KR102124400B1 - Cosmetic composition for cleansing fine dust comprising bioconversion products of asparagus cochinchinensis and soybean embryoas by liquid cultivation of basidiomycetes mycelium - Google Patents

Cosmetic composition for cleansing fine dust comprising bioconversion products of asparagus cochinchinensis and soybean embryoas by liquid cultivation of basidiomycetes mycelium Download PDF

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Abstract

The present invention relates to a cosmetic composition for cleansing skin, comprising a bioconversion product of Asparagus cochinchinensis Merr. and soybean gemmule by a liquid culture process of basidiomycota mycelium and, more specifically, to a cosmetic composition comprising a bioconversion product as an active ingredient, wherein the bioconversion product is excellent in cleaning power of fine dust and has excellent skin moisture content improvement and keratin improvement effects.

Description

담자균류균사의 액상배양공정에 의한 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 포함하는 미세먼지 세정용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR CLEANSING FINE DUST COMPRISING BIOCONVERSION PRODUCTS OF ASPARAGUS COCHINCHINENSIS AND SOYBEAN EMBRYOAS BY LIQUID CULTIVATION OF BASIDIOMYCETES MYCELIUM} COSMETIC COMPOSITION FOR CLEANSING FINE DUST COMPRISING BIOCONVERSION PRODUCTS OF ASPARAGUS COCHINCHINENSIS AND SOYBEAN EMBRYOAS BY LIQUID CULTIVATION OF MYCEDIOM

본 발명은 담자균류균사의 액상배양공정에 의한 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 미세먼지 세정력이 우수하고 피부 수분 함량 개선 효능 및 각질 개선 효능이 우수한 상기 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition for cleaning skin comprising bioconversion products of astronomical dong and soybean embryos by a liquid culture process of basidiomycete mycelia, more specifically, excellent in fine dust cleaning power, improving skin moisture content, improving efficacy and keratin improvement It relates to a cosmetic composition comprising the bioconversion product excellent in efficacy as an active ingredient.

치마버섯(Schizophyllum commune)은 싱어(Singer, R.)의 분류서(The Agaricales in modern taxonomy,1975)에 의하면 분류학상으로 담자균류의 주름버섯목 송이과 치마버섯속에 속하는 균으로, 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸 (β-1,6-branched-β-1,3-glucan)을 세포외로 생산하는 균주이다. 치마버섯은 야생에서 채취할 수 있으며, 다음과 같은 형태학적 특성이나 분류학적 지표에 의해 확인할 수 있다. 치마버섯의 자실체는 대가 없으며 갓의 측면이 기질에 부착하고 크기가 보통 1.0 내지 3.0cm이며, 모양은 부채형 또는 조개형이며 종으로 주름이 있고 말단은 불규칙하게 갈라지고 미세한 털이 덮여 있다. 주름살은 백색이지만 성숙하게 되면 담회색 또는 담자갈색을 띠며, 조직은 건조한 경우 수축하고 수분을 흡수하면 회복된다. 포자문은 백색이고 포자는 4~6 X 1.5~2㎛ 크기의 원추형으로 평활하며 흰색을 띠고 있다. 치마버섯(Schizophyllum commune Fr.)은 고목 등에 자생하는 각질의 버섯으로 더 상세한 섭생 및 모양은 한국버섯도감 및 싱어(Singer)의 분류서에 상세히 기재되어 있다.Schizophyllum commune is a taxonomically classified fungus belonging to the genus Pleurotus eryngii and Skirt fungi according to The Agaricales in modern taxonomy (1975), Beta-1,6 -Branch-beta-1,3-glucan (β-1,6-branched-β-1,3-glucan) is a strain that produces extracellularly. Skirt mushrooms can be collected in the wild and can be identified by the following morphological characteristics or taxonomic indicators. The fruiting body of the skirt mushroom has no stand, the side of the lampshade is attached to the substrate, and the size is usually 1.0 to 3.0cm, the shape is fan-shaped or clam-shaped, wrinkled with bells, and the ends are irregularly cracked and covered with fine hairs. Wrinkles are white, but when they mature, they have a light gray or pale brown color, and the tissue contracts when it is dry and recovers when it absorbs moisture. The spores are white, and the spores are conical, 4~6 X 1.5~2㎛, smooth and white. Schizophyllum commune Fr. is a keratinous mushroom native to old trees, etc. More detailed regime and shape are described in detail in the Korean Mushroom Book and Singer's classification.

치마버섯은 거친 식감으로 인해 중국에서만 일부 식용하는 것으로 알려져 있었으나, 본 버섯에 존재하는 β-1,6-분지-β-1,3-글루칸 구조의 '시조필란(Schizophyllan)'이라는 다당체의 생리활성 즉 보습 효과, 항-종양 활성, 마크로파지 자극, 항생(anti-biotic) 활성 등의 면역학적 효과(Shimizu et al. 1992; Komatsu et al. 1973) 등이 알려지면서 이를 이용하여 약품, 화장품 등의 유효기능성분으로서 다양하게 활용되고 있다. 치마버섯으로부터 유래된 시조필란(schizophyllan)은 베타-1,3-글루칸 주당쇄에 규칙적인 베타-1,6-잔기를 갖는 글루칸이다. 표고버섯(Lentinus edodes), 느타리버섯(Pleurotus ostreatus), 상황버섯(Phellinus linteus) 등의 다른 버섯류로부터 생산된 β-글루칸의 분자량이 수십만 ~ 200만인데 비해 치마 버섯 유래 시조필란(schizophyllan)의 분자량은 200만 ~ 500만으로 상당히 크며, 다른 버섯류의 β-글루칸이 불균일한 당 조성과 구조를 갖는데 비하여 분지된 균일하고 특유한 구조를 갖고 있으며, 세포외로 분비되는 안정한 중성 다당류의 특성을 갖고 있다 [참조: Kenichi T., Saimei T. Synthesis of the repeating units of Schizophyllan. 1986].Skirt mushrooms were known to be edible only in China due to the rough texture, but the bioactivity of the polysaccharide called'Schizophyllan' of the β-1,6-branch-β-1,3-glucan structure present in this mushroom That is, as the immunological effects such as moisturizing effect, anti-tumor activity, macrophage stimulation, and anti-biotic activity (Shimizu et al. 1992; Komatsu et al. 1973) are known, it is effective to use drugs, cosmetics, etc. It is used in various ways as a functional ingredient. Schizophyllan derived from Schizophyllum is a glucan that has regular beta-1,6- residues in the main sugar chain of beta-1,3-glucan. The molecular weight of β-glucan produced from other mushrooms such as shiitake mushrooms (Lentinus edodes), oyster mushrooms (Pleurotus ostreatus), and Phellinus linteus is hundreds of thousands to 2 million, whereas the molecular weight of schizophyllan derived from skirt mushrooms It is considerably larger from 2 million to 5 million, and has a uniform and unique structure with a branched uniform and unique structure compared to β-glucan of other mushrooms having a heterogeneous sugar composition and structure. [Ref: Kenichi T., Saimei T. Synthesis of the repeating units of Schizophyllan. 1986].

치마버섯에서 유래한 다당류인 베타 글루칸의 기능이 알려지면서 순수 분리정제에 대해 다양한 접근방법이 시도되고 있다. 치마버섯 유래의 베타 글루칸을 얻기 위한 방법으로 버섯 자실체는 배양 기간이 매우 길며 배양방법에 따라 조성이 균일하지 않을 가능성이 있으며, 고형 배지에 의한 균사체 배양 또한 배양기간이 길고, 균일하게 이루어지지 않으며, 베타 글루칸을 추출할 때 배지성분에 의한 추출의 영향을 배제할 수가 없다. 이에 따라 치마버섯의 생리활성 성분인 베타 글루칸을 단기간에 대량으로 얻기 위한 방법으로 자실체로부터 얻은 균사체를 액체 배양하는 것이다. 버섯균사체를 이용해서 순수한 고농도 베타 글루칸을 효율적으로 얻기 위한 방법으로는 액체 배양에 의한 생성량 증대가 많이 연구되어 왔으며, 특히 세포 외로 생성되는 베타 글루칸에 대한 연구가 상황버섯, 영지 등을 대상으로 활발히 진행되어 왔다. As the function of beta-glucan, a polysaccharide derived from shiitake, is known, various approaches to pure separation tablets have been attempted. As a method for obtaining beta-glucan derived from skirt mushrooms, the mushroom fruiting body has a very long cultivation period, and there is a possibility that the composition is not uniform depending on the cultivation method, and the mycelium cultivation by the solid medium also has a long cultivation period and is not uniformly made. When extracting beta glucan, the influence of extraction by the medium component cannot be excluded. Accordingly, as a method for obtaining a large amount of beta glucan, a bioactive component of the shiitake, in a short period of time, the mycelium obtained from the fruiting body is liquid cultured. As a method for efficiently obtaining pure high-concentration beta-glucan using mushroom mycelia, a lot of increase in production by liquid culture has been studied, and in particular, research on beta-glucan generated extracellularly is actively conducted on situational mushrooms, ganoderma etc. It has been.

한편, 천문동(Asparagus cochinchinensis (Lour.) Merr.)은 한국, 중국, 일본에서 분포하는 백합과(Liliaceae) 식물로서, 예로부터 건근(덩이뿌리)을 식용 및 약용으로 널리 사용되었으며, 항염증, 이뇨작용, 진해제, 항균, 신경안정, 타액 분비 촉진, 해열 등 다양한 약리작용이 알려져 있다. On the other hand, Asparagus cochinchinensis (Lour.) Merr. is a Liliaceae plant distributed in Korea, China, and Japan, and has been widely used for medicinal and medicinal purposes since ancient times. Various pharmacological effects are known, including action, antitussives, antibacterial, neurostable, salivation, and antipyretic.

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이에 따라 진정제 및 안정제와 같은 부가적인 효과와 함께 간염, 피부염, 천식, 당뇨, 뇌질환과 관련된 염증 질환의 치료에 이용되어 왔다. 19종의 아미노산과 다당류(polysaccharides) 뿐만 아니라 20종의 다기능성 화합물(β-sitosterol, daucosterol, n-ethatriacontanoic acid, palmitic acid, 9-heptacosylene, smilagenin, diosgenin, sarsasapogenin-3-O-β-D-glucoside feeding grapes imidacloprid, 5-methoxy methylfurfural, yame sapogenin, diosgenin-3-O-β-D imidacloprid feeding glucose glycosides, aspacochioside D, iso-agatharesinoside 및 seven steroidal saponins)을 함유한다. 또한 apoptosis를 저해하고, rat의 피부로 유도된 염증을 억제하는 효과가 확인되었고, 뼈의 대사와 관련하여 조골세포의 분화를 촉진하고 파골세포 생성을 억제효과를 가지는 것으로 알려져 있다.Accordingly, it has been used for the treatment of inflammatory diseases related to hepatitis, dermatitis, asthma, diabetes, and brain diseases along with additional effects such as sedatives and stabilizers. 19 amino acids and polysaccharides, as well as 20 multifunctional compounds (β-sitosterol, daucosterol, n-ethatriacontanoic acid, palmitic acid, 9-heptacosylene, smilagenin, diosgenin, sarsasapogenin-3-O-β-D- glucoside feeding grapes imidacloprid, 5-methoxy methylfurfural, yame sapogenin, diosgenin-3-O-β-D imidacloprid feeding glucose glycosides, aspacochioside D, iso-agatharesinoside and seven steroidal saponins). In addition, the effect of inhibiting apoptosis and suppressing inflammation induced by the skin of rats was confirmed, and it is known to promote osteoblast differentiation and inhibit osteoclast production in relation to bone metabolism.

