KR102320503B1 - 대상체에서 암 위험을 동정하는 조성물 및 방법 - Google Patents

대상체에서 암 위험을 동정하는 조성물 및 방법 Download PDF

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Abstract

본원에서 대상체로부터의 채액 샘플 및 예컨대 solCD44 및 총 단백질과 같은 마커에 대한 검정을 사용한, 대상체에서 암, 예컨대 두경부 편평상피 세포 암종의 위험을 측정하는 조성물 및 방법이 개시된다. 상기 위험을 기반으로 하여 대상체를 치료하는 방법 또한 본원에 제공된다. 암 치료의 효능을 측정하는 방법이 또한 개시된다.

Description

대상체에서 암 위험을 동정하는 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR IDENTIFYING A RISK OF CANCER IN A SUBJECT}
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 미국 가출원 번호 61/860,669 (2013년 7월 31일 출원), 미국 가출원 번호 62/009,175 (2014년 6월 7일 출원), 및 미국 가출원 번호 62/021,998 (2014년 7월 8일 출원)을 우선권으로 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
정부 지원에 대한 진술
본 발명은 국립보건원에 의해 수여된 수여 번호 R01CA118584과 RO3 CA107828 하에 정부 지원을 받아 만들어졌다. 정부는 본 발명에 일정한 권리를 갖는다. 본 발명은 또한 플로리다 보건원에 의해 부여된 뱅크헤드-콜리(Bankhead-Coley) 수여 번호 10BG02 하에서 정부 지원으로 만들어졌다. 정부는 본 발명에 일정한 권리를 갖는다.
두경부 편평상피 세포 암종 (HNSCC)은 심신약화 및 치사의 질병으로, 백인에 비하여 흑인에서 2배의 치사율 분포를 나타낸다. 이는 여성보다 남성에서 더욱 흔하다 (Cancer Facts and Figures-2013. Atlanta: American Cancer Society, 2013). HNSCC는 상부 호흡소화관 (UADT)을 포함한 암의 거의 90%를 차지한다 (Muir et al. Upper aerodigestive tract cancers. Cancer Suppl (1995) 75:147-53). 매년 상기 질병은 미국 내 5만명, 전세계 60만명의 사람들에게 영향을 미친다. 생존율은 불량하며, 이는 대부분의 환자들이 치료율이 30%밖에 되지 않는 말기 단계에 있기 때문이다 (Vokes, et al. Head and neck cancer. N Engl J Med (1993) 328:184-94). 상기 질병은 조기 발견시 80-90% 치유될 수 있다 (Markopoulos, et al. Salivary Markers for Oral Cancer Detection. Open Dent J. (2010) 4:172-178).
현재 HNSCC 바이오마커의 다수는 "체학(omics)" 접근을 사용하여, 사례-접근 연구 설계를 사용한 잠재적 마커의 대형 풀로부터의 몇몇 후보 마커를 동정한다 (Shankar, et al. Trends in salivary diagnostics - a 5-year review of oral oncology 2007-2011. Oral Oncol (2012) 48:e22-3; Li, et al. Salivary transcriptome diagnostics for oral cancer detection. Clin Cancer Res (2004) 10:8442-8450; Park, et al. Salivary microRNA: discovery, characterization, and clinical utility for oral cancer detection, Clin Cancer Res (2009) 15:5473-5477; Hu, et al. Clin Cancer Res (2008) 14:6246-6252; Carvalho, et al. Evaluation of promoter hypermethylation detection in body fluids as a screening/diagnosis tool for head and neck squamous cell carcinoma. Clin Cancer Res (2008) 14:97-107; Elashoff, et al. Prevalidation of salivary biomarkers for oral cancer detection. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2012) 21(4):664-72). 추가적인 시험에서, 마커는 또한 일반적으로 수행에 실패한다. 예를 들어, 메틸화 마커의 패널은 35-85%의 민감성 및 30-90%의 특이성을 산출하였으며, (Carvalho, et al. Evaluation of promoter hypermethylation detection in body fluids as a screening/diagnosis tool for head and neck squamous cell carcinoma. Clin Cancer Res (2008) 14:97-107), 한편 mRNA 마커 패널은 45-79%의 민감성 및 72-77%의 특이성를 산출하였다. (Elashoff D, et al. Prevalidation of salivary biomarkers for oral cancer detection. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2012) 21(4):664-72).
HNSCC 발병에 대한 대부분의 중요한 소인 인자는 담배, 알코올, 및 보통 HPV 유형 16을 갖는 인간 유두종 바이러스 (HPV) 감염이다 (Muscat, et al. Tobacco, alcohol, asbestos, and occupational risk factors for laryngeal cancer. Cancer (1992) 69:2244-51; Blot, et al. Smoking and drinking in relation to oral and pharyngeal cancer. Cancer Res (1988) 48:3282-7; Burch, et al. Tobacco, alcohol, asbestos, and nickel in the etiology of cancer of the larynx: a case-control study. J Natl Cancer Inst (1981) 67:1219-24; Johnson N. Tobacco use and oral cancer: a global perspect. J Dental Edu (2001) 65:328-339; Balaram P, et al. Oral cancer in southern India: the influence of smoking, drinking, paan-chewing and oral hygiene. Int J Cancer (2002) 98:440-45; Lewin F, et al. Smoking tobacco, oral snuff and alcohol in the etiology of squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer (1998) 82:1367-75; Mashberg A, et al. Tobacco smoking, alcohol drinking, and cancer of the oral cavity and oropharynx among U.S. veterans. Cancer (1993) 72:1369-75; Talamini R, et al. Cancer of the oral cavity andpharynx in nonsmokers who drink alcohol and in nondrinkers who smoke tobacco. J Natl Cancer Inst (1998) 90:1901-3; Lin BM, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer. (2013); D'Souza G, et al. Case-control study of human papillomavirus and oropharyngeal cancer. N Engl J Med (2007) 356:1944-56; Gao J, et al. Basic consideration of research strategies for head and neck cancer. Front Med 2012;6:339-53). 담배는 두경부암에 대한 강한 위험 인자이고, 알코올 사용과 함께 상승작용하여 위험을 높인다 (Muscat, et al. Tobacco, alcohol, asbestos, and occupational risk factors for laryngeal cancer. Cancer (1992) 69:2244-51; Blot, et al. Smoking and drinking in relation to oral and pharyngeal cancer. Cancer Res (1988) 48:3282-7; Burch, et al. Tobacco, alcohol, asbestos, and nickel in the etiology of cancer of the larynx: a case-control study. J Natl Cancer Inst (1981) 67:1219-24; Johnson. Tobacco use and oral cancer: a global perspect. J Dental Edu (2001) 65:328-339; Balaram, et al. Oral cancer in southern India: the influence of smoking, drinking, paan-chewing and oral hygiene. Int J Cancer (2002) 98:440-45; Lewin, et al. Smoking tobacco, oral snuff and alcohol in the etiology of squamous cell carcinoma of the head and neck. Cancer (1998) 82:1367-75; Mashberg, et al. Tobacco smoking, alcohol drinking, and cancer of the oral cavity and oropharynx among U.S. veterans. Cancer (1993) 72:1369-75; Talamini, et al. Cancer of the oral cavity andpharynx in nonsmokers who drink alcohol and in nondrinkers who smoke tobacco. J Natl Cancer Inst (1998) 90:1901-3; Lin, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer. 2013; Anantharaman, et al. Population attributable risk of tobacco and alcohol for upper aerodigestive tract cancer. Oral Oncology (2011) 47:725-31). HPV-연관된 HNSCC는 미국 내에서 그 사례가 증가하는 암 중 하나이다. 처음 HPV에 의하여 유도된 종양은 양호한 예후를 갖지만, 다수의 HPV 종양은 흡연 이력을 갖는 개체에서 발생한다 (Lin, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer. 2013; Ang, et al. Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer. N Engl J Med (2010) 363(1):24-35). 흡연자에서의 HPV 양성 종양은 보다 악화된 예후를 갖는다 (Lin, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer. 2013; Kumar, et al. EGFR, p16, HPV Titer, Bcl-xL and p53, sex, and smoking as indicators of response to therapy and survival in oropharyngeal cancer. J Clin Oncol (2008) 26:3128-37).
현재 스크리닝을 위한 "황금 표준(gold standard)"은 생검에 따른 물리적 검사이나, 민감성는 오직 64%이고, 특이성은 74%이다 (Brocklehurst, et al. Screening programmes for the early detection and prevention of oral cancer. Cochrane Database Syst Rev (2010) 11:CD004150). 구강암 검출을 돕는 다양한 기술이 존재하지만, 그것들이 스크리닝에 대해 육안보다 더 우수하다는 어떠한 증거도 없다. 본 분야에서 필요한 것은 암의 위험을 동정하거나, 암을 검출하거나, 암의 예후를 제공하거나, 또는 치료 동안 암 진행을 모니터링하는 방법이다. 본원에 개시된 요지는 이러한 요구, 그리고 다른 요구를 다룬다.
요약
대상체에서 암의 위험을 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 위험을, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용한 통계 분석에 의하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정한다. 상기 암은 HNSCC일 수 있으나, 또한 다른 유형의 암일 수 있다.
대상체에서 암 예후를 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 예후를, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 양호한 예후를 갖는 개체 및 불량한 예후를 갖는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 예후를 한정한다.
대상체에서 암 치료의 효과성을 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 효과성을, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 양호한 예후를 갖는 개체 및 불량한 예후를 갖는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 결과를 한정한다.
또한 염수 용액; 구강 염수 린스액을 수용하는 컵; CD44와 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체; 총 단백질 농도를 측정하는 시약; 및 solCD44 및 총 단백질에 대한 참조 수준을 포함하는 키트가 개시되며, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용한 다변량 분석 또는 로지스틱 회귀 산출에 의하여 측정될 수 있으며, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정한다.
추가적인 장점이 다음의 설명에서 부분적으로 제시될 것이고, 부분적으로는 설명으로부터 명백할 것이며, 또는, 하기 기술된 양태에 의하여 학습될 수 있다. 이점은 부가된 청구항들에서 특히 언급된 요소 및 조합에 의해 인식되고 달성될 것이다. 전술된 일반적인 설명 및 하기 상세한 설명은 단지 예시적이고 설명적인 것이고 제한적이지 않은 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 포함되고, 일부를 이루는 첨부 도면은, 설명과 함께, 본 발명의 여러 양태를 나타내고, 본 발명의 원리를 설명하는 역할을 한다.
도 1은 siRNA에 의하여 CD44를 표적화하는 것은 CAL 27 내의 종양 성장, EGFR 발현 및 인산화를 억제한다는 것을 나타낸다.
도 1a는 CAL 27 및 이의 CD44-siRNA 안정 감염체 (3C3)의 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 1b는 종양 부분 (20X)의 면역 염색을 나타낸다.
도 2a 및 2b는, 137개 임상-기반 사례 코호트내 무진행 생존 (PFS)이 높은 solCD44 수준을 갖는 환자 (>10 ng/mL) (도 2a) 및 단백질 수준 (>1 ng/mL) (도 2b)를 갖는 환자 내에서 더 낮다는 것을 나타낸다. 높은 solCD44 수준의 부정적 영향이 연구된 각각의 인종 민족 그룹, 흑인, 백인 히스패닉 (WH) 및 백인 비-히스패닉 (WNH)에서 나타난다 (도 2c).
도 3은 1년의 간격을 두고 행해지는 CD44 측정 차 분포를 나타낸다.
도 4a 및 4b는 solCD44 (도 4a) 및 단백질 수준 (도 4b) 측정 시 대조군 내에서 자궁경부 세포진검사(PAP smear) 결과를 나타낸다.
도 5a-f는 CD44 및 단백질 수준 컷포인트(cutpoint)를 기반하여 PFS (도 5a) 및 OS (도 5b)의 유의미한 차이를 나타내는 카플란-마이어 곡선을 나타낸다. 1년 간의 CD44 (도 5c) 및 단백질 (도 5e) 수준 차이는 정상 분포를 따른다. 선형 회귀 분석은, 1년간 감소하는 수준에 대한 경향이 CD44 (도 5d) 및 단백질 (도 5f) 둘 다에 대해 유의미하다는 것을 나타낸다.
본원에 개시된 조성물 및 방법은 개시된 요지의 특정 양태의 상세한 설명 및 그 안에 포함된 실시예 및 도면을 참고하여 더 용이하게 이해될 수 있다.
본 조성물, 및 방법이 개시되고 기술되기 전에, 하기에 기술된 양태는, 그것이 물론 가변적일 수 있기 때문에, 특정 합성 방법 또는 특정 시약에, 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 사용된 용어는 단지 특정한 양태를 설명하기 위한 것이지 제한하려고 의도되지 않음이 또한 이해되어야 한다.
또한, 본원을 통해, 다양한 명세서, 다양한 공보가 참조된다. 이러한 공보들의 개시 내용은 상기 개시된 요지를 유지시키는 본 기술의 상태를 더욱 충분히 기술하기 위하여 그 전체가 본원에 참고로 포함되어 있다. 개시된 참조는 또한 이러한 참조가 적용되는 문장에서 검토된, 이에 함유된 물질에 대해, 개별적으로 그리고 구체적으로 본원에 참조로 포함된다.
일반 정의
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 많은 용어들이 참조될 수 있으며, 이는 하기 의미를 갖는 것으로 정의된다:
본 명세서 및 특허청구의 범위를 통하여, 단어 "포함하다(comprise)" 및 상기 단어의 다른 형태, 예컨대 "포함하다(comprises)", 및 "포함하는(comprising)"은, 예를 들어 다른 첨가제, 성분, 정수, 또는 단계를 비제한적으로 포함하거나 배제하는 것으로 의도되지 않는 것을 의미한다.
명세서 및 첨부된 청구항에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥이 달리 명확히 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "조성물"에 대한 언급은 2개 이상의 상기 조성물의 혼합물을 포함하고, "제제"에 대한 언급은 2개 이상의 상기 제제의 혼합물을 의미하고, "성분"에 대한 언급은 2개 이상의 상기 성분 및 기타의 혼합물을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어들 "임의의" 또는 "임의로"는 차후에 기재된 사건 또는 상황이 일어날 수 있거나 일어나지 않을 수 있고, 설명은 상기 사건 또는 상황이 일어나는 경우와 일어나지 않는 경우를 포함함을 의미한다.
범위는 "약(about)" 하나의 특정 값으로부터, 및/또는 "약" 또 하나의 특정 값까지와 같이 본원에서 표현될 수 있다. "약"은 값의 5% 이내, 예를 들어, 4, 3, 2, 또는 1%인 것을 의미한다. 그와 같은 범위가 표현되는 경우, 또 하나의 예시는 하나의 특정 값에서부터 및/또는 다른 특정 값까지 포함한다. 유사하게, 값이 근사치로 표현되는 경우, 선행된 "약"의 사용에 의해, 특정 값이 추가 양태를 형성함이 이해될 것이다. 각각의 범위의 종료점이 다른 종료점과 관련하여, 그리고 다른 종료점과 독립적으로 모두 유의미함이 추가로 이해될 것이다.
본원에 사용되는 바와 같이, "대상체"는 개체를 의미한다. 따라서, "대상체"는 사육된 동물 (예를 들면, 고양이, 개, 등), 가축 (예를 들면, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 등), 실험실 동물 (예를 들면, 마우스, 토끼, 랫트, 기니아 피그 등), 및 조류를 포함할 수 있다. "대상체"는 포유동물, 예컨대, 영장류 또는 인간을 포함할 수 있다. 용어들 "대상체" 및 "환자"는 명세서 전체에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.
"마커" 또는 "바이오마커"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 예를 들어 대조군 대상체로부터 채득된 비교가능한 샘플 (예컨대 음성 진단을 갖는 개인, 정상 또는 건강한 대상체)와 비교하여, 암을 갖는 환자로부터 채득된 샘플에서 상이하게 존재하는, (특정 분명한 분자량, HA의 경우, 반복 이당류 단위로 구성된 분자의) 폴리펩티드를 나타낸다.
어구 "상이하게 존재하는"은 대조군 대상체와 비교하여, 예를 들어 암을 갖는 환자로부터 채득된 샘플에 존재하는 마커의 질 및/또는 빈도의 차이를 나타낸다. 예를 들어, 마커는, 대조군 대상체의 샘플과 비교하여, 두경부 편평상피 세포 암종 (HNSCC)를 갖는 환자의 샘플에서 상승된 수준 또는 감소된 수준으로 존재하는 폴리펩타이드일 수 있다. 대안적으로, 마커는 대조군 대상체의 샘플과 비교하여 환자의 샘플에서 더 높은 빈도 또는 더 낮은 빈도로 검출되는 폴리펩타이드일 수 있다. 마커는 양, 빈도 또는 둘 다의 관점에서 차별적으로 존재할 수 있다.
마커, 화합물, 조성물, 또는 물질은, 하나의 샘플 내 상기 마커, 화합물, 조성물, 또는 물질이 다른 샘플 내 마커, 화합물, 조성물, 또는 물질의 양과 통계적으로 확연히 다르다면, 2개 샘플 내에서 상이하게 존재한다. 예를 들어, 화합물은, 만약 그것이 다른 샘플에 존재하는 것보다 적어도 약 120%, 적어도 약 130%, 적어도 약 150%, 적어도 약 180%, 적어도 약 200%, 적어도 약 300%, 적어도 약 500%, 적어도 약 700%, 적어도 약 900% 또는 적어도 약 1000% 초과로 존재하거나, 그것이 하나의 샘플에서 검출 가능하고, 다른 샘플에서 검출가능하지 않다면, 2개 샘플에서 상이하게 존재한다.
대안적으로 또는 추가로, 마커, 화합물, 조성물, 또는 물질은, 환자의 샘플 내 폴리펩타이드 검출 빈도가 대조군에서에 비해 통계적으로 확연하게 높거나 낮다면, 2개 세트의 샘플 사이에서 상이하게 존재한다. 예를 들어, 바이오마커는, 만약 그것이 다른 샘플의 하나의 세트에 관찰된 것보다 적어도 약 120%, 적어도 약 130%, 적어도 약 150%, 적어도 약 180%, 적어도 약 200%, 적어도 약 300%, 적어도 약 500%, 적어도 약 700%, 적어도 약 900%, 또는 적어도 약 1000% 더 큰 빈도로, 또는 더 적은 빈도로 검출된다면, 2개 샘플에서 상이하게 존재한다. 이러한 예시적인 값은 그럼에도 불구하고, 당업자는 마커가 상이하게 존재하는지 여부를 측정하는 통계적으로 확연한 차이를 나타태는 컷-오프 포인트 등을 측정할 수 있는 것으로 예상된다.
