KR102147794B1 - 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 포함하는 신경퇴행성질환 치료용 조성물 - Google Patents

토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 포함하는 신경퇴행성질환 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 신경세포 보호용 조성물을 제공한다. 본 발명은 산화 스트레스에 의한 신경세포 사멸에 대하여 동반상승 효과를 나타내는 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 유효성분으로 한다.

Description

토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 포함하는 신경퇴행성질환 치료용 조성물{Composition for treating Neurodegenerative diseases comprising Mixture of Tomato and Lemon Extracts}
본 발명은 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 포함하는 신경퇴행성질환 치료용 조성물에 관한 것이다.
산화자극, 글루탐산에 의한 흥분성 독성, 비정상 단백질들의 축적, 칼슘에 의해 매개되는 독성, 유전적 결함, 자가면역이상 등의 여러 가지 기전들이 신경퇴행성질환의 발병 과정에 관여한다. 이 중에서 산화자극이 알쯔하이머병, 파킨슨병, 근위축성측삭경화증 등 신경퇴행성질환의 발병에 관여한다는 증거들이 최근 여러 보고를 통해 알려지고 있다. 그 밖에도 산화자극은 뇌허혈 및 간질과 같은 여러 가지 신경계 질환의 발병에도 중요한 역할을 한다.
현대사회에서는 노령 인구의 급격한 증가로 인해 노인성 치매(senile dementia) 등의 퇴행성 뇌질환의 증가가 심각한 사회 문제로 대두되고 있으나, 현재까지 이 질환의 예방 및 치료를 위한 효과적인 약제나 치료법이 개발 되지 못하고 있는 실정이다.
대한민국 공개특허 제2002-0044507호, 제2002-0030648호 및 제2002-0030642호 등에서는 당귀, 삼백초 및 오미자 등의 생약이 뇌신경세포의 보호활성을 나타낸다고 보고하고 있으나, 임상에 적용할 정도로 우수한 효과는 아니었다. 따라서, 퇴행성 뇌 질환의 예방과 개선을 위해 뇌 세포의 파괴와 노화를 지연시켜 뇌 세포를 보호하는 새로운 물질의 개발이 요구되고 있다.
대한민국 공개특허 제2002-0044507호 대한민국 공개특허 제2002-0030648호 대한민국 공개특허 제2002-0030642호
본 발명자들은 신경퇴행성 질환의 개선 효과를 갖는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물이 산화스트레스에 대한 신경세포사멸에 대하여 동반상승 효과를 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 신경퇴행성질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 신경세포 보호용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 일 양태는, 토마토(Solanum lycopersicum) 추출물 및 레몬(Citrus limon) 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에서 용어 "신경퇴행성질환"은 신경세포의 기능 감소 또는 소실에 의해 운동조절능력, 인지기능, 지각기능, 감각기능 및 자율신경의 기능 이상을 의미한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 신경퇴행성질환은 알쯔하이머 질환, 치매, 헌팅턴 질환, 파킨슨씨 질환, 근위축성 측삭 경화증, 기억력저하 및 중증근무력증으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 질환이다.
본 발명의 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 조성물은 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함한다.
상기 토마토 추출물 및 레몬 추출물은 토마토 또는 레몬을 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물 일 수 있다.
토마토 또는 레몬의 조추출물 제조에 사용되는 한 용매에 물과 알코올의 혼합물을 사용하는 경우에는 10%이상 내지 100%(v/v)미만, 20%이상 내지 100%(v/v)미만, 30%이상 내지 100%(v/v)미만, 40%이상 내지 100%(v/v)미만, 50%이상 내지 100%(v/v)미만, 60%이상 내지 100%(v/v)미만, 70%이상 내지 100%(v/v)미만, 10%이상 내지 90%(v/v)미만, 20%이상 내지 90%(v/v)미만, 30%이상 내지 90%(v/v)미만, 40%이상 내지 90%(v/v)미만, 50%이상 내지 90%(v/v)미만, 60%이상 내지 90%(v/v)미만 또는 60%이상 내지 80%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액, 예를 들어, 70%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다.
