KR102344995B1

KR102344995B1 - 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR102344995B1
Application number: KR1020190171987A
Authority: KR
Inventors: 노향선; 김규래; 장현준
Original assignee: (주)뷰티언스
Priority date: 2019-12-20
Filing date: 2019-12-20
Publication date: 2021-12-29
Also published as: KR20210079820A

Abstract

본 발명은 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은, 용매 추출물로 알로에 아보레센스 추출물을 포함함으로써, 기존의 알로에를 활용하는 화장품 조성물들은 주로 알로에 껍질을 제거하고 내피에 존재하는 겔 형태로 추출해 사용해왔지만 겔 형태는 95% 이상이 수분이고 유효 성분의 함량이 낮아 많은 양의 추출물을 사용해야 목적하는 효과를 나타내는 경우가 많으므로, 알로에 아보레센스 지상부 전체를 물이나 기타 다양한 용매를 사용해 간편히 추출함으로써 아보레센스 추출물에 함유된 여러 유효 성분들의 상호 보완적 작용을 통해 아보에센스의 효능 중 지금까지 알려지지 않았던 항산화, 피부 세포 활성 촉진, 주름 개선, 미백 효능, 항 아토피 효과 등이 기존의 알로에 베라 겔보다 현저히 높은 효과를 제공한다.

Description

알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법{Cosmetic composition containing aloe aborescens extract as an active ingredient, manufacturing method for the same}

본 발명은 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 여러 알로에 종의 하나인 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 추출하여 화장품 조성물을 제공함으로써, 기존에 알려지지 않은 항산화, 피부 세포 생육 촉진, 주름개선, 미백 효과와 함께 항 아토피 활성 등의 효과를 제공하도록 하기 위한 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법에 관한 것이다.

알로에 속에 속하는 500여 종의 다양한 알로에 종이 있으나 그 중 식용 및 약용으로 사용하는 종은 알로에 베라, 알로에 아보레센스 3종이 있다. 그 중 알로에 베라는 널리 알려져 있어 식품분야부터 화장품 소재에 이르기까지 다양하게 활용되고 있으나, 알로에 아보레센스는 화장품 소재로써 잘 활용되어지고 있지 않다.

알로에 베라 추출물을 이용한 논문은 많이 발표되어 있다. 염증 매개 인자인 프로스타글란딘을 억제 시키며 항염증 효과를 확인하였고(Beatriz V et al., J Ethnopharmacol, 55(1): 69-75, 1996), 알로에 베라 추출물이 Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Trichophyton mentagraphytes 등의 균을 억제시킴으로써 항균성이 보고되었다(Olaleye MT et al., Afr J Biotechnol, 4(12): 1413-1414, 2005). 또한 알로에 베라 겔 추출물을 이용하여 사람피부세포주에서 콜라겐 합성과 증식이 촉진되는 것을 확인하여 화장품 소재로써 가치가 확인되었다. 이 외에도 다양한 방면의 많은 알로에 베라 추출물 대한 연구가 보고되었다.

또한, 알로에 베라와 관련된 종래의 기술은 알로에 베라 잎 추출물을 이용한 피부보습용, 피부 노화 방지용 화장품 조성물(한국 등록특허 등록번호 제10-2040245호), 그리고 알로에 베라를 함유하는 건강보조식품의 조성물 및 제조방법(한국 등록특허 등록번호 제10-0992602호), 피부세포증식 촉진, 항산화, 항알러지 알로에 베라 새순 추출물(한국 등록특허 등록번호 제10-1702056호) 등에 해당하는 것이 있다.