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[천문동의 영양성분][Nutrition component of Tianmun-dong]

대두(Soybean)는 단백질과 지방이 풍부하고, 필수 아미노산인 라이신을 많이 함유하고 있다. 단백질 20~45%, 지방질 18~22%, 탄수화물 22~29%, 회분 4.5~5%이며, 필수 아미노산인 라이신, 시스틴, 트립토판, 글루타민산 등을 함유하며, 그 중에서도 대두배아(Soybean Embryo)에 가장 많은 이소플라본이 함유(2%)되어 있다. 또한 대두에는 사포닌(saponin)이 많이 함유되어 있어 체내에서의 과산화지질 생성을 방지하고 지질대사에 관여하여 노화, 비만방지에 효과적이며, 대두에 포함된 사포닌은 총 5종(Soyasaponin Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, A1, A2)으로 구성되어 있다.Soybeans are rich in protein and fat, and contain a lot of essential amino acids, lysine. Protein 20~45%, fat 18~22%, carbohydrate 22~29%, ash 4.5~5%, contains essential amino acids lysine, cystine, tryptophan, glutamic acid, etc., among them, most suitable for Soybean Embryo It contains a lot of isoflavones (2%). In addition, soybean contains a large amount of saponin, which prevents the formation of lipid peroxide in the body and participates in lipid metabolism to effectively prevent aging and obesity. Saponin contained in soybean has a total of 5 types (Soyasaponin Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ) , A 1 , A 2 ).

본 발명에서는 다양한 효능을 지닌 천연원료인 천문동과 대두배아를 배양 기질로 한 효율적인 생물전환공정(미생물발효전환)을 통하여 수득된 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물을 제공하고자 한다. In the present invention, to provide a cosmetic composition for cleaning the skin comprising a bioconversion product obtained through an efficient bioconversion process (microbial fermentation conversion) using natural raw materials having various effects, astronomical dong and soybean embryo as a culture substrate.

미생물 발효전환과 같은 바이오테크놀로지(biotechnology)를 응용하여 만들어진 물질을 주성분으로 함유한 바이오화장품은 화학기술을 이용해 인공적으로 합성하는 기존의 화장품과는 달리 자연 상태에서 기인한 유기물을 활용하여 피부에 보다 안전하다고 여겨진다. 넓은 의미로 천연재료를 함유한 화장품과 혼용하여 사용되는 경우가 있으나, 미생물 발효·세포융합·대량복제 기술 등을 사용하여 유효성분을 대량 생산하고 안전성과 효능을 높인다는 점에서 차별성이 있다.Biocosmetics that contain substances made by applying biotechnology, such as microbial fermentation conversion, as a main component, are safer for skin by utilizing organic substances derived from natural conditions, unlike conventional cosmetics that are artificially synthesized using chemical technology. It is considered. In a broad sense, it may be used in combination with cosmetics containing natural ingredients, but it is differentiated in that it uses microbial fermentation, cell fusion, mass replication technology, etc. to mass-produce active ingredients and enhance safety and efficacy.

대한민국 공개특허 제10-2017-0025066호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2017-0025066

본 발명은 다양한 효능을 지닌 천연원료인 천문동과 대두배아를 배양 기질로 한 담자균류균사의 액상배양공정 (생물전환공정(미생물발효전환))을 통하여 수득된 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention is a natural raw material having a variety of efficacy cheonmundong and soybean germ as a culture substrate, basidiomycete mycelium liquid culture process (bioconversion process (microbial fermentation conversion)) obtained through the bioconversion product obtained as an active ingredient skin Provided is a cosmetic composition for cleaning.

또한 본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 미세먼지 세정용 화장료 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a cosmetic composition for cleaning fine dust comprising a bio-conversion product obtained by inoculating basidiomycetes mycelia in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos and incubating them.

또한 본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 각질 개선용 화장료 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving keratin comprising a bio-conversion product obtained by inoculating basidiomycete mycelium in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos and incubating them.

또한 본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 피부 수분 함량 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin moisture content, comprising as an active ingredient a bioconversion product obtained by inoculating a basidiomycete mycelium in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the problems mentioned above, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

본 발명은, 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효 성분으로 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for cleaning the skin comprising a bioconversion product obtained by inoculating basidiomycete mycelia in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos and incubating them.

상기 천문동 및 대두배아는 분말 형태로 사용될 수 있다.The astronomical dong and soybean embryos may be used in powder form.

상기 담자균류균사는 액상배지에서 배양된 것일 수 있다.The basidiomycete mycelia may be cultured in a liquid medium.

상기 담자균류균사는 정치용 액상 배지에서 5 ~ 7일간 배양 후, 1~3일간 진탕배양하여 수득된 것일 수 있다.The basidiomycete mycelia may be obtained by culturing in a liquid medium for stationary for 5 to 7 days, followed by shaking and culture for 1 to 3 days.

상기 배양배지는 글루코스, 천문동, 대두배아, 질산나트륨, 인산칼륨 및 황산마그네슘을 포함할 수 있다.The culture medium may include glucose, astronomical dong, soybean embryo, sodium nitrate, potassium phosphate, and magnesium sulfate.

상기 배양배지는 글루코스 65 ~ 75 중량부, 천문동 72 ~ 82 중량부, 대두배아 0.5 ~ 5 중량부, 질산나트륨 15 ~ 25 중량부, 인산칼륨 10 ~ 20 중량부 및 황산마그네슘 1 ~ 7 중량부를 포함할 수 있다.The culture medium contains 65 to 75 parts by weight of glucose, 72 to 82 parts by weight of astronomical dong, 0.5 to 5 parts by weight of soybean embryos, 15 to 25 parts by weight of sodium nitrate, 10 to 20 parts by weight of potassium phosphate, and 1 to 7 parts by weight of magnesium sulfate can do.

상기 배양은 담자균류균사 5 ~ 15 %(v/v)를 접종하여 수행할 수 있다.The culture can be carried out by inoculating 5-15% (v/v) of Basidiomycetes.

상기 배양은 25~ 35 ℃에서 3 ~ 5일간 진탕배양하는 방법으로 수행할 수 있다.The culture may be performed by shaking culture at 25~35 ℃ for 3~5 days.

상기 담자균류균사는 치마버섯, 상황버섯, 차가버섯, 표고버섯, 잎새버섯, 목이버섯 및 눈꽃송이버섯으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있다.The basidiomycete mycelia may include one or more selected from the group consisting of skirt mushrooms, circumference mushrooms, chaga mushrooms, shiitake mushrooms, leafy mushrooms, wood ear mushrooms and snowflake mushrooms.

상기 생물전환산물은 베타글루칸, 아미노산 및 플라보노이드를 포함할 수 있다. The bioconversion product may include beta glucan, amino acids and flavonoids.

상기 생물전환산물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 20 중량%로 포함될 수 있다. The bioconversion product may be included in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.

또한 본 발명은, 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 미세먼지 세정용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for cleaning fine dust comprising bioconversion products obtained by inoculating basidiomycete mycelium in a culture medium containing astronomical dongs and soybean embryos and incubating them.

또한 본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는각질 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving keratin comprising a bio-converted product obtained by inoculating basidiomycete mycelium in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos and incubating it.

또한 본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류 균사를 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 피부 수분 함량 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin moisture content, comprising as an active ingredient a bioconversion product obtained by inoculating a basidiomycete mycelium in a culture medium containing astronomical dong and soybean embryos.

본 발명에 따르면, 천문동과 대두배아를 기질로 한 담자균류균사의 액상배양공정을 이용한 생물전환공정을 통하여 수득한 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 미세먼지 세정력이 우수하며, 각질 개선 효능 및 피부 수분 함량 개선 효능이 우수하다. According to the present invention, it is possible to provide a cosmetic composition for cleaning skin comprising bioconversion products obtained through a bioconversion process using a liquid culture process of basidiomycete mycelium based on astronomical dong and soybean embryos. The cosmetic composition according to the present invention is excellent in fine dust cleaning power, and is excellent in improving keratin and improving skin moisture content.

도 1은 FFD의 회기분석 결과에서 배지성분들이 베타글루칸 생산성 (EPS 값으로 측정)에 미치는 영향과 교호인자의 효과를 나타낸 교호관계 그래프이다(A:대두배아, B:천문동, C:NaNO3, D: KH2PO4).
도 2는 RSM(Response Surface Method) 트라이얼 수(Trial number)에 따른 DCW, EPS, Final pH, Yp/x 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 RSM 실험을 위한 중심합성계획법에 따른 배지요인들이 생산성에 미치는 효과를 3차원 그래프로 도식화 한 것 배지에 따른 영향과 교호작용을 베타글루칸 생산 관점에서 분석한 그래프이다.
도 4는 OFAT(One Factor At a Time) 방법에 따라 천문동 증가에 따른 배지간의 상호작용과 베타글루칸 생산성을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 OFAT(One Factor At a Time) 방법에 따라, 천문동 증가에 따른 총 플라보노이드의 함량 변화를 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 5L 배양기에서 수행되는 천문동/대두배아 생물(발효)전환 공정을 나타내는 것이다.
도 7은 천문동 열수추출물(A) 천문동/대두배아 생물(발효)전환 산물(B), 천문동/대두배아가 첨가되지 않은 발효배양물(C), 대조군(D)의 항균 효과를 분석한 디스크 어세이(Disc assay) 결과를 나타내는 것이다.
도 8은 천연원료인 천문동과 대두배아를 배양 기질로 한 생물전환공정(미생물발효전환)전후의 아미노산 함량 비교결과를 나타내는 것이다(위에서부터 순서대로 아미노산 대조군, 천문동 열수추출물, 천문동/대두배아 생물(발효)전환 산물).
도 9는 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물의 미세먼지 세정력을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 10은 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물의 즉각적 각질 개선 효능 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
도 11은 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물의 피부 수분함량 개선 효능 분석 결과를 나타내는 그래프이다.
1 is an alternating relationship graph showing the effect of media components on beta-glucan productivity (measured by EPS value) and alternating factors in the results of regression analysis of FFD (A: soybean embryo, B: astronomical cavity, C:NaNO 3 , D: KH 2 PO 4 ).
FIG. 2 is a graph showing DCW, EPS, Final pH, and Yp/x analysis results according to RSM (Response Surface Method) trial number.
FIG. 3 is a graph illustrating the effects of media factors on productivity in a three-dimensional graph according to the central synthesis planning method for RSM experiments, and analyzing the effects and interactions of media with beta glucan from the viewpoint of production.
4 is a graph showing the results of analyzing the interaction between media and beta glucan productivity according to the increase in astronomical dong according to the One Factor At a Time (OFAT) method.
5 is a graph showing the result of analyzing the change in the content of total flavonoids with increasing astronomical dong according to the OFAT (One Factor At a Time) method.
Figure 6 shows the astronomical dong / soybean embryonic (fermentation) conversion process performed in a 5L incubator.
7 is a disk fish analyzing the antimicrobial effect of cheonmun-dong hot water extract (A) astronomical dong / soybean germ (fermentation) conversion product (B), astronomical dong / soybean germ not added fermentation culture (C), control (D) It shows the results of the Dis assay.
Figure 8 shows the results of comparison of the amino acid content before and after the bioconversion process (microbial fermentation conversion) using natural raw materials Astronomical dong and soybean embryo as a culture substrate (amino acid control, astronomical dong hydrothermal extract, astronomical dong/soybean embryonic organism in order from the top ( Fermentation) conversion products).
9 is a graph showing the results of analyzing the fine dust cleaning power of a cosmetic composition for cleaning skin containing bioconversion products of astronomical sinus and soybean embryos.
10 is a graph showing the results of an analysis of the effect of immediate keratin improvement of a cosmetic composition for cleaning skin containing bioconversion products of astronomical sinus and soybean embryos.
11 is a graph showing the results of analyzing the skin moisture content improvement efficacy of a cosmetic composition for cleaning skin comprising bioconversion products of astronomical dong and soybean embryo.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 본 발명의 목적, 특징, 장점은 이하의 실시예를 통하여 쉽게 이해될 것이다. 본 발명은 여기서 설명하는 실시예에 한정되지 않고, 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 여기서 소개되는 실시예는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 따라서 이하의 실시예에 의해 본 발명이 제한되어서는 안 된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. The objects, features, and advantages of the present invention will be readily understood through the following examples. The present invention is not limited to the embodiments described herein, and may be embodied in other forms. The embodiments introduced herein are provided to sufficiently convey the spirit of the present invention to those skilled in the art to which the present invention pertains. Therefore, the present invention should not be limited by the following examples.

