KR102302983B1 - 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102302983B1
KR102302983B1 KR1020210078173A KR20210078173A KR102302983B1 KR 102302983 B1 KR102302983 B1 KR 102302983B1 KR 1020210078173 A KR1020210078173 A KR 1020210078173A KR 20210078173 A KR20210078173 A KR 20210078173A KR 102302983 B1 KR102302983 B1 KR 102302983B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
present
oral
antibacterial
composition
Prior art date
Application number
KR1020210078173A
Other languages
English (en)
Inventor
박준형
정호용
사티시쿠마 나타라잔
Original Assignee
주식회사 쓰리빅스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 쓰리빅스 filed Critical 주식회사 쓰리빅스
Priority to KR1020210078173A priority Critical patent/KR102302983B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102302983B1 publication Critical patent/KR102302983B1/ko
Priority to PCT/KR2022/004429 priority patent/WO2022265195A1/ko

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A01N37/46N-acyl derivatives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18Peptides; Protein hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00Function of food ingredients
    • A23V2200/30Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/312Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on dental health

Abstract

본 발명은 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 항균 펩타이드 및 이를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물, 의약외품 조성물 및 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 항균 펩타이드는 구강 질환과 관련된 그람 음성균이나 항생제 내성균에 대해 우수한 항균 활성을 가지는 바, 이를 활용하여 보다 효과적으로 구강 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

