KR102198128B1

KR102198128B1 - 바이러스 감염 및 추가 질환의 치료를 위한 아실아미노피리미딘 유도체

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Publication number: KR102198128B1
Application number: KR1020157007078A
Authority: KR
Inventors: 고완 데이비드 크레이그 맥; 세르게 마리아 알로이시우스 피터스; 베르너 엠브레히츠; 스테판 율리엔 라스트; 팀 휴고 마리아 욘커스; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송
Original assignee: 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니
Priority date: 2012-10-05
Filing date: 2013-10-03
Publication date: 2021-01-05
Also published as: US20150274676A1; WO2014053595A1; EA201590667A1; PH12015500713B1; KR20210002129A; DK2903967T3; CN104884434A; ES2701098T3; ES2701098T7; MX369803B; EP2903967B1; PH12015500713A1; EP2903967A1; SG11201502589YA; HK1210463A1; CN111606861A; AU2013326486B2; EP2903967B3; KR20150064729A; DK2903967T6

Abstract

본 발명은 화학식(I)의 아실아미노피리미딘 유도체, 그 제조방법, 그 약제학적 조성물 및 치료에서의 사용에 관한 것이다.

Description

바이러스 감염 및 추가 질환의 치료를 위한 아실아미노피리미딘 유도체{ACYLAMINOPYRIMIDINE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS AND FURTHER DISEASES}

본 발명은 아실아미노피리미딘 유도체, 그 제조방법, 그 약제학적 조성물 및 치료에서의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 아실아미노피리미딘 유도체의, 인터페론의 유도가 요망되는 바이러스 감염, 면역 질환 및 암의 치료에 있어서의 사용, 또는 백신 애쥬번트로서의 사용에 관한 것이다. 특정 바이러스 감염의 치료에서 인터페론 (IFN-type 1)의 정기적인 주사가 투여될 수 있으며, C형 바이러스 간염(HCV)의 경우에도 그러하다. 추가 정보는 Fried et. al. Peginterferon-alfa plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection, N Engl J Med 2002; 347: 975-82 참조. 경구 투여가능한 소분자 IFN 유도제는 면역원성의 감소 및 투여편의의 잠재적 이점을 제공한다. 따라서 신규한 IFN 유도제는 바이러스 감염 치료를 위한 잠재적으로 효과적인 신규 클래스 의약품이다. 항바이러스 효과를 갖는 소분자 IFN 유도제의 예는 De Clercq, E.; Descamps, J.; De Somer, P. Science 1978, 200, 563-565 참조.

그러나 현재 알려져 있는 화합물에 비하여 개선된 안전성 프로파일을 갖는 신규한 인터페론 유도제에 대한 강한 요구가 존재한다.

본 발명에 따라 화학식 (I)의 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형이 제공된다:

식에서,

R_1A는 수소, 치환 또는 비치환된 아실, 또는 아실옥시기로 이루어진 군에서 선택되고,

R_1B는 수소, 치환 또는 비치환된 아실, 또는 아실옥시기로 이루어진 군에서 선택되며,

단, R_1A 및 R_1B 모두가 수소는 아니며,

R₂는 C_1-6알킬, C_1-6알콕시, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬이며, 이들 각각은 선택적으로 할로겐, 하이드록실, 아미노, 디-(C_1-6)알킬아미노, C_1-6 알킬아미노, C_1-6 알킬, C_1-6알콕시, C_3-6 사이클로알킬, 카복실산, 카복실 에스테르, 카복실 아미드, 헤테로사이클, 바이사이클릭헤테로사이클, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 또는 니트릴에서 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환되고,

R₃은 C_1-8알킬 또는 아릴알킬이고, 이들 각각은 선택적으로 할로겐, 하이드록실, 아미노, C_1-6 알킬, 디-(C_1-6)알킬아미노, C_1-6 알킬아미노, C_1-6알콕시, C_3-6 사이클로알킬, 카복실산, 방향족 또는 지방족 카복실 에스테르, 카복실 아미드, 헤테로사이클, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 또는 니트릴에서 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된다.

제1 실시형태에서, 본 발명은 R_1A및/또는R_1B가 치환 또는 비치환된 아실이고 R₂가 C_1-6알킬, 바람직하게는 -CH₃ 이고, R₃이 알킬에스테르로 치환된 C_1-8알킬인 화학식 (I) 의 화합물을 제공한다.