그러나, 알로에 아보레센스와 관련된 종래의 기술은 변비 개선 및 예방기능을 갖는 식품 조성물(한국출원특허 출원번호 제10-2008-0122550호), 피부 보습과 혈행 개선, 셀룰라이트 분해 등의 효과를 갖는 알로에 추출물 및 캡사이신을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물(한국등록특허 등록번호 제10-1764131호)가 제시되고 있다. 또한, 한편, 알로에 아보레센스의 항산화 활성을 이용하여 산화적 스트레스로부터의 세포 보호 효능 효과가 확인되었고(Beppu H et al., J Ethnopharmacol, 89(1): 37-45, 2003), 알로에 아보레센스 즙을 환부에 도포시 피부 재생을 촉진시키며 및 상처 치유에 효과적임을 확인하였다(Jia Y et al., J Ethnopharmacol, 120(2): 181-9, 2008). 상처 치유에 효과적인 이유는 알로에 아보레센스 추출물의 항진균 효과 및 항염증 효과에서 기인하는 것으로 Fujita K 등이 수행한 Trichophyton mentagrophytes의 증식을 효과적으로 억제하는 항진균 효과 연구와(Fujita K et al., Antimicrob Agents Chemother, 14(1): 132-6, 1978) Masatoshi 등이 항염증 연구(Masatoshi YM et al., Agric Biol Chem, 1627-1629, 1991)를 보고하였다. 상기 여러 연구와 같이 알로에 아보레센스의 대해 기존에 여러 논문들이 보고되었으나, 알로에 아보레센스를 이용한 피부 항노화, 주름 개선 효능 등에 관한 연구는 미비한 실정이다. 즉, 알로에 아보레센스 추출물을 이용한 항산화, 피부 세포 생육 촉진, 주름개선, 미백 효과와 함께 항 아토피 활성 등을 제공하기 위한 기능성 화장품 조성물에 대해서는 현재까지 제공된 바가 없다.

대한민국 특허출원 출원번호 제10-2008-0122550호 "알로에베라와 알로에아보레센스를 주성분으로 함유하는 변비개선 및 예방기능을 갖는 겔상 식품조성물(Constipation releaving Health Food composition containing Aloe vera and Aloe aborescens)" 대한민국 등록특허 공고번호 제10-1764131호 "알로에 추출물 및 캡사이신을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물(EXTERNAL PREPARATION FOR SKIN COMPRISING ALOE EXTRACTS AND CAPSAICIN)"

본 발명은 상기의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 알로에 아보레센스 추출물에 항산화, 피부 세포 활성 촉진, 주름 개선, 미백 효과, 피부 면역 증진을 통한 항 아토피 효과 등에서 기존에 화장품 소재로 가장 많이 사용하고 있는 알로에 베라 겔보다 월등한 효과를 제공하도록 하기 위한 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법을 제공하기 위한 것이다.

그러나 본 발명의 목적들은 상기에 언급된 목적으로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 목적들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물은, 용매 추출물로 알로에 아보레센스 추출물을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

이때, 알로에 아보레센스 추출물은, 추출시 알로에 아보레센스 분말을 용매에 대해 1% 내지 90% 농도로 첨가하여 추출하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 상기 용매는, 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 또는 메틸렌클로라이드을 사용하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물은 알로에 아보레센스 추출물의 농도에 따라 미리 설정된 양의 DPPH 용액을 가하여 제조되는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 본 발명에서, 알로에 아보레센스 추출물은 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출하는 방법을 통해 수득하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 본 발명에서, 알로에 아보레센스 분말에 물이나 유기용매를 첨가하여 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정은 교반 또는 방치의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 할수 있다.

또한, 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정은, 열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 및 초음파 추출법 중 하나에 의해 수행되는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 본 발명의 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정에서 사용하는 복수의 추출법은 각각에 대해서 미리 설정된 횟수를 반복하여 추출하거나 각 추출법에 순서를 설정하여 순서에 따라 추출법을 수행하는 것을 특징으로 할 수 있다.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물의 제조 방법은, 아보레센스 지상부 전체를 건조 후 분말화하는 제 1 단계; 및 용매 추출물로 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 제 2 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

