KR102220361B1 - Hd-hook 효과 시료 식별 및 면역 측정 방법, 시스템, 키트 및 장치 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법, 면역 측정 중의HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템, 키트 및 장치, 면역 측정 방법, 면역 측정 식별용 시스템, 키트 및 장치에 관한 것으로, HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법은 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 함유된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하고, 화학 발광을 여기 스펙트럼하고 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차의 판독값을 기록하며, 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 표시하고, 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭 A’ 가 R0 보다 큰지를 비교하여, 만일 R0 보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고, 만일 R0 보다 작으면 HD-HOOK 효과가 구비되지 않는 단계를 포함한다.
Description
본 출원은 2016 년 11 월 22 일에 출원한 중국특허출원 CN201611026623.1에서 개시한 발명의 명칭이 <면역측정방법 및 면역측정 식별용 시스템 및 키트>에 대한 우선권 주장을 요구함과 더불어 상기 출원의 전부 내용을 인용을 통해 본 출원의 설명서에 편입시킬 것임을 요구한다.
본 출원은 2016 년 11 월 22 일에 출원한 중국특허출원 CN201611034237.7에서 개시한 발명의 명칭이 <면역측정방법 및 면역측정 식별용 시스템 및 키트>에 대한 우선권 주장을 요구함과 더불어 상기 출원의 전부 내용을 인용을 통해 본 출원의 설명서에 편입시킬 것임을 요구한다.
본 출원은 2016 년 11 월 22 일에 출원한 중국특허출원 CN201611034252.1에서 개시한 발명의 명칭이 <HD-HOOK 효과 시료 식별 방법 및 면역 측정 중의 HD-HOOK 효과 식별 시스템>에 대한 우선권 주장을 요구함과 더불어 상기 출원의 전부 내용을 인용을 통해 본 출원의 설명서에 편입시킬 것임을 요구한다.
본 출원은 2017 년 8 월 15 일에 출원한 중국특허출원 CN201710695530.6에서 개시한 발명의 명칭이 <면역 측정용 장치>에 대한 우선권 주장을 요구함과 더불어 상기 출원의 전부 내용을 인용을 통해 본 출원의 설명서에 편입시킬 것임을 요구한다.
본 발명은 광루미네선스 화학발광 기술 분야에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법, 면역 측정 중의 HD-HOOK 효과 식별용 시스템, 키트 및 장치, 면역 측정 방법, 면역 측정 식별용 시스템, 키트 및 장치에 관한 것이다.
면역학적 검출은 항원과 항체의 특이적 반응의 원리에 기반을 두고 있으며, 동위원소, 효소, 화학 발광 물질 등을 이용하여 측정하고자 하는 시료를 현시하거나 신호를 증폭할 수 있기 때문에 종종 단백질이나 호르몬과 같은 미량 생물 활성물질을 검출하는 데 이용된다.
화학 발광 면역 분석은 최근 발전이 비교적 빠른 비 방사성 면역 검출기술로, 그 원리는 화학 발광 물질을 이용하여 신호를 증폭함과 더불어 그 발광 강도를 빌어 면역 결합 과정을 직접 측정하는 것으로, 이 화학 발광 면역 분석법은 이미 면역학 검출에 있어서의 중요한 방향 중 하나가 되었다.
광루미네선스 화학발광법은 화학 발광 분석 기술에서 흔히 사용되는 방법 중 하나로서, 생물 분자 간의 상호 작용을 연구하는 데 이용할 수 있으며 임상에서는 주로 질병 관련 검출에 사용된다. 이 기술은 고분자 미립자 기술, 유기 합성, 단백질 화학 및 임상 검출과 같은 관련 분야의 연구를 통합한 기술이다. 이는 감광성 미립자와 발광 미립자를 일정 범위 내에서 결합하여 이온화 산소 에너지를 전달하고, 광 신호를 방출하여 검출 시료에 대한 검출을 실시한다. 그 중에서, 감광성 미립자 내부는 감광성 화합물로 채워지고, 발광성 미립자 내부는 발광 화합물 및 란타 노이드로 채워진다. 레드 레이저(600 ~ 700nm)의 여기 스펙트럼 하에서, 감광성 미립자는 고 에너지 상태의 전파 거리가 약 200nm인 단일상태산소이온(4μS)을 방출한다. 감광성 미립자와 발광 미립자 사이의 거리가 충분히 가까울 때, 감광성 미립자에 의해 방출된 단일상태산소이온은 발광성 미립자에 도달할 수 있고, 일련의 화학 반응을 통해 520 ~ 620 nm의 고 에너지 레벨의 빛을 방출하며 이때 이 빛은 기기에 의해 검출된다. 본 반응 시스템에서는, 미립자의 농도가 매우 낮고, 충돌 확률이 작고, 배경 신호가 미약하다. 감광성 미립자와 발광성 미립자가 면역 반응을 통해 결합된 후에야만 뚜렷한 빛을 방출하므로 따라서 시스템의 감도는 매우 높다. 질병 진단에서 일반적으로 사용되는 검출 모드는 항원 또는 항체로 코팅된 발광성 미립자, 비오틴 또는 디곡신으로 표지된 항원 또는 항체, 아비딘 또는 디곡신으로 코팅된 감광성 미립자, 중화 항원 또는 항체 등 3 개 내지 4 개 성분을 포함한다. 상기 각 성분은 측정하고자 하는 항원 또는 항체와 2 단계 이상의 배양 반응에 의해 결합되고, 화학 발광의 강도에 의해 측정하고자 하는 시료에 대해 질적 또는 양적으로 검출을 진행한다. 종래의 효소결합면역분석방법과 비교하여 볼 때, 상기 방법은 균질성, 고민감도, 간편조작으로 자동화가 용이하다는 등의 특징을 구비하고 있다. 따라서, 활용 전망성이 매우 넓다.
이중 항체 샌드위치 결합 검출 모드에서, 측정하고자 하는 물질의 농도가 일정 농도까지 상승하였을 때, 이중 항체 샌드위치 결합 복합체를 형성할 수 없기 때문에 신호값이 매우 낮게 되는 현상이 나타나는데 이를 고용량-후크 효과(HD-HOOK 효과)라고 한다. 즉, 고용량-후크 효과란 이중 부위 샌드위치 결합 면역실험에서 그 용량 반응 곡선의 고용량 구간에서 선형의 주향은 평판과 같이 무한하게 연장되는 것이 아니라 아래로 굴곡되는 모양을 이루는 바, 마치 하나의 갈고리(후크)와 같아 위음성의 현상을 조성하는 경우를 말한다.
HD-HOOK 효과는 면역측정에서 종종 발생하며, 그 발생율은 양성 시료의 약 30 %를 차지한다. HD-HOOK 효과의 존재로 인해, 피측정 시료는 그 농도가 검출 키트의 선형 범위를 초과한 것으로 인한 것인지 아니면 그 자체의 농도가 바로 그 값인지에 대해 명확한 판단을 할 수 없으므로 실험에서 오진되는 경우가 있다. 특히 위음성율이 올라가는 경우가 이 경우에 속한다.
구체적으로 말하면 한편으로는, 고농도의 시료를 검출할 때, 고용량-후크 효과로 인해 검출 신호가 낮게 나오는 경우를 초래하므로 이에 따라 시료에 대해 저농도로 해석되는 경우가 있다. 종래의 해결방법은 시약의 성분을 추가하여, 측정하고자 하는 시료에 대해 희석하거나 2 단계 검출법 등을 이용하였다.
다른 한 편으로는, 고용량-후크 효과로 시료 농도가 일정값으로 상승하면 신호가계속 상승하지 않아 검출범위가 제한된다. 종래에는 주로 항체를 최적화하거나 항체를 증가하는 방법으로 검출범위를 넓혔다.
통상적인 측정과정에는 반응홀에 측정하고자 하는 물질 및 시약을 투입하는 단계, 첫 번째 배양 단계, 통용액 추가단계, 두 번째 배양 단계 및 판독 단계, 이 5 단계로 구성된다.
본 발명의 검출방법은 통상적인 측정과정에 기초하고, 반응을 중단하지 않는 전제하에서 반응 과정에 신호값을 여러 차례 판독하고, 신호 변화에 대한 관찰을 통해 시료의 실제 농도를 판단하는 것이다.
본 발명은 선행 기술에서 존재하는 결함에 비추어 반응을 중단하지 않는 전제하에서 2 차례의 판독에 의해 검출범위를 넓히고 측정하고자 하는 시료에 HOOK 효과가 존재하는지를 정확하게 판단함으로써, 측정하고자 하는 시료의 농도를 용이하고 빠르게 산출할 수 있는 면역 측정법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상술한 목적과 기타 관련 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 첫 번째 측면으로 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 함유된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하고 여기 스펙트럼으로 화학발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하며 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 표시하고 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭 A’ 가 R0 보다 큰지를 비교하여, 만일 R0 보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고 R0 보다 작으면 HD-HOOK 효과가 구비되지 않는 단계를 포함하는 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법을 제공한다.
여기서 설명할 것은 측정하고자 하는 시료의 차이값의 증가폭과 피크 검량품의 차이값의 반응조건과 반응 간에는 일관적임이 검출되었다. 본 발명에 따른 바람직한 실시예에 있어서 상기 방법은,
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 함유된 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응용액을 추가 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’ 값을 R0과 비교하여, 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 이 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함한다.
본 발명과 관련하여 전반에 걸쳐 나오는 용어 "피크 검량품”은 특정 농도의 측정하고자 하는 물질을 함유한 시료를 지칭하며, 그 중에서 이중 항체 샌드위치 결합 면역실험의 측정하고자 하는 물질의 용량 반응 곡선 중의 고용량 구간에서, 선형의 주향이 하향으로 굴곡을 보이기 시작하는 때의 농도가 곧 피크 검량품 중의 측정 물질의 농도이다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여, A’가 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료로서, 희석할 필요가 있으며; 만일 A’가 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 만든 곡선이다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서, 발광 미립자는 발광 화합물 및 란타노이드 화합물로 채워진 고분자 미립자를 의미하며; 상기 감광성 미립자는 감광성 화합물로 채워진 고분자 미립자로 레드 레이저의 여기 스펙트럼 하에서 단열상태산소이온을 생성할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서, 단계 (2) 및 (3)에서, 레드 루미네선스를 600 ~ 700 nm로 조사하고 반응용액으로부터 방출되는 광량을 검출하며; 방출되는 빛의 검출 파장은 520 ~ 620 nm이다.
본 발명의 바람직한 실시예에 있어서, 상기 항원은 면역원성을 갖는 물질을 말하며; 상기 항체는 특정 이물질을 식별하는 생체에서 생성되는 면역 글로불린을 말하며; 상기 제 1 항체 및 제 2 항체는 상기 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 말하며; 상기 제 1 항원 및 제 2 항원은 상기 표적 항체에 특이적으로 결합하는 항원을 말한다.
본 발명은 두 번째 측면으로,
화학 발광 면역 반응을 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하기 위한 화학 발광 면역반응 여기 스펙트럼 및 계수장치;
측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’에 의해 HD-HOOK 효과 시료의 존재를 확인하는 프로세서를,
포함하는 면역 측정 중의 HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서 상기 시스템은,
화학 발광 면역 반응을 수행하기 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하기 위한 화학 발광 면역 반응 여기 스펙트럼 및 계수 장치;
측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’가 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 R0 보다 큰지를 비교하기 위한 것으로, 만일 R0 보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고 만일 R0 보다 작으면 시료에 HD-HOOK 효과가 구비되지 않는 프로세서를 포함하며,
여기서 화학 발광의 제 2 차 판독값은 동일한 면역 반응에서 일정 시간을 간격으로 다시 여기 스펙트럼하여 판독하여 얻은 수치를 말한다.
구체적인 일 실시예에 있어서, 본 발명은 용액을 담기 위한 용기 등을 포함하는 면역 반응 장치; 광자 계수 모듈 및 발광 다이오드 등을 포함하는 화학 발광 면역 반응 여기 스펙트럼 장치와 계수 장치; 및 상기 판독값을 처리하여 매핑 등 작업을 하는 컴퓨터 등을 포함하는 프로세서를 포함하는 면역측정 식별용 시스템을 제공한다. 이러한 면역측정 식별용 시스템에는 본 출원인의 실용 신안 특허 CN201532646U를 들 수 있으며 상기 문헌은 인용의 방식으로 본 출원에 편입시킨다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은,
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 포함된 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광 미립자를 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응용액을 추가 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 이 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함한다.
본 발명에 있어서, 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독값 증가폭 A’값을 R0과 비교하여 A’가 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는 희석할 필요가 있으며; 만일 A’가 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 작성한 곡선이다.
본 발명은 세 번째 측면으로,
검량품, 피크 검량품, 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원), 특이적 결합물로 표지된 표지물 감광성 미립자를 포함하는 키트를 제공하며. 상기 키트는 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 포함된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하고 여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차의 판독값을 기록하며 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’에 의해 HD-HOOK 효과 시료의 존재 여부를 확정하는 단계를 포함하는 사용방법을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서 상기 키트의 사용방법은, 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 포함된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하고 여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하며 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’가 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 R0과 비교하여 만일 R0보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고, R0보다 작으면 HD-HOOK 효과가 구비되지 않는 단계를 포함한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은,
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)가 포함된 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독후의 반응 용액을 추가 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여, 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 바람직한 일 실시예에 따르면, 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독값 증가폭 A’값을 R0과 비교하여 A’가 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는HD-HOOK 효과 시료로, 이에 대해 희석할 필요가 있으며; 만일 A’가 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 작성한 곡선이다.
여기서 특히 설명해야 할 것은, 상기 방법은 비질병 진단을 목적으로 하는 방법을 말하며 상기 방법은 이중 항체 샌드위치 결합 면역 측정법 또는 이중 항원 샌드위치 결합 면역 측정법의 과정에서 HD-HOOK 효과 시료를 용이하고 빠르게 식별하여 고농도 항원(또는 항체) 시료를 저농도 항원(또는 항체) 시료로 오판하는 것을 방지하기 위함이다.
바람직하게는, 상기 항원은 면역원성을 갖는 단백질, 폴리펩티드를 포함하는 물질을 말하며, 대표적인 항원으로는 사이토카인, 종양 표지물, 금속 단백질류, 심혈관 당뇨병 관련 단백질 등을 포함한다(그러나 이에 한정되는 것은 아니다).
상기 항체는 특정 이물질을 인식하는 생체에서 생성되는 면역 글로불린을 말한다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 항원 또는 항체는 B형 간염 표면 항원 (HBsAg), B형 간염 표면 항체 (HBsAb), 종양항원 125 (CA125), 페리틴 (Ferr) 및 C -펩타이드 (CP)에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 방법에 의해 검출할 수 있는 시료는 특별히 한정되지 않으며, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 포함하는 임의의 시료일 수 있고, 그 대표적인 예로는 혈청 시료, 뇨액 시료, 타액 시료 등을 들 수 있다. 본 발명의 바람직한 시료는 혈청 시료이다.
바람직하게는, 상기 제 1 항체 및 제 2 항체는 상기 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 말한다.
동일한 항원에 있어서, 상응하는 제 1 항체 및 제 2 항체는 동일하거나 상이할 수 있으며, 또 동시에 상기 항원에 결합할 수 있다.
상기 제 1 항원 및 제 2 항원은 상기 표적 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 항원을 말한다.
동일한 항체에 대해, 상응하는 제 1 항원 및 제 2 항원은 동일하거나 상이할 수 있으며 또 동시에 상기 항체에 결합할 수 있다.
바람직하게는, 상기 표지물은 특이적 결합물인 표지물에 특이적으로 결합할 수 있다.
보다 바람직하게는, 상기 표지물은 비오틴을 말하고 상기 표지물인 특이적 결합물은 스트렙 타비딘을 말한다.
바람직하게는, 상기 발광 미립자는 발광 화합물 및 란타노이드 화합물로 충전된 고분자 미립자이다. 발광 화합물은 Dioxene(다이옥신) 또는 thioxene(티옥신)의 유도체일 수 있으며, 란타노이드 화합물은 Eu (TTA) 3 / TOPO 또는 Eu (TTA) 3 / Phen 과 같은 것일 수 있다. 상기 미립자는 시중에서 구입할 수 있다. 발광 미립자의 표면 작용기는 임의의 단백질 그룹과 결합할 수 있으며 상기 단백질 그룹은 카르복시기, 알데히드기, 아민기, 에폭시에틸 또는 할로 알킬기 등의 공지된 각종 단백질 결합 가능한 작용기를 들 수 있다.
바람직하게는, 상기 감광성 미립자는 감광성 화합물로 충전된 고분자 미립자로, 레드 레이저의 루미네선스 하에 단일상태산소이온이 생성될 수 있다. 발광 미립자에 충분히 가깝게 되면, 단일상태산소이온은 발광 미립자로 전달되어 발광 미립자 내의 발광 화합물과 반응하여 자외광을 발생시키고, 자외광은 다시 란타노이드 화합물을 자극시켜 특정 파장의 광자를 생성한다. 감광성 화합물은 프탈로시아닌 염료 등 일 수 있으며 상기 미립자 역시 시중에서 구입할 수 있다.
바람직하게는, 단계 (2) 및 (3)에서, 600 ~ 700 nm의 레드 루미네선스로 조사하고, 반응 용액으로부터 방출된 광량을 검출한다. 방출되는 빛의 검출 파장은 520 ~ 620nm이다.
추가적으로, 레드 레이저 (600 ~ 700nm)로 감광성 미립자를 조사하고, 감광성 미립자에 의해 방출되는 단일상태산소이온 중 부분적 단일상태산소이온은 발광 미립자에 의해 수신되어 520 ~ 620nm의 고 에너지 레벨의 빛을 방출한다.
검출범위 내에서 측정하고자 하는 표적 항원의 농도는 이중 항체 샌드위치 결합 복합체의 수량으로 현시되며 광자 수량에 비례하지만; 측정하고자 하는 표적 항원 농도가 너무 높을 경우, 측정하고자 하는 항원의 일부는 단일 항체와 각각 결합하여 이중 항체 샌드위치 결합 복합체는 감소되며, 따라서 광 신호는 낮아지므로, 이 경우는 측정하고자 하는 표적 항원의 실제 농도를 반영하지 못한다.
같은 원리로, 검출범위 내에서, 측정하고자 하는 항체의 농도는 이중 항원 샌드위치 결합 복합체의 수량으로 현시되며, 광자의 수량에 비례하지만; 측정하고자 하는 표적 항체의 농도가 너무 높으면, 측정하고자 하는 항체의 일부는 각각 단일 항원과 결합하여 이중 항원 샌드위치 결합 복합체는 감소되며, 따라서 광 신호는 낮아지므로, 이 경우는 측정하고자 하는 표적 항체의 실제 농도를 반영하지 못한다.
본 발명의 방법은 2 차례의 판독에 의해 이 2 차례의 판독으로 얻어진 신호값의 증가폭 간의 관계를 비교함으로써, 검출 범위를 넓히고 HD-HOOK 효과 시료를 구분할 수 있는 역할을 발휘하게 된다. 2 차례에 걸친 판독값의 차이는 다음 세 가지 측면에 의해 결정된다.
