KR102352453B1 - 항산화 활성이 우수한 곡물 발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항산화 활성이 우수한 7가지 곡물과 스피룰리나의 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하여 우수한 항산화효과, 피부 보습 효과 및 피부 탄력개선 효과를 나타내는 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.

Description

항산화 활성이 우수한 곡물 발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유하는 조성물{Composition containing fermented grain extract and berry extracts complex having high antioxidative activity}
본 발명은 항산화 활성이 우수한 7가지 곡물과 스피룰리나의 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 유효성분으로 함유하여 우수한 항산화효과, 피부 보습 효과 및 피부 탄력개선 효과를 나타내는 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.
노화란 세월이 지나감에 따라 신체의 구조와 기능이 점진적으로 저하되고 질병과 사망에 대한 감수성이 급격히 증가하면서 쇠약해지는 과정으로 신체에 생리적 변화가 발생하여 신체 전반적으로 현저한 퇴화현상이 나타나게 되는 것을 말한다. 이 중에서 우리가 가장 쉽게 느낄 수 있는 것이 피부 노화로 이는 당뇨병, 심장병, 동맥경화, 치매, 암 등에 못지않게 중요한 것으로 인식이 되고 있으며, 개인차가 있지만 피부노화는 대개 20대 초반을 전후해서 시작되어 나이가 많아지면서 증가하는 것으로 나타난다.
활성산소(Reactive oxygen species, ROS)란 생체 조직을 공격하여 세포를 산화 손상시키는 주된 성분이며 산소의 존재 하에서 세포나 세포소기관에 손상을 초래한다. 활성산소를 항산화 물질이 제거하지 못할 경우 축적되는 활성산소에 의해 여러 가지 질병이나 노화가 초래될 수 있다. 암, 동맥경화, 당뇨병, 뇌졸중, 심근경색, 간염, 신장염, 교원병, 아토피성 피부염, 파킨슨병 등도 활성산소와 관련되어 있다고 알려져 있다.
활성산소로부터 우리 몸을 보호하려면 항산화물질이 많이 함유된 식품을 충분히 섭취하고, 활성산소를 증가시키는 여러 요인을 제거하는 것이 필요하다. 생물학적 반응으로 생성된 유리기(free radical)를 제거시켜 생체를 보호하는 항산화제로서 토코페놀, β-carotene, 비타민 C 등이 알려져 있다.
인간의 주식으로 사용되는 곡물은 영양분을 공급하며 다양한 활성성분을 함유하고 있어 곡물을 이용한 제품이 개발되어 오고 있다. 베리(berry)류는 작은 열매가 모여 하나의 과실 형태를 유지하는 장과류를 총칭하는 것으로 딸기(strawberry), 산딸기(raspberry), 포도(grape), 체리(cherry), 블루베리(blueberry), 크랜베리(cranberry), 아사이베리(acaiberry), 아로니아(black chokeberry), 오디(mulberry) 등이 이에 속한다. 산딸기는 장미과에 속하는 관목의 열매로 높은 항산화능을 가지고 있으며, 블루베리 및 크랜베리 역시 항산화, 항당뇨 및 항암 효과 등 다양한 생리활성을 지니고 있는 것으로 알려져 있다. 포도와 체리는 주로 생과로 소비되고 있으나 풍부하게 함유되어 있는 안토시아닌 색소의 기능성이 알려지면서 가공식품 및 기능성 식품에 널리 이용되고 있으며, 최근 아로니아는 다수의 연구 결과로 높은 항산화, 항노화, 항암 등의 효과가 입증되어 슈퍼푸드라고 불리고 있다. 이러한 베리류의 생리활성은 플라보노이드계 색소인 안토시아닌과 깊은 관련이 있으며, 이에 대한 다양한 연구가 진행 중이다.