본 발명은 천문동 및 대두배아를 포함하는 배양배지에 담자균류균사를 접종하여 배양한 배양물로부터 수득된 천문동 및 대두 배아의 생물전환산물(또는 발효전환산물)을 유효성분으로 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에서 생물전환산물과 발효전환산물은 동일한 의미로 사용된다.The present invention is a cosmetic composition for cleaning the skin comprising bioconversion products (or fermentation conversion products) of astronomical dongs and soybean embryos obtained from cultures inoculated with basidiomycete mycelia in a culture medium containing astronomical dongs and soybean embryos as an active ingredient. Provided is a composition. In the present invention, bioconversion products and fermentation conversion products are used in the same sense.

상기 조성물은 미세먼지 세정력이 우수하고, 각질 개선 효능 및 피부 수분 함량 개선 효능이 우수하다. 따라서 미세먼지 세정용 화장료 조성물, 각질 개선용 화장료 조성물, 피부 수분 함량 개선용 화장료 조성물 등으로 적용 가능하다. The composition has excellent fine dust cleaning power, and excellent in improving keratin and improving skin moisture content. Therefore, it can be applied as a cosmetic composition for cleaning fine dust, a cosmetic composition for improving keratin, and a cosmetic composition for improving skin moisture content.

본 발명의 화장료 조성물에서 상기 생물전환산물의 함량은 특별히 제한되지 않으며, 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 20 중량%로 포함되는 것일 수 있다. 상기 생물전환산물이 화장료 조성물 내에 0.0001 중량% 미만인 경우에는 그 용량이 소량이어서 기대하는 효과가 없을 수 있으며, 20 중량%를 초과하는 경우 효과의 변화가 미미할 수 있다.The content of the bioconversion product in the cosmetic composition of the present invention is not particularly limited, and may be included in 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition. When the bioconversion product is less than 0.0001% by weight in the cosmetic composition, the dose may be small and thus may not have the expected effect, and when it exceeds 20% by weight, the change in effect may be insignificant.

본 발명에서 사용되는 용어, "화장료 조성물"은 상기 화합물을 포함하는 조성물로서 그 제형은 어떠한 형태라도 가능하다. 이러한 제형의 예를 들면 상기 조성물을 이용하여 제조된 화장료는 영양크림, 아이크림, 마사지크림, 클렌징 크림과 같은 크림류, 팩류, 영양로션과 같은 로션류, 에센스류, 유연화장수, 영양 화장수와 같은 화장수류, 파우더류, 파운데이션류 및 메이크업 베이스류 등이고, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 이러한 제형 중 어떠한 형태로도 제조되어 상용화될 수 있으며, 상기 예들에 한정되지 않는다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물에는 통상의 화장료 제조 방법으로 제형화할 수 있다.The term "cosmetic composition" used in the present invention is a composition containing the compound, and the formulation may be in any form. For example, in the case of such a formulation, the cosmetic product prepared using the composition includes nutrient cream, eye cream, massage cream, creams such as cleansing cream, packs, lotions such as nutrient lotions, essences, softening lotion, and lotion such as nutrient lotions Types, powders, foundations, makeup bases, and the like, and may be manufactured and commercialized in any form of these formulations to achieve the object of the present invention, and are not limited to the above examples. In addition, the cosmetic composition according to the present invention can be formulated in a conventional cosmetic manufacturing method.

구체적으로 본 발명의 화장료는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 마스크팩, 마스크시트, 각질제거제, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. Specifically, the cosmetic of the present invention is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, essence, pack, mask pack, mask sheet , Exfoliant, soap, shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, emulsion, press powder, rust powder and eye shadow.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분(생물전환산물)에 더하여 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며, 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다. The cosmetic composition of the present invention may include other additives such as excipients and carriers in addition to the above-mentioned active ingredient (bioconversion product), and it is possible to apply and mix the usual ingredients blended into general skin cosmetics as necessary.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 경피 침투 강화제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어, 경피 침투 강화제란 피부의 혈관세포 내로 원하는 성분이 높은 흡수율로 침투할 수 있게 해주는 조성물이다. 바람직하게는 레시틴 화장품에 사용되는 다른 인지질 성분, 리포좀 성분 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.Specifically, the cosmetic composition of the present invention may further include a transdermal penetration enhancer. The term used in the present invention, transdermal penetration enhancer is a composition that allows the desired component to penetrate into the vascular cells of the skin with a high absorption rate. Preferably, other phospholipid components, liposome components, and the like used in lecithin cosmetics are included, but are not limited thereto.

또한, 유상 성분으로서 주로 사용될 수 있는 오일로는 식물성 오일, 광물성 오일, 실리콘유 및 합성유 중에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로, 미네랄오일, 사이크로메치콘, 스쿠알란, 옥틸도데실 미리스테이트, 올리브 오일, 비티스 비니페라 씨드 오일, 마카다미아너트오일, 글리세릴옥타노에이트, 캐스터 오일, 에칠헥실 이소노나노에이트, 디메치콘, 사이크로펜타실록산 및 선플라워 씨드 오일 등을 사용할 수 있다.In addition, one or more selected from vegetable oils, mineral oils, silicone oils and synthetic oils may be used as oils that can be mainly used as the oil component. More specifically, mineral oil, cyclomethicone, squalane, octyldodecyl myristate, olive oil, bitis vinifera seed oil, macadamia nut oil, glyceryl octanoate, castor oil, ethylhexyl isononanoate, dime Chicon, cyclopentasiloxane and sunflower seed oil can be used.

또한, 유화 능력을 보강하기 위하여 계면활성제, 고급 알콜 등을 0.1 내지 5 중량% 첨가할 수 있다. 이러한 계면 활성제로는 비이온 계면활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제, 인지질 등과 같은 통상적인 계면활성제를 사용할 수 있으며, 구체적으로, 소르비탄세스퀴놀리에이트, 폴리솔베이트 60, 글리세릴 스테아레이트, 친유형 글리세릴스테아레이트, 소르비탄 올리에이트, 소르비탄 스테아레이트, 디이에이-세틸포스페이트, 소르비탄스테아레이트/슈크로스코코에이트, 글리세릴스테아레이트/폴리에틸렌글라이콜-100 스테아레이트, 세테아레스-6 올리베이트, 아라키딜알코올/베헤닐알코올/아라키딜 글루코사이드, 폴리프로필렌글라이콜-26-부테스-26/폴리에틸렌글라이콜-40 하이드로제네이티드 캐스터오일 등을 사용할 수 있다. 고급 알콜로는 탄소수가 12 내지 20인 알코올, 예컨대 세틸알코올, 스테아릴 알코올, 옥틸도데칸올, 이소스테아릴 알코올 등을 단독으로 또는 1종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.In addition, 0.1 to 5% by weight of surfactant, higher alcohol, and the like may be added to reinforce the emulsifying ability. Conventional surfactants such as nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, and phospholipids can be used as such surfactants. Specifically, sorbitan sesquinolate, polysorbate 60 , Glyceryl stearate, lipophilic glyceryl stearate, sorbitan oleate, sorbitan stearate, die-cetyl phosphate, sorbitan stearate / sucrose cocoate, glyceryl stearate / polyethylene glycol-100 Stearate, ceteareth-6 oleate, arachidyl alcohol/behenyl alcohol/arachidyl glucoside, polypropylene glycol-26-butes-26/polyethylene glycol-40 hydrogenated castor oil, etc. can be used. have. As the higher alcohol, an alcohol having 12 to 20 carbon atoms such as cetyl alcohol, stearyl alcohol, octyldodecanol, isostearyl alcohol, or the like may be used alone or in combination of one or more.

수상 성분은 수상의 점도 또는 경도를 조절하기 위하여 카보머, 잔탄검, 벤토나이트, 마그네슘알루미늄실리케이트, 셀룰로오스검, 덱스트린 팔미테이트 등과 같은 1종 이상의 점증제를 0.001 내지 5 중량% 더 첨가할 수 있다.The aqueous phase component may further add 0.001 to 5% by weight of one or more thickeners such as carbomer, xanthan gum, bentonite, magnesium aluminum silicate, cellulose gum, dextrin palmitate, etc. in order to adjust the viscosity or hardness of the aqueous phase.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에는 필요에 따라 고급 지방산, 비타민 등의 약효 성분과 자외선 차단제, 산화 방지제(부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산, 토코페릴아세테이드, 부틸레이티드하이드록시톨루엔 등), 방부제(메칠파라벤, 부틸파라벤, 프로필파라벤, 페녹시에탄올, 이미다졸리디닐우레아, 클로르페네신 등), 착색제, pH 조절제(트리에탄올아민, 씨트릭애씨드, 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등), 보습제(글리세린, 솔비톨, 프로필렌 글라이콜, 부틸렌 글라이콜, 헥실렌 글라이콜, 디글리세린, 베타인, 글리세레스-26, 메칠글루세스-20 등), 윤활제 등의 성분을 더 첨가할 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention, if necessary, high-level fatty acids, vitamins, and other active ingredients, sunscreens, and antioxidants (butyl hydroxyanisole, propyl gallic acid, elisoric acid, tocopheryl acetate, butylated hydroxy Toluene, etc.), preservatives (methylparaben, butylparaben, propylparaben, phenoxyethanol, imidazolidinylurea, chlorphenesin, etc.), colorants, pH adjusters (triethanolamine, citric acid, citric acid, sodium citrate, malic acid, Sodium malate, fumaric acid, sodium malate, succinic acid, sodium succinate, sodium hydroxide, sodium hydrogen phosphate, etc., moisturizers (glycerin, sorbitol, propylene glycol, butylene glycol, hexylene glycol, diglycerin , Betaine, glycereth-26, methylglucose-20, etc.), lubricants, and other components can be further added.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부에 필수 영양소를 보조적으로 제공할 수 있는 물질을 추가로 포함하는데, 바람직하게는 천연향, 화장품향, 또는 한약재가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 보조제를 함유할 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention further includes a substance capable of supplementally providing essential nutrients to the skin, and may preferably contain auxiliaries including but not limited to natural, cosmetic, or herbal medicines. have.

본 발명은 다양한 효능을 지닌 천연원료인 천문동과 대두배아를 배양 기질로 효율적인 생물전환공정 (또는 발효전환공정)을 개발하고 천문동과 대두배아의 효능성분과 치마버섯(Schizophyllum commune)이 생산하는 β-글루칸(β-glucan)의 생산성을 극대화한 복합기능성 소재인 생물(발효)전환산물을 제조하여 화장료 조성물에 적용하였다.The present invention develops an efficient bioconversion process (or fermentation conversion process) of natural raw materials having various effects, astronomical dong and soybean embryo, as a culture substrate, and β- produced by the effective components of astronomical dong and soybean embryo and skirt mushroom ( schizophyllum commune ). A biological (fermentation) conversion product, which is a composite functional material that maximizes the productivity of glucan (β-glucan), was prepared and applied to a cosmetic composition.

