KR20200077650A - Spore suspension comprising insect extract and preparation method of allomyrina dichotoma Cordyceps with increased cordycepin content using this - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a spore suspension comprising an insect extract as an effective ingredient and a method for preparing Allomyrina dichotoma cordyceps with an enhanced large amount of cordycepin by using the same. According to the present invention, the spore suspension may contain the insect extract as an effective ingredient so as to increase the content of cordycepin of Allomyrina dichotoma cordyceps. In addition, according to the present invention, a method for preparing Allomyrina dichotoma cordyceps may use Allomyrina dichotoma so that fungi grow similar to a natural state to kill insects and generate cordyceps, and also may use the spore suspension to increase useful ingredients of cordyceps and establish optimal culture conditions, thereby preparing Allomyrina dichotoma cordyceps containing a high content of cordycepin.

Description

곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액 및 이를 이용한 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초의 제조방법{Spore suspension comprising insect extract and preparation method of allomyrina dichotoma Cordyceps with increased cordycepin content using this}Spore suspension comprising insect extract and preparation method of allomyrina dichotoma Cordyceps with increased cordycepin content using this}

본 발명은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액 및 이를 이용하여 코디세핀 함량이 다량으로 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a spore suspension containing an insect extract as an active ingredient and a method for preparing longevity scarab cordyceps in which codycepin content is enhanced in a large amount using the same.

장수풍뎅이(Allomyrina dichotoma)는 분류학상 곤충강 (Insecta) 딱정벌레목(Coleoptera) 장수풍뎅이과 (Dynastidae)에 속하며 1년에 한 번 생활사를 완결하는 1화생 곤충으로 3번의 탈피를 하여 번데기가 된 후 6-7월경에 성충으로 우화한다. 성충을 지낸 후 8월말에서 9월에 걸쳐 교미를 하고 산란을 하며, 약 2주 후에 1령 유충으로 부화한다. 우리나라에 서식하는 풍뎅이 종류 중에서 가장 몸집이 크고 잘 알려진 곤충이다. 수컷의 머리에는 긴 뿔이 나있고 가슴등판에도 뿔이 있는데 장수풍뎅이의 생김새를 나타내는 가장 큰 특징이다. 숲속의 참나무에서 주로 발견되며 오래된 나무에서 흐르는 진을 빨아먹는다. 몸 전체 모양은 약간 길쭉한 타원형이고 색깔은 검정색 또는 갈색이며 광택이 난다. 수컷만 뿔이 있고 암컷은 뿔이 없으며 크기도 수컷에 비해 작고 등판 전체에 걸쳐 털이 나 있다. 발에 날카로운 발톱이 있어서 나무를 잘 타고 오른다. 더듬이는 짧고 끝이 뭉툭하다. 이러한 특징을 갖는 장수풍뎅는 간경화, 간암 등의 간 질환에 효능이 있는 것으로 알려져 있고, 이외에도 허약체질의 보양효과와 각종 성인병 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.Longevity scarab ( Allomyrina dichotoma ) belongs to the insect family (Insecta) Coleoptera (Dynastidae) by taxonomy, and is a one-flowered insect that completes its life cycle once a year. Fable. After the imago, they mate and spawn from the end of August to September, and hatch into a 1-star larva after about 2 weeks. It is the largest and well-known insect among scarab species in Korea. The male's head has long horns, and the back of the chest has horns, which is the biggest characteristic of the appearance of the beetle. It is mainly found in oak trees in the forest and sucks gin flowing from old trees. The shape of the whole body is slightly elongated oval, and the color is black or brown and glossy. Only males have horns, females do not have horns, and they are smaller in size than males and have hairs throughout the back. They have sharp claws on their feet, so they climb trees well. Antennae short and blunt. Jangsu beetle having these characteristics is known to be effective in liver diseases such as cirrhosis and liver cancer, and is known to be effective in curing a weak body and curing various adult diseases.

한편, 동충하초는 약용버섯으로, 겨울 동(冬), 벌레 충(蟲), 여름 하(夏), 풀 초(草), 겨울에는 곤충의 몸속에서 잠복하여 양분을 흡수하여 곤충을 죽게 한 후, 여름에 환경이 맞으면 풀처럼 버섯을 만든다고 해서 동충하초라고 불리우며, 예로부터 인삼, 녹용과 함께 3대 명약으로 알려져 있다. 동충하초는 전세계적으로 약 750여종이 학계에 발표되어 알려져 있고, 3,000년 전부터 이용되었다고 전해지고 있으며, 불로장생의 묘약으로 일컬어져, 진시황, 양귀비, 등소평이 복용하여 장수하였다는 말이 전해져 오고 있다. 이러한 동충하초의 대표적인 효능으로는 항암작용, 면역증강, 간기능 개선, 고혈압, 항노화, 당뇨개선, 심장병, 자양강장 등의 효능이 많은 연구논문을 통해 밝혀졌으며, 현재도 동충하초의 연구가 지속적으로 진행되고 있다. 최근 건강식품의 소비가 급증하면서 동충하초에 대한 관심이 재조명되고 있는 실정이며, 동충하초를 이용한 건강보조 식품이 개발되어지고 있다. On the other hand, Cordyceps sinensis is a medicinal mushroom, winter insects, insect insects, summer insects, grass grasses, and in winter, lurks in the insect's body to absorb nutrients and kill insects, When the environment is right in the summer, it is called Dongchunghacho because it makes mushrooms like grass. About 750 species of Cordyceps sinensis have been published in the academic world and are known to have been used since 3,000 years ago. It has been said that it has been said to have been used as a potion for the longevity, and has been taken by Qin Shi Huang, Poppy and Deng Xiaoping for longevity. The representative efficacy of Cordyceps sinensis has been revealed through research papers with many effects such as anti-cancer action, immune enhancement, liver function improvement, hypertension, anti-aging, diabetes improvement, heart disease, and nutritious tonic. Is becoming. Recently, as consumption of healthy foods has rapidly increased, interest in Cordyceps has been reexamined, and health supplements using Cordyceps have been developed.