본 발명자들은 항산화 활성을 가지는 다양한 천연물들에 대하여 연구하던 중, 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리와 스피룰리나를 고체기질로써 이용하여 발효시켜 제조된 곡물 혼합발효추출물이 우수한 항산화활성을 나타낸다는 것을 확인하였다. 또한 이들 곡물 혼합발효추출물을 특정 베리류 추출복합물과 함께 사용하는 경우 더욱 우수한 항산화효과를 나타내며, 피부 보습 효과 및 피부 탄력개선 효과도 우수하여 화장료나 식품원료로 유용하게 사용될 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
(0001) 대한민국 등록특허 제10-2107582호(2020.04.28) (0002) 대한민국 공개특허 제10-2018-0069198호(2018.06.25) (0003) 대한민국 공개특허 제10-2016-0039972호(2016.04.12.) (0004) 대한민국 공개특허 제10-2010-0021755호(2010.02.26)
본 발명은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하여 우수한 항산화, 피부 보습 및 피부 탄력개선 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하여 우수한 항산화 활성을 나타내는 식품 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물이 제공된다.
상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 고체기질로 하여 효모를 배양하면서 발효시켜 추출한 것임을 특징으로 한다.
상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나가 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로, 더욱 바람직하게는 2~3 : 1~2 : 1~2 : 2~3 : 3~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로, 가장 바람직하게는 2 : 1 : 1 : 2 : 3 : 1 : 1 : 0.5의 중량비로 혼합되어 추출되는 것임을 특징으로 한다.
상기 추출복합물은 비치스트로베리(Fragaria chiloensis) 추출물, 서양산딸기(Rubus fruticosus) 추출물, 라즈베리(Rubus idaeus) 추출물, 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 추출물 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon) 추출물이 각각 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 이루어진다.
상기 유효성분으로서의 상기 혼합발효추출물과 추출복합물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량% 함유된다.
상기 화장료 조성물은 항산화용, 피부 보습용 또는 피부 탄력개선용인 것을 특징으로 한다.
상기 식품 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다.
7가지 곡물과 스피룰리나의 발효추출물인 본 발명의 혼합발효추출물과 5가지 베리류의 추출복합물은 각각 우수한 항산화활성을 가지지만, 함께 사용되는 경우 그 상승효과에 의하여 더욱 우수한 항산화, 피부 보습 및 피부 탄력개선 효과를 나타내므로 피부 개선용 화장료 또는 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 혼합발효추출물의 히알루론산 생성 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 혼합발효추출물의 HAS mRNA 발현 촉진 효과를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 발명은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리와 스피룰리나의 혼합발효추출물과 5가지 베리류 추출복합물을 유효성분으로 함유하는 조성물이 우수한 항산화효과, 피부 보습효과 및 피부 탄력개선 효과를 나타낸다는 것을 기술적 특징으로 한다.
본 발명에 따르면 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 또는 식품 조성물이 제공된다.
메밀은 성질이 차 체내 열을 내려주고 염증을 가라앉히며 몸의 습기와 열기를 내려주는 것으로 알려져 있다. 메밀에는 트레오닌, 리신 등 필수 아미노산 및 비타민이 함유되어 있으며 플라보노이드가 함유되어 있어 피부미용에 효과적이며 피부나 머리에 종기 및 부스럼에 효과가 있다.
수수는 벼목 볏과에 속하는 한해살이풀이며 서아프리카와 인도의 주식으로 이용된다. 수수는 프로안티시아닌을 함유하여 염증제거에 도움을 주며, 폴리페놀, 타닌 등의 항산화 성분이 풍부하여 활성산소 제거 및 세포재생에 도움을 준다.
찹쌀은 찰벼에서 나는 쌀이며 중국과 인도가 원산지이다. 찹쌀은 밥을 짓는 맵쌀에 비해 배젖이 불투명하여 녹말의 대부분이 아밀로펙틴으로 이루어져 찰기가 높다. 찹쌀은 비타민 E와 미네랄을 함유하여 피부보습에 도움을 주며 항산화 작용을 한다.
현미는 수확한 벼를 건조, 탈곡한 후 왕겨를 벗긴 쌀이다. 현미에는 지방, 단백질, 비타민 B1이 많이 함유되어 있어 영양식으로 이용된다. 또한, 철분, 셀레늄, 아연 등의 미네랄 성분을 함유하여 피부에 영양을 공급하고 피부노화예방에 도움을 준다.