본 발명에 따른 생물전환공정 (또는 발효전환공정)은, 천문동과 대두배아의 효능성분과 담자균류균사가 생산하는 β-글루칸(glucan)의 생산성을 극대화할 있다. 더욱 구체적으로 미생물(Schizophyllum commune)의 생리적 기능을 이용해 물질의 화학적인 변화를 이루는 생물전환시스템을 통해 한방 천연물(천문동 및 대두배아)에 함유된 효능 물질의 독성 완화 및 효능을 개선하는 동시에 생물배양공정을 통해 대사산물을 조절함으로써 미생물이 생산하는 유효성분인 베타글루칸을 고생산할 수 있다는 점에서 장점이 있다.The bioconversion process (or fermentation conversion process) according to the present invention can maximize the productivity of β-glucan produced by Efficacy components and Basidiomycete mycelia of astronomical dong and soybean embryo. More specifically, through the bioconversion system that achieves chemical changes of substances using the physiological functions of microorganisms ( Schophophlumlum commune ), it improves the toxicity and efficacy of the substances contained in herbal natural products (astronomical dong and soybean embryos) while simultaneously improving the efficacy and biocultivation process By controlling the metabolite through, there is an advantage in that beta-glucan, an active ingredient produced by microorganisms, can be produced high.

본 발명에서 사용되는 치마버섯(Schizophyllum commune)은 담자균으로 독성이 전혀 없으며 세포외 바이오폴리머(extracellular biopolymer)인 베타-1,6-분지-베타-1,3-글루칸(schizophyllan)을 생산한다. 치마버섯 유래 베타글루칸인 시조필란(schizophyllan)은 비이온성 수용성 다당체로서 평균분자량 2~5 X 106 Da이며 항암능력, 항생력, 성장인자 촉진, 보습력, 콜라겐 생성 촉진, 면역강화 기능이 있다. 시조필란(Schizophyllan) 화학구조는 다음과 같다. Schizophyllum commune used in the present invention is a basidiomycete and has no toxicity and produces beta-1,6-branch-beta-1,3-glucan (schizophyllan), an extracellular biopolymer. Schizophyllan, which is a beta-glucan derived from skirt mushroom, is a nonionic water-soluble polysaccharide with an average molecular weight of 2 to 5 X 10 6 Da, and has anti-cancer capacity, anti-vibration, growth factor promotion, moisturizing ability, collagen production promotion, and immune-enhancing functions. The chemical structure of Schizophyllan is as follows.

Figure 112019130414692-pat00003
Figure 112019130414692-pat00003

치마버섯은 의약품산업(면역조절제, 항암제, 약품전달물질, 피부염/상처 치료제 등), 화장품산업(보습제, 연화제, 경화제 등) 또는 사료산업(면역강화용 동물사료첨가제 등) 등에 적용될 수 있다.Skirt mushrooms can be applied to the pharmaceutical industry (immune modulators, anti-cancer agents, drug delivery materials, dermatitis/wound treatments, etc.), cosmetics industry (moisturizer, softener, hardener, etc.) or feed industry (immune-enhancing animal feed additives, etc.).

본 발명에서는 천문동과 대두배아의 효능성분과 β-글루칸(glucan)을 고효율로 생산할 수 있는 생물(미생물발효)전환 배지를 통계학적 방법 및 다양한 조합 실험을 통해 개발하였다. In the present invention, a biological (microbial fermentation) conversion medium capable of producing efficacious components of β-glucan and β-glucan with high efficiency was developed through statistical methods and various combination experiments.

본 발명의 일 실시예에 따라 최종 개발된 생물전환공정의 경우, 천문동과 대두배아가 첨가되어 있지 않은 대조군(control) 조건에 비해 2~3배 높은 약 20g/L의 베타글루칸 생산성을 보였으며, 단위 세포당 생산성을 나타내는 Yp/x 역시 5배 이상 증가하였다. In the case of the finally developed bioconversion process according to an embodiment of the present invention, it showed a beta-glucan productivity of about 20 g/L, which is 2 to 3 times higher than the control conditions in which astronomical dong and soybean embryo are not added, Yp/x, which shows productivity per unit cell, also increased more than 5 times.

동일 농도의 천문동 열수추출물에 비해 총 아미노산 함량은 약1.5배, 16종의 아미노산 중 티로신(Tyrosine) 알라닌(Alanine) 트레오닌(Threonine)은 약 1.3~1.7배, 류신(Leucine) 페닐알라닌(Phenylalanine) 글리신(Glycine)은 대략 2.6~3배 증가하였으며, 특히 메티오닌(Methionine)의 경우 10배로 다른 아미노산에 비해 높은 증가율 보였으며, 총 플라보노이드 함량 또한 눈에 띄게 증가한 것을 확인하였다.Total amino acid content is about 1.5 times that of the same concentration of astronomical extract from Astronomical dong, tyrosine alanine threonine of 16 amino acids is about 1.3 to 1.7 times, leucine phenylalanine (Phenylalanine) glycine ( Glycine) increased by approximately 2.6 to 3 times, especially in the case of Methionine, which was 10 times higher than that of other amino acids, and the total flavonoid content was also noticeably increased.

필수아미노산을 축으로 한 이러한 아미노산 함량의 증가는 면역력을 비롯한 모발이나 피부 등의 건강상태 개선뿐만 아니라, 비만이나 알츠하이머 같은 특정 질병 치료에 도움이 되는 기능성 소재로써의 가능성을 확인해주는 결과라 할 수 있다.This increase in amino acid content based on essential amino acids can be said to be the result of confirming the potential as a functional material to help treat specific diseases such as obesity and Alzheimer's disease, as well as improving health conditions such as immunity and hair and skin. .

따라서 본 발명에 따라 제조된 생물(발효)전환 산물은 식품 및 화장품 뿐 아니라 의약외품 및 의약품의 기능성소재로의 적용이 가능하다. Therefore, the biological (fermentation) conversion products manufactured according to the present invention can be applied not only to food and cosmetics, but also to quasi-drugs and pharmaceuticals as functional materials.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에서는, 글루코스 69.6 g/ℓ, 천문동 건조분말 77 g/ℓ, 대두배아 건조분말 1.5 g/ℓ, 질산나트륨20 g/L, 인산칼륨 15g/ℓ 및 황산마그네슘 2 g/ℓ를 포함하는 생물(발효)전환용 배양배지를 제공할 수 있다.In order to achieve the above object, in one embodiment of the present invention, glucose 69.6 g/ℓ, astronomical dong dry powder 77 g/ℓ, soybean germ dry powder 1.5 g/ℓ, sodium nitrate 20 g/L, potassium phosphate 15 g/ℓ And it may provide a culture medium for biological (fermentation) conversion containing 2 g / ℓ of magnesium sulfate.

<실시예> 생물(발효)전화공정을 위한 치마버섯 균사체 액상배양법<Example> Liquid Culture Method of Skirt Mushroom Mycelium for Biological (Fermentation) Conversion Process

(1) 천문동 및 대두배아의 원재료 준비단계(1) Preparation stage of raw materials for astronomical dong and soybean embryo

세척 및 절단 작업을 마친 원재료 각각은 대량건조가 가능한 열풍건조기에서 건조 작업을 수행한 후 조분쇄 및 미분쇄 공정을 거쳐 각각의 천연물 원재료의 분말화 작업을 하여 준비한다.Each of the raw materials that have been washed and cut is prepared by carrying out a drying operation in a hot air dryer capable of mass drying and then pulverizing and pulverizing the raw materials of each natural material.

(2) 발효전환을 위한 치마버섯 균사체 종균배양 단계(2) Cultivation stage of skirt mycelia mycelia for fermentation conversion

한천 배지(감자전분 4g 포도당 20g, 한천 15g, 증류수 1ℓ)에서 성장한 균사체(큐젠바이오텍에서 개발한 베타글루칸 고생산균주인 Schizophyllum commune QG143-1의 균사체를 이용)를 무균적으로 수거한 후, 이를 정치용 액상 배지(감자전분 4g, 포도당 20g) 28 ℃에서 6일간 배양하였다. 이렇게 배양한 균체를 다시 무균적으로 수거하여 동일 성분의 성장배지에 10%(v/v)가 되게 접종한 후 150rpm으로 교반하여 28 ℃에서 2일간 진탕배양하여 발효전환공정의 종균으로 사용하였다.After collecting aseptically the mycelium grown using agar medium (potato starch 4g glucose 20g, agar 15g, distilled water 1ℓ) (using mycelium of high-producing beta-glucan strain Schizophyllum commune QG143-1 developed by Kyugen Biotech) The liquid medium (potato starch 4 g, glucose 20 g) was cultured at 28° C. for 6 days. The cultured cells were collected aseptically and inoculated to 10% (v/v) in the growth medium of the same component, stirred at 150 rpm, and shaken and cultured at 28°C for 2 days to be used as seed for the fermentation conversion process.

생물(발효)전환공정을 위한 본 배양은 종균 10 %(v/v)를 접종하여 28˚C에서 150rpm 4일간 진탕 배양하였다. This culture for biological (fermentation) conversion process was inoculated with 10% (v/v) of seed germs and shake cultured at 28°C for 150 rpm for 4 days.

(3) 천문동 및 대두배아의 생물(발효)전환공정 개발 단계(3) Development stage of biological (fermentation) conversion process of astronomical dong and soybean embryo

생물(발효)전환을 위한 치마버섯 배양배지를 최적화하고자 천문동 및 대두배아를 첨가하여 통계학적인 방법을 바탕으로 최적화조건을 결정하였다. 이를 위해 OFAT(One Factor At a Time) 방법과 Plackett-Burman design에 의한 배지성분 최적화 그리고 완전요지배치법(Full Factorial design,FFD)과 반응표면분석법(Response surface method,RSM)에 의한 배지농도 최적화를 수행하였다. Optimization conditions were determined based on statistical methods by adding astronomical dong and soybean embryos in order to optimize the culture medium of the shiitake mushroom for bio (fermentation) conversion. To this end, the medium factor optimization by the One Factor At a Time (OFAT) method and the Plackett-Burman design and the optimization of the medium concentration by the Full Factorial design (FFD) and Response surface method (RSM) are performed. Did.

본 발명의 일 실시예에서는 OFAT(One Factor At a Time) 방법과 Plackett-Burman 디자인(design) 등을 통하여 천문동과 대두배아의 생물(발효)전환 공정에 필요한 나머지 배양배지 성분인 탄소원(글루코스)과 질소원(질산나트륨) 그리고 무기염류(인산칼륨, 황산마그네슘)를 경제성과 생산성을 고려하여 선택하였다. 이후, 통계적 배지 최적화 방법인 완전 요인 배치법(full factorial design, FFD)과 반응표면분석법(response surface method, RSM)을 통하여 치마버섯을 이용한 천문동/대두배아 발효전환산물의 유효성을 높이는 동시에 약용버섯의 유효성분인 베타글루칸을 고생산할 수 있는 최적의 배지농도를 다음과 같이 결정하였다: 글루코스 69.6g/ℓ, 천문동 건조분말 77 g/ℓ, 대두배아 건조분말 1.5 g/ℓ, 질산나트륨20g/L, 인산칼륨 15g/ℓ 및 황산마그네슘 2 g/ℓ. In one embodiment of the present invention, through the OFAT (One Factor At a Time) method and the Plackett-Burman design, etc., the remaining source of the culture medium required for the bio (fermentation) conversion process of astronomical dong and soybean embryo (glucose) and Nitrogen sources (sodium nitrate) and inorganic salts (potassium phosphate, magnesium sulfate) were selected considering economics and productivity. Thereafter, through the use of full factorial design (FFD) and response surface method (RSM), which are statistical media optimization methods, the effectiveness of medicinal mushrooms is enhanced while enhancing the effectiveness of astronomical dong/soybean fermentation conversion products using skirt mushrooms. The optimal medium concentration for high production of the component beta-glucan was determined as follows: glucose 69.6 g/l, astronomical dong dry powder 77 g/l, soybean embryo dry powder 1.5 g/l, sodium nitrate 20 g/L, phosphoric acid 15 g/L potassium and 2 g/L magnesium sulfate.

