JP7488812B2 - 化学発光免疫分析測定法及び該方法を使用するシステム、試薬キット - Google Patents
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Description
本出願は、2018年5月21日に提出された「化学発光免疫分析測定法及び該方法を使用するシステム、試薬キット」と題する中国特許出願CN 201810491290.2の優先権を有し、該出願の全ての内容は援用を通して本文に組み込まれる。
本発明は、化学発光技術分野に関し、特に化学発光免疫分析測定法、化学発光免疫分析測定法を使用するシステム、及び試薬キットに関する。
Claims (7)
- 以下のステップを含む化学発光免疫分析測定法:
(1)被検対象分子の含有を疑われる被検試料を、化学発光免疫に必要な試薬と混合し、反応させて被検混合物を形成する;
(2)前記被検混合物を化学発光させるように相次いでt回励起し、前記化学発光の信号値をn回記録する;ここで、n回目に記録された化学発光信号値は、読み取り値RLUnとして記録する;
(3)前記n回記録された化学発光信号値の中から任意の二回信号値を選択し、読み取り値として、それぞれRLUm及びRLUkと記録し、そして、RLUmとRLUkの増幅(RLUm/RLUk-1)×100%をAとして記録する;
(4)被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、RLUm及びRLUkそれぞれに対応する反応時間における二回の反応読み取り値RLUm’とRLUk’の増幅A’=(RLUm’/RLUk’-1)×100%に基づいて、第1の標準曲線を作成し、被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、標準物質の化学発光信号値とに基づいて、第2の標準曲線を作成する;
ここで、前記第1の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、前記増幅A’が縦軸にプロットされ、前記第2の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、標準物質の化学発光信号値が縦軸にプロットされ;
(5)ステップ(3)で得られた前記増幅Aを、前記第1の標準曲線に代入して、標準物質の濃度値を算出し;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の上昇区間に対応する場合、1回目の読み取り値RLU1を前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の下降区間に対応する場合、n回目反応の読み取り値RLUnを前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;
ここで、t,n,m,kはいずれも0より大きい自然数で、且つk<m≦n≦t,n≧2である。 - 前記nは2より大きいことを特徴とする請求項1に記載の方法。
- ステップ(1)において、化学発光反応の発生に必要な試薬としては、アクセプター試薬とドナー試薬を含む;ここで:前記ドナー試薬はドナーを含み、前記ドナーは励起状態で一重項酸素を発生させることができる;前記アクセプター試薬はアクセプターを含み、前記アクセプターは一重項酸素と反応して検出可能の化学発光信号値を生成することができることを特徴とする請求項1又は2に記載の方法。
- 以下のステップを含むことを特徴とする請求項1~3のいずれかに記載の方法:
(a1)被検抗原または抗体の含有を疑われる被検試料をアクセプター試薬と混合し、一回目の保温培養を行う;さらに一回目の保温培養で取得した混合液をドナー試薬と混合し、二回目の保温培養を行い、被検混合物を形成させる;
(a2)前記被検混合物を化学発光させるように600~700nmの赤色励起光を照射して相次いでt回励起し、前記化学発光の信号値をn回記録し、検出波長は520~620nmである;ここで、n回目に記録された化学発光信号値は、読み取り値RLUnとして記録する;
(a3)前記n回記録された化学発光信号値の中から任意の二回信号値を選択し、読み取り値として、それぞれRLUm及びRLUkと記録し、そして、RLUmとRLUkの増幅(RLUm/RLUk-1)×100%をAとして記録する;
(a4)被検対象分子を含有する一連の濃度既知のポジティブコントロールと、RLUm及びRLUkそれぞれに対応する反応時間における二回の反応読み取り値RLUm’とRLUk’の増幅A’=(RLUm’/RLUk’-1)×100%に基づいて第1の標準曲線を作成し、被検対象分子を含有する一連の濃度既知のポジティブコントロールと、ポジティブコントロールの化学発光信号値とに基づいて、第2の標準曲線を作成する;
ここで、前記第1の標準曲線において、被検対象分子を含有するポジティブコントロールの濃度が横軸に、前記増幅A’が縦軸にプロットされ、前記第2の標準曲線において、被検対象分子を含有するポジティブコントロールの濃度が横軸に、ポジティブコントロールの化学発光信号値が縦軸にプロットされ;
