KR102218175B1 - Spore suspension comprising insect extract and preparation method of allomyrina dichotoma Cordyceps with increased cordycepin content using this - Google Patents
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Abstract
본 발명은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액 및 이를 이용하여 코디세핀 함량이 다량으로 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 포자현탁액은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 장수풍뎅이 동충하초의 코디세핀 함량을 증대시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 살아있는 장수풍뎅이를 사용함으로써 자연상태와 유사하게 균이 생장하여 곤충을 죽이고 동충하초를 발생시키도록 유도할 수 있으며, 상기 포자현탁액을 이용함으로써 동충하초의 유용성분을 증대시킬 수 있을 뿐 아니라, 최적의 배양조건을 확립함으로써 고함량의 코디세핀을 함유하는 장수풍뎅이 동충하초를 제조할 수 있다.The present invention relates to a spore suspension containing an insect extract as an active ingredient, and a method for producing a cordyceps cordyceps with enhanced content of cordycepin using the same. The spore suspension according to the present invention can increase the content of cordycepin in Cordyceps beetle Cordyceps sinensis by including an insect extract as an active ingredient. In addition, the method for producing cordyceps beetle according to the present invention can induce a fungus to grow similar to the natural state to kill insects and generate cordyceps by using a live longevity beetle, and by using the spore suspension, useful ingredients of cordyceps sinensis In addition to being able to increase, by establishing the optimal culture conditions, it is possible to prepare the longevity beetle cordyceps sinensis containing a high content of cordycepine.
Description
본 발명은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액 및 이를 이용하여 코디세핀 함량이 다량으로 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a spore suspension containing an insect extract as an active ingredient, and a method for producing a cordyceps cordyceps with enhanced content of cordycepin using the same.
장수풍뎅이(Allomyrina dichotoma)는 분류학상 곤충강 (Insecta) 딱정벌레목(Coleoptera) 장수풍뎅이과 (Dynastidae)에 속하며 1년에 한 번 생활사를 완결하는 1화생 곤충으로 3번의 탈피를 하여 번데기가 된 후 6-7월경에 성충으로 우화한다. 성충을 지낸 후 8월말에서 9월에 걸쳐 교미를 하고 산란을 하며, 약 2주 후에 1령 유충으로 부화한다. 우리나라에 서식하는 풍뎅이 종류 중에서 가장 몸집이 크고 잘 알려진 곤충이다. 수컷의 머리에는 긴 뿔이 나있고 가슴등판에도 뿔이 있는데 장수풍뎅이의 생김새를 나타내는 가장 큰 특징이다. 숲속의 참나무에서 주로 발견되며 오래된 나무에서 흐르는 진을 빨아먹는다. 몸 전체 모양은 약간 길쭉한 타원형이고 색깔은 검정색 또는 갈색이며 광택이 난다. 수컷만 뿔이 있고 암컷은 뿔이 없으며 크기도 수컷에 비해 작고 등판 전체에 걸쳐 털이 나 있다. 발에 날카로운 발톱이 있어서 나무를 잘 타고 오른다. 더듬이는 짧고 끝이 뭉툭하다. 이러한 특징을 갖는 장수풍뎅는 간경화, 간암 등의 간 질환에 효능이 있는 것으로 알려져 있고, 이외에도 허약체질의 보양효과와 각종 성인병 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.Longevity beetle ( Allomyrina dichotoma ) is a one-flowered insect belonging to the family Insecta, Coleoptera, Dynastidae, and completes its life cycle once a year. After three molts and pupae, it becomes an adult in June-July. Fable. After being an adult, it mates and lays eggs from the end of August to September, and hatches into 1 instar larvae after about 2 weeks. It is the largest and most well-known insect among the scarab species living in Korea. Males have long horns on their head and horns on the back of their chest, which is the most important feature of the longevity beetle. It is mainly found in oak trees in the forest and sucks up the flowing gin from old trees. The whole body shape is slightly elongated oval, and the color is black or brown and glossy. Only males have horns, females do not have horns, and the size is smaller than males and has hairs all over the back plate. They have sharp claws on their feet, so they climb trees well. The antennae is short and the tip is blunt. Longevity beetle having these characteristics is known to be effective in liver diseases such as cirrhosis and liver cancer, and in addition, it is known to be effective in the aphrodisiac effect of a weak constitution and treatment of various adult diseases.
한편, 동충하초는 약용버섯으로, 겨울 동(冬), 벌레 충(蟲), 여름 하(夏), 풀 초(草), 겨울에는 곤충의 몸속에서 잠복하여 양분을 흡수하여 곤충을 죽게 한 후, 여름에 환경이 맞으면 풀처럼 버섯을 만든다고 해서 동충하초라고 불리우며, 예로부터 인삼, 녹용과 함께 3대 명약으로 알려져 있다. 동충하초는 전세계적으로 약 750여종이 학계에 발표되어 알려져 있고, 3,000년 전부터 이용되었다고 전해지고 있으며, 불로장생의 묘약으로 일컬어져, 진시황, 양귀비, 등소평이 복용하여 장수하였다는 말이 전해져 오고 있다. 이러한 동충하초의 대표적인 효능으로는 항암작용, 면역증강, 간기능 개선, 고혈압, 항노화, 당뇨개선, 심장병, 자양강장 등의 효능이 많은 연구논문을 통해 밝혀졌으며, 현재도 동충하초의 연구가 지속적으로 진행되고 있다. 최근 건강식품의 소비가 급증하면서 동충하초에 대한 관심이 재조명되고 있는 실정이며, 동충하초를 이용한 건강보조 식품이 개발되어지고 있다. On the other hand, cordyceps is a medicinal mushroom, and in winter, it hides in the body of insects in winter, insects, summer, grass, and in winter, absorbs nutrients and kills insects. It is called cordyceps sinensis because it makes mushrooms like grass when the environment is right in summer, and has been known as one of the three best medicines along with ginseng and antlers from ancient times. About 750 kinds of cordyceps are known in academia, and it is said that they have been used since 3,000 years ago.It is said to have been used as a potion for longevity, and it has been said that Shihwang Jin, Poppy, and Deung Sopyeong took longevity. The representative efficacy of cordyceps sinensis has been revealed through many research papers, such as anticancer action, immunity enhancement, liver function improvement, high blood pressure, anti-aging, diabetes improvement, heart disease, and nutrient tonic. Has become. Recently, as the consumption of health foods has increased rapidly, interest in cordyceps is being refocused, and health supplement foods using cordyceps are being developed.