이때, 알로에 아보레센스 추출물 추출 방식은, 열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 및 초음파 추출법 중 하나에 의해 수행되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법은, 기존의 알로에를 활용하는 화장품 조성물들은 주로 알로에 껍질을 제거하고 내피에 존재하는 겔 형태로 추출해 사용해왔지만 겔 형태는 95% 이상이 수분이고 유효 성분의 함량이 낮아 많은 양의 추출물을 사용해야 목적하는 효과를 나타내는 경우가 많으므로, 알로에 아보레센스 지상부 전체를 물이나 기타 다양한 용매를 사용해 간편히 추출함으로써 아보레센스 추출물에 함유된 여러 유효 성분들의 상호 보완적 작용을 통해 아보에센스의 효능 중 지금까지 알려지지 않았던 항산화, 피부 세포 활성 촉진, 주름 개선, 미백 효능, 항 아토피 효과 등이 기존의 알로에 베라 겔보다 현저히 높은 효과를 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명의 다른 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물, 그리고 이의 제조 방법은, 항산화, 피부 세포 활성 촉진, 주름 개선, 미백 효능, 항 아토피 효과 등이 향상된 새로운 기능성 화장품 조성물로서 다양한 화장품 제형에 적용될 수 있는 효과를 제공한다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 알로에 베라 겔에 대한 세포 생존 및 세포 활성 촉진 정도를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 로에 베라 겔에 대한 라디칼 소거능을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 알로에 베라 겔에 대한 콜라겐 합성 능력을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 알로에 베라 겔의 Matrix metalloproteinase-1(MMP-1)저해율을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 알로에 베라 겔의 티로시나제 저해율 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물에 사용되는 아보레센스 추출물과, 알로에 베라 겔의 대식세포로부터 나이트로옥사이드 (NO)의 생성을 억제하는 정도를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예의 상세한 설명은 첨부된 도면들을 참조하여 설명할 것이다. 하기에서 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 것이다.

본 발명에서 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물은 후술하는 바와 같이 사람피부세포주(CCD-986sk)에 알로에 아보레센스 추출물을 처리한 경우, 상기 세포에서 세포 대사 활성 증가, 주름 개선 효과, 미백 효과와 대식세포를 이용한 피부 면역 증진 효과 등의 실험 결과에 기반한 알로에 아보레센스 추출을 사용하여 발명을 완성하였다.

본 발명에서 알로에 아보레센스 추출물은 용매 추출물로, 천연으로부터 추출물을 수득하는 방법이라면 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출하는 방법을 통해 수득할 수 있다.

본 발명에서 알로에 아보레센스 분말에 물이나 유기용매를 첨가하여 추출하는 과정은 교반 또는 방치 등의 방법으로 수행될 수 있는데, 열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 또는 초음파 추출법 등 1회 또는 수회 반복하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출법으로 수행될 수 있고, 이로써 불용성, 난용성 물질의 용출을 최소화할 수 있다.

이때 첨가할 수 있는 유기용매는 제한되지는 않으나, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 또는 메틸렌클로라이드 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올일 수 있다.

이하에서는 본 발명의 실시예에 따른 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물의 제조 방법에 대해서 실시예를 들어 구체적으로 살펴보도로 한다.

[알로에 아보레센스 추출물의 추출 방법]

(실시예 1) 열수 추출법

본 발명의 알로에 아보레센스 추출물을 제조하기 위해, 아보레센스 지상부 전체를 열풍, 태양열, 감압, 동결 건조 등의 방법으로 건조 후 분말화한 알로에 아보레센스 분말 100g과 3차 증류수 1000ml를 계량하여 추출장치에 넣고 100 ℃에서 12내지 24시간 열수 추출하였다. 추출 용액을 거름종이에 한번 거른 후 감압 농축한 뒤에 동결 건조 하여 분말의 형태로 제조하였다.

(실시예 2) 에탄올 추출법

건조된 알로에 아보레센스 분말 100g과 에탄올 1000ml를 계량하여 추출장치에 넣고 80 ℃에서 12 내지 24시간 열수 추출하였다. 추출 용액을 거름종이에 한번 거른 후 감압 농축 한 뒤에 동결 건조하여 분말의 형태로 제조하였다.

(실시예 3) 메탄올 추출법

건조된 알로에 아보레센스 분말 100g과 메탄올 1000ml를 계량하여 추출장치에 넣고 60 ℃에서 12 내지 24시간 열수 추출하였다. 추출 용액을 거름종이에 한번 거른 후 감압 농축 한 뒤에 동결 건조하여 분말의 형태로 제조하였다.

본 발명의 실시 예에서는, 알로에 아보레센스 추출물의 효능 효과를 확인하기 위해 세포에 알로에 아보레센스 추출물을 투여하였고, 추출물을 처리하지 않은 세포에 비하여 세포 대사 활성 증가, 주름 개선 효과, 미백효과, 항 아토피 효과 등을 확인하였으며, 대조군으로는 현재 알로에 화장품 조성물로 가장 많이 사용되고 있는 알로에 베라 겔을 비교대상으로 실험을 실시하였다.

따라서 본 발명에 따른 알로에 아보레센스 추출물은 항산화, 세포의 대사 활성 증가, 주름 개선 효과, 미백 효과, 항 아토피 효과 등이 나타남에 따라 해당 효과가 요구되는 다양한 화장품에 적용될 수 있다

이하에서는 본 발명에 따른 알로에 아보레센스 추출물에 따른 각 효능에 대해서 구체적으로 살펴보도록 한다.

[세포 독성 평가 및 효능 평가]

1. 세포 배양

사람피부세포주(CCD-986sk)는 우태아혈청(Fetal bovine serum)을 10% 첨가한 배지(Dulbecco's modified Eagle' medium)에서 각각 배양하였다. 상기 각 세포는 배양접시에 배양 후 2일마다 배지를 교환해 주면서 37℃, 5% CO₂의 배양기에서 배양하였다.

2. 세포 독성 및 대사 활성 증진 평가

사람피부세포주(CCD-986sk)를 48-well 플레이트에 1×104 cell/well 농도로 접종한 뒤, 알로에 아보레센스 추출물을 각각 농도별(1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 및 0.01%)로 투여한 후, 24시간 배양 후 물질투여 없이 배양한 세포를 음성대조군으로 하여 세포 생존도 분석을 Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)를 사용해 진행하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 알로에 아보레센스 추출물 투여군의 1% 농도에서도 음성대조군 대비 세포 생존율이 큰 차이를 보이지 않아 독성이 없는 것으로 판단되었다, 특이하게 그 외 농도에서는 농도 의존적으로 음성대조군 대비 세포 생존율의 현격한 증가가 확인되어, 아보레센스 추출물이 세포 독성이 전혀 없는 것은 물론이고 세포내 미토콘드리아의 활성을 촉진시켜 세포 대사가 활성화되어 피부 세포 생육이 촉진되는 것이 확인되었다. 이에 반해 대조군인 알로에 베라 겔 투여군은 모든 농도에서 세포 생존도가 음성 대조군에 비해 큰 차이가 없어 세포 독성은 없는 것으로 확인되었으나, 세포 활성 촉진 정도는 높지 않아 세포 대사 활성도는 아보레센스 추출물에 비해 현격히 낮은 것으로 나타났다.

3. 효능 평가

3-1. 항산화평가

실험에 사용한 알로에 아보레센스 추출물들의 항산화 활성을 DPPH 소거 활성 측정을 통해 확인하였다. 양성대조군으로 Trolox(0.05%)를 사용하였으며 알로에 아보레센스 추출물을 각각 농도별(0.5%, 0.25%, 0.125%)로 제조한 시료에 0.2mM(밀리몰)의 DPPH 용액을 가하고 실온에서 30분간 반응하였다. 반응이 끝난 뒤 520nm에서 흡광도를 측정하여 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거능을 하기의 수학식 1로 확인하였다. 시료를 첨가하지 않은 음성대조군과 비교하여 자유라디칼 소거활성을 백분율로 나타내었다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 알로에 아보레센스 추출물 투여 시 음성 대조군 대비 모든 실험군에서 유의하게 DPPH 라디칼 소거능이 농도 의존적으로 증가하였으며, 0.5% 농도에서 95% 이상의 라디칼 소거능을 나타내었다. 이는 양성 대조군인 trolox 의 활성과 비교해도 매우 높은 항산화 활성임을 알 수있다. 특히 대조군인 알로에 베라 겔 투여 시 아보레센스 추출물에 비해 매우 낮은 소거능을 보이며 0.5% 농도에서도 약 20% 정도의 라디칼 소거능을 보였다.

