinant human LIGHT/TNFSF14 protein)을 구매하였다(카탈로그 번호 664-LI, Genbank accession No. O43557).

재조합 인간 TNFSF14 단백질의 아미노산 서열은 다음과 같다.

서열번호 1 :

MEESVVRPSVFVVDGQTDIPFTRLGRSHRRQSCSVARVGLGLLLLLMGAGLAVQGWFLLQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYIYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV

TNFSF14 유전자의 염기서열(또는 mRNA 염기서열)은 상기 서열번호 1의 아미노산 서열과 대응되는 염기로 이루어지고, 하기 서열번호 2(또는 Genbank accession number NM_003807)의 염기서열과 같다.

서열번호 2 :

실험에 사용할 멜라노사이트는 시중에서 용이하게 입수할 수 있는 세포를 사용하였다. 본 발명의 일 측면에 따른 실험에서는 life technology사에서 구매한 색소 침착이 보통 수준인 멜라노사이트(Human Epidermal Melanocytes, neonatal, moderately pigmented donor, HEMn-MP 또는 MC-MP)와 색소 침착이 미약한 수준인 멜라노사이트(Human Epidermal Melanocytes, neonatal, lightly pigmented donor, HEMn-LP 또는 MC-LP)를 사용하였다.

멜라노사이트를 배양하기 위한 배양 미디엄(culture medium)은 LONZA사(US)의 MGM™-4 BulletKit™ (제품번호 CC-3249)를 구매하여 사용하였다.

[실험예 1] 멜라닌 생성량 측정

MGM™-4 BulletKit™ 를 이용하여 색소침착이 보통인 것과 미약한 것의 두 종류 멜라노사이트를 각각 배양한 후, 재조합 TNFSF14 단백질(recombinant TNFSF14 protein)을 각각 처리하였다.

구체적으로, 배양된 각각의 멜라노사이트의 세포밀도(confluency)가 70%일 때, 재조합 TNFSF14 단백질(recombinant TNFSF14 protein) 25 ng/ml(배지 1 ml 당 25 ng)을 처리한 후 4일 뒤, 상기 각 세포들을 PBS 완충액 5ml을 이용하여 2 회 워싱(washing)하였다. 그 후 PBS 완충액 1ml를 넣어준 뒤 스크리퍼(scripper)를 이용하여 세포를 모두 긁어 모았다. 이후 13000 rpm으로 5분간 원심분리(centrifugation)하여 세포 알갱이(cell pellet)를 만들었다. 그 후 그 세포 알갱이의 색깔을 관찰하여 색소 형성 정도를 비교하였다.

또한, 상기 세포 알갱이를 200μl 부피의 1N NaOH에 녹인 뒤, 450nm 흡광도로 측정하여 멜라닌의 양을 측정하였다.

그 결과, 도 1 내지 도 3과 같은 결과가 나타났다. 도 1에서 좌측 상단의 ‘con’은 색소침착이 보통인 멜라노사이트(MC-MP)에 아무 것도 처리하지 않은 대조군을 의미하고, 우측 상단의 ‘con’은 색소침착이 미약한 멜라노사이트(MC-LP)에 아무 것도 처리하지 않은 대조군을 의미한다. 좌측 상단의 ‘LIGHT’는 색소침착이 보통인 멜라노사이트(MC-MP)에 TNFSF14 단백질을 처리한 군을 의미하고, 우측 상단의 ‘LIGHT’는 색소침착이 미약한 멜라노사이트(MC-LP)에 TNFSF14 단백질을 처리한 군을 의미한다. 도 2는 색소침착이 보통인 멜라노사이트(MC-MP)의 멜라닌 함량을 1로 했을 때 다른 실험군의 멜라닌 함량을 상대적으로 평가한 도표이다.

