KR102177631B1 - 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물 - Google Patents

Abstract

백신 접종 후 발생하는 동물 스트레스를 완화하고 생산성 저하를 막을 수 있는 수의학적 조성물이 개시된다. 본 발명은 상심자, 아세트아미노펜 및 부타포스판을 유효성분으로 포함하는 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물을 제공한다.

Description

백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물{Veterinary composition for reducing vaccine stress}

본 발명은 수의학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물에 관한 것이다.

구제역(FMD: Foot-and-Mouth Disease)은 소, 돼지, 양과 같이 발굽이 둘로 갈라진 형태의 동물군인 우제류(artiodactyla)에 감염되는 바이러스성 전염병이다. 구제역 바이러스에 의하여 전파되는 FMD에 감염되면, 동물에 발열, 발과 입의 물집, 물집으로 인한 파행 증상이 나타나며, 입, 혀, 코, 발 및 유두에 수포성 병변이 발생한다.

FMDV(Foot-and-Mouth Disease Virus)는 숙주의 인두에서 급속하게 복제되어 48시간 내에 혈류로 진입함으로써 입과 발에 병변을 유발하며, 에어로졸, 직접 접촉, 오염된 축산물을 통하여 전파된다. 최근 연구에 따르면 감염된 한 마리의 돼지가 단시간 내에 3000 마리의 소에 해당하는 에어로졸 바이러스를 방출하여, 돼지가 이 질병의 주요한 인자로서 질병 전파에 중요한 역할을 하는 것으로 보고되고 있다(Moraes et al, 2002)

이 질환은 전염성이 매우 강하고 국제교역상 피해규모가 크기 때문에, 국제수역사무국(OIE)에서는 A급 질병(List A)으로 분류하여 관리하고 있다. 또한, 구제역이 발생하면 이를 억제하기 위하여 이동제한, 검역, 위생 방역, 살처분 등의 조치가 취해지며, 최초 발생 지역을 중심으로 불활성화 백신을 이용한 백신 프로그램이 가동된다. 국내의 경우 2010년 전국적으로 구제역이 발생하여 약 330만 마리의 돼지가 살처분 되어, 양돈 논가에 막대한 경제적인 손실과 함께 국내 양돈 산업에 막대한 피해를 초래한 바 있다.

구제역은 치사율이 매우 높지는 않지만(약 5 내지 55%), 가축의 식욕 부진, 발열, 발육 저하 등으로 인해 가축의 상품가치를 크게 저하시키는 결과를 가져온다. 또한, 일단 발생하면 살처분 등에 의하여 축산 농가에 막대한 경제적 손실을 야기하기 때문에 구제역 예방을 위한 백신접종을 시행하는 것이 필수적이나, 백신을 접종한 가축에 백신 부작용이 발생하거나 스트레스 반응이 나타나기도 한다.

조류인플루엔자(Avian Influenza)는 닭, 칠면조 및 야생 조류 등 여러 종류의 조류에 감염되며, 주로 닭과 칠면조의 가금류에 피해를 주는 급성 바이러스성 전염병이다. 조류인플루엔자는 전파가 빠르고 병원성이 다양한 질병으로 세계동물보건기구(OIE)에서는 병원성에 따라 고병원성과 저병원성 조류인플루엔자로 분류하고 있다.

조류인플루엔자의 원인체는 오소믹소바이러스과(Orthomyxoviridae)의 A형 인플루엔자 바이러스(Infuenza virustype A)로서, A형 인플루엔자의 혈청형은 두 가지 단백질인 헤마글루티닌(Hemagglutinin)과 뉴라미니다제(Neuraminidase)의 종류에 따라 구분되는 H 혈청형과 N 혈청형이 있다. 조류인플루엔자 바이러스의 혈청형은 각각의 H 혈청형과 N 혈청형으로 표시하며(예: H9N2형), H 혈청형이 16가지, N 혈청형이 9가지 종류가 있으므로, 산술적으로 존재 가능한 인플루엔자 바이러스의 혈청형은 144가지로 나타낼 수 있다. 1996년 첫 발생 이후 현재까지 국내에서 유행하고 있는 조류인플루엔자의 혈청형은 H9N2형에 속하는 저병원성 조류인플루엔자이다.

조류인플루엔자 바이러스 감염의 진단은 유전자 검사, 바이러스의 분리 및 혈청학적 검사가 있다. 유전자 검사는 감염된 닭의 분변, 기관, 맹장편도와 기타 실질장기의 시료로부터 유전자를 추출한 후 RT-PCR을 통해 바이러스 감염여부와 감염된 바이러스의 혈청형을 확인할 수 있다. 바이러스 분리는 감염된 시료를 SPF (Specific Pathogen Free) 종란에 접종하여 혈구응집능 바이러스를 확인 및 분리하여 H형 및 N형의 혈청형별 특이 항체를 이용하여 HI(혈구응집억제반응) 및 NI(뉴라미니다제 억제반응)를 통해 분리된 바이러스의 혈청형을 동정할 수 있다. 혈청학적 검사로는 혈액을 이용한 혈구응집억제반응(HI), 한천내침강반응(AGID) 및 효소결합면역흡수법(ELISA)을 통해 계군의 감염여부를 판단할 수 있으며 대량검사가 가능하여 모니터링 검사방법으로 사용하고 있다. 이러한 유전자 검사, 바이러스 분리 및 혈청학적 검사를 하기 위해서는 적절한 시약, 장비 및 전문적인 기술이 있는 실험실에서 이루어져야 하며, 진단시간은 빠르면 3시간에서 5일 정도의 시간이 소요된다.