"진단성"은 병리학적 병태의 존재 또는 속성을 동정하고, 암의 발병 위험이 있는 환자를 동정하는 것을 포함한다. 진단 방법은 이의 민감성 및 특이성에 있어 차이를 보인다. 진단성 검정의 "민감성"은 양성으로 시험검출된 개체의 병든 개체의 백분율 ("진양성(true positive)"의 퍼센트)이다. 검정에 의하여 검출되지 않은 감소된 개체는 "위음성(false negative)"이다. 검정에서 감소되지 않고 음성을 시험된 대상체는 "진음성(true negative)"이다. 진단성 검정의 "특이성"는 양성으로 시험검출된 병든 개체를 배제한 비율로서 정의되는 "위양성" 비율에 1을 뺀 것이다. 특정 진단 방법이 병태의 확정적 진단을 제공할 수는 없지만, 이는 상기 방법이 진단에 도움이 되는 양성 지표를 제공한다면 충분하다.
용어 "검출", "검출하는" 등은 바이오마커 검출, 또는 HNSCC와 같은 암을 검출하는 맥락에서 사용될 수 있다 (예컨대, 양성 검정 결과가 수득될 때). 후자의 맥락에서, "검출하는" 및 "진단하는"은 동의어로 고려된다.
마커의 "시험량"은 시험된 샘플 내에 존재하는 마커의 양을 나타낸다. 시험량은 절대값 (예컨대, ng/mL) 또는 상대값 (예컨대, 신호의 상대 강도)일 수 있다.
마커의 "진단량"은 암 또는 종양 부하의 상대량(예컨대, 신호의 상대 강도)의 진단과 일치하는 대상체의 샘플 내 마커의 양을 나타낸다.
마커의 "대조군 양"은 마커의 시험량과 비교되는 임의의 양 또는 일정 범위의 양일 수 있다. 예를 들어, 마커의 대조군 양은 암이 없는 개인 내의 마커의 양일 수 있다. 대조군 양은 절대량 또는 상대량일 수 있다 (예컨대, 신호의 상대적 강도).
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 본원에서 아미노산 잔기, 특히 자연발생 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 아미노산의 유사체 또는 모방체인 아미노산 중합체, 및 천연 아미노산 중합체에 적용된다. 폴리펩티드는, 예컨대 탄수화물 잔기의 첨가로 변형되어 당단백질을 형성할 수 있다. 용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 비-당단백질 뿐만아니라 당단백질을 포함한다.
"검출가능한 모이어티" 또는 "표지"는 분광적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적 또는 화학적 수단에 의하여 검출가능한 조성물을 나타낸다. 예를 들어, 유용한 표지는 32p, 35S, 형광 염료, 전자-밀집 시약, 효소 (예컨대, ELISA에 통상적으로 사용되는 바와 같이), 비오틴-스트렙타비딘, 디옥시제닌, 합텐 및 항혈청 또는 모노클로날 항체가 사용가능한 단백질, 또는 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자를 포함한다. 검출가능한 모이어티는 종종 측정가능한 신호, 예컨대 방사성, 발색, 또는 형광성 신호를 생성하며, 이는 샘플 내 결합된 검출가능한 모이어티의 양을 정량화하기 위하여 사용될 수 있다. 신호의 정량화는 예컨대, 섬광 계수, 밀도측정, 또는 유세포측정에 의하여 달성될 수 있다.
“항체”는 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자들에 의해 실질적으로 암호화된 폴리펩티드 리간드, 또는 이의 단편을 지칭하고, 이것은 에피토프 (예컨대 항원)에 특이적으로 결합하고 이를 인식한다. 인식된 면역글로불린 유전자는 알파, 감마, 델타, 엡실론과 뮤(mu) 불변 영역 유전자 및 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 항체는, 예컨대 온전한 면역글로불린으로서, 또는 다양한 펩티다아제와 함께 소화에 의하여 생성된 다수의 잘 특징화된 단편으로서 존재한다. 이는 예컨대 Fab' 및 F(ab)'2 단편을 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "항체"는 전체 항체의 변형에 의하여 생성되거나 재조합 DNA 방법을 사용하여 신규로 합성된 항체 단편을 또한 포함한다. 이는 또한 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체 또는 단일쇄 항체를 또한 포함한다. 항체의 "Fc" 영역은 하나 이상의 중쇄 불변 영역 도메인을 포함하지만 중쇄 가변 영역을 포함하지 않는 면역글로불린 중쇄의 부분을 나타낸다.
"결합 검정(binding assay)"은 생화학 검정을 의미하며, 여기서 바이오마커는 검출 과정이 행해지는 제제, 예컨대 항체로의 결합에 의하여 검출된다. 검출 과정은 방사성 또는 형광 표지 등을 포함할 수 있다. 검정은 바이오마커의 고정화를 포함할 수 있거나, 용액 내 행해질 수 있다.
"면역검정"은 항원에 특이적으로 결합하는 항체 (예컨대 마커)를 사용하는 검정이다. 면역검정은 항원을 단리, 표적화, 및/또는 정량화하기 위하여 특정 항체의 특이적인 결합 성질을 사용하는 것을 특징으로 한다.
어구 항체에 "특이적으로 (또는 선택적으로) 결합한다" 또는 단백질 또는 펩티드를 언급할 때 "특이적으로(또는 선택적으로) ~와 면역활성이다"는 단백질 및 다른 생물제제의 이종 집단 내의 단백질 존재를 측정하는 결합 반응을 나타낸다. 따라서, 지정된 면역검정 상태에서, 특이적 항체는, 기타 배경보다 적어도 2배로 특정 단백질에 결합하고, 샘플 내 존재하는 다른 단백질에는 실질적으로 유의미한 양으로 결합하지 않는다. 그러한 상태에서의 항체로의 특이적 결합은 특정 항체에 대한 이의 특이성을 위하여 선택된 항체를 필요로 할 수 있다. 다양한 면역검정 포맷이 특정 단백질과 특이적으로 면역활성인 항체를 선택하기 위하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 고형-상 ELISA 면역검정은 보통 단백질과 특이적으로 면역활성인 항체를 선택하기 위하여 사용된다 (참고: 예컨대 Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988), for a description of immunoassay formats and conditions that can be used to determine specific immunoreactivity).
본원에 사용된 바와 같이, "샘플"은 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드, 펩타이드, 항체 단편 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. "샘플"은 체액, 세포 제조의 용해성 분획, 또는 세포가 성장하는 배지; 염색체, 세포소기관, 또는 세포로부터 단리 또는 추출된 막; 용액내 또는 기질에 결합된 게놈 DNA, RNA, 또는 cDNA, 폴리펩티드, 또는 펩티드; 세포; 조직; 조직 지문, 지문, 타액, 혈액, 피부 또는 모발; 이의 단편 또는 유도체이거나, 이로부터 유래할 수 있다.
"위험에 처한(at risk of)"은 정상 대상체와 비교하여, 또는 대조군 그룹과 비교하여, 예컨대 환자 집단의 증가된 위험을 의미한다. 따라서, 암 발병 "위험에 처해있는" 대상체는 정상 대상체 또는 집단과 비교하여 상승된 위험에 처해있으며, 암 재발 "위험에 처해있는" 대상체는 모든 치료된 환자 중의 재발 위험과 비교하여 증가된 재발 위험을 갖는 것으로 고려될 수 있다.
"증가된 위험" 또는 "상승된 위험"은 가능성, 예컨대 대상체가 암 또는 이의 재발을 발병할 가능성의 통계적으로 유의미한 임의의 증가를 의미한다. 위험은 비교되는 대조군 그룹보다 바람직하게는 적어도 10%, 더 바람직하게는 적어도 20%, 및 더욱더 바람직하게는 적어도 50% 초과로 증가한다.
용어 "예후(prognosis)"는 질병 또는 질병 진행의 공산적 과정에 관한, 특히 질병의 차도, 질병의 재발, 종양의 재발, 전이 및 죽음의 공산(likelihood)에 관한 예측을 의미한다. "양호한 예후"는 암, 예컨대 두경부 편평상피 세포 암종으로 고통받는 환자가 무-질병(즉, 무-암(cancer-free))을 유지할 공산을 나타낸다. "불량한 예후"는 환자가 잠재적인 암 또는 종양의 악화 또는 재발, 전이, 또는 사망을 맞이할 공산을 나타낸다. "양호한 결과"를 갖는 것으로 분류되는 암 환자는 잠재적인 암 또는 종양이 없는 채로 유지한다. 반대로, "불량한 결과"를 갖는 암 환자는 질병 재발, 종양 재발, 전이 또는 사망을 경험한다. 특정 예시에서, 예후 및 결과를 평가하기 위한 시간계(time frame)은, 예를 들어, 1년 미만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 또는 그 이상의 년수이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 예후를 측정하는 관련 시간 또는 무질병 생존 시간은 종양의 수술적 제거 또는 종양 성장의 억제, 완화, 또는 억제로 시작된다. 따라서, 예를 들어, 특정 예시에서, "양호한 예후"는 두경부 편평상피 세포 암종 환자가 적어도 5년 이상, 특히, 적어도 10년의 기간 동안 잠재적인 암 또는 종양이 없이 유지될 것인 공산을 나타낸다. 추가의 예시에서, "불량한 예후"는 두경부 편평상피 세포 암종 환자가 5년 미만 내에, 더욱 특히 10년 미만 내에 질병 재발, 종양 재발, 전이, 또는 사망을 경험할 공산을 나타낸다. 상기 제공된 예후 및 결과를 측정하기 위한 시간계는 예시적이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
용어 "치료"는 질환, 병리적 상태 또는 장애를 치유, 개선, 안정화, 또는 예방하기 위한 의도를 갖는 환자의 의료 관리를 나타낸다. 이 용어는 활성 치료, 즉, 질환, 병리적 상태 또는 장애의 개선으로 특이적으로 지향되는 치료를 포함하고, 또한 원인 요법, 즉, 연관된 질환, 병리적 상태 또는 장애의 원인의 제거로 지향되는 치료를 포함한다. 또한, 이 용어는 일시적 치료, 즉, 질환, 병리적 상태 또는 장애의 치유보다는 증상의 완화를 위해 설계된 치료; 예방적 치료, 즉, 연관된 질환, 병리적 상태 또는 장애의 발달을 최소화하거나 부분적으로 또는 완전히 억제하는 것으로 지향되는 치료; 및 지지적 치료, 즉, 연관된 질환, 병리적 상태 또는 장애의 개선으로 지향되는 또 하나의 특이적 요법을 보충하도록 이용된 치료; 및 지지적 치료, 즉, 연관된 질환, 병리적 상태 또는 장애의 개선으로 지향되는 또 하나의 특이적 요법을 보충하도록 이용된 치료를 포함한다.
용어 "생활방식 상담(lifestyle counseling)" 또는 "위험 인자 관리 상담"은 환자의 생활방식에 관하여 상기 환자에게 수여되는 전문적인 상담을 나타낸다. 예를 들어, 환자는 중독, 예컨대 흡연, 음주 또는 악물 사용에 대한 상담을 받을 수 있으며, 또는 성 행위, 예컨대 저위험 성 행위, 콘동 사용 등에 관한 상담을 받을 수 있다 "생활방식 상담"은 또한 식단 변형 또는 스트레스 관리를 나타낼 수 있다. 생활방식 상담은 전문가에 의하여 수여되며, 하나 이상의 세션, 문헌, 전문 비디오 등을 포함할 수 있다.
어구 "~와 유사한"은, 대상체와 유사한 연령을 갖는 집단 내에서 상기 집단의 평균 연령이 상기 대상체의 10년, 예를 들어 5년 내인 것을 의미한다. 또한, 어구 "~와 유사한"은 상기 대상체의 인종과 유사한 인종을 갖는 집단 내 개체에서 상기 대상체가 집단 내 개체의 다수와 상동한 인종이거나, 양친 중 적어도 하나가 상동한 것을 의미한다. 어구 "~와 유사한"은, 대상체와 유사한 알코올 소비 경험, 흡연 사용 경험을 갖는 집단 내에서 상기 알코올 또는 흡연의 평균 년수가 상기 대상체의 10년내, 예를 들어 5년 내인 것을 의미한다.
방법
상부 호흡소화관 (UADT) 점막은 명백한 악성종양 발병 전에, 전-악성 단계 이형성증을 통하여 진행된다. 이러한 단계에서 병변을 동정하는 것은 바람직하며, 이는 이형성증이 가역적이고 (Pindborg, A follow up study of sixty one oral dysplastic precancerous lesions in Indian villagers. Oral Surg Oral Med Oral Pathol (1977) 43:383-90), 자발적으로 또는 흡연 중단으로 퇴행할 수 있기 때문이다 (Larsson, et al. Reversibility of snuff dippers' lesions in Swedish moist snuff users: a clinical and histologic follow-up study. Oral Pathol Med . (1991) 20(6):258-64; Grizzle, et al. The biology of incipiend, pre-invasive or intraepithelial neoplasia. Cancer Biomark (2010) 9:21-39). 불행하게도, 이형성증은 일정 기간만 가시적이며, 양성 염증으로도 보여지는 결과를 종종 모방한다. 종종 이형성증은 더 추가적인 진행으로 말기 진단에 이르게 될때까지 발생된 채로 남아있게 된다 (Poh, et al. Direct fluorescence visualization of clinically occult high-risk oral premalignant disease using a simple hand-held device. Head Neck (2007) 29(1):71-6).
CD44, 세포 표면 막관통 당단백질은 세포 증식, 세포 이주 및 세포 개시와 관련된다 (Screaton et al. Proc Natl Acad Sci USA (1992) 89:12160-4; Ponta et al. Nature Rev Mol Cell Biol (2003) 4:33-45; Perez et al. Oral Oncol 2012; Prince et al. Proc Natl Acad Sci USA (2007) 104:973) is overexpressed in premalignant lesions (Hirvikoski et al. Virchows Arch. (1999) 43437-44; Ioachim et al. Histol Histopathol (1999) 14:1113-8). 점막 변화가 정상에서 중증 이형성증으로 진행될 때, CD44 발현은 상피의 모든 층을 포함하는 기저층으로부터 진행된다 (Hirvikoski et al. Virchows Arch. (1999) 43437-44; Ioachim et al. Histol Histopathol (1999) 14:1113-8). 더욱이, CD44는 체액에서 검출 가능한 용해성 형태 (solCD44)로 단백질 분해효소에 의하여 방출된다 (Kajita et al. J. Cell Biol (2001) 153:893-904). 총 단백질은 또한 효과적인 종양 마커이다 (Franzmann et al. Head & neck (2012) 34:687-95; Pereira et al. Cancer Biomark (2011)10:241-9; Franzmann et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2007) 16:1348-55).
본원에서 제공된 것은 용해성 CD44 (solCD44) 면역검정 및 총 단백질 검정을 사용한 체액 셈플 내 마커를 측정하는 비침습성 진단 시험이다. solCD44 및 총 단백질 수준 둘 다, 불량한 예후와 연관된 대조군과 비교하여 HNSCC가 더 높고, 표준 구강 검사에 의하여 암이 가시화되기 전에 상승된다. 더욱이, 이는 다른 위치, 예컨대 폐 및 방광에서의 암 또한 검출될 수 있음을 보여주었다 (실시예 1).
시간에 따라 solCD44 및 총 단백질 수준을 모니터링하는 것은 임상의로 하여금 세부 전문의 검사, 분자 이미지화 및 생검을 필요로 하는 환자를 정밀 검출할 수 있도록 해준다. 질병의 흔적이 없는 상태로부터 확정된 전-악성종양 또는 암으로 진행된 환자의 데이터 (실시예 1)은 solCD44 및 단백질 수준이 정상을 초과하여 증가되고, 일부 경우에서, 이는 악성종양 또는 전-악성종양이 임상적으로 가시화되기 2년 초과의 기간 전부터 증가된다는 것을 보여준다. 이러한 소요 시간은 전-악성종양이 가역 상태에 있으므로 흡연 중단 개입(intervention)을 촉진할 수 있고 (Pindborg, et al. A follow-up study of sixty-one oral dysplastic precancerous lesions in Indian villagers. Oral Surg Oral Med Oral Pathol . (1977) 43:383-90) 흡연 중단으로 퇴행될 수 있다 (Larsson, et al. Reversibility of snuff dippers' lesion in Swedish moist snuff users: a clinical and histologic follow-up study. Oral Pathol Med (1991) 20(6):258-64).
대상체에서 암의 위험을 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 수준, 즉, solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 위험을, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정한다. 즉, solCD44 및 총 단백질의 참조 수준은 통계학적으로 유의미한 위험 중 역치로서 사용되어, 이러한 참조 수준을 초과하는 solCD44 및 총 단백질의 시험량이, 대상체의 solCD44 및 총 단백질의 시험 수준이 참조 수준 미만일 때와 상반되게 대상체가 암을 갖는 통계적으로 유의미한 위험 (예컨대 공산의 2배, 공산의 10배 등)을 나타내도록 한다.
대상체에서 암 예후를 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 예후를, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 양호한 예후를 갖는 개체 및 불량한 예후를 갖는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 예후를 한정한다. 여기서, solCD44 및 총 단백질의 참조 수준은 통계적으로 유의미한 예후 (양호 대 불량) 중 역치로서 사용되어, 이러한 참조 수준을 초과하는 solCD44 및 총 단백질의 시험량이, 대상체의 solCD44 및 총 단백질의 시험 수준이 참조 수준 미만일 때와 상반되게 대상체가 불량한 예후를 갖는 통계적으로 유의미한 위험 (예컨대 공산의 2배, 공산의 10배 등)을 나타내도록 한다.
대상체에서 암 치료의 효과성을 측정하는 방법으로서, 상기 대상체로부터의 체액 샘플을 제공하는 단계; 상기 샘플 내에서 solCD44의 시험량을 측정하는 단계; 상기 샘플 내에서 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계; solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계; 및 상기 대상체에서 상기 암의 효과성을, 상기 solCD44의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준의 초과 또는 미만인지 여부를 측정함으로써 측정하는 단계를 포함하는 방법이 또한 본원에 개시되고, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 양호한 예후를 갖는 개체 및 불량한 예후를 갖는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 결과를 한정한다. 여기서, solCD44 및 총 단백질의 참조 수준은 암에 대한 통계적으로 유의미한 결과 중 역치로서 사용되어, 이러한 참조 수준을 초과하는 solCD44 및 총 단백질의 시험량이, 대상체의 solCD44 및 총 단백질의 시험 수준이 참조 수준 미만일 때와 상반되게 대상체가 소정의 결과 (예컨대 차도)를 갖는 통계적으로 유의미한 결과 (예컨대 공산의 2배, 공산의 10배 등)을 나타내도록 한다.