또한, 상기 알코올 수용액은 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 프로판올 수용액, 및 부탄올 수용액으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 예를 들어, 에탄올 수용액인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 토마토 추출물 또는 레몬 추출물은 용매 조추출물을 추가의 용매로 분획한 용매 분획물일 수 있으며, 예를 들면 상기 용매 조추출물에 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 토마토 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 레몬 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 추출물일 수 있다.
예를 들면, 상기 토마토 또는 레몬을 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 용매 조추출물을 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있다.
상기 토마토 추출물 또는 레몬 추출물은 토마토 또는 레몬의 용매 조추출물, 용매 분획물을 포함하며 상술한 바와 같다.
상기 토마토 추출물 또는 레몬 추출물은 토마토 또는 레몬의 꽃, 잎, 줄기, 열매, 과육, 과피, 종자 및 뿌리로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을, 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 토마토 추출물은 토마토 열매의 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 레몬 추출물은 레몬 껍질의 추출물일 수 있다.
상기 용매는 10%이상 내지 100%(v/v)미만, 20%이상 내지 100%(v/v)미만, 30%이상 내지 100%(v/v)미만, 40%이상 내지 100%(v/v)미만, 50%이상 내지 100%(v/v)미만, 60%이상 내지 100%(v/v)미만, 70%이상 내지 100%(v/v)미만, 10%이상 내지 90%(v/v)미만, 20%이상 내지 90%(v/v)미만, 30%이상 내지 90%(v/v)미만, 40%이상 내지 90%(v/v)미만, 50%이상 내지 90%(v/v)미만, 60%이상 내지 90%(v/v)미만 또는 60%이상 내지 80%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액, 예를 들어, 70%(v/v)의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다.
본 발명에 따른 토마토 추출물 또는 레몬 추출물의 제조 과정을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다: 토마토 또는 레몬을 절단하고 물로 세척하여 협착물을 제거한 후, 상기 토마토 또는 레몬의 중량에 대하여 약 10 내지 20배 중량의 추출용매로 환류 추출한다. 추출 후 여과하여 여과액을 모은다. 추출 온도는 특별한 제한은 없지만 15 내지 110℃, 바람직하게는 20 내지 90℃인 것이 좋다.
추출공정은 1회 또는 수회 반복할 수 있으며, 본 발명의 한 바람직한 예에서는 1차 추출 후 다시 재추출하는 방법을 채택할 수 있는데, 이는 생약추출물을 대량 생산하는 경우 효과적으로 여과를 한다 하더라도 생약 자체의 수분 함량이 높기 때문에 손실이 발생하게 되어 1차 추출만으로는 추출효율이 떨어지므로 이를 방지하기 위함이다. 또한, 각 단계별 추출효율을 검증한 결과 2차 추출에 의해 전체 추출량의 80 내지 90% 정도가 추출되는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 일 예에서, 추출공정을 2회 반복하는 경우, 상기 얻어진 잔사에 다시 추출용매, 약 5 내지 15 부피배, 바람직하게는 8 내지 12 부피배로 환류 추출한다. 추출 후 여과하고 이전에 얻어진 여과액과 합쳐서 감압농축을 하여 토마토 추출물 또는 레몬 추출물을 제조한다. 이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물이 추출 회수에 한정되는 것은 아니다.
상기 토마토 추출물 또는 레몬 추출물 제조 시에 사용되는 용매의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음의 정제단계에서 사용되는 용매의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있으므로, 용매의 사용량은 상기 범위로 하는 것이 좋다.
이와 같이 얻어진 여과된 추출물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30 중량배, 바람직하게는 15 내지 25 중량배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조하여 분말상태의 토마토 추출물 또는 레몬 추출물로서 제조될 수 있다.
본 발명에 사용된 추출 방법은 통상적으로 사용되는 모든 방법일 수 있으며, 예컨대, 냉침, 열수추출, 초음파 추출, 또는 환류 냉각 추출법일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어, '추출물'은 용매 조추출물, 특정 용매 가용 추출물(용매 분획물) 및 용매 조추출물의 용매 분획물을 포함하며, 상기 토마토 추출물 또는 레몬 추출물은 용액, 농축물 또는 분말 상태를 모두 포함한다.
본 발명의 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함한다.