구제역 및 조류인플루엔자 백신 부작용의 예로는, 백신 접종 후 발생하는 부종, 염증, 괴사 등의 국소적 부작용 증상과 전신적 반응의 형태로 발생하는 스트레스 증가, 면역 이상 반응, 발열, 식욕 감퇴, 기립 지연, 행동 둔화, 발적, 호흡 곤란, 신경이상 증상, 폐사 등을 들 수 있다. 이러한 부작용은, 불완전한 병원성의 제거에서 기인하는 백신 내에 잔존하는 병원성 때문에 면역능이 저하된 개체 등에서 나타나는 현상이거나, 백신에 첨가되는 오일 유래 면역보조제에 의해 발생하는 현상일 수 있으나, 명확하게 그 원인이 밝혀져 있지는 않다.

구제역 및 조류인플루엔자는 일단 전염이 시작되면 사회적, 경제적으로 막대한 피해를 발생시킬 뿐만 아니라, 가축매몰, 침출수 등에 따른 2차 피해 또한 상당하기 때문에, 적절한 시기에 백신 접종이 필수적이다. 그러나 위에서 언급한 백신의 부작용에 대한 우려, 그리고 백신 접종 후 부작용과 스트레스가 생산성 저하를 일으켜 출하지연을 발생시킨다는 우려 때문에, 일부에서는 백신 접종 자체를 기피하는 문제가 발생하고 있다.

따라서, 이렇듯 다양한 요인에 의해 가축이 스트레스를 느끼면서 발생하는 문제점들을 소거하여, 가축의 체중 및 생산성을 증가시키고, 폐사율을 감소시키기 위한 사료 첨가제에 대한 연구가 필요한 실정이고, 공개특허 제2017-0015084호는 백신 스트레스 완화용 수의학적 조성물을 개시하고 있다.

따라서, 본 발명은 상기 문제점을 해결하고자 안출된 것으로, 백신 접종 후 발생하는 동물 스트레스를 완화하고 생산성 저하를 막을 수 있는 수의학적 조성물 을 제공하고자 한다.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은, 상심자, 아세트아미노펜 및 부타포스판을 유효성분으로 함유하는 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 상심자는 분말형태인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 전체 조성물 대비 상기 상심자는 0.01~10중량%, 상기 아세트아미노펜은 10~60중량% 및 상기 부타포스판은 0.01~30중량%로 포함된 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 백신은 구제역 또는 조류인플루엔자의 백신인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005~2중량%인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 수의학적 조성물에 있어 상심자 및 특정 화합물을 포함함으로써 바이러스 백신 접종에 의한 동물 스트레스를 완화시키고, 생산성 저하를 방지할 수 있는 수의학적 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 실험예 1에 따른 실험군의 백신 투여 후 2주간의 직장온도를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 2는 실험예 1에 따른 실험군의 백신 투여 후 2주간의 임상지수를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 3은 실험예 1에 따른 실험군의 백신 투여 후 FMDV 항체가를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 4는 실험예 1에 따른 실험군의 백신 투여 후 코티솔의 농도를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 5는 실험예 2에 따른 실험군의 백신 투여 후 NDV 항체가를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 6은 실험예 2에 따른 실험군의 백신 투여 후 IBV 항체가를 측정한 결과를 나타낸 그래프
도 7는 실험예 2에 따른 실험군의 백신 투여 후 코티솔의 농도를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

이하에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐리게 할 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략하기로 한다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.

본 발명자들은 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물에 있어서, 구제역 및 조류인플루엔자가 가축의 식욕 부진, 발열, 발육 저하 등으로 인해 가축의 상품가치를 크게 저하시키고, 일단 발생하면 살처분 등에 의하여 축산 농가에 막대한 경제적 손실을 야기하기 때문에 구제역 및 조류인플루엔자 예방을 위한 백신접종을 시행하는 것이 필수적이나, 백신을 접종한 가축에 백신 부작용이 발생하거나 스트레스 반응이 나타나고 이러한 백신의 부작용에 대한 우려, 그리고 백신 접종 후 부작용과 스트레스가 생산성 저하를 일으켜 출하 지연을 발생시킨다는 우려 때문에, 일부에서는 백신 접종 자체를 기피하는 문제가 발생하고 있다는 사실에 직시하고, 이러한 문제점을 해결하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 상심자에 아세트아미노펜 및 부타포스판을 혼합하여 수의학적 조성물을 제조하는 경우, 구제역 및 조류인플루엔자 백신을 접종하고 발생할 수 있는 부작용이나 동물이 받는 스트레스를 현저하게 감소시킬 수 있음을 발견하고 본 발명에 이르게 되었다.

따라서 본 발명은 상심자, 아세트아미노펜 및 부타포스판을 유효성분으로 함유하는 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물을 개시한다.