3-2. 콜라겐 합성 능력 평가

섬유아세포주를 48-well 플레이트에 디쉬에 웰당 1×104 cell/well 농도로 접종한 뒤, 알로에 아보레센스 추출물을 각각 농도별(1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 및 0.01%)로 투여한 후, 24시간 배양하였다. 양성대조군으로 TGF-b을 사용하여 0.1ng/ml 농도로 처리하였다. 배양액을 수거하여 실험에 사용하였으며, 세포 배양액 내 콜라겐 합성량은 procollagen type 1 peptide EIA kit(Takara biomedical)을 사용하여 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 넣은 다음 sample 및 standard를 20ul 넣고 37℃에서 3시간 반응 시켰다. 반응이 끝난 뒤 각 well의 배양액을 제거한 후 wash buffer로 4회 세척하였다. substrate용액 100ul를 첨가하고 상온에서 15분간 반응시켰다. Stop solution(1N H2SO4) 100ul를 첨가하여 반응을 중지시킨 후 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 알로에 아보레센스 추출물 투여 시 음성 대조군 대비 모든 실험군에서 유의하게 콜라겐 합성이 증가하였으며, 0.5% 농도에서 콜라겐 합성이 음성대조군 대비 50% 이상 증가하여 가장 뛰어난 콜라겐 합성 증가 효과를 나타내었으나 기존 화장품에 널리 사용되는 알로에 베라 겔은 0.5% 농도에서 콜라겐 합성이 음성대조군 대비 약 25% 증가하였다.

3-3. MMP-1 생성 저해 평가

섬유아 세포주를 48-well 플레이트에 디쉬에 웰당 1×104 cell/well 농도로 접종한 뒤, 알로에 아보레센스 추출물을 각각 농도별 (1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 및 0.01%)로 투여한 후, 24시간 배양하였다. 양성대조군으로 TGF-beta1을 사용하여 0.1ng/ml 농도로 처리하였다. 배양액을 수거하여 실험에 사용하였으며, 세포 배양액 내 콜라겐 합성량은 Human MMP-2 ELISA kit(Abcam)을 사용하여 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 넣은 다음 sample 및 standard를 50ul 넣고 37℃에서 3시간 반응 시켰다. 반응이 끝난 뒤 각 well의 배양액을 제거한 후 wash buffer로 4회 세척하였다. substrate용액 100ul를 첨가하고 상온에서 15분간 반응시켰다. Stop solution(1N H2SO4) 100ul를 첨가하여 반응을 중지시킨 후 ELISA reader로 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 알로에 아보레센스 추출물 투여 시 음성 대조군 대비 모든 실험군에서 유의하게 MMP-1의 양이 감소하였으며, 0.5% 농도에서 MMP-1의 양이 음성대조군 대비 약 20% 감소하였다. 이에 알로에 베라 겔은 MMP-1의 양이 음성대조군 대비 20% 이하로 감소하였다.

3-4. 티로시나제 저해 평가

알로에 아보레센스 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해 티로시나제 저해 효과를 분석했다. 이를 위해 우선 버섯 유래의 티로시나제를 0.1M 인산완충용액에 2000 units/ml로 녹여 동결 보존하였고 기질로 L-3,4-디 하이드록시페닐알라닌 (L-3,4-dihydroxylphenyl alanine, L-DOPA)을 직전에 조제하여 분석하였다.

티로시나제 저해 활성은 티로시나제 (78 units/mL), 1/15M 인산 완충용액을 함께 넣어 25℃에서 5분간 미리 반응시키고 알로에 아보레센스 추출물을 0.125%, 0.25%, 0.5%로 투여 하였고, 양성대조군으로는 알부틴을 사용하여 처리하였다. 이에 상기 L-DOPA를 넣어 475nm에서 10분간 흡광도를 측정한 뒤 하기 수학식 2로부터 효소 저해율(%)을 산출하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 알로에 아보레센스 추출물 투여 시 추출물 농도에 따라 티로시나제 저해율이 증가하였으며, 최고 처리 농도인 0.5%에서 티로시나제 저해율이 약 30%로 측정되었다. 하지만 알로에 베라 겔은 같은 농도인 0.5%에서 약 15% 정도의 티로시나제 저해율을 보이며 알로에 아보레센스에 비해 절반 정도의 저해율을 보였다.