즉, 두 종류의 멜라노사이트 모두 TNFSF14 단백질(즉, LIGHT)을 처리한 후 멜라닌의 생성량이 약 50%가량 감소하여, 적은 양으로도 매우 효과적으로 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 확인하였다. 또한, 이러한 결과는 TNFSF14 단백질의 함량이 25 ng/ml일 경우에도 유사함을 확인하였다(도 3. TNFSF14 단백질의 함량이 10 내지 50 ng/ml인 경우 유사한 결과가 나올 것임을 알 수 있다). TNFSF14 단백질은 TNFSF14 유전자에 의해 코딩되는 것이므로, TNFSF14 유전자의 양을 늘리거나 발현을 증진시킬 경우 마찬가지로 멜라닌 생성을 효과적으로 억제시킬 수 있음을 확인한 것이기도 하다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

TNFSF14 단백질 3.0 중량%, L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00 중량%, 수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00 중량%, 시트르산나트륨 0.10 중량%, 시트르산 0.05중량%, 감초 엑기스 0.20 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 3.00 중량%, 정제수 잔량을 이용하여 유연화장수(스킨로션)을 제조하였다.

[제형예 2] 크림

TNFSF14 단백질 3.00중량%, 폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00 중량%, 자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00 중량%, 프로필렌글리콜 4.00 중량%, 스쿠알렌 6.00 중량%, 트리2-에틸헥산글리세릴 6.00 중량%, 스핑고당지질 1.00 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 7.00 중량%, 밀랍 5.00 중량%, 정제수 잔량을 사용하여 크림형 제제를 제조하였다.

[제형예 3] 팩

TNFSF14 단백질 3.00 중량%, 폴리비닐알코올 13.00 중량%, L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00 중량%, 라우로일히드록시프롤린 1.00 중량%, 수용성 콜라겐 (1% 수용액) 2.00 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 3.00 중량%, 에탄올 5.00 중량%, 정제수 잔량을 사용하여 팩을 제조하였다.

[제형예 4] 건강식품

하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강 식품을 제조하였다.

성분	함량
TNFSF14 단백질	5㎎
비타민 혼합물
비타민 A 아세테이트	70 ㎍
비타민 E	1.0 ㎎
비타민 B1	0.13 ㎎
비타민 B2	0.15 ㎎
비타민 B6	0.5 ㎎
비타민 B12	0.2 ㎍
비타민 C	10 ㎎
비오틴	10 ㎍
니코틴산아미드	1.7 ㎎
엽산	50 ㎍
판토텐산 칼슘	0.5 ㎎
무기질 혼합물
황산제1철	1.75 ㎎
산화아연	0.82 ㎎
탄산마그네슘	25.3 ㎎
제1인산칼륨	15 ㎎
제2인산칼슘	55 ㎎
구연산칼륨	90 ㎎
탄산칼슘	100 ㎎
염화마그네슘	24.8 ㎎