수의학적으로 적용되고 있는 백신은, 바이러스 항원과 오일성분의 보조제(adjuvants)를 혼합한 불활화 오일백신과 같은 불활화 백신(inactivated vaccine)이거나 생백신(Live vaccine)으로, 오일 성분의 보조제가 원인이 되어 국소적 염증 등의 반응을 일으키거나, 질병에 이미 감염된 동물에 사용된 경우에는 사료섭취 저하 등의 백신 접종에 따른 스트레스가 발생한다고 알려져 있다. 또한, 구제역 바이러스 백신은 접종 시 부종, 염증 및 괴사 등 여러 가지의 부작용이 따르는 경우가 있다.

이에 본 발명에 따른 상기 수의학적 조성물은 스트레스 호르몬 수치를 현저하게 감소시키며, 동물의 식욕억제 현상이 나타나지 않도록 조절하고, 백신 접종 동물에서 나타나는 백신 접종에 따른 스트레스를 완화하고 부작용을 예방 또는 치료할 수 있다.

상기 상심자(오디)는 뽕나무과(Moraceae)에 속한 낙엽교목인 뽕나무(Morus alba L.)의 열매가 자홍색을 나타낼 때 채취하여 건조한 후 한약재로 사용되며 한방에서는 어지러움과 이명, 구갈, 소갈 등의 치료에 이용하는 것으로 알려져 있으며(강병수 등, 본초학, 영림사, 서울, 한국 2000), 일본에서는 양혈거풍의 효능과 풍열을 다스리며 강장, 진통약, 불면증, 이명, 어지러움, 요통, 변비 등의 치료에 응용하는 것으로 알려져 있다(Namba,T., The Encyclopedia of Wakan-Yaku with Color Pictures Vol. 1 Hoikusha, Osaka, Japan, 1993). 동의보감에는 소갈을 다스리고 오장을 이롭게 하며 뽕나무의 정(精)이 모여 있다고 적고 있다(동의보감국역위원회, 2000).

또한, 상기 상심자는 용매를 이용하여 추출한 후 이를 건조시켜 분쇄한 분말형태일 수 있다.

상기 추출은 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올, 헥산, 에틸아세테이트 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매로 추출한 것일 수 있다. 본 발명의 추출물은 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 6인 알코올 및 이들의 혼합용매에서 선택된 용매로 추출한 것일 수 있으며, 또는 탄소수 1 내지 6의 저급 알코올 수용액일 수 있다. 상기 알코올 수용액의 농도는 10 내지 100%(v/v)일 수 있으며, 바람직하게는 70 내지 100%(v/v)일 수 있다. 본 발명의 추출 용매는 가장 바람직하게는 95%(v/v)의 에탄올 수용액일 수 있다.

또한, 본 발명에서의 추출 방법은 당업계에 공지된 것이면 제한 없이 사용할 수 있으며, 그 예로 냉침, 열수 추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 방법이 있으나 여기에 국한되는 것은 아니다. 바람직하게는 환류냉각 추출할 수 있다.

상기 방법으로 제조된 추출물은 여과하여 여액을 모으고, 다시 잔사에 원료 중량의 4 내지 7배의 추출 용매, 예컨대 물을 가하여 환류냉각 추출 조건으로 4시간 동안 재추출하고 여과하여 이전의 여액과 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있다. 본 발명의 추출물이 추출의 횟수에 한정되는 것은 아니다.

상기와 같이 추출한 후 합한 여액은 40 내지 60℃에서 감압농축하여 추출물 중에 잔존하는 용매를 제거하고, 감압농축된 농축물 중량의 25 내지 50배의 물로 2 내지 3회 공비 농축한 후 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 최종 추출물은 추가적으로 더욱 정제할 수도 있고, 동결건조 등의 방법에 의해 건조시켜 용매를 제거하여 고형화하거나 분말 형태로 제조할 수 있다.

본 발명에서 상기 아세트아미노펜(acetaminophen)은 성분명이며, 1950년대에 미국에서 개발된 타이레놀(tylenol)이라는 단일제제의 상품명으로 잘 알려져 있다. 인체 내에서 통증을 전달하는 프로스타글란딘(Prostaglandin)의 생합성을 방해하여 진통 효과를 나타내며, 이밖에 해열 작용도 한다. 아스피린에 비하여 항염증 효과는 미미하지만, 진통 및 해열 효과가 뛰어나 발열이나 통증, 두통, 치통 등에 널리 쓰인다. 의사의 처방 없이 살 수 있는 일반의약품에 속한다. 그러나 허용된 용량보다 많이 복용하거나 아세트아미노펜이 포함된 여러 제품을 동시에 복용하는 경우에는 간에 치명적 손상을 초래할 수 있다. 또 아세트아미노펜 복용중에 음주를 하는 경우에도 간 손상의 위험성이 높아질 수 있다.

본 발명에서 상기 부타포스판은 하기 화학식 1로 표현되는 유기인화합물로서 대사를 활성화하고 면역시스템을 조절하는 기능을 지닌 약리활성 물질이다.