다만, 자연상태에서 채집되는 동충하초의 수가 제한적이고, 환경오염과 기후변화에 의해 그 수가 적어지고 있으므로, 동충하초를 이용한 제품의 개발과 유용 약리 성분 분석, 의약용 소재로써의 개발에 많은 어려움을 겪고 있다. 이와 같은 상황에서 동충하초 자원의 수집, 수집 균주 및 우량균주의 개발과 이를 이용한 신품종 동충하초 종균의 개발과 안정적인 대량 인공생산 기술의 개발이 절실한 실정이다. However, as the number of cordyceps collected in nature is limited, and the number is decreasing due to environmental pollution and climate change, there are many difficulties in developing products using cordyceps, analyzing useful pharmacological components, and developing them as medical materials. . Under such circumstances, there is an urgent need for the collection of cordyceps resources, the development of collected strains and superior strains, the development of new varieties of cordyceps seeds using the same, and the development of stable mass artificial production technology.
이에, 본 발명자는 유용성분으로서 코디세핀의 함량이 증진된 동충하초를 제조하고자 연구한 결과, 특정 물질을 함유한 포자현탁액을 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 주사하여 재배하는 경우 코디세핀 함량이 두드러지게 증진되는 것을 확인하였으며, 또한 이러한 장수풍뎅이 동충하초의 제조를 위한 최적의 배양 조건을 확립함으로써 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the present inventors studied to produce cordyceps with an enhanced content of cordycepine as an useful ingredient, and found that cordycepine content was remarkably enhanced when cultivated by injecting a spore suspension containing a specific substance into a live longevity beetle pupa. It was confirmed, and the present invention was completed by establishing the optimal culture conditions for the production of such a beetle Cordyceps sinensis.
따라서 본 발명의 목적은 특정 물질을 함유함으로써 동충하초의 유용성분을 증진시킬 수 있는 포자현탁액을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a spore suspension capable of enhancing the useful components of Cordyceps sinensis by containing a specific substance.
본 발명의 다른 목적은 상기 포자현탁액을 이용한 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing cordyceps cordyceps with enhanced cordycepin content using the spore suspension.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법으로 제조되는 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cordyceps cordyceps with enhanced content of cordycepin prepared by the above method.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, In order to achieve the object of the present invention as described above,
본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공한다.The present invention provides a spore suspension comprising the spores and insect extracts of Cordyceps sinensis as an active ingredient.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초 균주는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cordyceps militaris strain may be Cordyceps militaris.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충의 열수추출물 또는 벼메뚜기 열수추출물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the insect extract may be a hot water extract of white spotted flower radish larva or a hot water extract of rice grasshopper.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초균의 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL로 포함될 수 있다.Of the present invention In one embodiment, the spores of Cordyceps sinensis may be included in the spore suspension at 10 6 to 10 7 CFU/mL.
또한, 본 발명은 (a) 살아있는 장수풍뎅이에 상기의 포자현탁액을 주사 접종하는 단계; 및 (b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공한다. In addition, the present invention (a) the step of inoculating the spore suspension by injection into the live longevity beetle; And (b) providing a method of producing a cordyceps beetle with increased content of cordycepine comprising the step of culturing the injection-inoculated longevity beetle for 25 to 45 days at 60 to 70% humidity and 26 to 30°C temperature conditions do.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 (b) 단계 이후 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다. In one embodiment of the present invention, further comprising the step of culturing fruiting bodies for 15 to 45 days in the (c) hyphae cultured longevity beetle at 85 to 95% humidity and 20 to 30 °C temperature after step (b) can do.
또한, 본 발명은 상기 (a) 내지 (c) 단계를 포함하는 제조방법으로 제조된 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공한다.In addition, the present invention provides a longevity beetle Cordyceps sinensis with an enhanced content of cordycepine prepared by a manufacturing method comprising the steps (a) to (c).
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g의 양으로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the longevity beetle Cordyceps sinensis may contain cordycepin in an amount of 10 to 30 mg/g.
본 발명에 따른 포자현탁액은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 장수풍뎅이 동충하초의 코디세핀 함량을 증대시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 살아있는 장수풍뎅이를 사용함으로써 자연상태와 유사하게 균이 생장하여 곤충을 죽이고 동충하초를 발생시키도록 유도할 수 있으며, 상기 포자현탁액을 이용함으로써 동충하초의 유용성분을 증대시킬 수 있을 뿐 아니라, 최적의 배양조건을 확립함으로써 고함량의 코디세핀을 함유하는 장수풍뎅이 동충하초를 제조할 수 있다.The spore suspension according to the present invention can increase the content of cordycepin in Cordyceps beetle Cordyceps sinensis by including an insect extract as an active ingredient. In addition, the method for producing cordyceps beetle according to the present invention can induce a fungus to grow similar to the natural state to kill insects and generate cordyceps by using a live longevity beetle, and by using the spore suspension, useful ingredients of cordyceps sinensis In addition to being able to increase, by establishing the optimal culture conditions, it is possible to prepare the longevity beetle cordyceps sinensis containing a high content of cordycepine.