첫 번째 측면에서, 제 1 차 판독이 진행될 때, 감광성 미립자는 레드 레이저 (600 ~ 700 nm)로 조사되어 단일상태산소이온을 방출한다. 일부 단일상태산소이온은 발광 미립자에 전달된 후 일련의 화학반응을 통해 520 ~ 620nm의 고에너지 레벨의 빛을 방출하며; 일부 단일상태산소이온은 항체(또는 항원)에 의해 결합되지 않은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)과 반응함으로써 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 농도를 낮추게 한다. 저농도 시료의 경우, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 농도가 감소한 후에 이중 항체 샌드위치 결합 복합체가 감소하고 이로 인해 제 2 차 판독 신호값이 감소하게 되며; 고농도 HD-HOOK 효과 시료의 경우, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 농도가 감소한 후, 이중 항체 샌드위치 결합 복합체가 증가하며, 이로 인해 제 2 차 판독 신호값은 오히려 증가하게 된다.
두 번째 측면에서, 저농도 시료의 경우, 감광성 미립자는 제 1 차 판독 과정에 레드 레이저 (600 ~ 700nm)로 조사되고, 이로 인해 단일상태산소이온이 방출된 후 에너지가 어느 정도 손실이 되어 제 2 차 판독 신호는 감소하게 된다.
세 번째 측면에서, HD-HOOK 효과의 경우, 제 1 차 판독이 진행될 때, 항원 및 항체 반응이 아직 평형에 이르지 않아 2 차례의 판독 간격 시간에도 반응이 지속적으로 정방향으로 진행하게 되며 따라서 제 2 차 판독 신호도 증가하게 된다.
결과적으로, 본 발명에서 반응이 아직 평형에 이르지 않았을 때, 제 1 차 판독을 진행할 경우, 감광성 미립자는 루미네선스의 조사로 인해 단일상태산소를 방출하고 그 중의 일부는 발광 미립자에 전달되고 일부는 아직 결합되지 않은 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체와 반응하며 이로 인해 일부 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 소모하여 반응 평형을 역으로 움직이게 하며, 또 다른 한 면으로, 감광성 미립자는 한 차례의 여기 스펙트럼을 받은 후 일정 정도 소모되는 바, 이로써 제 2 차 판독이 진행될 때, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체 농도가 낮은 시료의 신호값은 낮아지게 되며; 반대로 농도가 높은 시료의 이중 항체 샌드위치 결합 복합체는 감광성 미립자와 결합하여 제 1 차 판독이 진행될 때, 아직 평형에 이르기까지 꽤 이를 경우에는 제 2 차 판독 시행 시 반응은 지속적으로 정반응 방향으로 이동하게 되며 따라서 신호도 점차 높아지게 된다. 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)의 농도가 계속 높아짐에 따라 제 2 차 광루미네선스의 신호값과 제 1 차 신호값 간의 증가폭도 따라서 높아지게 된다. 신호의 증가폭은 시료의 농도와 정적 상관 관계가 있기 때문에 2 차례의 신호의 증가폭을 비교하여 보면, 신호값이 낮고 증가폭이 큰 시료는 HD-HOOK 효과가 있음을 알 수 있다.
본 발명의 네 번째 측면으로,
화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후의 혼합액에 대해 복수의 판독을 진행하기 위한 판독 유닛;
상기 판독 유닛에 연결되고, 판독 유닛의 판독에 근거하여 면역 측정에 HD-HOOK의 위험이 있는지를 판단하는 프로세싱 유닛을 포함하는 HD-HOOK 효과 시료 식별용 측정장치를 제공한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 배양 후의 혼합액을 판독 유닛으로 이동하는데 이용되는 이동 메커니즘이 더 포함된다.
본 발명의 또 다른 일부 실시예에 있어서, 상기 장치는 화학 발광 면역 반응을 위한 적절한 주변 온도를 제공하는 인큐베이터를 더 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 장치는 판독 완료 후 혼합액 재배양을 위해 인큐베이터로 리셋하기 위한 리셋 메커니즘을 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 이동 메커니즘은 푸싱 메커니즘을 말하며, 상기 리셋 메커니즘은 푸시백 메커니즘을 말하며, 상기 혼합액은 스트립을 이용하여 담아둔다.
본 발명의 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 판독 유닛은 화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후 혼합된 혼합액을 2 차례 판독하는 데 이용된다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 인큐베이터는 제 1 인큐베이터 및 제 2 인큐베이터를 포함하고, 상기 푸싱 메커니즘은 배양을 위해 제 1 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 제 2 인큐베이터로 푸싱하도록 구성되고, 상기 푸싱 메커니즘은 제 2 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 판독 유닛으로 푸싱하여 제 1 차 판독을 시행하게 하며;
상기 푸시백 메커니즘은 재배양을 위해 상기 제 1 차 판독이 완료된 후에 상기 혼합액을 다시 상기 제 2 인큐베이터로 푸시백하도록 구성되며;
상기 푸싱 메커니즘은 또 제 2 차 판독을 위해 제 2 인큐베이터 내의 재배양된 혼합액을 판독 유닛으로 이동하도록 추가로 이용되며;
상기 프로세싱 유닛이 제 2 차 판독과 제 1 차 판독값의 증가폭이 표준곡선의 최대치보다 큰 것으로 검출이 되면 이 면역측정에 HOOK의 위험이 있는 것으로 판단을 한다.
본 발명의 다른 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 푸시백 메커니즘은,
바닥판;
상기 바닥판 위에 설치된 가이드 레일;
상기 가이드 레일 위에 설치되고, 스트립 탑재용으로 사용되는 컵 이동 메커니즘;
상기 가이드 레일을 따라 이동하도록 상기 컵 이동 메커니즘을 구동시키는 구동 장치;
상기 바닥판의 양단부에 설치되어 상기 컵 이동 메커니즘의 위치를 검출하는데 이용되는 광전 감지기;
상기 광전 감지기에 연결되며, 상기 광전 감지기에 의해 방출되는 위치 신호에 의해 컵 이동 메커니즘의 위치를 조정할 수 있는 위치 조정 메커니즘을 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 가이드 레일은 직선 레일 또는 궤도가변 레일을 말한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 측정하고자 하는 시료와 시약의 혼합을 완료하기 위해 상기 인큐베이터의 일측에 설치되어 있는 스트립 시료 트레이와 상기 인큐베이터의 다른 일측에 설치되어 시약을 저장하기 위한 시약 냉장 구역을 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 상기 스트립 시료 트레이의 일측에 설치되어 블랭크 스트립을 상기 스트립 시료 트레이쪽으로 푸싱하는데 이용되는 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘을 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 시료 튜브를 탑재하기 위한 시료 튜브 캐리어를 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 상기 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘에 인접한 시료 튜브 캐리어에 설치되어 프리 희석 플레이트에 대해 희석 처리를 시행하는 희석 플레이트 발진기를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 바늘을 장착한 로보트 암을 더 포함하고,
그 중에서도, 상기 로보트 암은 제 1 로보트 암 및 제 2 로보트 암을 포함하고, 상기 제 1 로보트 암은 상기 시료 튜브 캐리어 구역으로부터 시료를 인출하여 이를 스트립 시료 트레이의 스트립에 배분하고, 상기 제 2 로보트 암은 시약 냉장 구역에서 시약을 인출하여 이를 스트립 시료 트레이의 스트립에 배분하는데 이용된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 제 1 세척 메커니즘 및 제 2 세척 메커니즘을 더 포함하고, 상기 제 1 세척 메커니즘은 상기 제 1 로보트 암의 상기 장착 바늘을 세척하는데 이용되며, 상기 제 2 세척 메커니즘은 제 2 로보트 암의 장착 바늘을 세척하는데 이용된다.
구체적으로 시료는 인큐베이터에 들어가기 전에 다음 단계를 거쳐야 한다.
1. 블랭크 스트립은 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘에 의해 스트립 시료 트레이 위치 (D0)로 푸싱되며;
2. 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이로 푸싱하여 DO 위치로 이동하게 한 후, 시계 방향으로 90도 회전하여 스트립 시료 트레이 위치 D1까지 오게 하고. 이 위치에서 제 1 로보트 암은 시료 튜브 캐리어 구역에서 시료를 인출하여 블랭크 스트립에 시료를 적재하며;
3. 시료 배분을 완료한 후, 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D2까지 시계 방향으로 90도 회전시킨 후 이 위치에서 작동을 멈추며;
4. 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D3까지 시계 방향으로 90도 회전하고 이 위치에서 시약은 제 2 로보트 암에 의해 시약 냉각 구역에서 인출되어 그 위치에 있는 스트립에 배분된다.
D3 위치에 있는 모든 스트립에 대한 시료 배분을 완료한 후 이를 전부 인큐베이터 (상기 푸싱 메커니즘은 도면에 미도시)로 이송한 후 , 스트립 시료 트레이를 D3 위치에서 D0(이 과정은 D1 위치에서의 스트립의 시료 배분 작업이 완료된 후 시행하여야 함)으로 회전하고, 이로써 스트립 시료 트레이의 1 차 순환을 완료한다. 스트립 시료 트레이가 전부하로 작동할 때, 스트립 시료 트레이의 D0 위치에서 블랭크 스트립을 적재하고, D1 위치에서 시료 배분을 시행하며, D2 위치에서 대기하고, D3 위치에서 시약을 배분하여 시약 배분을 완료한 후 스트립을 인큐베이터에 이송한다. 스트립 시료 트레이의 회전은 회전하기 전에 D0 ~ D3의 이 4 개 구역에서의 모든 작업이 완료되기를 기다려야 한다.
시료 채취를 완료한 후의 스트립은 제 1 인큐베이터 내로 푸싱되어 배양을 완료한 후 푸싱 메커니즘은 다시 상기 스트립을 제 2 인큐베이터 내로 푸싱한다. 이 과정에서, 특이적 결합물 표지를 한 표지물 감광성 미립자를 측정하고자 하는 시료 및 시약의 스트립에 투여한 후, 상기 시료는 배양을 위해 제 2 인큐베이터(12)에 푸싱된다. 배양 후, 스트립은 푸싱 메커니즘에 의해 판독 유닛에 푸싱되어 광루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이에 근거해 제 1 차 판독값을 기록한다. 제 1 차 판독을 완료한 스트립은 재배양을 위해 푸시백 메커니즘에 의해 제 2 인큐베이터로 푸시백되어 재배양을 거친 후 상기 스트립은 다시 푸싱 메커니즘에 의해 판독 유닛에 푸싱되어 광루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이에 근거해 제 2 차 판독을 기록한다. 2 차례의 판독을 완료한 후, 프로세싱 유닛은 이 2 차례의 판독값을 처리하는데 이때, 제 2 차 판독값과 제 1 판독값 간의 증가폭이 표준곡선의 최대값보다 크면, 면역 측정에 후크(HOOK) 위험이 있는 것으로 판단된다. 한 가지 방법은 상기 장치가 정성적으로 HOOK 프롬프트를 제시함으로써 작업자는 이에 근거해 시료를 희석한 후 다시 측정을 시행할 수 있으며; 두 번째 방법은 상기 장치가 정량 결과를 직접 제공하게 하는 방법인데 이 경우 정량 결과는 선형 범위보다 훨씬 높은 것이 문제시된다.
종래 기술과 비교하여, 상기 장치는 판독 유닛을 설치하여 배양한 후의 혼합액에 대해 2 차례 심지어는 복수 판독을 시행하도록 하고 프로세싱 유닛을 이용해 판독 유닛의 판독값을 처리하여 면역 측정에 HOOK 위험이 있는지를 판단함으로써 HOOK 효과로 인해 측정하고자 하는 시료에 대하여 그 농도가 검출 키트의 선형 범위를 초과하여 얻어진 값인지 아니면 그 자체 농도가 바로 그 값인지를 정확하게 가려내지지 못하는 것을 방지할 수 있으며 이로써 실험 오진을 피할 수 있다.
본 발명은 다섯 번째 측면으로,
(1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료에 화학 발광 면역 반응을 진행하여 여기 스펙트럼으로 화학발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭을 A 로 기록하며, (2) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A’를 표준곡선으로 하고/하거나 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질에 대한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A "를 표준으로 하며; (3) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과/또는 표준과 비교하는 단계를 포함하는 면역측정 방법을 제공한다.
여기서 설명해야 할 것은, 측정하고자 하는 시료의 차이값의 증가폭과 공지된 표준물질의 차이값의 증가폭의 반응조건과 반응 간에는 일관적임에 유의하여야 한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A와 상기 표준곡선을 서로 비교하였다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 공지된 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 (시료의) 농도보다 낮으며 여기서 말하는 공지된 상기 표준물질은 양성 대조군을 가리킨다.
본 발명의 또 다른 일부 실시예에 있어서, 상기 방법은 만일 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대치보다 크면 시료를 희석한 다음 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 방법은,
(a1) 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)에 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)을 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(a2) 단계 (a1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(a3) 단계 (a2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(a4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(a5) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A’에 의해 표준곡선이 얻어지며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(a6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준과 비교하고 상기 표준을 임계값으로 기록하며; 및/또는 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군을 말한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 방법은 만일 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 방법은,
(c1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(c2) 상기 단계 (c1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(c3) 상기 단계 (c2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(c4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(c5) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(c6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 방법은,
만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 방법은,
(d1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(d2) 상기 단계 (d1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(d3) 상기 단계 (d2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(d4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(d5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(d6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 사이의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과 비교하고; 상기 방법은 시료의 농도를 측정하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 방법은,
(b1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(b2) 상기 단계 (b1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(b3) 상기 단계 (b2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(b4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(b5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A'를 표준곡선으로 하는 단계;
(b6) A 값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 표준곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계를 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 발광 미립자는 발광 화합물 및 란타노이드 화합물로 채워진 고분자 미립자를 말하며; 상기 감광성 미립자는 감광성 화합물로 채원진 고분자 미립자로서, 레드 레이저의 여기 스펙트럼 하에서 단열상태산소이온을 생성할 수 있다.
본 발명에 있어서, 600 ~ 700 nm의 레드 루미네선스를 조사하고 반응 용액으로부터 방출되는 광량을 검출하며; 방출되는 빛의 검출 파장은 520 ~ 620 nm이다.
본 발명에 있어서, 상기 항원은 면역원성을 갖는 물질을 말하며; 상기 항체는 특정 이물질을 식별하는 생체에서 생성되는 면역 글로불린을 말하며; 상기 제 1 항체 및 제 2 항체는 상기 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 말하며; 상기 제 1 항원 및 제 2 항원은 상기 표적 항체에 특이적으로 결합하는 항원을 말한다.
본 발명의 여섯 번째 측면으로,
화학 발광 면역 반응의 시행을 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭을 A로 기록하는 화학 발광 면역 반응 여기 스펙트럼 및 계수 장치;
프로세서를 포함하는 면역 측정 식별용 시스템을 제공한다.
구체적인 실시예에 있어서, 본 발명은 용액을 담는 용기 등을 포함하는 면역 반응 장치; 광자 계수 모듈 및 발광 다이오드 등을 포함하는 화학 발광 면역 반응 여기 스펙트럼 장치와 계수 장치; 및 상기 판독값을 처리하여 매핑 등 작업을 하는 컴퓨터 등을 포함하는 프로세서를 포함하는 면역측정 식별용 시스템을 제공한다. 이러한 면역측정 식별용 시스템에는 본 출원인의 실용 신안 특허 CN201532646U를 들 수 있으며 상기 문헌은 인용방식을 통해 본 출원에 편입된다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A에 의해 표준곡선을 얻는데 이용되며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮으며; 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 크면 시료를 다시 희석한 후 측정하여야 한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은
(1) 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)에 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A에 의해 표준곡선이 얻어지며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)을 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하는데 이용되며, 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높음을 알 수 있다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은,
(1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 (또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값으로 하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 서로 비교하는데 이용되며, 만일 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 공지된 표준물질보다 낮은 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은,
(1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 (또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값으로 하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 제 1 차 판독과 2 차례의 판독값의 증가폭 A로 각각 표준곡선을 얻는데 이용되며, 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 1 차 판독값과 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 표준곡선과 서로 비교하여 이를 통해 시료의 농도를 확정한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은,
(1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 (또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 표준곡선으로 하는 단계;
(6) A 값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 표준곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계를 포함하며,
상기 표준곡선은 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 일련의 표준물질의 제 1 차 판독값과 공지된 일련의 표준물질의 농도에 따라 얻은 곡선을 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 발광 미립자는 발광 화합물 및 란타노이드 화합물로 채워진 고분자 미립자를 말하며; 상기 감광성 미립자는 감광성 화합물로 채원진 고분자 미립자로서, 레드 레이저의 여기 스펙트럼 하에서 단열상태산소이온을 생성할 수 있다.
본 발명에 있어서, 600 ~ 700 nm의 레드 루미네선스를 조사하고 반응 용액으로부터 방출되는 광량을 검출하며; 방출된 빛의 검출 파장은 520 ~ 620 nm이다.
본 발명에 있어서, 상기 항원은 면역원성을 갖는 물질을 말하며; 상기 항체는 특정 이물질을 식별하는 생체에서 생성되는 면역 글로불린을 말하며; 상기 제 1 항체 및 제 2 항체는 상기 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 말하며; 상기 제 1 항원 및 제 2 항원은 상기 표적 항체에 특이적으로 결합하는 항원을 말한다.
본 발명의 일곱 번째 측면으로,
제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원), 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 포함하는 키트를 제공하며, 상기 키트의 사용 방법은, (1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료에 대해 화학 발광 면역 반응을 진행하여 여기 스펙트럼으로 화학발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭을 A 로 기록하는 단계, (2) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A’를 표준곡선으로 하고/하거나 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A"를 표준으로 하는 단계; (3) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)을 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과/또는 표준과 비교하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과 서로 비교한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 공지된 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 (시료의) 농도보다 낮으며 또한 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군을 말한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대치보다 크면 시료에 대해 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은,
(a1) 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)에 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)을 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(a2) 단계 (a1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(a3) 단계 (a2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(a4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(a5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A’를 표준곡선으로 하며, 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(a6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준과 비교하고 상기 표준을 임계값으로 기록하며; 및/또는 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군을 말한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은, 만일 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은,
(c1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(c2) 상기 단계 (c1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고 , 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(c3) 상기 단계 (c2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(c4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(c5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(c6) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은, 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은,
(d1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(d2) 상기 단계 (d1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(d3) 상기 단계 (d2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(d4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(d5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(d6) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 측정 시료의 제 1 차 판독값과 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과 비교하여 시료의 농도를 확정하는 단계 (4)를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 키트의 사용방법은,
(b1) 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료를 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(b2) 상기 단계 (b1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(b3) 상기 단계 (b2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(b4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(b5) 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A'를 표준곡선으로 하는 단계;
(b6) A 값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 표준곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계를 포함하며,
상기 표준곡선은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 공지된 일련의 표준물질의 제 1 차 판독값과 공지된 일련의 표준물질의 농도에 의해 작성한 곡선을 포함한다.