1. 생물(발효)전환공정을 위한 치마버섯 배양배지 성분조사 1. Investigation of the composition of the skirt culture medium for the biological (fermentation) conversion process

천문동/대두배아 발효전환산물의 생산배지 최적화를 위하여 탄소원 4종(Glucose, Maltose, Sucrose, Lactose), 질소원 5종(대두배아, Yeast extract, Soytone, 천문동, NaNO3), 무기염류 2종(KH2PO4, MgSO4)을 포함한 총 12가지의 배지성분의 PBD(Plackett-Burman Design) 실험을 통해 EPS(베타글루칸 생산성), Yp/x, 총 플라보노이드(total flavonoid) 값에 긍정적인 영향을 주는 배지성분을 확인하였으며, 또한 OFAT(One Factor At a Time)방법에 의한 조합 실험을 수행하여 대량생산을 위한 산업용 저가배지에 적절한 배지조합을 확인하였다. 이들 결과를 바탕으로 경제성이 있는 저가 원료인 글루코스(glucose)를 탄소원으로 하여 통계학적 실험방법에 하나인 FFD(Full Factorial Design)법을 이용하여 각 배지성분의 효과와 배지 간의 상호작용을 확인하였다. To optimize the production medium of astronomical dong/soybean embryo fermentation conversion products, 4 carbon sources (Glucose, Maltose, Sucrose, Lactose), 5 nitrogen sources (soybean embryo, Yeast extract, Soytone, astronomical dong, NaNO3), 2 inorganic salts (KH 2 A medium that positively affects the EPS (beta-glucan productivity), Yp/x, and total flavonoid values through PBD (Plackett-Burman Design) experiments with a total of 12 media components including PO 4 and MgSO 4 ) The ingredients were confirmed, and a combination experiment according to the One Factor At a Time (OFAT) method was performed to confirm a suitable media combination for low-cost industrial medium for mass production. Based on these results, the effect of each medium component and the interaction between the mediums were confirmed by using the FFD (Full Factorial Design) method, which is one of the statistical experimental methods, using glucose, an economical low-cost raw material, as a carbon source.

2. FFD(Full Factorial Design)를 통한 치마버섯-천문동 생산배지 성분조사 2. Investigation of the ingredients of the production medium of skirt mushroom-Astronomical dong through Full Factorial Design (FFD)

FFD(Full Factorial Design)는 통계적 배지 최적화 방법 중 각 요인(factor)간의 상호작용을 확인할 수 있는 대표적인 실험법으로 배지조성의 변화가 베타글루칸의 생산성과 총 플라보노이드(Total flavonoid)값에 미치는 영향을 체계적으로 분석하였다.FFD (Full Factorial Design) is a representative experimental method that can confirm the interaction between each factor among statistical media optimization methods, and systematically affects the effect of media composition on beta-glucan productivity and total flavonoid value. Analysis.

FFD는 요인(factor)과 수준(level)의 세부조합반응(response)과 요인factor의 선형모형을 가정한 1차 회귀모형의 해석을 통해 최적조건을 찾아가는 방법으로 n은 수준의 수, k는 요인의 수를 나타내며 실험횟수는 (nk)로 결정된다. 본 발명의 일 실시예에서는 (-1)low level과 (+1)high level 2가지 수준으로 가지고 대두배아, 천문동, NaNO3, KH2PO4 4가지의 인자(factor)로 (2k)trials (실험 횟수), 즉 16(24)+2(center point)실험을 수행하였다. FFD is a method of finding the optimal condition through the analysis of a first-order regression model that assumes a linear model of factors and factors and a sub-combination of factors and levels, where n is the number of levels and k is the factor. The number of experiments is determined by (nk). In one embodiment of the present invention, (1) low level and (+1) high level have two levels, soybean embryo, astronomical dong, NaNO 3 , KH 2 PO 4 with 4 factors (2 k )trials (Number of experiments), that is, 16(2 4 )+2(center point) experiments were performed.

ANOVA 분석을 수행한 결과는 P 값(value)이 <0.0001로 매우 신뢰할 수 있는 수준의 결과로 이는 실험 결과가 99.999이상 정확하다는 것을 의미한다 (표1). The result of ANOVA analysis is a very reliable level with a P value of <0.0001, which means that the experimental result is more than 99.999 accurate (Table 1).

[표 1][Table 1]

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FFD 회귀분산 분석결과에서 배지성분들이 베타글루칸 생산성(EPS 값으로 측정) 에 미치는 영향과 교호인자의 효과를 나타낸 교호관계 그래프(interaction graph, 도 1)를 보면 천문동과 대두배아의 첨가농도와 상관없이 NaNO3의 첨가 농도를 높일수록 생산성이 증가되며, 천문동과 대두배아의 농도가 일정 할 때 NaNO3와 KH2PO4의 첨가량이 높을수록 생산성이 증가되는 것을 확인할 수 있었다.Looking at the interaction graph (Fig. 1) showing the effect of media components on beta-glucan productivity (measured by EPS value) and alternating factors in the FFD regression analysis results, regardless of the concentration of astronomical dong and soybean embryo, the the higher the concentration of NaNO 3 NaNO 3 and the higher the amount of addition of KH 2 PO 4, and to increase the productivity, the concentration of the soybean embryo cheonmundong schedule was confirmed that the increase in productivity.

표 2를 통해 NaNO3와 KH2PO4가 모두 낮은 수준으로 첨가된 1~4번 조합과 NaNO3와 KH2PO4가 모두 높은 수준으로 첨가된 13~16번 조합을 살펴보면 1~4번 조합은 pH 4.39~4.52, 베타글루칸 생산성은 10.4~11.75g/L을 13~16번 조합에서는 pH 3.99~4.23, 17.89~20.35g/L의 베타글루칸 생산성을 보이는 것을 확인할 수 있었다. NaNO3와 KH2PO4 두 성분 모두 pH 완충기능이 있는 배지 성분으로 천연물유래 원료인 천문동과 대두배아 첨가 시 나타나는 pH 변화의 조절이 베타글루칸 생산성에 매우 밀접하게 영향을 주는 것으로 판단된다. 이는 앞서 제시한 교호관계 그래프 (interaction graph) 결과에서 나타난 경향성과 일맥상통하는 결과라 할 수 있다. Looking at Table 2, combinations 1 to 4 in which both NaNO 3 and KH 2 PO 4 were added at a low level and combinations 13 to 16 in which both NaNO 3 and KH 2 PO 4 were added at a high level were considered as combinations 1 to 4 Silver pH 4.39 ~ 4.52, beta glucan productivity 10.4 ~ 11.75g / L 13 ~ 16 combinations of pH 3.99 ~ 4.23, 17.89 ~ 20.35g / L beta glucan productivity was confirmed that can be seen. Both of NaNO 3 and KH 2 PO 4 are medium components with pH buffering function, and it is thought that the regulation of pH change when adding natural product-derived raw materials, astronomical dong and soybean embryo, affects beta-glucan productivity very closely. This can be said to be in line with the tendency shown in the results of the interaction graph presented above.

[표 2][Table 2]

Figure 112019130414692-pat00005
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이러한 결과를 통해 배지 성분으로 첨가된 천문동에 의해 감소된 pH를 NaNO3와 KH2PO4가 보정해주는 중요한 인자(factor)임을 확인하였고, 이에 따라 NaNO3와 KH2PO4의 농도조절 및 발효전환 산물의 유효성분을 증가시킬 수 있는 생물(발효)전환용 배지농도 최적화를 위해 RSM(Response Surface Method)을 수행하였다. Through these results, it was confirmed that NaNO 3 and KH 2 PO 4 are important factors for correcting the pH decreased by astronomical dong added as a medium component, and accordingly, concentration adjustment and fermentation conversion of NaNO 3 and KH 2 PO 4 Response Surface Method (RSM) was performed to optimize the medium concentration for bio (fermentation) conversion that can increase the active ingredient of the product.

이에 따라 RSM은 NaNO3와 KH2PO4가 높은 수준(high level)인 20g/L로 첨가된 13~16번 조합 중 베타글루칸 생산성(EPS 값으로 측정)이 20.35g/L, Yp/x 값이 2.84로 가장 높게 나타난 16번 조합을 센터 포인트(center point)로 설정하여 수행하였다.Accordingly, RSM has a beta-glucan productivity (measured by EPS value) of 20.35 g/L and Yp/x value among combinations 13 to 16 in which NaNO 3 and KH 2 PO 4 are added at a high level of 20 g/L. This was performed by setting the combination number 16, which was the highest with 2.84, as the center point.

3. RSM(Response Surface Method)을 통한 치마버섯-천문동 생산배지 최적화3. Optimizing the production medium of skirt mushroom-cheonmun-dong through Response Surface Method (RSM)

RSM(반응표면분석법)은 여러 가지 실험 인자들, 즉 독립변수(배지성분)의 상호 작용에 따른 종속변수(EPS 생산성)의 변화에 대하여 최대반응치를 나타내는 최적조건(최적배지농도)을 찾아내기 위해 이용되는 통계적인 분석방법이다. RSM을 통해 신속하게 최적조건을 결정할 수 있으며 여러 조건에서 상호작용 파악이 가능하다. 또한 소규모의 실험으로 실험하지 않은 부분에서의 최적 지점도 예측 가능한 장점을 가지고 있다.The Response Surface Method (RSM) is used to find the optimal condition (optimal medium concentration) that represents the maximum response to the change of the dependent variable (EPS productivity) due to the interaction of various experimental factors, that is, the independent variable (medium component). It is a statistical analysis method used. With RSM, it is possible to quickly determine the optimal conditions and to understand the interaction in various conditions. In addition, the optimal point in the part that has not been tested by small-scale experiments has a predictable advantage.

반응표면분석법은 반응에 대한 요인 수준의 최적조건을 찾을 때 비선형모형을 가정한 2차 회귀모형의 최적 조건 해석 즉 독립변수(배지성분)의 상호 작용에 따른 종속변수(EPS 생산성)의 변화에 대하여 최대 반응치를 나타내는 최적조건(최적배지농도)을 찾아내기 위해 이용되는 통계적인 분석방법이다. 이러한 RSM은 소규모의 실험으로 실험하지 않은 부분에서의 최적 지점도 예측을 통해 신속하게 최적조건을 결정할 수 있으며 여러 조건에서 상호작용 파악이 가능하다는 장점을 가지고 있으며, 실험디자인에 따라 박스-벤켄계획법(Box-Behnken Design)과 요인배치법(Factorial Design)의 요인실험점에 중심점과 축점의 실험점을 추가한 중심합성계획법(central composite design)으로 세분화 된다. The response surface analysis method analyzes the optimal conditions of the second-order regression model, which assumes a nonlinear model when finding the optimal conditions at the factor level for the response, that is, changes in the dependent variable (EPS productivity) due to the interaction of independent variables (medium components). This is a statistical analysis method used to find the optimal condition (optimal medium concentration) that represents the maximum response value. These RSMs have the advantage of being able to quickly determine the optimal conditions by predicting the optimum point in the non-experimental part as a small-scale experiment, and have the advantage of understanding the interaction in various conditions. It is subdivided into a central composite design method that adds the center point and the experimental point of the axis point to the factor experiment point of the Box-Behnken Design and Factorial Design method.