본원에 기술된 방법은 암을 갖는 대상체에서 solCD44 및 총 단백질 수준과 연관된다. 특히, 본원에 개시된 방법은 대상체에서 암의 위험을 측정할 수 있다. 대상체는 "고 위험" 범주에 있을 수 있으며, 이는 암과 연관된 것으로 밝혀진 하나 이상의 위험 인자를 갖는 것을 의미한다. 이러한 "고위험" 범주는 비제한적으로, 대상체의 연령, 인종, 흡연 상태, 알코올 소비, 암 병력, 및/또는 인간 유두종바이러스 (HPV) 검정의 양성 결과를 포함한다. 이러한 위험 인자는 solCD44 및 총 단백질의 시험량과 함께 사용되어 대상체의 악성종양 또는 전-악성종양을 발병하는 공산을 측정할 수 있다. "전-악성종양(Pre-malignancy)"은 아직 악성종양은 아니나, 악성이 될 것인 조직으로 정의된다. 전-악성종양 성장의 예시는 결장의 폴립, 피부의 광선각화증, 자궁경부의 이형성증, 폐의 화생, 및 백반증 (구강 내 흰 부분들)을 포함한다. 일부 경우에서, 전-악성종양은 임의의 임상적 증상을 필연적으로 나타내지 않는다.
대상체는 전-악성종양 또는 악성종양인 것으로 진단되지 않았을 수 있고나, 본원에 개시된 검정 전에 검사를 받지 않았을 수 있다. 대상체는 악성종양 또는 전-악성종양의 임상적으로 가시적인 신호를 가지지 않을 수 있다.
solCD44 및 총 단백질의 수준이 역치 수준을 초과한 것으로 진단된 후에, 환자는 추가 분석 및 치료를 위하여 전문가에게 안내될 수 있다. 대상체는 이후 이전 값과의 스코어 비교에 기반하여, 수술, 방사선, 또는 화학요법, 또는 이의 조합에 노출될 수 있고, 여기서 상기 대상체는 수술, 방사선, 또는 화학요법, 또는 이의 조합에 이전에 노출되지 않았다. 대상체는 또한 위험 인자 관리 또는 생활방식 상담을 제공받을 수 있다. 예를 들어, 대상체는 흡연, 음주, 및 다른 위험 행동에 대해 상담받을 수 있다. 대상체는, 예를 들어, 흡연 중단 프로그램에 등록할 수 있다.
대상체는 또한 후속 관리 및 검정을 위하여 돌아오도록 요청받을 수 있다. 대상체는 solCD44 및 총 단백질 수준에 대해 매주, 매월, 6개월 마다, 매년, 또는 5년마다, 또는 그 사이에 임의의 양으로 재-시험될 수 있다. 이는 본원에 기술된 바와 같이 전문 의사 및 위험 인자 관리에 방문과 결합하여 시행될 수 있다.
"대상체에서 암의 위험을 측정하는 것"은 바이오마커의 조합의 과발현이 종양, 전이, 또는 사망의 증가된 공산과 연관된다는 것을 의미하도록 의도된다. 예를 들어, "대상체에서의 암의 위험"은 1년, 5년, 10년, 또는 그 이상의 기간 이내에, 또는 그 사이의 임의의 시간 기간에 암 또는 종양, 전이 또는 사망의 증가된 공산을 나타낼 수 있다. solCD44 또는 총 단백질은 대조군과 비교하여 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500% 또는 그 초과로 과발현될 수 있다.
CD44
solCD44는 다수의 두경부 편평상피 세포 암종 (HNSCC) 경우에서 상승되고, 이는 높은 특이성을 갖는 양성 질병과 암을 구별한다. CD44는 정상 상부 호흡소화관 상피의 기저 표면에서 발현된다. CD44 발현은 상승하고, 상피 내 모든 층을 포함하며, 이때 90%의 경우에서 조직학적 이형성을 갖는다. CD44v는 종양형성을 촉진시키며, 이때 이는 기질금속단백질분해효소와 상호작용한다. MMP 유형 1은 CD44를 용해성 형태(solCD44)로 절단된다. HNSCC 환자를 위한 구강 린스액이 정상 대조군보다 7배 초과로 높은 solCD44 수준을 가졌다는 것을 보여주었다. HNSCC의 80%는 상승된 타액 solCD44를 가졌으며, 반면 대조군은 그렇지 않았다.
종양 생물학에서 분자의 공지된 역할에 근원을 둔, CD44-기반 스크리닝 시험이 발견되었다. CD44는 담배 유도된 유전성 손상의 결과로 과발현되며, 종양 개시에 요구된다. 대부분의 HNSCC는, 종양이 HPV 양성일지라도, 흡연자에서 발생한다 (Lin, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer (2013). 담배 흡연은 DNA 부가물을 형성함에 의한 손상 및 돌연변이를 야기하는 산화적 손상 (Pfeifer, et al. Tobacco smoke carcinogens, DNA damage and p53 mutations in smoking-associated cancers. Oncogene (2002) 21:7435-51) 및 DNA 이중가닥 파열 (Werbrouk, et al. Single-nucleotide polymorphisms in DNA double-strand break repair genes: association with head and neck cancer and interaction with tobacco use and alcohol consumption. Mutation Res (2008) 656:74-81)을 각각 야기한다. DNA 파열이 올바르게 교정되지 않을 경우, 유전적 수차, 예컨대 유전자 증폭이 발생하여 (Mondello, et al. Gene amplification, radiation sensitivity and DNA double -strand breaks. Mutation Res 2010; Miller, et al. Genomic amplification of MET with boundaries within fragile site FRA7G and upregulation of MET pathways in esophageal adenocarcinoma. Oncogene (2006) 25:409-18; Jarvinen, et al. High-resolution copy number and gene expression microarray analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines of tongue and larynx. Genes, Chromosomes &Cancer (2008) 47:500-9), CD44 및 다른 유전자 생성물의 과발현을 야기한다 (Miller, et al. Genomic amplification of MET with boundaries within fragile site FRA7G and upregulation of MET pathways in esophageal adenocarcinoma. Oncogene (2006) 25:409-18; Liu, et al. (1978). CD44는 대안적으로 스플라이싱된 엑손 (엑손 5-14)의 공통 도메인 및 가변 영역을 갖는 막관통 당단백질 계통을 나타낸다 (Screaton GR, et al. Genomic structure of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD44 reveals at least 12 alternatively spliced exons. Proc Natl Acad Sci USA (1992) 89:12160-4). CD44 이소형은, 세포외 기질 성분 (히알루론산) (HA), 막 단백질 (EGFR, HER2), 세포골격 성분 (에즈린, 라딕신, 모에신 및 메를린) 및 핵내 단백질 (STAT 3)을 포함하는 많은 다른 분자와 상호작용하여 발암성 신호를 초래한다 (Ponta, et al. CD44: from adhesion molecules to signaling regulators. Nature Rev Mol Cell Biol (2003) 4:33-45; Morrison et al. (1998); Lokeshwar, et al. Ankyrin-binding domain of CD44 is required for the expression of hyaluronic acid-mediated adhesion function. J Cell Biol (1994) 126:1099-1109; Lee, et al. Acetylation and activation of STAT3 mediated by nuclear translocation of CD44. J Cell Biol . (2009) 185:949-57). 이러한 신호는 세포사를 억제하여 (Perez, et al. CD44 interacts with EGFR and promotes head and neck squamous cell carcinoma initiation and progression. Oral Oncol . (2013) 4:306-13; Lakshman, et al. CD44 promotes resistance to apoptosis in human colon cancer cells. Exp Mol Pathol (2004) 77:18-25) 추가의 유전적 손상 및 악성 변형을 촉진한다.
CD44는 단순히 종양형성의 부산물이 아니라, 종양 개시의 동인(driver)이며, 이는 구강 린스액 시험에 의하여 용이하고 비침습적으로 검출될 수 있다. CD44 양성인 종양 세포 (CD44+)는 종양 개시 용량을 갖는다 (Prince ME, et al . Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma. Proc Natl Acad Sci USA (2007) 104:973-8). CD44 음성 (CD44-) 종양 세포는 40개 이식체 중 오직 1개에서 종양을 생성하는 반면, CD44+ 세포는 단지 수천 세포만의 주사로 30개의 이식체 중 20개에서 종양을 생성하였다 (Prince, et al. Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma. Proc Natl Acad Sci USA (2007) 104:973-8).
CD44는 히알루론산에 대한 수용체이고, 다른 리간드, 예컨대 오스테오폰틴, 콜라겐 및 MMP와 또한 상호작용할 수 있다. CD44는 다중-구조의, 그리고 다중-기능성 세포 표면 분자로서, 세포 증식, 세포 분화, 세포 이동, 혈관형성, 상응하는 수용체에 대한 시토카인, 케모카인 및 성장 인자의 제시, 및 세포막에서의 프로테아제의 도킹(docking), 뿐만 아니라 세포 생존을 위한 신호에도 관여한다. 이러한 모든 생물학적 특성은 정상 세포의 생리학적 활성에 필수적이지만, 이들은 또한 암 세포의 병리학적 활성과도 연관되어 있다. CD44 발현은 체액에서 용이하게 측정될 수 있는데, 이는 막-유형 1 MMP (MT1- MMP)와 같은 프로테아제가 CD44를 이의 용해성 형태 (solCD44)로 절단하기 때문이다 (Kajita, et al. Membrane-type 1 matrix metalloproteinase cleaves CD44 and promotes cell migration. J. Cell Biol (2001) 153:893-904).
개시된 검정은 대상체로부터의 샘플 내에 하나 이상의 바이오마커, 예를 들어 CD44 (예컨대 용해성 CD44 (solCD44))의 검출을 포함한다. Franzmann 등에 의한 미국 특허 번호 8,088,591는 대상체에서 HNSCC를 진단 및 모니터링하는데 사용될 수 있는 바이오마커의 기술을 위하여 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
CD44는 다수의 포유동물 세포 유형에서 발현된다. 엑손 1-5 및 16-20을 포함하는 표준 이소형, 지정된 CD44는 대부분의 세포 유형에 발현된다. 가변 엑손을 함유하는 CD44 스플라이스 변이체는 CD44v로 지정된다. 일부 상피 세포는 또한 더 큰 이소형 (CD44E)을 발현하며, 이는 엑손 v8-10을 포함한다. CD44 단백질은 또한 프로테아제를 통하여 용해성 형태(solCD44)로 방출되며(Kajita, et al. J Cell Biol (2001) 153:893-904), 그리고 정상 순환에서 검출가능하다 (Naor, et al. Adv Cancer Res (1997) 71:241-319; Guo, et al. Cancer Res (1994) 54:422-6; Martin, et al. Int J Cancer (1997) 74:443-5; Ristamaki, et al. Blood (1997) 90:4039-45;Yamane, et al. Oncology (1999) 56:232-8; Scott, et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2000) 9:1211-4; Van Hal, et al. Clin Cancer Res (1999) 5:3534-4). solCD44의 순환 수준은 일부 종양에서 전이와 관련된다 (Ristamaki et al. Blood (1997) 90:4039-45; Yamane et al. Oncology (1999) 56:232-8).
solCD44는 면역 검정에 의하여 측정될 수 있다. 면역검정은 비제한적으로 ELISA, MELISA, CEDIA, 면역스크리닝, 측방 유동 시험 (측방 유동 검정), 자기성 면역검정, 방사성 면역검정, 또는 주변 광학 섬유 면역검정 (Surround Optical Fiber Immunoassay; SOFIA)을 포함한다. 추가 예시는 효소 연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 측방 유동 검정을 포함한다.
총 단백질
총 단백질 (TP)는, 본원에서 언급된 바와 같이, 샘플 내, 예를 들어 구강 린스액 내 존재하는 모든 단백질의 양이다. 용액 내 단백질에 대한 가장 간단하고 직접적인 검정 방법은 280nm의 흡광도(UV 범위)에서 측정하는 것이다. 방향족 측쇄를 함유하는 아미노산 (즉, 티로신, 트립토판 및 페닐알라닌)은 강한 자외선(UV-light) 흡수를 나타낸다. 결과적으로, 단백질 및 펩타이드는, 그들의 방향족 아미노산 함량 및 총 농도에 따라 자외선(UV-light)을 흡수한다. HPLC에 의한 아미노산 분석에 전통적으로 사용되는, 다른 방법은 모든 1차 아민 (즉, 리신 잔기의 N-말단 및 측쇄)을 닌하이드린 또는 o- 프탈디알데하이드 (OPA)와 같은 착색된 또는 형광성 염료로 표지하는 것이다. 몇몇의 비색성, 시약-기반 단백질 검정 기술 또한 알려져 있다. 단백질은 시약에 첨가되어, 첨가된 양에 따라 색 변화를 생성한다. 단백질 농도는 정제된 참조 단백질의 공지된 농도로 구성된 표준 곡선을 참조하여 측정된다.
총 단백질 검정의 예시는 브래드포드(Bradford) 검정, 로이(Lowry) 검정, 변형된 로이(Lowry) 검정, 및 피어스(Pierce) BCA 단백질 검정을 포함한다. 로이 검정은 용액내 단백질의 총 수준을 측정하기 위한 생화학 검정이다. 상기 총 단백질 농도는 단백질 농도에 따라 샘플 용액의 색 변화에 의해 나타나며, 이는 이후 비색성 기술을 사용하여 측정될 수 있다. 본원에 개시된 방법과 함께 사용할 수 있는 로이 검정의 변형 또한 존재한다. 일 예는 하기에서 발견된다: Peterson et al. (Anal Biochem (1977) 83(2):346-356).
통계적 분석
상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용한 통계 분석에 의하여 측정될 수 있으며, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정한다. 이러한 참조 수준은 통계적 분석, 예컨대 로지스틱 회귀 산출에 예속될 수 있다. 다변량 분석 또한 통계적 분석에서 사용될 수 있다. 다변량 분석에 의한 로지스틱 회귀 산출 사용 방법은 미국 특허 6,110,109에 개시된 바와 같이 본 분야에 공지되어 있으며, 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
건강한 개체로부터의 solCD44 및 총 단백질의 참조 수준 또한, 암을 갖는 개체의 수준과 함께 회귀 분석에 예속될 수 있다. 이러한 분석은 예를 틀어 특정 유형의 암, 예컨대 HNSCC를 갖는 개체에 대해 행해질 수 있다는 것이 주시된다. 이러한 스코어는 암 위험의 통계적으로 유의미한 한정을 측정하기 위하여 분석될 수 있다. 일단 이러한 스코어가 수득되면, 이들은 본원에 개시된 방법에 적용되어 환자 내 solCD44 의 시험량 및 총 단백질의 시험량이 solCD44 및 총 단백질의 참조 수준을 초과하는지 또는 미만인지를 측정함으로써 상기 대상체 내 암의 위험을 측정할 수 있다. 개별 환자의 위험 수준은 따라서 이러한 비교에 기반하여 측정될 수 있다.
로지스틱 회귀 산출 방법 뿐만 아니라, 다변량 분석 방법도 하기에 개시되며: Gareth James et al., (2013). An Introduction to Statistical Learning. Springer. p. 6; Harrell, Frank E. (2001). Regression Modeling Strategies. Springer-Verlag. ISBN 0-387-95232-2; Hosmer, David et al. (2000). Applied Logistic Regression (2nd ed.). Wiley. ISBN 0-471-35632-8; Menard, Scott W. (2002). Applied Logistic Regression (2nd ed.). SAGE. ISBN 978-0-7619-2208-7; Cohen, Jacob et al. (2002). Applied Multiple Regression/Correlation Analysis for the Behavioral Sciences (3rd ed.). Routledge. ISBN 978-0-8058-2223-6; Mark et al. (2001). Multiple Regression Analysis and Mass Assessment: A Review of the Issues. The Appraisal Journal, Jan. pp. 89-109), 이의 전문은 로지스틱 회귀 산출 및 다변량 분석에 관한 교시를 위하여 그 전체가 참조로 포함된다.
샘플 수집
본원에 개시된 방법에서 사용될 샘플은 임의의 체액으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 체액은 구강 린스액, 타액, 가래, 호기 응축물(breath condensate), 혈액, 혈장, 및 소변으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 샘플은 타액 또는 구강 린스액이다. 타액은 많은 방법을 사용하여 수집될 수 있다. 하나의 통상적인 방법은 전체 타액 수집이다. 타액은 종종 휴식 상태에서 정해진 기간에 걸쳐 이의 대부분이 방출되는 곳인, 전방 구강으로부터 수집된다. 구강 린스액은 액체, 종종 타액의 정해진 양의 사용을 포함하며, 이는 입안에서 조작되고, 구강, 후두 및 인두를 따라 부착된 물질을 방출하는 것을 돕는다.
대상체는 구강 린스액 샘플이 수득되기 전에 먹는 것, 마시는 것, 또는 흡연을 삼가도록 요청받을 수 있다. 대상체는 예를 들어 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60분, 또는 그보다 더 길게 삼가도록 요청받을 수 있다.
암
본원에 개시된 방법은 암의 임의의 유형, 또는 암의 1가지 초과의 유형의 조합을 검출하기 위하여 사용될 수 있다. 예시는 비제한적으로, 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 급성 골수구 백혈병, 골수아세포, 전골수구, 골수단구, 단구성, 적백혈병, 만성적 백혈병, 만성적 골수구성 (과립구성) 백혈병, 만성적 림프구성 백혈병, 진성 적혈구증가증, 림프종, 호지킨 질환, 비-호지킨 질환, 다발성 골수종, 발덴스트롬's 거대글로불린혈증, 중쇄 질환, 고형 종양, 육종 및 암종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 척색종, 맥관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평상피 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 피지샘 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭샘암종, 수질 암종, 기관지 암종, 신장 세포 암종, 간종양, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피성 암종, 신경아교종, 별아교세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경교세포종, 및 망막모세포종을 포함한다. (그러한 장애의 고찰을 위해서는 다음을 참고: Fishman et al., (1985, Medicine, 2d Ed., J.B. Lippincott Co., Philadelphia.)
특히, 상기 암은 두경부 편평상피 세포 암 (HNSCC), 폐암, 전립선암, 결장암, 방광암, 흑색종, 백혈병/림프종, 유방암, 및 골육종으로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본원에 또한 개시된 것은 "전-악성종양"으로, 이는 종양형성 또는 암 진행, 특히, 과형성, 화생, 또는 가장 특히 이형성으로 구성된 비-종양성 세포 성장의 발생에 선행한다 (그러한 비정상 성장 상태의 고찰을 위해서는 다음을 참고: Robbins and Angell, 1976, Basic Pathology, 2d Ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, pp. 68-79.). 과형성(Hyperplasia)은, 구조 또는 기능의 유의미한 변화 없이, 조직 또는 기관 내에서 세포 수 증가를 포함하는 제어된 세포 증식의 한 형태이다. 일 예시 외에도, 자궁내막 과형성은 종종 자궁내막암에 선행한다. 화생(Metaplasia)은, 성인 세포 또는 완전히 분화된 세포의 일 유형이 성인 세포의 다른 유형을 대체하는 제어된 세포 성장의 한 유형이다. 화생은 상피 또는 결합조직 세포에서 발생할 수 있다. 전형적인 화생은 일정부분 무질서한 화생성 상피를 포함한다. 이형성(Dysplasia)은 종종 암의 전조이며, 주로 상피에서 발견되고; 이는 개별 세포 균일성 및 세포의 구성적 배향의 상실을 포함하는 비-종양성 세포 성장의 가장 무질서한 유형이다. 이형성 세포는 종종 비정상적으로 크고, 깊이 염색된 핵을 갖고, 다형태성을 나타낸다. 이형성은 특징적으로, 만성 자극 또는 염증이 존재하는 곳에 발생하고, 종종 자궁경부, 기도, 구강 및 쓸개 내에서 발견된다.
환자 위험
본원에 개시된 대상체는 총 단백질 및 solCD44의 측정 이외의 위험 인자에 대해 분석될 수 있다. 예를 들어, 환자 위험 인자는 알코올 사용, 담배 사용, 또는 인간 유두종 바이러스 (HPV) 감염을 포함할 수 있다. 환자 위험 인자는 또한 또 다른 암 마커에 관한 실험실 결과를 포함할 수 있다.
전통적으로, HNSCC의 80%-90%는 담배 및 알코올 사용에 기인했다 (Sturgis, et al. Cancer (2007) 110:1429-35). 담배 흡연자에 대한 HNSCC 발병 위험은 비흡연자에 비해 5 내지 25배 크며, 상기 위험은 빈도, 기간 및 흡연 정도에 따라 용량-의존적 방식으로 증가한다 (Marur et al. Mayo Clin Proc . (2008) 83:489-501; Sturgis, et al. Cancer (2007) 110:1429-35; Ragin, et al. J Dent Res (2007) 86:104-14; Curado et al. Curr Opin Oncol . (2009) 21:194-200). 위험은, 흡연 경험이 없는 사람의 수준에는 접근하지 못하더라도, 흡연 중단 기간과 더불어 실질적으로 감소한다 (Schlect, et al. Epidemiology (1999) 10:412-18; Bosetti, et al. Am J Epidemiol (2008) 167:468-73). 한 이탈리아의 연구에서 발견된 바에 따르면, 모든 상부 호흡소화관 암에 대한 75세에서의 누적 위험은 임의의 유형의 담배를 계속 흡연하는 남성에서 6.3%였고, 약 50세에서 흡연 중단한 남성에서 3.1%, 약 30세의 남성에서 흡연 중단한 남성에서 1.2%, 그리고 일생동안 흡연하지 않은 자들 중 0.8%였다 (Bosetti, et al. Am J Epidemiol. (2008) 167:468-73). 진행중인 흡연이 HNSCC의 주요 위험일지라도, 비자발적 또는 2차 흡연 또한 증가된 암 위험과 연관되었다. 국제적인 풀(pool) 분석에서, 15년 초과의 기간동안 집과 직장 모두에서 발생한 비자발적 흡연에 대한 긴 노출은 HNSCC, 특히 인두 및 후두암의 증가된 위험과 연관되었다 (Lee et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2008) 17:1974-81).
알코올 또한 흡연 사용에 기인하는 HNSCC 위험을 상승작용적으로 증가시키는 것을 나타내었다 (Ragin et al. J Dent Res (2007) 86:104-14). 고도의 알코올 소비는 HNSCC에 대한 독립적인 위험 인자이다. 1일당 2 또는 3잔의 음주로 정의되는 고빈도 사용은 독립적으로 구강인두, 하인두 및 후두 암의 증가된 위험과 연관되었다 (Hashibe et al. J Natl Cancer Inst (2007) 99:777-89).
HNSCC와 연관되었던 다른 위험 인자는 식단 패턴, 바이러스 및 직업적 노출을 포함한다. 수많은 연구 결과는 HNSCC와 비타민 A 결핍을 연관지으며, 반면 다른 연구는 높은 과일 및 채소 섭취와 역연관(inverse association)됨을 기술한다 (Marur et al. Mayo Clin Proc. (2008) 83:489-501; Curado et al. Curr Opin Oncol. (2009) 21:194-200). 연루된 바이러스는, 엡슈타인-바르 바이러스 (EBV) 및 인간 파필로마바이러스 (HPV)를 포함하고, 예컨대 크로뮴, 니켈, 및 라듐에 대한 직업적 노출 또한 특히 부비동 암종과 특히 연관되었다 (Marur et al. Mayo Clin Proc. (2008) 83:489-501).
HPV
흡연-연관된 HNSCC의 경우는 1975년부터 미국에서 감소한 반면, 인간 유두종바이러스 (HPV)에 잠재적으로 기인하는 HNSCC 비율은 증가하였다. HPV-연관된 구강인두 편평상피 세포 암종 (OPSCC)의 2,370건이 넘는 새로운 경우가 여성에서 진단되며, 미국에서만 약 9,356건이 매년 남성에서 진단된다. 성생활을 유지중인 여성 내에서의 자궁경부 HPV 감염의 추정된 일생동안의 위험은 80%까지에 이른다. 본원에서 HPV 및 유도된 구강인두암 및 자궁경부암 사이의 면역학적 연결이 개시된다. PD-1 (프로그래밍된 세포사) 수용체는 종양의 면역 회피에서의 공통적인 연결이다. (2008, World Health Organization Section of Cancer Information, 2008; Goodman, MT, et al.; 2012, Lyford-Pike, S, et al.)
solCD44 및 총 단백질 수준의 결합은 마커의 단독 사용에 비하여 대조군으로부터 더욱 효과적으로 HNSCC를 구별할 수 있다. 그러나, solCD44 수준은 인간 유두종 바이러스 (HPV) 감염을 갖는 대상체에서 더 낮을 수 있다. 사실, solCD44 및 총 단백질 수준을 사용하는 이변량 분석은 흑인 남성에서 가장 효과적으로 수행되며, HPV 감염은 덜 공통적이다. 따라서, 다변량 분석 내 HPV 상태의 포함은 검정의 민감성 및 정확성을 개선할 수 있고, HPV+ HNSCC 검출을 가능케할 수 있다. (실시예 2).
HNSCC 검출 또는 예후와 연관된 다른 바이오마커는 총 단백질, solCD44, 및 HPV 검출과 조합 사용되어 개시된 방법의 민감성 및/또는 정확성을 개선할 수 있다. 예를 들어, solCD44 수준은 연령 및 흡연 상태에 따라 변할 수 있다. 다변량 분석에 사용될 수 있는 HNSCC 위험 인자 및 인구학적 인자의 예시는 담배에 대한 노출, 알코올에 대한 노출, 인종, 민족, 치과적 건강, 성별, 교육 수준, 연령, 일반 건강, 암 가족력, 성생활 이력, 및 사회경제적 상태를 포함하며, 다변량 분석 내에서 하나 이상의 위험 인자 또는 인구학적 인자를 사용하여 조합된 스코어를 측정할 수 있다.
HPV 감염은 HPV의 직접 또는 간접 측정에 의하여 측정될 수 있다. 분자적 검정의 3가지 범주는 조직 및 박리된 세포 샘플 내 HPV 감염 검출에 대해 현재 이용가능하다. 모든 것은 HPV DNA 검출을 기반으로 하며, 이는 하기를 포함한다: (1) 비증폭된 혼성화 검정 (서던(Southern) 이송 혼성화, (STH), 닷 블랏(dot blot) 혼성화 (DB) 및 원위치 혼성화 (ISH)); (2) 신호 증폭된 하이브리드화 검정, 예컨대 혼성체 포획 분석; 및 (3) 표적 증폭 분석, 예컨대 PCR 및 원위치 PCR. 서던 블랏(Southern blot) 혼성화는 많은 양의 DNA를 필요로 하며, 많은 노동력을 필요로하는 데다가 생산적이지 않은 한편, 원위치(in situ) 혼성화는 HPV에 대해 중간 수준의 민감성만을 갖는다. HPV의 PCR-기반 검출은 극도로 민감하고 특이적이다. 이러한 접근을 사용하여, 바이러스 DNA는 DNA 폴리머라아제에 의하여 시험관내 증폭되어 적당한 양의 표적을 생성하며, 이는 이후 겔 상에서 직접적으로 가시화되거나, (더욱 특이적인 접근으로) 전통적인 혼성화 방법을 사용하여 특이적 프로브에 의하여 검출된다. 실제적으로, PCR 기반 방법의 민감성은 100 ng 세포성 DNA의 배경에서 약 10-100 HPV 바이러스 게놈 수준이다. PCR이 DNA의 매우 적은 양(10-100 ng)에서 행해질 수 있으므로, 이는 낮은 DNA 용량을 갖는 시료에서 사용하기에 이상적이다.
유전적 인자
다른 예에서, 악성종양에 대한 하기 소인 인자 중 하나 이상을 나타내는 환자는 본원에서 개시된 방법을 위하여 선택될 수 있다: 악성 종양 연관 염색체 전좌, 가족성 용종증 또는 가드너 증후군 (결장암의 가능한 전구체), 양성 단클론성 감마글로불린병증 (다발성 골수종의 가능한 전구체), 및 멘델 (유전적) 유전 패턴을 나타내는 전암성 질병 (예를 들면, 결장의 가족성 용종증, 가드너 증후군, 유전성 외골증, 다발성내분비 선종증, 아밀로이드 생성 및 크롬친화세포종을 갖는 수질 갑상선 암종, 포이츠-제거스 증후군, 폰 레클링하우센 신경섬유종증, 망막모세포종, 경동맥소체 종양, 피부 멜라닌암종, 안구내 멜라닌암종, 색소성 건피증, 혈관확장성 운동실조증, 체디아크-히가시 증후군, 백피증, 판코니(Fanconi) 재생불량빈혈, 및 블룸 증후군; 참고: Robbins and Angell, 1976, Basic Pathology, 2d Ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, pp. 112-113) 등)
HA 및 히알루로니다제 ( HAase )
히알루론산 (HA) 및 히알루로니다제 (HAase)도 또한 샘플 내에서 측정될 수 있다. HA는 특정 암에서 과발현된 비황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)이다. HA는 세포 표면 상에서 히알루론난 합성효소에 의하여 합성되고, D-글루크론산 및 N-아세틸-D-글루코사민의 반복 이당류 단위로 구성된다. 이는 체액, 조직, 및 세포외 기질 내에 존재한다. 이는 세포 표면 수용체 (예컨대 CD44, RHAMM 등)과 상호작용하고, 이러한 상호작용을 통하여, 세포 부착, 이주, 및 증식을 조절한다. 종양에 유형에 따라서, HA는 기질 세포, 종양 세포, 또는 둘다에 의하여 합성될 수 있다. 종양 조직에서, HA는 종양 세포 이주를 촉진하고, 면역 감시체계에 대한 보호를 제공하고, 세포 성장 및 이주의 접촉-매개된 억제의 부분적 손실을 야기함으로써 전이를 지지한다. HA의 작은 단편은 혈관신생적이며, 방광 암 환자의 소변, 전립선암 조직, 및 HNSCC 환자로부터의 타액으로부터 단리되었다. HA 농도는 결장, 유방, 전립선, 방광 및 폐를 포함한 몇몇 암에서 상승된다. 결장 및 유방과 같은 종양 내 HA의 조직 발현은 불량한 예후를 나타낸다.
표 1: 암 병력이 있는 환자와 없는 환자의 CD44 및 총 단백질 수준의 비교
Figure 112016013940930-pct00001
표 2: 다양한 과거 암을 갖는 환자 내 CD44 및 단백질 수준
Figure 112016013940930-pct00002
히알루로니다제는 HA를 작은 혈관신생 HA 단편으로 분해하는 내생글리코시드가수분해효소이다. HA 및 HA 단편은 초점 접착 키나아제(FAK) 및 MAP 키나아제 경로를 활성화함으로써 상피 세포 증식, 접착 및 이주를 자극한다. 히알루로니다제는 CD44 이소형의 발현을 변경하고, 증가된 종양 세포 주기와 연관된다. 상이한 유전자에 의하여 암호화된 6가지의 인간 히알루로니다제 중에서, 3가지가 단백질 수준에서 특징화된다.
키트
또한 염수 용액; 구강 염수 린스액을 수용하는 컵; CD44와 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체; 총 단백질 농도를 측정하는 시약; 및 solCD44 및 총 단백질에 대한 참조 수준을 포함하는 키트가 개시되며, 여기서 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정될 수 있으며, 그리고 상기 solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준은, 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정한다.
실시예
하기 실시예는 개시된 요지에 따른 방법, 조성물 및 결과를 예시하기 위하여 아래에 제시된다. 이러한 실시예는 본원에 개시된 요지의 모든 측면을 포함하는 것으로 의도되지 않으며, 대표적인 방법, 조성물, 및 결과를 예시하는 것으로 의도된다. 이러한 실시예는 본 발명의 동등체 및 변형체를 배제하는 것으로 의도되지 않으며, 이는 본 분야의 당업자에게 자명하다.
실시예 1: CD44 및 총 단백질 구강 린스액 시험
solCD44/총 단백질 구강 린스액 시험은 조기 및 공격형 HNSCC을 동정하기 위한 강력한 도구이다. 150개의 암 사례 및 150개의 임상-기반의, 빈도-매칭된 대조군의 실험에서, 구강 린스액 CD44/총 단백질 시험이 흑인 남성 서브세트 내 약 90%의 정확성으로 HNSCC 사례를 대조군으로부터 구별하였음이 주목되었다. 사례 중 높은 solCD44 수준은 단백질 수준, 질병 유형 (구강인두 대 구강), 종양 단계 및 다른 공변량에 독립적인 불량한 예후의 무생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)과 연관된다.
solCD44/단백질 구강 린스액 시험의 특이성은 커뮤니티-기반 코호트내에서 예상된 것보다 더 양호하다. 소수의 부유층과, 경제적으로 혜택을 받지 못한 계층이 많은, 북부 중앙 지역의 마이애미-데이드(Miami-Dade) 카운티 내 위치한 사회-경제적으로 낙후된 도시를 포함하는 사우스 플로리다 내의 흡연 및 몇몇의 담배-연관 암 클러스터 비율은 높다 (“커뮤니티 코호트) (Dietz NA, et al. Toward the identification of communities with increased tobacco-associated cancer burden: Application of spatial modeling techniques. J Carcinog 2011; 10:22). 상기 커뮤니티 코호트 클러스터 내 암 비율은, 플로리다 남부와 비교하여 다음과 같이 모두 높은 정도로 유의미하다: 폐 관련 위험 (RR)=1.4; p<0.0001; 구강 RR=1.5; p<0.01; 및 자궁경부 RR=2.6; p<0.0001 (Dietz NA, et al.Toward the identification of communities with increased tobacco-associated cancer burden: Application of spatial modeling techniques. J Carcinog 2011; 10:22). 커뮤니티 코호트 HNSCC 초기 검출 및 예방 프로그램을 개발하였다. 고위험 집단 내의 CD44 및 단백질 수준 및 시간에 따른 그의 가변성을 평가하였고, 흡연 중단이 이의 감소된 수준을 초래하였는지를 측정하였다. 구강 린스액 시험이 수용가능한지 여부 또한 평가하였다. 구강 린스액 시험의 특이성은 커뮤니티 코호트로부터의 대상체 내에서 유효하였고, 상기 시험이 100%의 민감성 및 92%의 특이성으로 커뮤니티 코호트 대조군으로부터 흑인 남성 HNSCC (임상 기반 연구에 등록된) 사례를 구별한다는 것이 발견되었다. 7개의 "위양성" 사례 중, 발병된 1개 사례는 폐암이 확인되었고, 다른 사례는 구강 전-악성 종양으로 의심되었다. 구강 린스액 시험은 잘 수용되었다. 더욱이, 평균 solCD44 수준은 연례 방문으로 돌아온 대상체에서 9%만큼 감소하였으며, 이는 스크리닝된 코호트에서 암 위험이 감소할 수 있다는 것을 나타낸다. 따라서, 이러한 프로그램은 HNSCC에 대한 위험에서 유의미하게, 그리고 긍정적으로 환자에게 영향을 줄 수 있다.
데이터
CD44는 종양 개시 및 진행과 연관된다: CD44는 세포 표면에서 발현되고 종양 개시와 관련된 막관통 단백질이다. 정상 점막에서, CD44 염색은 기저 및 부기저 층으로 국한되나, 증가된 이형성증 및 침습성 암을 갖는 모든 포함하도록 증가된다. 불량하게 분화된 종양은 혈관을 둘러싸고, 암 팽창 영역 내 말초에서 초점 CD44 염색을 보여준다 (Germani, R, et al. Molecular markers of micrometastasis in oral cavity carcinomas. Otolaryngol Head Neck Surg 2009;141:52-8). CD44의 녹-다운은 누드 마우스에서 종양 성장을 크게 감소시킨다 (도 1a) (P<0.05) (Perez A, et al. CD44 interacts with EGFR and promotes head and neck squamous cell carcinoma initiation and progression. Oral Oncol. 2013; 4:306-13). 도 1b는 상피 성장 인자 수용체 (EGFR), HNSCC의 주요 분자적 동인, 및 그의 인산화 형태 (Y1068)가 CD44-siRNA 이종이식체에서 감소되며, 2개의 분자가 기능적으로 연관된 것을 나타내는 것을 보여준다.
종양 개시에 있어서의 CD44의 공지된 역할 때문에 (Prince ME, et al . Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma Proc Natl Acad Sci USA 2007;104:973-8), solCD44는 암 환자 및 대조군으로부터의 구강 린스액 내에서 평가되었다. 상기 시험은 정상 대조군 및 두경부의 양성 질병을 갖는 개체들로부터 HNSCC를 정확히 구별하는 것을 보여주었다 (Franzmann EJ, et al. Salivary soluble CD44: a potential molecular marker for head and neck cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14:735-739; Franzmann EJ, et al. Soluble CD44 is a potential marker for the early detection of head and neck cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2007;16:1348-1355; Franzmann EJ, et al. Salivary protein and solCD44 levels as a potential screening tool for early detection of head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 2012; 34:687-95). 또한 단순한 로이(Lowry)-유사 검정에 의하여 측정된 총 단백질이 대조군과 비교하여 HNSCC 내에서 증가하였다는 것과 (Franzmann EJ, et al. Salivary protein and solCD44 levels as a potential screening tool for early detection of head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 2012; 34:687-95), solCD44 및 총 단백질 수준의 조합이 마커의 단독 사용에 비하여 대조군으로부터 더욱 효과적으로 HNSCC를 구별할 수 있다는 것이 발견되었다 (Franzmann EJ, et al. Salivary protein and solCD44 levels as a potential screening tool for early detection of head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 2012; 34:687-95; Pereira LH, et al. Salivary markers and risk factor data: a multivariate modeling approach for head and neck squamous cell carcinoma detection Cancer Biomark. 2011;10:241-9).
다중-기관의, 맹검된 , 빈도-매칭된, 사례-대조군 연구 (n=300):
150개의 구강암 사례군 및 150개의 매칭된 빈도, 임상-기반 대조군을 등록하였다. 대조군을 마이애미 의과대학 캠퍼스의 사설 1차 케어 클리닉 및 제퍼슨 메모리얼 병원 시스템이 운영하는 시내 카운티 클리닉인 제퍼슨 부설기관(Jefferson Reaves, Sr. Health Center)로부터 2007년 내지 2012년에 등록되었다. 연구 요원들은 solCD44 및 단백질 검정을 수행할 때 사례군-대조군 상태에 대해 맹검되었다. 적격성 결정이 맹검 해제 전에 PI에 의하여 내려졌다.