Description

신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도{NOVEL ANTIMICROBIAL PEPTIDE AND USES THEREOF}
본 발명은 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다.
인간 및 생명체는 외부와 내부에서 다양한 미생물에 노출되어 있어 스스로를 보호할 수 있는 선천성 면역체계를 가지고 있으며 이 중 하나가 항균 펩타이드로 약 2~50개의 아미노산으로 구성된 작은 크기의 펩타이드로서 생물체가 병원균에 감염되었을 때 1차 방어물질로 작용한다. 항균 펩타이드는 주로 양전하(cationic)를 띠며 소수성(hydrophobic) 아미노산 잔기에 의해 양친매성(amphipathic) 특성을 가지는데 이러한 특성으로 음전하를 띠는 미생물 세포막 지질과 결합하여 미생물의 세포막의 전위를 변화시키거나 세포막에 구멍을 내어 파괴하거나 세포막내로 들어가 세포 기능을 저해함으로 항균 활성을 나타내게 된다. 항균 펩타이드는 광범위한 병원성 박테리아, 곰팡이, 기생충 및 바이러스에 대해 효과적인 것으로 입증되었다. 병원균에 대해 탁월한 효능에도 불구하고, 이들은 최근까지 거의 활용되지 않았다. 고전적 항생제의 남용 또는 부적절한 투여는 항균 저항성에 심각한 문제를 일으켰다. 따라서, 항균 펩타이드는 항생제 내성 미생물에 맞선 자연의 대체 약리학적 자원으로 간주될 수 있다.
구강 점막(Oral mucosa)은 다양한 미생물의 틈새로, 미생물 군의 변화는 충치(dental caries), 치주염(periodontitis) 및 치은염(gingivitis)과 같은 질병으로 이어진다. 치주염은 그람-음성 박테리아, 특히 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 의한 구강 염증 질환이다. 치주염의 치료는 스켈링 및 항생제와 같은 기계적 치료가 포함된다. 그러나 항생제의 부적절한 사용으로 항생제 내성 균주가 출현하는 등의 문제가 발생하는 바, 이러한 문제점을 해결하고 구강 질환을 효과적으로 치료할 수 있는 새로운 치료제가 필요한 실정이다.
대한민국 등록특허 제10-1257228호 (2013.04.29. 공고)
본 발명의 목적은 항균 활성이 우수한 신규 펩타이드 및 이를 이용한 구강 질환 치료 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 항균 펩타이드를 제공한다.
본 발명은 상기 항균 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 항균 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물, 의약외품 조성물, 및 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 신규한 항균 펩타이드는 구강 질환과 관련된 그람 음성균이나 항생제 내성균에 대해 우수한 항균 활성을 가지는 바, 이를 활용하여 기존의 문제점을 개선하고 보다 효과적으로 충치, 치주염, 치은염 등의 구강 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대한 최소억제농도(MICminimum inhibitory concentration, MIC)를 측정한 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 독성 실험 결과 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.
본 발명자는 신규한 펩타이드를 합성하였고, 상기 펩타이드가 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대해 항균 활성을 나타냄을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 항균 펩타이드를 제공한다.
- 서열번호 1 : RVLTHVFKCKLKLR
본 명세서에 있어서, "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.
상기 펩타이드는 합성 펩타이드로서, 상기 합성을 위한 방법은 당업계의 통상적인 펩타이드의 화학적 합성 방법(W. H. Freeman and Co., Proteins; structures and molecular principles (1983))일 수 있으며, 구체적으로는 액상 고상법(Solution Phase Peptide synthesis), 고상 고상법(Solidphase peptide syntheses), 단편 응축법 및 F-moc 또는 T-BOC 화학법일 수 있으며, 보다 바람직하게는 액상 고상법(Merrifield, RB., J. Am. Chem. Soc., 85.2149: 196)으로 합성할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 펩타이드는 그람 음성균, 그람 양성균 또는 항생제 내성균에 대해 항균 활성을 가질 수 있으며, 바람직하게는 그람 음성균 또는 항생제 내성균에 대해, 보다 바람직하게는 그람 음성균에 대해 우수한 항균 활성을 가질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 그람 음성균은 포르피로모나스 속(Porphyromonas) 그람 음성균일 수 있으며, 바람직하게는, 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis; P.gingivalis)"는 구강질환을 일으키는 몇 가지 대표적인 원인균 중 하나로, 치주질환이 발생한 구강 내에서 발생되며, 그 외에도 위장관 상부, 호흡기 및 결장에서도 발견되는 것으로 보고되었다.
상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속(Staphylococcus), 락토바실러스 속(Lactobacillus) 및 바실러스 속(Bacillus)을 포함하는 그람 양성균으로 당업계에 공지된 모든 그람 양성균일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 항생제 내성균은 항생제 내성을 갖는 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 항생제는 아미노글리코사이드 계열 (아미노글리코사이드, 겐타마이신, 네오마이신 등), 페니실린 계열 (앰피실린 등), 술폰아미드 계열, 베타-락탐 계열 (베타-락탐, 아목시실린/클라불란산 등), 클로람페니콜 계열, 에리트로마이신 계열, 플로르페니콜 계열, 포스포마이신 계열, 카나마이신 계열, 린코마이신 계열, 메티실린 계열, 퀴놀론 계열, 스트렙토마이신 계열, 테트라사이클린 계열, 트리메소프림 계열 및 반코마이신 계열의 항생제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 상기 항균 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 상기 항균 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대해 우수한 항균 활성을 가지는 바, 상기 균주에 의한 구강 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물로 활용할 수 있다.
상기 구강 질환은 구강영역에서 발생하는 여러 가지 질환으로, 충치, 치주염 및 치은염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않고, 구강에 발생하는 질환이라면 그 병증에 관계없이 모두 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 약학 조성물은 상기 유효성분 이외에 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 적절한 담체와 배합될 수 있고, 필요에 따라, 부형제, 희석제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 결합제, 붕해제, 용제 등을 더 포함하여 제조될 수 있다. 상기 적절한 담체 등은 본 발명에 따른 항균 펩타이드의 활성 및 특성을 저해하지 않는 것으로, 투여 형태 및 제형에 따라 달리 선택될 수 있다.
상기 약학 조성물은 어떠한 제형으로도 적용될 수 있고, 보다 상세하게는 통상의 방법에 따라 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 비경구형 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다.
상기 경구형 제형 중 고형 제형은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등의 형태로, 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 솔비톨, 만니톨, 셀룰로오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있고, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 또한, 캡술제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 포함할 수 있다.
상기 경구형 제형 중 액상 제형은 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구 제형은 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 이에 제한되지 않고, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제를 모두 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 치료 효능의 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3 등을 더 첨가할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다.