도 1a는 살아있는 장수풍뎅이 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1b는 살아있는 갈색거저리 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1c는 살아있는 흰점박이 꽃무지 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1d는 살아있는 쌍별 귀뚜라미에 포자현탁액을 주사 접종하고 50일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 2a는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액을 주사 접종하는 과정을 보여주는 사진이다.
도 2b는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 5일차를 보여주는 사진이다.
도 2c는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 20일차를 보여주는 사진이다.
도 2d는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 40일차를 보여주는 사진이다.
도 2e는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 45일차를 보여주는 사진이다.
도 2f는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 55일차를 보여주는 사진이다.
도 2g는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 60일차를 보여주는 사진이다.
도 2h는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 80일차를 보여주는 사진이다.
도 2i는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 90일차를 보여주는 사진이다.
도 3은 장수풍뎅이 동충하초 균사배양단계에서 온도조건별 배양일수별 코디세핀 함량을 측정한 결과이다(2a: 20℃, 2b: 25℃, 2c: 30℃).
도 4는 장수풍뎅이 동충하초 자실체생육단계에서 온도조건별 배양일수별 코디세핀 함량을 측정한 결과이다(3a: 20℃, 3b: 25℃, 3c: 30℃).
도 5는 접종된 포자현탁액 종류별 생육된 장수풍뎅이 동충하초의 코디세핀 함량을 측정한 결과이다.Figure 1a shows the results of induction of fruiting bodies 20 days after injection and inoculation of a spore suspension into a live beetle larva.
Figure 1b shows the results of induction of fruiting bodies 20 days after injection and inoculation of a spore suspension to live brown larvae.
Figure 1c shows the results of induction of fruiting bodies 20 days after inoculation of spore suspension into live white spotted larvae.
Figure 1d shows the results of induction of fruiting bodies 50 days after injection and inoculation of a spore suspension into a live twin cricket.
2A is a photograph showing a process of inoculating a spore suspension by injection into a live beetle pupa.
Figure 2b is a photograph showing the 5th day after inoculation of spore suspension injection into the pupae of a live longevity beetle.
Figure 2c is a photograph showing the 20th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2d is a photograph showing the 40th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2e is a photograph showing the 45th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2f is a photograph showing the 55th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2g is a photograph showing the 60th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2h is a photograph showing the 80th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 2i is a photograph showing 90 days after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupa.
Figure 3 is a result of measuring the content of cordycepin by culture days for each temperature condition in the hyphae culture step of longevity beetle Cordyceps sinensis (2a: 20°C, 2b: 25°C, 2c: 30°C).
Figure 4 is a result of measuring the content of cordycepine by cultivation days for each temperature condition in the fruiting body growth stage of the beetle Cordyceps sinensis (3a: 20°C, 3b: 25°C, 3c: 30°C).
5 is a result of measuring the content of cordycepin of cordyceps cordyceps grown by the type of inoculated spore suspension.
본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention is characterized in that it provides a spore suspension containing the spores and insect extracts of Cordyceps sinensis as an active ingredient.
본 명세서에서 언급하는 ‘동충하초’는 약용버섯으로, 겨울 동(冬), 벌레 충(蟲), 여름 하(夏), 풀 초(草), 겨울에는 곤충의 몸속에서 잠복하여 양분을 흡수하여 곤충을 죽게 한 후, 여름에 환경이 맞으면 풀처럼 버섯을 만든다고 해서 동충하초라고 불리우며, 예로부터 인삼, 녹용과 함께 3대 명약으로 알려져 있다. The'cordyceps sinensis' referred to in the present specification is a medicinal mushroom, which absorbs nutrients by lurking in the body of insects in winter, insect insects, summer summer, grass, and winter. It is called Cordyceps Hacho because it makes mushrooms like grass when the environment is suitable in summer, and has been known as one of the three best medicines along with ginseng and antlers from ancient times.
동충하초에는 다당류, 코디세핀(cordycepin), 아데노신(adenosine), 로바스타틴(lovastatin), 에르고스테롤(ergosterol), 각종 불포화지방산 등의 다양한 저분자 물질들이 포함되어 있어 동충하초의 생리활성에 기여하는 것으로 알려져 있다. 그 중, 코디세핀, 아데노신 등의 핵산유도체 물질들은 고농도로 함유되어 있는데, 이들은 동충하초의 주요 지표물질로도 사용된다. 특히, 코디세핀은 항암, 항산화 및 항염증 등의 생리활성을 나타내는 유효성분으로 알려져 있으며, 한국에서는 동충하초의 주요 약리성분으로 보고된 바 있다.Cordyceps sinensis contains various low-molecular substances such as polysaccharides, cordycepin, adenosine, lovastatin, ergosterol, and various unsaturated fatty acids, and is known to contribute to the physiological activity of Cordyceps sinensis. Among them, nucleic acid derivatives such as cordycepine and adenosine are contained in high concentrations, and these are also used as major indicators of cordyceps sinensis. In particular, cordycepin is known as an active ingredient that exhibits physiological activities such as anticancer, antioxidant and anti-inflammatory, and has been reported as a major pharmacological component of Cordyceps sinensis in Korea.
동충하초를 형성하는 곰팡이는 그 종류에 따라 숙주특이성을 갖는다. 예를 들어, 코디셉스 시커더(Cordyceps cicadae)는 매미를 숙주로 하고, 오피오코디셉스 시넨시스(Ophiocordyceps sinensis)나 페실로마이세스 헤피알리(Paecilomyces hepialid), 레카니실리움(Lecanicillium) 등은 박쥐나방 유충을 숙주로 한다. 반면, 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)는 숙주특이성이 넓어서 다양한 곤충을 숙주로 삼을 수 있다.The fungi that form cordyceps have host specificity depending on their type. For example, Cordyceps cicadae has a cicada as its host, and Ophiocordyceps sinensis ) or Paecilomyces hepialid ), Lecanicillium , etc. are host to bat moth larvae. On the other hand, Cordyceps Militaris militaris ) has a wide host specificity, so it can host various insects.