제2 실시형태에서, 본 발명은 R_1A및/또는R_1B가 이소부티릴이고, R₂ 가 -CH₃이고, R₃이 헵탄-3-일이소부티레이트인 화학식 (I)의 화합물을 제공한다.

임의의 입체화학적 형태의 화학식 (I)의 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형은 의약품으로서, 특히 인터페론 유도제로서의 활성을 갖는다.

따라서, 추가적 양태에서 본 발명은 화학식 (I) 화합물 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형과 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

나아가 본 발명에 따른 화학식 (I) 화합물 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형, 또는 상기 화학식 (I) 화합물 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형을 포함하는 약제학적 조성물은 의약품으로서 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태는 화학식 (I) 화합물 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형, 또는 상기 화학식 (I) 화합물 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형을 포함하는 약제학적 조성물이 따라서 인터페론의 유도가 관련되는 장애의 치료에 사용될 수 있다는 것이다.

용어 "알킬"은 특정 수의 탄소원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 지칭한다.

용어 "할로겐" 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.

용어 "아실"은 -(C=O)R로 정의된 기를 지칭하며, 이때 R은 치환 또는 비치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴이다.

용어 "아실옥시"는 -(C=O)OR로 정의된 기를 지칭하며, 이때 R은 치환 또는 비치환된 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴이다.

용어 "알케닐"은 적어도 두 개의 탄소원자와 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합으로 이루어진 상기 정의된 알킬을 지칭한다.

용어 "알키닐"은 적어도 두 개의 탄소원자와 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합으로 이루어진 상기 정의된 알킬을 지칭한다.

용어 "사이클로알킬"은 특정 수의 탄소원자를 함유하는 카보사이클릭 고리를 지칭한다.

용어 "알콕시"는 (예를 들면 메톡시기 또는 에톡시기) 산소에 단일결합된 알킬(탄소 및 수소쇄) 기를 지칭한다.

용어 "아릴"은 선택적으로 N, O 및 S, 특히 N 및 O에서 선택되는 하나 또는 두 개의 헤테로원자를 포함하는 방향족 고리 구조를 의미한다. 상기 방향족 고리 구조는 5, 6 또는 7개의 고리 원자를 가질 수 있다. 특히, 상기 방향족 고리 구조는 5 또는 6개의 고리 원자를 가질 수 있다.

도 1은 화합물 1을 마우스에 15.5 mg/kg의 용량으로 단일 경구 투여한 후 측정한 간(A) 및 혈장(B) 내 인터페론 수준을 도시한 것이다.
도 2는 화합물 1을 마우스에 15.5 mg/kg의 용량으로 단일 경구 투여한 후 측정한 간(C)^* 및 혈액(D) 내 CXCL10 발현을 도시한 것이다.
* 4 시간 시점의 한 샘플은 높은 HPRT1 값으로 인해 제거되었다.

용어 "바이사이클릭 헤테로사이클"은 두 개의 융합된 방향족 고리로 구성된 용어 아릴에 대해 정의된 바와 같은 방향족 고리 구조를 의미한다. 각 고리는 선택적으로 N, O 및 S, 특히 N 및 O에서 선택되는 헤테로원자를 포함한다.

용어 "아릴알킬"은 선택적으로 알킬기로 치환된 용어 "아릴"에 대해 정의된 바와 같은 방향족 고리 구조를 의미한다.

용어 "헤테로아릴알킬"은 선택적으로 알킬기로 치환된 용어 "헤테로아릴"에 대해 정의된 바와 같은 방향족 고리 구조를 의미한다.

"헤테로사이클"은 포화 또는 부분 포화된 분자를 지칭하며, 에틸옥사이드, 테트라하이드로푸란, 디옥산 또는 다른 사이클릭 에테르를 포함한다. 질소를 함유하는 헤테로사이클은 예를 들면 아제티딘, 모르폴린, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘 등을 포함한다. 다른 헤테로사이클은 예를 들면, 티오모르폴린, 디옥소리닐 및 사이클릭 설폰을 포함한다.

"헤테로아릴기"는 성질상 방향족인 헤테로사이클릭기이다. 이들은 N, O 또는 S에서 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 또는 폴리사이클릭이다. 헤테로아릴기는 예를 들면, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 푸릴, 옥사졸릴, 피롤릴, 피리도닐, 피리딜, 피리다지닐, 피라지닐일 수 있다.