다만, 자연상태에서 채집되는 동충하초의 수가 제한적이고, 환경오염과 기후변화에 의해 그 수가 적어지고 있으므로, 동충하초를 이용한 제품의 개발과 유용 약리 성분 분석, 의약용 소재로써의 개발에 많은 어려움을 겪고 있다. 이와 같은 상황에서 동충하초 자원의 수집, 수집 균주 및 우량균주의 개발과 이를 이용한 신품종 동충하초 종균의 개발과 안정적인 대량 인공생산 기술의 개발이 절실한 실정이다. However, since the number of cordyceps collected in the natural state is limited and the number is reduced due to environmental pollution and climate change, we are having a lot of difficulties in developing products using cordyceps and analyzing useful pharmacological components and developing them as medicinal materials. . In this situation, the collection of Cordyceps sinensis resources, development of collected strains and superior strains, and the development of new species of Cordyceps sinensis using them and the development of stable mass artificial production technology are in desperate need.

이에, 본 발명자는 유용성분으로서 코디세핀의 함량이 증진된 동충하초를 제조하고자 연구한 결과, 특정 물질을 함유한 포자현탁액을 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 주사하여 재배하는 경우 코디세핀 함량이 두드러지게 증진되는 것을 확인하였으며, 또한 이러한 장수풍뎅이 동충하초의 제조를 위한 최적의 배양 조건을 확립함으로써 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the present inventors have researched to manufacture cordyceps sinensis with enhanced content of codysepin as a useful ingredient, and when cultivated by injecting a spore suspension containing a specific substance into a live longevity scarab pupa, the codysepin content is significantly improved. Also, the present invention was completed by establishing optimal culture conditions for the production of such longevity beetles.

한국등록특허 제10-1835383호Korean Registered Patent No. 10-1835383 한국등록특허 제10-1810854호Korean Registered Patent No. 10-1810854

따라서 본 발명의 목적은 특정 물질을 함유함으로써 동충하초의 유용성분을 증진시킬 수 있는 포자현탁액을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a spore suspension capable of enhancing useful components of Cordyceps sinensis by containing a specific substance.

본 발명의 다른 목적은 상기 포자현탁액을 이용한 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing cordyceps sinensis beetle with enhanced codysepin content using the spore suspension.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법으로 제조되는 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cordyceps sinensis beetle enhanced codycepin content produced by the above method.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, In order to achieve the object of the present invention as described above,

본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공한다.The present invention provides a spore suspension containing the spore and insect extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초 균주는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cordyceps strain may be Cordyceps militaris .

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충의 열수추출물 또는 벼메뚜기 열수추출물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the insect extract may be a hot water extract of a white-spotted flower larvae or a hot water extract of rice locusts.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초균의 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL로 포함될 수 있다.Of the present invention In one embodiment, the spores of the Cordyceps sinensis can be included in the spore suspension at 10 6 to 10 7 CFU/mL.

또한, 본 발명은 (a) 살아있는 장수풍뎅이에 상기의 포자현탁액을 주사 접종하는 단계; 및 (b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공한다. In addition, the present invention comprises the steps of (a) injecting and inoculating the spore suspension into a live longevity scarab; And (b) incubating the injection-inoculated longevity scarab for 25 to 45 days under conditions of 60 to 70% humidity and 26 to 30°C, providing a method for preparing cordyceps sinensis with enhanced codysepin content. do.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 (b) 단계 이후 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다. In one embodiment of the present invention, after the step (b) (c) further comprising the step of culturing mycelia for 15 to 45 days at 85 ~ 95% humidity and 20 ℃ ~ 30 ℃ temperature mycelium cultured longevity beetle can do.

또한, 본 발명은 상기 (a) 내지 (c) 단계를 포함하는 제조방법으로 제조된 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공한다.In addition, the present invention provides a longevity scarab cordyceps with enhanced codycepin content prepared by a production method comprising the steps (a) to (c).

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g의 양으로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the longevity beetle Cordyceps may contain codicepin in an amount of 10 to 30 mg/g.

본 발명에 따른 포자현탁액은 곤충 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 장수풍뎅이 동충하초의 코디세핀 함량을 증대시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 살아있는 장수풍뎅이를 사용함으로써 자연상태와 유사하게 균이 생장하여 곤충을 죽이고 동충하초를 발생시키도록 유도할 수 있으며, 상기 포자현탁액을 이용함으로써 동충하초의 유용성분을 증대시킬 수 있을 뿐 아니라, 최적의 배양조건을 확립함으로써 고함량의 코디세핀을 함유하는 장수풍뎅이 동충하초를 제조할 수 있다.The spore suspension according to the present invention can increase the codycepin content of longevity scarab beetles by including the insect extract as an active ingredient. In addition, the method of manufacturing longevity scarab cordyceps according to the present invention can induce that fungi grow and kill insects and generate cordyceps similar to the natural state by using live longevity scarab, and useful components of cordyceps by using the spore suspension. In addition to being able to increase, by establishing the optimum culture conditions can be prepared longevity scarab cordyceps containing a high content of codysepin.