3-5. 항 아토피 효능 측정

알로에 아보레센스의 항 아토피 효과를 확인하기 위해 가장 보편적으로 사용하는 대식세포에서 NO 생성양 억제 정도를 측정했다. 이를 위해 우선 쥐의 대식세포 RAW 264.7 세포를 배양하였다. 배양 및 분화 배지는 Dulbecco’ modified Eagle’ medium (DMEM) high glucose에 10% Fetal bovine serum을 첨가하여 5% CO₂, 37 ℃ 인큐베이터에서 충분히 배양한 후에 세포를 원심분리하여 세포를 모아서 1.5×105cells/ml의 밀도로 96well plate에 분주하여 24시간 배양하였다. 24시간 후에 0.15, 0.25, 0.5% 농도의 알로에 시료들을 1ug/mL Lipolysaccharides (LPS) 처리, 무처리군으로 나누어 200 μl 만큼 첨가하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 배양된 샘플의 상층액 50 ul 만큼 새 96 well plate에 옮긴 후 Griess 시약 50 μl을 첨가하고 다시 20분을 실온에 방치한 뒤에 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, NaNO₂를 이용한 정량법을 이용하여 NO 생성량을 정량하였다.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이 모든 시료들의 NO 생성량을 확인한 결과 알로에 아보레센스 추출물이 모든 처리 농도에서 알로에 베라 겔에 비해 현저하게 NO 생성을 억제하여 피부 염증을 효과적으로 억제하는 것이 확인되었다. 특히 아보레센스 추출물이 LPS 처리 후에도 NO의 생성 억제율미 45% 이상 현저히 감소하여, 높은 피부 면역 효과가 있음이 확인되었다.

이는 상기 3-1의 항산화 활성과도 일치하는 결과를 보여, 알로에 아보레센스의 우수한 향장 효능이 높은 항산화 활성이 기인되는 것을 확인했다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시 예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시 예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 특히 해당 추출물을 얻기 위해 초음파나 초고압 등의 기타 다른 물리적, 화학적 방법 등을 통해 얻어진 추출물들도 같은 기능을 가지고 있어 본 실시예 대상에서 제외되지 않는다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

용매 추출물로 알로에 아보레센스 추출물을 포함하고
상기 아보레센스 추출물의 함량은 0.1 내지 0.5 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 1에 있어서, 알로에 아보레센스 추출물은,
추출시 알로에 아보레센스 분말을 용매에 대해 1% 내지 90% 농도로 첨가하여 추출하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 2에 있어서, 상기 용매는,
물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 또는 메틸렌클로라이드을 사용하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 1에 있어서,
알로에 아보레센스 추출물의 농도에 따라 미리 설정된 양의 DPPH 용액을 가하여 제조되는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 1에 있어서,
알로에 아보레센스 추출물은 물 또는 유기용매를 첨가하여 가용 추출하는 방법을 통해 수득하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 1에 있어서,
알로에 아보레센스 분말에 물이나 유기용매를 첨가하여 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정은 교반 또는 방치의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 1에 있어서, 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정은,
열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 및 초음파 추출법 중 하나에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
청구항 7에 있어서,
알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 과정에서 사용하는 복수의 추출법은 각각에 대해서 미리 설정된 횟수를 반복하여 추출하거나 각 추출법에 순서를 설정하여 순서에 따라 추출법을 수행하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물.
아보레센스 지상부 전체를 건조 후 분말화하는 제 1 단계; 및
용매 추출물로 알로에 아보레센스 추출물을 추출하는 제 2 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물의 제조 방법.
청구항 9에 있어서, 알로에 아보레센스 추출물 추출 방식은,
열수 추출법, 냉침 추출법, 환류 냉각 추출법 및 초음파 추출법 중 하나에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 알로에 아보레센스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품 조성물의 제조 방법.