본 명세서에서 언급하는 ‘곤충 추출물’은 흰점박이 꽃무지 유충이나 벼메뚜기와 같은 곤충의 추출물일 수 있으나, 다만, 곤충의 종류를 이에 한정하는 것은 아니다.The “insect extract” referred to in the present specification may be an extract of an insect such as a white spotted flower larva or a rice locust, but the type of insect is not limited thereto.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충 또는 벼메뚜기 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100~120℃ 온도에서 6~24시간 열수추출한 후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 곤충 추출물을 제조할 수 있다.In an embodiment of the present invention, the insect extract is extracted with hot water for 6 to 24 hours at a temperature of 100 to 120° C. by adding 1 L of distilled water to 100 g of white spotted radish larva or rice grasshopper, and then filtered to remove impurities, An insect extract can be prepared by recovering the supernatant by centrifugation at a speed.
본 발명에서는 살아있는 곤충을 기주하여 동충하초균에 포자현탁액을 직접 주사 접종하여 동충하초를 인공적으로 재배하는 기술에 있어서, 포자현탁액의 성분으로 상기와 같은 곤충 추출물을 함유하는 경우 동충하초의 코디세핀 함량을 두드러지게 증대시킬 수 있음을 확인하였다.In the present invention, in the technology of artificially cultivating Cordyceps sinensis by directly inoculating a spore suspension into Cordyceps sinensis by hosting live insects, the content of cordycepin of Cordyceps sinensis is remarkably increased when the above insect extract is contained as a component of the spore suspension. It was confirmed that it can be increased.
이에, 본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공한다.Thus, the present invention provides a spore suspension comprising the spores and insect extracts of Cordyceps sinensis as an active ingredient.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초균은 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)일 수 있으며, 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL으로 포함될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cordyceps militaris may be the cordyceps militaris, and the spores may be included in the spore suspension at 10 6 to 10 7 CFU/mL.
또한, 본 발명은 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing cordyceps beetle cordyceps with an enhanced content of cordycepin.
장수풍뎅이(Allomyrina dichotoma)는 분류학상 곤충강 (Insecta) 딱정벌레목(Coleoptera) 장수풍뎅이과 (Dynastidae)에 속하며 1년에 한 번 생활사를 완결하는 1화생 곤충이다.Longevity beetle ( Allomyrina dichotoma ) is a one-figure insect belonging to the family Insecta, Coleoptera, Dynastidae, and completes its life cycle once a year.
본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 하여 상기에서 언급한 본 발명의 포자현탁액을 직접 주사 접종하여 배양함으로써 코디세핀 함량이 증대된 장수풍뎅이 동충하초 제조할 수 있다.In the present invention, by directly inoculating and inoculating the spore suspension of the present invention mentioned above using the live longevity beetle pupa as a host, it is possible to prepare a cordyceps cordyceps sinensis having an increased content of cordycepine.
본 발명의 상기 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 (a) 살아있는 장수풍뎅이에 포자현탁액을 주사 접종하는 단계; 및 (b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함할 수 있다.The method of manufacturing the longevity beetle Cordyceps sinensis of the present invention comprises the steps of: (a) inoculating a live longevity beetle with a spore suspension by injection; And (b) may include the step of culturing the hyphae for 25 to 45 days at 60 to 70% humidity and 26 to 30 ℃ temperature conditions of the injection inoculated beetle.
본 발명의 상기 (a) 단계는 살아있는 장수풍뎅이에 포자현탁액을 주사 접종하는 단계로서, 자세하게는 살아있는 장수풍뎅이에 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 직접적으로 주사 접종하는 단계이다. The step (a) of the present invention is a step of inoculating a spore suspension into a live beetle by injection, and in detail, a step of directly inoculating a spore suspension containing a spore of Cordyceps sinensis and an insect extract to the live longevity beetle as an active ingredient. to be.
본 발명의 상기 (a) 단계는 첫째, 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 사용한다는 점에 있어서 종래기술과 차별화되며, 둘째, 살아있는 곤충(장수풍뎅이)에 동충하초균을 접종하여 배양함으로써 자연상태의 동충하초와 동일하게 제조된다는 점에 있어서 종래기술과 차별화될 뿐 아니라, 셋째, 장수풍뎅이의 유충이 아닌 번데기를 기주로 사용한다는 점에서 종래기술과 차별화된다.The step (a) of the present invention is differentiated from the prior art in that first, a spore suspension containing cordyceps spores and insect extracts is used as an active ingredient, and secondly, cordyceps subbacterium is used in living insects (longevity beetles). By inoculating and culturing, it is differentiated from the prior art in that it is manufactured in the same manner as cordyceps in a natural state, and third, it is differentiated from the prior art in that it uses the pupa rather than the larvae of the longevity beetle as a host.