본 연구진은 반응표면분석법을 용이하게 하기 위한 실험계획법으로 2K요인 실험에 중심점 (center points)과 축점 (axial points)을 추가시킨 중심합성계획법 (central composite design)(CCD)을 사용하였다. 중심합성계획법에서는 중심점 (n0)의 수는 제한이 없으며(본연구에서는 4개의 중점사용), 축점 (α)의 수는 2k로서 본 실험에서는 4가지의 배지 성분 농도를 조사하고자 하였기 때문에 총 8개의 축점 실험을 수행하였다. 총 실험횟수는 2K+2k+n0 =24+2*4+n0 가 되므로 28개의 선정된 조건에서 실험을 실시하였다. The researchers have used the response surface experimental design as to make the method easily center the 2 K factor experiments (center points) and the central composite design was added to the axis point (axial points) (central composite design ) (CCD). In the central synthesis planning method, the number of center points (n 0 ) is not limited (four key points are used in this study), and the number of axial points (α) is 2k. Dog axial point experiments were performed. The total number of experiments is 2 K +2k+n 0 =2 4 +2*4+n 0 , so the experiment was conducted under 28 selected conditions.

중심합성계획법에 의거해 얻은 결과는 Design-Expert 6.0 program을 이용해 통계적으로 분석하여 회귀방정식을 얻음으로써 각각의 배지성분들에 대한 상호 영향을 검토하고 베타글루칸 생산성(EPS 값으로 측정)을 위한 최적 배양 조건을 구하였다. 이 때 전체 모델(model)에 대한 유의성은 ANOVA 분석 시 주어지는 P값에 의해 결정되며, 일반적으로 P<0.05일 때 그 유의성이 인정된다. 최적배양 조건, 생물(발효)전환 배지의 최적 농도는 2차 다항식의 f 값이 최대로 되는 지점을 3차원 반응표면도와 컨투어 플롯(contour plot)을 이용하여 분석하였다. The results obtained by the central synthesis planning method are analyzed statistically using the Design-Expert 6.0 program to obtain a regression equation to examine the mutual effects on each medium component, and optimal culture conditions for beta-glucan productivity (measured by EPS value). Was obtained. At this time, the significance for the entire model is determined by the P value given in the ANOVA analysis, and is generally recognized when P<0.05. The optimum culture conditions and the optimum concentration of the biological (fermentation) conversion medium were analyzed using a 3D response surface map and a contour plot at the point where the f value of the second-order polynomial was maximized.

그 결과 P값이 0.0001인 유의한 결과를 얻을 수 있었으며 각 배지 성분의 영향과 교호작용까지 설명해주는 2차 다항식을 얻을 수 있었다(표3). As a result, a significant result with a P value of 0.0001 was obtained, and a second-order polynomial that explained the effects and interactions of each medium component was obtained (Table 3).

[표 3][Table 3]

Figure 112019130414692-pat00006
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[표 4][Table 4]

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실험결과, NaNO3가 높은 수준(high level)으로 첨가된 13~16번 조합에서 높은 생산성을 확인할 수 있었으며, 그 중 15번 조합의 EPS 함량이 25g/L로 가장 높았으며, 14번 조합에서의 Yp/x값이 3.97로 높았다. 전체적으로 총 플라보노이드(Total flavonoid)는 천문동이 첨가되지 않은 대조군(control) 배지에 비해 천문동을 첨가한 배지에서 높은 것으로 나타났다. As a result of the experiment, high productivity was confirmed in combinations 13 to 16 in which NaNO 3 was added at a high level. Among them, the EPS content of combination 15 was the highest at 25 g/L, and in combination 14 The Yp/x value was as high as 3.97. Overall, the total flavonoid was found to be higher in the medium to which the astronomical sinus was added compared to the control medium to which no astronomical sinus was added.

2차 다항식을 통해 확인한 그래프를 통해 배지에 따른 영향과 교호작용을 베타글루칸 생산 (EPS 값으로 측정)관점에서 살펴보면, 대두배아와 천문동은 반비례적으로 상호작용하며 생산성에 영향 주었으며, KH2PO4와 NaNO3의 농도가 높은 수준을 유지할 때 대두배아의 첨가량이 낮을수록 생산성이 증가되었다. 또한 앞서 수행한 결과와 마찬가지로 천문동과 NaNO3는 서로 매우 밀접하게 상호작용하며 직접적으로 생산성에 큰 영향을 주는 것을 확인할 수 있었다. From the perspective of beta-glucan production (measured by EPS value) through the graph confirmed through the second-order polynomial, soybean embryos and astronomical dongs interact inversely and affect productivity, and KH 2 PO4 and When the concentration of NaNO 3 was maintained, productivity increased as the amount of soybean germ added was low. In addition, as in the previous results, it was confirmed that astronomical dong and NaNO 3 interact very closely with each other and directly affect productivity.

천문동과 NaNO3 컨투어 플롯(contour plot)을 보면 NaNO3가 중심 포인트 보다 낮은 농도에서는 천문동 농도에 매우 민감하게 영향을 받아 곡선 간격이 매우 좁았지만 20g/L이상의 농도에서는 천문동과의 상호작용이 낮아지고 생산성에도 영향을 적게 주는 것으로 확인 되었다. 이를 통해 질소원이면서 pH 완충작용을 하는 NaNO3의 최적 농도가 0과 -1 사이의 자리 할 것으로 예측되며 반응표면도의 최대 곡면이 천문동 -2에서 +2까지 넓은 탄원을 나타내는 것으로 보아 천문동의 농도 증가에 따른 생산성을 확인해 볼 필요가 있을 것으로 판단된다. The contour plot of Nano 3 and NaNO 3 shows that NaNO 3 is very sensitive to the concentration of astronomical sinus at concentrations lower than the central point, so the curve interval is very narrow, but at 20 g/L or higher, the interaction with astronomical sinus decreases. It was also found to have a small impact on productivity. Through this, the optimum concentration of NaNO 3 , which is a nitrogen source and pH buffering, is expected to be between 0 and -1, and the maximum curved surface of the reaction surface map shows a wide pleading from -2 to +2, which increases the concentration of astronomical dong. It is necessary to check the productivity according to the.

따라서 최대 농도가 20g/L인 NaNO3의 3가지 조건과 천문동을 고농도로 첨가한 OFAT(One Factor At a Time) 조합 실험을 통해 천문동 증가에 따른 배지간의 상호작용과 생산성을 확인 해 보았다. Therefore, the interaction and productivity of the medium with increasing astronomical dong were confirmed by experiments of three conditions of NaNO 3 with a maximum concentration of 20 g/L and one factor at a time (OFAT) combination experiment with high concentration of astronomical dong.

천문동 17, 47, 77, 107, 137g/L와 NaNO3 10, 15, 20g/L를 조합으로 계획했으며, 나머지 배지 성분은 Glucose 69.6g/L, KH2PO4 15g/L, MgSO4 2g/L로 고정하여 수행하였다. 그 결과 NaNO3가 20g/L 첨가된 trial에서 높은 베타글루칸 생산성을 보였으며, 천문동의 첨가량이 증가할수록 총플라보노이드 함량도 증가하는 경향을 보였다. 특히, 생물(발효)전환 공정을 수행하기 전 추출물의 총플라노이드 함량에 비해 생물(발효)전환 산물의 총플라보노이드 함량이 매우 증가하였다.17, 47, 77, 107, 137 g/L of astronomical dong and 10, 15, and 20 g/L of NaNO 3 were planned in combination, and the remaining medium components were Glucose 69.6 g/L, KH 2 PO 4 15 g/L, MgSO 4 2 g/L It was carried out by fixing with L. As a result, in the trial in which NaNO 3 was added at 20 g/L, beta-glucan productivity was high, and the total flavonoid content tended to increase as the amount of astronomical copper increased. In particular, the total flavonoid content of the bio (fermentation) conversion product was significantly increased compared to the total flanoid content of the extract before performing the bio (fermentation) conversion process.

[표 5][Table 5]

Figure 112019130414692-pat00008
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베타글루칸의 생산성이 가장 높았던 6번, 9번 중 총 플라보노이드 함량이 0.75로 비교적 높았던 9번 조합을 결정하여 발효기에서의 생산성과 생물(발효)전환 공정 전후의 아미노산 함량 변화 및 항균효과 등을 비교하여 최적화된 조건에서의 생물(발효)전환산물의 유효성 여부를 확인하였다. By determining the combination of the 9th, which had a relatively high total flavonoid content of 0.75 among the 6th and 9th, which had the highest productivity of beta-glucan, comparing the productivity in the fermenter with the amino acid content before and after the bio (fermentation) conversion process and antibacterial effects The effectiveness of biological (fermentation) conversion products under optimized conditions was confirmed.

본 연구진은 이러한 과정을 통해 천문동/대두배아 생물(발효)전환을 위한 배양기내 배양특성 연구 및 공정 전후 물질을 비교, 분석을 할 수 있었으며, 생물(발효)전환산물인 개발소재의 우수성을 확인하였다. Through this process, the researchers were able to compare and analyze the culture characteristics in the incubator for astronomical dong/soybean embryonic (fermentation) conversion and before and after the process, and confirm the superiority of the development material as a biological (fermentation) conversion product. .

5L 배양기에서의 천문동/대두배아 생물(발효)전환 공정을 수행하기 위하여 (주)큐젠바이오텍에서 개발한 베타글루칸 고생산균주인 Schizophyllum commune QG143-1의 균사체를 PDB(Potato Dextrose Broth)배지에서 성장배양시킨 후 본 발명의 일 실시예에서 제공하는 생물(발효)전환용 배양배지(글루코스 69.6 g/ℓ, 천문동 건조분말 77 g/ℓ, 대두배아 건조분말 1.5 g/ℓ, 질산나트륨 20 g/L, 인산칼륨 15 g/ℓ 및 황산마그네슘 2 g/ℓ)가 포함된 생물배양기에 접종하였다. 생물배양기의 70%인 3.5L를 조업부피로 하여 교반속도(agitation speed) 150rpm, 가스 퍼징 속도(gas purging rate) 1vvm을 유지하며 28℃에서 4일간 배양하였다(도 6). The mycelium of Schizophyllum commune QG143-1, a beta-glucan high-producing strain developed by QGEN Biotech, was grown and cultured in a PDB (Potato Dextrose Broth) medium to perform the process of converting astronomical/soybean embryos (fermentation) in a 5L culture medium After the culture medium for conversion of the biological (fermentation) provided in one embodiment of the present invention (glucose 69.6 g/ℓ, dry powder of astronomical dong 77 g/ℓ, dry powder of soybean germ 1.5 g/ℓ, sodium nitrate 20 g/L, phosphoric acid Inoculated in a bio-incubator containing 15 g/L of potassium and 2 g/L of magnesium sulfate). 3.5L, which is 70% of the bio-cultivator, was used as the operating volume, and maintained at 150 rpm for agitation speed and 1 vvm for gas purging rate, and cultured at 28° C. for 4 days (FIG. 6 ).

그 결과 대조군(control) 조건에 비해 2~3배 높은 재현성 있는 베타글루칸 생산성을 확인할 수 있었으며, 단위 세포당 생산수율을 나타내는 Yp/x 값은 2.04, 총 플라보노이드 함량은 0.94g/L로 배양 전에 비해 약 36배 증가하였다. 천문동/대두배아의 생물(발효)전환 산물의 이러한 결과는 다양한 유효성 평가 실험에서도 확인할 수 있었다.As a result, it was possible to confirm the reproducible beta-glucan productivity 2 to 3 times higher than the control condition, the Yp/x value representing the production yield per unit cell was 2.04, and the total flavonoid content was 0.94 g/L, compared to before the culture. It increased by about 36 times. These results of biological (fermentation) conversion products of astronomical dong/soybean embryos were also confirmed in various efficacy evaluation experiments.