여기서 특별히 설명해야 할 것은, 상기 방법은 비질병 진단을 목적으로 하는 방법으로, 상기 방법은 이중 항체 샌드위치 결합 면역법 또는 이중 항원 샌드위치 결합 면역법의 검출 과정에서 2 차례의 판독을 통해 검출 범위를 넓히며 측정하고자 하는 시료에 HOOK 효과가 있는지를 정확하게 판단하며 측정하고자 하는 시료 중의 검체의 농도를 용이하고 빠르게 산출할 수 있다.
바람직하게는, 상기 항원은 면역원성을 갖는 단백질, 폴리펩티드를 포함하는 물질을 말하며, 대표적인 항원으로는 사이토카인, 종양 표지물, 금속 단백질류, 심혈관 당뇨병 관련 단백질 등을 포함(그러나 이에 한정되지 않음)한다.
상기 항체는 특정 이물질을 식별하는 생체에서 생성되는 면역 글로불린을 말한다.
본 발명의 일부 실시예에서, 상기 항원 또는 항체는 인슐린(INS), B형간염 바이러스 표면항체(HBsAb), 알파태아단백(AFP), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 등에서 선택된다.
본 발명의 방법에 의해 검출할 수 있는 시료는 특별히 한정되지 않으며, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 포함하는 임의의 시료일 수 있고, 그 대표적인 예로는 혈청 시료, 뇨액 시료, 타액 시료 등을 들 수 있다. 본 발명의 바람직한 시료는 혈청 시료이다.
바람직하게는, 상기 제 1 항체 및 제 2 항체는 상기 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 말한다.
동일한 항원에 있어서, 상응하는 제 1 항체 및 제 2 항체는 동일하거나 상이할 수 있으며, 또 동시에 상기 항원에 결합할 수 있다.
상기 제 1 항원 및 제 2 항원은 상기 표적 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 항원을 말한다.
동일한 항체에 대해, 상응하는 제 1 항원 및 제 2 항원은 동일하거나 상이할 수 있으며 또 동시에 상기 항체에 결합할 수 있다.
바람직하게는, 상기 표지물은 특이적 결합물인 표지물에 특이적으로 결합할 수 있다.
보다 바람직하게는, 상기 표지물은 비오틴을 말하고 특이적 결합물인 표지물은 스트렙 타비딘을 말한다.
바람직하게는, 상기 발광 미립자는 발광 화합물 및 란타노이드 화합물로 충전된 고분자 미립자이다. 발광 화합물은 Dioxene(다이옥신) 또는 thioxene(티옥신)의 유도체일 수 있고, 란타노이드 화합물은 Eu (TTA) 3 / TOPO 또는 Eu (TTA) 3 / Phen 과 같은 것일 수 있다. 상기 미립자는 시중에서 구입할 수 있다. 발광 미립자의 표면 작용기는 임의의 단백질 그룹과 결합할 수 있으며 상기 단백질 그룹은 카르복시기, 알데히드기, 아민기, 에폭시에틸 또는 할로 알킬기 등의 공지된 각종 단백질 결합 가능한 작용기를 들 수 있다.
바람직하게는, 상기 감광성 미립자는 감광성 화합물로 충전된 고분자 미립자로, 레드 레이저의 루미네선스 하에 단일상태산소이온이 생성될 수 있다. 발광 미립자에 충분히 접근하게 되면, 단일상태산소이온은 발광 미립자로 전달되어 발광 미립자 내의 발광 화합물과 반응하여 자외광을 생성시키고, 자외광은 다시 란타노이드 화합물을 자극시켜 특정 파장의 광자를 생성한다. 감광성 화합물은 프탈로시아닌 염료 등 일수 있으며 상기 미립자 역시 시중에서 구입할 수 있다.
바람직하게는, 600 ~ 700 nm의 레드 루미네선스를 조사하고, 반응 용액으로부터 방출된 광량을 검출한다. 방출되는 빛의 검출 파장은 520 ~ 620nm이다.
또한, 레드 레이저 (600 ~ 700nm)가 감광성 미립자를 조사하고, 감광성 미립자에 의해 방출되는 단일상태산소이온에서 일부의 단일상태산소이온은 발광 미립자에 의해 접수되어 520 ~ 620nm의 고 에너지 레벨의 빛을 방출한다.
검출 범위 내에서 측정하고자 하는 표적 항원의 농도는 이중 항체 샌드위치 결합 복합체의 수량으로 표시되며 광자 수량에 정비례하지만; 측정하고자 하는 표적 항원 농도가 너무 높으면 측정 항원의 일부는 단일 항체와 각각 결합하여 이중 항체 샌드위치 결합 복합체는 감소되고, 이에 따라 광 신호는 낮아지며, 이 경우 측정하고자 하는 표적 항원의 실제 농도를 반영하지 못하게 된다.
같은 원리로, 검출범위 내에서, 측정하고자 하는 항체의 농도는 이중 항원 샌드위치 결합 복합체의 수량으로 표시되며, 광자의 수량에 정비례하지만; 측정하고자 하는 표적 항체의 농도가 너무 높으면, 측정 항체의 일부는 각각 단일 항원과 결합하여 이중 항원 샌드위치 결합 복합체는 감소되고, 따라서 광 신호는 낮아지며, 이 경우 측정하고자 하는 표적 항체의 실제 농도를 반영하지 못하게 된다.
본 발명의 방법에 있어서, 2 차례의 판독에 의해 이 2 차례의 판독으로 얻어진 신호값의 증가폭 간의 관계를 비교함으로써, 검출 범위를 넓히는 역할을 할 수 있다. 2 차례에 걸친 판독값의 차이는 다음의 세 가지 측면에 의해 결정된다.
첫 번째 측면에서, 제 1 차 판독이 시행될 때, 감광성 미립자는 레드 레이저 (600 ~ 700 nm)로 조사되어 단일상태산소이온을 방출한다. 일부 단일상태산소이온은 발광 미립자에 전달된 후 일련의 화학반응을 통해 520 ~ 620 nm의 고에너지 레벨의 빛을 방출하며; 일부 단일상태산소이온은 항체(또는 항원)에 의해 결합되지 않은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)와 반응하여 측정 표적 항원(또는 항체)의 농도를 낮춘다. 저농도 시료의 경우, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 농도가 감소한 후에 이중 항체 샌드위치 결합 복합체가 감소하고 제 2 차 판독 신호값이 감소하게 되며; 그러나 고농도 시료에 있어서는, 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)의 농도가 감소된 후에, 이중 항체 샌드위치 결합 복합체가 증가하게 되며, 따라서 제 2 차 판독 신호값은 오히려 증가하게 된다.
두 번째 측면에서, 저농도 시료의 경우 감광성 미립자는 제 1 차 판독 과정에 레드 레이저 (600 ~ 700nm)로 조사되고, 이로 인해 단일상태산소이온이 방출된 후 에너지가 어느 정도 손실되고 제 2 차 판독 신호는 감소하게 된다.
세 번째 측면에서 HD-HOOK 효과의 경우, 제 1 차 판독이 시행될 때, 항원 및 항체 반응이 아직 평형에 이르지 않아 2 차례의 판독 간격 시간에도 반응이 지속적으로 정방향으로 진행하게 되며 따라서 제 2 차 판독 신호는 증가하게 된다.
요약하면, 본 발명에서 반응이 아직 평형에 이르지 않았을 때 제 1 차 판독을 시행하였을 경우, 감광성 미립자는 루미네선스의 조사로 인해 단일상태산소를 방출하고 그 중의 일부는 발광 미립자에 전달되고 일부는 아직 결합되지 않은 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체와 반응하여 일부 측정 표적 항원 또는 항체를 소모하여 반응 평형을 역으로 이동하게 하며, 다른 한 면으로, 감광성 미립자는 한 차례의 자극을 받은 후 일정 정도 소모되는바 제 2 차 판독이 시행될 때, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체의 농도가 낮은 시료의 신호값은 낮아지게 되며; 반대로 농도가 높은 시료의 이중 항체 샌드위치 결합 복합체는 감광성 미립자와 결합하여 제 1 차 판독이 시행될 때, 아직 평형에 이르기까지 꽤 이를 경우에는 제 2 차 판독 시행 시 반응은 정반응 방향으로 이동하게 되며 따라서 신호도 증가하게 되며 측정하고자 하는 표적 항원 (또는 항체)의 농도가 계속 높아짐에 따라 제 2 차 광루미네선스의 신호값과 제 1 차 신호값 간의 증가폭도 높아지게 된다. 신호의 증가폭은 시료의 농도와 정적 상관 관계가 있기 때문에 2 차례 신호의 증가폭을 비교하여 검출 범위를 넓힐 수 있으며 이로써 검출 과정에서 쉽고 빠르게 시료의 농도를 산출할 수 있다.
선행 기술과 비교하여, 본 발명의 상기 방법은 광루미네선스 화학 발광 플랫폼(발광 산소 채널)의 무세척과 반응의 균일성에 기초하고, 면역 반응을 중단하지 않으면서도 하나의 반응에 대해 복수 신호 측정을 시행할 수 있으며, 서로 다른 반응 시간의 광 신호를 검출하여 두 신호의 대소를 비교하여 HD-HOOK 효과 시료를 구분할 수 있으며 상기 방법은 검출 범위의 제한을 받지 않으며 검출 범위를 100 배 이상 효과적으로 확장할 수 있다. 동시에, 본 발명의 방법은 이중 항체 샌드위치 결합법 검출에서 HD-HOOK의 효과 시료를 100% 정확하게 식별할 수 있으며 상기 방법은 이중 항체 샌드위치 결합법 면역 측정의 정확성을 뚜렷하게 향상시키고 이중 항체 샌드위치 결합법 면역 측정의 위음성율을 낮추게 한다. 또한, 본 발명의 방법은 조작이 용이한 바, 2 차례의 판독값에 의해 검출 범위를 넓히고, 검출 과정에서 쉽고 빠르게 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출할 수 있다.
본 발명의 여덟 번째 측면으로,
화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후 상기 혼합된 혼합액에 대해 복수 판독을 시행하기 위한 판독 유닛;
상기 판독 유닛에 연결되고, 판독 유닛의 판독에 기초하여 면역 측정에 HOOK의 위험이 있는지를 판단하는 프로세싱 유닛을 포함하는 HD-HOOK 효과 시료를 식별하기 위한 면역측정장치를 제공한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 장치는 배양후의 혼합액을 판독 유닛으로 이동하는데 사용하는 이동 메커니즘이 더 포함된다.
본 발명의 또 다른 일부 실시예에 있어서, 상기 장치는 화학 발광 면역 반응을 위한 적절한 주변 온도를 제공하는 인큐베이터를 더 포함한다.
본 발명의 일부 실시예에 있어서, 상기 장치는 판독 완료 후의 혼합액의 재배양을 위해 인큐베이터로 리셋하기 위한 리셋 메커니즘을 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 이동 메커니즘은 푸싱 메커니즘을 말하며, 상기 리셋 메커니즘은 푸시백 메커니즘을 말하며, 상기 혼합액은 스트립을 이용하여 담아 둔다.
본 발명의 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 판독 유닛은 화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후 혼합된 혼합액을 2 차례 판독하는데 사용된다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 인큐베이터는 제 1 인큐베이터 및 제 2 인큐베이터를 포함하고, 상기 푸싱 메커니즘은 배양을 위해 제 1 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 제 2 인큐베이터로 푸싱하도록 구성되고, 상기 푸싱 메커니즘은 제 2 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 판독 유닛으로 푸싱하여 제 1 차 판독을 시행하게 하며;
상기 푸시백 메커니즘은 재배양을 위해 상기 제 1 차 판독이 완료된 후에 상기 혼합액을 다시 상기 제 2 인큐베이터로 푸시백하도록 구성되며;
상기 푸싱 메커니즘은 또 제 2 판독을 위해 제 2 인큐베이터내의 재배양된 혼합액을 판독 유닛으로 이동하는데 또 이용되며;
상기 프로세싱 유닛이 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값의 증가폭이 표준곡선의 최대치보다 큰 것으로 검출이 되면 이 면역측정에 HOOK의 위험이 있는 것으로 판단하는 과정을 포함한다.
본 발명의 다른 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 푸시백 메커니즘은,
바닥판;
상기 바닥판 위에 설치된 가이드 레일;
상기 가이드 레일 위에 설치되고, 스트립 탑재용으로 사용되는 컵 이동 메커니즘;
상기 가이드 레일을 따라 이동하도록 상기 컵 이동 메커니즘을 구동시키는 구동 장치;
상기 바닥판의 양단부에 설치되어 상기 컵 이동 메커니즘의 위치를 검출하는데 사용되는 광전 감지기;
상기 광전 감지기에 연결되며, 상기 광전 감지기에 의해 방출되는 위치 신호에 의해 컵 이동 메커니즘의 위치를 조정할 수 있는 위치 조정 메커니즘을 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 가이드 레일은 직선 레일
또는 궤도가변 레일이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 측정하고자 하는 시료와 시약의 혼합을 완료하기 위해 상기 인큐베이터의 일측에 설치되어 있는 스트립 시료 트레이와 상기 인큐베이터의 다른 일측에 설치되어 시약을 저장하기 위한 시약 냉장 구역을 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 상기 스트립 시료 트레이의 일측에 설치되어 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이쪽으로 푸싱하는데 사용되는 블랭크 스트립 스택과 적재 메커니즘을 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 시료 튜브를 탑재하기 위한 시료 튜브 캐리어를 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 상기 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘과 인접한 시료 튜브 캐리어에 설치되어 프리 희석 플레이트에 대해 희석 처리를 시행하는 희석 플레이트 발진기를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 바늘을 장착한 로보트 암을 더 포함하고,
그 중에서, 상기 로보트 암은 제 1 로보트 암 및 제 2 로보트 암을 포함하고, 상기 제 1 로보트 암은 상기 시료 튜브 캐리어 구역으로부터 시료를 인출하여 이를 스트립 시료 트레이의 스트립에 배분하고, 상기 제 2 로보트 암은 시약 냉장 구역에서 시약을 인출하여 이를 스트립 시료 트레이의 스트립에 배분하는데 사용된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 제 1 세척 메커니즘 및 제 2 세척 메커니즘을 더 포함하고, 상기 제 1 세척 메커니즘은 상기 제 1 로보트 암의 상기 장착 바늘을 세척하기 위한데 사용되고, 상기 제 2 세척 메커니즘은 제 2 로보트 암의 장착 바늘을 세척하는데 사용된다.
구체적으로 시료는 인큐베이터에 이송하기 전에,
1. 블랭크 스트립은 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘에 의해 스트립 시료 트레이 위치 (D0)로 푸싱되고;
2. 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이로 푸싱하여 DO 위치로 이동시킨 후, 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D1까지 시계 방향으로 90도 회전하고, 이 위치에서 제 1 로보트 암은 시료 튜브 캐리어 구역에서 시료를 인출하여 블랭크 스트립에 시료를 적재하며;
3. 시료 배분을 완료한 후, 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D2까지 시계 방향으로 90도 회전하고 이 위치에서 작동을 멈추며;
4. 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D3까지 시계 방향으로 90도 회전하고 이 위치에서 시약은 제 2 로보트 암에 의해 시약 냉장 구역에서 인출되어 그 위치에 있는 스트립에 배분하는 단계를 경과한다.
D3 위치에 있는 모든 스트립에 대한 시료 배분을 완료한 후 이를 전부 인큐베이터 (상기 푸싱 메커니즘은 도면에 미도시)로 이송한 후 , 스트립 시료 트레이를 D3 위치에서 D0(이 과정은 D1 위치에서의 스트립의 시료 배분 작업이 완료된 후 시행하여야 함)으로 회전하고, 이로써 스트립 시료 트레이의 1 차 순환을 완료한다. 스트립 시료 트레이가 전부하로 작동할 때, 스트립 시료 트레이의 D0 위치에서 블랭크 스트립을 적재하고, D1 위치에서 시료 배분을 시행하며, D2 위치에서 대기하고, D3 위치에서 시약을 배분하여 시약 배분을 완료한 후 스트립을 인큐베이터에 이송한다. 스트립 시료 트레이의 회전은 D0 ~ D3의 이 4 개 구역에서의 모든 작업이 완료된 후 회전하여야 한다.
시료 채취를 완료한 후의 스트립은 제 1 인큐베이터 내로 푸싱되어 배양을 완료한 후 푸싱 메커니즘은 다시 상기 스트립을 제 2 인큐베이터 내로 푸싱한다. 이 과정에서, 특이적 결합물 표지를 한 표지물 감광성 미립자를 측정하고자 하는 시료 및 시약에 투여한 후, 시료는 배양을 위해 제 2 인큐베이터(12)에 푸싱된다. 배양 후, 스트립은 푸싱 메커니즘에 의해 판독 유닛에 푸싱되어 루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이로써 제 1 판독값을 기록한다. 제 1 차 판독을 완료한 스트립은 재배양을 위해 푸시백 메커니즘에 의해 제 2 인큐베이터로 푸시백되어 재배양을 거친 후 상기 스트립은 다시 푸싱 메커니즘에 의해 판독 유닛에 푸싱되어 루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이때 제 2 차 판독을 기록한다. 2 차례의 판독을 완료한 후, 프로세싱 유닛은 이 두 차례의 판독값을 처리하는데 이때, 제 2 차 판독값과 제 1 판독값 사이의 증가폭이 표준곡선의 최대값보다 크면, 면역 측정에 후크(HOOK) 위험이 있는 것으로 판단된다. 한 가지 방법은 상기 장치가 정성적으로 HOOK 프롬프트를 제시함으로써 작업자는 시료를 희석한 후 다시 측정을 시행할 수 있으며; 두 번째 방법은 상기 장치가 정량 결과를 직접 제공하나 이 정량 결과는 선형 범위보다 훨씬 높은 것이 문제시된다.
종래 기술과 비교하여, 본 발명에 있어서 상기 장치는, 판독 유닛을 설치하여 배양한 후의 혼합액에 대해 2 차례 내지 심지어 복수 판독을 시행할 수 있으며 또 프로세싱 유닛을 이용해 판독 유닛의 판독값을 처리하여 면역 측정에 HOOK 위험이 있는지를 판단함으로써 HOOK 효과로 인해 측정하고자 하는 시료에 대하여 그 농도가 검출 키트의 선형 범위를 초과하여 얻어진 값인지 아니면 그 자체 농도가 바로 그 값인지를 정확하게 가려내지지 못하게 되는 것을 방지할 수 있으며 이로써 실험 오진을 피할 수 있는 장점이 있다.
다음은 도면과 결부하여 본 발명에 대하여 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 그 중에서,
도 1은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 케이스 내부 구조를 나타낸 개략도 1이다.
도 2는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 케이스 내부 구조를 나타낸 개략도 2이다.
도 3은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 푸시백 메커니즘을 나타낸 개략도 1이다.
도 4는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 푸시백 메커니즘을 나타낸 개략도 2이다.
도 5는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치를 나타낸 개략도 1이다.
도 6은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치를 나타낸 개략도 2이다.
도 7은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 하나의 완정한 테스트 과정을 나타낸 순서도이다.