상기 비타민 및 무기질 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

[제형예 5] 건강음료

성분	함량
TNFSF14 단백질	5㎎
구연산	1000 ㎎
올리고당	100 g
매실농축액	2 g
타우린	1 g
정제수	잔량
총 부피	900 ㎖

상기 표 3과 같이 총 부피 900㎖가 되도록 잔량의 정제수를 첨가하여 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2리터 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> COMPOSITION FOR SKIN WHITENING COMRPISING TNFSF14 PROTEIN <130> 17p218/ind <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 240 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln 1 5 10 15 Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser 20 25 30 Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly 35 40 45 Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg 50 55 60 Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala 85 90 95 His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu 100 105 110 Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr 115 120 125 His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr 130 135 140 Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser 145 150 155 160 Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu 165 170 175 Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser 180 185 190 Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His 195 200 205 Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu 210 215 220 Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val 225 230 235 240 <210> 2 <211> 2894 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 cgagactcca tctcaaaaac aaaacaaata aacgaacaaa aaaacccaca acgtattatt 60 ttcttgttta cgaggtttct tgtctctctg gctccaccag aagaggagca gggacccttc 120 ttgctgttgt tcattgctgc atcccccaca ccgagagcag agcctggcat gggcagaaag 180 tcctcagtcg atatttggtg gccccaagcg aatgaagcat ccaagaaggg aaagctgggg 240 gctccccact gcacttgcca cctgagtcac attttcagaa gcctctggaa agtcgtgcac 300 agcccaggag tgttgagcaa tttcggtttc ctctgaggtt gaaggaccca ggcgtgtcag 360 ccctgctcca gacaccttgg gcatggagga gagtgtcgta cggccctcag tgtttgtggt 420 ggatggacag accgacatcc cattcacgag gctgggacga agccaccgga gacagtcgtg 480 cagtgtggcc cgggtgggtc tgggtctctt gctgttgctg atgggggccg ggctggccgt 540 ccaaggctgg ttcctcctgc agctgcactg gcgtctagga gagatggtca cccgcctgcc 600 tgacggacct gcaggctcct gggagcagct gatacaagag cgaaggtctc acgaggtcaa 660 cccagcagcg catctcacag gggccaactc cagcttgacc ggcagcgggg ggccgctgtt 720 atgggagact cagctgggcc tggccttcct gaggggcctc agctaccacg atggggccct 780 tgtggtcacc aaagctggct actactacat ctactccaag gtgcagctgg gcggtgtggg 840 ctgcccgctg ggcctggcca gcaccatcac ccacggcctc tacaagcgca caccccgcta 900 ccccgaggag ctggagctgt tggtcagcca gcagtcaccc tgcggacggg ccaccagcag 960 ctcccgggtc tggtgggaca gcagcttcct gggtggtgtg gtacacctgg aggctgggga 1020 gaaggtggtc gtccgtgtgc tggatgaacg cctggttcga ctgcgtgatg gtacccggtc 1080 ttacttcggg gctttcatgg tgtgaaggaa ggagcgtggt gcattggaca tgggtctgac 1140 acgtggagaa ctcagagggt gcctcagggg aaagaaaact cacgaagcag aggctgggcg 1200 tggtggctct cgcctgtaat cccagcactt tgggaggcca aggcaggcgg atcacctgag 1260 gtcaggagtt cgagaccagc ctggctaaca tggcaaaacc ccatctctac taaaaataca 1320 aaaattagcc ggacgtggtg gtgcctgcct gtaatccagc tactcaggag gctgaggcag 1380 gataattttg cttaaacccg ggaggcggag gttgcagtga gccgagatca caccactgca 1440 ctccaacctg ggaaacgcag tgagactgtg cctcaaaaaa aagaaaggaa gaaaaaagaa 1500 aactcaggaa acagatcttg ggggacactc cagggaaccc aaaactcaaa ggcggagagc 1560 tcagtgggca ccaccaaggc gagatgaagc cccagcaggc accttcagaa gacccacgta 1620 gactgcagac cctgccacgg acaatactaa ggacaaaaac ccagagactt ggggtctgtg 1680 ggcccccaaa catggggtaa agttgatttg cctgatattc aggaagaagg ggtgaggggt 1740 gggtatttat gcttttgatt cagaagaaag tggggcttgg gattccaggg acttggctgg 1800 gggtgggaaa cttcatccac ttccctactc tcatcatgag tacggacagg gtgggcggga 1860 gactgatcat cgggactcat catgaagagc ccagccccac cccacatact cagatcccac 1920 ccacagactg gtggccacac ctcagcctgg tcacaaagag ttacactcag atacatgagc 1980 acggcagcgt gctcataact gtttaacaac cagctgtcct gggaggggga cagctttgta 2040 atgtttgcca atttccatgg tgtaaatgct accaccatgg ctgatttcat cactgccaag 2100 catagacatc cctaatagga caccacggat ctgtccccgg catccggccc agggcctggc 2160 acaaagcatg ctctagggaa atgcttgctg attgaaagga aggaagaatg actctacagt 2220 cacacctatg gcatcccaca aaatctgtca catggctgca taatctcagc cactctttca 2280 caactataga ctcatacacg cgaagtgcca gattcatgca caaccacaca atcacatgga 2340 agtcacagac ggcatcacag acagtcacag cactgtgtgt atgttataac acaagcacac 2400 aaaactcaga cagcatccca gctacacagc cactcccaga ggtgtcaccg tcacacttgg 2460 taattaatac tcattacatt agacacagac agaccaagtt atagtcagac ctggttacac 2520 acatacacac acacaatatc accatgacaa atacacatta cacacacaca acatcacaat 2580 gacaaacaca cattacacac acaacatcac gatgacaaac acacattaca cacacaacat 2640 cacgatgaca aacacacatt acacacacat cacaatgaca aacacaacat tacacacaca 2700 caacatcaca atgacacaca catcacacac acatcacaat gacaaacaca caacattaca 2760 cacatataca cacagcctga gggccctccc cagcccagac taacacatct cggggtgagg 2820 accagacctt gttcataacc ctgggcctct taaccactga tctttgaaat aaatggcaaa 2880 tagttgtacc tgga 2894