[화학식 1]

본 발명에서 상기 수의학적 조성물은 전체 조성물 대비 상기 상심자를 0.01~10중량%, 바람직하게는 0.05~5중량%, 더욱 바람직하게는 0.5~3중량%를 포함할 수 있고, 상기 아세트아미노펜을 10~60중량%, 바람직하게는 15~50중량%, 더욱 바람직하게는 20~40중량%를 포함할 수 있고, 상기 부타포스판을 0.01~30중량%, 바람직하게는 0.1~20중량%, 더욱 바람직하게는 1~10중량%를 포함할 수 있다.

상기 상심자, 아세트아미노펜 및 부타포스판의 함량이 상기 함량범위 미만이면, 구제역 또는 조류인플루엔자 백신 접종 시 부작용 및 스트레스 완화 효능이 저하될 수 있고, 상기 함량범위를 초과하면 약물 접종량이 과도하여 동물에게 스트레스가 발생하여 생산성이 저하될 수 있다.

발명에 따른 상기 수의학적 조성물이 약학적 조성물의 형태로 제공이 되는 경우에는, 본 발명의 상기 혼합물 이외에 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있으며, 상기 부형제로 바람직하게 무수포도당을 사용할 수 있다.

또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.

약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 펩티드 제제에 대한 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

본 발명의 조성물이 포유동물에게 투여 시, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 수의학적 조성물은 사료에 혼합되어 가축에게 제공될 수 있으며, 상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005~2중량%일 수 있고, 바람직하게는 0.01~1.5중량%일 수 있고, 더욱 바람직하게는 0.05~1중량%일 수 있다.

상기 수의학적 조성물 함량이 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005중량% 미만이면, 백신 접종 시 스트레스 완화 효능이 저하될 수 있고, 2중량%를 초과하면, 첨가량 대비 스트레스 완화 효능이 향상되지 않아 경제적이지 못하고, 가축이 사료 섭취 시 과도한 약물을 섭취하여 스트레스가 증가할 수 있다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성장 촉진제 등을 더 포함할 수 있으며, 상기 사료는 곡물(예를 들면. 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수, 쌀), 식물성 단백질 사료(예를 들면, 평지, 콩, 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료), 동물성 단백질 사료(예를 들면, 혈분, 육분, 골분 및 생선분), 당분 및 유제품(예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조 성분 등)을 더 포함할 수 있으며 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료와 조합하여 투여할 수도 있고, 또한, 상기 사료는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구 제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다.

또한, 상기 수의학적 조성물을 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약제학적으로 허용 가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로오스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있고, 고체 담체가 사용될 경우, 사료는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있으며, 액체 담체가 사용될 경우, 사료는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명에 따른 구체적인 실시예를 들어 설명한다.

제조예

상심자(농업회사법인(주)휴먼허브로부터 구입)를 파쇄기를 이용하여 적당한 크기(30mm)로 파쇄한 다음 추출기에 넣고 10배 중량의 정제수를 넣어 80~90℃에서 5~6시간 추출하여 추출액을 1㎛ 크기의 마이크로필터를 이용하여 여과하여 여액을 얻고, 여과액을 감압농축(EYELA사, N-1000, 일본)후 동결건조기(일신바이오, FD8508, 한국)을 이용하여 상심자 동결 건조 분말을 수득하였다.

실시예 1

상기 제조예에서 제조한 상심자 동결 건조 분말 30g, 아세트아미노펜(ANQIU LU'AN PHARMACEUTICAL CO. LTD) 300g, 부타포스판(NGL Fine-Chem Limited) 50g 및 무수포도당(삼양제넥스) 620g을 혼합하여 조성물을 제조하였으며, 상기 제조는 동물약품공정서 제제총칙 중 산제 제법에 준하여 제조하였다.

실시예 2

상기 제조예에서 제조한 상심자 동결 건조 분말 15g, 아세트아미노펜 300g, 부타포스판 50g 및 무수포도당 635g을 혼합하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.

실시예 3

상기 제조예에서 제조한 상심자 동결 건조 분말 5g, 아세트아미노펜 300g, 부타포스판 50g 및 무수포도당 645g을 혼합하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.

비교예

상기 제조예에서 제조한 상심자 동결 건조 분말 192g 및 무수포도당 808g을 혼합하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조성물을 제조하였다.

실험예 1

1. 재료 및 방법

시험동물 및 시험설계:

육성돈 18두(Conventional Landrace pig, Male, 하나바이오)를 공시하였고, 동물 입수 후 1주간 동물실에서 순화 후 2주 동안 시험을 실시하였다.

시험설계는 ⅰ)일반적인 사료인 CON(Basal diet)만을 제공한 군인 음성대조군, ⅱ) 일반사료를 공급하고 FMD 백신을 투여한 백신투여군, ⅲ) 사료 내에 상기 비교예에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 1군, ⅳ) 사료 내에 상기 실시예 1에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 2군, ⅴ) 사료 내에 상기 실시예 2에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 3군 및 ⅵ) 사료 내에 상기 실시예 3에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 4군을 준비하여 각각 3두씩 배치하였다.

백신 및 사양관리:

온도 22±3℃, 환기횟수 10~15회/시간, 조명주기 12시간 및 조도 150~300Lux의 환경조건으로 설정하여 사육을 실시하였고, 백신 접종은 음성대조군을 제외한 모든 육성돈에게 동일한 불활화 정제 구제역 백신(녹십자수의약품 주식회사)을 제조사의 매뉴얼에 따라 두당 2ml을 접종하였다.