도 8은 종래의 방법을 사용하여 HCG + β에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 9는 본 발명의 방법을 사용하여 HCG + β에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 10은 종래의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 11은 본 발명의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 12는 종래의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 표본 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 13은 본 발명의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 14는 종래의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 15는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 16은 종래의 검출방법을 사용하여 INS에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 17은 본 발명의 방법을 사용하여 INS에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 간의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 18은 종래의 검출방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 19는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 간의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 20은 종래의 검출방법을 사용하여 AFP에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 21은 본 발명의 방법을 사용하여 AFP에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 22는 종래의 검출방법을 사용하여 TSH에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 23은 본 발명의 방법을 사용하여 TSH에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 24는 종래의 검출방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 25는 본 발명의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 26은 종래의 검출방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 27은 본 발명의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 28은 종래의 검출방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 29는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도면에서, 동일한 부재에는 동일한 부호를 사용하였으며 도면은 실제 비율에 따라 도시된 것이 아니다.
도 1은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 케이스 내부 구조를 나타낸 개략도 1이다.
도 2는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 케이스 내부 구조를 나타낸 개략도 2이다.
도 3은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 푸시백 메커니즘을 나타낸 개략도 1이다.
도 4는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 푸시백 메커니즘을 나타낸 개략도 2이다.
도 5는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치를 나타낸 개략도 1이다.
도 6은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치를 나타낸 개략도 2이다.
도 7은 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정장치 및 면역 측정 장치의 하나의 완정한 테스트 과정을 나타낸 순서도이다.
도 8은 종래의 방법을 사용하여 HCG + β에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 9는 본 발명의 방법을 사용하여 HCG + β에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 10은 종래의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 11은 본 발명의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 12는 종래의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 표본 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 13은 본 발명의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 14는 종래의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 15는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 A의 시료 농도와의 관계를 각각 보여주는 그래프이다.
도 16은 종래의 검출방법을 사용하여 INS에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 17은 본 발명의 방법을 사용하여 INS에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 간의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 18은 종래의 검출방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 19는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 간의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 20은 종래의 검출방법을 사용하여 AFP에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 21은 본 발명의 방법을 사용하여 AFP에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 22는 종래의 검출방법을 사용하여 TSH에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 23은 본 발명의 방법을 사용하여 TSH에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 24는 종래의 검출방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 25는 본 발명의 방법을 사용하여 Ferr에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 26은 종래의 검출방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 27은 본 발명의 방법을 사용하여 C-펩타이드에 의해 얻어진 신호값과 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 28은 종래의 검출방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 신호값과 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도 29는 본 발명의 방법을 사용하여 HBsAb에 의해 얻어진 제 1 차 판독 신호와 증가폭 A의 시료 농도 사이의 관계를 보여주는 그래프이다.
도면에서, 동일한 부재에는 동일한 부호를 사용하였으며 도면은 실제 비율에 따라 도시된 것이 아니다.
본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용을 설명하기 전에 본 발명의 청구범위는 다음의 특정된 구체적인 실시형태에 제한된 것이 아니며 또한 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 형태에서 사용된 용어들은 단지 본 발명의 특정된 구체적인 실시형태를 설명하기 위한 목적에서 사용된 것이지 특허청구범위에 기재된 본 발명의 범위를 제한하기 위하여 사용된 것은 아니다.
실시예에 있어서, 수치 범위를 제시하였을 때, 본 발명에서 이에 대한 특별한 설명을 한 경우를 제외하고 각 수치의 범위의 시작 수치와 마지막 수치 및 그 사이의 임의의 수치 중에서 선택될 수 있는 것으로 이해해야 할 것이다. 본 발명에 사용된 모든 기술적 용어와 과학적 용어는 본 기술 분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 실시예에서 사용된 구체적인 방법, 장치, 재료 외에도, 본 기술 분야의 통상의 지식을 가진자라면, 종래 기술에 대한 이해와 본 발명의 기재된 내용에 따라 본 발명의 실시예에서 기재한 방법, 장치, 재료와 상사 또는 동일한 종래 기술의 임의의 방법, 장치 및 재료를 사용하여 본 발명의 타 실시예가 가능할 것이다.
달리 언급하지 않는 한, 본 발명에서 개시된 실험 방법, 검출방법 및 제조방법은 본 기술 분야의 통상적인 분자 생물학, 생화학, 염색질 구조 및 분석, 화학 분석, 세포 배양, 재조합 DNA 기술 및 관련 분야의 통상적인 기술을 사용한다. 이러한 기술은 기존 문헌에서 이미 잘 설명되어있다. 구체적으로 Sambrook 등 MOLECULAR CLONING 을 참조할 수 있다. A LABORATORY MANUAL, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 and Third edition, 2001; Ausubel 등, CURRENT PROLOCOLS IN MULECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, New York, 1987 and periodic updates; the series METHODS IN ENZYMOLOGY, Academic Press, San Diego; Wolffe, CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press, San Diego，1998 ； METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin (P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，Academic Press, San Diego, 1999 ；와 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY， Vol. 119， Chromatin Protocols(P.B.Becker, ed.)Humana Press, Totowa，1999 등이다.
본 발명의 발명인은 광범위하고 심도 깊은 연구를 통해, 반응을 중단하지 않는 전제에서 2 차례의 판독을 설정하고 이 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 측정하고자 하는 시료를 희석하여 다시 측정해야 할 것인지를 판단하며; 또는 두 차례의 판독값의 증가폭 A와 시료 농도 사이의 관계를 구축하여 2 차례의 판독값으로 검출범위를 넓혀 검출 과정에서 간편하고 빠르게 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출하며; 또는 2 차례의 판독값의 증가폭과 시료 사이의 관계가 HD-HOOK 효과 시료 사이의 관계인지를 연구하여 이중 샌드위치 결합 면역 측정에서 HD-HOOK 효과로 인한 위음성을 쉽고 효과적으로 제거함으로써 이중 샌드위치 결합 면역 측정의 정확성을 높일 수 있음을 밝혀냈다. 또한, 본 발명의 발명자는 배양 후 혼합액에 대해 2 차례 및 그 이상의 판독을 시행할 수 있는 측정 장치를 제공하였다. 상기 장치를 이용하여 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법 및 면역 측정 방법을 시행에 옮길 수 있다.
도 1 및 도 2는 본 발명에 따른 상기 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 측정 장치 및 면역 측정 장치의 케이스 내부 구조를 나타낸 개략도이며, 여기에는,
화학 발광 면역 반응을 위한 적절한 주위 온도를 제공하기 위한 제 1 배양기(11) 및 제 2 배양기(12)를 포함하는 배양기(1);
화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후의 혼합액에 대해 2 차례의 판독을 수행하는 판독 유닛(2), 상기 판독 유닛(2)는 광전 증폭관 또는 레이저 발사기일 수 있으며;
상기 인큐베이터(1)과 상기 판독 유닛(2) 사이에 설치되어 제 1 푸싱 메커니즘(31)과 제 2 푸싱 메커니즘(32)을 포함하는, 여기서, 제 1 푸싱 메커니즘(31)은 인큐베이터(1)를 횡단하며 제 2 푸싱 메커니즘(32)는 제 1 푸싱 메커니즘(31)의 후단에 연결되고 상기 제 2 푸싱 메커니즘은(32)은 케이스 내부에 위치하는 푸싱 메커니즘(3)을 포함한다.
상기 제 1 푸싱 메커니즘(31)과 제 2 푸싱 메커니즘(32)는 서로 배합하여 제 1 인큐베이터(11) 내의 배양한 후의 스트립을 판독 유닛(2)에 이송하여 제 1 차 판독을 시행하며, 또한 제 2 인큐베이터(12) 내의 배양한 후의 스트립을 판독 유닛(2)에 이송하여 제 2 차 판독을 진행한다.
상기 스트립은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 측정 시료와 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자 및 표지물로 표지된 제 2 항체(또는 항원)의 혼합액을 담은 스트립으로, 상기 혼합액에는 특이적 결합물 표지를 한 표지물 감광성 미립자도 더 추가하였다.
상기 판독 유닛(2)와 상기 제 2 인큐베이터(12) 사이에 설치되는 푸싱백 메커니즘은 도 3에서 도시한 바와 같은 직선 레일 푸싱백 메커니즘(4)와 도 4에 도시한 바와 같은 가변 레일 푸싱백 메커니즘(4')가 있으며 이 두 가지 푸싱백 메커니즘은 모두 제 1 차 판독을 완료한 스트립을 재배양을 위한 제 2 인큐베이터(12)에 푸시백하는데 이용된다.
제 1 차 판독에서 배양 후의 스트립에 대해 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며; 제 2 차 판독에서 재배양 후의 스트립에 대하여 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출한다.
프로세싱 유닛(미도시)는 제 2 차 판독과 제 1 차 판독값의 증가폭이 표준곡선의 최대치보다 클 경우, 스트립을 희석한 후 다시 측정한다. 상기 표준곡선은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 증가폭에 의해 얻어지며 상기 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮다. 그 중에서, 상기 프로세싱 유닛은 상기 판독값을 처리하고 매핑 등 작업을 하는 컴퓨터일 수 있다.
인큐베이터는 면역 측정 장치의 기계적 구현을 용이하게 하는 제 1 인큐베이터 및 제 2 인큐베이터로 구성되는데, 본 발명은 이에 한정되지 않는 것으로 이해해야 할 것이다.
또한, 상기 이동 메커니즘은 로보트 암 피지식 형태일 수도 있고 상기 리셋 메커니즘도 로보트 암 피지식 형태일 수도 있으며 본 발명은 이에 한정되지 않는 것으로 이해해야 할 것이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에서, 상기 푸시백 메커니즘은,
바닥판(41); 상기 바닥판(41) 위에 설치된 가이드 레일; 상기 가이드 레일은 도 3에서 도시한 바와 같은 직선 레일(421)을 포함한다. 상기 가이드 레일은 또한 도 4에서 도시한 바와 같은 가변 레일(422)일 수도 있다.
상기 컵 이동 메커니즘(43)을 가이드 레일을 따라 이동하는데 사용되는 구동 장치, 상기 구동 장치는 구체적으로, 모터 고정 플레이트(442)를 통해 가이드 레일(2)의 일단부에 고정되는 스테퍼 모터(441)를 포함하고, 상기 스테퍼 모터(441)의 출력단부에는 타이밍 벨트(443)가 설치되고 상기 가이드 레일(2)의 타단부에는 아이들러 풀리(444)가 설치되고 상기 타이밍 벨트 바퀴(443)와 아이들러 풀리(444)는 타이밍 벨트(445)에 의해 슬리브된다. 상기 아이들러 풀리(444)의 축심에는 아이들러 플레이트(447)에 고정된 아이들러 축(446)이 설치되어 있다.
상기 가이드 레일 위에 설치된 컵 이동 메커니즘(43), 상기 컵 이동 메커니즘(43)은 스트립 탑재용으로 사용되며 상기 컵 이동 메커니즘(43)에는 컵 이동 드래그 체인(431)과 상기 컵 이동 드래그 체인(431)과 연결된 컵 이동 연결판(432), 상기 컵 이동 연결판(432)는 타이밍 압력용 플레이트(448)를 통해 상기 타이밍 벨트(445)를 연결시킨다.
상기 바닥판(41)의 양단에 설치된 광전 감지기(45), 상기 광전 감지기(45)는 센서 스트립(46)과 연결되어 광전 감지기(45)는 센서 스트립(46)을 통해 상기 컵 이동 메커니즘(43)의 위치를 검출하는데 이용된다.
상기 광전 감지기(45)에 연결된 위치 조정 메커니즘, 상기 위치 조정 메커니즘은상기 광전 감지기(45)에 의해 방출되는 위치 신호에 의해 상기 컵 이동 메커니즘(43)의 위치를 조정할 수 있다. 구체적으로는, 상기 위치 조정 메커니즘은, 위치 조정 플레이트(46) 및 제어기(미도시)를 포함하며, 상기 제어기는 상기 위치 조정 플레이트(46)와 상기 광전 감지기(45)와 에 각각 연결되고, 상기 제어기는 광전 감지기(45)에서 방출하는 위치 신호를 수신하여 위치 조정 플레이트(46)를 제어하여 컵 이동 메커니즘(43)의 위치를 조정한다. 일반적으로 상기 위치 조정 메커니즘은 미세 조정을 위해 사용되며, 컵 이동 메커니즘(43)이 지정된 위치에 도달하지 않았거나 도달한 위치에 약간의 편차가 있을 경우, 상기 위치 조정 메커니즘을 이용해 미세 조정을 시행한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, 도 5에 도시한 바와 같이, 상기 장치는 상기 인큐베이터(1)의 일측에 설치되어 회전 가능한 스트립 시료 트레이(5)를 포함하며, 상기 블랭크 스트립은 상기 스트립 시료 트레이(5)에서 측정하고자 하는 시료와 시약의 혼합을 완료하며 이때 상기 시료는 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항체)를 함유하며 상기 시약은 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광 미립자와 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원)이다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에 있어서, 상기 장치는 상기 인터베이스(1)의 타 측에 설치되어 시약을 저장하기 위한 시약 냉장구역(8)을 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 상기 스트립 시료 트레이(5)의 일측에 설치되어 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이(5)에 이송하기 위한 블랭크 스트립 스택과 적재 메커니즘(6)을 더 포함한다.
본 발명의 일부 구체적인 실시예에서, 시료 튜브를 적재하는데 사용되는 시료 튜브 캐리어(7)를 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 일부 구체적인 실시예에서, 상기 로보트 암에 장착 바늘을 설치한 로보트 암 (미도시)을 더 포함하며;
그 중에서, 상기 로보트 암은 제 1 로보트 암 및 제 2 로보트 암을 포함하고, 상기 제 1 로보트 암은 상기 시료 튜브 캐리어 구역으로부터 시료를 인출하는데 사용되며 상기 제 2 로보트 암은 시약 냉장 구역에서 시약을 인출하는데 사용된다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에 있어서, 제 1 세척 메커니즘(9) 및 제 2 세척 메커니즘(10)을 더 포함하고, 상기 제 1 세척 메커니즘(9)은 상기 제 1 로보트 암의 장착 바늘을 세척하기 위한데 사용되고, 상기 제 2 세척 메커니즘(10)은 제 2 로보트 암의 장착 바늘을 세척하는데 사용된다.
직선 가이드 레일(421)을 설치할 경우, 모듈의 길이가 길어져 케이스 (즉, 도 1 및도 2에서 도시된 전체 구조)와 펌프(11)의 위치가 상대적으로 치밀하여(도 5에서 도시된 바와 같이) 조립 및 분해가 복잡해진다. 가변 레일(422)를 설치할 경우, 일 실시예로, 가변 레일(422)은 곡선 가이드 레일로 설계할 수 있으며, 상기 모듈의 폭이 넓어져서 케이스 및 제 2 세척 바늘 메커니즘(10)의 위치가 비교적 치밀해지기는 하지만 (도 6에서 도시한 바와 같이) 조립 및 분해에는 영향을 미치지 않는다.
구체적으로 시료는 인큐베이터(1)에 이송되기 전에,
1. 블랭크 스트립은 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘(6)에 의해 스트립 시료 트레이(5) 위치(D0)로 푸싱되고;
2. 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이(5)로 푸싱한 후 스트립 시료 트레이 위치 D1까지 시계 방향으로 90도 회전하여. 이 위치에서 제 1 로보트 암은 시료 튜브 캐리어 구역(7)에서 시료를 인출하여 블랭크 스트립에 시료를 배분하며;
3. 시료 배분을 완료한 후, 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D2까지 시계 방향으로 90도 회전하고 이 위치에서 작동을 멈추며;
4. 스트립을 스트립 시료 트레이 위치 D3까지 시계 방향으로 90도 회전하고 이 위치에서 시약은 제 2 로보트 암에 의해 시약 냉장 구역(8)에서 인출되어 그 위치에 있는 스트립 내에 배분한다.
D3 위치에 있는 모든 스트립에 대한 시료 배분을 완료한 후 이를 전부 인큐베이터(1)로 이송한 후 , 스트립 시료 트레이(5)를 D3 위치에서 D0(이 과정은 D1 위치에서의 스트립의 시료 배분 작업이 완료된 후 시행하여야 함)로 회전하고, 이로써 스트립 시료 트레이(5)의 1 차 순환을 완료한다. 스트립 시료 트레이가 전부하로 작동할 때, 스트립 시료 트레이(5)의 D0 위치에서 블랭크 스트립을 적재하고, D1 위치에서 시료 배분을 시행하며, D2 위치에서 대기하고, D3 위치에서 시약을 배분하여 시약 배분을 완료한 후 스트립을 인큐베이터(1)에 이송한다. 스트립 시료 트레이(5)의 회전은 이 회전을 시행하기 전에 D0 ~ D3의 이 4개 구역에서의 모든 작업이 완료되어야 한다.
시료 채취를 완료한 후의 스트립은 제 1 인큐베이터(11) 내로 이송되어 배양을 완료한 후 푸싱 메커니즘(3)은 다시 상기 스트립을 제 2 인큐베이터 내로 푸싱한다. 이 과정에서, 특이적 결합물 표지를 한 표지물 감광성 미립자를 측정하고자 하는 시료 및 시약에 투여한 후, 배양을 위해 제 2 인큐베이터(12)에 푸싱되며 배양 후의 스트립은 푸싱 메커니즘(3)에 의해 판독 유닛(2)에 푸싱되어 루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이로써 제 1 판독값을 기록한다. 제 1 차 판독을 완료한 스트립은 재배양을 위해 직선 레일 푸시백 메커니즘(4) 또는 가변 레일 푸시백 메커니즘(4')에 의해 제 2 인큐베이터(12)로 푸시백되며, 재배양을 거친 후의 상기 스트립은 다시 푸싱 메커니즘(3)에 의해 판독 유닛(2)에 푸싱되어 루미네선스에 의해 조사되어 방출 광량이 검출되는데 이때 제 2 차 판독을 기록한다.
2 차례의 판독을 완료한 후, 프로세싱 유닛(2)은 이 두 차례의 판독값을 처리하는데 이때, 제 2 차 판독값과 제 1 판독값 사이의 증가폭이 표준곡선의 최대값보다 크고, 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 한 가지 방법은 상기 장치가 정성적으로 HOOK 프롬프트를 제시함으로써 작업자는 시료를 희석한 후 다시 측정을 시행할 수 있으며; 두 번째 방법은 상기 장치가 정량 결과를 직접 제공하게 하나 이 정량 결과는 선형 범위보다 훨씬 높은 것이 문제시된다. 도 7은 하나의 완정한 테스트 과정을 나타낸 순서도로서, 이는 무희석 과정의 테스트 순서도이다. 도면에서 a, b, c, d와 e는 제 1 차 스트립, 제 2 차 스트립, 제 3 차 스트립, 제 4 차 스트립과 제 5 차 스트립을 각각 표시한다.