상기 약학 조성물의 유효 용량 수준은 사용 목적, 환자의 연령, 성별, 체중 및 건강 상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 달리 결정될 수 있다. 예를 들어, 일정하지는 않지만 일반적으로 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여될 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학 조성물은 구강 질환이 발생할 수 있는 임의의 동물에 투여할 수 있고, 상기 동물은 예를 들어, 인간 및 영장류뿐만 아니라 소, 돼지, 말, 개 등의 가축 등을 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 제제 형태에 따른 적당한 투여 경로로 투여될 수 있고, 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 투여 방법은 특히 한정할 필요 없이, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피부 도포, 피하, 호흡기내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracere-broventricular) 주사 등의 통상적인 방법으로 투여될 수 있다.
상기 약학 조성물은 구강 질환 예방 또는 치료를 위하여 단독으로 사용될 수 있고, 수술 또는 다른 약물 치료 등과 병용하여 사용될 수 있다.
본 발명은 상기 항균 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대해 우수한 항균 활성을 가지는 바, 상기 균주에 의한 구강 질환의 예방 또는 개선을 위한 의약외품 조성물로 활용할 수 있다.
상기 구강 질환은 충치, 치주염 및 치은염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서, "의약외품"이란 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 본 발명에 따른 의약외품 조성물은 바람직하게는 구강용 의약외품을 포함할 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 상기 유효성분 이외에 구강용 의약외품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 더 포함할 수 있고, 예를 들어, 연마제, 습윤제, 결합제, 기포제, 감미제, 방부제, 약효성분, 향미제, 색소, 용제, 증백제, 가용화제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 치약, 구강세정제, 구강청정제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬, 구강양치액 및 잇몸 마사지 크림 등의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 의약외품 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 구강용 의약외품 조성물과 중복하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 항균 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 구강 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대해 우수한 항균 활성을 가지는 바, 상기 균주에 의한 구강 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품 조성물로 활용할 수 있다.
상기 구강 질환은 충치, 치주염 및 치은염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 건강기능식품은 구강 질환 예방 또는 개선의 목적으로 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료 등으로 제조될 수 있고, 상기 식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있다. 예를 들어, 음료 및 각종 드링크, 과실 및 그의 가공식품(과일통조림, 잼 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(햄, 베이컨 등), 빵류 및 면류, 쿠키 및 스낵류, 유제품(버터, 치즈 등) 등이 가능하며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 식품학적으로 허용 가능한 식품 첨가제(식품 첨가물) 및 적절한 기타 보조 성분을 더 포함하여 제조될 수 있다.
상기 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정할 수 있다. 상기 '식품첨가물공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.
상기 기타 보조 성분은 예를 들어, 향미제, 천연 탄수화물, 감미제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 특히, 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 사용할 수 있으며, 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품에 함유된 항균 펩타이드의 유효용량은 구강 질환 예방 또는 개선 등 그 사용 목적에 따라 적절하게 조절될 수 있다. 상기 조성물은 식품을 원료로 하여 일반 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 구강 질환 예방 또는 개선을 위한 보조제로 섭취될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
< 실시예 1> 신규한 펩타이드의 제조
신규한 펩타이드를 합성하기 위하여, 본 발명자들은 Fmoc 아미노기 보호용 기를 이용한 메리필드(Merrifield)의 액상 고상법 (Merrifield, RB., J. Am. Chem. Soc., 85, 2149, 1963)을 사용하여 펩타이드를 제조하였다.
상기 펩타이드는 Fmoc (9-fluorenylmethoxycarbonyl)를 아미노산의 Nα-아미노 그룹(amino group)의 보호기(protecting group)로 사용하는 고상법(solid phase method)으로 합성하였다.
구체적으로, 카르복실 말단이 -NH2 형태인 펩타이드는 Rink Amide MBHA-Resin을 출발물질로 사용하였으며, 카르복실 말단이 -OH 형태의 펩타이드는 Fmoc-아미노산-Wang Resin을 출발물질로 사용하였다.
Fmoc-아미노산의 커플링(coupling)에 의한 펩타이드 사슬의 연장 (elongation)은 DCC (N-hydroxybenzotriazole(HOBt)-dicyclo-hexylcar-bodiimide)법에 의하였다.
각 펩타이드의 아미노 말단의 Fmoc-아미노산을 커플링 시킨 후, 20% 피페리딘/N-메틸피롤리돈(NMP)용액으로 Fmoc 기를 제거하고 NMP 및 디클로로메탄(DCM)으로 여러 번 씻어준 다음 질소 가스로 말렸다.
여기에 TFA (trifluoroacetic acid)-phenol-thioanisole-H2O-triisop- ropylsilane (85 : 5 : 5 : 2.5 : 2.5, vol./vol.) 용액을 가하고 3시간 동안 반응시켜 보호기의 제거 및 레진으로부터 펩타이드를 분리시킨 다음, 디에틸에테르로 펩타이드를 침전시켰다. 이렇게 하여 얻은 조(crude) 펩타이드는 0.1% TFA가 포함된 아세토니트릴 농도구배(acetonitrile gradient)로 하여 정제형 역상-HPLC(reverse phase-HPLC) column (Delta Pak, C18 300Å, 15μm, 19.0mm x 30mm, Waters)을 이용하여 정제하였다.
합성 펩타이드를 6N-HCl로 110℃에서 24시간 동안 가수분해한 후, 얻어진 잔사를 감압농축 한 뒤, 0.02N-HCl에 녹여서 아미노산 분석기 (Hitachi 8500 A)로 아미노산 조성을 측정하였다.
또한, 합성된 펩타이드의 시퀀스(sequence)를 바탕으로 분자량을 계산하였고, MALDI 질량 분석법 (matrixassisted laser desorption ionization mass spectrometer)을 이용하여 정확한 분자량을 측정하였다.
그 결과, 측정된 분자량과 계산된 분자량이 일치하여 하기와 같이 정확한 아미노산 서열을 가지는 항균 펩타이드가 합성되었음을 확인하였다.
- RVLTHVFKCKLKLR (서열번호 1)
< 실시예 2> 포르피로모나스 진지발리스 ( Porphyromonas gingivalis )에 대한 항균 활성 확인
상기 실시예 1에서 제조된 펩타이드를 증류수에 1mg/mL 농도로 녹인 후, 항균 활성을 확인하기 위해 액체배지 미량희석법(broth microdilution method assay)을 사용하였다.
제조된 펩타이드의 항균 활성을 측정하기 위해 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis, Strain number: KCTC5352)를 24시간 동안 배양한 후 배양 균액의 일정액을 새 BHI(Brain Heart Infusion) 액체배지와 면양적혈구가 5% 첨가된 배지에서 분광광도계로 OD600에서 0.1이 되도록 희석한 후, 펩타이드 및 양성 대조군(positive control)인 옥시테트라사이클린(Oxytetracycline)은 50μg/mL 부터 100μg/mL의 농도로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양한 후 OD600에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 하기 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 상기 펩타이드에 의해 처리한 경우 양성 대조군보다 더 낮은 최소 억제 농도(minimum inhibitory concentration, MIC)로 포르피로모나스 진지발리스를 억제함을 확인하였다.
minimum inhibitory concentration (μg/mL)
옥시테트라사이클린 서열번호 1의 펩타이드
Porphyromonas gingivalis
50