사례군 및 대조군 (n=300)의 전체 코호트는, 이중 78%가 흡연 이력을 가졌고 대략 50%가 중도 또는 고도의 음주를 인정하였으므로, 담배-연관된 악성종양에 대하여 높은 위험에 처해 있었다. 양자 그룹으로부터 대략 40%가 불량한 구강 건강으로 인하여 6개 이상의 치아 손실이 있었다. 상기 사례 그룹은 53% JMH (카운티 병원) 대상체를 포함하였으며, 44%는 60세를 초과하였고, 81%는 남성이었고, 17%가 흑인이었으며, 그리고 51%가 히스패닉이었다. 연령, 성별, 인종, 민족, 구강 건강 (발치 개수), 흡연 이력, 음주 습관 또는 횟수를 포함하는 주요 공변량에 대하여, 카운티 대 사설 병원 시스템으로부터 등록된 사례군 및 대조군 사이에 유의미한 차이(p<0.05)는 없었다.
solCD44 및 총 단백질 수준 둘 다, 사례군에서 대조군에 비해 상승하였다 (solCD44: 5.50ng/mL 대 2.87ng/mL, p<0.0001; 단백질: 0.94mg/mL 대 0.76 mg/mL, p=0.007). 마커 수준을 사례군 및 대조군 사이 및 이내의 위험 인자 또는 인구학적 변수의 차이에 기반하여 관찰하였다. solCD44 및 단백질 수준은, 연령, 성별, 민족/인종, 흡연 습관 또는 음주 습관이 고려되었을 때 p<0.05의 수준에서 대조군과 비교하여 사례군에서 일반적으로 더 높았다. 연령에 기반한 solCD44 수준의 유의미한 차이(보다 높은 연령의 환자 내의 보다 높은 수준)가 사례군에서 발견되었다.
표 3.
Figure 112016013940930-pct00003
단계 및 p16 상태와 같은 종양 특성 (조직이 이용가능할 때 측정된 HPV에 대한 대용물) (Lin, et al. Long-term prognosis and risk factors among patients with HPV-associated oropharyngeal squamous cell carcinoma. Cancer. 2013)은 solCD44 또는 단백질 수준에 유의미하게 영향을 주지 않았으며, 예외적으로 종양 크기의 차이 (T1-T2 대 T3-T4; CD44: 4.23 ng/mL vs. 6.4 ng/mL, p=0.026)가 CD44에 대해 나타나며, logCD44에 대해서는 나타나지 않았다. 이러한 발견에 기반하여, 로지스틱 회귀 모델은 log2 solCD44, 단백질 및 연령에 기반하여 대조군으로부터 HNSCC를 구별하도록 개발되었다. 고-위험의, 그리고 다양한 코호트에도 불구하고, 상기 모델은 곡선하면적 (AUC)로 측정시 0.69의 정확성을 보였다 (표 3).
아프리카계 미국인 (특히 남성)은 불균형한 비율로 구강암으로 고통받고 있으며, 이에 대한 전체 생존 비율은 더 낮다. 서브세트 분석은 인종, 민족, 및 성별에 의하여, solCD44, 단백질 및 연령을 포함한 다변량 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 수행되어 집단 간 차이를 평가하였다. 흑인 남성 서브세트에 대한 결과는 상기 모델이 AUC=0.89로 대조군으로부터 HNSCC 환자를 정확하게 구분하였다는 것을 보여준다 (표 4). 회귀 모델에 기반한 가능성 스코어가 각 흑인 남성 대상체에 대해 산출되었다. 관찰은 예측된 가능성이 0.3418을 초과하는지 또는 동등한지에 대한 사례로서 예측되었다. 이러한 컷포인트에서, 민감성은 100%, 특이성은 71.4%, 그리고 정확성는 87.1%였다.
표 4.
Figure 112016013940930-pct00004
다른 인종/인족 및 성별 그룹에 대하여, solCD44, 단백질, 및 연령을 포함하는 예측 모델은 하기 곡선하면적(AUC)을 초래하였다: 백인 비-히스패닉 남성=0.76; 백인 히스패닉 남성=0.76; 모든 여성=0.64. 개별 모델 구성에 대한 승산비는 유의성에 다다르지 못하였으며, 이는 작은 샘플 크기 및 흑인 남성에 대한 연령, 및 백인, 히스패닉 남성에 대한 연령, log solCD44 및 단백질의 예외 때문인 것으로 추정된다 (하기 표 5). 따라서 히스패닉 남성의 단백질 수준은, 흑인 남성과 달리, 유의미한 보호성 효과와 연관되었다.
표 5.
Figure 112016013940930-pct00005
커뮤니티 코호트 조기 검출 및 예방 연구: 커뮤니티 코호트 내 solCD44/단백질을 연구하기 위하여 뱅크헤드-콜리(Bankhead-Coley; BHC) 연구 프로젝트 보조금이 사용되었다. 150명의 흑인 대상체가 등록 및 시험되었으며, 기준선 마커 수준이 수득되었다. BHC 대상체는, 임상-기반 실험으로부터의 흑인 사례군과 위험 인자 및 인구학적 요소에 대하여 유사하였으며, 단, 그들은 평균적으로 약 10년 정도 연령이 낮았으며 (51세 대 61세, p<0.05), BHC 연구 내 히스패닉 흑인의 비율이 더 낮았다 (<1% 대 27% p<0.05). 임상-기반 연구 내에 흑인 남성에 대한 모델 및 컷포인트 (표 5)이 BHC 연구 내의 흑인 남성에게 적용되었으며, 81건(92.05%)이 대조군으로, 7 건(7.95%)이 사례군으로 예측되었다. 이러한 7건의 "위양성" 사례에서 기준선 양성 solCD44/단백질 시험 이후 14개월후에 생검에 의하여 폐암이 발병한 것으로 진단되었다. 다른 대상체는 전립선 암 병력이 있었고, 정상의 기준선 검사를 보였으나, 높은 가능성의 마커 결과를 보였다. 그는 다음 연례 방문에서 진행한 구강 린스액 수집 후 9개월째에 우려되는 백반증이 발병하였다. 대상체 내 마커 수준은 증가하고, 생검은 계류 상태이다. 따라서 일부 "위양성" 경우들 조차도 진행 또는 원격(distant) 질병을 갖는 진양성으로 보였다.
마커 시험은 임상-기반 코호트보다 커뮤니티-기반 BHC 코호트에서 더욱 특이적이다 (92% 대 71.4%). solCD44 수준은 흑인 임상-기반 대조군 코호트보다 BHC 코호트에서 더 낮았으며, 이는 log2 CD44에 대한 유의성 경계에 다다랐다 (CD44: 1.85 ng/mL 대 2.67 ng/mL, log2CD44: 0.69 ng/mL 대 1.14 ng/mL; p=0.057). 이는 임상-기반 코호트가 커뮤니티-기반 코호트보다 더 높은 위험군이라는 것을 나타낸다. 이에 뒷받침하여, 150명의 임상-기반 대상체 중 10% 초과의 대상체가 (반면 BHC 코호트 내에서는 1% 미만), 이전에 암 병력이 있었다. 이전에 암 병력이 있었던 임상-기반 대조군은, 이전에 암이 없었던 대조군에 비하여 유의미하게 증가된 solCD44 (중앙값 3 대 2.2 ng/mL, p<0.05) 및 단백질 (중앙값 1.03 대 0.64 mg/mL, p<=0.05) 수준을 보였다.
빈도-매칭 기준으로 인하여 임상-기반 연구 내 9건의 여성 흑인 사례가 있었다. 두 성별 모두의 모델 또한 양호한 AUC를 나타냈다 (표 6).
표 6.
Figure 112016013940930-pct00006
solCD44 /단백질 시험은 그것이 가시화되기 전에 암을 검출한다: 상승된 구강 린스액 solCD44 수준 및 무질병 (위-양성)을 갖는 이전 연구 (18)으로부터의 2명의 대조군 대상체에서 2-3년 후에 중증도의 이형성증 및 침습성 암이 발병하였다. 회귀 트리 모델에 기반한 위험에 처해있던 2명 이상의 임상-기반 대조군 참가자들에서 추적 연구 기간 내에 원위치 암종 또는 침습성 암이 발병하였다. BHC 연구로부터의 한 환자에게서 현재 폐암이 발병하였고, 진단 14개월 전에 상승된 마커 수준을 보였다. 우려되는 구강 병변, 전립선암 병력, 및 상승된 solCD44 및 단백질 수준을 갖는 다른 개체는 구강 생검 계류 중이다.
상승된 solCD44 및 단백질 수준은 불량한 예후과 연관된다: 도 2a-c는 추적 연구가 있었던 150건의 임상-기반 사례 중 137건에 대한 PFS를 나타냈다. 149명의 평가가능한 대상체 중 59명이 사망하였고 (추적연구 기간의 중앙값: 22.9개월, 범위: 0.7 내지 65.1개월) 및 137명의 평가가능한 대상체 중 68명이 발병을 겪었다. 평균 3년 PFS 및 전체 생존(OS)는 각각 48.8% 및 54.7%이었다. 높은 수준의 solCD44 (>10 ng/mL) 및 총 단백질 (>1 mg/mL)은 감소된 PFS와 연관되었다. 단일변량 분석에서, PFS의, 또한 OS의 예측인자는 CD44 (계속적/범주적 인자로서), 단백질 (계속적/범주적), 단계, T4 단계, 인종 (흑인 인종의 보다 악화된 결과), 및 연령이었다. 성별, 흡연, 및 알코올 상태 뿐만 아니라 부위 (구강인두 대 구강) 중 어떤 것도 유의미한 예측인자가 아니었다. P16은 사례군의 서브세트에 대해서만 유효하였고; p16- 대 p16+의 효과는 PFS에 대하여 유의미하였으나 (HR 2.201, p=0.0458, n=73), OS에 대해서는 유의미하지 않았다 (HR 1.531 p=0.2941, n=79). 모델 내 CD44 및 단백질을 촉진하는 단계적 선택을 사용하여, p16을 배제한 다변량 분석은 하기를 포함하는 PFS 및 OS에 대한 공통적 모델을 초래하였다: CD44, 단백질, 단계, 인종, 및 연령. 이러한 모델 하에서, 둘 모두의 PFS 상에서 10 이상의 solCD44 수준의 독립적인 위험 효과가 있었다 (HR 2.628, 95% CI: 1.325, 5.210, p=0.0057) 및 OS (HR 2.103, 95% CI: 1.031,4.291, p=0.0411). ≥1mg/mL의 단백질의 위험 효과는 PFS에 대한 유의성에 접근하였지만 (HR 1.571, 95% CI: 0.906, 2.725, p=0.1079), OS에 대한 유의성에는 접근하지 못했다 (HR 1.459, p=0.215). 이러한 발견은 상승된 solCD44 및 단백질 수준이 더욱 공격형의 질환과 연관된다는 것을 나타낸다. 따라서 구강 린스액 시험은 초기 검출이 가장 필요한 질병을 동정할 수 있다.
구강 린스액 시험을 사용한 HNSCC에 대한 스크리닝은 다음 원격 부위의 암을 검출한다: solCD44 및 단백질 수준은 전립선 (7), 결장 (2), 방광 (2), 흑색종 (2), 백혈병/림프종 (1), 유방 (1), 및 골육종 (1)을 포함하는 다른 부위에서의 이전 암 병력을 갖는 임상-기반 대조군 내에서 상승되었으며, 이는 마커가 UADT 이외의 암의 위험을 반영할 수 있다는 것을 지지한다. BHC 대조군 중 한 명에서 상승된 구강 린스액 마커 시험 이후 14개월 후에 폐암이 발병하였다. 임상-기반 연구에서, 사례군 및 대조군 참가자는 수집 당시 UADT 외의 부위에서 암이 있는 것으로 발견될 경우 주요 분석에서 배제되었다. 2개 사례 및 3개 대조군이 이러한 이유로 배제되었다. 결장 및 HNSCC 둘 다를 갖는 한 사례는 정상 수준의 22배에 달하는 64.2 ng/mL의 solCD44의 수준을 가졌다. 원격 암을 갖는 3개 대조군 중 한명은 14ng/mL의 solCD44 수준 및 1.5 mg/mL의 단백질 수준을 갖는 방광암이 있었다. 저등급 구강 전-악성종양의 가능성으로 인하여 배제된 다른 대조군은 4.8 ng/mL의 solCD44 수준 및 1.3 mg/mL의 단백질 수준을 가졌고, 폐암 발병으로 발전하였다. 이러한 데이터는 solCD44 및 단백질 수준이 이것이 임상적으로 인식되기 전에 더욱 원격형의 부위에서 질병을 지시할 수 있다는 것을 나타낸다.
실험적 절차 1
커뮤니티 코호트 등록 및 스크리닝 부위: 주당 1000명의 개체를 돌볼 뿐만 아니라 주거 프로젝트를 제공하는 커뮤니티 코호트 내 푸드 뱅크(food bank) 대상체를 등록하였다. 실베스터(Sylvester) 암 센터의 불균형 해소 및 커뮤니티 봉사활동 중심 (DCO)은 이러한 커뮤니티-기반 협력의 성공을 촉진하였다.
대상체 : 150명의 대상체의 등록을 2년 내에 완료하였다. 환자들은, 그들이 100개 이상의 담배를 일생동안 흡연한 경험이 있고, 40세 초과일 경우 등록하였다. 평균 연령은 51.2세였고, 58.7%은 남성, 100%는 흑인, 99.3%가 비-히스패닉이었다. 117명의 참가자를 등록하였다. 이들 중, 74명이 제1 및 제2 연례 추적 연구를 위하여 돌아왔고, 5명은 추적 연구를 위하여 대기 중이다.
설문: 동의 후, 임상 연구 요원은 결과 해석에 영향을 줄 수 있는 잠재적 공변량에 관한 자세한 정보를 수집하기 위하여 설문지를 부여하였다. 상기 설문지는 BRFSS 조사를 기반으로 하고, 연령, 인종, 민족, 성별, 담배 및 알코올 사용, 사회경제적 상태 (SES), 교육, 영양상태, 및 구강 건강을 포함하는 질문을 포함한다 (조사 기구 참고). 이러한 모든 것은 두경부암에 대한 잠재적 위험 인자와 연관성이 있다. 환자들에게 UADT의 양성 질병에 관한 증상 및 이의 병력에 관한 것을 질문하고, 암을 포함한 기관계 질병의 고찰을 수행한다. 참가자들은 그들의 처방된 약물, 한약 치료, 미등록 약물 및 비타민에 대하여 열거하고, 그들의 담배 제품의 마지막 사용 시점 및 가글, 양치, 또는 먹은 것, 마셨던 것에 대해 질문받는다.
두경부 검사: 동의서 및 설문의 제출 이후, 숙련된 두경부 외과의사 (PI)가 헤드라이트-보조 검사, 구강 혀 및 목의 기저부 촉진, 뇌신경 검사, 비강검사 및 후두 거울 검사를 포함하는 표준 두경부 검사를 수행한다. 악성종양을 나타낼 수 있는 희거나 붉거나, 또는 튀어나오거나 궤양생성된 병변을 생검을 위하여 기록 및 언급한다. 다른 이상, 예컨대 역류성 식도염 및 감염은 지시된 바와 같은 언급과 함께 기록한다. 생검을 보증하도록 충분히 우려되지 않는 반응성 병변 및 궤양을 갖는 환자는 커뮤니티 코호트 부위로 안내하고, 한편 치표 또는 생검을 필요로 하는 환자들은 UM 또는 JMH 두경부 클리닉으로 안내한다. 치아 부식 및 치주 질환의 상대량을 고려하고, 0 내지 2의 범위로 스코어링하였다. 진단 일자에 따른 모든 이상은 데이터베이스 입력을 위하여 문서화한다.
구강 린스액의 수집 및 처리: 혈청 내 solCD44 수준이 정상 상피 구획으로부터 유래된 변이체 이소형에 의하여 크게 오염될 수 있으므로, 구강 린스액이 혈청 측정 대신 사용될 수 있다 (Van Hal NL, et al. Evaluation of soluble CD44v6 as a potential serum marker for head and neck squamous cell carcinomal Clin Cancer Res 1999;5:3534-41). 구강 린스액은 주로 적은 양의 타액 및 염수로 구성되고, UADT 점막과 접촉한다. 연구 요원은 스크리닝 부위에서 대상체로부터 구강 린스액의 수집을 수행한다. 대상체에게 수집하기 적어도 1시간 전에 구강 위생 절차, 흡연, 먹는것, 및 마시는 것을 삼가도록 요구한다 (Navazesh M. Methods for collecting saliva. Ann NY Acad Sci 1993;694:72-7). HNSCC 환자의 가글액을 0 내지 2의 범위로 스코어링하였다. 수집 후, 샘플을 냉장보관하고, 얼음과 함께 실험실로 이송하고, 원심분리하고, 펠렛을 분리하고, 린스액 샘플을 분획하여, 이러한 분획물 및 펠렛을 -80ºC에서 보관한다.
추적 연구: 연례 구강 린스액 수집, 설문 및 신체 검사를 연구 기간동안 수행한다.
데이터수집: 검사 상의 발견을 사전 인쇄된 로그를 사용하여 기록하고 데이터베이스에 입력한다. 설문, 로그, 및 구강 린스액 샘플은 식별 정보를 함유하지 않지만, 대상체에 특이적인 코드로 표지된다. 마스터 로그는 이러한 번호의 정보를 식별하는 것을 연결시켜준다. 이러한 마스터 로그를 검정 수행 동안 환자의 보안 및 맹검을 유지하기 위하여, 분석을 위하여 사용된 데이터베이스로부터 개별 보관한다.
SolCD44 및 단백질 시험: solCD44 ELISA 시험을 다수 출판물 (17-20)에 기술된 변형을 갖는, 제조자 (Bender MedSystems)에 의하여 제공된 지시사항에 따라 수행한다. 샘플을 뱃치 내에서 시험하고, 전체 농도에서 측정하였다. 단백질 검정 (Bio-Rad Laboratories)은 이전에 출판된 바와 같이 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다 (Franzmann, et al. Salivary soluble CD44: a potential molecular marker for head and neck cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14:735-739; Franzmann, et al. Soluble CD44 is a potential marker for the early detection of head and neck cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2007;16:1348-1355; Franzmann, et al. Salivary protein and solCD44 levels as a potential screening tool for early detection of head and neck squamous cell carcinoma. Head Neck. 2012; 34:687-95; Pereira, et al. Salivary markers and risk factor data: a multivariate modeling approach for head and neck squamous cell carcinoma detection. Cancer Biomark. 2011;10:241-9). 결과를 샘플 코드로 분석이 진행될 때까지 환자 정보를 함유하는 데이터베이스로부터 개별적으로 보관된 데이터베이스에 입력하였다.