1) 만일 한꺼번에 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘(6)으로부터 8 개의 블랭크 스트립을 스트립 시료 트레이(5)로 푸싱할 때 이 과정은 약 20초 소요되며. 도 7에서는 이를 배제하였으며;
2) 스트립 시료 트레이(5)의 회전에 필요한 시간을 배제하였으며;
3) 블랭크 스트립을 D1 위치까지 회전한 후 스트립은 D1 위치 즉 도 7에서 도시한 D1 위치에서 시료의 배분을 하며, 만일 한 번 채취한 시료를 8 등분으로 배분할 때, 즉 한 번 채취한 시료를 8 개의 서로 다른 스트립에 배분할 때, 한 조의 시료 배분 작업에 30초간 소요된다고 가정한다면, 8 개의 스트립에 총 240 초간 소요되며;
4) 스트립은 D3 위치 즉 도 7에서 도시한 D3 위치에서 시약 배분을 시행할 때, 만일 한 번 채취한 시약을 8 등분으로 배분할 때, 시약 R1의 배분을 완료한 후 곧 바로 시약 R2의 배분을 시행한다고 가정할 때, 만일 각각의 스트립에 시약을 배분하는데 30초간 소요된다면 8 개의 스트립에 배분하는데 총 480초간 소요되며;
5) 스트립을 D3 위치에서 제 1 인큐베이터(11)로 이송하는데 소요되는 시간은 무시하고, 이는 이 과정은 제 2 로보트 암으로 장착 바늘을 세척할 때 이 작업을 완성할 수 있기 때문이며;
6) 도 7의 F는 제 1 차 배양 시간을 나타내며;
7) 각 스트립에 감광성 미립자를 배분하는 시간은 도 7에서는 무시하였으며, 통용액 적재구 12는 도 5 및 도 6에 도시한 바와 같으며;
8) 도 7의 F는 제 2 차 배양 시간을 나타내며;
9) 도 7의 G는 판독 유닛이 한 개의 스트립을 판독하는 시간(기계 이동 시간과 스트립을 버리는 시간을 포함)을 나타낸다.
상기 과정에서는 시약 배분 단계에서 R1 및 R2 이 두 가지 시약을 배분하였다. 그러나 여기서 이해해야 할 것은 시약 R1, R2 및 R3 이 세 가지 시약으로 배분할 수도 있으며 이때 R1, R2 및 R3은 모두 시료 배분을 완료한 후에 첨가되는 것으로 가정할 경우, 예를 들어 HBeAb인 경우, R3은 50μ1 중화 e 항원이라 할 때, 그 작동과정은 R1, R2 만 있는 경우와 유사하다. 다만 시약 배분 단계에서 한 가지 시약이 더 추가되었을 뿐이고 R1, R2 및 R3의 배분 순위는 임의로 선택되는 것으로 이해해야 할 것이다.
마찬가지로 R1, R2 및 R3 중 한 종류의 시약은 시료 배분 전에 첨가, 예를 들어 CA19-9인 경우, R3은 15μ1 시료 희석액이며 D1 위치에서 제 2 로보트 암으로 한 종류의 시약의 배분을 완료한 후 다시 제 1 로보트 암으로 시료의 배분을 완료하며 이를 제외한 기타 과정은 R1, R2 만 있는 경우와 일치한 것으로 이해하여야 할 것이다.
마찬가지로 R1, R2 및 R3 중, R3 은 사전 희석액으로 사전희석 플레이트가 필요하다. 예를 들어 HCV인 경우, 10 μ1 시료+100 μ1 희석액으로 희석한 후, 희석후의 시료 25 μ1를 채취하여 테스트를 받는 것으로 이해하여야 할 것이다. 블랭크 스트립을 D1 로 회전한 후, 제 2 로보트 암으로 희석액 R3 을 사전 희석 플레이트에 배분하고 제 1 로보트 암으로 시료를 사전 희석 플레이트에 배분한다. 이때 필요하다면 반복하여 흡입 진동(吸打)을 할 수 있다. 그 중에서, 희석액을 배분하는 과정에서 일흡다분(한 번 흡입하여 여러 개 배분하는 방식)하는 공동 시료 배분을 시행할 수 있다. 예를 들어 다섯 개 프로젝트를 할 경우, 그 중의 한 개 프로젝트는 사전 희석이 필요하고 기타 네 개 프로젝트는 사전 희석이 필요하지 않을 경우, 제 1 로보트 암으로 5 회분의 시료를 흡입한 후 1 회분은 사전 희석 플레이트에 배분하고 나머지 4 회분은 각각 블랭크 스트립에 배분한다. 그 다음, 도 5와 도 6에서 도시한 바와 같이 사전 희석 플레이트에 대해 진동 처리를 한다. 블랭크 스트립 스택 및 적재 메커니즘(6)에 인접한 시료 튜브 캐리어(7)의 일측에 희석 플레이트 진동기(11)를 설치하고, 진동 처리를 한 후, 제 1 로보트 암은 희석한 후의 시료를 스트립 내에 배분한다. 그 이후의 과정은 R1, R2만 있는 경우와 일치하므로 여기서 더 설명하지 않기로 한다.
본 발명에서 말하는 용어 "제 1 항체" 및 "제 2 항체"는 특정 항원 (예를 들어, 종양 표지물)에 특이적으로 결합하는 항체를 말한다. 동일한 항원 (예를 들어, 종양 표지물)에 있어서, 상응하는 제 1 항체 및 제 2 항체는 상이하거나 동일할 수 있으며, 동시에 상기 항원에 결합할 수 있다. 용어 "제 1 항원" 및 "제 2 항원"은 특정 항체 (예를 들어, B 형 간염 표면 항체)에 특이적으로 결합하는 항원을 말한다. 동일한 항체 (예를 들어, B 형 간염 표면 항체)에 있어서, 상응하는 제 1 항원 및 제 2 항원은 상이하거나 동일할 수 있으며 동시에 상기 항체에 결합할 수 있다.
본 발명에서 말하는 용어 "항원"은 면역원성을 가진 물질, 예를 들어 단백질, 폴리펩타이드이다. 대표적인 항원은 사이토카인, 종양 표지물, 금속 단백질류, 심혈관 당뇨병 관련 단백질 등을 포함(단, 이에 한정되지 않음)한다.
본 발명에서 말하는 용어 "종양 표지물"은 종양의 생성과 증식과정에서 종양 세포 자체에 의해 생성되거나 종양 세포에 대한 생체의 반응에 의해 생성되는 종양의 존재 및 성장에 반응하는 일종의 물질을 말한다. 본 영역에서 대표적인 종양 표지물은 알파태아단백(AFP), 암 항원 125(CA125)등을 포함(단, 이에 한정되지 않음)한다.
이중 항체 샌드위치 결합방법의 기본 원리는,
이중 항체 샌드위치 결합방법의 기본 원리는 본 영역의 당업자에게 잘 알려져있다. 통상적인 방법은, 제 1 항체를 고상 담체에 고정한 후, 제 1 항체 및 항원과 반응시키고 그 다음 표지된 제 2 항체와 반응시킨 후, 끝으로 화학 발광 또는 효소결합 발색반응을 시행하여 신호를 검출한다.
광루미네선스 화학 발광 방법의 기본 원리는,
광루미네선스 화학 발광 방법의 기본 원리는 본 영역의 당업자에게 잘 알려져있다. 통상적인 방법은, 감광성 미립자와 발광 미립자를 일정 범위 내에서 결합시켜 이온 산소 에너지 전달을 생성하고 광 신호를 방출함으로써 측정하고자 하는 시료에 대해 측정한다. 그 중에서, 감광성 미립자 내부는 감광성 화합물로 채워지고, 발광 미립자의 내부는 발광 화합물과 란타노이드로 채워진다. 레드 레이저(600 ~ 700nm)의 자극 하에서, 감광성 미립자는 고 에너지 상태의 전파 거리가 약 200nm인 단일상태산소이온(4μS)을 방출한다. 감광성 미립자와 발광 미립자 사이의 거리가 충분히 가까워졌을 때, 감광성 미립자에 의해 방출된 단일상태산소이온은 발광 미립자에 도달할 수 있고, 일련의 화학 반응을 통해 520 ~ 620 nm의 고 에너지 레벨의 광선을 방출하며 이때 이 광선은 기기에 의해 검출된다.
본 발명의 바람직한 실시예에 있어서, 발광 미립자 위에 고정된 제 1 항체의 특징을 충분히 이용하고, 동시에 비오틴으로 표지된 제 2 차 항체, 스트렙 타비딘으로 코팅된 감광성 미립자를 이용하여 혈청 시료 또는 항원 표준 품질 보증액을 차례로 또는 동시에 제 1 항체로 코팅된 발광성 미립자, 비오틴으로 표지된 제 2 항체와 반응 용기에 첨가한 다음, 스트렙 타비딘으로 코팅된 감광성 미립자를 더 첨가함으로써 다음의 반응을 일으킨다.
(1) 발광성 미립자 위의 제 1 항체는 혈청 시료 또는 항원 표준품질 보증액 중의 상응한 항원과 결합하여 "항원-제 1 항체-발광 미립자" 3 원 복합체를 형성하며;
(2) 제 2 항체는 혈청 시료 또는 항원 표준품질 보증액 중의 상응한 항원에 결합하여, 최종적으로 "제 2 항체-항원-제 1 항체 - 발광성 미립자"의 이중 항체 샌드위치 결합 복합체를 형성하며;
비오틴과 스트렙타비딘은 특이적으로 결합함으로써 이중 항체 샌드위치 결합 복합체를 감광성 미립자와 결합시킨다.
이때, 감광성 미립자와 발광 미립자 사이의 거리는 200 nm 미만이고, 레드 레이저(600 ~ 700 nm)로 감광성 미립자를 조사한 후 방출되는 단일상태산소이온은 발광성 미립자에 의해 수용될 수 있다. 일련의 화학 반응을 통해 520 ~ 620nm의 고 에너지 레벨의 빛이 방출되며 이를 통한 화학 발광량의 강도에 의해 측정하고자 하는 시료에 대한 정성적 또는 정량적 검출을 진행한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시예에 있어서, 발광 미립자 위에 고정된 제 1 항원의 특징을 충분히 이용하고, 동시에 비오틴으로 표지된 제 2 차 항원, 스트렙 타비딘으로 코팅된 감광성 미립자를 이용하여 혈청 시료 또는 항원 표준 품질 보증액을 차례로 또는 동시에 제 1 항원으로 코팅된 발광성 미립자, 비오틴으로 표지된 제 2 항원과 반응 용기에 첨가한 다음, 스트렙 타비딘으로 코팅된 감광성 미립자를 더 첨가함으로써 다음의 반응을 일으킨다.
(1) 발광성 미립자 위의 제 1 항원은 혈청 시료 또는 항원 표준품질 보증액 중의 상응한 항체와 결합하여 "항체-제 1 항원-발광 미립자" 3 원 복합체를 형성하며;
(2) 제 2 항원은 혈청 시료 또는 항원 표준품질 보증액 중의 상응한 항체에 결합하여, 최종적으로 "제 2 항원-항체-제 1 항원 - 발광성 미립자"의 이중 항원 샌드위치 결합 복합체를 형성하며;
비오틴과 스트렙타비딘은 특이적으로 결합함으로써 이중 항원 샌드위치 결합 복합체를 감광성 미립자와 결합시킨다.
이때, 감광성 미립자와 발광 미립자 사이의 거리는 200 nm 미만이고, 레드 레이저(600 ~ 700 nm)로 감광성 미립자를 조사한 후 방출되는 단일상태산소이온은 발광성 미립자에 의해 수용될 수 있다. 일련의 화학 반응을 통해 520 ~ 620nm의 고 에너지 레벨의 빛이 방출되며 이를 통한 화학 발광량의 강도에 의해 측정하고자 하는 시료에 대한 정성적 또는 정량적 검출을 진행한다.
다음에서는, 본 발명의 관련 조작의 상세한 사항에 대하여 더 구체적으로 설명한다.
(1) 제 1 항체(또는 항원)으로 코팅된 발광성 미립자를 시약 1로 표기한다. 이는 박양바이오테크놀러지유한회사에서 구매할 수 있다.
(2) 제 2 항체(또는 항원)은 당업계에 공지된 다양한 표지물 및 특이적 결합물 시스템으로 표지할 수 있다. 바람직하게는, 제 2 항체(또는 항원)은 비오틴- 아비딘 시스템에 의해 표지된다. 비오틴으로 표지된 제 2 항체(또는 항원)은 시약 2로 표기한다. 이는 박양바이오테크놀러지유한회사에서 구매할 수 있다.
(3) 스트렙타비딘으로 코팅된 감광성 미립자는 통용액으로 표기하며 이는 박양바이오테크놀러지유한회사에서 구매할 수 있다.
(4) 검량품 :
측정하고자 하는 항원(또는 항체)로 특정 농도 범위 (피크 검량품의 농도는 HD-HOOK 효과 농도와 동일함)의 공지된 표준물질 용액을 구성한다. 검량품, 시약 1, 시약 2를 고르게 섞고 배양 반응 후, LiCA 통용액을 넣고, 계속하여 배양 반응하여 일정한 시간이 지난 후 제 1 차 판독(RLU1)을 하고 또 다시 배양하여 일정한 시간이 지난 후 제 2 차 판독(RLU2)을 하며 A = (RLU2 / RLU1-1) X100 %으로 산출하고 표준물질의 RLU1과 두 차례의 판독값의 증가폭 A를 각각 표준물질의 농도에 따라 검량곡선과 표준곡선을 만들며; 표준물질의 RLU1과 농도의 검량곡선은 비 HD-HOOK 효과 단계에서는 RLU1은 농도가 높아짐에 따라 높아지며 이를 RLU1의 상승 구간으로 기록하고 농도가 HD-HOOK 효과 단계로 상승한 후 RLU1의 농도는 농도가 높아짐에 따라 하강하는 데 이때 이를 RLU1의 하강 구간으로 기록하며; 표준물질의 두 차례의 도수(판독값)의 증가폭과 농도 간의 표준곡선은 증가폭은 농도가 높아짐에 따라 높아지며 HD-HOOK 효과의 영향을 받지 않는 것으로 나타난다.
공지된 표준물질 용액의 농도 범위는 필요에 따라 HD-HOOK 효과 농도를 초과하거나 HD-HOOK 효과 농도보다 낮을 수 있다.
(5) 시료 검출 :
본 발명의 방법에 의해 검출될 수 있는 시료는 특별히 한정되지 않고, 항원(또는 항체)를 함유한 임의의 시료일 수 있으며, 대표적인 예로는 혈청 시료, 뇨액 시료 및 타액 시료 등을 포함할 수 있다. 바람직한 시료는 혈청 시료인 것이다.
(6) 시료 농도 산출 :
측정하고자 하는 시료의 두 차례의 판독값의 증가폭 A 값을 검량품의 A와 비교하여, 만일 측정하고자 하는 시료 A가 검량품 A보다 큰 경우, 시료의 농도는 검량품의 농도보다 크며; 만일 이와 동시에 상기 시료 RLU1가 상기 검량품의 RLU1보다 작은 경우, 상기 시료의 RLU1가 낮은 것은 HD-HOOK 효과에 의한 것이므로 이 경우는 희석하여 검출하여야 하며;
또는 측정하고자 하는 시료의 두 차례의 증가폭 A 값을 검량품 A와 검량품 농도간의 표준곡선에 대입하여 측정하고자 하는 시료의 농도가 RLU1의 상승 구간에 있는지 아니면 하강 구간에 있는지를 판단하고 또 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 소재 구역의 검량품 RLU1와 검량품 농도간의 검량곡선에 대입하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출하며;
또는 측정 시료의 두 차례의 증가폭 A 값을 HD-HOOK 효과 임계값 R0과 비교하여, 만일 A가 R0보다 작으면 상기 시료는 HD-HOOK 효과 시료가 아니며 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 검량품 RLU1과 검량품 농도 간의 검량곡선에 대입하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출하며; 만일 A가 R0보다 크거나 같으면 상기 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되며 이때는 희석한 후 검출하여야 한다.
<실시예 1>
인체 혈청 시료에서 인체 융모성 성선자극호르몬 및 β 소단위체 검출(HCG+β)
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 인체 융모성 성선자극호르몬 및 β 소단위체 (HCG+β) 검출 키트 (광루미네선스 화학 발광방법)을 사용하여 혈청 시료 중의 인체 융모성 성선자극호르몬 및 β 소단위체 (HCG+β)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1- 검량품 6(즉, 공지된 일련의 표지물질), 시약 1 (발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴 표지 항체, 즉, 비오틴으로 표지되는 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
Roche 측정(검출 한계를 초과하는 시료는 희석하여 측정)에 의해 얻어진 18 사례의 HCG + β 농도의 환자의 혈청 시료에 대하여 통상적인 방법과 본 발명의 방법으로 각각 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 측정하고자 하는 시료, 검량품, 시약 1 (발광 항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 각각 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10분간 배양한 후 광자 계수기로 판독하여 PLU를 기록하며 산출하여 시료의 농도를 얻으며 그 결과는 표 1에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례의 판독방법을 사용하여, 즉 측정하고자 하는 시료, 검량품, 시약 1 (발광 항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU1를 기록하며 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며 이와 함께 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) X100 %을 산출하며 , 그 결과는 표 1에서 표시한 바와 같다.
표 1: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
Roche 측정 결과는 실제 농도로, 표 1과 도 8에서 표시한 바와 같으며 농도가 상승하여 54531mIU / ml 까지 도달할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 높아지며 그 이후 농도는 계속 상승하며 신호값은 HCG + β 농도가 높아짐에 따라 오히려 감소한다. 즉, 농도가 54531 mIU / ml 이상이면 HD-HOOK 임을 나타낸다. 통상적인 검출에서, 검출 범위는 0-10000 mIU / m 이며 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 > 10000 mIU / ml의 농도를 나타낸다. HD-HOOK 효과 시료의 농도가 계속 상승하고 신호는 지속적으로 감소함에 따라 시료 18에서와 같이 초 고농도 시료가 저농도로 보고되는 상황이 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는, 측정하고자 하는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치의 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 구분할 수 없게 된다.
본 발명의 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 저농도로 보고된 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1과 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표로 한다. 표 1 및 도 9에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 54531mIU / ml 까지 계속 증가하고 그 이후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 상승한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 10 ~ 18의 증가폭 A는 모두 검량품 6의 증가폭 (11.1 %)보다 크며, A 값은 계속 상승하는데 이는 시료 10 ~ 18의 HCG+β 농도는 모두 10000mIU / ml보다 크며 농도는 계속 증가함을 나타내는바 이는 Roche의 농도 결과에 부합된다. 시료 18의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 종래의 방법으로 얻은 검출 농도는 8713.02mIU / ml이며, 이 경우는 본 발명의 방법에 의해 HD-HOOK 효과 시료로 판단할 수 있으며 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
<실시예 2>
시료에서 페리틴(Ferr)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 페리틴(Ferr) 검출 키트(화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 페리틴(Fitzgerald로부터 구입, Catalog No : 30-AF10)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6(즉, 공지된 일련의 표준물질),시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
고농도의 페리틴 항원을 희석구배로 희석한 후 통상적인 검출방법과 본 발명에의한 검출방법을 각각 사용하여 다양한 농도의 페리틴 시료의 농도값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1 (발광 항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 각각 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 이를 판독하여 RLU를 기록하며, 그 결과는 표 2에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례 판독방법을 사용하면, 즉, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(발광항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 2에서 표시한 바와 같다.