도 1a는 살아있는 장수풍뎅이 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1b는 살아있는 갈색거저리 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1c는 살아있는 흰점박이 꽃무지 유충에 포자현탁액을 주사 접종하고 20일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 1d는 살아있는 쌍별 귀뚜라미에 포자현탁액을 주사 접종하고 50일 후에 자실체 유도 결과를 나타낸 것이다.
도 2a는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액을 주사 접종하는 과정을 보여주는 사진이다.
도 2b는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 5일차를 보여주는 사진이다.
도 2c는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 20일차를 보여주는 사진이다.
도 2d는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 40일차를 보여주는 사진이다.
도 2e는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 45일차를 보여주는 사진이다.
도 2f는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 55일차를 보여주는 사진이다.
도 2g는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 60일차를 보여주는 사진이다.
도 2h는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 80일차를 보여주는 사진이다.
도 2i는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 포자현탁액 주사 접종 후 90일차를 보여주는 사진이다.
도 3은 장수풍뎅이 동충하초 균사배양단계에서 온도조건별 배양일수별 코디세핀 함량을 측정한 결과이다(2a: 20℃, 2b: 25℃, 2c: 30℃).
도 4는 장수풍뎅이 동충하초 자실체생육단계에서 온도조건별 배양일수별 코디세핀 함량을 측정한 결과이다(3a: 20℃, 3b: 25℃, 3c: 30℃).
도 5는 접종된 포자현탁액 종류별 생육된 장수풍뎅이 동충하초의 코디세핀 함량을 측정한 결과이다.
Figure 1a shows the results of inducing fruiting bodies 20 days after inoculation of spore suspension into live longevity beetle larvae.
Figure 1b shows the results of inducing fruiting bodies 20 days after inoculation with a spore suspension in a live brown larva.
Figure 1c shows the results of inducing fruiting bodies 20 days after inoculation with a spore suspension in a live white-spotted flower larvae.
Figure 1d shows the results of inducing fruiting bodies 50 days after inoculation of spore suspension into live paired crickets.
Figure 2a is a photograph showing the process of inoculating spore suspension in a live longevity scarab pupa.
Figure 2b is a photograph showing the 5th day after the spore suspension injection inoculation on the live longevity scarab pupa.
Figure 2c is a photograph showing the 20th day after the spore suspension injection inoculation on a live longevity scarab pupa.
Figure 2d is a photograph showing the 40 days after the spore suspension injection inoculation on the live longevity scarab pupa.
Figure 2e is a photograph showing the 45th day after inoculation of the spore suspension injection into the live longevity scarab pupa.
Figure 2f is a photograph showing the 55th day after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupae.
Figure 2g is a photograph showing the 60 days after inoculation of spore suspension injection into a live beetle pupae.
Figure 2h is a photograph showing the 80th day after the spore suspension injection inoculation on the live longevity scarab pupa.
Figure 2i is a photograph showing the 90th day after inoculation of the spore suspension injection into a live beetle pupae.
Figure 3 is a result of measuring the codycepin content by culture day by temperature conditions in the mycelial culture stage of the longevity scarab beetle (2a: 20 ℃, 2b: 25 ℃, 2c: 30 ℃).
Figure 4 is a result of measuring the codycepin content by the number of culture days by temperature conditions at the stage of longevity beetle cordyceps fruiting stage (3a: 20 ℃, 3b: 25 ℃, 3c: 30 ℃).
Figure 5 is a result of measuring the codycepin content of the longevity scarab cordyceps grown by type of spore suspension inoculated.

본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention is characterized by providing a spore suspension containing the spore and insect extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient.

본 명세서에서 언급하는 ‘동충하초’는 약용버섯으로, 겨울 동(冬), 벌레 충(蟲), 여름 하(夏), 풀 초(草), 겨울에는 곤충의 몸속에서 잠복하여 양분을 흡수하여 곤충을 죽게 한 후, 여름에 환경이 맞으면 풀처럼 버섯을 만든다고 해서 동충하초라고 불리우며, 예로부터 인삼, 녹용과 함께 3대 명약으로 알려져 있다. 'Dongchunghacho' referred to in this specification is a medicinal mushroom, winter dong (벌레), insect worm (蟲), summer summer (Summer), grass grass (草), in the insect body in winter, absorbs nutrients and absorbs insects It is called Dongchunghacho because it makes mushrooms like grass when the environment is right in the summer, and it has long been known as a great medicine with ginseng and antler.

동충하초에는 다당류, 코디세핀(cordycepin), 아데노신(adenosine), 로바스타틴(lovastatin), 에르고스테롤(ergosterol), 각종 불포화지방산 등의 다양한 저분자 물질들이 포함되어 있어 동충하초의 생리활성에 기여하는 것으로 알려져 있다. 그 중, 코디세핀, 아데노신 등의 핵산유도체 물질들은 고농도로 함유되어 있는데, 이들은 동충하초의 주요 지표물질로도 사용된다. 특히, 코디세핀은 항암, 항산화 및 항염증 등의 생리활성을 나타내는 유효성분으로 알려져 있으며, 한국에서는 동충하초의 주요 약리성분으로 보고된 바 있다.Cordyceps is known to contribute to the physiological activity of cordyceps because it contains various low molecular substances such as polysaccharides, cordycepin, adenosine, lovastatin, ergosterol, and various unsaturated fatty acids. Among them, nucleic acid derivatives such as codycepin and adenosine are contained in high concentrations, and they are also used as main indicators of Cordyceps sinensis. In particular, codycepin is known as an active ingredient exhibiting physiological activities such as anti-cancer, antioxidant and anti-inflammatory, and has been reported as a major pharmacological component of Cordyceps sinensis in Korea.

동충하초를 형성하는 곰팡이는 그 종류에 따라 숙주특이성을 갖는다. 예를 들어, 코디셉스 시커더(Cordyceps cicadae)는 매미를 숙주로 하고, 오피오코디셉스 시넨시스(Ophiocordyceps sinensis)나 페실로마이세스 헤피알리(Paecilomyces hepialid), 레카니실리움(Lecanicillium) 등은 박쥐나방 유충을 숙주로 한다. 반면, 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)는 숙주특이성이 넓어서 다양한 곤충을 숙주로 삼을 수 있다.The fungus forming cordyceps has host specificity depending on its type. For example, Cordyceps cicadae hosts cicada and Ophiocordyceps sinensis or Paecilomyces hepialid ), Lecanicillium , etc., host bat moth larvae. On the other hand, Cordyceps militaris ) has a wide range of host specificities and can host various insects.

본 명세서에서 언급하는 ‘곤충 추출물’은 흰점박이 꽃무지 유충이나 벼메뚜기와 같은 곤충의 추출물일 수 있으나, 다만, 곤충의 종류를 이에 한정하는 것은 아니다.The term “insect extract” referred to in the present specification may be an extract of an insect such as a white spotted flower larvae or a rice locust, but the type of insect is not limited thereto.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충 또는 벼메뚜기 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100~120℃ 온도에서 6~24시간 열수추출한 후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 곤충 추출물을 제조할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the insect extract is added to 1 g of distilled water to 100 g of white spotted flower larvae or rice locusts, extracted with hot water at a temperature of 100 to 120° C. for 6 to 24 hours, filtered to remove impurities, and Insect extracts can be prepared by centrifugation at a rate to recover the supernatant.