흑미는 고대 중국인들에게 인기 있던 특종 쌀이며 단백질과 지방, 비타민 B군과 DㆍE, 칼슘과 인, 철 등이 풍부해 아미노산이 많고 특히 라이신이 백미보다 많이 함유되어 있다. 또한, 강력한 항산화 물질인 오리자놀, 토코트리에놀, 오리자후란 등이 함유되어 있어 활성산소의 산화작용을 방지하고 멜라닌 합성억제를 통해 피부를 밝고 환하게 한다.
율무는 열대, 아열대에서 재배되거나 야생한다. 글리세라이드 성분과 다당을 함유하고 있으며, 트리올레오일글레세롤을 함유하고 있어 면역증강에 도움을 주며 항염작용을 한다.
보리는 화분과에 속하는 1년생 초본식물로 대맥이라고도 한다. 보리는 재배역사가 가장 오랜 작물의 하나로 이집트의 석기시대 유물에서 발견되었기 때문에 약 1만년 전 재배가 시작되었을 것이라고 추정하고 있다. 보리는 베타글루칸, 비타민C, 비타민E를 함유하고 있어 높은 항산화효과를 가지고 있다.
스피룰리나(Spirulina)는 지구에서 가장 오래된 조류로서 식물, 동물, 해조류, 박테리아 등이 가지는 다양한 영양소를 골고루 함유하고 있어서 미래 식량 및 우주 식품으로 여겨진다. 스피룰리나에는 주성분인 단백질, 탄수화물, 식이섬유 뿐 아니라 감마리놀렌산, 카로티노이드, 클로로필, 피코사이아닌 등의 항산화 성분이 함유되어 있다. 또한, 칼슘, 철, 마그네슘과 같은 미네랄도 다량 포함되어 있어 피부에 영양을 공급하고 항노화 기능을 한다.
본 발명 조성물은 유효성분의 하나로서 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리와 스피룰리나의 혼합발효추출물을 함유한다.
본 발명에 있어서, 바람직하게는 상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 고체기질로 하여 효모를 배양하면서 발효시켜 추출한 것이다.
상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나가 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로, 더욱 바람직하게는 2~3 : 1~2 : 1~2 : 2~3 : 3~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로, 가장 바람직하게는 2 : 1 : 1 : 2 : 3 : 1 : 1 : 0.5의 중량비로 혼합되어 추출되는 것이다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 혼합발효추출물은 다음과 같은 방법에 의하여 제조된다.
A)세척 건조된 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비율로 혼합하는 단계; B)수증기를 이용하여 상기 혼합물을 멸균하면서 혼합물에 수분을 공급하는 단계; C)상기 혼합물에 효모를 혼합하여 20~25℃에서 48~72시간 배양하여 발효시키는 단계; 및 D)상기 발효물을 추출하는 단계를 포함하여 제조된다.
먼저, 세척 건조된 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조한다. 상기 천연물들은 분말형태로 사용될 수도 있다.
메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 각각 2~3 : 1~2 : 1~2 : 2~3 : 3~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로 혼합하여 추출하는 경우에 더욱 우수한 항산화, 보습 및 주름개선 효과를 나타내므로 더욱 바람직하며, 가장 바람직하게는 2 : 1 : 1 : 2 : 3 : 1 : 1 : 0.5의 중량비로 혼합되어 추출되는 것이다.
상기 혼합물에 수증기를 가하여(steam heating) 세균을 사멸하면서 수분을 공급한다. 수분을 머금은 혼합물에 효모를 혼합하여 20~25℃에서 48~72시간 배양하여 발효시킨다.
본 발명에서는 이와 같은 효모고체발효 공법을 사용하여 추출물을 제조한다. 이와 같은 고체발효공법은 낮은 수분함량으로 발효공정 중 균의 오염 가능성이 낮아지며, 미생물의 서식 환경과 흡사한 환경을 조성하여 생성물의 활성이 액체배양에 비해 증가하는 장점을 가진다.