표 2: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
통상적인 검출에서 표 2와 도 10에서와 같이 농도가 51000 ng / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 신호값도 증가하며 그 이후 농도는 계속하여 상승하며 신호값은 Ferr 농도의 증가함에 따라 감소하며 통상적인 검출 범위는 0-2000 ng / ml 이며 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 > 2000 ng / ml 농도를 표시한다. HD-HOOK 효과 시료의 농도가 계속 상승하여 농도가 2550000 ng / ml로 높아지면 신호는 검량품 6의 신호 아래로 떨어지면서 초 고농도 시료가 시료 15와 같이 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
본 발명의 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 저농도로 보고된 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1과 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표로 한다. 표 2 및 도 11에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 51000ng / ml 까지 계속 증가하고 그 후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 증가한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 4 ~ 15의 증가폭 A는 모두 검량품 6의 증가폭 (-5.5 %)보다 크며, 이는 시료 4 ~ 15의 Ferr의 농도가 모두 2000ng / ml 보다 큼을 나타낸다. 이는 실제 농도와 부합되며 시료 15의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 통상적인 방법으로 얻은 검출 농도는 1860.97 ng / ml이며, 이 경우는 본 발명의 방법에 의해 검출 범위를 초과한 시료임을 판단할 수 있으므로 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
<실시예 3>
시료에서 C-펩타이드(CP)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 C-펩타이드(CP) 검출 키트(화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 C-펩타이드(Fitzgerald로부터 구입, Catalog No : 30-AC96)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6(즉, 공지된 일련의 표준물질), 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
고농도의 C - 펩타이드 항원을 희석구배로 희석한 후 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 다양한 농도의 C - 펩타이드 시료의 농도값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1 (발광 항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU 를 얻으며 그 결과는 표 3에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례 판독방법 즉, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(발광항체, 즉 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 3에서와 같이 표시한다.
표 3: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
통상적인 검출에서 표 3과 도 12에서와 같이 농도가 10000 ng / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 신호값도 증가하며 그 이후 농도는 계속하여 상승하며 신호값은 C-펩타이드 농도의 증가에 따라 감소하며 통상적인 검출 범위는 0-30 ng / ml 이며 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 > 30 ng / ml 농도를 표시한다. 농도가 계속 상승하여 33500000 ng / ml로 높아지면 신호는 검량품 6의 신호 아래로 떨어지면서 초 고농도 시료가 시료 16, 17에서와 같이 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
본 발명에 의한 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 저농도로 보고된 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1와 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표로 한다. 표 3 및 도 13에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 10000ng / ml 까지 계속 증가하고 그 후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 증가한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 5 ~ 17의 증가폭 A는 모두 검량품 6의 증가폭 (-4.9 %)보다 크며, 이는 시료 5 ~ 17의 C-펩타이드의 농도가 모두 30ng / ml 보다 크며 검출 상한을 초과함을 나타낸다. 이는 실제 농도와 부합되며 시료 16, 17의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 통상적인 방법으로 얻은 검출 농도는 각각 8.15 ng / ml과 0.76 ng / ml이며, 이 경우는 본 발명의 방법에 의해 검출 상한을 초과한 시료임을 판단할 수 있으므로 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
<실시예 4>
인체 혈청 시료에서 B 형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 B 형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg) 검출 키트(광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 HBsAg 농도를 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6(즉, 공지된 일련의 표준물질), 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 표준곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
우선 본 발명의 방법을 사용하여 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 혈청 시료 1-15를 검출한다. 구체적으로, 측정하고자 하는 물질, 시약 1 (발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 4에서 표시한 바와 같다.
표 4: 본 발명에 의한 측정 결과
본 발명의 방법에 의해 얻은 15 개의 혈청 시료의 농도는 표 4에서 표시한 바와 같다. 우선, 검량품 (6)의 증가폭 간의 비교를 통해 검출 상한치 (336.56 IU / mL)를 초과한 시료를 구분해낸다. 즉 A 값이 27 % 이상이면 HOOK 효과 시료로 판단하며 이때는 희석하여 검출할 것을 추천하며; A 값이 27 % 미만이면 검출 범위 내의 시료로, 이때는 검량곡선을 사용하여 직접 시료 농도를 산출할 수 있다.
위의 결론의 신뢰성을 검증하기 위해 시료에 대해 희석구배를 진행한 후 농도의 변화를 검출하였다. 시료 1 - 시료 15에 대해 모두 2 배 희석과 4 배 희석을 하고 동시에 통상적인 검출방법으로 희석하지 않은 원액 시료, 2배 희석 시료, 4배 희석 시료를 검출하고 희석 후의 농도의 변화를 관찰하여 이 시료가 HOOK 효과를 갖는지를 판단하였다. 즉, 희석 후 시료 농도가 오히려 증가하는 경우, 이 시료는 HOOK 효과 시료로 판단할 수 있다. 비 HOOK 효과 반응 시료는 희석 후 농도는 감소한다. 그 결과는 표 5와 같이 나타난다.
표 5: 희석 검증 결과
표 5에서와 같이, 혈청 시료 1, 2, 3, 5, 6, 9, 12, 13, 14, 15는 희석 후의 검출 농도는 증가하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료이며 농도는 336.56IU / mL 이상임을 증명한다. 혈청 시료 4, 7, 8, 10, 11 은 희석한 후 농도는 감소하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료가 아님을 증명한다. 이는 본 발명의 방법으로 얻은 결과와 완전히 일치하다.
<실시예 5>
인체 혈청 시료에서 CA 125의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 탄수화물 항원 125(CA 125) 검출 키트(광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 CA 125 농도를 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6(즉, 공지된 일련의 표준물질), 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
우선 본 발명의 방법을 사용하여 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 혈청 시료 1-18를 검출한다. 구체적으로, 측정하고자 하는 물질, 시약 1 (발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 6에서와 같이 표시한다.
표 6: 본 발명의 방법을 이용한 측정 결과
본 발명의 방법에 의해 얻은 18 개의 혈청 시료의 농도는 표 6에서 표시한 바와 같다. 우선, 검량품 6의 증가폭 간의 비교를 통해 검출 상한치를 초과한 시료를 구분해낸다. 즉 A 값이 7.4 %보다 크면 HOOK 효과 시료로 판단하며 이때는 희석하여 검출할 것을 추천하며; A 값이 7.4 % 미만이면 비 HOOK 효과 시료로, 이때는 검량곡선을 이용하여 직접 시료 농도를 산출할 수 있다.
위의 결론의 신뢰성을 검증하기 위해 시료에 대해 희석구배를 진행한 후 농도의 변화를 검출하였다. 시료 1 - 시료 18에 대해 모두 2 배 희석과 4 배 희석을 하고 동시에 통상적인 검출방법으로 희석하지 않은 원액 시료, 2배 희석 시료, 4배 희석 시료를 검출하고 희석 후의 농도의 변화를 관찰하여 이 시료가 HOOK 효과를 갖는지를 판단하였다. 즉, 희석 후 시료 농도가 오히려 증가하는 경우, 이 시료는 HOOK 효과 시료로 판단할 수 있다. 비 HOOK 효과 반응 시료는 희석 후 농도는 감소한다. 그 결과는 표 7과 같이 나타난다.
표 7: 희석 검증 결과
표 7에서와 같이 혈청 시료 16, 17 및 18은 희석 후 검출 농도가 증가하였는바, 이는 HD-HOOK 효과 시료임을 증명하며, 혈청 시료 1-시료 15는 희석 후 농도가 감소하였는바, 이는 HD-HOOK 효과 시료가 아님을 증명한다. 이는 본 발명의 방법에 의해 얻은 결과와 일치하다. 시료를 희석하지 않은 상황에서 통상적인 방법으로 원액 시료를 검출할 경우, HD-HOOK 효과로 인한 혈청 시료 16, 17, 18를 저농도 시료로 잘못 판단하게 된다.
<실시예 6>
시료에서 B 형 간염 바이러스 표면 항체 (HBsAb)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 B 형 간염 바이러스 표면 항체 검출 키트 HBsAbHBsAb (광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 B 형 간염 바이러스 표면 항체(북경중과경달바이오테크놀러지유한회사로부터 구입, Clone No : M2201)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6(즉, 공지된 일련의 표준물질), 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 표준곡선을 이용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
고농도의 HBsAb 를 희석구배로 희석한 후 통상적인 검출방법과 본 발명의 검출방법을 각각 사용하여 다양한 농도의 HBsAb 시료의 농도값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-14, 시약 1 (HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HBsAg)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU 를 얻으며 그 결과는 표 8에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례 판독방법을 사용하면, 즉, 검량품 1-검량품 6, 측정하고자 하는 시료 1-14, 시약 1(HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HBsAg)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 8에서 표시한 바와 같다.
표 8: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
통상적인 검출에서 표 8과 도 14에서와 같이 농도가 10000 nIU / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 신호값도 증가하며 그 후 농도는 계속 상승하며 신호값은 HBsAb 농도의 증가에 따라 감소하며 통상적인 검출 범위는 0-1000 nIU / ml 이며 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 > 1000nIU / ml 농도를 표시한다. 농도가 계속 상승하여 335000 nIU / ml 및 그 이상으로 높아지면 신호는 검량품 6의 신호 아래로 떨어지면서 초 고농도 시료가 시료 12, 13, 14와 같이 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 측정하고자 하는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
본 발명의 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 보고된 저농도 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1와 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표 중 하나로 한다. 표 8 및 도 15에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 10000 nIU / ml 까지 계속 증가하고 그 후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 증가한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 8 ~ 14의 증가폭 A는 모두 검량품 6의 증가폭 (35.9 %)보다 크며, 이는 시료 8 ~ 14의 HBsAb의 농도는 모두1000 mIU / ml 보다 크며 검출 상한을 초과함을 나타낸다. 이는 실제 농도와 부합되며 시료 12, 13, 14의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 통상적인 방법으로 얻은 검출 농도는 각각 802.57 mIU / ml, 352.22 mIU / ml, 147.9 mIU / ml이며, 이 경우는 본 발명의 방법에 의해 검출 상한을 초과한 시료임을 판단할 수 있으므로 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
<실시예 7>
정성 키트 Anti-HCV에서의 본 발명 방법의 응용
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 C 형 간염 바이러스 항체 검출 키트 (화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 Anti-HCV의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 참조품, 음성 대조, 양성 대조, 시약 1(발광 HCV 항원, 즉 HCV 항원으로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 HCV 항원, 즉 비오틴으로 표지된 HCV 항원)을 포함한다.
참조품, 음성 대조, 양성 대조에서, 참조품은 측정하고자 하는 시료의 음양성을 판단하기 위한 참조용인 공지된 농도의 표준품이며; 음성 대조, 양성 대조는 테스트의 유효성을 판단하기 위한 공지된 농도의 표준품이다. 고농도의 Anti-HCV를 희석구배하고 통상적인 검출방법과 본 발명의 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 Anti-HCV를 함유한 시료의 신호값을 산출하였다.
통상적인 측정방법에서, 희석구배를 한 일련의 Anti-HCV 시료, 시약 1 (발광 HCV 항원, 즉 HCV 항원으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HCV 항원, 즉, 비오틴으로 표지된 HCV 항원)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU 를 얻으며 그 결과는 표 9에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례 판독방법을 사용하면, 즉, 희석구배를 한 일련의 Anti-HCV 시료, 시약 1(발광 HCV 항원으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HCV 항원, 즉 비오틴으로 표지된 HCV 항원)을 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 9에서 표시한 바와 같다.
표 9: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
표 9에서 표시한 바와 같이, 항원 희석 배수를 10,000 배로 감소시킨 후에는 농도가 증가함에 따라 신호값은 감소하며 HOOK 효과가 발생한다. 농도가 계속하여 상승하여 일정값 (예를 들면 시료 12에서 나타난 것과 같이)까지 오르면 RLU는 참조치 cut off 이하로 떨어지며, 이 경우, 통상적인 검출방법에서는 이 결과를 음성으로 오판한다. 본 발명의 방법에서는 우선 두 차례의 신호의 증가폭 A= (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 관찰하여 측정하고자 하는 시료의 A 값을 양성 대조의 A 값(-25 %)과 비교하여 측정 시료와 양성 참조 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 위의 도표에서 표시한 바와 같이 시료 12의 A 값(47 %)은 양성 대조의 A 값(-25 %)보다 훨씬 높은바 이는 이 시료의 농도가 양성 대조보다 높기 때문에 양성 시료임을 나타내며, 그 신호가 풍부하지 않은 것은 HOOK 효과에 의한 것으로 이 경우는 희석하여 검증하여야 한다.
<실시예 8>
시료에의 인슐린(INS)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 인슐린(INS) 검출 키트 (화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 인슐린(Fitzgerald로부터 구입, Catalog No : 30R-2704)의 함량을 검출하였다.
고농도의 인슐린 항원을 희석구배하고 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 인슐린을 함유한 시료의 신호값을 산출하였다.
통상적인 측정방법에서, 공지된 농도의 측정하고자 하는 시료, 시약 1 (발광 항체, 즉 마우스 단일 클론으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉, 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU를 얻으며 그 결과는 표 10에서 표시한 바와 같다.
본 발명의 두 차례 판독방법을 사용하면, 즉, 공지된 농도의 측정하고자 하는 시료, 시약 1(발광 항체, 즉 마우스 단일 클론으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체, 즉 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 10에서 표시한 바와 같다.
표 10: 통상적인 측정과 본 발명을 이용한 측정 결과
표 10 및 도 16에서 알 수 있는 바와 같이, 농도가 3 μIU / ml 에서 1000μIU / ml까지 상승할 때 신호값은 농도가 증가함에 따라 상승하며, 농도가 계속 증가함에 따라 신호값은 인슐린의 농도가 높아짐에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10,000μIU / ml를 초과하면 HD-HOOK인 경우인 것이다. 통상적인 검출에서 항원의 농도가 이 검출 범위보다 높을 경우 시료의 보고되는 농도는 낮아진다(보고되는 농도는 모두 10,000 μIU / ml 미만임).
본 발명의 방법은 2 차례의 판독값에 의해 검출 범위를 넓히는 것이다. 각 측정하고자 하는 시료는 선후로 신호값 결과인 RLU1과 RLU2를 검출하며, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료 농도 구간을 판단하는 지표 중 하나로 한다. 표 10 및 도 17에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 10,000μIU / ml까지 상승할 때까지 계속 증가하며 그 이후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A 값은 농도에 따라 계속 상승한다.
인슐린 검량품의 농도가 3 μIU / ml 내지 1,000,000 μIU / ml의 범위를 포함할 때, 본 발명의 방법에 의해 각각 RLU1와 A 간의 검량곡선과 표준곡선을 (도 17에서와 같이)만든다. 농도가 상승함에 따라 A는 계속 상승하며, RLU1은 3μIU / ml ~ 10,000μIU / ml의 상승 구간과 10,000μIU / ml ~ 1,000,000μIU / ml의 하강 구간으로 나뉘어진다. 본 발명의 방법을 이용하여 검출하여 각각 측정하고자 하는 시료의 RLU1, RLU2 및 A를 얻는다. 먼저, A 값에 의해 측정하고자 하는 시료의 농도가 3 μIU / ml ~ 10,000 μIU / ml의 상승 구간인지 10,000 μIU / ml ~ 1,000,000 μIU / ml의 하강 구간인지를 확정하고 그 다음 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량 곡선에 대입시켜 정확한 농도를 산출한다.
표 10에서와 같이, 인슐린 농도가 10,000 μIU / ml 일 때, 신호는 피크 구간으로, 그에 대응하는 A는 20 %이며, 만일 측정하고자 하는 시료 A가 <20% 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료가 아니므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 μIU / ml 미만인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하며; 만일 A가 ≥ 20 % 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료이므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 μIU / ml 이상인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출함으로써 검출 상한범위를 10,000 μIU / ml에서 1,000,000 μIU / ml로 확장하였다.
<실시예 9>
시료에서 B 형 간염 바이러스 표면 항체 (HBsAb)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 B 형 간염 바이러스 표면 항체 검출 키트 (광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 B 형 간염 바이러스 표면 항체 (북경중과경달바이오테크놀러지유한회사로부터 구입, Clone No : M2201)의 농도를 검출하였다.
고농도의 HBsAb를 희석구배한 후 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 HBsAb를 함유한 시료의 신호값을 산출하였다.
통상적인 측정방법에서, 희석구배를 한 HBsAb 시료, 시약 1 (HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HBsAg)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU를 기록한다.
본 발명의 두 차례 판독방법 즉, 희석구배를 한 HBsAb시료, 시약 1(HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 HBsAg)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 결과는 표 11에서 표시한 바와 같다.
표 11: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
표 11 및 도 18에서 알 수 있는 바와 같이, 농도가 1 mIU / ml 에서 10,000m IU / ml까지 상승할 때 신호값은 농도가 증가함에 따라 상승하며, 농도가 계속 증가함에 따라 신호값은 HBsAb의 농도가 높아짐에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10,000 mIU / ml를 초과하면 HD-HOOK인 경우인 것이다. 통상적인 검출에서 항원의 농도가 이 검출 범위보다 높을 경우 시료의 보고되는 농도는 낮아진다(보고되는 농도는 모두 10,000 mIU / ml 미만임).
본 발명의 방법은 2 차례의 판독값에 의해 검출 범위를 확장한다. 각 측정하고자 하는 시료는 선후로 신호값 결과인 RLU1과 RLU2를 검출하며, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료 농도 구간을 판단하는 지표 중 하나로 한다. 표 11 및 도 19에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 10,000mIU / ml까지 상승할 때까지 계속 증가하며 그 이후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A 값은 농도에 따라 계속 상승한다.
HBsAb 검량품의 농도가 1 mIU / ml 내지 3,350,000 mIU / ml의 범위를 포함할 때, 본 발명의 방법에 의해 각각 RLU1와 A 간의 검량곡선과 표준곡선을 (도 19에서와 같이)만든다. 농도가 상승함에 따라 A는 계속 상승하며, RLU1은 1mIU / ml ~ 10,000mIU / ml의 상승 구간과 10,000mIU / ml ~ 3,350,000mIU / ml의 하강 구간으로 나뉘어진다. 본 발명의 방법을 이용하여 측정하고자 하는 시료의 RLU1, RLU2 및 A를 각각 검출하여 얻는다. 먼저, A 값에 의해 측정하고자 하는 시료의 농도가 1 mIU / ml ~ 10,000 mIU / ml의 상승 구간인지 10,000 mIU / ml ~ 3,350,000 mIU / ml의 하강 구간인지를 확정하고 그 다음 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량 곡선에 대입하여 정확한 농도를 산출한다.
표 11에서와 같이, HBsAb 농도가 10,000 mIU / ml 일 때, 신호는 피크 구간으로, 그에 대응하는 A는 37.5 %이며, 만일 측정하고자 하는 시료 A가 <37.5% 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료가 아니므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 mIU / ml 미만인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하며; 만일 A가 ≥ 37.5 % 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료이므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 mIU / ml 이상인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출함으로써 검출 상한 범위를 10,000 mIU / ml에서 3,350,000 mIU / ml로 확장하였다.
<실시예 10>
시료에서 알파태아단백 (AFP)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 알파태아단백 검출 키트 (광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 AFP (Fitzgerald사부터 구입, Catalog No： 30-1370)의 함량을 검출하였다.