조사항목 및 방법:

(1) 체중측정

백신스트레스 완화 효과를 알아보기 위하여 백신 투여전, 백신 투여 당일, 백신 투여 후 1일, 7일 및 14일에 체중을 측정하여 증체량의 변화를 조사하였으며, 일일 증체량은 시험종료 시점의 체중에서 백신 투여 개시체중을 뺀 값에 실험일수를 나눈 값으로 하였다.

(2) 사료 섭취량 측정

시험사료는 NRC(2012) 요구량에 따라 배합한 사료(스페셜 젖돈, 대주산업㈜)로서 두당 2kg씩 모두 동일하게 제한급여를 실시하였으며, 물은 자유로이 섭취할 수 있도록 하였고, 매일 공급량과 잔량을 측정하여 사료섭취량을 측정하였으며, 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예에서 제조된 조성물을 사료에 혼합하여 공급한 3일간의 사료섭취량도 측정하였다.

(3) 임상증상 관찰

실험이 종료되는 14일간 하기 표 1에 따른 임상증상 지표에 따라 임상증상을 관찰한 후 배점하였다.

(4) 혈청 FMDV 항체가 측정

혈청 내 FMDV 항체가를 분석하기 위하여 ELISA kit(PrioCHECK)를 이용하여 하기와 같은 방법으로 측정하였다.

FMDV antigen 이 부착된 웰에 ELISA buffer 90㎕와 각각의 혈청 10㎕를 분주한 후 상온(22±3℃)에서 60±5분간 반응시켰으며, 반응이 끝난 후 washing buffer로 5회 세척하였다. 세척 후 conjugate를 ELISA buffer로 30배 희석하여 100㎕씩 ELISA 플레이트에 분주한 후 상온(22±3℃)에서 60±5분간 반응시켰으며, 반응이 끝난 후 washing buffer로 5회 세척하였다. 발색시약(TMB)를 각각 100㎕씩 첨가하여 발색반응을 확인하였으며, 반응정지용액을 100㎕첨가하여 발색반응을 정지시켰다. 발색반응을 멈춘 후 UV spectrophotometer(Hidex sense, Turku, Finland)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였고, 그 결과를 계산식 {100-(corrected OD450 test sample/corrected OD450max)×100}에 따라 PI 수치를 얻어 50 이상일 경우 양성, 50 미만일 경우 음성으로 판정하였다.

(5) 혈청 코티솔 ( Cortisol ) 함량 분석

스트레스 지표 중 하나인 코티솔을 분석하기 위하여 ELISA kit(biosasb Technology Laboratory)를 이용하여, 하기와 같은 방법으로 측정하였다.

Porcine cortisol antibody가 부착된 웰에 혈청 40㎕, Anti-cortisol antibody 10㎕ 및 streptavidin-HRP 50㎕를 분주하여 혼합한 후 37℃에서 60분간 반응시킨 후 washing buffer로 5회 세척하였다. 세척 후 Substrate A와 B를 각각 50㎕씩 첨가하여 37℃에서 10분간 반응시켰으며, 반응정지 용액을 50㎕씩 첨가하여 발색반응을 멈춘 후 UV spectrophotometer(Hidex sense, Turku, Finland)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

(6) 통계 처리

통계처리는 STATISTICA 프로그램을 이용하여 One-way ANOVA 분석을 하였고, 이후 DunCan's multiple range test(p<0.05)로 각각의 시험군별로 평균간의 유의성을 검정하였으며, 결과값은 평균값±표준편차(mean±SD)로 나타내었다.

2. 실험결과

(1) 체중변화

상기 표 2를 참조하면, 시험물질 투여 종료 후 14일째의 대조군, 백신투여군및 샘플 1 내지 4 투여군의 총 증체량은 각각 11.07±1.24kg, 9.93±0.57kg, 10.80±1.71kg, 10.83±1.21kg, 13.30±3.42kg 및 10.23±0.49kg이고, 각 시험군의 일일증체량은 각각 0.79±0.09kg, 0.71±0.04kg, 0.77±0.12kg, 0.77±0.09kg, 0.95±0.24kg 및 0.73±0.04kg이었다.

각 시험군 간의 유의성은 관찰되지 않았으나, 모든 실험예에서 총 증체량이 백신투여군에 비하여 향상되었음을 알 수 있고, 또한 샘플 3의 총 증체량이 백신투여군에 비하여 약 34% 증가하였음을 알 수 있다.

또한, 샘플 3이 샘플 1과 비교했을 때 총 증체량 및 일일 증체량이 향상되었음을 알 수 있다.

(2) 사료효율

상기 표 3을 참조하면, 백신투여 후 각 시험군의 개체별 총 사료섭취량은 각각 27.77±0.00kg, 27.74±0.00kg, 27.74±0.00kg, 27.77±0.00kg, 27.81±0.00kg 및 27.96±0.00kg으로 시험군간 유의성은 관찰되지 않았다.

사료효율은 각각 0.40±0.04kg, 0.36±0.02kg, 0.39±0.06kg, 0.39±0.04kg, 0.48±0.12kg 및 0.37±0.02kg으로 샘플 3의 사료효율이 백신투여군 및 샘플 1에 비하여 높았으나 유의적 차이는 관찰되지 않았다.