25
< 실시예 3> 세포 독성 확인
인간 각질 세포주 HaCat cell line은 사람의 표피 세포로, 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin) 및 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2의 환경에서 배양하여 확인하였다.
먼저, 6-well 세포 배양 플레이트에 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 HaCaT를 3×105/well로 시딩하여 하루 배양하였다. 그 후 무혈청(serum-free) 배지로 세척하고 무혈청 배지에 상기 펩타이드를 농도별로 처리한 다음 24시간 동안 배양한 후 세포 사멸을 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 세포 독성이 거의 확인되지 않았다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
<110> 3BIGS CO., LTD. <120> NOVEL ANTIMICROBIAL PEPTIDE AND USES THEREOF <130> DP-2021-0104 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 1 Arg Val Leu Thr His Val Phe Lys Cys Lys Leu Lys Leu Arg 1 5 10

Claims (8)

  1. 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 항균 펩타이드.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 펩타이드는,
    포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대해 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 항균 펩타이드.
  3. 제 1 항에 따른 항균 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  4. 제 1 항에 따른 항균 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)에 대한 항균 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
KR1020210078173A 2021-06-16 2021-06-16 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도 KR102302983B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210078173A KR102302983B1 (ko) 2021-06-16 2021-06-16 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
PCT/KR2022/004429 WO2022265195A1 (ko) 2021-06-16 2022-03-29 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210078173A KR102302983B1 (ko) 2021-06-16 2021-06-16 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102302983B1 true KR102302983B1 (ko) 2021-09-17