고농도의 AFP 항원을 희석구배한 후, 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 AFP를 함유한 시료의 신호값을 측정하였다. 상기 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법은 실시예 8를 참조하였다. 그 검출 결과는 다음과 같다.
표 12: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
표 12 및 도 20에서 알 수 있는 바와 같이, 농도가 5ng / ml 에서 10,000 ng / ml까지 상승할 때 신호값은 농도가 증가함에 따라 상승하며, 농도가 계속 증가함에 따라 신호값은 AFP의 농도가 높아짐에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10,000 ng / ml를 초과하면 HD-HOOK인 경우인 것이다. 통상적인 검출에서 항원의 농도가 이 검출 범위보다 높을 경우 시료의 보고되는 농도는 낮아진다(보고되는 농도는 모두 10,000 ng / ml 미만임).
본 발명의 방법은 2 차례의 판독값에 의해 검출 범위를 확장한다. 각 측정하고자 하는 시료는 선후로 신호값 결과인 RLU1과 RLU2를 검출하며, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료 농도 구간을 판단하는 지표로 한다. 표 12 및 도 21에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 10,000 ng / ml까지 상승할 때까지 계속 증가하며 그 이후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A 값은 농도에 따라 계속 상승한다.
AFP 검량품의 농도가 5 ng / ml 내지 1,000,000 ng / ml의 범위를 포함할 때, 본 발명의 방법에 의해 각각 RLU1와 A 간의 검량곡선과 표준곡선을 (도 21에서와 같이)만든다. 농도가 상승함에 따라 A는 계속 상승하며, RLU1은 5 ng / ml ~ 10,000 ng / ml의 상승 구간과 10,000 ng / ml ~ 10,000,000 ng / ml의 하강 구간으로 나뉘어진다. 본 발명의 방법을 이용하여 측정하고자 하는 시료의 RLU1, RLU2 및 A를 각각 검출하여 얻는다. 먼저, A 값에 의해 측정하고자 하는 시료의 농도가 5 ng / ml ~ 10,000 ng / ml의 상승 구간인지 10,000 ng / ml ~ 10,000,000 ng / ml의 하강 구간인지를 확정하고 그 다음 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량 곡선에 대입하여 정확한 농도를 산출한다.
표 12에서와 같이, AFP 농도가 10,000 ng / ml 일 때, 신호는 피크 구간으로, 그에 대응하는 A는 18 %이며, 만일 측정하고자 하는 시료 A가 <18%인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료가 아니므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 ng / ml 미만인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하며; 만일 A가 ≥ 18 % 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료이므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000 ng / ml 이상인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출함으로써 검출 상한 범위를 10,000 ng / ml에서 1,000,000 ng / ml로 확장하였다.
<실시예 11>
시료에서 갑상선 자극 호르몬(TSH)의 검출
박양바이오테크놀러지(상하이)유한회사에서 생산한 갑상선 자극 호르몬 검출 키트 (광루미네선스 화학 발광법)을 사용하여 시료 중의 갑상선 자극 호르몬 (Fitzgerald사부터 구입, Catalog No： 30R-AT009)의 함량을 검출하였다.
고농도의 TSH 항원을 희석구배한 후, 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 TSH를 함유한 시료의 신호값을 측정하였다. 상기 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법은 실시예 8를 참조하였다. 그 검출 결과는 다음과 같다.
표 13: 통상적인 측정과 본 발명에 의한 측정 결과
표 13 및 도 22에서 알 수 있는 바와 같이, 농도가 1μIU / ml 에서 10,000μIU / ml까지 상승할 때 신호값은 농도가 증가함에 따라 상승하며, 농도가 계속 증가함에 따라 신호값은 TSH의 농도가 높아짐에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10,000μIU / ml를 초과하면 HD-HOOK인 경우인 것이다. 통상적인 검출에서 항원의 농도가 이 검출 범위보다 높을 경우 시료의 보고되는 농도는 낮아진다(보고되는 농도는 모두 10,000μIU / ml 미만임).
본 발명의 방법은 2 차례의 판독값에 의해 검출 범위를 확장하였다. 각 측정하고자 하는 시료는 선후로 신호값 결과인 RLU1과 RLU2를 검출하며, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료 농도 구간을 판단하는 지표로 한다. 표 13 및 도 23에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 10,000μIU / ml까지 상승할 때까지 계속 증가하며 그 이후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A 값은 농도에 따라 계속 상승한다.
TSH 검량품의 농도가 1μIU / ml 내지 1,000,000μIU / ml의 범위를 포함할 때, 본 발명의 방법에 의해 각각 RLU1와 A 간의 검량곡선과 표준곡선을 (도 23에서와 같이)만든다. 농도가 상승함에 따라 A는 계속 상승하며, RLU1은 1μIU / ml ~ 10,000μIU / ml의 상승 구간과 10,000μIU / ml ~ 1,000,000μIU / ml의 하강 구간으로 나뉘어진다. 본 발명의 방법을 이용하여 측정하고자 하는 시료의 RLU1, RLU2 및 A를 각각 검출하여 얻는다. 먼저, A 값에 의해 측정하고자 하는 시료의 농도가 3μIU / ml ~ 10,000μIU / ml의 상승 구간인지 10,000μIU / ml ~ 1,000,000μIU / ml의 하강 구간인지를 확정하고 그 다음 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량 곡선에 대입하여 정확한 농도를 산출한다.
표 13에서와 같이, TSH 농도가 10,000μIU / ml 일 때, 신호는 피크 구간으로, 그에 대응하는 A는 17.0 %이며, 만일 측정하고자 하는 시료의 A가 <17.0% 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료가 아니므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000μIU / ml 미만인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하며; 만일 A 가 ≥ 17.0 % 인 경우, 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료이므로 그에 대응하는 RLU1을 농도가 10,000μIU / ml 이상인 검량곡선에 대입하여 농도를 산출함으로써 검출 상한 범위를 10,000μIU / ml에서 1,000,000μIU / ml로 확장하였다.
<실시예 12>
인체 혈청 시료에서 B형 간염 바이러스 표면 항원 (HBsAg)의 검출
본 발명에 의한 면역 측정 방법에 관련된 키트를 사용하여 시료 중의 HBsAg의 농도를 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품, 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
피크 검량품의 선정에 있어서, 공지된 HOOK 시료를 희석구배한 후 통상적인 방법으로 그 신호값을 검출하고 신호값이 가장 높은 시료를 피크 검량품으로 선정한다. 즉 이 농도보다 작은 시료는 HOOK 효과가 발생하지 않지만 이 농도를 초과하면 HOOK 효과가 있는 시료인 것이다. 그 A 값을 R0으로 기록하고 이를 측정하고자 하는 시료가 HOOK 효과가 있는지를 판단하는 임계값으로 한다.
사용되는 또 다른 구성 요소는 LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)이며, 이 상품은 박양바이오테크놀러지회사에서 생산한 광루미네선스 화학 발광 분석 시스템의 보조 시약이다. 이는 기기 및 상응하는 광루미네선스 화학발광 방법의 측정키트 세트와 함께 사용하며 항원 및 항체의 검출에 이용된다.
먼저, 본 발명의 방법을 이용하여 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 혈청 시료 1-15를 검출한다. 구체적으로, 측정하고자 하는 시료, 시약 1 (항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2 (비오틴으로 표지된 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 검출결과는 표 14에서 표시한 바와 같다.
표 14: 본 발명의 검출방법에 의한 검출 결과
본 발명의 방법에 의해 얻은 15 개의 혈청 시료의 농도는 표 14에서 표시한 바와 같다. 먼저, 피크 검량품의 증가폭 R0 와의 비교를 통해 HOOK 효과의 시료를 구분해낸다. 즉, A 값이 31 % 이상이면 HOOK 효과 시료로 판단하며 이때는 희석하여 검출할 것을 추천한다. A 값이 31 % 미만이면 비 HOOK 효과 시료로서, 이때는 검량곡선을 사용하여 직접 시료 농도를 산출할 수 있다.
위의 결론의 신뢰성을 검증하기 위해 시료에 대해 희석구배를 진행한 후 농도의 변화를 검출하였다. 시료 1 - 시료 15에 대해 모두 2 배 희석과 4 배 희석을 하고 동시에 통상적인 검출방법으로 희석하지 않은 원액 시료, 2배 희석 시료와 4배 희석 시료를 검출하고 희석 후의 농도의 변화를 관찰하여 이 시료가 HOOK 효과를 갖는지를 판단하였다. 즉, 희석 후 시료 농도가 오히려 증가하는 경우, 이 시료는 HOOK 효과 시료로 판단할 수 있다. 비 HOOK 효과 반응 시료는 희석 후 농도는 감소한다. 그 결과는 표 15와 같이 나타난다.
표 15: 희석 검증 결과
표 15에서와 같이, 혈청 시료 1, 2, 3, 5, 6, 9, 12, 13, 14, 15는 희석 후의 검출 농도는 증가하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료임을 증명하며 혈청 시료 4, 7, 8, 10, 11은 희석한 후 농도는 감소하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료가 아님을 증명한다. 이는 본 발명의 방법으로 얻은 결과와 완전히 일치하다.
<실시예 13>
인체 혈청 시료에서 CA125의 검출
본 발명에 의한 면역 측정 방법에 관련된 키트를 사용하여 시료 중의 CA125의 농도를 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품, 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
피크 검량품의 선정에서, 공지된 HOOK 시료를 희석구배한 후 통상적인 방법으로 그 신호값을 검출하고 신호값이 가장 높은 시료를 피크 검량품으로 선정한다. 즉 이 농도보다 작은 시료는 HOOK 효과가 발생하지 않지만 이 농도를 초과하면 HOOK 효과가 있는 시료인 것이다. 그 A 값을 R0으로 기록하고 이를 측정하고자 하는 시료가 HOOK 효과가 있는지를 판단하는 임계값으로 한다.
먼저, 본 발명의 방법을 이용하여 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 혈청 시료 1-18를 검출한다. 구체적으로, 측정하고자 하는 시료, 시약 1(항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 검출결과는 표 16에서 표시한 바와 같다.
표 16: 본 발명의 검출방법에 의한 검출 결과
본 발명의 방법에 의해 얻은 18 개의 혈청 시료의 농도는 표 16에서 표시한 바와 같다. 먼저, 피크 검량품의 증가폭 R0 와의 비교를 통해 HOOK 효과의 시료를 구분해낸다. 즉, A 값이 18.7 % 이상이면 HOOK 효과 시료로 판단하며 이때는 희석하여 검출할 것을 추천하며; A 값이 18.7 % 미만이면 비 HOOK 효과 시료로서, 이때는 검량곡선을 사용하여 직접 시료 농도를 산출할 수 있다.
위의 결론의 신뢰성을 검증하기 위해 시료에 대해 희석구배를 진행한 후 농도의 변화를 검출하였다. 구체적으로, 시료 1 - 시료 18에 대해 모두 2 배 희석과 4 배 희석을 하고 동시에 통상적인 검출방법으로 희석하지 않은 원액 시료, 2배 희석 시료와 4배 희석 시료를 검출하고 희석 후의 농도의 변화를 관찰하여 이 시료가 HOOK 효과를 갖는지를 판단하였다. 즉, 희석 후 시료 농도가 오히려 증가하는 경우, 이 시료는 HOOK 효과 시료로 판단할 수 있다. 비 HOOK 효과 반응 시료는 희석 후 농도는 감소한다. 그 결과는 표 17에서와 같이 나타난다.
표 17: 희석 검증 결과
표 17에서와 같이, 혈청 시료 16, 17, 18은 희석 후의 검출 농도는 증가하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료임을 증명하며 혈청 시료 1-시료 15는 희석한 후 농도는 감소하였는바 이는 HD-HOOK 효과 시료가 아님을 증명한다. 이는 본 발명의 방법으로 얻은 결과와 완전히 일치하다.
<실시예 14>
시료에서 페리틴(Ferr)의 검출
본 발명에 의한 면역 측정 방법에 관련된 키트를 사용하여 시료 중의 페리틴(Fitzgerald사로부터 구입, Catalog No： 30-AF10)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품, 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
피크 검량품의 선정에서, 공지된 HOOK 시료를 희석구배한 후 통상적인 방법으로 그 신호값을 검출하고 신호값이 가장 높은 시료를 피크 검량품으로 선정한다. 본 실험 즉, 시료 9에서, 농도가 이 농도 미만인 시료는 HOOK 효과가 발생하지 않지만 이 농도를 초과하면 HOOK 효과가 있는 시료인 것이다. 그 A 값을 R0으로 기록하고 이를 측정하고자 하는 시료가 HOOK 효과가 있는지를 판단하는 임계값으로 한다.
고농도의 페리틴 항원을 희석구배한 후, 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 페리틴을 함유한 시료의 신호값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(발광 항체, 즉 마우스 단일 클론으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 항체, 즉, 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU 를 얻으며 그 결과는 다음의 도표에서 표시한 바와 같다.
먼저, 본 발명의 두 차례의 판독방법, 즉 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 항체, 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 검출 결과는 표 18에서 표시한 바와 같다.
표 18: 통상적인 검출 결과와 본 발명의 검출방법에 의한 검출 결과
표 18와 도 24에서 같이 고농도의 항원을 희석구배한 시료의 통상적인 검출에서는, 농도가 51000 ng / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 증가하며 그 이후 농도가 계속 상승할 때 신호값은 Ferr의 농도가 증가함에 따라 감소한다. 즉, 농도가 51000 ng / ml보다 큰 경우, HD-HOOK 효과 시료이며, 51000 ng / ml인 시료 9는 바로 피크 검량품이며 R0은 13.9 %이다.
통상적인 검출에서 검출범위는 0-20000 ng / ml로, 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 >2000 ng/ml 농도를 표시한다. HD-HOOK 효과 시료의 농도는 계속 상승하지만 신호값은 감소하면서 시료 15에서와 같이 초 고농도 시료가 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
본 발명의 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 보고된 저농도 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1와 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표 중 하나로 한다. 표 18 및 도 25에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 51000ng / ml 까지 계속 증가하고 그 후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 증가한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 10 ~ 15의 증가폭 A는 모두 피크 검량품의 증가폭 R0(13.9%)보다 크며, 이는 시료 10 ~ 15의 Ferr 농도가 모두 51000ng / ml보다 크다는 것을 나타내고, HD-HOOK시료임을 나타낸다. 이는 실제 농도와 부합되며 시료 15의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 통상적인 방법으로 얻은 검출 농도는 1860.97 ng / ml이며, 본 발명의 방법에 의해 HD-HOOK 효과 시료임을 판단할 수 있으므로 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
<실시예 15>
시료에서 C-펩타이드(CP )의 검출
본 발명에 의한 면역 측정 방법에 관련된 키트를 사용하여 시료 중의 C-펩타이드(Fitzgerald사로부터 구입, Catalog No： 30-AC96)의 함량을 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품, 시약 1(발광 항체, 즉 항체로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항체, 즉 비오틴으로 표지된 항체)를 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
피크 검량품의 선정에서, 공지된 HOOK 시료를 희석구배한 후 통상적인 방법으로 그 신호값을 검출하고 신호값이 가장 높은 시료를 피크 검량품으로 선정한다. 본 실험 즉, 시료 9에서와 같이, 농도가 이 농도 미만인 시료는 HOOK 효과가 발생하지 않지만 이 농도를 초과하면 HOOK 효과가 있는 시료인 것이다. 그 A 값을 R0으로 기록하고 이를 측정하고자 하는 시료가 HOOK 효과가 있는지를 판단하는 임계값으로 한다.
고농도의 C-펩타이드 항원을 희석구배한 후, 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 C-펩타이드를 함유한 시료의 농도값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(발광 항체, 즉 마우스 단일 클론으로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 항체, 즉, 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU를 얻으며 그 결과는 표 19에서 표시한 바와 같다.
먼저, 본 발명의 두 차례의 판독 방법 즉, 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-15, 시약 1(발광 항체, 마우스 단일 클론 항체로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 항체, 비오틴으로 표지된 마우스 단일 클론 항체)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 분(min)간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 검출 결과는 표 19에서 표시한 바와 같다.
표 19: 통상적인 검출 결과와 본 발명의 검출방법에 의한 검출 결과
표 19와 도 26에서와 같이 고농도의 항원을 희석구배한 시료의 통상적인 검출에서는, 농도가 10000 ng / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 증가하며 그 이후 농도가 계속 상승할 때 신호값은 C-펩타이드의 농도가 증가함에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10000 ng / ml보다 큰 경우는, HD-HOOK 효과 시료이며, 농도가 10000 ng / ml인 시료 9는 바로 피크 검량품이며 R0은 23.3 %이다.
통상적인 검출에서 검출범위는 0-30 ng / ml로, 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 >30 ng/ml 농도를 표시한다. HD-HOOK 효과 시료인 경우, 농도는 계속 상승하지만 신호값은 감소하면서 시료 16, 17에서와 같이 초 고농도 시료가 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
<실시예 16>
시료에서 B 형 간염 바이러스 표면 항체(HbsAb)의 검출
본 발명에 의한 면역 측정 방법에 관련된 키트를 사용하여 시료 중의 B 형 간염 바이러스 표면 항체(북경중과경달바이오테크놀러지유한회사로부터 구입, Clone No : M2201)의 농도를 검출하였다. 상기 키트는 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품, 시약 1(발광 항원, 즉 항원으로 코팅된 발광 미립자), 시약 2(비오틴 표지 항원, 즉 비오틴으로 표지된 항원)을 포함한다.
검량품 1- 검량품 6은 일반적인 키트 중의 공지된 농도의 시료이며 이 농도는 HOOK 시료보다 훨씬 낮으며 검량곡선을 사용하여 측정하고자 하는 시료의 농도를 산출한다.
피크 검량품의 선정에서, 공지된 HOOK 시료를 희석구배한 후 통상적인 방법으로 그 신호값을 검출하고 신호값이 가장 높은 시료를 피크 검량품으로 선정한다. 본 실험 즉, 시료 9에서, 농도가 이 농도 미만인 시료는 HOOK 효과가 발생하지 않지만 이 농도를 초과하면 HOOK 효과가 있는 시료인 것이다. 그 A 값을 R0으로 기록하고 이를 측정하고자 하는 시료가 HOOK 효과가 있는지를 판단하는 임계값으로 한다.
고농도의 HbsAb 항원을 희석구배한 후, 통상적인 검출방법과 본 발명에 의한 검출방법을 각각 사용하여 서로 다른 농도의 HbsAb를 함유한 시료의 농도 값을 측정하였다.
통상적인 측정방법에서, 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-14, 시약 1(HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 HBsAg)를 반응컵에 넣고 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 10 분(min)간 배양한 후 광자계량기로 판독하여 RLU를 얻으며 그 결과는 표 20에서 표시한 바와 같다.
먼저, 본 발명의 두 차례의 판독 방법 즉, 검량품 1-검량품 6, 피크 검량품과 측정하고자 하는 시료 1-14. 시약 1(HBsAg로 코팅된 발광 미립자) 및 시약 2(비오틴으로 표지된 HBsAg)를 37 °C에서 15 분(min)간 배양한 후, LiCA 통용액(스트립타비딘으로 표지된 감광성 미립자)를 추가하고 37 °C에서 3 min간 배양한 후 판독하여 RLU 1를 기록하며, 계속하여 37 °C에서 7 min간 배양한 후 판독하여 RLU2를 기록하며, 제 2 차 신호값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 산출하며 그 검출 결과는 표 20에서 표시한 바와 같다.