참고로, 장수풍뎅이 유충을 기주로 하여 포자현탁액을 주사하는 경우, 내부 수분이 많이 함유되어 있어, 접종 후 유충 내부에서 동충하초균이 생장하기에 적합하지 않았다. 또한, 종령 유충의 경우 크기는 크지만 활동력과 면역력이 매우 높은 상태여서 접종액을 다시 내뱉거나, 접종하여도 접종이 이루어지지 않았으며, 접종액을 늘리면 치사량으로 바로 죽는 것을 확인하였다. 이에, 본 발명자들은 장수풍뎅이 유충에 주사접종을 시도하였지만, 균사가 제대로 배양되지 못하였고, 오염률이 매우 높아서 성공하지 못하였다. 반면에, 장수풍뎅이 번데기는 내부가 고형화되는 시점이기 때문에 동충하초 균사가 자라나기에 적합하였다.For reference, when the spore suspension is injected using the beetle larva as the host, it contains a lot of internal moisture, so it is not suitable for the growth of Cordyceps sinensis inside the larva after inoculation. In addition, it was confirmed that the inoculation was not made even when the inoculum was re-spitted or inoculated because the larvae were large in size but had very high activity and immunity. Accordingly, the present inventors tried to inoculate the larvae of the beetle, but the mycelium was not properly cultured, and the contamination rate was very high, so it was not successful. On the other hand, the beetle pupae was suitable for the growth of cordyceps hyphae because it was the time when the inside of the beetle was solidified.
또한, 본 발명자들은 포자현탁액을 주사하는 살아있는 기주 곤충으로서 장수풍뎅이 유충, 흰점박이 꽃무지 유충, 갈색거저리 유충, 쌍별 귀뚜라미, 누에 번데기를 각각 실험하였으며, 그 결과 누에 번데기를 제외한 모든 실험체에서 자실체 발이가 일어나지 못한 것을 확인하였다(도 1a 내지 1d 참조).In addition, the present inventors experimented with longevity beetle larvae, white-spotted larvae, brown larvae, twin crickets, and silkworm pupae as living host insects injecting spore suspension. As a result, fruiting body paws in all specimens except silkworm pupae It was confirmed that it did not happen (see FIGS. 1A to 1D).
따라서 살아있는 곤충에 포자현탁액을 주사하여 동충하초균을 접종 배양함에 있어서 장수풍뎅이 유충, 흰점박이 꽃무지 유충, 갈색거저리 유충, 쌍별 귀뚜라미는 바람직하지 못하며, 장수풍뎅이 번데기 및 누에 번데기가 가능함을 확인하였다. 다만, 누에 번데기는 크기가 본래부터 작아, 장수풍뎅이 번데기와 비교하여 자실체도 작고 코디세핀 함량이 적기 때문에(장수풍뎅이 번데기의 경우 누에 번데기 대비 약 3배 이상 고농도의 코디세핀 함량을 보임), 본 발명에서는 동충하초균의 배양에 적합한 살아있는 기주 곤충으로서 장수풍뎅이 번데기를 이용하였다.Therefore, it was confirmed that longevity beetle larva, white-spotted flowery larva, brown roe larva, and twin crickets are not preferable in inoculating and cultivating Cordyceps sinensis by injecting spore suspension into live insects, and longevity beetle pupa and silkworm pupa are possible. However, since the silkworm pupae are inherently small in size and have a smaller fruiting body compared to the longevity beetle pupae (the longevity beetle pupae show a high concentration of cordycepine at least three times that of the silkworm pupa), the present invention In, the longevity beetle pupa was used as a live host insect suitable for cultivation of Cordyceps sinensis.
본 발명의 상기 (b) 단계는 동충하초균이 주사 접종된 장수풍뎅이를 균사 배양하는 단계로서, 자세하게는 상기 (a) 단계를 통해 수득한 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계이다.The step (b) of the present invention is a step of hyphae culturing the longevity beetle injected with Cordyceps sinensis, and in detail, the injection-inoculated longevity beetle obtained through step (a) is 60-70% humidity and 26-30. This is a step of culturing the hyphae for 25 to 45 days in a temperature condition of ℃.
본 발명의 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 상기 (b) 단계 이후 추가적으로 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 (c) 단계는 균사 배양된 장수풍뎅이를 자실체 배양하는 단계이다.The method for producing a longevity beetle Cordyceps sinensis of the present invention further comprises the step of culturing fruiting bodies for 15 to 45 days at 85 to 95% humidity and 20 to 30 °C temperature condition of (c) hyphae cultured longevity beetle after step (b). Can include. The step (c) of the present invention is a step of culturing a fruiting body of a hyphae cultured longevity beetle.
본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 하여 동충하초균을 직접 주사 접종하여 고함량의 코디세핀을 함유하는 장수풍뎅이 동충하초를 제조하기 위하여 균주 배양에 있어서 최적의 배양조건 및 자실체 배양에 있어서 최적의 배양조건을 확립하였으며, 이러한 배양조건은 본 발명에서 최초로 규명하였다.In the present invention, in order to produce cordyceps cordyceps containing a high content of cordycepine by direct injection of Cordyceps sinensis using live longevity beetle pupa as a host, optimum culture conditions for culturing strains and optimal culture conditions for fruiting body culture Was established, and these culture conditions were first identified in the present invention.
따라서 본 발명은 종래기술 대비 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초의 제조를 위하여 균주 및 자실체 배양에 있어서 각각의 최적조건을 규명하였다는 점에서 차별화된다. Accordingly, the present invention is differentiated in that the optimal conditions for culturing the strain and fruiting body were identified for the production of cordyceps cordyceps with increased content of cordycepin compared to the prior art.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공한다.In addition, the present invention provides a cordyceps beetle cordyceps with enhanced content of cordycepin prepared by the above method.
본 발명의 상기 방법으로 제조된 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g 양으로 포함할 수 있다. Longevity beetle Cordyceps sinensis prepared by the above method of the present invention may contain cordycepin in an amount of 10 to 30 mg/g.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are for explaining the present invention more specifically, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
<< 실시예Example 1> 1>
<1-1> <1-1> 기주의Host 준비 Preparations
본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 사용하였다.In the present invention, live longevity beetle pupa was used as a host.