본 발명에서는 살아있는 곤충을 기주하여 동충하초균에 포자현탁액을 직접 주사 접종하여 동충하초를 인공적으로 재배하는 기술에 있어서, 포자현탁액의 성분으로 상기와 같은 곤충 추출물을 함유하는 경우 동충하초의 코디세핀 함량을 두드러지게 증대시킬 수 있음을 확인하였다.In the present invention, in the technique of artificially cultivating Cordyceps sinensis by directly inoculating spore suspension into Cordyceps sinensis based on living insects, when the insect extract as described above is included as a component of Spore suspension, the codysepin content of Cordyceps remarkably It was confirmed that it can be increased.

이에, 본 발명은 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a spore suspension containing the spore and insect extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 동충하초균은 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)일 수 있으며, 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL으로 포함될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the Cordyceps sinensis may be Cordyceps militaris , and spores may be included in the spore suspension at 10 6 to 10 7 CFU/mL.

또한, 본 발명은 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method of manufacturing cordyceps sinensis beetle enhanced codysepin content.

장수풍뎅이(Allomyrina dichotoma)는 분류학상 곤충강 (Insecta) 딱정벌레목(Coleoptera) 장수풍뎅이과 (Dynastidae)에 속하며 1년에 한 번 생활사를 완결하는 1화생 곤충이다.Longevity scarab ( Allomyrina dichotoma ) belongs to the insect family (Insecta) Coleoptera (Dynastidae) in taxonomy and is a one-pest insect that completes its life cycle once a year.

본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 하여 상기에서 언급한 본 발명의 포자현탁액을 직접 주사 접종하여 배양함으로써 코디세핀 함량이 증대된 장수풍뎅이 동충하초 제조할 수 있다.In the present invention, the longevity scarab beetle can be prepared by inoculating and incubating the spore suspension of the present invention mentioned above with the live longevity scarab pupa as the host.

본 발명의 상기 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 (a) 살아있는 장수풍뎅이에 포자현탁액을 주사 접종하는 단계; 및 (b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함할 수 있다.The method of manufacturing the longevity scarab cordyceps of the present invention comprises: (a) inoculating a live longevity scarab with a spore suspension; And (b) incubating the inoculated longevity scarab for 25 to 45 days under conditions of 60 to 70% humidity and 26 to 30°C.

본 발명의 상기 (a) 단계는 살아있는 장수풍뎅이에 포자현탁액을 주사 접종하는 단계로서, 자세하게는 살아있는 장수풍뎅이에 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 직접적으로 주사 접종하는 단계이다. The step (a) of the present invention is a step of injecting and inoculating a spore suspension into live longevity scarab, and in detail, directly inoculating a spore suspension containing spore and insect extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient into live longevity scarab. to be.

본 발명의 상기 (a) 단계는 첫째, 동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액을 사용한다는 점에 있어서 종래기술과 차별화되며, 둘째, 살아있는 곤충(장수풍뎅이)에 동충하초균을 접종하여 배양함으로써 자연상태의 동충하초와 동일하게 제조된다는 점에 있어서 종래기술과 차별화될 뿐 아니라, 셋째, 장수풍뎅이의 유충이 아닌 번데기를 기주로 사용한다는 점에서 종래기술과 차별화된다.The step (a) of the present invention is first, it is different from the prior art in that it uses a spore suspension containing spores and insect extracts of Cordyceps sinensis as an active ingredient, and secondly, Cordyceps sinensis is used for live insects (longevity scarab). By inoculating and cultivating, it is not only different from the prior art in that it is manufactured in the same way as the natural cordyceps, but third, it is different from the prior art in that it uses pupae, not larvae of the beetle, as the host.

참고로, 장수풍뎅이 유충을 기주로 하여 포자현탁액을 주사하는 경우, 내부 수분이 많이 함유되어 있어, 접종 후 유충 내부에서 동충하초균이 생장하기에 적합하지 않았다. 또한, 종령 유충의 경우 크기는 크지만 활동력과 면역력이 매우 높은 상태여서 접종액을 다시 내뱉거나, 접종하여도 접종이 이루어지지 않았으며, 접종액을 늘리면 치사량으로 바로 죽는 것을 확인하였다. 이에, 본 발명자들은 장수풍뎅이 유충에 주사접종을 시도하였지만, 균사가 제대로 배양되지 못하였고, 오염률이 매우 높아서 성공하지 못하였다. 반면에, 장수풍뎅이 번데기는 내부가 고형화되는 시점이기 때문에 동충하초 균사가 자라나기에 적합하였다.For reference, when the spore suspension is injected with the longevity scarab larva as the host, it contains a lot of internal moisture, and thus, it was not suitable for the growth of Cordyceps sinensis inside the larva after inoculation. In addition, it was confirmed that the seed larvae are large in size, but have very high activity and immunity, so that the inoculum was not re-exposed or inoculated even after inoculation. Thus, the present inventors tried to inoculate longevity scarab larvae, but the mycelium was not properly cultured, and the contamination rate was very high, so it was unsuccessful. On the other hand, the longevity scarab was suitable for growing Cordyceps mycelium because it was the time when the inside solidified.

또한, 본 발명자들은 포자현탁액을 주사하는 살아있는 기주 곤충으로서 장수풍뎅이 유충, 흰점박이 꽃무지 유충, 갈색거저리 유충, 쌍별 귀뚜라미, 누에 번데기를 각각 실험하였으며, 그 결과 누에 번데기를 제외한 모든 실험체에서 자실체 발이가 일어나지 못한 것을 확인하였다(도 1a 내지 1d 참조).In addition, the present inventors experimented with long-lived scarab larvae, white spotted flower larvae, brown larva larvae, paired crickets, and silkworm pupae as living host insects that inject spore suspensions, and as a result, fruit body shedding was observed in all specimens except silkworm pupae. It was confirmed that it did not occur (see FIGS. 1A to 1D ).