(a5)ステップ(a3)で得られた前記増幅Aを、前記第1の標準曲線に代入して、標準物質の濃度値を算出し、;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線におけるポジティブコントロールの化学発光信号値の上昇区間に対応する場合、1回目の読み取り値RLU1を前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線におけるポジティブコントロールの化学発光信号値の下降区間に対応する場合、n回目反応の読み取り値RLUnを前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;
ここで、t,n,m,kはいずれも0より大きい自然数で、且つk<m≦n≦t,n≧2である。 - 以下を含む、化学発光免疫分析測定法を使用するシステム:
化学発光反応を行うための反応装置;被検混合物を化学発光させるように相次いでt回励起し、前記化学発光の信号値をn回記録する励起及び読み取り装置;ここで、n回目に記録された化学発光信号値は、読み取り値RLUnとして記録する;前記n回記録された化学発光信号値の中から任意の二回信号値を選択し、読み取り値として、それぞれRLUm及びRLUkと記録し、そして、RLUmとRLUkの増幅(RLUm/RLUk-1)×100%をAとして記録する;
被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、RLUm及びRLUkそれぞれに対応する反応時間における二回の反応読み取り値RLUm’とRLUk’の増幅A’=(RLUm’/RLUk’-1)×100%に基づいて第1の標準曲線を作成し、被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、標準物質の化学発光信号値とに基づいて、第2の標準曲線を作成するプロセッサ;
ここで、前記第1の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、前記増幅A’が縦軸にプロットされ、前記第2の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、標準物質の化学発光信号値が縦軸にプロットされ;
前記プロセッサは、前記増幅Aを、前記第1の標準曲線に代入して、標準物質の濃度値を算出し、;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の上昇区間に対応する場合、1回目の読み取り値RLU1を前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の下降区間に対応する場合、n回目反応の読み取り値RLUnを前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;
ここで、t,n,m,kはいずれも0より大きい自然数で、且つk<m≦n≦t,n≧2である。 - 前記システムの使用方法は以下のステップを含むことを特徴とする請求項5に記載のシステム:
(1)被検対象分子の含有を疑われる被検試料を、化学発光免疫に必要な試薬と混合し、反応させて被検混合物を形成する;
(2)前記被検混合物を化学発光させるように相次いでt回励起し、前記化学発光の信号値をn回記録する;ここで、n回目に記録された化学発光信号値は、読み取り値RLUnとして記録する;
(3)前記n回記録された化学発光信号値の中から任意の二回信号値を選択し、読み取り値として、それぞれRLUm及びRLUkと記録し、そして、RLUmとRLUkの増幅(RLUm/RLUk-1)×100%をAとして記録する;
(4)被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、RLUm及びRLUkそれぞれに対応する反応時間における二回の反応読み取り値RLUm’とRLUk’の増幅A’=(RLUm’/RLUk’-1)×100%に基づいて、第1の標準曲線を作成し、被検対象分子を含有する一連の濃度既知の標準物質と、標準物質の化学発光信号値とに基づいて、第2の標準曲線を作成する;
ここで、前記第1の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、前記増幅A’が縦軸にプロットされ、前記第2の標準曲線において、被検対象分子を含有する標準物質の濃度が横軸に、標準物質の化学発光信号値が縦軸にプロットされ;
(5)ステップ(3)で得られた前記増幅Aを、前記第1の標準曲線に代入して、標準物質の濃度値を算出し、;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の上昇区間に対応する場合、1回目の読み取り値RLU1を前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;前記増幅Aを前記第1の標準曲線に代入して算出された濃度値が前記第2の標準曲線における標準物質の化学発光信号値の下降区間に対応する場合、n回目反応の読み取り値RLUnを前記第2の標準曲線に直接代入して、被検対象分子の濃度を算出する;
ここで、t,n,m,kはいずれも0より大きい自然数で、且つk<m≦n≦t,n≧2である。 - 前記nは2より大きいことを特徴とする請求項5又は6に記載のシステム。
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