표 20: 통상적인 검출 결과와 본 발명의 검출방법에 의한 검출 결과
표 20과 도 28에서와 같이 고농도의 HbsAb을 희석구배한 시료의 통상적인 검출에서는, 농도가 10000 mIU / ml로 상승할 때까지 신호값은 농도가 증가함에 따라 증가하며 농도가 계속 상승할 때 신호값은 HbsAb의 농도가 증가함에 따라 감소한다. 즉, 농도가 10000 mIU / ml보다 큰 경우는, HD-HOOK 효과 시료이며, 농도가 10000 mIU / ml인 시료 9는 바로 피크 검량품이며 R0은 37.5 %이다.
통상적인 검출에서 검출범위는 0-1000 mIU / ml로, 검출 상한선을 초과한 경우 시료는 >1000 mIU /ml 농도를 표시한다. HD-HOOK 효과 시료는 농도가 계속 상승하지만 신호값은 감소하면서 시료 12, 13, 14와 같이 초 고농도 시료가 저농도로 보고되는 경우가 나타난다. 따라서, 통상적인 검출에서는 시료의 검출 결과가 실제 농도인지 아니면 최대치 시료가 HD-HOOK 효과의 영향을 받아 저농도로 보고된 경우인지를 판단할 수 없게 된다.
본 발명의 방법은 두 차례의 판독을 통해 HOOK 효과로 인해 보고된 저농도 시료를 식별해낸다. 각 측정하고자 하는 시료의 선후로 검출된 신호값의 결과를 RLU1와 RLU2로 하고, 제 2 차 판독값의 증가폭 A = (RLU2 / RLU1-1) × 100 %를 시료의 농도를 판단하는 지표로 한다. 표 20 및 도 29에서 알 수 있는 바와 같이, 신호값은 농도가 증가함에 따라 10000 mIU / ml 까지 계속 증가하고 그 후 신호값은 농도가 증가함에 따라 감소하기 시작하지만 증가폭 A는 오히려 농도에 따라 계속 증가한다. 따라서, 측정하고자 하는 시료의 A 값과 검량품의 A 값을 직접 비교하면 바로 측정하고자 하는 시료의 농도와 검량품 농도 간의 대소 관계를 판단할 수 있다. 시료 10 ~ 14의 증가폭 A는 모두 피크 검량품의 증가폭 R0(37.5%)보다 크며, 이는 시료 10 ~ 14의 HbsAb 농도가 모두 10000 mIU / ml 이상이므로 HD-HOOK 시료임을 나타낸다. 이는 실제 농도와 부합되며 시료 12, 13, 14의 신호값은 검량품 6보다 낮으며, 통상적인 방법으로 얻은 검출 농도는 각각 802.57 mIU / ml, 352.22 mIU / ml, 147.9 mIU / ml,이며, 본 발명의 방법에 의해 HD-HOOK 효과 시료임을 판단할 수 있기 때문에 이때는 희석하고 검출하여야 한다.
상기 실시예는 오로지 본 발명의 원리와 그 효과를 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다. 본 기술을 익숙히 장악한 자라면 누구든지 본 발명의 사상과 범위 내에서 상기 실시예에 대하여 수정 또는 변형을 실시할 수 있다. 따라서 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명이 제시한 사상과 범위 내에서 다양한 수정 또는 그와 같은 변형은 여전히 본 발명의 청구범위 기재의 범위 내에 있게 되는 것이다.
Claims (92)
- 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체가 함유된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하여 여기 스펙트럼으로 화학발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하며 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 표시하고 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭 A’ 가 R0 보다 큰지를 비교하여, 만일 R0 보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고 R0 보다 작으면 HD-HOOK 효과가 없는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법.
- 제 1항에 있어서,
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체가 함유된 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응용액을 추가 배양 한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’ 값을 R0과 비교하여, 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 이 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는,
HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법. - 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여, A’이 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료로서, 희석할 필요가 있으며; 만일 A’이 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 만든 곡선인 것을 특징으로 하는,
HD-HOOK 효과 시료를 식별하는 방법. - 화학 발광 면역 반응을 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하기 위한 화학 발광 면역반응 여기 스펙트럼 및 계수장치;
측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’로 HD-HOOK 효과 존재를 확인하는 프로세서를 포함하는,
면역 측정 중의 HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템. - 제 4항에 있어서, 상기 시스템은,
화학 발광 면역 반응을 시행하기 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 기록하기 위한 화학 발광 면역반응 여기 스펙트럼 및 계수장치;
측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’가 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 R0 보다 큰지를 비교하기 위한 것으로, 즉, 만일 R0 보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고 만일 R0 보다 작으면 시료에 HD-HOOK 효과가 없는 것인 프로세서를 포함하며,
여기서 화학 발광의 제 2 차 판독값은 동일한 면역 반응에서 일정 시간을 간격으로 다시 여기 스펙트럼하여 판독하여 얻은 수치를 말하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 중의 HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템. - 제 4항에 있어서, 상기 시스템의 사용 방법은,
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체가 포함된 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광 미립자를 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응용액을 추가 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 이 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는,
면역 측정 중의 HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템. - 제 6항에 있어서,
측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독값 증가폭 A’값을 R0과 비교하여 A’가 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 효과 시료로서, 희석할 필요가 있으며; 만일 A’가 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 만든 곡선인 것을 특징으로 하는 면역 측정 중의 HD-HOOK 효과를 식별하는 시스템. - 검량품, 피크 검량품, 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원, 특이적 결합물로 표지된 표지물 감광성 미립자를 포함하는 키트에 있어서,
상기 키트의 사용 방법은 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료에 대해 화학 발광 면역 반응을 진행하고 화학 발광을 여기 스펙트럼하고 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차의 판독값을 기록하며 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’로 HD-HOOK 효과 시료의 존재를 확인하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 8항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체가 포함된 측정 시료에 대한 화학 발광 면역 반응을 진행하고 여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차의 판독값을 기록하며 측정하고자 하는 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A’가 피크 검량품의 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 R0과 비교하여 만일 R0보다 크면 시료에 HD-HOOK 효과가 있고, 만일 R0보다 작으면 HD-HOOK 효과가 구비되지 않는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 8항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(1) 검량품, 피크 검량품, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체가 포함된 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독후의 반응 용액을 추가 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 피크 검량품에 대한 제 2 차와 제 1 차 판독 간의 차이값의 증가폭 A를 R0으로 기록하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독 증가폭 A’값을 R0과 비교하여, 만일 A’가 R0보다 크거나 같을 경우, 시료는 HD-HOOK 효과 시료로 식별되는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 8항에 있어서,
측정하고자 하는 시료의 2 차례의 판독값 증가폭 A’값을 R0과 비교하여, 만일 A’가 R0보다 크거나 같으면 측정하고자 하는 시료는 HD-HOOK 시료이며 이때는 희석할 필요가 있으며; 만일 A’가 R0보다 작으면 직접 검량곡선을 이용하여 시료의 농도를 산출하며;
상기 검량곡선은 검량품의 제 1 차 판독값과 검량품의 농도를 기반으로 작성한 곡선인 것을 특징으로 하는 키트. - 화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후의 혼합액에 대해 복수의 판독을 진행하기 위한 판독 유닛;
상기 판독 유닛에 연결되고, 상기 판독 유닛의 판독에 근거하여 면역 측정에 HD-HOOK의 위험이 있는지를 판단하는 프로세싱 유닛
을 포함하는 것을 특징으로 하는 HD-HOOK 효과 시료 식별용 면역측정장치. - 제 12항에 있어서,
배양 후의 혼합액을 판독 유닛으로 이동하는데 이용되는 이동 메커니즘; 및/또는 화학 발광 면역 반응을 위한 적절한 주변 온도를 제공하는 인큐베이터; 및/또는 판독 완료 후 혼합액 재배양을 위해 인큐베이터로 리셋하기 위한 리셋 메커니즘을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 13항에 있어서,
상기 이동 메커니즘은 푸싱 메커니즘을 말하며, 상기 리셋 메커니즘은 푸시백 메커니즘을 말하며, 상기 혼합액은 스트립을 이용하여 담아두는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 12항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 판독 유닛은 화학 발광 반응을 기록하고 또 배양한 후의 혼합액에 대해 두 차례의 판독을 진행하는데 이용되는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치.
- 면역 측정 방법에 있어서,
(1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료에 화학 발광 면역 반응을 진행하여 여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하여 기록하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 증가폭을 A 로 기록하는 단계, (2) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A’를 표준곡선과/또는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질에 대한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A"를 표준으로 하는 단계; (3) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과/또는 표준과 비교하는 단계를 포함하는 면역 측정 방법. - 제 16항에 있어서,
측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A와 상기 표준곡선을 서로 비교하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 17항에 있어서,
상기 공지된 일련의 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 (시료의) 농도보다 낮고/낮거나 공지된 표준물질은 양성 대조군을 가리키는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 18항에 있어서,
상기 방법은 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대치보다 크면 시료를 희석한 다음 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 19항에 있어서,
(a1) 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원에 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(a2) 단계 (a1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(a3) 단계 (a2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(a4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(a5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A’에 의해 표준곡선이 얻어지며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(a6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 16항에 있어서,
측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준과 비교하고 상기 표준을 임계값으로 기록하며;
및/또는 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군을 가리키는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 21항에 있어서, 상기 방법은
만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 22항에 있어서,
(c1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(c2) 상기 단계 (c1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(c3) 상기 단계 (c2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(c4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(c5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(c6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 21항에 있어서,
만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료에 대해 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 24항에 있어서,
(d1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(d2) 상기 단계 (d1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(d3) 상기 단계 (d2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(d4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(d5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(d6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 17항에 있어서, 상기 방법은
시료의 농도를 확정하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 제 26항에 있어서,
(b1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(b2) 상기 단계 (b1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(b3) 상기 단계 (b2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(b4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(b5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A'를 표준곡선으로 하는 단계;
(b6) A값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계;
상기 검량곡선은 측정하고자 하는 표적 항원(또는 항)을 함유한 공지된 일련의 표준물질의 제 1 차 판독과 공지된 일련의 표준물질의 농도에 의해 만든 곡선인 것을 특징으로 하는 면역 측정 방법. - 화학 발광 면역 반응의 시행을 위한 면역 반응장치;
여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭을 A로 기록하는 화학 발광 면역 반응 여기 스펙트럼 및 계수 장치;
프로세서,
를 포함하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 28항에 있어서,
상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A에 의해 표준곡선을 얻는데 이용되며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮으며; 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 크면 시료를 다시 희석한 후 측정하여야 하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 29항에 있어서, 상기 시스템의 사용 방법은
(1) 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원에 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A에 의해 표준곡선이 얻어지며 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 28항에 있어서,
상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하는데 이용되며 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 공지된 표준물질의 농도보다 높은 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 31항에 있어서, 상기 시스템의 사용방법은
(1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값으로 하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 28항에 있어서,
상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 서로 비교하는데 이용되며, 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 공지된 표준물질보다 낮은 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하며;
및/또는 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군을 가리키는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 33항에 있어서, 상기 시스템의 사용 방법은
(1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값으로 하는 단계;
(6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 28항에 있어서,
상기 프로세서는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 제 1 차 판독과 두 차례의 판독값의 증가폭 A로 각각 검량곡선과 표준곡선을 얻는데 이용되며, 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 1 차 판독값과 두 차례의 판독값의 증가폭 A를 각각 검량곡선과 표준곡선에 비교하여 이를 통해 시료의 농도를 확정하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 35항에 있어서, 상기 시스템의 사용 방법은
(1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(2) 상기 단계 (1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(3) 상기 단계 (2)에서 진행한 제 1 차 판독후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 표준곡선으로 하는 단계;
(6) A 값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 식별용 시스템. - 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원, 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 포함하는 키트에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료에 대해 화학 발광 면역 반응을 진행하여 여기 스펙트럼으로 화학 발광의 제 1 차와 제 2 차 판독값을 측정하여 기록하며 제 2 차와 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭을 A 로 기록하는 단계, (2) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A’를 표준곡선 과/또는 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질에 의한 2 차례의 판독의 차이값의 증가폭 A"를 표준으로 하는 단계; (3) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차와 제 1 차 판독간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과/또는 표준과 비교하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 37항에 있어서,
측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준곡선과 서로 비교하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 38항에 있어서,
상기 공지된 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 (시료의) 농도보다 낮고/낮거나 공지된 표준물질은 양성 대조군을 가리키는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 39항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 표준곡선의 최대치보다 크면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 40항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(a1) 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원에 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(a2) 단계 (a1)의 혼합액에 특이적 결합물로 표지된 표지물인 감광성 미립자를 추가로 첨가하고, 배양한 후 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(a3) 단계 (a2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후, 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(a4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(a5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질에 의한 2 차례의 판독값의 증가폭 A’를 표준곡선으로 하며, 그 중에서 표준물질의 농도는 HOOK 효과가 생성되는 농도보다 낮은 단계;
(a6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대값보다 큰 경우, 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 39항에 있어서,
측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 제 2 차 판독값과 제 1 차 판독값 간의 차이값의 증가폭 A를 상기 표준과 비교하며 상기 표준을 임계값으로 하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 42항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 두 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계 (4)를 더 포함하고;
및/또는 상기 공지된 표준물질은 양성 대조군인 것을 특징으로 하는 키트. - 제 43항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(c1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(c2) 상기 단계 (c 1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(c3) 상기 단계 (c 2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(c4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(c5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(c6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크면 상기 측정하고자 하는 시료의 농도는 상기 공지된 표준물질의 농도보다 높은 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 42항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 45항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(d1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(d2) 상기 단계 (d1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(d3) 상기 단계 (d2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(d4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(d5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 하나의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A"를 임계값으로 하는 단계;
(d6) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A를 임계값과 비교하여 만일 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료의 2 차례의 판독값의 증가폭 A가 상기 임계값보다 크고 동시에 상기 측정하고자 하는 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값이 상기 공지된 표준물질보다 낮으면 시료를 희석한 후 다시 측정하여야 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 38항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
시료의 농도를 확정하는 단계 (4)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 키트. - 제 47항에 있어서, 상기 키트의 사용 방법은
(b1) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 측정 시료를 제 1 항체 또는 항원으로 코팅된 발광 미립자, 표지물로 표지된 제 2 항체 또는 항원과 혼합하여 혼합액을 배양하는 단계;
(b2) 상기 단계 (b1)의 혼합액에 특이적 결합물 표지를 한 표지물인 감광성 미립자를 다시 첨가하여 배양한 후 루미네선스를 조사하고, 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU1을 기록하는 제 1 차 판독 단계;
(b3) 상기 단계 (b2)에서 진행한 제 1 차 판독 후의 반응 용액을 추가로 배양한 후 다시 루미네선스를 조사하고 방출된 광량을 검출하며 광자 계수기로 이를 판독하여 RLU2를 기록하는 제 2 차 판독 단계;
(b4) 시료의 제 1 차 판독에서 얻은 신호값에 대한 제 2 차 판독에서 얻은 신호값의 증가폭을 A로 하며, A = (RLU2 / RLU1-1) xl00 %인 단계;
(b5) 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체를 함유한 공지된 일련의 표준물질의 2 차례의 판독값의 증가폭 A'를 표준곡선으로 하는 단계;
(b6) A 값을 통해 측정하고자 하는 시료의 농도가 표준곡선의 상승 구간에 있는지 또는 하강 구간에 있는지를 확정하고 다시 측정하고자 하는 시료의 RLU1를 그에 대응하는 검량곡선에 대입하여 농도를 산출하는 단계를 포함하며,
상기 표준곡선은 측정하고자 하는 표적 항원 또는 항체의 공지된 일련의 표준물질의 제 1 차 판독값과 공지된 일련의 표준물질의 농도에 의해 작성한 곡선인 것을 특징으로 하는 키트. - 화학 발광 면역 반응을 기록하고 배양 후의 혼합액에 대해 복수의 판독을 진행하기 위한 판독 유닛;
상기 판독 유닛에 연결되고, 상기 판독 유닛의 판독에 근거하여 면역 측정에 HD-HOOK의 위험이 있는지를 판단하는 프로세싱 유닛
을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 49항에 있어서,
배양 후의 혼합액을 판독 유닛으로 이동하는데 이용되는 이동 메커니즘;
및/또는 화학 발광 면역 반응을 위한 적절한 주변 온도를 제공하는 인큐베이터;
및/또는 판독 완료 후 혼합액 재배양을 위해 인큐베이터로 리셋하기 위한 리셋 메커니즘을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 50항에 있어서,
상기 이동 메커니즘은 푸싱 메커니즘을 말하며, 상기 리셋 메커니즘은 푸시백 메커니즘을 말하며, 상기 혼합액은 스트립을 이용하여 담아두는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 49항 내지 제 51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 판독 유닛은 화학 발광 반응을 기록하고 또 배양한 후의 혼합액에 대해 두 차례의 판독을 진행하는데 이용되는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치.
- 제 51항에 있어서,
상기 인큐베이터는 제 1 인큐베이터 및 제 2 인큐베이터를 포함하고, 상기 푸싱 메커니즘은 배양을 위해 제 1 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 제 2 인큐베이터로 푸싱하도록 구성되고, 상기 푸싱 메커니즘은 제 2 인큐베이터 내의 배양후의 혼합액을 판독 유닛으로 푸싱하여 제 1 차 판독을 시행하게 하며;
상기 푸시백 메커니즘은 재배양을 위해 상기 제 1 차 판독이 완료된 후에 상기 혼합액을 다시 상기 제 2 인큐베이터로 푸시백하도록 구성되며;
상기 푸싱 메커니즘은 또 제 2 차 판독을 위해 제 2 인큐베이터 내의 재배양된 혼합액을 판독 유닛으로 이동하도록 추가로 이용되며;
프로세싱 유닛이 제 2 차 판독과 제 1 차 판독값의 증가폭 A가 표준곡선의 최대치보다 큰 것으로 검출이 되면 이 면역측정에 HOOK의 위험이 있는 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 51항에 있어서, 상기 푸시백 메커니즘은,
바닥판;
상기 바닥판 위에 설치된 가이드 레일;
상기 가이드 레일 위에 설치되고, 스트립 탑재용으로 사용되는 컵 이동 메커니즘;
상기 가이드 레일을 따라 이동하도록 상기 컵 이동 메커니즘을 구동시키는 구동 장치;
상기 바닥판의 양단부에 설치되어 상기 컵 이동 메커니즘의 위치를 검출하는데 이용되는 광전 감지기;
상기 광전 감지기에 연결되며, 상기 광전 감지기에 의해 방출되는 위치 신호에 의해 컵 이동 메커니즘의 위치를 조정할 수 있는 위치 조정 메커니즘을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 제 54항에 있어서,
상기 가이드 레일은 직선 레일 또는 궤도가변 레일일 수 있는 것을 특징으로 하는 면역 측정 장치. - 삭제
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
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