화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 이들의 산부가염 및 염기염을 포함한다. 적당한 산부가염은 비-독성염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적당한 염기염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

본 발명의 화합물은 또한 비용매화 및 용매화 형태로 존재할 수 있다. 용어 "용매화물"은 본 발명에서 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 용매 분자, 예를 들면, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하기 위해 사용된다.

용어 "다형"은 둘 이상의 형태 또는 결정 구조로 존재하는 본 발명의 화합물의 능력을 지칭한다.

본 발명의 화합물은 결정형 또는 무정형 산물로 투여될 수 있다. 이들은 예를 들면 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해 예컨대 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 이들은 단독으로 또는 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 조합하여 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합하여 투여될 수 있다. 일반적으로 이들은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 제제로서 투여될 것이다. 용어 "부형제"는 본 발명에서 본 발명의 화합물 이외의 임의의 성분을 기술하기 위해 사용된다. 부형제의 선택은 주로 특정 투여 모드, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과 및 제형의 성질과 같은 인자에 따라 달라진다.

본 발명의 화합물 또는 이들의 임의의 하위그룹은 투여 목적에 대한 다양한 약제학적 형태로 제제화될 수 있다. 적합한 조성물로서 전신 투여 약물에 통상적으로 채용되는 모든 조성물이 인용될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 유효량의 특정 화합물, 선택적으로 부가염 형태를 활성성분으로서 약제학적으로 허용가능한 담체와 친밀한 혼합물로 합하고, 이때 담체는 투여에 바람직한 제제 형태에 따라 다양한 형태를 가질 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 바람직하게 예를 들면, 경구, 직장 또는 경피 투여에 적합한 단일 제형으로 존재한다. 예를 들면, 경구 제형의 조성물을 제조하는데 임의의 통상적인 약제학적 매질이 채용될 수 있으며, 현탁액, 시럽, 엘릭실, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우에는 예를 들면, 물, 글리콜, 오일, 알콜 등; 분말, 필, 캡슐 및 정제의 경우에는 전분, 슈가, 카올린, 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체를 채용할 수 있다. 투여의 편의성 때문에, 정제 및 캡슐제는 가장 유용한 경구 복용 단위 형태를 대표하며, 이 경우 고체 약제학적 담체가 자명하게 채용된다. 또한 사용 직전 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제제도 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서 담체는 선택적으로 투과 증강제 및/또는 적당한 습윤제를 포함하며, 선택적으로 피부에 유의한 유해효과를 일으키지 않는 적합한 임의의 성질의 첨가제를 부차적 비율로 조합할 수 있다. 상기 첨가제는 피부 투여를 촉진하며/하거나 원하는 조성물을 제조하는데 도움이 될 수 있다. 이들 조성물은 다양한 방식, 예컨대 경피 패치, 스폿-온, 연고로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 흡입 또는 통기를 통해 이러한 방식으로 투여하기 위해 당업계에 사용되는 방법 및 제형으로 투여될 수 있다. 따라서, 일반적으로 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐에 투여될 수 있다.

투여 편의성 및 용량 균일성을 위해 전술한 약제학적 조성물을 단위 제형으로 제형화 하는 것이 특히 유리하다. 본 발명에서 단위 제형은 요구되는 약제학적 담체와 함께 바람직한 치료학적 효과를 산출하도록 계산된 예정된 양의 활성 성분을 포함하는 단위를 포함하는, 단위 용량으로서 적합한 물리적으로 구별되는 단위들을 지칭한다. 이러한 단위 제형의 예는 정제(분할선이 있는 정제 또는 코팅된 정제를 포함), 캡슐, 필, 분말 패킷, 웨이퍼, 좌제, 주사 가능한 용액 또는 현탁액 등 및 이들의 분리된 배수들이다.

감염 질환의 치료분야의 당업자는 후술하는 검사 결과로부터 유효량을 결정할 수 있다. 일반적으로 유효 일일량은 0.01 mg/체중 kg 내지 50　mg/체중 kg, 더 바람직하게 0.1 mg/체중 kg 내지 10 mg/체중 kg으로 사료된다. 요구되는 용량을 하루에 걸쳐 적합한 간격으로 둘, 셋, 넷 이상의 하위-용량으로 투여하는 것이 적합할 수 있다. 상기 하위-용량은 예컨대 단위 제형당 1 내지 1000 mg, 및 특히 5 내지 200　mg의 활성성분을 포함하는 단위 제형으로서 제형화될 수 있다.