상기 혼합물은 토마토 추출물 및 레몬 추출물이 일정 중량(건조중량)의 비율로 혼합된 혼합물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물에 포함되는 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 중량 혼합비는 5:1, 2:1, 1:1, 1:2 또는 1:5 일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물에 포함되는 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 중량 혼합비는 0.8-1.2:0.8-1.2 일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물에 포함되는 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 중량 혼합비는 0.9-1.1:0.9-1.1 일 수 있다.
본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물에 포함되는 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 중량 혼합비는 1:1 일 수 있다.
본 발명자들은 토마토와 레몬 추출물의 혼합물은 혼합비율에 따라 다른 상호작용을 나타낼 수 있음을 확인하였다. 특히, 토마토와 레몬 추출물의 건조중량 혼합비가 1:1인 경우 산화스트레스에 의한 신경세포보호효과가 현저히 상승하는 것을 확인하였다 (표 2 및 도 3 참조).
상기 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 신경보호(neuroprotective) 활성을 가질 수 있다.
상기 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 산화 스트레스에 의한 세포사멸을 억제하는 신경세포 보호 활성을 갖을 수 있다.
상기 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 산화 스트레스에 의한 세포사멸을 억제하는 신경세포 보호 활성을 갖을 수 있다.
H2O2는 산화 스트레스를 유도하는 독성물질로 활성산소 및 라디칼 등을 생성하여 세포를 산화 스트레스 상태에 이르게 하여 세포의 산화적 손상을 야기하는데, 산화 스트레스는 세포 내에서 수산기(hydroxy radical) 등의 활성산소 생성과 이를 방어하는 항산화 메커니즘의 균형이 깨지면서 발생하는 것으로 활성산소의 증가로 인한 라디칼의 생성이 세포내 미토콘드리아의 파괴, 단백질 및 DNA 변형, 지질과산화에 기인한다. 산화 스트레스 메커니즘은 뇌질환을 비롯하여 주요 질환의 병인으로 작용하고 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 토마토 및 레몬 추출물의 혼합물의 약제학적 유효량 및/또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량"은 상술한 토마토 및 레몬 추출물의 혼합물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육, 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.001-1000 ㎎/㎏이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제, 캅셀제 또는 젤(예컨대, 하이드로젤) 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 신경세포 보호용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 혼합물은 산화 스트레스에 의한 신경세포사멸의 억제 활성을 갖을 수 있다.
본 발명의 신경세포 보호용 조성물은 상기 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물과 유효성분이 동일하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 신경세포 보호용 조성물은 약제학적 조성물 또는 식품조성물일 수 있다. 또는 인 비트로(in vitro)에서 사용되는 신경세포 보호용 조성물일 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 신경퇴행성 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 신경세포 보호용 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명은 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물이 산화 스트레스에 의한 신경세포 사멸에 대하여 동반상승 효과를 가짐을 확인하였다.
도 1은 PC12에서 산화스트레스-유도성 세포사멸에 대한 토마토 추출물, 레몬 추출물 또는 혼합물(최종 농도 0.05% 또는 0.1%)의 개선효과를 나타낸다.
도 2는 PC12에서 산화스트레스-유도성 세포사멸에 대한 토마토 추출물 0.05%, 레몬 추출물 0.05% 또는 이의 혼합물의 개선효과를 나타낸다.
도 3은 PC12에서 산화스트레스-유도성 세포사멸에 대한 토마토 추출물 및 레몬 추출물 혼합물의 혼합 비율별 개선효과를 나타낸다.
도 4a 및 4b는 노령 동물에서 토마토 추출물, 레몬 추출물 또는 혼합물 투여에 의한 뇌 조직 내 DCX 양성세포 증가 효과를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.
실시예 1: 토마토 추출물 및 레몬 추출물의 제조
토마토(Solanum lycopersicum, 열매) 및 레몬(Citrus limon, 껍질)을 각각 분쇄하고 70% 에탄올에 첨가 및 교반하여 80℃에서 6시간 동안 추출하였다. 5 마이크로 카트리지 필터로 여과한 후 60℃에서 감압농축을 실시하였다. 추출물 50% 및 덱스트린 50%를 혼합하여 분무건조하여 60 메쉬로 체별(filtering)하여 토마토 추출물 및 레몬 추출물을 수득하였다.