자세하게는, 장수풍뎅이 유충이 번데기가 된 후로 2~3일 지난 장수풍뎅이 번데기(날개 등 껍질이 만들어지지 않은 상태, 우화시작 전)를 기주로 사용하였다. 장수풍뎅이 유충 및 번데기는 “농업회사법인(주)오상킨섹트”와 “농업회사법인(주)동의바이오”에서 구입하였다.In detail, the longevity beetle pupae (the state where the skins such as wings were not made, before the start of the fable), which had passed 2-3 days after the larvae became a pupa, was used as a host. Longevity beetle larvae and pupae were purchased from “Osang Kinsect Co., Ltd.” and “Dongui Bio Co., Ltd.”
<1-2> 동충하초균 준비<1-2> Preparation of Cordyceps sinensis
본 발명에서 동충하초균은 자연에서 채집하여 분리하였고, 형태적 및 분자생물학적 방법을 통하여 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)로 동정되었다. 분자생물학적 동정은 ㈜마크로젠에 의뢰하여 18S rRNA region을 sequence 분석하였으며, 분리 동정된 균은 “세종006”이라고 자체 균주번호를 부여하여 실험을 진행하였다.Cordyceps bacteria were separated and collected from nature by the present invention, coordination sepseu mm through the morphological and molecular biological methods other less (Cordyceps militaris ). For molecular biological identification, the 18S rRNA region was sequenced by requesting Macrogen Co., Ltd., and the isolated and identified bacteria were tested by assigning their own strain number “Sejong 006”.
<< 실시예Example 2> 2>
포자현탁액 준비Preparation of spore suspension
<2-1> <2-1> 멸균수를Sterile water 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of spore suspension using
번데기 동충하초(Cordyceps militaris) 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco) 고체배지에 계대하여 25℃ 항온배양기(incubator)에서 21일간 배양하여 사용하였다. 멸균수 3ml를 배양된 플레이트에 분주하고 멸균된 스프레더(spreader)를 이용하여 긁어모았다. 이렇게 긁어낸 포자액을 10㎛ 크기의 필터를 이용하여 균사체는 걸러내고 포자만 수확하였다. 수확한 포자는 혈구계수기를 이용하여 포자수를 산출하였고, 접종에 사용된 포자현탁액은 107CFU/㎖의 농도로 멸균수를 희석하여 사용하였다.Pupa Cordyceps militaris ) strain was passed to PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) solid medium and cultured in a 25°C incubator for 21 days. 3 ml of sterilized water was dispensed on the cultured plate and scraped using a sterilized spreader. The spore solution thus scraped was filtered off using a filter having a size of 10 μm, and only spores were harvested. The harvested spores were counted using a hemocytometer, and the spore suspension used for inoculation was diluted with sterile water to a concentration of 10 7 CFU/ml.
<2-2> <2-2> 미네랄 워터를Mineral water 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of spore suspension using
번데기 동충하초(Cordyceps militaris) 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco) 고체배지에 계대하여 25℃ 항온배양기(incubator)에서 21일간 배양하여 사용하였다. 멸균된 미네랄 워터 3ml를 배양된 플레이트에 분주하고 멸균된 스프레더(spreader)를 이용하여 긁어모았다. 이렇게 긁어낸 포자액을 10㎛ 크기의 필터를 이용하여 균사체는 걸러내고 포자만 수확하였다. 수확한 포자는 혈구계수기를 이용하여 포자수를 산출하였고, 접종에 사용된 포자현탁액은 107CFU/㎖의 농도로 멸균된 미네랄 워터를 희석하여 사용하였다.Pupa Cordyceps militaris ) strain was passed to PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) solid medium and cultured in a 25°C incubator for 21 days. 3 ml of sterilized mineral water was dispensed on the cultured plate and scraped using a sterilized spreader. The spore solution thus scraped was filtered off using a filter having a size of 10 μm, and only spores were harvested. The harvested spores were counted by using a hemocytometer, and the spore suspension used for inoculation was diluted with sterilized mineral water at a concentration of 10 7 CFU/ml.
<2-3> <2-3> 흰점박이White spot 꽃무지Flowers 유충 larva 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of spore suspension using
먼저, 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 농업회사법인 ㈜오상켄섹트에서 수득한 흰점박이 꽃무지 유충을 3일간 절식한 후 깨끗이 세척하였다. 세척이 완료된 흰점박이 꽃무지 유충 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100℃ 온도에서 12시간 열수추출하였다. 이후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 제조하였다.First, a hot water extract of white spotted radish larva was prepared. In detail, the white-spotted radish larvae obtained from Osang Kensect Co., Ltd., an agricultural corporation, were fasted for 3 days and washed cleanly. 1L of distilled water was added to 100g of white spotted radish larvae that were washed, and hot water was extracted at 100°C for 12 hours. Thereafter, impurities were removed by filtration, and the supernatant was recovered by centrifugation at a speed of 1000 rpm to prepare a hot water extract of white spotted radish larva.
이후, 상기 제조된 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Then, a spore suspension was prepared using the prepared white spotted flower radish larva hot water extract. The preparation of the spore suspension was prepared in the same manner as in Example <2-2>, except that'white spotted radish larva hot water extract' was used instead of'mineral water'.
<2-4> 벼메뚜기 <2-4> Rice grasshopper 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of spore suspension using
먼저, 벼메뚜기 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 농업회사법인 ㈜동의바이오에서 구입한 벼메뚜기 건조물 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100℃ 온도에서 12시간 열수추출하였다. 이후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 벼메뚜기 열수추출물을 제조하였다. First, a hot water extract of rice grasshopper was prepared. In detail, 1L of distilled water was added to 100g of dried rice grasshoppers purchased from Dongeui Bio, an agricultural corporation, and hot water was extracted at 100℃ for 12 hours. Thereafter, the impurities were removed by filtration, and the supernatant was collected by centrifugation at a speed of 1000 rpm to prepare a rice locust hot water extract.