따라서 살아있는 곤충에 포자현탁액을 주사하여 동충하초균을 접종 배양함에 있어서 장수풍뎅이 유충, 흰점박이 꽃무지 유충, 갈색거저리 유충, 쌍별 귀뚜라미는 바람직하지 못하며, 장수풍뎅이 번데기 및 누에 번데기가 가능함을 확인하였다. 다만, 누에 번데기는 크기가 본래부터 작아, 장수풍뎅이 번데기와 비교하여 자실체도 작고 코디세핀 함량이 적기 때문에(장수풍뎅이 번데기의 경우 누에 번데기 대비 약 3배 이상 고농도의 코디세핀 함량을 보임), 본 발명에서는 동충하초균의 배양에 적합한 살아있는 기주 곤충으로서 장수풍뎅이 번데기를 이용하였다.Therefore, it was confirmed that longevity scarab larvae, white spotted flower larvae larvae, brown larvae larvae, and paired crickets are undesirable in inoculating and cultivating Cordyceps sinensis by injecting spore suspension into living insects, and that longevity scarab pupae and silkworm pupae are possible. However, since the silkworm pupae is inherently small in size, the fruiting body is small compared to the longevity scarab pupae and has a small codysepine content (in the case of the longevity pupae, the codysepine content of about 3 times higher than that of the silkworm pupae is shown), the present invention Essence used longevity scarab pupa as a live host insect suitable for the culture of Cordyceps sinensis.

본 발명의 상기 (b) 단계는 동충하초균이 주사 접종된 장수풍뎅이를 균사 배양하는 단계로서, 자세하게는 상기 (a) 단계를 통해 수득한 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계이다.The step (b) of the present invention is a step of mycelial cultivation of the longevity scarab inoculated with Cordyceps sinensis, and in detail, the inoculated longevity scarab obtained through the step (a) is 60-70% humidity and 26-30 It is a step of incubating mycelium for 25 to 45 days at a temperature condition of ℃.

본 발명의 장수풍뎅이 동충하초 제조방법은 상기 (b) 단계 이후 추가적으로 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 (c) 단계는 균사 배양된 장수풍뎅이를 자실체 배양하는 단계이다.The method for preparing longevity scarab beetle of the present invention further comprises (c) incubating mycelial cultured longevity scarab for 15 to 45 days under conditions of 85 to 95% humidity and 20 to 30° C. It can contain. Step (c) of the present invention is a step of culturing the mycelium cultured longevity beetle fruiting body.

본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 하여 동충하초균을 직접 주사 접종하여 고함량의 코디세핀을 함유하는 장수풍뎅이 동충하초를 제조하기 위하여 균주 배양에 있어서 최적의 배양조건 및 자실체 배양에 있어서 최적의 배양조건을 확립하였으며, 이러한 배양조건은 본 발명에서 최초로 규명하였다.In the present invention, the best culture conditions for strain culture and optimum culture conditions for fruiting the fruiting body to produce longevity scarab beetle containing a high content of codysepin by directly inoculating the Cordyceps sinensis with live longevity scarab pupae as the host Was established, and these culture conditions were first identified in the present invention.

따라서 본 발명은 종래기술 대비 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초의 제조를 위하여 균주 및 자실체 배양에 있어서 각각의 최적조건을 규명하였다는 점에서 차별화된다. Therefore, the present invention is differentiated in that the optimal conditions for each of the strains and fruiting bodies have been identified for the production of longevity scarab beetle, which has a higher codycepin content than the prior art.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초를 제공한다.In addition, the present invention provides a cordyceps longevity beetle enhanced codycepin content produced by the above method.

본 발명의 상기 방법으로 제조된 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g 양으로 포함할 수 있다. Longevity scarab cordyceps prepared by the above method of the present invention may include codicepin in an amount of 10 to 30 mg/g.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are intended to illustrate the present invention more specifically, but the scope of the present invention is not limited to these examples.

<< 실시예Example 1> 1>

<1-1> <1-1> 기주의Host 준비 Preparations

본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기를 기주로 사용하였다.In the present invention, live longevity scarab was used as a host.

자세하게는, 장수풍뎅이 유충이 번데기가 된 후로 2~3일 지난 장수풍뎅이 번데기(날개 등 껍질이 만들어지지 않은 상태, 우화시작 전)를 기주로 사용하였다. 장수풍뎅이 유충 및 번데기는 “농업회사법인(주)오상킨섹트”와 “농업회사법인(주)동의바이오”에서 구입하였다.In detail, longevity scarab pupae (without skins such as wings, before the fable begins) were used as the host. Longevity scarab larvae and pupae were purchased from “Osangkin Sector Co., Ltd.” and “Dongui Bio Co., Ltd.”.

<1-2> 동충하초균 준비<1-2> Preparation of Cordyceps sinensis

본 발명에서 동충하초균은 자연에서 채집하여 분리하였고, 형태적 및 분자생물학적 방법을 통하여 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)로 동정되었다. 분자생물학적 동정은 ㈜마크로젠에 의뢰하여 18S rRNA region을 sequence 분석하였으며, 분리 동정된 균은 “세종006”이라고 자체 균주번호를 부여하여 실험을 진행하였다.In the present invention, Cordyceps was collected from nature and separated, and Cordyceps was obtained through morphological and molecular biological methods. militaris ). Molecular biological identification was commissioned by Macrogen Co., Ltd. and sequence analysis of the 18S rRNA region was performed, and the isolates identified as “Sejong 006” were assigned their own strain numbers to conduct experiments.

<< 실시예Example 2> 2>

포자현탁액 준비Preparation of spore suspension

<2-1> <2-1> 멸균수를Sterilized water 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of used spore suspension

번데기 동충하초(Cordyceps militaris) 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco) 고체배지에 계대하여 25℃ 항온배양기(incubator)에서 21일간 배양하여 사용하였다. 멸균수 3ml를 배양된 플레이트에 분주하고 멸균된 스프레더(spreader)를 이용하여 긁어모았다. 이렇게 긁어낸 포자액을 10㎛ 크기의 필터를 이용하여 균사체는 걸러내고 포자만 수확하였다. 수확한 포자는 혈구계수기를 이용하여 포자수를 산출하였고, 접종에 사용된 포자현탁액은 107CFU/㎖의 농도로 멸균수를 희석하여 사용하였다.Pupa Cordyceps militaris ) strain was passaged on a PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) solid medium and cultured for 21 days in a 25°C incubator. 3 ml of sterile water was dispensed into the cultured plate and scraped using a sterilized spreader. The scraped spore solution was filtered using a 10 μm-sized filter to filter out the mycelium and harvest only the spores. The harvested spores were counted using a hemocytometer, and the spore suspension used for inoculation was used by diluting sterile water to a concentration of 10 7 CFU/mL.