토마토 추출물 및 레몬 추출물의 혼합물은 건조된 분말의 무게를 측정하여 원하는 비율로 혼합하여 사용하였다.
실시예 2: 신경세포보호 효과
산화스트레스-유도성 신경세포손상(세포독성)에 대하여, 토마토와 레몬 혼합물에 의해 개선 효과를 여부를 확인하고자 PC12를 이용하여 실험을 진행하였다.
세포배양
PC12 세포(ATCC® CRL-1721??)는 10% HS(Horse serum), 5% FBS(fetal bovine serum) 및 100 unit/ml의 페니실린(penicillin), 100 mg/ml의 스트렙토마이신(streptomycin)이 첨가된 RPMI1640(Roswell Park Memorial Institute 1640) 배지를 사용하여 배양하였다.
세포생존능 분석
콜라겐 코팅된 96 웰 플레이트에 PC12 세포를 1×106 cell/웰의 농도로 접종하고, 37℃ 및 5% 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 토마토 추출물, 레몬 추출물, 또는 이의 혼합물을 0.05%, 0.1% 농도로 배지에 용해한 후, 각각의 추출물을 포함한 배지 200 μl을 PC12 세포에 24시간 동안 처리하였다. 추출물 또는 혼합물을 모두 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)로 세척한 후, 0.1 M 과산화수소(H2O2)를 처리하여 30분 동안 배양하였다. 다음, WST(water soluble tetrazolium) 용액을 웰 당 10 ㎕씩 첨가하여 37℃, 5% 이산화탄소의 조건에서 3시간 동안 반응시킨 뒤 ELISA 리더기를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. O.D.값은 음성대조군(control, 무처리 세포)을 100%로 하였을 때의 상대적인 세포 생존율을 측정하였다.
실험결과
상승효과 1
과산화수소에 대한 상대적인 세포 생존율을 확인한 결과, 과산화수소만 처리한 양성대조군(H2O2)의 세포 생존율은 음성대조군에 비해 약 50%로 감소하였다. 각각의 토마토 및 레몬추출물을 0.05% 또는 0.1%로 처리하였을 때, 농도 의존적으로 PC12 세포의 생존율이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다.
이와 비교하여 토마토와 레몬 혼합물을 각각의 추출물과 동일한 농도(0.05% 또는 0.1%)로 처리하였을 때, 단독처리 보다 더 높은 생존율이 관찰되어, 토마토 및 레몬의 혼합물은 단독 추출물보다 신경세포보호효과에서 상승효과가 나타냄을 확인하였다(도 1).
상승효과 2
과산화수소에 대한 상대적인 세포 생존율을 확인한 결과 과산화수소만 처리한 양성대조군(H2O2)의 세포 생존율은 음성대조군(control)에 비해 약 51.1%로 감소하였고, 각각 0.05%의 토마토 추출물 또는 레몬 추출물을 처리하였을 때, 각각 50.7% 및 53%의 생존율로, 단독 추출물에서는 신경세포의 생존율이 거의 변화하지 않았다.
반면, 0.05% 토마토 추출물과 0.05% 레몬 추출물을 혼합한 0.1% 혼합물의 경우에는 PC12 세포의 생존율이 정상군과 동일한 생존율을 보여주었다. 즉, 토마토와 레몬 추출물의 혼합물은 서로간의 상호작용을 통해 상승작용이 명확하게 확인되었고, 이는 산화스트레스에 의한 신경세포보호효과가 우수한 것으로 증명되었다(표 1 및 도 2).
- 음성대조군 H2O2 처리군 토마토 추출물(T) 레몬 추출물(L) 혼합물(T:L=1:1)
세포생존율 (%) 100 51.1 50.7 53 106
상승효과 3
과산화수소에 대한 상대적인 세포 생존율을 확인한 결과 과산화수소만 처리한 양성대조군(H2O2)의 세포 생존율은 음성대조군(control)에 비해 약 50~70%로 감소하였다. 각각 토마토 추출물(0.25, 0.1, 0.05%) 또는 레몬 추출물(0.25, 0.1, 0.05%)을 처리 및 건조중량 혼합비율 별(토마토:레몬; 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5)로 처리하였을 때, 혼합비율에 따라서 상승효과는 다르게 나타났다.