이어서 상기 배양물을 회수하여 5~10배 중량의 용매로 추출한다. 이때 용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매를 사용할 수 있다. 본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면 1,3-부틸렌글리콜과 정제수를 3:7(w/w) 비율로 혼합한 혼합 용매를 가하고, 3~5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100~120℃로 3~7시간 끓여서 추출한다.
이어서 상기 추출물을 여과하여 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물을 제조한다.
이와 같이 제조되는 상기 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나의 혼합발효추출물은 그 활성을 평가한 결과, 그 상승작용에 의하여 우수한 항산화 효과, 보습관련인자 발현증가 효과를 나타내었다.
본 발명 조성물은 또 다른 유효성분으로서 5가지 베리류의 추출복합물을 함유한다. 구체적으로는 비치스트로베리(Fragaria chiloensis), 서양산딸기(Rubus fruticosus), 라즈베리(Rubus idaeus), 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon)의 추출복합물을 유효성분으로 함유한다.
상기 추출복합물은 비치스트로베리(Fragaria chiloensis) 추출물, 서양산딸기(Rubus fruticosus) 추출물, 라즈베리(Rubus idaeus) 추출물, 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 추출물 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon) 추출물이 각각 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 이루어지며, 더욱 바람직하게는 동일 중량비율로 이루어진다. 상기 추출복합물은 상기 5가지 베리류를 혼합한 후 추출하여 제조될 수도 있다.
유효성분으로서의 상기 혼합발효추출물과 추출복합물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량% 함유된다. 본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 혼합발효추출물과 추출복합물은 동일 중량비율로 함유된다.
상기 혼합발효추출물과 추출복합물이 함께 사용되는 경우에 보다 우수한 항산화 효과, 피부 보습효과 및 피부 탄력개선 효과를 나타내었다(시험예 4 ~ 7).
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 상기 식품 조성물은 제제(製劑)화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 제제 형태로는 과립제, 산제, 정제, 피복제, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙 등을 들 수 있다. 본 발명의 식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서의 상기 곡물 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물 뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 더욱 포함할 수 있다.
[실시예]
이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 ~ 6: 혼합발효추출물의 제조
메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 하기 표 1의 조성에 따라 혼합하여 혼합물 500g을 제조하였다. 수증기를 이용하여 상기 혼합물을 멸균하면서 혼합물에 수분을 공급하고 고체기질로 하여 효모를 접종 후 25℃에서 72시간 배양하여 발효시켰다. 이어서 상기 배양물을 회수하여 8배 중량의 용매(1,3-부틸렌글리콜:정제수=3:7)로 5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 5시간 끓여서 추출하였다.
중량비 메밀 수수 찹쌀 현미 흑미 율무 보리 스피룰리나
실시예 1 1 1 1 1 2 1 1 0.5
실시예 2 2 2 1 2 2 1 2 0.5
실시예 3 3 1 1 3 3 2 1 1
실시예 4 1 2 2 2 2 2 2 1
실시예 5 2 1 1 2 3 1 1 0.5
실시예 6 2 2 2 3 4 2 2 1
비교예 1~6: 혼합추출물의 제조
상기 실시예 1~6과 동일한 조성으로 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 혼합하여 혼합물 500g을 제조하였다. 수증기를 이용하여 상기 혼합물을 멸균하면서 혼합물에 수분을 공급하고 8배 중량의 용매(1,3-부틸렌글리콜:정제수=3:7)로 5일간 침적하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 5시간 끓여서 추출하였다.
시험예 1: DPPH 라디칼 소거능 측정
상기 실시예 및 비교예에서 얻어진 시료에 대해 DPPH free radical 소거 실험을 하였다.