<2-2> <2-2> 미네랄 워터를Mineral water 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of used spore suspension

번데기 동충하초(Cordyceps militaris) 균주를 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco) 고체배지에 계대하여 25℃ 항온배양기(incubator)에서 21일간 배양하여 사용하였다. 멸균된 미네랄 워터 3ml를 배양된 플레이트에 분주하고 멸균된 스프레더(spreader)를 이용하여 긁어모았다. 이렇게 긁어낸 포자액을 10㎛ 크기의 필터를 이용하여 균사체는 걸러내고 포자만 수확하였다. 수확한 포자는 혈구계수기를 이용하여 포자수를 산출하였고, 접종에 사용된 포자현탁액은 107CFU/㎖의 농도로 멸균된 미네랄 워터를 희석하여 사용하였다.Pupa Cordyceps militaris ) strain was passaged on a PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) solid medium and cultured for 21 days in a 25°C incubator. 3 ml of sterilized mineral water was dispensed into the cultured plate and scraped using a sterilized spreader. The scraped spore solution was filtered using a 10 μm-sized filter to filter out the mycelium and harvest only the spores. The harvested spores were counted using a hemocytometer, and the spore suspension used for inoculation was used by diluting sterilized mineral water to a concentration of 10 7 CFU/mL.

<2-3> <2-3> 흰점박이White spotted 꽃무지Flower 유충 larva 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of used spore suspension

먼저, 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 농업회사법인 ㈜오상켄섹트에서 수득한 흰점박이 꽃무지 유충을 3일간 절식한 후 깨끗이 세척하였다. 세척이 완료된 흰점박이 꽃무지 유충 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100℃ 온도에서 12시간 열수추출하였다. 이후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 제조하였다.First, a white spotted flower larva larvae hot water extract was prepared. In detail, the white spotted flower larvae obtained from Osangkensec Co., Ltd. were fasted for 3 days and then washed cleanly. 1 L of distilled water was added to 100 g of white spotted flower larvae, which had been washed, and hot water was extracted at 100° C. for 12 hours. Thereafter, impurities were removed by filtration, and centrifugation was performed at a rate of 1000 rpm to recover the supernatant, thereby producing a white-spotted flower larvae hot water extract.

이후, 상기 제조된 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Subsequently, a spore suspension was prepared using the white spotted flower larva larvae hot water extract. The spore suspension was prepared in the same process as in Example <2-2>, except that instead of'mineral water','white spotted flower radish larvae hot water extract' was used.

<2-4> 벼메뚜기 <2-4> Rice Grasshopper 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of used spore suspension

먼저, 벼메뚜기 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 농업회사법인 ㈜동의바이오에서 구입한 벼메뚜기 건조물 100g에 증류수 1L를 첨가하여 100℃ 온도에서 12시간 열수추출하였다. 이후, 여과하여 불순물을 제거하고, 1000rpm의 속도로 원심분리하여 상등액을 회수함으로써 벼메뚜기 열수추출물을 제조하였다. First, a rice locust hot water extract was prepared. In detail, 1 L of distilled water was added to 100 g of dried rice locust purchased from Dongui Bio Co., Ltd., to extract hot water at 100° C. for 12 hours. Thereafter, impurities were removed by filtration, and centrifugation was performed at a rate of 1000 rpm to recover the supernatant, thereby preparing a rice locust hot water extract.

이후, 상기 제조된 벼메뚜기 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘벼메뚜기 열수추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Thereafter, a spore suspension was prepared using the prepared rice locust hot water extract. The spore suspension was prepared in the same manner as in Example <2-2>, except that instead of'mineral water','rice locust hot water extract' was used.

<2-5> 솔잎 <2-5> pine needles 열수추출물을Hot water extract 이용한 포자현탁액 제조 Preparation of used spore suspension

먼저, 솔잎 열수추출물을 준비하였다. 자세하게는, 솔잎을 채취하여 유수에 씻고 풍건한 후 분쇄기로 잘게 갈아 솔잎분말을 준비하였다. 솔잎분말 20g에 대하여 증류수 1L를 첨가한 후 12시간 열수추출하고 추출액을 여과하여 솔잎 추출물을 제조하였다.First, a pine needle hot water extract was prepared. In detail, pine needles were collected, washed in running water, air-dried, and finely ground to prepare a pine needle powder. After adding 1 L of distilled water to 20 g of pine needle powder, hot water was extracted for 12 hours, and the extract was filtered to prepare a pine needle extract.

이후, 상기 제조된 솔잎 열수추출물을 이용하여 포자현탁액을 제조하였다. 포자현탁액 제조는 상기 실시예<2-2>와 비교하여 ‘미네랄 워터’ 대신 ‘솔잎 추출물’을 이용한 것을 제외하고는 동일한 과정으로 제조되었다.Thereafter, a spore suspension was prepared using the prepared pine needle hot water extract. The spore suspension was prepared in the same manner as in Example <2-2> except that'pine needle extract' was used instead of'mineral water'.

<< 실시예Example 3> 3>

장수풍뎅이 번데기 동충하초 배양조건별 코디세핀 함량 변화Changes in Codysepin Content by Culture Conditions of Longevity Scarab Pupa Cordyceps

본 발명에서는 기주에 포자현탁액 종류별 주사 접종 후 균사배양 및 자실체 배양의 최적 조건을 확립하기 위하여, 온도조건 및 배양일수에 따른 코디세핀 함량 변화를 살펴보았다.In the present invention, in order to establish optimum conditions for mycelial culture and fruiting body culture after injection inoculation by spore suspension type in a host, a change in the codycepin content according to temperature conditions and the number of days of culture was examined.

간략하게는, 살아있는 장수풍뎅이 번데기(등 부위)에 상기 실시예 <2-1>에서 제조한 포자현탁액을 200㎕로 주사하였다. 이때, 접종농도는 107CFU/㎖이었으며, 각 실험군별 60마리씩 접종하였다.Briefly, the spore suspension prepared in Example <2-1> above was injected into 200 μl of a live beetle pupae (back part). At this time, the inoculation concentration was 10 7 CFU/mL, and 60 animals were inoculated for each experimental group.