정확한 용량과 투여빈도는 당업자에 알려져 있는 바와 같이, 사용되는 특정 화학식 (I)의 화합물, 치료될 특정 병태, 치료될 병태의 심각도, 특정 환자의 나이, 체중 및 일반적인 신체적 상태 및 각자가 복용하고 있는 다른 약물에 좌우된다. 나아가, 치료되는 대상의 반응 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 의존하여 유효량이 감소되거나 증가될 수 있음은 명백하다. 전술한 유효량 범위는 단지 가이드라인이며 본 발명의 범위나 사용을 임의의 범위로 제한하지 않는다.

실험 섹션.

화합물 1의 제조

자기 교반 막대를 구비한 50 mL 바이알에 2,4-디클로로-5-메톡시 피리미딘(2.0 g, 11.7 mmol), 및 아세토니트릴(20 mL), 디이소프로필 에틸아민(3.02 g, 23.4 mmol) 및 (S)-3-아미노헵탄올(4.59 g, 35.1 mmol)을 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15 시간 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 조산물을 디클로로메탄에서 디클로로메탄 내 10% 메탄올 구배를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그라피로 정제하였다. 최상 분획을 수집하고 용매를 감압하에 제거하여 백색 고체 B를 수득하였다.

자기 교반 막대를 구비한, 벽이 두꺼운 유리 바이알내에 B(1 g, 3.66 mmol), NH₃(10 mL, aq.), 암모늄 바이카보네이트(3.34 g, 42.3 mmol) 및 카퍼(I) 옥사이드(121 mg, 0.85 mmol)를 넣었다. 바이알을 밀봉하고 오일 배스에 넣고, 150℃까지 15 시간 가열하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하고(3 x 25 mL), 유기층을 모아 마그네슘 설페이트 상에서 건조하였다. 고체를 여과로 제거하고 여액의 용매를 감압하에 제거하였다. 조산물 C를 HPLC로 정제하였다.

C(463 mg, 1.82 mmol)를 THF(13 mL)에 녹이고 -78℃까지 냉각하였다. NaH (145 mg, 3.64 mmol, 광유내 60% 분산액)을 한번에 가하고 -78℃에서 30분간 교반하였다. 이소부티릴 클로라이드(389 μL, 3.64 mmol)를 -78℃에서 적가하고, 10분간 교반하였다. 냉각 배스를 제거하고 혼합물을 실온에 도달하도록 하였다. 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 혼합물을 물로 퀀칭하고 진공 농축하였다. 잔여물을 HPLC(RP Vydac Denali C18 10 μm, 200 g, 5 cm, 이동상 물 내 0.25% NH₄HCO₃용액, 아세토니트릴)로 정제하고, 원하는 분획을 수집하고, 용매를 감압하에 제거하여 순수한 산물을 수득하였다.

LC-MS m/z = 395 (M+H), 체류시간1.1 minutes, LC method A.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 0.83 (t, J=6.90 Hz, 3 H) 0.98 - 1.07 (m, 12 H) 1.16 - 1.35 (m, 4 H) 1.44 - 1.62 (m, 2 H) 1.84 (q, J=6.78 Hz, 2 H) 2.45 (spt, J=7.00 Hz, 1 H) 2.96 (br. s., 1 H) 3.80 (s, 3 H) 3.92 - 4.07 (m, 2 H) 4.18 - 4.31 (m, 1 H) 6.69 (d, J=9.03 Hz, 1 H) 7.60 (s, 1 H) 9.49 (s, 1 H).

A 제조를 위한 합성 반응도

A2의 제조

THF(1 L) 내 발레알데하이드(43 g, 500 mmol) 용액에 A1(200 g, 532 mmol)을 가하고 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔여물을 석유 에테르에 희석하고 여과하였다. 여액의 용매를 감압하에 제거하고, 잔여물을 석유에테르에서 석유에테르 내 3% 에틸 아세테이트 구배를 사용하는 실리카 크로마토그라피로 정제하여, 무색 오일로서 A2(90 g)를 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ ppm 6.81-6.77 (m, 1H), 5.68-5.64 (td, J=1.2Hz, 15.6 Hz, 1H), 2.11-2.09 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.38-1.26 (m, 4H), 0.85-0.81 (t, J=7.2Hz, 3H).