상기 시험 방법은 에탄올상에서 1,1-Diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH, Sigma D9132-1G)가 발생시키는 자유 라디칼에 대한 소거능을 시험함으로써 항산화 효과의 직접적인 작용 정도를 파악할 수 있는 시험법이다. 화합물 1,1-Diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH, Sigma D9132-1G)은 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데, 이에 일정 농도의 추출물과 혼합하여 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지 확인하였다. 구체적으로는 에탄올 0.4ml에 0.1mM의 DPPH용액 0.5ml, 그리고 일정농도로 희석된 각 시료를 0.1ml 첨가하였다. 10초간 강하게 vortexing 후 냉암소에서 30분간 반응시킨 후, ELISA를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하며, 항산화능의 정도는 에탄올을 사용한 대조군의 흡광강도를 기준으로 백분율로 표시하였다. 결과적인 자유 라디칼 소거능을 하기의 식에 의하여 계산하였다.
자유 라디칼 소거능(%)= {1-(B/A) }×100
A: 시료를 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도
B: 시료를 처리한 실험군 웰의 흡광도
시료 농도(%) 자유라디칼 소거능(%)
실시예 1 0.5 26.5
실시예 2 0.5 30.9
실시예 3 0.5 37.8
실시예 4 0.5 35.7
실시예 5 0.5 43.4
실시예 6 0.5 41.7
비교예 1 0.5 13.8
비교예 2 0.5 17.3
비교예 3 0.5 24.1
비교예 4 0.5 20.0
비교예 5 0.5 29.9
비교예 6 0.5 27.8
상기 표 2에서 확인되는 바와 같이, 7가지 곡물과 스피룰리나를 고체기질로하여 발효한 실시예의 혼합발효추출물에서 일반 혼합추출물에 비하여 자유라디칼 소거능이 우수함을 확인하였다. 실시예 3, 5, 6에서 더욱 우수한 항산화활성을 나타내었으며, 실시예 5에서 가장 우수한 활성을 나타내었다.
시험예 2: Hyaluronic acid 생성량 측정
상기 실시예 및 비교예에서 제조된 추출물 시료 처리에 의한 Hyaluronic acid 생성량을 측정하였다. HaCaT 세포를 96 well plate에 1×106cells/well의 농도로 분주하여 배양한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. HaCaT 세포에 각 시료 0.5%씩 처리하고, 24시간 배양한 후 회수한 배양액은 ELISA kit를 이용하여 hyaluronic acid(HA)의 생성량을 측정하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에서 확인되는 바와 같이, 7가지 곡물과 스피룰리나를 고체기질로하여 발효한 실시예의 혼합발효추출물에서 일반 혼합추출물에 비하여 훨씬 높은 히알루론산 생성 효과를 나타냈다. 실시예 3, 5 및 6에서 더욱 높은 히알루론산 생성 효과를 나타내었다.
시험예 3: HAS-3 발현 증가 시험
상기 실시예 및 비교예에서 제조된 혼합발효추출물 시료 처리에 의한 HAS mRNA 발현량을 측정하였다. HaCaT 세포를 96 well plate에 1×106cells/well의 농도로 분주하여 배양한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 18시간 starvation 시키고, 24시간 동안 배양하였다. HaCaT 세포에 각 시료 0.5%씩 처리하고, 24시간 배양 한 후 세포는 RT-PCR을 이용하여 hyaluronic acid synthase(HAS) mRNA 발현량을 조사하였다. HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 도 2에 나타내었다.
HAS-3 발현증가율(%)=(시료 HAS-3 발현양/대조군 HAS-3 발현양)×100
도 2에서 확인되는 바와 같이, 7가지 곡물과 스피룰리나를 고체기질로하여 발효한 실시예의 혼합발효추출물에서 일반 혼합추출물에 비하여 훨씬 높은 HAS-3 발현증가율을 나타내었다.
실시예 7: 베리류 추출복합물의 제조
비치스트로베리(Fragaria chiloensis), 서양산딸기(Rubus fruticosus), 라즈베리(Rubus idaeus), 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon) 각각의 열매를 추출하여 각각의 추출물을 제조하였다.
건조된 각 베리 50g을 세절한 후 8배 중량의 정제수에 4시간 동안 60℃에서 열수 추출한 후 여과하여, 고형분 함량이 10% 이상이 되도록 감압 농축하여 각 추출물을 제조하였다. 각각의 추출물을 동일 중량비율로 혼합하여 베리류 추출복합물을 제조하였다.
시험예 4: 항산화 효과 시험
실시예 5의 혼합발효추출물, 실시예 7의 베리류 추출복합물 및 이들의 동일 중량비 혼합물을 시료로 하여 DPPH free radical 소거 실험을 하였다.
시험관에 농도별로 준비된 시료 용액 50μL를 넣고, 100μL의 0.1mM 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)/ethanol 용액을 첨가하여 25℃의 실온에서 30분 동안 방치한 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 라디칼 소거율은 다음의 식에 따라 DPPH 탈색의 %로 계산하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
소거율(%)=(대조군의 흡광도-시료첨가군의 흡광도)/대조군의 흡광도 × 100
시료명 처리농도(ug/ml) DPPH 소거율(%)
혼합발효추출물(실시예 5) 5,000 44.3
베리류 추출복합물(실시예 7) 5,000 53.6
혼합발효추출물 + 베리류 추출복합물 5,000 74.2
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이, 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물 자체로도 우수한 DPPH 소거율을 나타내었으며, 이들을 함께 적용하는 경우 동일농도에서 더욱 우수한 DPPH 소거율을 나타내었다. 이를 통해 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물은 항산화용 화장료나 식품의 원료로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
시험예 5: HAS-3 발현 증가 시험
실시예 5의 혼합발효추출물, 실시예 7의 베리류 추출복합물 및 이들의 동일 중량비 혼합물에 대하여 보습활성을 평가하였다.
HaCaT cell을 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 1×106 cell/well로 조절한 후 96 well plate 에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 시료를 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)을 통해 Hyaluronan Synthase-3(HAS-3)의 발현 증가율을 확인하였다.
HAS-3 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 양성 대조군으로는 히알루론산(Hyaluronic Acid)을 사용하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
HAS-3 발현율(%)=(시료 HAS-3 발현 양/대조군 HAS-3 발현 양)×100
시료명 처리농도(ug/ml) HAS-3발현율(%)
혼합발효추출물(실시예 5) 5,000 162.1
베리류 추출복합물(실시예 7) 5,000 143.8
혼합발효추출물 + 베리류 추출복합물 5,000 192.6
히알루론산 500 189.5
상기 표 4에서 확인되는 바와 같이, 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물 자체로도 우수한 보습활성을 나타내었으며, 이들을 함께 적용하는 경우 더욱 우수한 보습 활성을 나타내었다.
시험예 6: 엘라스틴 발현 증가 시험
실시예 5의 혼합발효추출물, 실시예 7의 베리류 추출복합물 및 이들의 동일 중량비 혼합물에 대하여 피부탄력 개선활성을 평가하였다.
섬유아세포(CCD-986Sk)를 10% FBS가 첨가된 IMDM 배지를 이용하여 1×106 cell/well로 조절한 후 96 well plate 에 접종하고 18시간 동안 배양하였다. 배양한 뒤 상기 실시예의 시료를 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 배양된 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 elastin의 발현 증가율을 확인하였다.
elastin 발현 증가율은 하기 식에 의해 산출되었고, 양성 대조군으로는 아데노신(Adenosine)을 사용하였다. 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.
Elastin 발현율(%)=(시료 elastin 발현양/대조군 elastin 발현양) × 100
시료명 처리농도(ug/ml) Elastin 발현율(%)
혼합발효추출물(실시예 5) 5,000 153.6
베리류 추출복합물(실시예 7) 5,000 149.2
혼합발효추출물 + 베리류 추출복합물 5,000 182.8
Adenosine 500 175.1
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이, 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 함께 적용하는 경우 더욱 우수한 Elastin 발현율을 나타내었다.
실시예 8 : 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물 함유 시트 마스크 제조
상기 실시예 5의 혼합발효추출물과 실시예 7의 베리류 추출복합물을 포함하는 크림을 하기 표 6의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다. 이를 부직포에 함침시켜 시트마스크를 제조하였다. 대조예로서 실시예 5의 혼합발효추출물 만을 포함하는 시트 마스크를 제조하였다.