혼합비율 별 상승효과 산출식은 다음과 같다.
상승효과(%)=(토마토레몬혼합-H2O2)-{(토마토-H2O2)+(레몬-H2O2)}
혼합비율 별 상승효과는 토마토:레몬(5:1)의 경우 -24.9%, 토마토:레몬(2:1)의 경우 -8.2%, 토마토:레몬(1:1)의 경우 35.1%, 토마토:레몬(1:2)의 경우 13.5%, 토마토:레몬(1:5)의 경우 5.9%로 상승효과가 나타났다. 즉, 이 결과는 토마토와 레몬 추출물의 혼합물은 비율에 따라서 다른 상호작용을 나타내고, 특히, 1:1의 혼합물에서 우수한 상승작용이 나타남을 명확하게 보여준다. 따라서, 1:1의 혼합물에서 산화스트레스에 의한 신경세포보호효과가 우수한 것으로 증명되었다(표 2 및 도 3).
토마토:레몬 혼합비 5:1 2:1 1:1 1:2 1:5
상승효과 (%) -24.9 -8.2 35.1 13.5 5.9
실시예 3: 동물모델에서의 신경전구세포 증가 효과
실험방법
오리엔트바이오(성남시, 한국)에서 암컷 무모쥐(Skh-1)를 구입하였다. 마우스는 우정바이오(수원시, 한국) 동물실험실에서 1주일의 순응과정을 거치고 온도: 23±2℃, 습도: 55±5%를 기준으로 매일 모니터링하며 유지 사육하였다. 설치류 전용 사료(펠렛)를 자유급이하고 음수는 물병을 이용하여 급수하였다.
2개월령의 젊은 대조군 마우스(Y), 12개월령의 노령 대조군 마우스(O), 토마토 추출물 투여군(T, 400 mg/kg), 레몬 추출물 투여군(L, 400 mg/kg), 및 혼합물 투여군1(TL1, 토마토 추출물 200 mg/kg 및 레몬 추출물 200 mg/kg의 혼합물) 에 각각 추출물 또는 대조물을 경구투여하였다. 추출물 또는 대조물을 0.5% 카르복시메틸 셀룰로오스-소듐에 녹이고 마우스당 0.2 ml 용량으로 희석하여 경구투여하였다. 젊은 대조군마우스와 노령 대조군마우스는 동일한 용량의 0.5% 카르복시메틸 셀룰로오스-소듐 용액을 경구투여하였다. 6주 동안 경구투여 후, 뇌 조직을 분리하여 면역조직화학염색법을 통해 신경전구세포의 증가 여부를 평가하였다.
면역조직화학염색법을 실시하기 위해, 먼저, 마우스의 뇌 조직을 40 μm 두께로 절편을 제작한 후, 슬라이드에 고정시켰다. 블로킹 용액으로 상온에서 30분 동안 반응시키고, 1차 항체(Doblecortin(DCX), Santacruz, 1:200)를 4℃에서 하룻밤동안 반응시켰다. 세척 후, 바이오틴이 결합된 2차 항체로 1시간 동안 반응시키고, ABC 키트(vector) 및 DAB 용액(3,3'-diaminobenzidine, Dako)로 순차적으로 반응시켰다. 군당 40개의 뇌 조직 절편에서 염색된 세포를 계수하였다.
결과
마우스의 해마 내 치아이랑(dentate gyrus)토마토 추출물 투여군(T), 레몬 추출물 투여군(L) 및 혼합물 투여군(TL1)은 노령 마우스와 비교하여 DCX 양성 세포의 수가 증가하였다(도 4a 및 4b).

Claims (8)

  1. 토마토 추출물 및 레몬 추출물이 0.8-1.2 : 0.8-1.2 중량 비율로 혼합된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성질환의 예방 또는 치료용 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 토마토 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 추출물인 것인 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 레몬 추출물은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 추출물인 것인 조성물.
  4. 삭제
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 신경퇴행성질환은 알쯔하이머 질환, 치매, 헌팅턴 질환, 파킨슨씨 질환, 근위축성 측삭 경화증, 기억력저하 및 중증근무력증으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환인 것인 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 신경보호(neuroprotective) 활성을 갖는 것인 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
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