또한 기존 추출물(열수 추출물)과 대조군에 비해 탁월한 항균 효과가 있음을 대장균과 포도상구균의 디스크 어세이(Disc assay)실험을 통해 확인할 수 있었다(도 7). In addition, it was confirmed through a disc assay experiment of Escherichia coli and Staphylococcus aureus that it has superior antibacterial effects compared to the conventional extract (hot water extract) and the control group (FIG. 7 ).

아미노산 분석결과 16종의 1차 아미노산을 기준으로 천문동/대두배아 생물(발효)전환 산물의 총 아미노산 함량이 기존 추출물에 비해 약1.5배 증가하였으며, 티로신(Tyrosine) 알라닌(Alanine) 트레오닌(Threonine)은 약 1.3~1.7배, 류신(Leucine) 페닐알라닌(Phenylalanine) 글리신(Glycine) 대략 2.6~3배 증가하였다. 또한 메티오닌(Methionine)의 경우 그 증가률이 10배 정도로 다른 아미노산에 비해 탁월하였다(표 6, 표 7, 도 8). 필수아미노산을 축으로 한 이러한 아미노산 함량의 증가는 면역력을 비롯한 모발이나 피부 등의 건강상태 개선뿐만 아니라, 비만이나 알츠하이머 같은 특정 질병 치료에 도움이 되는 기능성 소재로써의 가능성을 확인해주는 결과라 할 수 있다. 아미노산은 피부와 모발의 원료가 될 뿐만 아니라 피부와 모발의 수분을 유지하는 중요한 역할을 맡고 있다. 피부건강에 있어 아미노산은 ① 피부의 재생과 소멸을 원활하게 해 표피를 재생하고, ② 피부 세포와 콜라겐원료, 진피재생의 재료가 된다. 또한 ③피부를 보호하는 각질 보습성분으로 작용, 보습력을 높이며, ④항산화 작용으로 표피와 진피의 산화를 방지할 수 있다. As a result of amino acid analysis, the total amino acid content of astronomical dong/soybean embryonic (fermented) conversion products increased by about 1.5 times compared to the existing extracts based on 16 primary amino acids, and tyrosine alanine threonine About 1.3 to 1.7 times, Leucine phenylalanine (Phenylalanine) Glycine (Glycine) increased approximately 2.6 to 3 times. In addition, in the case of Methionine, the increase rate was 10 times higher than other amino acids (Table 6, Table 7, Figure 8). This increase in amino acid content based on essential amino acids can be said to be the result of confirming the potential as a functional material to help treat specific diseases such as obesity and Alzheimer's disease, as well as improving health conditions such as immunity and hair and skin. . Amino acids are not only a raw material for skin and hair, but also play an important role in maintaining moisture in skin and hair. In skin health, amino acids are ① regeneration of the skin and regeneration of the epidermis, ② skin cells, collagen raw materials, and dermis regeneration. In addition, ③ acts as a keratin moisturizing ingredient that protects the skin, increases moisturizing power, and ④ prevents oxidation of the epidermis and dermis through antioxidant action.

[표 6][Table 6]

아미노산 분석조건/아미노산 분석을 위한 유도체화 시약 및 방법Derivatization reagents and methods for amino acid analysis conditions/amino acid analysis

Figure 112019130414692-pat00009
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[표 7] [Table 7]

아미노산 표준물질 및 실험 시료의 아미노산 함량 분석 결과Analysis of amino acid content of amino acid standards and experimental samples

Figure 112019130414692-pat00010
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4. 미세먼저 세정력 평가4. Evaluation of cleaning power of fine first

먼지는 입자의 크기에 따라 50㎛ 이하인 총먼지(TSP, Total Suspended Particles)와 입자크기가 매우 작은 미세먼지(PM, Particulate Matter)로 구분한다. 미세먼지는 다시 지름이 10㎛보다 작은 미세먼지(PM10)와 지름이 2.5㎛보다 작은 미세먼지(PM2.5)로 나뉜다. PM10이 사람의 머리카락 지름(50~70㎛)보다 약 1/5~1/7 정도로 작은 크기라면, PM2.5는 머리카락의 약 1/20~1/30에 불과할 정도로 매우 작다. 이처럼 미세먼지는 눈에 보이지 않을 만큼 매우 작기 때문에 대기 중에 머물러 있다 호흡기를 거쳐 폐 등에 침투하거나 혈관을 따라 체내로 이동하여 들어감으로써 건강에 나쁜 영향을 미칠 수도 있다. 세계보건기구(WHO)는 미세먼지(PM10, PM2.5)에 대한 대기질 가이드라인을 1987년부터 제시해 왔고, 2013년에는 세계보건기구 산하의 국제암연구소(IARC, International Agency for Research on Cancer)에서 미세먼지를 사람에게 발암이 확인된 1군 발암물질(Group 1)로 지정하였다. 미세먼지를 이루는 성분은 그 미세먼지가 발생한 지역이나 계절, 기상조건 등에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로는 대기오염물질이 공기 중에서 반응하여 형성된 덩어리(황산염, 질산염 등)와 석탄·석유 등 화석연료를 태우는 과정에서 발생하는 탄소류와 검댕, 지표면 흙먼지 등에서 생기는 광물 등으로 구성된다. The dust is classified into TSP (Total Suspended Particles), which is 50㎛ or less, and Particulate Matter (PM), which has a very small particle size. The fine dust is further divided into fine dust (PM10) having a diameter less than 10 μm and fine dust (PM2.5) having a diameter less than 2.5 μm. If PM10 is about 1/5 to 1/7 smaller than a human hair diameter (50 to 70 µm), PM2.5 is very small, about 1/20 to 1/30 of the hair. As such, the fine dust stays in the air because it is so small that it is invisible to the eye, and may penetrate the lungs, etc. through the respiratory tract, or move into the body along the blood vessels, thereby adversely affecting health. The World Health Organization (WHO) has been providing air quality guidelines for fine dust (PM10, PM2.5) since 1987, and in 2013 the International Agency for Research on Cancer (IARC) under the World Health Organization. In the study, fine dust was designated as a group 1 carcinogen (Group 1) where carcinogenesis was confirmed in humans. The components that make up the fine dust may vary depending on the region, season, weather conditions, etc. where the fine dust has occurred. In general, it is composed of lumps (sulfate, nitrate, etc.) formed by the reaction of air pollutants in the air, and carbon generated from the process of burning fossil fuels such as coal and petroleum, and minerals generated from soot and ground dust.

상기에서 확인된 최적 농도의 배지에서 수득된 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물(표 8, 바디 워시 조성물)의 미세먼지 세정력을 테스트하였다. 피험자 20명의 전완부에 미세먼지 대체재를 도포 후 시험 시료 및 미온수를 이용하여 세정하는 방법으로 수행하였고, Folliscope 및 Image-Pro Plus를 이용하여 분석하였다. The fine dust cleaning power of the cosmetic composition (Table 8, body wash composition) using bioconversion products of astronomical dong and soybean embryo obtained from the medium having the optimum concentration identified above was tested. After applying a fine dust substitute to the forearm of 20 subjects, it was performed by a method of cleaning using test samples and lukewarm water, and analyzed using Folliscope and Image-Pro Plus.

1) 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물1) Cosmetic composition using bioconversion products of astronomical dong and soybean embryo

[표 8] [Table 8]

바디 워시 화장료 조성물Body wash cosmetic composition

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2) 미세먼지 대체재 (초미세먼지 모사체 및 미세먼지 흡착 모사체)2) Substitute for fine dust (super fine dust mimic and fine dust adsorption mimetic)

① 초미세먼지 모사체 성분명: 카본블랙 (Carbon Black)① Superfine dust mimetic component name: Carbon Black

- 제조사: Sensient Cosmetic Technologies (Batch C3950)-Manufacturer: Sensient Cosmetic Technologies (Batch C3950)

- INCI name: CI77266-INCI name: CI77266

- Cas number: 1333-86-4-Cas number: 1333-86-4

- 평균 입자크기: 0.22㎛-Average particle size: 0.22㎛

② 미세먼지 흡착 모사체② Fine dust adsorption mimetic

: 입자경 2.5㎛ 이하의 Carbon Black을 dessicator에 보관하며, 시험 직전 Carbon Black과 증류수를 1 : 10 의 비로 혼합해 미세먼지 흡착 대체재를 제조하여 시험에 사용한다.: Carbon black with a particle diameter of 2.5 µm or less is stored in a dessicator, and carbon black and distilled water are mixed at a ratio of 1: 10 immediately before the test to prepare a fine dust adsorption material and used for testing.

3) 대조군 (표준 시료) : 아이보리 오리지날 비누 (전성분 리스트: 향료, 테트라소듐이디티에이, 글리세린, 팜커넬애씨드, 팜애씨드, 소듐팜커넬레이트, 소듐팔메이트, 소듐탈로우에이트, 탈로우애씨드, 소듐코코에이트, 코코넛애씨드, 정제수, 소듐클로라이드)3) Control group (standard sample): Ivory original soap (All ingredients list: fragrance, tetrasodium ID, glycerin, palm kernel acid, palm acid, sodium palm kernelate, sodium palmate, sodium tallowate, tallow acid , Sodium cocoate, coconut acid, purified water, sodium chloride)

4) 테스트 순서4) Test order

- 피험자는 기준 세정제를 이용하여 양측 전완부를 세정하고 페이퍼 타올로 가볍게 두드려 물기를 제거한 후, 30분간 항온·항습 조건 (20~24℃, 40~60%RH)에서 안정을 취한다.-The subject washes the forearm on both sides with a standard cleaning agent, taps lightly with a paper towel, removes moisture, and is stable under constant temperature and humidity conditions (20 to 24°C, 40 to 60%RH) for 30 minutes.

- 피험자의 양측 전완부에 2cm X 2cm의 정방형 시험 부위를 구획한 후, 각각 시험 부위(천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물로 세정), 대조 부위(비누 세정) 및 물 세정 부위로 지정한다.-After dividing the 2cm X 2cm square test area on both forearms of the subject, designate them as the test site (washed with cosmetic composition using bioconversion products of astronomical sinus and soybean embryos), control site (soap wash), and water wash, respectively do.

- Folliscope과 DSLR을 이용하여 미세먼지 대체재 도포 전 각 부위의 이미지를 촬영한다.-Using Folliscope and DSLR, take images of each part before applying fine dust substitute.

- 정량 (20㎕)의 미세먼지 대체재를 각 부위에 도포한 후 30분간 마르도록 기다린다.-After applying a quantity (20 µl) of fine dust substitute to each site, wait for 30 minutes to dry.

- Folliscope과 DSLR을 이용하여 미세먼지 대체재 도포 후 각 부위의 이미지를 촬영한다.-Using Folliscope and DSLR, after applying fine dust substitute, take an image of each part.

- 각각의 시험 부위에 사용방법대로 만들어진 시험 시료, 대조 시료의 거품 및 물을 이용하여 약 20회 문지른다.-Each test site is rubbed about 20 times using test sample, control sample foam and water.

- 10초간 흐르는 물을 이용해 각 부위를 세정한 후 20분간 마르도록 기다린다.-After washing each part with running water for 10 seconds, wait for 20 minutes to dry.

- Folliscope과 DSLR을 이용하여 세정 후 각 부위의 이미지를 촬영한다.-After cleaning using Folliscope and DSLR, images of each part are taken.

5) 평가 방법 5) Evaluation method

① Folliscope 및 Image-Pro Plus를 이용한 미세먼지 세정력 효능 평가① Efficacy evaluation of fine dust cleaning power using Folliscope and Image-Pro Plus

- 도포 후와 세정 후 미세먼지 대체재 흡착량(△)을 Image-Pro Plus로 분석한 픽셀(Pixel) 값을 이용하여 아래와 같이 산출하고, 시험 부위와 대조 부위의 세정 후 미세먼지 대체재 흡착량(△) 차이의 통계학적 유의성을 검증한다. -After application and after cleaning, the adsorption amount of fine dust substitute material (△) is calculated using the pixel value analyzed by Image-Pro Plus as follows, and the amount of fine dust substitute material adsorption after cleaning of the test site and the control area (△ ) Verify the statistical significance of the differences.