(3) 임상증상

도 1은 직장 내 온도 변화를 나타낸 그래프이고, 도 2는 임상 지표 결과를 나타낸 그래프이다.

도 1 및 도 2를 참조하면, 백신투여군의 체온은 백신 투여 후 8시간째부터 2일째까지 음성대조군에 비하여 유의하게 높았으며, 일부 개체에서는 6일째까지 지속적으로 높은 체온이 유지되었다. 이후 일시적으로 체온이 상승하여 음성대조군과 비교 시 유의한 차이가 관찰되었다. 또한, 백신 투여 당일 후 모든 개체에서 설사 또는 연변이 관찰되었고, 백신 투여 후 1일째까지 설사 또는 연변이 지속되었으며, 2일째까지 행동둔화가 관찰되었고, 접종부위 경결은 2~6일째까지, 피모거침은 대부분의 개체에서 13일까지 관찰되었다.

샘플 1의 경우, 백신 투여 후 8시간째부터 백신 투여 후 2일째까지 모든 개체의 체온이 음성대조군에 비하여 유의하게 높았으며, 일부 개체에서는 7일째까지 간헐적으로 체온이 상승하였고, 음성대조군과 백신투여군(백신투여 후 6일째 및 7일째)에 비하여 체온이 유의하게 높았다. 또한, 백신 투여 당일 후 모든 개체에서 연변이 관찰되었고, 일부 개체에서는 백신 투여 후 1일째까지 연변이 관찰되었으며, 백신 투여 후 1~2일째까지 행동둔화가 관찰되었고, 접종부위 경결은 2~5일째까지, 피모거침은 대부분의 개체에서 13일까지 관찰되었다.

샘플 2의 경우, 백신 투여 후 8시간째부터 백신 투여 후 2일재까지의 체온이 음성대조군보다 유의하게 높았으며, 이후 체온이 감소하여 백신 투여 후 3일째와 9일째에는 백신투여군 보다 유의하게 체온이 감소하였다. 또한 백신 투여 당일 후 모든 개체에서 설사 또는 연변이 관찰되었고, 백신 투여 후 1~2일째까지 행동둔화가 관찰되었고, 접종부위 경결은 2~4일째까지, 피모거침은 대부분의 개체에서 13일가지 관찰되었다.

샘플 3의 경우, 백신 투여 후 8시간째부터 백신 투여 후 2일째까지의 체온이 음성대조군보다 유의하게 높았으나, 백신 투여 후 1일째에는 백신투여군에 비하여 유의하게 낮았다. 이후 일부 개체에서 일시적인 체온 상승이 관찰되었으나, 전반적으로 체온의 큰 변화는 관찰되지 않았다. 또한 백신 투여 당일 모든 개체에서 연변이 관찰되었고, 백신 투여 후 1~2일째까지 행동둔화가 관찰되었고, 접종부위 경결은 2일째까지, 피모거침은 대부분의 개체에서 13일까지 관찰되었다.

샘플 4의 경우, 백신 투여 후 8시간째부터 백신 투여 후 2일째까지 체온이 대조군보다 유의하게 높았으며, 이후에는 일부 개체에서 일시적인 체온 상승이 관찰되어 대조군보다 유의하게 높았다(백신투여 후 8일째 및 9일째). 또한, 백신 투여 당일 후 모든 개체에서 설사 또는 연변이 관찰되었고, 백신 투여 후 1~2일째까지 행동둔화가 관찰되었고, 접종부위 경결은 2일째까지, 피모거침은 대부분의 개체에서 13일까지 관찰되었다.

(4) 혈청 FMDV 항체가 변화

각 시험군에 대하여 백신 투여 전 1회 및 백신 투여 후 7일 및 14일째에 혈액을 채취하여 혈청 내 FMDV 항체가 변화를 관찰하였고 그 결과를 하기 표 4 및 도 3에 나타내었다.

상기 표 4 및 도 3을 참조하면, 음성 대조군의 경우 혈청 내 FMDV 항체가가 일정수준으로 유지되는 것으로 확인되었으며, 백신투여군과 샘플 1 내지 4의 경우 백신 투여 후 7일째의 PI 값이 50% 이상으로 확인되어 항체가 형성되었으며 14일째의 PI 값은 60~80%로 각 군의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.

(5) 혈청 Cortisol 함량의 변화

각 시험군에 대하여 백신 투여 후 1일, 7일 및 14일째에 혈액을 채취하여 혈청 내 코티솔 함량의 변화를 관찰하였고, 그 결과를 하기 표 5 및 도 4에 나타내었다.

상기 표 5 및 도 4를 참조하면, 백신투여군 및 샘플 1 내지 4의 경우, 백신 투여 후 14일째의 코티솔 함량이 각각 177.77±14.81ng/ml, 155.53±9.38ng/ml, 179.13±22.30ng/ml, 143.33±22.89ng/ml 및 153.87±11.60ng/ml이었으며, 샘플 3의 경우 백신투여군과 대비할 때 코티솔 함량이 유의하게 낮았다.

(6) 부검 소견

음성대조군, 백신투여군 및 샘플 1 내지 4에 따른 약물 투여종료 후 14일째에 돼지를 안락사 시켜 부검한 후, 간, 신장, 비장, 소장, 대장 림프절 등 실질 장기에 대한 육안적 변화를 관찰한 결과, 음성대조군과 비교할 때, 샘플 1 내지 4에서 특별한 육안적 병변은 관찰되지 않았다.

상기 실험예 1의 결과를 참조하면, 본원발명에 따른 수의학적 조성물의 경우 구제역 백신 접종 시 발생하는 부작용인 발열, 설사 등을 억제하여 증체량 저하를 방지하는 것을 확인할 수 있다.

실험예 2

1. 재료 및 방법

시험동물 및 시험설계:

산란계 30마리(Hy-line brown, 하나바이오)를 공시하였고, 동물 입수 후 1주간 동물실에서 순화 후 2주 동안 시험을 실시하였다.

시험설계는 ⅰ)일반적인 사료인 CON(Basal diet)만을 제공한 군인 음성대조군, ⅱ) 일반사료를 공급하고 FMD 백신을 투여한 백신투여군, ⅲ) 사료 내에 상기 비교예에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 1, ⅳ) 사료 내에 상기 실시예 1에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 2, ⅴ) 사료 내에 상기 실시예 2에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 3 및 ⅵ) 사료 내에 상기 실시예 3에서 제조한 조성물을 톤당 1kg을 첨가하여 공급하고 FMD 백신을 투여한 샘플 4를 준비하여 각각 5두씩 배치하였다.

백신 및 사양관리:

온도 22±3℃, 환기횟수 10~15회/시간, 조명주기 16시간 및 조도 25Lux의 환경조건으로 설정하여 사육을 실시하였고, 백신 접종은 음성대조군을 제외한 모든 산란계에게 동일한 대성 ANBBE-Q 오일 치큰백(주식회사 대성미생물연구소)을 제조사의 매뉴얼에 따라 두당 0.5ml을 접종하였다.

조사항목 및 방법:

(1) 체중측정

백신스트레스 완화 효과를 알아보기 위하여 백신 투여 전, 백신 투여 당일, 백신 투여 후 3일, 7일, 10일 및 14일에 체중을 측정하여 증체량의 변화를 조사하였으며, 일일 증체량은 시험종료 시점의 체중에서 백신 투여 개시체중을 뺀 값에 실험일수를 나눈 값으로 하였다.

(2) 사료 섭취량 측정

시험사료는 NRC(2012) 요구량에 따라 배합한 사료(산란 스페셜, 대주산업㈜)로서 두당 110g씩 모두 동일하게 제한급여를 실시하였으며, 물은 자유로이 섭취할 수 있도록 하였고, 매일 공급량과 잔량을 측정하여 사료섭취량을 측정하였으며, 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예에서 제조된 조성물을 사료에 혼합하여 공급한 3일간의 사료섭취량도 측정하였다.

(3) 임상증상 관찰

실험이 종료되는 14일간 하기 표 6에 따른 임상증상 지표에 따라 임상증상을 관찰한 후 배점하였다.

(4) 혈청 NDV 및 IBV 항체가 측정

혈청 내 NDV 및 IBV 항체가를 분석하기 위하여 ELISA kit(IDEXX, USA)를 이용하여 하기와 같은 방법으로 측정하였다.

NDV antigen 또는 IBV antigen이 부착된 웰에 500배로 희석한 혈청 100㎕를 분주한 후 상온(22±3℃)에서 30분간 반응시켰으며, 반응이 끝난 후 3차 증류수로 5회 세척하였다. 세척 후 conjugate 100㎕씩 플레이트에 분주한 후 발색시약(TMB)을 각각 100㎕씩 첨가하여 발색반응을 확인하고, 반응정지용액을 100㎕씩 첨가하여 발색반응을 멈춘 후 UV spectrophotometer(Hidex sense, Turku, Finland)를 이용하여 650nm에서 흡광도를 측정하였고, 그 결과를 계산식 (Sample OD650-mean NC OD₆₅₀)/(mean PC OD₆₅₀-mean NC OD₄₅₀)에 따라 S/P 지수를 얻어 0.2초과일 경우 양성, 0.2 이하일 경우 음성으로 판정하였다.

(5) 혈청 코티솔 ( Cortisol ) 함량 분석

스트레스 지표 중 하나인 코티솔을 분석하기 위하여 ELISA kit(biosasb Technology Laboratory)를 이용하여, 하기와 같은 방법으로 측정하였다.

chicken cortisol antibody가 부착된 웰에 혈청 40㎕, Anti-cortisol antibody 10㎕ 및 streptavidin-HRP 50㎕를 분주하여 혼합한 후 37℃에서 60분간 반응시킨 후 washing buffer로 5회 세척하였다. 세척 후 Substrate A와 B를 각각 50㎕씩 첨가하여 37℃에서 10분간 반응시켰으며, 반응정지 용액을 50㎕씩 첨가하여 발색반응을 멈춘 후 UV spectrophotometer(Hidex sense, Turku, Finland)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

(6) 통계 처리

통계처리는 STATISTICA 프로그램을 이용하여 One-way ANOVA 분석을 하였고, 이후 DunCan's multiple range test(p<0.05)로 각각의 시험군별로 평균간의 유의성을 검정하였으며, 결과값은 평균값±표준편차(mean±SD)로 나타내었다.