성 분 함량(중량%)
대조예 1 실시예 8
혼합발효추출물 + 베리류 추출복합물 - 10.0
혼합발효추출물(실시예 5) 10.0 -
친유형 모노스테아린산글리세린 2.0 2.0
프로판다이올 1.1 1.1
카보머 0.3 0.3
부틸렌글라이콜 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5
알지닌 0.3 0.3
소듐히아루로네이트 4.0 4.0
방부제, 향 미량 미량
정제수 잔량 잔량
시험예 7: 피부 보습 개선 효과 확인
피부 수분함유량 측정
피부 보습에 대한 임상시험으로 피부 수분 측정기(Corneometer, Courage+Khazaka, GmbH, Germany)를 이용하여 피부전도도를 측정함으로써 피부 보습력을 평가하였다.
피부 수분 측정은 실내온도 20 내지 25℃, 상대습도 40 내지 55%로 유지시킨 항온항습 조건 하에서 실시예 8과 대조예 1의 크림을 도포한 시트를 6명의 피검자의 양측 전박부에 각각 첩부한 후, 사용 후 30분, 1시간의 수분 함유량을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
구분 초기 평균 30분후 평균 1시간후 평균
대조예 1 32 72 76
실시예 8 26 78 77
임상평가
상기 피검자들의 설문평가를 통하여 피부 촉촉함, 쿨링감, 흡수력을 평가하였다. 5점 척도법에 따라 평가하였으며, 그 평균을 하기 표 8에 나타내었다.
대조예 1 실시예 8
항목 피부 촉촉함 쿨링감 흡수력 피부 촉촉함 쿨링감 흡수력
평균 3.50 3.33 3.67 4.33 4.67 4.50
상기 표 7과 표 8에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유한 실시예 8에서 높은 보습효과를 나타내었다.
실시예 9 : 혼합발효추출물과 베리류 추출복합물을 함유하는 음료 제조
상기 실시예 5의 혼합발효추출물과 실시예 7의 베리류 추출복합물을 포함하는 음료를 하기 표 9의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
성 분 함량
혼합발효추출물 + 베리류 추출복합물 300mg
구연산 100mg
올리고당 100mg
매실 농축액 5mg
타우린 50mg
정제수 350㎖

Claims (10)

  1. 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로서 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량% 함유하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 고체기질로 하여 효모를 배양하면서 발효시켜 추출한 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나가 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로 혼합되어 추출되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출복합물은 비치스트로베리(Fragaria chiloensis) 추출물, 서양산딸기(Rubus fruticosus) 추출물, 라즈베리(Rubus idaeus) 추출물, 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 추출물 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon) 추출물이 각각 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 이루어지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화용, 피부 보습용 또는 피부 탄력개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나 혼합발효추출물과 비치스트로베리, 서양산딸기, 라즈베리, 로우스위트블루베리 및 크랜베리 추출복합물을 유효성분으로서 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~20 중량% 함유하는 식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나를 고체기질로 하여 효모를 배양하면서 발효시켜 추출한 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
  8. 제6항에 있어서, 상기 혼합발효추출물은 메밀, 수수, 찹쌀, 현미, 흑미, 율무, 보리 및 스피룰리나가 각각 1~3 : 1~2 : 1~2 : 1~3 : 2~4 : 1~2 : 1~2 : 0.5~1의 중량비로 혼합되어 추출되는 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
  9. 제6항에 있어서, 상기 추출복합물은 비치스트로베리(Fragaria chiloensis) 추출물, 서양산딸기(Rubus fruticosus) 추출물, 라즈베리(Rubus idaeus) 추출물, 로우스위트블루베리(Vaccinium angustifolium) 추출물 및 크랜베리(Vaccinium macrocarpon) 추출물이 각각 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 이루어지는 것임을 특징으로 하는 식품 조성물.
  10. 제6항에 있어서, 상기 식품 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.














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