<3-1> 균사배양 조건<3-1> Mycelial culture conditions

기주에 포자현탁액을 주사한 후 균사배양을 진행하였다. 균사배양은 암조건, 습도 60~70%로 통일하였으며, 온도 조건은 20℃, 25℃, 30℃, 35℃에서 각각 균사배양되었을 때 배양일수별 코디세핀 함량을 측정하였다. After the spore suspension was injected into the host, the mycelial culture was performed. The mycelial culture was unified with dark conditions and humidity of 60 to 70%, and the temperature condition was measured for codycepin content by culture day when cultured at 20°C, 25°C, 30°C, and 35°C, respectively.

코디세핀 함량을 측정하기 위하여, 시료는 수분 함량이 6~8%가 될 때까지 50~65℃ 오븐으로 건조시켰다. 건조된 자실체는 분쇄기(Retsch, Haam, Germany)로 0.5~1mm 크기로 분쇄하였다. 건조 분말 5g을 메탄올 250ml로 22시간 추출하였고, 추출액을 1500rpm 5분간 원심분리하여 0.45㎛ 필터로 여과하였다. 이렇게 수득된 추출물을 컬럼 흡착크로마토그래피(흡착수지 Diaion HP20)를 이용하여 코디세핀을 분리하였고, 함량은 HPLC(Waters 600 Q-펌프, 996 광 다이오드 어레이 검출기 및 Water Empower 소프트웨어)를 이용하여 측정하였다.In order to measure the codyspin content, the sample was dried in an oven at 50-65° C. until the moisture content reached 6-8%. The dried fruiting bodies were pulverized to a size of 0.5 to 1 mm with a grinder (Retsch, Haam, Germany). 5 g of dry powder was extracted with 250 ml of methanol for 22 hours, and the extract was centrifuged for 5 minutes at 1500 rpm and filtered through a 0.45 μm filter. The thus obtained extract was separated by using column adsorption chromatography (adsorption resin Diaion HP20), and codycepin was separated, and the content was measured using HPLC (Waters 600 Q-pump, 996 photodiode array detector and Water Empower software).

그 결과 하기 표 1 및 도 3a 내지 3c에서 나타낸 바와 같이, 균사배양단계에서 코디세핀 함량은 30℃의 온도 조건에서 두드러지게 증대되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 45일차에 가장 높은 코디세핀 함량을 보여주었다. 한편, 35℃의 온도 조건에서 배양하는 경우 균사 배양이 이루어지지 않아 코디세핀 함량을 측정할 수 없었다.As a result, as shown in Table 1 and FIGS. 3A to 3C, it was confirmed that the codyspin content in the hyphae culture step was significantly increased at a temperature condition of 30° C., and particularly showed the highest codysepin content on the 45th day. . On the other hand, when cultured at a temperature of 35°C, the mycelial culture was not performed, and thus the codicepine content could not be measured.

균사배양 온도 및 배양일수별 코디세핀 함량 (μg Cor/g)Mycelial culture temperature and codyspin content by culture days (μg Cor/g) 20℃20℃ 25℃25℃ 30℃30℃ 5일차Day 5 385385 5일차Day 5 13031303 5일차Day 5 30363036 10일차Day 10 526526 10일차Day 10 18831883 10일차Day 10 24152415 15일차Day 15 10621062 15일차Day 15 25322532 15일차Day 15 50125012 20일차Day 20 12851285 20일차Day 20 24242424 20일차Day 20 50355035 25일차Day 25 635635 25일차Day 25 18341834 25일차Day 25 87658765 30일차Day 30 527527 30일차Day 30 16921692 30일차Day 30 73847384 35일차Day 35 435435 35일차Day 35 19021902 35일차Day 35 79137913 40일차Day 40 735735 40일차Day 40 26402640 40일차Day 40 73497349 45일차Day 45 14801480 45일차Day 45 30353035 45일차Day 45 1005310053 50일차Day 50 11061106 50일차Day 50 27502750 50일차Day 50 80658065

<3-2> 자실체 생육조건<3-2> Fruiting Conditions

상기 실시예 <3-1>을 통해 포자현탁액 접종 후 균사배양 45일차에 가장 높은 코디세핀 함량을 확인하였는바, 본 실험에서는 균사배양 45일차부터 자실체 유도를 위하여 생육실로 이동하였다.After the spore suspension was inoculated through Example <3-1>, the highest codycepin content was confirmed on day 45 of mycelial culture, and in this experiment, it was moved to the growth room for fruiting induction from day 45 of mycelial culture.

자실체 생육조건은 광조건, 습도 85~90%이상으로 통일하였으며, 온도 조건은 20℃, 25℃, 30℃에서 각각 배양되었을 때 배양일수별 코디세핀 함량을 측정하였다. 코디세핀 함량은 상기 <실시예 3-1>과 동일한 방법으로 측정되었다.Fruiting conditions were unified with light conditions and humidity of 85 to 90% or higher, and temperature conditions were measured for codycepin content by culture day when cultured at 20°C, 25°C, and 30°C, respectively. Codycepin content was measured in the same manner as in <Example 3-1>.

그 결과 하기 표 2 및 도 4a 내지 4c에서 나타낸 바와 같이, 자실체배양단계에서 코디세핀 함량은 25℃의 온도 조건에서 가장 높게 증대되는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 15일차부터 45일차까지 높은 수준의 코디세핀 함량을 보여주었다.As a result, as shown in Table 2 and FIGS. 4A to 4C, it was confirmed that the codycepin content in the fruiting body culture step was most increased at a temperature of 25° C., and particularly high codycepin from day 15 to day 45 The content was shown.