표 7.
Figure 112016013940930-pct00007
품질 관리: 수용된 범위 외에서 시험된 샘플을 정의된 품질 관리 기준에 기반하여 반복한다. 예를 들어, 최고 표준의 흡광도는 1.5 내지 2.5 범위 내이다. 개별 샘플 및 플레이트내 변화는 10% CV까지 수용된다. 플레이트내 가변성은 20% CV까지 허용된다. 최고 표준 초과의 수준은 ½ 농도로 반복하였다. 모든 반복된 측정 (예컨대, 개별 대상체에 대한 각각의 연례 수집)은 기술적 가변성을 줄이기 위하여 동일한 날 ELISA 플레이트 상에서 수행한다.
실시예 데이터: 마커 수준 결과를 기준선에서, 제1 연례 방문에서 51명의 BHC 대상체에 대해 수득하였다. 이러한 변화를 1년 초과의 기간에 걸쳐 개별 참가자의 마커 수준 내에서 정량화하였고, 이후 이러한 변화를 도표화하여 히스토그램을 형성하였다. 전체적으로, solCD44, log2CD44, 및 단백질에 대하여, 가장 높은 백분율의 참가자가 0의 중앙값에 더 가까운 변동을 갖는 경향을 보였다. 연간 평균 solCD44 수준은 1.63 ng/mL로부터 1.48 ng/mL (p=0.0185)로 감소되었으며 (도3 및 도 7), 이는 그러한 위험이 감소하는 것을 보여준다. 이러한 CD44 변화는 log2CD44의 유의미한 변화와 함께 수반되며, 반면 단백질은 전혀 변화가 없었다
통계적 분석 : 이는 총 5년의 기간에 걸쳐 1년 단위로 진행된 150명의 대상체의 종단 연구이다. solCD44 및 단백질 수준은 등록시 수집될 수 있으며, 후속으로 4회까지 수집될 수 있다. 시간에 따른 비균등 수의 비균등 간격으로의 대상체 관찰이 예상되고, 분석 방법은 이를 설명하기 위하여 설계된다. 마커 데이터는 필요시 변동을 안정화하기 위하여 로그-변형되고, 정상 분포 피트(fit)를 개선한다. 시간-연속 플롯은 개별 및 전체 궤적을 기술하기 위하여 사용되며, 예를 들어 CD44 발현에서의 변화는 연구 대상체의 평균 수준을 전체 시간의 역할로서의, 그리고 설명적 변수에 의한 개별 대상체와 함께 나타냄으로써 묘사된다. 반복된 측정에 대한 일반적인 혼합 효과는 성별, 연령 등과 같은 설명적 변수의 조정과 함께 시간에 따른 마커 수준의 변화를 기술하는데 사용된다. 시간 및 설명적 변수 사이의 상호작용의 유의성은, 시간에 따른 마커 발현의 상이한 패턴이 이러한 변수의 일부에 의하여 정의된 하위그룹에 대하여 발견될 수 있음이 예상된다. 분석을 무작위 효과 모델을 위한 PROC MIXED 절차를 사용한 SAS® 9.3에서 실시한다. 측정치 사이의 의존도를 나타내는 변동-공변량 매트릭스 구조를 표준 통계 기준에 따라 선택한다. 선택된 횟수로 시간 간의, 그리고 하위 그룹간의 사후(post-hoc) 비교를 전체 유형 I 오차 비율을 유지하는 조정과 함께 수행한다.
연구 검정력 예시: 간결성을 위하여, 검정력 예시는 150명의 대상체, 개인당 2개의 반복된 관찰 및 2개 그룹 (예컨대, 흡연 범주)에 기반하여 나타낸다. 쌍을 이룬 데이터 (예컨대 기준선 대 1년 추적연구)를 비교하는 150명의 대상체의 전체 연구 크기는 80%의 검정력을 가지며, 이는 5%의 양측 유의성 수준에서 쌍을 이룬 t-시험에 기반하여, 0.23의 효과를 검출하기 위하여 사용된다. 100명 또는 50명의 대상체(예컨대 현재 흡연자)의 더 작은 그룹 크기 내의 2회 사이의 비교를 위하여, 80% 검정력이 각각 0.28 또는 0.40의 효과 크기를 검출하기 위하여 사용된다. 2개 샘플, 예컨대 소정의 시간(예컨대 등록 시간)에서의 50명의 현재 흡연자 대 100명의 이전 흡연자의 비교를 위하여, 5%의 양측 유의성 수준에서 쌍을 이룬 t-시험에 기반하여, 0.56의 효과 크기를 검출하기 위하여 80%의 검정력이 있다.
표 8.
Figure 112016013940930-pct00008
실험적 절차 2
이상적인 초기 검출 시험이 가역적 단계에서 HNSCC를 동정한다. 이는 초기 질병에서 종종 비가시적이므로 어려움을 겪는다 (Poh CF, et al. Direct fluorescence visualization of clinically occult high-risk oral premalignant disease using a simple hand-held device Head Neck. 2007 Jan;29(1):71-6). 분자적 이미지화는 도움이 될 수 있으나, 별개의 병변 없이는, 환자를 위한 절제성 선택사항은 없다. 따라서, 병변이 아직 동정되지 않았을 경우 대상체 내에서 위험을 줄이는 처치를 갖는 것이 최선이다. 흡연 후 혈청 내 CD44 이소형이 감소한다는 것을 지지하는 근거가 있다. 실험적 절차 2에서, 구강 린스액 내 solCD44 및 단백질 수준이 흡연 중단으로 감소한다는 것이 나타났다.
총 125명의 대상체를 등록하였다. 이들 중, 23명이 1년의 궤적에서 3개월째 흡연사용을 중지하였고, 15명이 1년째 흡연 사용을 중지하였다고 밝혔다. 적어도 3개월간 중지한 사람 중 코티닌 확인(cotinine confirmation)을 15명에서 수득하였다. solCD44 및 단백질 수준의 이용가능한 결과를 표 8에 나타낸다. 이러한 대상체 중 대부분은 대조군 평균 수치이거나 미만의 마커 수준을 갖는다 (solCD44=1.85ng/mL, 단백질=0.63mg/mL).
대상체 : 대상체는 적어도 3개월간 성공적으로 금연하였고, 암 또는 전-악성종양이 없는 개체이다. 참가자는 최초로 커뮤니티 코호트 내 커뮤니티 기관 및 카운티 내의 모집 노력을 통해 모집되었다. 처치 프로그램 (예컨대 그룹 또는 개별 상담, 니코틴 대체 등)의 등록 여부와 상관 없이 금연하고자 하는 흡연자들을 등록하였다. HNSCC의 고위험군인 40세 초과의 개체들을 우선적으로 등록하였다.
흡연 중단 프로그램: 흡연자들을 그들의 요구를 충족시키는 자원 (예컨대, 플로리다 흡연자의 금연 핫라인, 1차 케어, 자기개발 자료, 또는 상담 프로그램)으로 안내한다. 니코틴 대체요법과 조합된 행동 치료에 관심있는 현재 흡연자를 처치를 위한 UM 클리닉으로 안내한다. 프로그램은, 인지적 행동 전략을 사용하는 집중, 그룹-기반의 상담을 포함한다. 참가자들에게 그들이 선호하는 금연 프로그램을 완료하고 전화 또는 메일로 참가자들과 연락을 유지하도록 안내한다.
구강 린스액, 타액 샘플, 및 설문: 대상체는 구강 린스액, 타액 샘플을 제공받고, 금연 전에 금연 클리닉에서 설문을 완료한다. 혈청 solCD44 수준은 흡연 중단 후 제1의 4주 내에 20-30% 감소하며, 따라서 수집 전 1주 초과로 흡연 중단했던 대상체가 배제된다 (Scott DA, et al. Plasma concentrations of reputed tumor-associated soluble CD44 isoforms (v5 and v6) in smokers are dose-related and decline with smoking cessation. 2000 Cancer Epidemiol Biomark Prev 2000;9:1211-4). 온전한, 비자극된 타액을 5분간 시료 컵으로 수집한다. 타액 샘플을 분석 동안 냉장보관한다. 수집 및 설문을 기준선 (중지 전), 및 중지 후 3개월째에, 그리고 1년째에 부여한다.
SolCD44 , 단백질 및 코티닌 검정: 코티닌은 니코틴의 주요 대사물이고, 담배 노출의 바이오마커로서 널리 사용되어 왔다. 타액 코티닌 수준을 제조자의 지시사항에 따라 키트 (Salimetrics)를 사용하여 측정한다. SolCD44 및 단백질 검정을 이에 따라 수행한다
추적 연구: 환자들을 흡연 중단 클리닉으로 유도한다. 3개 시점에서의 구강 린스액 및 설문.
데이터수집: 샘플 수집 및 설문지 투여 일자, 중지 시작 및 중지 종료 일자를 포함하는 흡연 중단 유지 데이터를 로그에 기록하고 사생활 보호를 사용한 데이터베이스에 입력한다.
통계적 분석: solCD44, 단백질 및 코티닌수준을 중지 후 3개월째에, 그리고 1년째에 흡연 중단 프로그램에 등록한 모든 대상체로부터 수집한다. 금연자 대 비금연자를 흡연 중단 프로그램 완료 후 마커 수준에 대해 비교하여, 2개 샘플의 t-시험, 또는 다중 회귀 모델을 사용하여 설명적 변수의 조정을 가능케한다. 성공적인 금연자들중 관심 마커에 대한 종단적 데이터 분석은, 대상체 및 그룹 플롯으로 시작하는, 상기 기술된 마커 수준과 시간 기능으로서 유사하다.
연구 검정력 예시: 검정력의 예시로서, 쌍을 이룬 데이터의 비교를 위한 30명의 금연자들로 구성된 연구 크기 (예컨대 사전 흡연 중단 프로그램 대 완료 후 3개월 및 1년)는 0.53의 효과 크기를 검출하는 80%의 검정력을 가지며, t-시험 및 5%의 양측 유의성 수준에서 0.5의 쌍을 이룬 관찰 사이의 연관 관계에 기반한다. log2sol CD44의 평균 (및 표준 편차)는 현재 흡연자들 중 1.6 (0.7)이었으며; 따라서 효과 크기 0.53은 0.4 (0.86)의 평균 차 (log2sol CD44의 25% 감소분임 (1.6 내지 1.2))와 상응한다. 비교를 위하여, 흡연 중지 프로그램을 종료한지 3개월 후에 마커 수준에 대한 금연자 대 비금연자는, 2개 샘플 t-시험 및 5%의 양측 유의성 수준을 기반으로, 0.62의 효과 크기를 검출하는 80%의 검정력을 가지며, 이는 30명의 금연자 및 90명의 비금연자의 연구 크기로 추정된다.
실험적 절차 3
포함 기준: 대상체 (n=30)를 만약 그들이 새로 진단된, 생검 입증된 구강 또는 구인두의 편평상피 세포 암종을 갖는다면 포함한다. 치료 (예컨대, 수술, 화학요법, 방사선)는 통계적인 분석에서 언급 및 기술된다. 대상체를 UM 및 JMH에서의 두경부 클리닉으로부터 등록한다. 진단은 수술적 병리학 보고에 의하여 확정된다.
배제 기준: UADT를 포함하는 임의의 조직학의 이전 암을 갖는 환자는 배제한다. 하인두, 비인두, 부비동, 식도, 타액샘 내에 또는 후두 내에 또는 아래에 위치한 일차 편평상피 세포 암종의 병력을 갖는 환자는 배제한다. 임신중 또는 수유중인 여성은 배제하였다. 피부의 상피 또는 기저 세포 암종을 배제한 다른 부위에서의 임의의 이전 암 병력을 갖는 환자가 배제하였다.
구강 린스액 수집, solCD44 및 단백질 검정, 데이터 수집: 모든 수집 (설문 포함) 및 검정 절차는 본원에 개시된다. 완료된 AJCC 단계 정보, p16 단계를 포함하는 병리학적 특성 (기관 표준 당) 및 예컨대 화학요법, 방사선 요법, 수술과 같은 주어진 치료의 유형 및 기간이 문서화될 것이다.
치료 전과 후의 종양 측정: 표준 RECIST (고령 종양 내 반응 평가 기준)을 사용하여 측정을 수행하였다 (Eisenhauer EA, et al. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 2009;45:228-47). 종양은 표준 이미지화에 의하여 측정가능하여야 한다. 이미지화 시점은 기관 프로토콜에 따른다.
구강 린스액 수집을 위한 시점: 구강 린스액을 진단 (기준선) 시에, 방사선 투여시 요법을 완료한지 3개월 후 (방사선은 최종 용량 투여 후 약 3개월간 약효가 유지되므로) 및 방사선 비투여시 요법을 완료한지 1개월 후에 수집한다.
통계적 분석: solCD44 마커 수준은 치료에 대한 반응과 함께 감소하는 것이 측정되었다. 분석을 위한 데이터는 1) solCD44 및 단백질에 대한 구강 린스액으로부터의 결과 및 2) 치료 전과 후의 종양 측정치 3) 종양 특성, 치료, 및 위험 인자 (예컨대, 흡연)의 기술을 포함한다. 정량적 변수 (예컨대 solCD44 및 총 단백질)은 평균 및 표준 오차 측면에서 요약된다. 데이터는 필요시 변형되어, 정상 분포 피트(fit)를 개선한다. 범주 변수는 계수 및 백분율로 요약된다. 전체 마커가 치료 전과 후에 어떻게 변화하였는지를 관찰한다. 이는 종단 설계에 상응하며, 여기서 solCD44 및 단백질 수준은 치료전 및 치료 후에 수집된다. 일반적인 혼합 효과 모델은, 작은 샘플 크기를 갖는 공변량에 대한 조정과 함께 전-치료 대 후-치료의 마커 수준 변화를 기술하기 위하여 반복 측정을 위하여 사용된다. 분석을 무작위 효과 모델을 위한 PROC MIXED 절차를 사용한 SAS® 9.3에서 실시한다. 측정치 사이의 의존도를 나타내는 변동-공변량 매트릭스 구조를 표준 통계 기준에 따라 선택한다. 특정 시간에서의 시간 간의, 그리고 하위그룹 간의 (예컨대 인종 범주) 쌍별 비교를 전체 유형 I 오차 비율을 유지하는 조정과 함께 수행한다.
연구 검정력 및 정밀성: 사례는 그들의 흡연 상태에 따라 치료에 대한 완전 관해 (CR)를 가질 수 있다 (Browman GP, et al. Influence of cigarette smoking on the efficacy of radiation therapy in head and neck cancer. N Engl J Med. 1993;328:159-63). 마커 수준의 측정을 위하여, 15명의 CR 환자의 하위그룹 내 치료 전과 후(50% CR 비율)은 5%의 양측 유의성 수준에서 쌍을 이룬 t-시험에 기반하여, 0.67의 작은 효과 크기 내지 보통의 효과 크기를 검출하기 위하여 80%의 검정력을 가질 수 있다. 21명의 CR 환자 (70%의 CR 비율)를 추정시, 0.55의 효과 크기를 검출하기 위하여 80%의 검정력이 있다.
실시예 2: HPV 양성 상피세포 암종 , CD44, 및 HPV 양성 자궁경부 감염
방법
HNSCC 및 150개 대조군을 갖는 150명의 환자를 2007년 1월 및 2013년 9월 사이에 프로토콜에 따라 등록하였다. 그들을 연령, 민족, 담배 및 알코올 사용에 대해 매칭하였다. 그들을 이비인후과 클리닉 및 암 센터로부터 등록하였다. 대조군 대상체는 클리닉에서 담배 또는 알코올 섭취 설문에 "예"라고 답할 경우 접근되었다. 대조군은 그들이 잠재적인 악성 병태를 갖고 있을 경우 배제하였다. 사례군 대상체는 생검 입증된 모든 단계 및 부위의 두경부 편평상피 세포 암종을 갖는 모든 환자들이었다. 비인두 암종을 갖는 대상체들은 배제하였다. 대상체는 또한 임신중이거나, HIV에 감염되었을 경우 배제하였다.
구강인두 암을 갖는 31명의 여성의 하위그룹을 동정하였고, 21명은 IHC를 사용하여 HPV 대용물 마커 p16에 대해 시험하였다. 구강인두 HPV 상태를 확인하기 위하여 그들의 차트를 검토하였다. 추가적인 차트 검토를 자궁경부 HPV 상태를 평가하기 위하여 세포진검사(PAP smear) 및 1차 케어 기록을 통하여 완료하였다. 34명의 여성 대조군들의 하위 그룹을 동정하였다. 추가적인 차트 검토를 이러한 대상체들에 대하여 자궁경부 HPV 상태를 평가하기 위하여 세포진검사(PAP smear) 및 1차 케어 기록을 통하여 완료하였다. 세포진검사(PAP smear test)는, 그들이 적어도 비측정된 유의성의 이형의 편평상피 세포(ASCUS)의 증거를 나타낸다면 양성으로 고려되었다.
구강 린스액 수집
정상 염수의 5 mL로 5초간 가글하였고, 5초간 교반하였고, 이후 시료 컵에 두었다. 타액을 이송을 위하여 얼음에 두었고, 80도에서 저장하였다.
단백질 검정
총 단백질 농도를 BioRad 단백질 검정(BioRad, Hercules, CA)를 사용하여 측정하였다. 단백질 평가를 이중으로 수행하였다.
용해성 CD44 검정
구강 린스액 시료 내 solCD44 농도를 효소-연결된 면역흡착 검정 (Bender MedSystems, Vienna, Austria)을 사용하여 측정하였다. 전체가 정상 CD44의 변이체 이소형이었다. 샘플을 와류하고, 원심분리하였고, 상청액을 연구에 사용하였다. 모든 실험은 이중으로 수행하였다. 통계적 분석을 만-휘트니-윌콕손(Mann-Whitney-Wilcoxon; MWW)에 의하여 수행하였다. 귀무가설(null hypothesis)의 비-모수적 시험을 수행하였다.
결과
인구 통계
대조군은 34명의 개체로 구성되었다. 3%의 백인 비-히스패닉, 6%의 흑인 히스패닉, 44%의 흑인 비-히스패닉, 및 47%의 백인 히스패닉이 있었다. 31명의 개체가 있는 사례 그룹 중, 29%가 비-히스패닉, 26%가 흑인 비-히스패닉, 및 45%가 백인 히스패닉이었다.
구강인두 편평상피 세포 암종 및 p16 상태
21명의 개체가 있는 그룹 중, 36%가 p16에 대해 양성이었다. 이러한 p16 양성 개체 중, 4명이 흑인 비-히스패닉이었고, 4명이 백인 히스패닉이었다. 잔여 64%는 p16에 대하여 음성이었다.