A4 화합물의 제조

n-부틸 리튬(290 mL, 725 mmol)을 THF(800 mL) 내 A3(165 g, 781 mmol) 교반 용액에 -78℃에서 가하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반한 후 THF(400 mL) 내 A2(90 g, 488.4 mmol)를 가하고 반응물을 2 시간 동안 -78℃에서 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl 용액으로 퀀칭하고 실온까지 데웠다. 산물을 에틸아세테이트와 물에 분배하였다. 유기상을 소금물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 잔여물을 컬럼 크로마토그라피로 정제하여(석유 에테르 내 5% 에틸 아세테이트로 용출), 무색 오일 A4(132 g)를 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ ppm 7.36-7.16 (m, 10H), 3.75-3.70 (m, 2H), 3.43-3.39 (d, J=15.2Hz, 1H), 3.33-3.15 (m, 1H), 1.86-1.80 (m, 2H), 1.47-1.37 (m, 2H), 1.32 (s, 9H), 1.26-1.17 (m, 7H), 0.83-0.79 (t, J=7.2Hz, 3H).

A5의 제조

A4(130 g, 328 mmol)를 THF(1.5 L)에 녹이고, LAH(20 g, 526 mmol)를 소량씩 0℃에서 가하였다. 생성 혼합물을 동일 온도에서 2시간 교반한 후 실온까지 데웠다. 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl 용액으로 퀀칭하였다. 산물을 에틸아세테이트와 물에 분배하였다. 유기상을 소금물로 세척하고, 건조 및 증발시켰다. 유기층을 합하여 소듐 설페이트 상에서 건조하고, 고체를 여과로 제거하고 농축하여 조산물 A5(100 g)를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ ppm 7.33-7.14 (m, 10H), 3.91-3.86 (m, 1H), 3.80-3.77 (d, J=13.6Hz, 1H), 3.63-3.60 (d, J=13.6Hz, 1H), 3.43-3.42 (m, 1 H), 3.15-3.10 (m, 1H), 2.70-2.63 (m, 2H), 1.65-1.28 (m, 10H), 0.89-0.81 (m, 3H).

A의 제조

메탄올(200 mL) 내 A5(38 g, 116.75 mmol) 용액 및 10% Pd/C를 50 PSI 수소하 50℃에서 24 시간 동안 수소화하였다. 반응 혼합물을 여과하고 용매를 증발시켜 A를 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ ppm 8.04 (s, 3H), 3.60-3.49 (m, 2H), 3.16-3.15 (m, 1H), 1.71-1.67 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 2H), 1.33-1.26 (m, 4H), 0.90-0.87 (t, J=6.8Hz, 3H).

분석 방법

하기 표의 화합물 1-8을 하기 LC-MS 방법에 따라 LC-MS로 특성화하였다.

역상 UPLC(초고성능액체크로마토그라피)를 브리지된 에틸실록산/실리카 하이브리드(BEH) C18 컬럼(1.7 μm, 2.1 x 50　mm; Waters Acquity) 상에서 0.8 ml/min의 유속으로 수행하였다. 두 개의 이동상(H₂O 내 10 mM 암모늄 아세테이트/아세토니트릴 95/5; 이동상 B: 아세토니트릴)을 사용하여 95% A 및 5% B에서 1.3분에 5% A 및 95% B로 구배 조건을 주고, 0.7분 동안 유지하였다. 주사 용적은 0.75 mL로 사용하였다. 콘 전압은 포지티브이온화모드를 위해 30 V로 네거티브이온화모드를 위해 30 V 로 하였다.

인 비보 IFN-α의 생산 및 CXCL10 mRNA의 상향조절

화합물들을 C57BL/6 마우스에 경구 투여한 후 이들의 인 비보 IFN-α 생산 및 CXCL10 mRNA 상향 조절 유도 잠재성을 평가하였다. 전신 순환 내 IFN-α 량은 뮤린 pan-IFN-α ELISA(PBL InterferonSource, ref. 42120)를 사용하여 일정 시간에 걸쳐 측정하였다. 이 ELISA는 모든 뮤린 IFN-α 서브타입을 인식한다. CXCL10은 인터페론-자극 유전자(ISG)로서 IFN-I가 IFNAR 수용체(인터페론알파 수용체)에 결합 시 발현이 높게 유도된다. CXCL10 mRNA 발현 수준을 RT-qPCR로 측정하였다.

각 화합물 및 시험 용량에 대해, 6-10 주령, 20-22 g 중량의 암컷 C57BL/6J 마우스를 3마리씩 사용하여 테스트하였다. 모든 동물에 피딩 튜브를 사용하여 화합물 1을 20% 수성 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린 비히클 내 1.55 mg/mL 용액으로써 15.5 mg/kg의 단일 경구 용량으로 투여하였다. 투여 0.5, 1, 2, 4 및 7 시간 후, 전신혈을 꼬리 정맥에서 채혈하여 K-EDTA 함유 튜브에 넣었다. 4 ℃에서 1500g의 속도로 10분간 원심 분리하여 혈장을 혈액세포로부터 분리하여 -80℃에서 보관 후 ELISA 분석하였다. 각 시점에서, 3 마리의 동물들의 중간값 및 표준편차를 산출하여 화합물의 역가를 산출하였다.

혈액을 꼬리 정맥에서 채혈하여 500 μl 의 PAXgene 용액을 함유하는 마이크로닉 튜브에 넣었다(PreAnalytix사 시판 PAXgene 혈액 RNA 튜브). 실온에서 밤새 인큐베이션한 후, 튜브를 -20℃에서 저장한 후, PAXgene 96 Blood RNA kit(PreAnalytix)로 총 RNA를 추출하였다. 정제된 RNA를 랜덤 6-mer 프라이머(High-Capacity cDNA Archive kit, Applied Biosystems)로 역전사하였다. CXCL10 mRNA 수준을 Taqman qPCR 기술(Taqman 유니버셜 PCR 마스터 믹서, UNG AmpErase 없음, Taqman Gene Expression assay Mm00445235_m1, Applied Biosystems사)로 7900HT Fast Real-time PCR 시스템(Applied Biosystems) 상에서 측정하였다. HPRT1(하이포크산틴 포스포리보실트랜스퍼라제 1) mRNA 수준을 내인성 대조군으로 사용하였다(Mm01545399_m1). △△Ct 방법(상대적 정량화를 위해)을 사용하여 대조군 비히클에 비교해 화합물들의 CXCL10 발현 조절을 평가하였다. 각 시점에서 3마리의 동물들의 중간값 및 표준편차를 산출하여 화합물의 역가를 산출하였다.

화합물 1을 단일 용량으로 경구 투여한 후 마우스내 간 및 혈액/혈장 내에서 내인성 인터페론의 유도 및 CXCL10의 상향조절이 관찰되었다.

Claims

화학식 (I)의 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:

식에서,
R_1A는 수소 또는 치환 또는 비치환된 아실 중에서 선택되고,
R_1B는 수소 또는 치환 또는 비치환된 아실 중에서 선택되고, 단, R_1A 및 R_1B 모두가 수소는 아니며,
R₂는 C_1-6알킬, 아릴C_1-6알킬 또는 헤테로아릴C_1-6알킬이고, 이들 각각은 C_1-6알콕시에 의해 임의로 치환되고,
R₃은 C_1-8알킬이고, 상기 C_1-8알킬은 하이드록실, C_1-6알킬, 카복실산 또는 지방족 카복실 에스테르에서 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환되고,
상기 아실은 -(C=O)R로 정의된 기를 지칭하며, 이때 R은 치환 또는 비치환된 C_1-6알킬이다.
제1항에 있어서, R_1A및/또는 R_1B가 치환 또는 비치환된 아실이고, R₂가 C_1-6알킬이고, R₃이 알킬에스테르로 치환된 C_1-8알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R_1A및/또는 R_1B가 이소부티릴이고, R₂가 -CH₃이고, R₃이 헵탄-3-일 이소부티레이트인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론 유도제로서의 활성을 갖는 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 바이러스 감염, 면역 질환 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 인터페론 유도가 관여되는 질환의 치료용 약학적 조성물.
삭제
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 그 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 포함하는, 바이러스 감염, 면역 질환 및 암으로 구성된 군으로부터 선택된 인터페론 유도가 관여되는 질환의 치료용 약제.