자실체 생육 온도 및 배양일수별 코디세핀 함량 (μg Cor/g)Fruiting body growth temperature and codycepin content by culture days (μg Cor/g) 20℃20℃ 25℃25℃ 30℃30 0일차Day 0 1043310433 0일차Day 0 1043310433 0일차Day 0 1043310433 5일차Day 5 1087710877 5일차Day 5 1255412554 5일차Day 5 1054610546 10일차Day 10 80668066 10일차Day 10 1200712007 10일차Day 10 1157211572 15일차Day 15 73057305 15일차Day 15 1703117031 15일차Day 15 1445314453 20일차Day 20 99849984 20일차Day 20 1742117421 20일차Day 20 1384413844 25일차Day 25 1105611056 25일차Day 25 1724017240 25일차Day 25 1458314583 30일차Day 30 1256812568 30일차Day 30 1650416504 30일차Day 30 1538415384 35일차Day 35 1086110861 35일차Day 35 1808418084 35일차Day 35 1608416084 40일차Day 40 1086110861 40일차Day 40 1814818148 40일차Day 40 1700817008 45일차Day 45 1186111861 45일차Day 45 1888318883 45일차Day 45 1702117021 50일차Day 50 85108510 50일차Day 50 1220512205 50일차Day 50 1352013520

<< 실시예Example 3> 3>

기주에In the host 포자현탁액 주사 접종 및 포자현탁액 종류에 따른 코디세핀 함량 Inoculation of spore suspension injection and codycepin content according to spore suspension type

본 발명에서는 살아있는 장수풍뎅이 번데기에 상기 <실시예 2>에서 제조한 포자현탁액(미네랄 워터, 흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물, 벼메뚜기 열수추출물, 솔잎 열수추출물) 각각을 200㎕로 주사하였다. 이때, 접종농도는 107CFU/㎖이었으며, 각 실험군별 60마리씩 접종하였다.In the present invention, each of the spore suspensions (mineral water, white spotted flower larvae hot water extract, rice locust hot water extract, pine needle hot water extract) prepared in <Example 2> was injected into 200 μl in a live longevity scarab pupae. At this time, the inoculation concentration was 10 7 CFU/mL, and 60 animals were inoculated for each experimental group.

기주에 포자현탁액 종류별 주사 접종 후 암조건, 습도 60~70%에서 30℃의 조건으로 45일간 균사배양하였으며, 이후 광조건, 습도 85~90%이상에서 25℃의 조건으로 45일간 자실체를 배양하였다. 상기 과정으로 제조된 자실체의 코디세핀 함량을 측정하였다.After inoculation by spore suspension type by host, the cells were incubated for 45 days under conditions of dark conditions, humidity of 60-70% and 30℃, and then fruiting bodies were cultured for 45 days under conditions of light and humidity of 85-90% and 25℃. The codycepin content of the fruiting body produced by the above process was measured.

그 결과 하기 표 3 및 도 5에서 나타낸 바와 같이, 다른 실험군 대비 처리군 2(흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물)에서 것이 두드러지게 우수한 코디세핀 함량을 보여주었다.As a result, as shown in Table 3 and FIG. 5, the treatment group 2 (white spotted flower larvae larvae hot water extract) showed significantly better codicepine content compared to other experimental groups.

기주에 주사한 포자현탁액 종류별 생육된 동충하초의 코디세핀 함량Codycepin content of cordyceps grown by type of spore suspension injected into host 포자현탁액 종류Spore suspension type 코디세핀 함량 (μg Cor/g)Codysepin content (μg Cor/g) 실험군 1
(미네랄 워터)
Experiment group 1
(Mineral water)
1858118581
실험군 2
(흰점박이 꽃무지 유충 열수추출물)
Experiment group 2
(White spotted flower larva larvae hot water extract)
2833828338
실험군 3
(벼메뚜기 열수추출물)
Experiment group 3
(Rice locust hot water extract)
2044520445
실험군 4
(솔잎 열수추출물)
Experiment group 4
(Pine needle hot water extract)
1731117311
대조군
(멸균수)
Control
(Sterile water)
1888318883

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, the present invention has been focused on the preferred embodiments. Those skilled in the art to which the present invention pertains will understand that the present invention may be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in terms of explanation, not limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the equivalent range should be interpreted as being included in the present invention.

Claims (8)

동충하초균의 포자 및 곤충 추출물을 유효성분으로 포함하는 포자현탁액.A spore suspension containing the spore and insect extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient. 제1항에 있어서,
상기 동충하초 균주는 코디셉스 밀리타리스(Cordyceps militaris)인 것을 특징으로 하는 포자현탁액.
According to claim 1,
The cordyceps strain is Cordyceps Spore suspension, characterized in that militaris ).
제1항에 있어서,
상기 곤충 추출물은 흰점박이 꽃무지 유충의 열수추출물 또는 벼메뚜기 열수추출물인 것을 특징으로 하는 포자현탁액.
According to claim 1,
The insect extract is a spore suspension, characterized in that the hot water extract or rice locust hot water extract of white spotted flower larvae.
제1항에 있어서,
상기 동충하초균의 포자는 포자현탁액에 106 내지 107 CFU/mL로 포함되는 것을 특징으로 하는 포자현탁액.
According to claim 1,
The spore suspension of the Cordyceps sinensis is characterized in that the spore suspension is contained in 10 6 to 10 7 CFU / mL.
(a) 살아있는 장수풍뎅이에 제1항의 포자현탁액을 주사 접종하는 단계; 및
(b) 상기 주사 접종된 장수풍뎅이를 60~70% 습도 및 26~30℃ 온도 조건에서 25~45일 동안 균사 배양하는 단계를 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법.
(a) inoculating a living beetle with the spore suspension of claim 1; And
(b) comprising the step of incubating the injection-inoculated longevity scarab for 25 to 45 days at 60 to 70% humidity and 26 to 30°C temperature conditions, a method for preparing cordyceps cordyceps with enhanced codysepine content.
제5항에 있어서,
상기 (b) 단계 이후 (c) 균사 배양된 장수풍뎅이를 85~95% 습도 및 20℃~30℃ 온도 조건에서 15~45일 동안 자실체 배양하는 단계를 더 포함하는, 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초 제조방법.
The method of claim 5,
After the step (b) (c) further comprising the step of culturing the mycelium cultured longevity beetle at 85-95% humidity and 20 ℃ ~ 30 ℃ temperature for 15 to 45 days fruiting body, longevity enhanced codyspin content How to make scarab cordyceps.
제6항의 제조방법으로 제조된 코디세핀 함량이 증진된 장수풍뎅이 동충하초.The longevity scarab cordyceps that has been enhanced by the codycepin content produced by the method of claim 6. 재7항에 있어서,
상기 장수풍뎅이 동충하초는 코디세핀을 10 ~ 30 mg/g의 양으로 포함하는 장수풍뎅이 동충하초.
The method of claim 7,
The longevity scarab cordyceps is longevity scarab cordyceps which contains codycepin in an amount of 10 to 30 mg/g.
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