자궁경부 세포진 검사(PAP Smear)
19명의 개체가 있는 대조군 그룹 중, 26%가 세포진 검사(PAP smear) 양성이었고, 한편 74%가 세포진 검사(PAP smear) 음성이었다. 8명의 개체가 있는 대조군 그룹 중, 38%가 세포진 검사(PAP smear) 양성이었고, 한편 62%가 세포진 검사(PAP smear) 음성이었다. 대조군내 세포진검사(PAP smear)에 기반한 solCD44 및 단백질 수준의 차이는 도 4a 및 4b에서 나타날 수 있다.
검토
p16 시험의 시행 측정이 구강인두 편평상피세포 암종을 갖는 모든 환자에서 수행되었다. 양성 세포진검사(PAP smear)는 구강인두 편평상피 세포 암종에 대한 잠재적 위험으로서 나타났다. 양성 세포진검사(PAP smear)의 경우는 대조군보다 사례군 내에서 더 높았다. solCD44 수준은, 세포진검사(PAP smear) 음성인 환자들과 비교하여, 세포진검사(PAP smear) 양성인 환자 내에서 더 높았다.
Biron 등은, 구강인두 편평상피세포 암종 환자 내 자궁경부암 발병 위험이, 일반 집단과 비교하여 증가하였다는 것을 실증하였다. 이는 위험이 적어도 25배 더 크고, 더욱 보편적으로는 편도 종양 (55%), 다음으로는 기저부 종양 (25%)임을 보여주었다. 2개의 이전의 연구는 자궁경부암을 갖는 여성의 큰 코호트 내의 2차 원발성 종양 비율 및 구강인두 편평상피세포 암종의 발병 위험이 일반 집단 내 여성과 비교하여 증가하였다는, 역 연관규칙을 연구하였다. 상기 역학 연관규칙은 자궁경부 및 구강인두 사이의 HPV 동시감염 가능성을 반영한다.
일 사례는, 자궁경부의 고위험 HPV 및 이후의 자굼경부 암 및 p16 구강암을 갖는 환자를 보여주었다. 25년전 자궁절제술 이력이 있는, p16 구강인두 편평상피세포 암종을 갖는 또 다른 환자는 원위치 혼성화에 의하여 p16 양성 및 HPV 양성으로 나타났다.
실시예 3: 구강암 스크리닝을 위한 위험 계층화 시스템
다중 기관, 사례군-대조군, 병원-기반 설계를 성별, 인종, 민족, 담배 및 알코올 사용, 및 사회경제적 상태 (SES)에 대해 빈도 매칭된 150명의 구강암 환자 및 150명의 대조군으로부터의 구강 린스액 내 가용성 CD44 (CD44) 및 총 단백질 수준을 측정하기 위하여 사용하였다. 다변량 분석을 마커 및 사례군/대조군 상태 사이의 연관관계를 측정하기 위하여 수행하였다. 무진행 (PFS) 및 전체 생존(OS)는 사례군 내에서 측정하였다. 참조 대조군 및 수준으로서의 역할을 하는, 진행 중인 공동체-기반 구강암 스크리닝 프로젝트 (n=150)로부터의 대상체의 1년에 걸쳐 마커 수준 변화를 측정하였다.
병원-기반 대상체들을 CD44 및 단백질 각각에 대한 2개의 컷포인트를 기반으로 5개 그룹으로 다변량 재귀 분할 계층화하였다. ≥5.33 ng/mL의 CD44는 사례군 상태와 높은 수준으로 연관되었다 (조정된 OR 14.714, 95%CI: 6.094, 35.527; p<.0001, 대 CD44가 <2.22 ng/mL이고 단백질이 <1.23 mg/mL인 최저 위험 그룹 (참조로서)). CD44 수준이 <5.33 ng/mL일때, 총 단백질은 사례 상태 예측에 도움을 준다. ≥5.33 ng/mL의 CD44는 불량한 PFS와 연관되었다 (조정된 HR=3.588, 95%CI: 1.558, 8.265, p=0.0027) 및 OS (조정된 HR=2.882, 95%CI: 1.165, 7.130, p=0.022). 대상체에 대한 마커 수준은 유의미하게 감소하였다 (CD44:24%, p<.0001, 단백질: 16%, p=0.036) (1년간 커뮤니티-기반 스크리닝 실험에 남아있는 대상체 (n=95)).
연구 프로토콜
대상체를 마이애미 대학 실베스터(Sylvester) 통합 암 센터 (UM) 및 잭슨 메모리얼 병원 (JMH) 클리닉으로부터 2007년 내지 2012년에 모집하였다. 모든 실험을 세계 의학 연합의 윤리 강령 (헬신키(Helsinki) 선서)에 따라 각 대상체의 서면 동의서와 함께 수행하였다. 이러한 연구는 성별, 인종, 민족, 담배 및 알코올 사용, 및 사회경제적 상태 (SES)에 대해 빈도 매칭된 150명의 구강암 환자 및 150명의 대조군 내의 용해성 종양 마커를 평가하였다. 구강암 사례군은 구강인두 (OP) 및 구강 (OC)을 포함하는 HNSCC를 갖는, 새로 진단된, 이전에 비치료된 대상체를 포함하였다. 대상체들을 보험가입 환자를 돌보는 사설 대학 병원 시스템(UM) 및 저소득 환자를 1차로 돌보는 카운티 병원 시스템(JMH)에서 동등하게 모집하였다. 대상체는 인구학적, 행동적 위험 인자 및 SES를 포함하는 기준 설문을 완료하였다. 사례군에 대해, 종양 특성 및 지출에 대한 데이터를 의료 기록 및 종양 레지스트리로부터 추출하였다. 암에 대한 우려스러운 병변을 갖는 대조군을 배제하였다. HIV 양성 또는 임신중인 개체를 배제하였다. 배제 결정을 마커 수준 결과 인식 없이 수행하였다.
검증을 위하여, 노스 마이애미-데이드(Dade) 카운티 내 저소득 커뮤니티로부터의 담배 또는 알코올 사용 이력을 갖는 150명의 개체로 구성된 대조군 코호트를 포함하였다. 이러한 커뮤니티 코호트를 시간, 기준선, 및 연간 추적연구하였으며, 스크리닝된 집단 내 마커 변화를 평가하기 위하여 구강 린스액을 수득하고 측정하였다. 원래 비흡연자인 21명의 정상 지원자들로 구성된 또 다른 대조군 코호트를 또한 포함하였다. 최종적으로, 27개 구강 및 구강인두 사례들 및 위험 인자 및 UADT의 양성 질병 이력을 갖는 39개 대조군들 (그 수준은 이전 병원-기반 연구의 부분으로서 시험되었음)을 포함하였다 (Pereira, et al. Cancer Biomark 2011;10:241-9).
실험실 분석
이전에 발표된 절차를 사용하여 구강 린스액 샘플을 수집하였다 (Franzmann et al. Head Neck 2012;34:687-95; Pereira et al. Cancer Biomark 2011;10:241-9; Franzmann et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2007;16:1348-55). solCD44 (정상 및 변이체 이소형) 수준을, 이전에 공보된 변형을 갖는, 샌드위치 ELISA 검정 (eBioscience)을 사용하여 측정하였다. DC 단백질 검정 (Bio-Rad 실험실)을 이전에 출판된 바와 같이 제조된 타액 샘플을 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다 (Franzmann et al. Head & neck 2012;34:687-95; Pereira LH et al. Cancer Biomark 2011;10:241-9; Franzmann et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2007;16:1348-55). 각 샘플들을 중복 시험하였으며, 기술자는 질병 상태에 대하여 맹검되었다. 흡광도를 마이크로플레이트 판독기 (Bio-Rad 실험실)상에서 판독했고, 농도를 표준 곡선을 사용하여 측정하였다.
포르말린-고정되고, 파라핀-포매된 시료는 가능할 경우 (n=79), 사례군에서 회수하였다. HPV 상태를 HPV 상태에 대한 수용된 대용물 마커인 p16INK4A 면역조직화학 (IHC)을 사용하여 평가하였다 (Hafkamp et al. International Journal of Cancer 2008;122:2656-64; El-Naggar et al. Head Neck. 2012, 34:459-61). p16INK4A를 68개 시료에서의 제조자의 IHC 프로토콜에 따라 수행하였다. HPV 상태를 또한 IHC (n=10) 또는 원위치 혼성화 (ISH) (n=1)로 차트 고찰을 통하여 평가하였다. 모든 시료를 환자에 대한 임상적 데이터에 대해 맹검된 연구 병리학자 (CG)에 의하여 검토하였다. p16INK4A 발현을, 강력하고 확산형의 핵 및 세포질 염색이 종양 시료에서 ≥50%일 경우, 양성으로 스코어링하였다 El-Naggar et al. Head Neck. 2012;34:459-61).
통계적 분석
환자 그룹을 카이-스퀘어(chi-square) 시험 또는 피셔 정확성 시험(Fisher’s exact test)을 사용하여 잠재적으로 중요한 범주 공변량의 분포에 대해 비교하였다. CD44 데이터를 로그 아래첨자-2 변형하여 변동을 안정화하고, 정상 분포 피트(fit)를 개선한다. 스튜던트 t-시험 또는 변이 분석 (ANOVA), 이후 피셔 최소-유의미-차(Fisher’s least-significant-difference) 시험을 사용하여, 사전-명시된 대조의 쌍별 평균 비교 및 시험을 위하여 연속 변수를 분석하였다. 로지스틱 회귀 분석을 마커 및 구강암 위험 사이의 연관관계를 측정하기 위하여 사용하였다. 승산비 (OR) 추정치를, 피팅된 모델에 대한 동작 특성 곡선 (ROC)의 상응하는 95% 신뢰 구간 (95%CI) 및 곡선하 면적 (AUC)과 함께 보고하였다. 또한, 마커 및 공변량 사이의 유의미한 상호작용을 포함한 피팅된 다변량 로지스틱 모델, 뿐만 아니라 다변량 재귀분할 분석을 사용하여 유래된 CD44 및 단백질에 대한 컷포인트를 기반으로 한 위험 그룹을 포함하는 모델로부터의 민감성, 특이성, 및 정확성의 추정치는 (Breiman, et al. 1984 Classification and Regression Trees. Wadsworth, Belmont, CA)는 R-패키지 MVPART (v.1.6.1.) 및 재귀 분할 및 회귀 트리 (RPART), 버젼 1.6-0에서 실행되었다. 카플란-마이어 및 콕스 휘귀 모델을 PFS 및 전체 OS를 평가하기 위하여 사용하였다. 위험 비율 (HR) 추정치 및 상응하는 95%CI를 보고하였다. SAS 버전 9.2 (SAS Institute, Inc.) 및 R 패키지를 사용하여 통계적 분석을 수행하였다.
결과
병원-기반 사례-대조군 연구의 특성
150명의 구강암을 갖는 환자 및 150명의 대조군을 포함하는 병원-기반 사례군-대조군 연구의 기술은 표 9에 요약된다.
표 9. 사례군 및 대조군의 특성
Figure 112016013940930-pct00009
연령, 성별, 인종, 구강 건강 (발치 개수), 흡연 이력, 음주 습관, 또는 그들의 카운티 (JMH) 대 사설 병원 시스템 (UM)으로부터의 등록 여부에 대하여, 사례군 및 대조군 사이에 유의미한 차이는 없었다. 표 10은 사례 중 암-특이적 특성을 보여준다. OP 환자들은, OC 환자와 비교하여, 말기 단계 (III/IV 대 I/II; p<.0001)에 존재하고, 더 많이 진전된 N-상태 (N1-N3 vs. N0, Nx; p<.0001)를 나타내고, HPV + 대 HPV - 종양 (p<.001)를 가질 가능성이 더 많았다.
표 10. 150개 사례 중 질병에 의한 단계 및 HPV 상태
Figure 112016013940930-pct00010
Log2CD44 (이하 CD44) 및 총 단백질을, 사례군 및 대조군 사이 및 이내의 위험 인자 또는 인구학적 변수에 대하여 평가하였다(표 11). CD44 및 단백질 수준은, 연령, 성별, 민족/인종, 흡연 습관 또는 음주 습관이 고려되었을 때 p<0.05의 수준에서 대조군과 비교하여 사례군에서 더 높았다. CD44 수준은 사례군 그룹 내에서 연령 (더 고령의 환자에서 더 높은 수준), 가글 (더 불량한 가글 능력에서 더 높은 수준), 및 치아 손실 (더 많은 치아 손실에서 더 높은 수준)에 따라 유의미하게 변화하였으나, 대조군 그룹 내에서는 아니었다. CD44 및 단백질 수준은 TNM 상태 또는 HPV 상태에 의해 유의미하게 달라지지 않았다.
표 11. 환자 그룹 및 주요 변수에 의한 R01 HNSCC 연구의 구강 린스액 내 log 2 solCD44, 및 단백질 수준
Figure 112016013940930-pct00011
표 11. 환자 그룹 및 주요 변수에 의한 R01 HNSCC 연구의 구강 린스액 내 log 2 solCD44, 및 단백질 수준 (계속)
Figure 112016013940930-pct00012
P: 전체 평균의 균등성의 ANOVA 국제적 시험으로부터의 p 값. 상기 상동한 문자는 피셔 최소-유의미-차(Fisher’s least-significant-difference) 시험에 의한, 5% 수준 (문자 a, b, c) 또는 10% 수준 (문자 w, y)에서 유의미한 주요 변수의 그룹 또는 범주 내 쌍별 평균 비교를 식별한다.
위험 모델링
단일변량 분석에서, 2.036의 CD44의 1-단위 증가 (95%CI:1.552, 2.671, p<0.0001, AUC=0.68) 및 2.159의 단백질의 1-단위 증가 (95%CI:1.288, 3.617, p<0.0035, AUC=0.59)로 CD44 및 총 단백질은 대조군으로부터 암 사례를 구별하였다. AUC는 중요한 변수 및 그들의 상호작용에 대한 조정 후 0.757로 개선되었으며; CD44에 대한 OR은 2.668로 상승하였고 (95%CI: 1.794, 3.968 p<.0001), 한편, 단백질에 대한 승산비는 1 미만이 되어 유의미하지 않았다 (OR=0.661, 95%CI: 0.312, 1.399, p=0.279) (표 12 패널 A).
구강인두 HNSCC를 갖는 비흡연자 내 빈번한 HPV+ 종양은 흡연 및 알코올 유도된 종양과 비교하여 더 양호한 예후를 갖는다. p16INK4A (HPV 상태 대용물)로 분류된 분석에 대한 발견은 상기 조합된 분석과 유사하였다 (Hafkamp et al. International Journal of Cancer 2008;122:2656-64; El-Naggar et al. Head Neck. 2012, 34:459-61). HPV 그룹에서, 단백질 수준은 다변량 분석 후 유의미한 보호성 효과와 연관되었다 (표 12 패널 B).
CD44 및 단백질 사이의 관계, 질병 존재의 예측에 대해 더 깊은 이해를 위하여 다변량 재귀 분할 및 로지스틱 회귀 분석을 채용하였다 (표 12 패널 C). 분류 트리 결과, CD44 및 단백질에 대한 2개의 컷포인트를 기반으로 한 다음의 5개의 유의미한 위험 그룹이 "대조군" 대상체로 분류되었다: 그룹 1 (CD44 <2.22 ng/mL이고, 단백질 <1.23 mg/mL이고, n=102임), 및 그룹 4 (CD44 ≥2.22 & <5.33 ng/mL이고, 단백질 ≥0.558 mg/mL이고, n=116임), 그리고 "사례군" 대상체로서 그룹 2 (CD44 <2.22 ng/mL이고, 단백질 ≥1.23 mg/mL이고, n=5임), 그룹 3 (CD44 ≥2.22 & <5.33 ng/mL이고, 단백질 <0.558 mg/mL이고, n=20임), 및 그룹 5 (CD44 ≥5.33 ng/mL이고, 단백질 수준과 무관하게, n=57임) (표 12 패널 C). ≥5.33 ng/mL의 CD44는, 단백질 수준과 무관하게, 사례군 상태와 높은 수준으로 연관되었다 (OR=11.830, 95%CI: 5.279,26.508;p<0.0001, 그룹 5 대 1을 참고로서 비교). CD44 수준이 <5.33 ng/mL일 때, 총 단백질은 위험 규모 측정에 도움을 준다. 예를 들어, CD44가 <2.22 ng/mL이고, 단백질이 >≥1.23 mg/mL의 환자 (그룹 2)는, 그룹 1의 환자와 비교하여 사례 (OR=10.069, 95%CI: 1.079, 93.93, p<0.05)가 되는 보다 유의미하게 높은 위험을 갖는다. 예를 들어, CD44 <2.22 ng/mL & <5.33 ng/mL 및 0.558 mg/mL 미만의 단백질의 환자 (그룹 3)는, 그룹 1의 환자와 비교하여 사례 (OR=10.069, 95%CI: 3.103, 32.672, p=0.0001)가 되는 보다 유의미하게 높은 위험을 갖는다. CD44가 ≥2.22 ng/mL & <5.33 ng/mL이고, 단백질이 ≥0.558 mg/mL인 환자 (그룹 4)에 대하여, 사례 (OR=2.192, 95%CI: 1.247, 3.854, p=0.006)가 되는 보다 낮지만 유의미한 위험이 관찰되었다. 인구학적 및 위험 인자를 포함하는 다변량 모델로부터 유래된 OR은 ≥5.33 ng/mL의 CD44 수준이 사례 상태와 계속적으로 높은 수준으로 연관되고 (조정된 OR=14.714, 95%CI: 6.094, 35.527; p<.0001) 및 총 단백질 수준이 사례 상태의 예측을 돕는다는 것을 보여주었다 (표 12 패널 C).
표 12. 예측 모델
Figure 112016013940930-pct00013
AUC: ROC 곡선하면적. 재설계된 R2: 측정 계수가 모델로 설명된 확산을 측정하였다. 승산비: 연속 변수 log2 CD44, 단백질, 및 연력에 대한 1-단위 증가; 인종/민족 (WNH 및 Black 대 WH), 성별 (남성 대 여성), 흡연 및 알코올 (경험 있음 대 경험 없음), 및 발치된 치아 (6개 이상 또는 전체 대 5개 이하).
표 12. 예측 모델 (계속)
Figure 112016013940930-pct00014
로지스틱 회귀 모델은 CD44-단백질 위험 그룹 (5개 카테고리, p<0.0001), 연령 (≥60 대 <60, p=0.060), 성별 (남성 대 여성, p=0.016), 인종/민족 (백인 비히스패닉(WNH) 및 백인(WH) 대 흑인, p=0.0027), 알코올 (경험있음 대 경험없음, p=0.0103), 및 상호작용 인종/민족×연령 (p=0.0138) 및 성별×알코올 (p=0.0063)를 포함하였다. 흡연 (경험있음 대 경험없음, p=0.844) 및 제거된 치아 (6 이상 또는 전체 대 5 이하, p=0.274)는 이의 포함이 모델 핏을 개선하지 않으므로 모델에 포함되지 않았다.