Family

ID=77924052

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210078173A KR102302983B1 (ko) 2021-06-16 2021-06-16 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102302983B1 (ko)
WO (1) WO2022265195A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022265195A1 (ko) * 2021-06-16 2022-12-22 주식회사 쓰리빅스 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101257228B1 (ko) 2010-06-16 2013-04-29 주식회사 나이벡 항균 또는 항염증 활성을 가지는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물
US20130108575A1 (en) * 2009-01-06 2013-05-02 C3 Jian, Inc. Antibacterial and antifungal peptides
US20140155317A1 (en) * 2006-09-06 2014-06-05 C3 Jian, Inc. Selectively targeted antimicrobial peptides and the use thereof
JP2015529221A (ja) * 2012-09-07 2015-10-05 エージェンシー フォー サイエンス,テクノロジー アンド リサーチ ペプチドおよびそれらの使用
KR20160049577A (ko) * 2014-10-27 2016-05-10 경희대학교 산학협력단 항균 펩타이드 헥사머를 포함하는 구강 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이의 용도

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102302983B1 (ko) * 2021-06-16 2021-09-17 주식회사 쓰리빅스 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140155317A1 (en) * 2006-09-06 2014-06-05 C3 Jian, Inc. Selectively targeted antimicrobial peptides and the use thereof
US20130108575A1 (en) * 2009-01-06 2013-05-02 C3 Jian, Inc. Antibacterial and antifungal peptides
KR101257228B1 (ko) 2010-06-16 2013-04-29 주식회사 나이벡 항균 또는 항염증 활성을 가지는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물
JP2015529221A (ja) * 2012-09-07 2015-10-05 エージェンシー フォー サイエンス,テクノロジー アンド リサーチ ペプチドおよびそれらの使用
KR20160049577A (ko) * 2014-10-27 2016-05-10 경희대학교 산학협력단 항균 펩타이드 헥사머를 포함하는 구강 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이의 용도

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022265195A1 (ko) * 2021-06-16 2022-12-22 주식회사 쓰리빅스 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022265195A1 (ko) 2022-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102224929B1 (ko) 해삼에서 분리한 항균 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR101734064B1 (ko) 마이시니딘 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR102415725B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 h123 및 이의 용도
US9862749B2 (en) Analogue peptide CMA3 derived from CM-MA peptide and use thereof
KR102415734B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR102302983B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
JP5202649B2 (ja) ヘリコバクター・ピロリ菌のリボソームタンパク質l1由来の新しい抗生ペプチド及びその使用
WO2024053836A1 (ko) 항생제 내성균에 대한 항균 활성을 가지는 항균 펩타이드 h103b 및 이의 용도
KR101077180B1 (ko) 헬리코박터 파이로리균의 리보좀 단백질 l1 유래의 새로운 항생 펩타이드 및 그의 용도
KR102158036B1 (ko) Pseudin-2 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
WO2017018595A1 (ko) 이중 스테이플화된 펩타이드 및 이의 용도
KR102039400B1 (ko) mBjAMP1 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR101998106B1 (ko) Hp1404 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR20210086538A (ko) 양친매성 펩타이드 및 이를 포함하는 항균용 또는 항염증용 조성물
KR102451854B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 h103 및 이의 용도
WO2023048411A1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
KR102603281B1 (ko) Hylin a1 펩타이드로부터 유래한 신규 펩타이드 및 이의 용도
KR102608336B1 (ko) Pep27 펩타이드로부터 유래한 신규 펩타이드 및 이의 용도
KR102492395B1 (ko) 호랑나비 유충으로부터 유래된 펩타이드인 파필리오신-3 및 이의 용도
KR102430003B1 (ko) 아메리카왕거저리 유충으로부터 유래된 펩타이드인 조포바신-1 및 이의 용도
KR20230133718A (ko) 항진균 활성을 나타내는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 포함하는 항진균용 조성물
KR20180022011A (ko) 바퀴벌레에서 유래한 항균 펩타이드 페리플라네타신-5 및 그의 조성물
KR101930125B1 (ko) 스테이플화된 헵타펩타이드 및 이의 용도
KR20200134153A (ko) 신규한 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염
KR20230040784A (ko) 항염증 효능을 가지는 곤충유래 프로테티아마이신-11 펩타이드 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant