KR102336515B1 - 부포린 유도체 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 부포린 유도체 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 부포린 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 피부주름 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 부포린 유도체는 SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 억제하여, 막 융합을 억제시킴으로써 신경전달물질의 방출을 효과적으로 억제시킬 수 있다. 따라서, 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 피부주름, 다한증, 다양한 통증 질환, 알러지, 뇌신경장애 등 신경전달물질의 과다 배출로 인하여 발생하는 질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 부포린 유도체 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 부포린 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
SNARE 복합체는 효모에서 24개 이상, 포유류에서는 60개 이상의 SNARE 단백질로 구성된 단백질 복합체로서, 시냅스 소포(synaptic vesicle) 융합을 매개하는데 주요한 역할을 수행한다. 신경전달물질이 방출되기 위해서는 신경말단에 위치하는 시냅스 소포와 시냅스 전막(presynaptic membrane) 사이의 막이 융합되어야 한다. 이러한 막 융합을 조절하는 SNARE 단백질들은 SNARE 복합체를 형성하여 막 융합을 야기시키고, 이로 인해 신경전달물질이 방출되게 된다. SNARE 복합체의 형성은 신경전달물질의 방출 등 세포 외 배출작용에 중요한 역할을 하게 된다.
SNARE 단백질에 특이적으로 작용하여 SNARE 복합체의 형성을 저해시키는 대표적인 물질로서 보툴리눔 독소가 있으며, SNARE 복합체의 형성을 저해시킴으로써 신경전달을 차단하기 위한 용도로 사용되고 있다(미국공개특허 2016-0151466). 특히, 보툴리눔 독소 B(BoNT/B)는 syb2(synaptobrevin-2)를 비가역적으로 분해하여 신경전달을 차단시킨다. 이를 통해, 근육의 움직임이나 교감 또는 부교감 신경계를 억제하여, 주름제거뿐 아니라 피부통증, 근육통, 허리통증, 만성두통 등 다양한 통증 질환에 유용하게 사용되며, 다한증, 모공확장증, 알러지, 뇌신경장애, 사시, 위산역류질환 등 다양한 질환의 치료에도 활용도가 높다.
그러나, 보툴리눔 독소는 강한 독성 물질로서 부작용의 위험성이 높으며, 실질적인 약물 사용에 있어서 고도의 주의가 필요하다. 따라서, SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 억제하면서 부작용이 낮은 새로운 물질 개발이 필요한 실정이다.
이에 본 발명자들은 부포린 유도체가 SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 억제시키고, 나아가 시냅스 소포와의 막 융합을 억제시킬 수 있는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 측면은, 하기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다:
N-말단 확장 도메인 - 제1 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (I)
본 발명의 다른 측면은, 상기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체를 제공한다:
N-말단 확장 도메인 - 제2 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (II)
본 발명에 따른 부포린 유도체는 SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 억제하여, 막 융합을 억제시킴으로써 신경전달물질의 방출을 효과적으로 억제시킬 수 있다. 따라서, 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물은 피부주름, 다한증, 다양한 통증 질환, 알러지, 뇌신경장애 등 신경전달물질의 과다 배출로 인하여 발생하는 질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 부포린-1과 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인하기 위한 풀-다운 분석(pull-down assay) 실험모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 부포린-1과 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 마우스의 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인하기 위한 풀-다운 분석 모식도를 나타낸 것이다.
도 4는 부포린-1과 마우스 뇌 조직 내의 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 부포린-1이 SNARE 복합체 형성의 각 단계에 미치는 영향을 확인한 것이다.
도 6은 부포린-1에 의한 SNARE 복합체의 형성이 억제되는 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 부포린-1, 부포린-2 및 파라신의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 비교한 것이다.
도 8은 효모 액포 및 SNARE 단백질들을 이용한 막 융합 실험 모식도를 나타낸 것이다.
도 9는 부포린-1에 의한 막 융합 억제 효과를 확인한 것이다.
도 10은 PC-12 세포 및 HEK-293 세포에서 부포린-1이 SNAP-25와 동일한 위치에 분포하는 것을 확인한 것이다.
도 11은 PC-12 세포에서 부포린-1이 Stx1과 동일한 위치에 분포하는 것을 확인한 것이다.
도 12는 PC-12 세포에서 부포린-1에 의한 CgA-EAP 방출 억제 효과를 확인한 것이다.
도 13은 PC-12 세포 및 HEK-293 세포에서 H2A의 분포를 확인한 것이다.
도 14는 SNARE 단백질들과 H2A의 결합 유무를 확인하기 위해, 마우스 뇌 조직 균질액(homogenates)에 H2A를 처리한 후, 항-히스톤 H2A 항체를 이용해 H2A와 결합한 SNARE 단백질들을 확인한 것이다.
도 15는 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 확인한 것이다.
도 16은 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드의 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과를 확인한 것이다.
도 17은 부포린 유도체들의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 비교한 것이다.
도 2는 부포린-1과 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 마우스의 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인하기 위한 풀-다운 분석 모식도를 나타낸 것이다.
도 4는 부포린-1과 마우스 뇌 조직 내의 SNARE 단백질들의 결합 여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 부포린-1이 SNARE 복합체 형성의 각 단계에 미치는 영향을 확인한 것이다.
도 6은 부포린-1에 의한 SNARE 복합체의 형성이 억제되는 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 부포린-1, 부포린-2 및 파라신의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 비교한 것이다.
도 8은 효모 액포 및 SNARE 단백질들을 이용한 막 융합 실험 모식도를 나타낸 것이다.
도 9는 부포린-1에 의한 막 융합 억제 효과를 확인한 것이다.
도 10은 PC-12 세포 및 HEK-293 세포에서 부포린-1이 SNAP-25와 동일한 위치에 분포하는 것을 확인한 것이다.
도 11은 PC-12 세포에서 부포린-1이 Stx1과 동일한 위치에 분포하는 것을 확인한 것이다.
도 12는 PC-12 세포에서 부포린-1에 의한 CgA-EAP 방출 억제 효과를 확인한 것이다.
도 13은 PC-12 세포 및 HEK-293 세포에서 H2A의 분포를 확인한 것이다.
도 14는 SNARE 단백질들과 H2A의 결합 유무를 확인하기 위해, 마우스 뇌 조직 균질액(homogenates)에 H2A를 처리한 후, 항-히스톤 H2A 항체를 이용해 H2A와 결합한 SNARE 단백질들을 확인한 것이다.
도 15는 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 확인한 것이다.
도 16은 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드의 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과를 확인한 것이다.
도 17은 부포린 유도체들의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 비교한 것이다.
본 발명의 일 측면은, 하기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
N-말단 확장 도메인 - 제1 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (I)
상기 식 (I)에서, 제1 코어 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이고; N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 1개 내지 15개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있으며; C-말단 확장 도메인은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 3의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 1개 내지 3개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, "제1 코어 도메인"이란, 부포린-1 단백질의 17번부터 35번까지의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 의미한다. 상기 전장의 부포린-1 단백질은 서열번호 116의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다. 또한, 상기 제1 코어 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
상기 N-말단 확장 도메인은 상술한 코어 도메인의 N-말단에 결합되는 도메인으로서, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 잔기가 결실된 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 5개, 10개 또는 15개의 아미노산 잔기가 결실된 것일 수 있다.
상기 서열번호 2는 Xaa1 Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa2 Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시되며, 여기서 Xaa1 또는 Xaa2는 각각 독립적으로 Ser, Ala 및 Val 중 어느 하나일 수 있다. 일 실시예에서, 상기 서열번호 2의 Xaa1이 Ala이고, Xaa2가 Val일 경우에 Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시될 수 있으며, 또 다른 일 실시예에서, 상기 서열번호 2의 Xaa1이 Ser이고, Xaa2가 Ala일 경우에 Ser Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Ala Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시될 수 있다.
상기 C-말단 확장 도메인은 상술한 코어 도메인의 C-말단에 결합되는 도메인으로서, 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 잔기가 결실된 것일 수 있다.
상기 아미노산 잔기의 결실은, N-말단 확장 도메인 및 C-말단 확장 도메인 중 어느 하나 또는 양쪽 도메인 전부에서 발생할 수 있다.
상기 N-말단 확장 도메인이 폴리펩타이드로서, 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 5개, 10개 또는 15개의 아미노산이 연속적으로 결실될 수 있으며, 상기 C-말단 확장 도메인이 폴리펩타이드로서, 서열번호 3의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 2개 또는 3개의 아미노산이 연속적으로 결실될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 부포린 유도체는 서열번호 4 내지 67의 아미노산 서열 중 어느 하나를 갖는 것일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, '부포린'이란, 아시아 두꺼비(Bufo gargarizans)의 히스톤 H2A의 단백질 분해 과정에 의해 생성되는 히스톤 H2A-유래 항균 펩타이드로, 부포린-1, 부포린-2, 파라신(parasin) 등이 있다.
부포린-1은 syb2와 구조적 유사성으로 인해 syb2 대신 Stx1 및 SNAP-25와 결합하여 SNARE 복합체의 형성을 억제시킬 수 있다. 보툴리눔 독소 B(BoNT/B)는 신경전달물질 배출에 관여하는 핵심 단백질인 SNARE 단백질을 절단하는 단백질 분해효소이다. 이는 SNARE 단백질, 특히 syb2를 비가역적으로 절단함으로써 신경의 전달을 차단한다. 반면, 부포린-1은 SNARE 복합체의 형성을 저해함으로써 신경전달을 방해하는 경쟁적 저해제(competitive inhibitor)이다. 따라서, Stx1 및/또는 SNAP-25와 결합능이 있는 상술한 식 (I)의 부포린 유도체는 SNARE 복합체 형성을 억제시킬 수 있다. 나아가, 상술한 식 (I)의 부포린 유도체는 SNARE 단백질이 관련된 질환의 치료에 효과적으로 활용될 수 있다.
상기 히스톤 H2A 단백질은 히스톤 단백질의 한 부류로, 상기 히스톤 단백질은 H2A를 포함하여 5개의 부류로 나눠지며, H1, H2A, H2B, H3 및 H4가 여기에 해당한다. 히스톤 단백질의 주요 기능은 핵에서의 유전자 발현을 조절하는 것이다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 약학 조성물의 유효성분인 부포린 유도체는 v-SNARE 단백질 대신 t-SNARE 단백질과의 결합을 통해 SNARE 복합체 형성을 억제할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, 'SNARE 단백질'이란, 세포내에서 일어나는 막 융합에 관여하는 거대한 SNARE(soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein receptor) 복합체를 구성하고 있는 단백질을 의미한다. SNARE 단백질들은 SNARE 복합체를 형성하여 시냅스 소포와 시냅스 전막 사이의 막을 융합시키며, 이러한 막 융합에 의해 신경전달물질 배출 통로가 열리게 된다. 상기 막 융합 시에 지질이중층의 재배열이 일어나게 되는데, 이들 막은 자발적으로 융합되지 않고 외부에서 강한 힘이 주어져 막들 간의 반발력을 극복하여야 한다. 이때, 막들 간의 반발력을 이겨낼 정도의 강한 힘을 만들어 내는 것이 SNARE 단백질이다. 즉, 막 융합 시, 표적 막(target membrane)에 부착되어 있는 Stx1 및 SNAP-25의 복합체인 t-SNARE와 소포에 부착되어 있는 v-SNARE인 syb2가 서로 관여하여 SNARE 복합체를 형성하고, 이로 인해서만 막을 융합시킬 수 있는 것이다. 이들은 서로 꽈배기처럼 꼬여 있는 구조를 갖게 되는데, 이때, 상기 SNARE 단백질들의 접합과 꼬임 과정이 완전히 수행되지 않으면 막 융합이 이루어지지 않게 되며, 이에 따라 신경전달물질 방출이 일어나지 않게 된다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 v-SNARE 단백질은 syb1 및 syb2가 바람직하며, syb2인 것이 가장 바람직하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 t-SNARE 단백질은 Stx1, Stx2, Stx3, Stx4, Stx5, Stx6, Stx7, Stx8, Stx10, Stx11, Stx12, Stx16, Stx17, Stx18, Stx19 및 SNAP-25가 바람직하며, stx1 및 SNAP-25로부터 선택되는 1종 이상인 것이 가장 바람직하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 약학 조성물의 유효성분인 부포린 유도체는 SNARE 복합체 형성을 억제하여 신경전달물질의 방출을 조절할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 약학 조성물의 유효성분인 부포린 유도체는 SNARE 복합체 형성을 억제하여 시냅스 소포와 시냅스 전막 사이의 액포 막 융합을 억제할 수 있다. 본 명세서에서 용어, "액포"는 세포벽, 세포 함유물과 마찬가지로 후형질에 속하는 막으로 싸인 거대한 세포소기관을 의미한다.
상기 신경질환은 사시, 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 다한증, 모공확장증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 피부통증, 근육통, 허리통증, 만성두통, 측두하악관절 통증 장애, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증, 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 뇌신경장애, 위산역류질환, 성대 기능 장애, 알러지성 질환, 자가면역성 질환, 만성신경병증, 안면근육비대증 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.
구체적으로, 대한민국 등록특허 제 10-1803201 호에는 SNARE 복합체 형성을 저해할 경우, 신경전달물질 방출을 저해함으로써 다한증의 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있음이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제 10-1729138 호에는 SNARE 복합체 형성을 저해할 경우, 시냅스 소포(synaptic vesicle)와 시냅스 전막(presynaptic membrane) 사이의 막 융합을 저해함으로써 모공 축소 효과를 나타낼 수 있음이 개시되어 있다. 또한, 대한민국 등록특허 제 10-0901074 호에는 SNARE 복합체 형성을 저해할 경우, 신경전달물질 방출을 저해함으로써 피부 통증을 완화시킬 수 있음을 개시되어 있다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 저해하므로, 상기와 같은 신경질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은, 하기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
N-말단 확장 도메인 - 제1 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (I)
상기 식 (I)에서,
제1 코어 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이고;
N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 1개 내지 15개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있으며;
C-말단 확장 도메인은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 3의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 1개 내지 3개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있다.
상기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체는 약학 조성물에서 상술한 바와 동일하다.
종래 기술(대한민국 등록특허 제 10-1736775 호, 대한민국 등록특허 제 10-1673226 호, 대한민국 등록특허 제 10-1997474 호 및 대한민국 등록특허 제 10-1650020 호 등)에 SNARE 복합체 형성을 저해할 경우, 신경전달물질 방출을 저해함으로써 피부의 주름을 개선하는 효과를 나타낼 수 있음이 개시되어 있다. 본 발명에 따른 부포린 유도체는 SNARE 복합체의 형성을 효과적으로 억제하여, 액포의막 융합을 억제시킴으로써 신경전달물질의 방출을 효과적으로 억제시킬 수 있으므로, 본 발명의 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 이러한 SNARE 복합체 형성 억제능을 통해 SNARE 표적화 전구약물로서 사용 가능하며, 신경전달물질의 과다 배출로 인하여 발생하는 피부주름의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은, 하기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체를 제공한다.
N-말단 확장 도메인 - 제2 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (II)
상기 식 (II)에서, 제2 코어 도메인은 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이고; N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 1개 내지 15개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있으며; C-말단 확장 도메인은 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 69의 3번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 1개 내지 2개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, "제2 코어 도메인"이란, 부포린-1 단백질의 17번부터 36번까지의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 의미한다. 상기 전장의 부포린-1 단백질은 서열번호 116의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있고, 상기 제2 코어 도메인은 서열번호 68의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
상기 N-말단 확장 도메인은 상술한 코어 도메인의 N-말단에 결합되는 도메인으로서, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 잔기가 결실된 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 5개, 10개 또는 15개의 아미노산 잔기가 결실된 것일 수 있다.
상기 서열번호 2는 Xaa1 Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa2 Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시되며, 여기서 Xaa1 또는 Xaa2는 각각 독립적으로 Ser, Ala 및 Val 중 어느 하나일 수 있다. 일 실시예에서, 상기 서열번호 2의 Xaa1이 Ala이고, Xaa2가 Val일 경우에 Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시될 수 있으며, 또 다른 일 실시예에서, 상기 서열번호 2의 Xaa1이 Ser이고, Xaa2가 Ala일 경우에 Ser Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Ala Arg Ala Lys Ala Lys Thr로 표시될 수 있다.
상기 C-말단 확장 도메인은 상술한 코어 도메인의 C-말단에 결합되는 도메인으로서, 서열번호 69의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 상기 폴리펩타이드의 3번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 1개 또는 2개가 결실된 것일 수 있다.
상기 아미노산 잔기의 결실은, N-말단 확장 도메인 및 C-말단 확장 도메인 중 어느 하나 또는 양쪽 도메인 전부에서 발생할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 부포린 유도체가 서열번호 70 내지 114의 아미노산 서열 중 어느 하나를 가질 수 있다.
상기 부포린 유도체는 서열번호 115 내지 117 중 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖지 않는 것을 특징으로 할 수 있다. 또한, 상기 부포린 유도체는 상기 부포린 유도체가 서열번호 119 내지 122 중 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은, 하기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
N-말단 확장 도메인 - 제2 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (II)
상기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체는 상술한 바와 동일하다.
본 발명의 또 다른 측면은, 하기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
N-말단 확장 도메인 - 제2 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (II)
상기 식 (II)로 표시되는 부포린 유도체는 상술한 바와 동일하다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 신경성 SNARE 단백질의 발현 및 정제
SNARE 단백질인 Stx1(아미노산 1-265, 서열번호 123), SNAP-25(아미노산 1-206, 서열번호 124) 및 syb2(아미노산 1-96, 서열번호 125)의 세포질 도메인을 코딩하는 유전자를 각각 pHis-parallel 벡터(Addgene)에 삽입시켰다. 이 벡터들을 각각 E. coli Rosetta 2(λDE3)(Novagen)에 형질전환시켰다. 형질전환 시킨 대장균을 LB 배지에서 37℃온도로 배양하였다. 600 nm 파장에서의 광학밀도(O.D) 값이 0.4 내지 0.6에 이르렀을 때, 1 mM 농도의 IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)를 첨가하였다. 상기 형질전환 시킨 대장균을 22℃ 온도에서 12시간 동안 배양한 후, 30분 동안 5,000×g 조건에서 원심분리하였다. 그 후, 2 mM DDT(Dithiothreitol) 및 2 mM 페닐메틸설포닐플루오라이드(phenylmethylsulfonyl fluoride)가 함유된 PBS에 재부유시켰다.
그 후, 형질전환된 대장균을 초음파 균질기(Vibra-Cell, Sonics& Materials) 파쇄하였다. 12,000×g 조건에서 30분 동안 원심분리한 후, 상층액을 수득하였다. 수득한 상층액을 Ni2+-니트릴로트리아세트산 크로마토그래피 컬럼(Millipore)으로 정제하고, 250 mM 이미다졸을 포함한 PBS로 용출시켜 각각의 Stx1(아미노산 1-265), SNAP-25(아미노산 1-206) 및 syb2(아미노산 1-96) 단백질을 분리하였다. 분리한 SNARE 단백질들을 각각 아미콘(Amicon) 울트라 원심분리 필터(Millipore)를 이용해 150 mM NaCl 및 0.5% n-옥틸-d-글루코피라노시드를 포함하는 20 mM Tris-HCl 버퍼로 교체하였다. SDS-PAGE 및 쿠마시블루 염색(Coomassie Brilliant Blue staining)을 이용해 각각의 SNARE 단백질들의 순도가 90% 이상임을 확인하였다.
실시예 1. 부포린-1과 SNARE 단백질의 결합 여부 확인
실시예 1. 부포린-1과 재조합 SNARE 단백질의 결합 여부 확인
부포린-1과 SNARE 단백질의 결합 여부를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
이때, 비오틴-부포린-1은 애니젠(주)에서 합성하였으며, 비오틴-스트렙타비딘 키트를 Thermos Fisher사로부터 구매하였다. 구체적으로, 비오틴-부포린-1을 스트렙타비딘 비드에 고정시키고, 상기 제조예 1에서 제조한 각각의 Stx1, SNAP-25 또는 syb2 SNARE 단백질들을 20 μM 씩 비드에 처리하여 6시간 동안 4℃ 온도에서 반응시켰다. Tris-HCl 버퍼로 4회 세척한 후, 용출 버퍼를 이용해 비드에 결합된 단백질을 분리시킨 후, SDS-PAGE 및 웨스턴 블랏을 통하여 단백질 결합 유무를 확인하였다.
그 결과, 부포린-1이 Stx1 및 SNAP-25와는 결합하지만, syb2와는 결합하지 않는 것을 확인하였다(도 1 및 도 2).
실시예 1.2. 부포린-1과 마우스 뇌 조직 내 SNARE 단백질의 결합 여부 확인또한, C57/BL6 수컷 마우스(12주령)의 뇌 조직을 적출하여 150 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1% 트리톤 X-100, 단백질 분해효소 억제제 칵테일(Roche)을 포함하는 20 mM Tris(pH 7.8) 버퍼에서 균질화시킨 후, 4℃ 온도 및 13,000×g 조건에서 30분 동안 원심분리하였다. 상층액을 회수하여 풀-다운 분석에 사용하였고, 용출된 샘플을 SDS-PAGE, 및 항-Stx1(sc-12736), 항-SNAP-25(sc-376713), 항-syb2 항체(sc-69706, Santa Cruz Biotechnology)를 이용하여 웨스턴 블랏으로 확인하였다. 모든 동물 실험은 광주과학기술원소속 동물윤리위원회의 감독과 승인을 받고 진행하였다(GIST-2018-033).
그 결과, 부포린-1이 SNAP-25와 결합하지만, syb2와는 결합하지 않는다는 것을 확인하였다(도 3 및 도 4). 이를 통해, 부포린-1이 syb2 대신 신경성 t-SNARE 단백질인 Stx1 및 SNAP-25과 상호작용을 한다는 것을 확인하였다.
실시예 2. 부포린-1이 SNARE 복합체 형성의 각 단계에 미치는 영향 확인
부포린-1이 SNARE 복합체 형성의 각 단계 중 어느 단계를 억제하는지 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
부포린-1을 각각 Stx1, t-SNARE 복합체 및 완전한 SNARE 복합체에 0 μM, 3 μM, 10 μM, 30 μM 및 100 μM 농도별로 처리하였다. 이때, 상기 t-SNARE 복합체는 3 μM 농도의 Stx1 단백질을 3 μM 농도의 SNAP-25와 실온에서 2시간 동안 반응시켜 t-SNARE 복합체를 형성하도록 하였다. 그 후, t-SNARE 복합체는 부포린-1과 4℃ 온도에서 2시간 동안 반응시켰고(도 5, (b)), t-SNARE 복합체에 Syb2(3 μM)를 첨가한 완전한 SNARE 복합체는 부포린-1과 4℃ 온도에서 하룻밤 동안 반응시켰다(도 5, (c)). 각각의 실험 조건에서 SNARE 복합체의 형성은 SDS-PAGE와 쿠마시블루 염색을 이용해 확인하였다. 이때, SNARE 복합체에 해당하는 밴드의 농도를 농도계(GS-900, Bio-Rad)를 이용하여 정량하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, t-SNARE 복합체와 부포린-1을 반응시켰을 때와 Stx1과 부포린-1을 반응시켰을 때 SNARE 복합체 형성이 억제되었다. 반면, 완전한 SNARE 복합체는 부포린-1의 처리에도 전혀 영향을 받지 않았다. 이를 통해, 부포린-1이 SNARE 복합체 형성을 억제할 때, 완전한 SNARE 복합체 형성 마지막 단계를 방해하기 보다는 주로 t-SNARE 복합체 형성을 저해하거나 Syb2가 t-SNARE 복합체에 결합하는 것을 저해하는 것을 확인하였다.
실시예 3. 부포린-1, 부포린-2 및 파라신 비교
히스톤 H2A-유래 펩타이드인 부포린-1, 부포린-2 및 파라신을 비교하기 위해, 신경성 SNARE 복합체 형성과 신경성 SNARE-매개 막 융합에 대한 억제 효과를 실험하였다.
먼저, 하기 표 1은 히스톤 H2A-유래 펩타이드들의 서열 유사성을 비교한 것으로, 서열상의 차이는 붉은색 및 밑줄로 표시하였다.
실시예 3.1. 신경성 SNARE 복합체 형성 억제 효과 비교
부포린-1, 부포린-2 및 파라신의 신경성 SNARE 복합체 형성 저해 효과를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 제조예 1에서 제조한 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질을 각각 3 μM로 처리한 후, 부포린-1, 부포린-2 또는 파라신을 처리한 후, 2시간 동안 4℃ 온도에서 반응시킨 후, 3 μM 농도의 syb2를 첨가하고 4℃ 온도에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 그 후, SDS-PAGE 샘플 버퍼를 이용하여 반응을 종료시켰다. SNARE 복합체의 형성은 SDS-PAGE 및 쿠마시블루 염색을 이용하여 확인하였다. SNARE 복합체의 분자량인 75 kDa의 밴드를 농도계(GS-900, Bio-Rad)를 이용하여 정량하였다.
그 결과, 부포린-1을 처리한 경우, 부포린-1의 농도가 증가할수록 SNARE 복합체의 형성이 억제되는 것을 확인하였다. 반면, 부포린-2는 부포린-1에 비해 SNARE 복합체 형성 억제율이 낮았으며, 파라신은 SNARE 복합체 형성의 억제율이 미미하였다(도 6 및 도 7). 이를 통해, 부포린-2 및 파라신에 비해 부포린-1이 효과적으로 SNARE 복합체 형성을 억제한다는 것을 확인하였다.
실시예 3.2. 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과 비교
부포린-1, 부포린-2 및 파라신의 효모 액포 및 신경성 SNARE 복합체를 이용한 막 융합 억제 효과를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, syb2 단백질을 포함하지만 pep4p 단백질과 prb1p 단백질이 결여된 BJ-syb2 액포(Saccharomyces cerevisiae strain BJ3505 유도체, 3 μg) 및 Stx1 단백질과 SNAP-25 단백질을 포함하지만 Pho8p 단백질이 결여된 DKY-Stx1/S25 액포(derivative of the DKY6281 strain, 3 μg)를 264 nM 정제 Pbi2p(IB2), 10 μM CoA, 1 mM ATP, 1 mg/mL 크레아틴 키나아제, 29 mM 크레아틴 포스페이트를 포함하는 반응 버퍼(125 mM KCl, 5 mM MgCl2, 10mM Pipes-KOH(pH 6.8) 및 200 mM 솔비톨에서 신경성 SNARE-매개 액포융합 반응(30 ㎕)을 진행하였다. 27℃ 온도에서 90분 동안 반응시킨 후, 알칼린 포스페이트 활성을 측정하여 효모의 액포의 융합을 확인하였다. 융합된 효모 액포는 생성된 p-니트로페닐레이트 농도(μM)/분/pep4p-보유 액포의 질량으로 계산하였다. 그 결과, 부포린-1이 농도 의존적으로 SNARE-매개 막 융합을 억제시킨다는 것을 확인하였다(도 8 및 도 9).
실시예 4. PC-12 세포 및 HEK-293 세포상에서의 부포린-1, Stx1 및 SNAP-25와 분포 비교
면역형광법 및 공초점 현미경을 통해 신경세포 모델로 사용되는 마우스 유래 PC-12 세포와 인간 유래 HEK-293 세포에서의 부포린-1을 처리한 후, 이의 분포를 비교하였다.
먼저, 2×105 세포수의 PC-12 세포 또는 HEK-293 세포를 10 mm 지름의 유리 커버슬립에서 24시간 동안 배양시킨 후, 20 μM 농도의 FITC가 표지된-부포린-1을 처리하고 2시간 동안 반응시켰다. 그 후, PC-12 세포 또는 HEK-293 세포를 4% 파라포름알데히드로 10분 동안 고정시키고, 0.1% 트리톤 X-100가 포함된 PBS에서 10분 동안 배양하였다. 그 후, PC-12 세포 또는 HEK-293 세포를 5% BSA를 포함하는 PBS에서 1시간 동안 배양하였다. PC-12 세포를 항-SNAP-25(sc-376713) 항체 및 항-Stx1 항체(sc-12736)를 처리하고 1시간 동안 반응시킨 후, Alexa Fluor 594가 표지된 2차 항체(Invitrogen)와 1시간 동안 반응시켰다. 그 후, 4℃ 온도의 PBS로 PC-12 세포 또는 HEK-293 세포를 3회 세척하였다. 형광염색은 100x/NA 1.40 유액대물렌즈(oil-immersion objective lens(Uplan-SApochromat))가 장착된 공초점 현미경으로 관측하였고, Olympus Fluoview 프로그램을 이용하여 분석하였다.
그 결과, 부포린-1이 PC-12 세포에서 원형질막 주위에 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질과 같은 위치에 분포되는 반면, Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질이 결여된 HEK-293 세포에서는 부포린-1이 관찰되지 않았다(도 10 및 도 11). 이를 통해, 부포린-1이 in vitro 상에서 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질과 결합하는 것을 확인하였다.
실시예 5. 부포린-1의 CgA-EAP 방출 억제 효과 확인
부포린-1의 CgA-EAP 방출 억제 효과를 확인하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저, PC-12 세포를 pCMV-CgA-EAP 플라스미드(Thermo fisher scientific)를 이용해 형질전환시켰다. 16시간 후, 배지를 DMEM 배지로 교체하고 4시간 더 배양하였다. 그 후, KREB-HEPES 버퍼에 용해된 부포린-1을 PC-12 세포에 처리하여 90분 동안 반응시킨 후, 자극 버퍼(10 mM HEPES(pH 7.4), 150 mM NaCl, 5 mM KCl 및 2mM BaCl2)를 처리하고 15분 동안 반응시켰다.
그 후, 배양액을 회수하여 4℃ 온도에서 1,700×g 조건으로 3분 동안 원심분리하여 상층액을 확보하였다. 붙어 있는 세포 펠릿을 0.1% 트리톤 X-100을 이용하여 재부유 시킨 후, 동결/융해(freeze/thaw)를 3회 실시하여 세포를 용해시키고, 4℃ 온도에서 12,000×g로 5분 동안 원심분리하였다. 포스페이트 활성을 Phospha-Light chemiluminescence assay kit(Applied Biosystems)를 이용하여 확인하였다. 방출된 CgA-EAP 양을 Centro XS3 LB 960을 이용하여 배양액과 세포에서 측정된 휘도(luminance)에 대한 배양액에서의 휘도의 상대적인 값을 계산하여 도출하였다.
그 결과, 부포린-1을 처리한 경우, CgA-EAP의 방출이 억제되는 것을 확인하였다. 이를 통해, 부포린-1에 의해 신경전달물질의 방출을 억제할 수 있다는 것을 확인하였다(도 12).
실시예 6. 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드(인간 히스톤 H2A의 아미노산 1-39) 비교
실시예 6.1. PC-12 세포 및 HEK-293 세포상에서 분포 비교
실시예 5와 동일한 방법으로, 한국세포주은행(Seoul,Korea)에서 입수한 마우스 유래 PC-12 세포 및 인간 유래 HEK-293 세포에서의 부포린-1 유사 인간 펩타이드(서열번호 115)를 처리한 후, 이의 분포를 비교하였다.
그 결과, 부포린-1 유사 인간 펩타이드가 PC-12 세포에서 원형질막 주위에 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질과 같은 위치에 분포되는 반면, Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질이 결여된 HEK-293 세포에서는 H2A가 관찰되지 않았다(도 13). 이를 통해, 부포린-1과 유사하게 부포린-1 유사 인간 펩타이드도 in vitro 상에서 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질과 결합하는 것을 확인하였다.
실시예 6.2. SNARE 단백질과의 결합 여부 확인
실시예 1에서 균질화시킨 마우스의 뇌 조직에 부포린-1 유사 인간 펩타이드(서열번호 115)를 처리한 후, 항-히스톤 H2A 항체를 이용하여 공동면역침전(Co-immunoprecipitation)시켜 부포린-1 유사 인간 펩타이드와 결합하는 SNARE 단백질을 확인하였다.
구체적으로, 또한, C57/BL6 수컷 마우스(12주령)의 뇌 조직을 적출하여 150 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1% 트리톤 X-100, 단백질 분해효소 억제제 칵테일(Roche)을 포함하는 20 mM Tris(pH 7.8) 버퍼에서 균질화시킨 후, 4℃ 온도 및 13,000×g 조건에서 30분 동안 원심분리하였다. 상층액을 회수한 후, 200 ㎍의 부포린-1 유사 인간 펩타이드를 처리한 후, G-아가로스 단백질과 접합된 항-히스톤 H2A 항체(ab18975, Abcam)를 더 첨가하여 4℃ 온도에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 이때, 대조군으로서 뇌 조직 균질액을 래빗 혈청과 반응시켰다. 비드를 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1% 트리톤 X-100, 단백질 분해효소 억제제가 함유된 버퍼로 3회 세척하였다. 항체와 결합한 단백질을 1x SDS 샘플 버퍼와 10분 동안 가열하여 수득하였다. 그 후, SDS-PAGE 및 웨스턴 블랏을 통해 단백질을 분리하고 분석하였다.
그 결과, Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질은 부포린-1 유사 인간 펩타이드와 결합하는 반면, syb2와는 결합하지 않는 것을 확인하였다(도 14). 이를 통해, 부포린-1 유사 인간 펩타이드 및/또는 이의 유도체가 syb2 대신에 신경성 t-SNARE 단백질과 상호작용 하는 것을 확인하였다.
실시예 6.3. 신경성 SNARE 복합체 형성 및 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과 비교
실시예 3 및 4와 동일한 방법으로, 부포린-1 및 부포린-1 유사 인간 펩타이드(히스톤 H2A의 아미노산 1-39)의 SNARE 복합체 형성 억제 효과 및 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과를 비교하였다.
그 결과, 부포린-1 유사 인간 펩타이드가 효과적으로 신경성 SNARE 복합체 형성을 억제시키고, 신경성 SNARE-매개 막 융합을 억제시킨다는 것을 확인하였다. 이를 통해, 부포린-1 유사 인간 펩타이드가 부포린-1과 유사하게 신경성 SNARE 복합체 형성 억제 효과 및 신경성 SNARE-매개 막 융합 억제 효과 나타내는 것을 확인하였다(도 15 및 도 16).
제조예 2. 부포린 유도체 제작
하기 표 2에 기재된 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3 및 부포린-1-4의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 각각 pHis-parallel 벡터(Addgene)에 삽입시켰다. 이후, 제조예 1과 동일한 방법으로 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3 및 부포린-1-4을 분리하였다.
분리한 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3 및 부포린-1-4들을 각각 아미콘(Amicon) 울트라 원심분리 필터(Millipore)를 이용해 150 mM NaCl 및 0.5% n-옥틸-d-글루코피라노시드를 포함하는 20 mM Tris-HCl 버퍼로 교체하였다. SDS-PAGE 및 쿠마시블루 염색(Coomassie Brilliant Blue staining)을 이용해 각각의 SNARE 단백질들의 순도가 90% 이상임을 확인하였다.
실시예 7. 부포린 유도체의 신경성 SNARE 복합체 형성 억제 효과 비교
상기 제조예 2에서 제조한 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3 및 부포린-1-4의 신경성 SNARE 복합체 형성 저해 효과를 확인하기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
제조예 1에서 제조한 Stx1 단백질 및 SNAP-25 단백질을 각각 3 μM로 처리한 후, 파라신, 부포린-1, 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3, 부포린-1-4 및 부포린-2를 각각 처리한 후, 2시간 동안 4℃ 온도에서 반응시킨 후, 3 μM 농도의 syb2를 첨가하고 4℃ 온도에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 그 후, SDS-PAGE 샘플 버퍼를 이용하여 반응을 종료시켰다. SNARE 복합체의 형성은 SDS-PAGE 및 쿠마시블루 염색을 이용하여 확인하였다. SNARE 복합체의 분자량인 75 kDa의 밴드를 농도계(GS-900, Bio-Rad)를 이용하여 정량하였다.
그 결과, 파라신을 제외한 부포린-1, 부포린-1-1, 부포린-1-2, 부포린-1-3, 부포린-1-4 및 부포린-2에서 SNARE 복합체의 형성이 억제되는 것을 확인하였다(도 17).
통계학적 분석
모든 수치는 평균값±표준편차로 표기하였다. 두 집단간 비교는 Sigma plot의 양방 독립표본 스튜던트 t-검정(two-tailed unpaired student's t-test)을 통해 분석하였다. 통계학적 유의미성은 별표로 표시하였다(*p<0.05, **p<0.01 및 ***p<0.005).
<110> ANYGEN CO., LTD.
Gwangju Institute of Science and Technology
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Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys
35
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Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys
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20 25 30
Lys
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Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
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20 25
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1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys
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<223> Synthetic Buforin
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Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25
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<223> Synthetic Buforin
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Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25
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<220>
<223> Synthetic Buforin
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1 5 10 15
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Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
1 5 10 15
Val His Arg Leu Leu Arg Lys
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Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
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His Arg Leu Leu Arg Lys
20
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Buforin
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Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
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<210> 20
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<223> Synthetic Buforin
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Xaa Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr
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Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly
35
<210> 21
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
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Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys Gly
35
<210> 22
<211> 35
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Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser
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Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys Gly
35
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<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 23
Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser
1 5 10 15
Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg
20 25 30
Lys Gly
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<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Buforin
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Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25 30
Gly
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
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Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
<210> 26
<211> 31
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<223> Synthetic Buforin
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Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 27
Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
<210> 28
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Buforin
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Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln
1 5 10 15
Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 29
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 29
Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe
1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 30
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
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Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 31
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
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Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val
1 5 10 15
Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 32
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
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Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly
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Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 33
Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
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Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 34
Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
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20
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Buforin
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Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
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<220>
<223> Synthetic Buforin
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20 25 30
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35
<210> 37
<211> 37
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<220>
<223> Synthetic Buforin
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Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg
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Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys Gly Asn
35
<210> 38
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 38
Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser
1 5 10 15
Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys Gly Asn
35
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<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 39
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1 5 10 15
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20 25 30
Lys Gly Asn
35
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<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 40
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly Asn
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 41
Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
Asn
<210> 42
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 42
Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
<210> 43
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 43
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1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 44
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1 5 10 15
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20 25 30
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 45
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1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 46
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic Buforin
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1 5 10 15
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<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic Buforin
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1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 49
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1 5 10 15
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 59
Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 60
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 60
Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln
1 5 10 15
Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 61
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 61
Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe
1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 62
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 62
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 63
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 63
Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val
1 5 10 15
Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 64
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 64
Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly
1 5 10 15
Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 65
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 65
Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
1 5 10 15
Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 66
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 66
Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
1 5 10 15
His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 67
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 67
Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20
<210> 68
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Core domain 2
<400> 68
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
1 5 10 15
Leu Leu Arg Lys
20
<210> 69
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> C-terminal Domain
<400> 69
Gly Asn Tyr
1
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<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 70
Xaa Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly
35
<210> 71
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 71
Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys Gly
35
<210> 72
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 72
Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser
1 5 10 15
Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys Gly
35
<210> 73
<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 73
Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser
1 5 10 15
Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg
20 25 30
Lys Gly
<210> 74
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 74
Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25 30
Gly
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 75
Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
<210> 76
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 76
Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
<210> 77
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 77
Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
<210> 78
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 78
Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln
1 5 10 15
Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 79
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 79
Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe
1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 80
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 80
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 81
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 81
Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val
1 5 10 15
Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 82
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 82
Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly
1 5 10 15
Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25
<210> 83
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 83
Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
1 5 10 15
Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20
<210> 84
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 84
Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
1 5 10 15
His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20
<210> 85
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 85
Xaa Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly Asn
35
<210> 86
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 86
Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys Gly Asn
35
<210> 87
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 87
Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser
1 5 10 15
Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys Gly Asn
35
<210> 88
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 88
Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser
1 5 10 15
Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg
20 25 30
Lys Gly Asn
35
<210> 89
<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 89
Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25 30
Gly Asn
<210> 90
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 90
Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
Asn
<210> 91
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 91
Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
<210> 92
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 92
Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
<210> 93
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 93
Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln
1 5 10 15
Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
<210> 94
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 94
Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe
1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25
<210> 95
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 95
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25
<210> 96
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 96
Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val
1 5 10 15
Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25
<210> 97
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 97
Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly
1 5 10 15
Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25
<210> 98
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 98
Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
1 5 10 15
Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25
<210> 99
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 99
Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
1 5 10 15
His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20
<210> 100
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 100
Xaa Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 101
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 101
Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg
1 5 10 15
Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu
20 25 30
Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 102
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 102
Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser
1 5 10 15
Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu
20 25 30
Arg Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 103
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 103
Gly Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser
1 5 10 15
Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg
20 25 30
Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 104
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 104
Lys Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys
20 25 30
Gly Asn Tyr
35
<210> 105
<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 105
Gln Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
Asn Tyr
<210> 106
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 106
Gly Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly
1 5 10 15
Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn
20 25 30
Tyr
<210> 107
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 107
Gly Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 108
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 108
Lys Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln
1 5 10 15
Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 109
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 109
Xaa Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe
1 5 10 15
Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25 30
<210> 110
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 110
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 111
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 111
Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val
1 5 10 15
Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 112
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 112
Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly
1 5 10 15
Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 113
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 113
Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg
1 5 10 15
Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 114
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin
<400> 114
Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val
1 5 10 15
His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 115
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N-terminal of human histone H2A(1-39)
<400> 115
Ser Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Ala Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 116
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> buforin-1
<400> 116
Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
35
<210> 117
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> buforin-2
<400> 117
Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg Lys
20
<210> 118
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> parasin
<400> 118
Lys Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg
20
<210> 119
<211> 34
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin 1-1
<400> 119
Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala
1 5 10 15
Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly
20 25 30
Asn Tyr
<210> 120
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin 1-2
<400> 120
Arg Ala Lys Ala Lys Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro
1 5 10 15
Val Gly Arg Val His Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20 25
<210> 121
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin 1-3
<400> 121
Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His
1 5 10 15
Arg Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr
20
<210> 122
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Buforin 1-4
<400> 122
Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr
1 5 10 15
Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg
20 25 30
Leu Leu Arg Lys Gly
35
<210> 123
<211> 265
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Stx1(1-265)
<400> 123
Met Lys Asp Arg Thr Gln Glu Leu Arg Thr Ala Lys Asp Ser Asp Asp
1 5 10 15
Asp Asp Asp Val Ala Val Thr Val Asp Arg Asp Arg Phe Met Asp Glu
20 25 30
Phe Phe Glu Gln Val Glu Glu Ile Arg Gly Phe Ile Asp Lys Ile Ala
35 40 45
Glu Asn Val Glu Glu Val Lys Arg Lys His Ser Ala Ile Leu Ala Ser
50 55 60
Pro Asn Pro Asp Glu Lys Thr Lys Glu Glu Leu Glu Glu Leu Met Ser
65 70 75 80
Asp Ile Lys Lys Thr Ala Asn Lys Val Arg Ser Lys Leu Lys Ser Ile
85 90 95
Glu Gln Ser Ile Glu Gln Glu Glu Gly Leu Asn Arg Ser Ser Ala Asp
100 105 110
Leu Arg Ile Arg Lys Thr Gln His Ser Thr Leu Ser Arg Lys Phe Val
115 120 125
Glu Val Met Ser Glu Tyr Asn Ala Thr Gln Ser Asp Tyr Arg Glu Arg
130 135 140
Cys Lys Gly Arg Ile Gln Arg Gln Leu Glu Ile Thr Gly Arg Thr Thr
145 150 155 160
Thr Ser Glu Glu Leu Glu Asp Met Leu Glu Ser Gly Asn Pro Ala Ile
165 170 175
Phe Ala Ser Gly Ile Ile Met Asp Ser Ser Ile Ser Lys Gln Ala Leu
180 185 190
Ser Glu Ile Glu Thr Arg His Ser Glu Ile Ile Lys Leu Glu Asn Ser
195 200 205
Ile Arg Glu Leu His Asp Met Phe Met Asp Met Ala Met Leu Val Glu
210 215 220
Ser Gln Gly Glu Met Ile Asp Arg Ile Glu Tyr Asn Val Glu His Ala
225 230 235 240
Val Asp Tyr Val Glu Arg Ala Val Ser Asp Thr Lys Lys Ala Val Lys
245 250 255
Tyr Gln Ser Lys Ala Arg Arg Lys Lys
260 265
<210> 124
<211> 206
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SNAP-25(1-206)
<400> 124
Met Ala Glu Asp Ala Asp Met Arg Asn Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg
1 5 10 15
Arg Ala Asp Gln Leu Ala Asp Glu Ser Leu Glu Ser Thr Arg Arg Met
20 25 30
Leu Gln Leu Val Glu Glu Ser Lys Asp Ala Gly Ile Arg Thr Leu Val
35 40 45
Met Leu Asp Glu Gln Gly Glu Gln Leu Glu Arg Ile Glu Glu Gly Met
50 55 60
Asp Gln Ile Asn Lys Asp Met Lys Glu Ala Glu Lys Asn Leu Thr Asp
65 70 75 80
Leu Gly Lys Phe Cys Gly Leu Cys Val Cys Pro Cys Asn Lys Leu Lys
85 90 95
Ser Ser Asp Ala Tyr Lys Lys Ala Trp Gly Asn Asn Gln Asp Gly Val
100 105 110
Val Ala Ser Gln Pro Ala Arg Val Val Asp Glu Arg Glu Gln Met Ala
115 120 125
Ile Ser Gly Gly Phe Ile Arg Arg Val Thr Asn Asp Ala Arg Glu Asn
130 135 140
Glu Met Asp Glu Asn Leu Glu Gln Val Ser Gly Ile Ile Gly Asn Leu
145 150 155 160
Arg His Met Ala Leu Asp Met Gly Asn Glu Ile Asp Thr Gln Asn Arg
165 170 175
Gln Ile Asp Arg Ile Met Glu Lys Ala Asp Ser Asn Lys Thr Arg Ile
180 185 190
Asp Glu Ala Asn Gln Arg Ala Thr Lys Met Leu Gly Ser Gly
195 200 205
<210> 125
<211> 96
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> syb2(1-96)
<400> 125
Met Ser Ala Thr Ala Ala Thr Ala Pro Pro Ala Ala Pro Ala Gly Glu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Pro Ala Pro Pro Pro Asn Leu Thr Ser Asn Arg Arg Leu
20 25 30
Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val Asp Ile Met Arg Val
35 40 45
Asn Val Asp Lys Val Leu Glu Arg Asp Gln Lys Leu Ser Glu Leu Asp
50 55 60
Asp Arg Ala Asp Ala Leu Gln Ala Gly Ala Ser Gln Phe Glu Thr Ser
65 70 75 80
Ala Ala Lys Leu Lys Arg Lys Tyr Trp Trp Lys Asn Leu Lys Met Met
85 90 95
Claims (13)
- 하기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물:
N-말단 확장 도메인 - 제1 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (I)
상기 식 (I)에서,
제1 코어 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이고;
N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 5개, 10개 또는 15개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드이며;
C-말단 확장 도메인은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 3의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 2개 또는 3개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드이며,
상기 부포린 유도체가 서열번호 9, 15, 19, 25, 31, 35, 57, 63, 67, 116 및 119 내지 122 중 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것이고,
상기 신경질환은 사시, 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 다한증, 모공확장증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 피부통증, 근육통, 허리통증, 만성두통, 측두하악관절 통증 장애, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증, 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 뇌신경장애, 위산역류질환, 성대 기능 장애, 알러지성 질환, 자가면역성 질환, 만성신경병증, 안면근육비대증 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 하기 식 (I)로 표시되는 부포린 유도체를 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물:
N-말단 확장 도메인 - 제1 코어 도메인 - C-말단 확장 도메인 (I)
상기 식 (I)에서,
제1 코어 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이고;
N-말단 확장 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는 서열번호 2의 1번 위치의 아미노산부터 시작하여 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 5개, 10개 또는 15개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드이며;
C-말단 확장 도메인은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이거나, 또는서열번호 3의 4번 위치의 아미노산부터 시작하여 C-말단으로부터 N-말단 방향으로 2개 또는 3개의 아미노산이 연속적으로 결실된 폴리펩타이드이며,
상기 부포린 유도체가 서열번호 9, 15, 19, 25, 31, 35, 57, 63, 67, 116 및 119 내지 122 중 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것인, 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
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-
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- 2019-10-25 CN CN201911026170.6A patent/CN111100195B/zh active Active
- 2019-10-25 KR KR1020190133798A patent/KR102336515B1/ko active IP Right Grant
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