이후, 상기 제조된 벼메뚜기 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘벼메뚜기 열수추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Then, a spore suspension was prepared using the prepared rice grasshopper hot water extract. The preparation of the spore suspension was prepared in the same manner as in Example <2-2>, except that “rice grasshopper hot water extract” was used instead of “mineral water”.
<2-5> 솔잎 <2-5> pine needles 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of spore suspension using
먼저, 솔잎 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 솔잎을 채취하여 유수에 씻고 풍건한 후 분쇄기로 잘게 갈아 솔잎분말을 준비하였다. 솔잎분말 20g에 대하여 증류수 1L를 첨가한 후 12시간 열수추출하고 추출액을 여과하여 솔잎 추출물을 제조하였다.First, a hot water extract of pine needles was prepared. In detail, pine needles were collected, washed in running water, air-dried, and then finely ground with a grinder to prepare pine needle powder. After adding 1 L of distilled water to 20 g of pine needle powder, hot water extraction was performed for 12 hours, and the extract was filtered to prepare a pine needle extract.
이후, 상기 제조된 솔잎 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘솔잎 추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Then, a spore suspension was prepared using the prepared hot water extract of pine needles. The spore suspension was prepared in the same manner as in Example <2-2>, except that'pine needle extract' was used instead of'mineral water'.
<< 실시예Example 3> 3>
장수풍뎅이 번데기 동충하초 배양조건별 코디세핀 함량 변화Changes in Cordycepin Content by Culture Conditions of Longevity Beetle Pupa Cordyceps Sinensis
본 발명에서는 기주에 포자현탁액 종류별 주사 접종 후 균사배양 및 자실체 배양의 최적 조건을 확립하기 위하여, 온도조건 및 배양일수에 따른 코디세핀 함량 변화를 살펴보았다.In the present invention, in order to establish the optimal conditions for mycelial culture and fruiting body culture after injection inoculation by type of spore suspension in the host, changes in the content of cordicepine according to temperature conditions and culture days were examined.
간략하게는, 살아있는 장수풍뎅이 번데기(등 부위)에 상기 실시예 <2-1>에서 제조한 포자현탁액을 200㎕로 주사하였다. 이때, 접종농도는 107CFU/㎖이었으며, 각 실험군별 60마리씩 접종하였다.Briefly, 200 µl of the spore suspension prepared in Example <2-1> was injected into the pupae (back part) of a live longevity beetle. At this time, the inoculation concentration was 10 7 CFU/ml, and 60 mice were inoculated for each experimental group.
<3-1> 균사배양 조건<3-1> Hyphae culture conditions
기주에 포자현탁액을 주사한 후 균사배양을 진행하였다. 균사배양은 암조건, 습도 60~70%로 통일하였으며, 온도 조건은 20℃, 25℃, 30℃, 35℃에서 각각 균사배양되었을 때 배양일수별 코디세핀 함량을 측정하였다. After the spore suspension was injected into the host, hyphae culture was performed. The mycelial culture was unified under dark conditions and humidity of 60-70%, and the temperature conditions were measured for cordycepine content by culture days when hyphae were cultured at 20℃, 25℃, 30℃, and 35℃ respectively.
코디세핀 함량을 측정하기 위하여, 시료는 수분 함량이 6~8%가 될 때까지 50~65℃ 오븐으로 건조시켰다. 건조된 자실체는 분쇄기(Retsch, Haam, Germany)로 0.5~1mm 크기로 분쇄하였다. 건조 분말 5g을 메탄올 250ml로 22시간 추출하였고, 추출액을 1500rpm 5분간 원심분리하여 0.45㎛ 필터로 여과하였다. 이렇게 수득된 추출물을 컬럼 흡착크로마토그래피(흡착수지 Diaion HP20)를 이용하여 코디세핀을 분리하였고, 함량은 HPLC(Waters 600 Q-펌프, 996 광 다이오드 어레이 검출기 및 Water Empower 소프트웨어)를 이용하여 측정하였다.In order to measure the content of cordycepine, the sample was dried in an oven at 50 to 65° C. until the moisture content became 6 to 8%. The dried fruiting body was pulverized in a size of 0.5 to 1 mm with a pulverizer (Retsch, Haam, Germany). 5 g of dry powder was extracted with 250 ml of methanol for 22 hours, and the extract was centrifuged at 1500 rpm for 5 minutes and filtered through a 0.45 μm filter. The thus obtained extract was separated from cordycepin using column adsorption chromatography (adsorption resin Diaion HP20), and the content was measured using HPLC (Waters 600 Q-pump, 996 photodiode array detector and Water Empower software).
그 결과 하기 표 1 및 도 3a 내지 3c에서 나타낸 바와 같이, 균사배양단계에서 코디세핀 함량은 30℃의 온도 조건에서 두드러지게 증대되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 45일차에 가장 높은 코디세핀 함량을 보여주었다. 한편, 35℃의 온도 조건에서 배양하는 경우 균사 배양이 이루어지지 않아 코디세핀 함량을 측정할 수 없었다.As a result, as shown in Table 1 and FIGS. 3A to 3C, it was confirmed that the cordycepine content in the hyphae culture step was significantly increased under the temperature condition of 30°C, and in particular, the highest cordycepine content was shown on day 45. . On the other hand, in the case of culturing under a temperature condition of 35° C., the hyphae culture was not performed, so the content of cordycepine could not be measured.