2. 실험결과

(1) 체중변화

상기 표 7를 참조하면, 시험물질 투여 종료 후 14일째의 대조군, 백신투여군 및 샘플 1 내지 4 투여군의 총 증체량은 각각 152.80±20.50g, 131.20±48.80g, 132.20±36.23g, 133.60±25.63g 및 165.20±55.54g이고, 각 시험군의 일일증체량은 각각 10.91±1.46g/day, 9.37±3.49g/day, 9.44±2.59g/day, 9.54±1.83g/day, 11.80±3.97g/day 및 9.43±2.80g/day이었다.

각 시험군 간의 유의성은 관찰되지 않았으나, 샘플 1 내지 4에서 총 증체량이 백신투여군에 비하여 향상되었음을 알 수 있고, 또한 샘플 3의 총 증체량 및 일일증체량이 백신투여군에 비하여 26%가 증가하였음을 알 수 있다.

또한, 샘플 3이 샘플 1과 비교했을 때 총 증체량 및 일일 증체량이 향상되었음을 알 수 있다.

(2) 사료효율

상기 표 8을 참조하면, 백신투여 후 각 시험군의 개체별 총 사료섭취량은 각각 1.17±0.05kg, 1.06±0.12kg, 1.09±0.06kg, 1.08±0.14kg, 1.04±0.11kg 및 1.15±0.03kg이었다.

사료효율은 각각 0.13±0.02, 0.13±0.05, 0.12±0.03, 0.12±0.02, 0.16±0.05 및 0.12±0.04로 각 시험군간의 유의성은 관찰되지 않았지만, 샘플 3의 사료 효율이 백신투여군 및 샘플 1에 비하여 높은 것을 알 수 있다.

(3) 임상증상

모든 시험군에서 행동, 벼슬, 깃털, 분변 등에서 특이적인 임상증상이 관찰되지 않았다.

(4) 혈청 NDV 항체가 변화

각 시험군에 대하여 백신 투여 전 1회 및 백신 투여 후 7일 및 14일째에 혈액을 채취하여 혈청 내 NDV 항체가 변화를 관찰하였고 그 결과를 하기 표 9 및 도 5에 나타내었다.

상기 표 9 및 도 5를 참조하면, 백신투여군과 샘플 1 내지 4의 경우 백신 투여 후 실험 종료 시 NDV 항체가(Log₁₀titer)는 각각 3.37±0.09, 3.46±0.06, 3.49±0.08, 3.40±0.07 및 3.32±0.30으로 각 군의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.

(5) 혈청 IBV 항체가 변화

각 시험군에 대하여 백신 투여 전 1회 및 백신 투여 후 7일 및 14일째에 혈액을 채취하여 혈청 내 IBV 항체가 변화를 관찰하였고 그 결과를 하기 표 10 및 도 6에 나타내었다.

상기 표 10 및 도 6를 참조하면, 백신투여군과 샘플 1 내지 4의 경우 백신 투여 후 실험 종료 시 IBV 항체가(Log₁₀titer)는 각각 3.48±0.17, 3.52±0.25, 3.59±0.22, 3.57±0.24 및 3.44±0.30으로 각 군의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.

(6) 혈청 Cortisol 함량의 변화

각 시험군에 대하여 백신 투여 후 1일, 7일 및 14일째에 혈액을 채취하여 혈청 내 코티솔 함량의 변화를 관찰하였고, 그 결과를 하기 표 11 및 도 7에 나타내었다.

상기 표 11 및 도 7을 참조하면, 백신투여군 및 샘플 1 내지 4의 경우, 백신 투여 후 14일째의 코티솔 함량이 각각 2.4±0.6ng/ml, 2.1±0.4ng/ml, 2.1±0.3ng/ml, 1.8±0.5ng/ml 및 2.4±0.5ng/ml이었으며, 샘플 3의 경우 백신투여군과 대비할 때 코티솔 함량이 유의하게 낮았다.

상기 실험예 2의 결과를 참조하면, 본원발명에 따른 수의학적 조성물의 경우 조류인플루엔자 백신 접종 시 발생하는 발현, 설사 등의 부작용을 억제하여 증체량 저하를 방지하는 것을 확인할 수 있다.

이와 같이, 본 발명에 따른 수의학적 조성물의 경우, 상심자에 아세트아미노펜 및 부타포스판을 혼합함으로써 구제역 또는 조류인플루엔자 백신 접종 시 발생하는 스트레스를 완화시켜 생산량 저하를 방지할 수 있는 수의학적 조성물을 제공할 수 있게 된다.

이상으로 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명하였다. 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다.

Claims (5)

1. 전체 조성물 중에 유효성분으로 상심자 0.5~3중량%, 아세트아미노펜 20~40중량% 및 부타포스판 1~10중량%를 포함하는 백신 접종 동물의 스트레스 완화용 수의학적 조성물로서, 상기 백신은 구제역 및 조류인플루엔자의 백신인 스트레스 완화용 수의학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 상심자는 분말형태인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물.
3. 삭제
4. 삭제
5. 제1항에 있어서,
   상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005~2중량%인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물.
   
   

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