Claims

TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 피부 미백용 식품 조성물.
TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는,
기미, 주근깨, 검버섯, 잡티, 표피 멜라닌세포성 병변(Epidermal melanocytic lesion), 밀크커피 반점(Cafe’s au lait macules), 모반, 베커 모반(Becker’s Nevus), 반문상 모반(Nevus Spilus), 흑자(Lentigines), 흑색점, 진피 멜라닌세포성 병변(Dermal melanocytic lesions), 몽고반(Mongolian spot), 오타 모반(Nevus of Ota), 후천성 양측성 오타 모반양 반(Acquired bilateral nevus of Ota-like macules), 이토 모반(Nevus of Ito), 청색 모반(Blue nevus), 멜라닌형성세포성 모반(Melanocytic nevus), 경계 모반(Junctional nevus), 복합 모반(Compound nevus), 진피내 모반(Intradermal nevus), 운륜 모반(Halo nevus), 선천성 멜라닌세포성 모반(Congenital nevocytic nevus), 스피츠 모반(Spitz nevus), 이형성 모반(Dysplastic nevus), 흑색종(Melanoma), 악성 흑자 흑색종(Lentigo maligna melanoma), 표재 확장성 흑색종(Superficial spreading melanoma), 선단 흑자성 흑색종(Acral lentiginous melanoma), 결절성 흑생종(Nodular melanoma), 색소성 기저세포암(pigment basal cell carcinoma), 색소성 피부섬유종(dermatofibromas), 색소성 피부낭종(dermoid cyst), 색소성 켈로이드(keloid), 자외선에 의한 색소 침착, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 색소 침착, 및 색소성 각질극세포종(keratoacanthomas)으로 구성된 군에서 선택되는 1 이상의 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 TNFSF14 단백질은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것인, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 TNFSF14 유전자의 mRNA인, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제하는 것인, 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 미백은 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 흑색종, 자외선에 의한 색소 침착, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 색소 침착으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 개선 또는 완화하는 것인, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 TNFSF14 단백질의 함량은 상기 조성물 총중량 대비 0.00001 중량% 내지 10 중량%인, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 TNFSF14 단백질의 투여량은 0.00001mg/kg/일 내지 20mg/kg/일인, 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 조성물의 투여경로는 경피인, 조성물.
제1항 내지 제3항 중 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 벡터에 포함되어 투여되는 것인, 조성물.
TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 및 상기 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상을 포함하는 체모 색상 조절용 조성물.
제12항에 있어서, 상기 색상 조절은 회색화(灰色化), 백화(白化), 갈화(褐化), 적화(赤化) 및 황화(黃化)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 체모 색상 조절용 조성물.
제12항 또는 제13항의 조성물을 체모에 처리하는 단계를 포함하는 미용 목적의 체모 색상 조절 방법.
세포에 시험물질을 처리하는 단계; 및
상기 단계 이후 세포 내의 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양 변동 여부를 확인하는 단계를 포함하는, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법.
제15항에 있어서, 상기 시험 물질 처리 후에 발현된 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 양이 처리 전의 발현양에 비해 많을 경우, 상기 시험 물질을 피부 미백 효능 물질로 판단하는 단계를 더 포함하는, 피부 미백 효능 물질의 스크리닝 방법.
시험 물질 처리 전과 후의 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 상대적 발현 정도를 나타내는 측정부를 포함하는, 피부 미백 효능 물질 스크리닝을 위한 키트.
제17항에 있어서, 멜라노사이트 및 지시서를 더 포함하고, 상기 지시서에는 제15항의 방법이 기재되어 있는, 피부 미백 효능 물질 스크리닝을 위한 키트.
개체에서 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현양을 확인하는 단계를 포함하는, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.
제19항에 있어서, 상기 피부 상태는 멜라닌과 관련된 피부 상태인, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.
제19항에 있어서, 상기 발현양의 확인은, 멜라닌을 형성시키는 특정 자극이 가해지기 전과 후의 TNFSF14(tumor necrosis factor superfamily member 14) 단백질 또는 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현 정도를 비교하는 것인, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.
제19항에 있어서, 상기 피부 상태 진단은 피부 전체 또는 특정 피부 부위에서 멜라닌 침착이 증가 또는 감소하여 피부 흑화 또는 백화가 진행될 가능성이 있는 피부로 판정하는 것인, 피부 상태 진단을 위해 필요한 정보를 제공하는 방법.