<3-2> 자실체 생육조건<3-2> Growth conditions for fruiting bodies
상기 실시예 <3-1>을 통해 포자현탁액 접종 후 균사배양 45일차에 가장 높은 코디세핀 함량을 확인하였는바, 본 실험에서는 균사배양 45일차부터 자실체 유도를 위하여 생육실로 이동하였다.According to Example <3-1>, the highest content of cordicepine was confirmed on the 45th day of mycelial culture after inoculation of the spore suspension, and in this experiment, from the 45th day of the mycelial culture, it was moved to the growth room for induction of fruiting bodies.
자실체 생육조건은 광조건, 습도 85~90%이상으로 통일하였으며, 온도 조건은 20℃, 25℃, 30℃에서 각각 배양되었을 때 배양일수별 코디세핀 함량을 측정하였다. 코디세핀 함량은 상기 <실시예 3-1>과 동일한 방법으로 측정되었다.Fruiting body growth conditions were unified under light conditions and humidity of 85-90% or higher, and temperature conditions were measured for cordycepine content by culture days when cultured at 20°C, 25°C, and 30°C, respectively. The content of cordycepine was measured in the same manner as in <Example 3-1>.
그 결과 하기 표 2 및 도 4a 내지 4c에서 나타낸 바와 같이, 자실체배양단계에서 코디세핀 함량은 25℃의 온도 조건에서 가장 높게 증대되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 15일차부터 45일차까지 높은 수준의 코디세핀 함량을 보여주었다.As a result, as shown in Table 2 below and FIGS. 4A to 4C, it was confirmed that the content of cordicepine in the fruiting body culture step increased the highest under the temperature condition of 25°C. In particular, the high level of cordycepine from day 15 to day 45 Showed the content.
<< 실시예Example 3> 3>
기주에On host 포자현탁액 주사 접종 및 포자현탁액 종류에 따른 코디세핀 함량 Codycepin content according to spore suspension injection inoculation and spore suspension type
본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 상기 <실시예 2>에서 제조한 포자현탁액(미네랄 워터, 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물, 벼메뚜기 열수추출물, 솔잎 열수추출물) 각각을 200㎕로 주사하였다. 이때, 접종농도는 107CFU/㎖이었으며, 각 실험군별 60마리씩 접종하였다.In the present invention, the spore suspension (mineral water, hot water extract of white spotted radish larvae, hot water extract of rice locust, hot water extract of pine needles) prepared in Example 2 was injected into a live longevity beetle pupa at 200 µl. At this time, the inoculation concentration was 10 7 CFU/ml, and 60 mice were inoculated for each experimental group.
기주에 포자현탁액 종류별 주사 접종 후 암조건, 습도 60~70%에서 30℃의 조건으로 45일간 균사배양하였으며, 이후 광조건, 습도 85~90%이상에서 25℃의 조건으로 45일간 자실체를 배양하였다. 상기 과정으로 제조된 자실체의 코디세핀 함량을 측정하였다.After injection inoculation by type of spore suspension at the host, the hyphae were cultured for 45 days in dark conditions and at a humidity of 60 to 70% and at 30°C, and then, fruiting bodies were cultured for 45 days in a light condition and at a humidity of 85 to 90% or higher at 25°C. The content of cordycepin in the fruiting body prepared by the above process was measured.
그 결과 하기 표 3 및 도 5에서 나타낸 바와 같이, 다른 실험군 대비 처리군 2(흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물)에서 것이 두드러지게 우수한 코디세핀 함량을 보여주었다.As a result, as shown in Table 3 and FIG. 5, in the treatment group 2 (white spotted radish larva hot water extract) compared to the other experimental groups showed remarkably superior cordycepine content.
(미네랄 워터)Experimental group 1
(Mineral water)
(흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물)Experimental group 2
(White spotted radish larva hot water extract)
(벼메뚜기 열수추출물)Experimental group 3
(Rice Grasshopper Hot Water Extract)
(솔잎 열수추출물)Experimental group 4
(Hot water extract of pine needles)
(멸균수)Control
(Sterilized water)
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, the present invention has been looked at around its preferred embodiments. Those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains will be able to understand that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered from an illustrative point of view rather than a limiting point of view. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the above description, and all differences within the scope equivalent thereto should be construed as being included in the present invention.
Claims (8)
상기 포자현탁액은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하고,
상기 동충하초균은 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)이며,
상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충의 열수추출물 또는 벼메뚜기 열수추출물인 것을 특징으로 하는, 포자현탁액.As a spore suspension that can be injected and inoculated into a living host,
The spore suspension contains spores and insect extracts of Cordyceps sinensis as an active ingredient,
The cordyceps militaris is Cordyceps militaris,
The insect extract is a spore suspension, characterized in that the hot water extract of white spotted flower radish larvae or hot water extract of rice locust.
상기 동충하초균의 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL로 포함되는 것을 특징으로 하는 포자현탁액.The method of claim 1,
Spore suspension, characterized in that the spores of Cordyceps sinensis are contained in the spore suspension at 10 6 to 10 7 CFU/mL.
(b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법.(a) the step of inoculating the spore suspension of claim 1 into a live beetle by injection; And
(b) comprising the step of culturing the injection-inoculated longevity beetle for 25 to 45 days in a temperature condition of 60 to 70% humidity and 26 to 30 °C, cordycepin content is enhanced longevity beetle cordyceps production method.
상기 (b) 단계 이후 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법.The method of claim 5,
After step (b) (c) hyphae cultured longevity beetle further comprising the step of culturing fruiting bodies for 15 to 45 days at 85 to 95% humidity and 20 ℃ to 30 ℃ temperature conditions, enhanced longevity of cordycepine Scarab cordyceps production method.
상기 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g의 양으로 포함하는 장수풍뎅이 동충하초.The method of claim 7,
The longevity beetle cordyceps sinensis is a longevity beetle cordyceps containing cordycepin in an amount of 10 to 30 mg/g.
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