표 11, 패널 A는 보다 높은 백분율의 HPV+ 대상체가 위험 그룹 3 내에 있고, 한편, 보다 높은 백분율의 HPV- 대상체가 위험 그룹 4 내에 있다는 것을 나타낸다. 단계 IV 질병을 갖는 환자는 덜 진행된 종양을 갖는 환자와 비교하여 위험 그룹 1 또는 5에서 더욱 보편적이다 (표 13, 패널 A).
표 13. HNSCC 검출 및 예후 측정에서의 SolCD44 /총 단백질 시험
Figure 112016013940930-pct00015
1PFS에 대한 콕스(Cox) 비례 위험 모델은, 위험 그룹 (5개 카테고리, p=0.0181), 단계 (III/IV 대 I/II, p=0.0117), 인종 (흑인 대 기타, p=0.0066), 인종 (비-히스패닉 대 히스패닉, p=0.5964), 성별 (여성 대 남성, p=0.5779), 및 연령 (p=0.2112)을 포함하였다.
2OS에 대한 콕스(Cox) 비례 위험 모델은, 위험 그룹 (5개 카테고리, p=0.0750), 단계 (III/IV 대 I/II, p=0.0315), 인종 (흑인 대 기타, p=0.0041), 인종 (비-히스패닉 대 히스패닉, p=0.1091), 성별 (여성 대 남성, p=0.2663), 및 연령 (p=0.0725)을 포함하였다.
표 13 (계속)
Figure 112016013940930-pct00016
마커의 예측적 유의성
위험 그룹에 의한 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존(OS)에 대한 카플란-마이어 곡선은 도 5a 및 5b에서 나타난다. 위험 그룹에 의한 PFS 및 OS에 대한 비조정된 및 조정된 위험 비율 (HR) 추정치는 표 13, 패널 B에서 나타난다. 종양 단계, 연령, 성별 인종 및 민족, 위험 그룹 5 (높은 CD44)에 해당되는 병원-기반 사례에 대한 조정을 갖는 다변량 분석에 기반하여, 위험 그룹 1 내의 사례와 비교하여 감소된 PFS (조정된 HR=3.588, 95%CI: 1.558, 8.265, p=0.0027) 및 OS (조정된 HR=2.882, 95%CI: 1.165, 7.130, p=0.0220)를 갖는다. 위험 그룹 2는 위험 그룹 1의 사례와 비교하여 감소된 PFS (HR=3.863, 95%CI: 0.966, 15.445, p=0.056) 및 OS의 유의미하지 않은 차이 (HR=2.406, 95%CI: 0.579, 9.990, p=0.2268)와 경계성 연관을 가지며; 그러나 이러한 그룹은 4개 사례만을 포함하였다.
민감성 및 특이성
사례 상태를 예측하기 위한 민감성이 80.7%였다 (표 13c). 이는 2006년 병원-기반 연구에서 입증되었다 (민감성 77.8%).33 2012년 병원-기반 사례에서는, 민감성이 단계 I-III 암에 대하여 88%에 달했다 (표 13C). HNSCC에 대한 고위험에 처한 커뮤니티 (n=150, 98% 흡연자, 건강관리에 대한 불량한 접근) 및 주로 비흡연자였던 정상 지원자인 병원-기반 대조군 내의 특이성이 입증되었다 (표 13C). 특이성은 정상 지원자 코호트 (95.2%)에서 가장 컸다. 추가적인 평가에서, 10% 초과의 병원 기반 대조군 대 1% 미만의 커뮤니티 코호트는 UADT 이외의 이전 암 병력을 가졌다는 것이 발견되었다. 이전 암 병력을 가진 병원-기반 대조군은 이전 암이 없는 대조군에 비하여 유의미하게 높은 solCD44 수준을 가졌다 (p<0.05).
위험의 역전
커뮤니티-기반 코호트 내 총 95명의 환자들이 기준선 및 연례 추적연구 수집을 제공하였다. 1년에 걸친 CD44 및 단백질 수준의 변화 분포는 도 5c 및 5e에 각각 나타난다. 평균 CD44 수준은 기준선에서 1.829 ng/mL, 1년 추적연구에서 1.390 ng/mL였다. CD44 수준의 평균 연간 감소치인 -0.439 ng/mL (24%)는 유의미하였다 (p<.0001). 선형 회귀 분석은 보다 낮은 CD44 값 (R2=0.227, 절편값=0.785 (p<.0001), 기울기=0.331 (p<.0001))에 대해 유의미한 선형 경향을 확인하였다 (도 5d). 평균 단백질 수준은 또한, 선형 회귀 분석 (R2=0.108, 절편값=0.284 (p=0.002), 기울기=0.402 (p<.0001))의 확인과 함께, 0.644mg/mL로부터 0.543 mg/mL로 유의미하게 감소하였다(p=0.036) (도 5f). 이러한 변화가 연간 과정에 걸친 검정 상태의 변화에 기인하였는지 여부를 측정하기 위하여, 기준선 제2 분취량 (기준선 2)는 각 검정 (단백질 및 CD44)에 대한 81개 쌍을 갖는 연간 추적조사 수집과 동일한 플레이트에서 수행되었다. 기준선 2 및 연간 추적조사 사이의 수준 감소는 오직 CD44에 대해 유의미하였으며 (CD44: -0.296ng/mL, p=0.023; 단백질: -0.013 mg/mL, p=0.796), 한편 회귀 분석은 양자 마커 모두에 대한 보다 낮은 숫자에 대한 유의미한 경향을 보여주었다 (CD44: R2=0.227, 절편값=0.882 (p<.0001), 기울기=0.288 (p<.0001); 단백질. R2=0.155, 절편값=0.256 (p=0.008), 기울기=0.534 (p<.0001). 2개의 기준선이 기준선 1 상의 기준선 2의 선형 회귀에 의하여 비교되었다. CD44에 대하여, 연관성은 높았고 (R=0.899), 절편값은 0으로부터 유의미하게 상이하지 않았고(p=0.150), 기울기는 1로부터 유의미하게 상이하지 않았으며 (p=0.881), 이는 2개가 동등하다는 것을 나타낸다. 단백질에 대하여, 연관성은 높았고 (R=0.925), 절편값은 0으로부터 유의미하게 상이하지 않았고(p=0.712), 기울기는 1로부터 유의미하게 상이하지 않았으며 (0.85, p<.001), 이는 단백질에 대한 기준선 사이의 차이가 예상된 무작위 변화 내에 있지 않다는 것을 나타낸다.
1년간의 추적 연구 후에, 중도 (위험 그룹 4, n=14) 또는 고도 위험 그룹 2, n=1, 위험 그룹 3 n=5 및 위험 그룹 5 n=2) 내의 22개의 커뮤니티 대상체 중에서, 오직 5명 만이 위험에 처한(at risk) 범주 (위험 그룹 4, n=3, 위험 그룹 2 n=1, 위험 그룹 5 n=1) 내에 남아있었다.
다른 부위에서 구강 암 또는 암을 검출하는데 있어서의 CD44의 역할
2개의 대상체가 상승된 위험 범주 (양자의 위험 그룹 4)에 해당하였고, 추적 연구에서 초기 HNSCC (입술 및 후두의 원위치 암종)이 발병하였다. 1개 대조군은, 방광암으로 인하여, 14 ng/mL의 solCD44 수준 및 1.5 mg/mL의 단백질 수준을 가졌다. 구강 전-악성종양에 대한 우려 때문에 배제된 또 다른 대조군은 4.8 ng/mL의 solCD44 수준 및 1.3 mg/mL의 단백질 수준을 가졌으며, 폐암으로 발병하였다. 커뮤니티 기반 연구로부터의 환자에서 폐암이 발병하였고, 진단한 지 14개월 전 상승된 수준 (CD44 =3.975 ng/mL, 단백질=0.656 mg/mL)을 가졌다.
검토
본원에 개시된 방법은, CD44 및 단백질에 기반한, 비싸지 않고, 비침습성의 스크리닝 도구가 대조군으로부터 구강암 사례를 정확하게 구분할 수 있다는 것을 보여준다. 빈도 매칭은 본원에서 특히 담배 사용 또는 사회경제적 상태과 같은 공변량에 의한 교락(confounding)을 예방한다. 미국 내 85만명이 넘는 개체가 구강암 위험에 처해있지만, 이러한 위험에 처해있는 개체 중 극히 적은 수만이 실제적으로 구강 검사를 받는다. 본원에 개시된 구강 린스액 분자 시험은, 숙련된 구강 검사를 필요로 하는 대부분의 개체에게 1차 케어 제공자 및 치과의사가 구강암의 위험을 알릴 수 있는 간결하고 신뢰성있는 측정을 제공함으로써 구강암 스크리닝을 혁신화할 수 있다. CD44 ELISA 검정 및 단백질 시험은 이미 측방 유동 시험 스트립 원형으로 전환되었다. 따라서, 질량 스크리닝은 실행가능하다.
연구는 또한, 높은 CD44가 불량한 PFS 및 OS와 연관된다는 것을 보여준다. 이러한 마커는 요법을 인도하는데 유용할 수 있다 (Ang et al. N Engl J Med. 2010 1;363:24-35) 상기 시험은 초기 단계 (I-III) 구강 암을, 말기 단계(IV) 질병보다 더 잘 검출할 수 있다. CD44의 역할은 종양 개시에 중요할 수 있다.
위양성으로 간주되었던 이러한 연구에서의 2명의 환자에서 후속 주기동안 HNSCC가 발병하였다 (Franzmann et al. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2007;16:1348-55). 더욱이, 폐 및 방광을 포함하는 다른 흡연 연관된 종양을 갖는 대상체 또한 상승된 CD44 수준을 가졌다. 따라서, "위양성"은 실질적으로 오컬트(occult) 구강 질병 또는 다른 관련된 위험 인자를 갖는 암에 대해 진양성일 수 있다. CD44가 종양 개시 인자이므로, 수준은 위험 인자가 감소하고, 오컬트 병변이 사라질 경우 감소할 수 있다. 데이터는 1년간 커뮤니티 스크리닝 프로그램을 유지했던 개체가 CD44 수준의 유의미한 감소를 경험했다는 것을 나타낸다. 모든 대상체는 흡연 중단 및 구강 위생 및 영양 증진을 돕는 자원 접근에 대한 교육을 받았다. 따라서 행동 변화는 감소된 수준을 초래했을 수 있다.

Claims (42)

  1. 대상체에서 두경부 편평상피 세포 암 (HNSCC)의 위험을 측정하는 방법으로서,
    a) 상기 대상체로부터의 체액 샘플 내 solCD44의 시험량을 측정하는 단계;
    b) 상기 샘플 내 총 단백질의 시험량을 측정하는 단계;
    c) solCD44의 참조 수준 및 총 단백질의 참조 수준을 제공하는 단계로서, 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 상기 암이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준은, 상기 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정하는, 단계; 및
    d) 상기 solCD44 의 시험량 및 상기 총 단백질의 시험량이 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준을 초과하는지 또는 미만인지를 측정함으로써 상기 대상체 내 상기 암의 위험을 측정하는 단계를 포함하되,
    상기 solCD44의 참조 수준은 2.2 ng/mL 및 5.3 ng/mL이고, 상기 총 단백질의 참조 수준은 1.2 mg/mL 및 0.6 mg/mL인, 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 집단 내 상기 대상체는 상기 대상체의 사회인구학적 인자 및 위험 인자와 유사한 연령, 민족, 알코올 사용 이력, 담배 사용 이력, 또는 암 병력을 갖는, 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 집단 내 상기 개체는 상기 대상체의 사회인구학적 인자 및 위험 인자와 유사한 인간 유두종 바이러스(HPV) 감염의 상태를 갖는, 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 체액은 구강 린스액, 타액, 가래, 호기 응축물(breath condensate), 혈액, 혈장, 혈청, 및 소변으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 구강 린스액은 구강 염수 린스액인, 방법.
  6. 청구항 4에 있어서, 상기 구강 린스액은 상기 대상체가 먹고, 흡연하고, 그리고 마신 지 적어도 1시간 후에 수득되는, 방법.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 청구항 4에 있어서, 상기 대상체는 상기 대상체의 연령, 인종, 알코올 소비 이력, 담배 사용 이력, 암 병력, 또는 인간 유두종바이러스 (HPV) 검정의 양성 결과에 기반하여 상기 구강 린스액을 제공하도록 선택되는, 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체는 가시적인 악성종양 또는 전-악성종양(premalignancy)이 없는, 방법.
  11. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체는, 식별된 위험에 기반하여, 수술, 방사선, 또는 화학요법, 또는 이의 조합을 통하여 치료되는, 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 상기 solCD44의 시험량은 상기 암의 위험을 측정하기 전에 상기 총 단백질의 시험량으로 정규화된, 방법.
  13. 청구항 1에 있어서, 면역검정이 상기 샘플 내 상기 solCD44의 시험량을 측정하기 위하여 사용된, 방법.
  14. 청구항 1에 있어서, 면역검정이 상기 집단으로부터의 solCD44 수준을 측정하기 위하여 사용된, 방법.
  15. 청구항 13 또는 14에 있어서, 상기 샘플 내 상기 solCD44의 시험량 또는 상기 집단으로부터의 solCD44 수준을 측정하기 위하여 사용된 상기 면역검정은 효소 연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 측방 유동 검정(Lateral Llow Assay)인, 방법.
  16. 청구항 1에 있어서, 로이(Lowry) 또는 변형된-로이(Lowry) 단백질 검정이 상기 샘플 내 상기 총 단백질의 시험량을 측정하기 위하여 사용되는, 방법.
  17. 청구항 1에 있어서, 로이(Lowry) 또는 변형된-로이(Lowry) 단백질 검정이 상기 집단으로부터의 총 단백질 수준을 측정하기 위하여 사용된, 방법.
  18. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체에 위험 인자 관리 상담을 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 위험 인자 관리 상담은 흡연 중단 프로그램을 포함하는, 방법.
  20. 청구항 1에 있어서, 정규 시간 간격으로 단계 a) 내지 d)를 반복하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  21. 청구항 1에 있어서, 매 3 내지 6개월마다 단계 a) 내지 d)를 반복하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  22. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체를 암 전문가에게 안내(referring)하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  23. 청구항 1에 있어서, 상기 샘플 내 히알루론산 (HA) 및 히알루로니다제 (HAase) 중 적어도 하나의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 청구항 1에 있어서, 통계적 분석이 상기 참조 수준을 측정하기 위하여 사용되는, 방법.
  30. 청구항 29에 있어서, 통계적 분석이 다변량 분석 또는 로지스틱 회귀 산출을 포함하는, 방법.
  31. 염수 용액;
    구강 염수 린스액을 수용하는 컵;
    CD44와 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항체;
    총 단백질 농도를 측정하는 시약; 및
    solCD44 및 총 단백질에 대한 참조 수준을 포함하는 키트로서,
    상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준은, 건강한 개체 및 두경부 편평상피 세포 암 (HNSCC)이 있는 개체의 집단으로부터의 solCD44 수준 및 총 단백질 수준을 사용하여 측정되고, 상기 solCD44의 참조 수준 및 상기 총 단백질의 참조 수준은, 상기 암에 대해 상이한, 통계적으로 유의미한 위험을 한정하되,
    상기 solCD44의 참조 수준은 2.2 ng/mL 및 5.3 ng/mL이고, 상기 총 단백질의 참조 수준은 1.2 mg/mL 및 0.6 mg/mL인, 키트.
  32. 청구항 31에 있어서, p16 INK4a에 결합하는 적어도 하나의 항체를 추가로 포함하는, 키트.
  33. 삭제
  34. 청구항 31 또는 32에 있어서, CD44 참조 샘플, p16 참조 샘플, 또는 이의 조합을 추가로 포함하는, 키트.
  35. 청구항 32에 있어서, 상기 p16 INK4a에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 CD44에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 조합의 검출을 위한 하나 이상의 비색성 제제를 포함하는, 키트.
  36. 청구항 31에 있어서, 상기 키트는 측방 유동 면역검정(lateral flow immunoassay)인, 키트.
  37. 청구항 32에 있어서, 상기 키트는 상기 p16 INK4a에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 CD44에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 조합으로 임의로 코팅된 다중-웰 플레이트(multi-well plate)를 포함하는, 키트.
  38. 삭제
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2016012079A (es) * 2014-03-19 2017-04-13 Vigilant Biosciences Inc Dispositivo para deteccion de estados de enfermedad y aplicaciones del mismo.
WO2016061465A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Biomarkers for head and neck cancer and methods of their use
CA2992370A1 (en) * 2015-04-06 2016-10-13 University Of Miami Imaging device and method for detection of disease
US11150246B2 (en) * 2015-09-11 2021-10-19 Vigilant Biosciences, Inc. Device for early detection of disease states
FI126519B (en) * 2015-10-16 2017-01-13 Aqsens Oy SLEMHINNEANALYS
WO2019115724A1 (en) * 2017-12-13 2019-06-20 Valle Brian William Della Biomarkers for multiple sclerosis
RU2708786C1 (ru) * 2019-02-15 2019-12-11 Анастасия Игоревна Стукань Способ прогнозирования исхода плоскоклеточного рака языка и ротоглотки
US20220137041A1 (en) * 2019-02-26 2022-05-05 University Of Miami Device for methods of detecting cancer

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007133725A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 University Of Miami Biomarkers for detection and diagnosis of head and neck squamous cell carcinoma
WO2013074793A1 (en) * 2011-11-15 2013-05-23 University Of Miami Methods for detecting human papillomavirus and providing prognosis for head and neck squamous cell carcinoma
JP2013518848A (ja) 2010-02-04 2013-05-23 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 頭頸部扁平上皮癌の治療に使用されるｃｄ４４に対するモノクローナル抗体

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6110109A (en) 1999-03-26 2000-08-29 Biosignia, Inc. System and method for predicting disease onset
DE60300339T2 (de) * 2003-08-25 2006-04-13 Mtm Laboratories Ag Verfahren zum Nachweis von Karzinomen in solubilisierten zervikalen Körperproben
WO2005095987A2 (en) * 2004-03-26 2005-10-13 University Of Miami Salivary soluble cd44: a molecular marker for head and neck cancer
WO2008036333A2 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 University Of Miami Hypermethylation of cd44 promoter in head and neck squamous cell carcinoma
US8715926B2 (en) * 2008-11-24 2014-05-06 Loma Linda University Biomarkers for the detection of head and neck tumors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007133725A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 University Of Miami Biomarkers for detection and diagnosis of head and neck squamous cell carcinoma
JP2013518848A (ja) 2010-02-04 2013-05-23 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 頭頸部扁平上皮癌の治療に使用されるｃｄ４４に対するモノクローナル抗体
WO2013074793A1 (en) * 2011-11-15 2013-05-23 University Of Miami Methods for detecting human papillomavirus and providing prognosis for head and neck squamous cell carcinoma

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Elizabeth J Franzmann et al, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2007), vol 16(7), pp 1348-1355.
Elizabeth J Franzmann et al, Head & Neck (2011.3.16.), vol 34(5), pp 687-695.

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