도포 후 미세먼지 대체재 흡착량(△) = 도포 후 미세먼지 대체재 잔류 면적 (Pixel) - 도포 전 미세먼지 대체재 잔류 면적 (Pixel) Adsorption amount of fine dust substitute after application (△) = Residual area of fine dust substitute after application (Pixel)-Residual area of fine dust substitute before application (Pixel)

세정 후 미세먼지 대체재 흡착량(△) = 세정 후 미세먼지 대체재 잔류 면적 (Pixel) - 도포 전 미세먼지 대체재 잔류 면적 (Pixel)Adsorption amount of fine dust substitute after cleaning (△) = Residual area of fine dust substitute after cleaning (Pixel)-Residual area of fine dust substitute before application (Pixel)

- 시료의 세정 효과 퍼센트 수치를 다음 식을 이용하여 산출하고 시험 부위와 대조 부위(비누)의 개선율(%) 차이의 통계학적 유의성을 검증한다.-Calculate the percentage value of the cleaning effect of the sample using the following formula and verify the statistical significance of the difference (%) difference in improvement between the test site and the control site (soap).

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② 피부과 전문의에 의한 안전성 평가 ② Safety evaluation by dermatologist

- 시험기간 중 제품 사용에 의한 부작용(홍반, 부종, 인설, 가려움, 작열감, 뻣뻣함, 따끔거림 및 기타 이상증상) 발생 여부를 평가한다.-Evaluate the occurrence of side effects (erythema, edema, swelling, itching, burning sensation, stiffness, tingling, and other abnormalities) caused by the use of the product during the test period.

6) 시험결과6) Test result

[표 9] [Table 9]

미세먼지 세정력 시험 결과Fine dust cleaning power test result

Figure 112019130414692-pat00013
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(시험 부위: 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물 세정, 대조 부위: 일반 비누 세정)(Test site: cleansing the cosmetic composition using bioconversion products of astronomical sinus and soybean embryo, control site: general soap cleaning)

20명의 피험자를 대상으로 상기 바디 워시 화장료 조성물을 이용하여 미세먼지 대체재를 도포한 시험 부위를 세정한 결과, 비누(대조 시료)를 이용하여 세정한 대조 부위에 비해 미세먼지 대체재 흡착량(△, Pixel)이 통계적으로 유의한 수준 (p<0.05)으로 적고, 개선율(%)이 시험 부위와 대조 부위 각각 97.50%, 93.79%로 시험 시료 (천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물)를 이용하여 세정한 시험 부위가 대조 시료를 이용하여 세정한 대조 부위에 비해 통계적으로 유의한 수준 (p<0.05)으로 높은 것으로 확인되었는 바, 본 화장료 조성물이 미세먼지에 대한 우수한 세정력(클렌징 효과)을 가지는 것으로 판단된다(표 9 및 도 9). 또한 시험 기간 동안 모든 피험자에서 특별한 이상반응이 관찰되지 않았는 바, 안전한 시료로 판단된다. As a result of washing the test site coated with the fine dust substitute material using the body wash cosmetic composition for 20 subjects, the adsorption amount of fine dust substitute material (△, Pixel) compared to the control site cleaned with soap (control sample) ) Is used as a statistically significant level (p<0.05), and the improvement rate (%) is 97.50% and 93.79%, respectively, in the test site and the control area, using test samples (cosmetic composition using bioconversion products of astronomy sinus and soybean embryos). It was confirmed that the test site washed with a statistically significant level (p<0.05) is higher than the control site cleaned using a control sample, and this cosmetic composition has excellent cleaning power (cleansing effect) against fine dust. Is determined (Table 9 and Figure 9). In addition, no adverse events were observed in all subjects during the test period, so it is considered a safe sample.

5. 각질 개선 효능 평가5. Evaluation of keratin improvement efficacy

인간 피부의 표피층 (epidermis)은 기저층 (stratum basalis)으로부터 분화되면서 표층으로 이동하는 여러 층의 각질세포 (keratinocyte)들로 이루어져 있다. 각질세포는 최종적으로 분화하면서 그 생명력 (Viability)를 소실하고 사세포 (corneocyte)로 전환되는데 이 사세포들이 이루는 표피의 최외각층을 각질층 (Stratum corneum)이라고 한다. 하부 각질층은 상부 각질층에 비해 각질세포 사이의 결합력이 강하여 외부 물질의 피부침투를 막는 중요한 방어벽으로서 작용하며, 각종 물리력으로부터의 피부를 보호하고 또한 항균물질 (antimicrobial peptide)들을 가지고 있어 오염 균에 의한 감염을 막는 역할을 하기도 한다. 각질세포는 끊임 없이 분화하여 각질층으로 유입되므로 피부의 항상성 (homeostasis)를 유지하기 위해 상부각질층의 세포들은 서로 간의 결합이 느슨해지고 약한 외부자극에도 쉽게 분리되어 피부로부터 탈락되게 되는데, 이것 각질세포의 탈락 (desquamation)과정이며 유리되는 각질세포들이 임상적으로는 인설 혹은 통상적으로 각질이라 불리는 양상으로 나타나게 된다. 각질세포의 탈락과정의 중요한 기전들은 다음과 같다. 첫째, 각질세포간의 결합을 매개하는 각질교소체 (corneodesmosome)의 분해과정을 들 수 있으며 이는 주로 각질층 내 pH에 의해 그 활성이 조절되는 여러 종류의 단백질분해 효소들에 의해 이루어진다. 두 번째, 각질층간 지질의 해체 및 분해과정 또한 각질세포의 탈락과정과 밀접한 관련이 있으며 이는 세정제 등의 사용과 관련된 피부 장벽 손상과도 관련이 있다. 마지막으로 피부 수화 과정에서 각질세포의 부피대비 표면적이 변화하는 과정에서 발생하는 표피 탈락기전이 있으며 각질이 밀려 떨어지는 양상으로 나타난다.The epidermis of human skin consists of several layers of keratinocytes that migrate to the superficial layer as they differentiate from the stratum basalis. As the keratinocytes finally differentiate, they lose their viability and are converted into corneocytes. The outermost layer of the epidermis formed by these dead cells is called the stratum corneum. The lower stratum corneum has a stronger binding capacity between keratinocytes than the upper stratum corneum and acts as an important barrier to prevent skin from penetrating foreign substances, protects skin from various physical forces, and also has antimicrobial peptides, causing infection by contaminating bacteria. It also acts to prevent. Since the keratinocytes constantly differentiate and flow into the stratum corneum, the cells of the upper stratum corneum are loosened from each other and easily detached from the skin due to weak external stimuli to maintain homeostasis of the skin. (desquamation) is a process and free keratinocytes appear clinically in the form of scale or commonly called keratin. Important mechanisms in the process of exfoliation of keratinocytes are as follows. First, there is a decomposition process of corneodesmosome that mediates binding between keratinocytes, which is mainly achieved by various proteolytic enzymes whose activity is controlled by pH in the stratum corneum. Second, the process of disintegration and decomposition of lipids between the stratum corneum is also closely related to the exfoliation process of keratinocytes, which is also related to skin barrier damage associated with the use of detergents. Lastly, in the process of hydration of the skin, there is a mechanism of exfoliation of the epidermis that occurs in the process of changing the surface area of the keratinocytes by volume, and it appears that the keratin is pushed away.

본 실험에서는 상기에서 확인된 최적 농도의 배지에서 수득된 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물(표 8, 바디 워시 조성물)의 즉각적 각질 개선 효능을 테스트하였다. 피험자 21명의 안면부에 시험 시료(표 8의 화장료 조성물)를 사용 후, Corneofix F20 (Courage & Khazaka, Germany) 및 Visioscan VC98 (Courage & Khazaka, Germany)을 이용하여 분석하였다.In this experiment, the effect of immediate keratin improvement of a cosmetic composition (Table 8, body wash composition) using bioconversion products of astronomical sinus and soybean embryo obtained from the medium having the optimum concentration identified above was tested. After using the test sample (cosmetic composition of Table 8) on the face of 21 subjects, it was analyzed using Corneofix F20 (Courage & Khazaka, Germany) and Visioscan VC98 (Courage & Khazaka, Germany).

1) 테스트 순서1) Test order

- 피험자는 기준 세정제를 이용하여 세정 후 페이퍼 타올로 가볍게 두드려 물기를 제거한 후 30분간 항온·항습조건(20~24℃, 40~60%PH)에서 안정을 취한다.-After washing using a standard cleaning agent, the subject was gently knocked with a paper towel to remove moisture, and then stabilized under constant temperature and humidity conditions (20 to 24°C, 40 to 60% PH) for 30 minutes.

- 평가 시마다 동일한 부위에서 측정이 이루어질 수 있도록 다음과 같이 시험부위를 지정한다. →시험부위: 손목에서부터 15cm 떨어진 전완부의 중앙.-Designate the test site as follows so that the measurement can be made at the same site for each evaluation. → Test site: center of the forearm 15 cm from the wrist.

- Corneofix와 Visiocan을 이용하여 시험부위의 시료 사용 전 각질지수(Desquamation index)를 측정한다.-Using Corneofix and Visiocan, measure the desquamation index before using the sample at the test site.

- 시험 시료를 시험 부위에 일회 사용한다. -Use the test sample once on the test site.

- Corneofix와 Visiocan을 이용하여 사용 전과 동일한 방법으로 동일한 부위에서 각질지수(Desquamation index)를 측정한다.-Using Corneofix and Visiocan, measure the keratinization index at the same site in the same way as before use.

2) 평가 및 분석 방법2) Evaluation and analysis method

① Visioscan을 이용한 각질 개선 효능 평가① Evaluation of keratin improvement efficacy using Visioscan

- 시험 전, 후 각질 지수 (Desquamation Index)를 기기적으로 측정한다. -Before and after the test, the desquamation index is measured mechanically.

- 개선 정도를 다음과 같이 %값으로 도출한다, -The degree of improvement is derived as a% value as follows,

Figure 112019130414692-pat00014
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② 피부과 전문의에 의한 안전성 평가 ② Safety evaluation by dermatologist

- 시험기간 중 시료 사용에 의한 부작용 (홍반, 부종, 인설, 가려움, 자통, 작열감, 뻣뻣함, 따끔거림 및 기타 이상증) 발생 여부를 평가한다. -Evaluate the occurrence of side effects (redness, edema, swelling, itching, pain, burning sensation, stiffness, tingling, and other abnormalities) caused by the use of samples during the test period.

3) 시험결과3) Test result

[표 10]Table 10

각질지수 (Desquamation index, %) 개선 정도Degree of improvement of keratin index (Desquamation index, %)

Figure 112019130414692-pat00015
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Significant probability : *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 Significant probability : *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001

Corneofix 와 Visioscan을 이용해 측정한 시험 부위의 각질 지수 (Desquamation index) 개선율은 18.96%로 확인되었다. 이는 시험 시료 사용 후, 사용 전에 비해 통계적으로 유의한 수준 (p<0.05)으로 각질 지수(Desquamation index)가 감소한 것으로서, 시험 시료가 피부의 즉각적 각질 개선 효과를 가지는 것으로 판단된다 (도 10). 또한 시험기간 동안 모든 피험자로부터 피부 이상반응이 관찰되지 않았는 바, 안전한 시료인 것으로 사료된다. The improvement rate of the desquamation index of the test site measured using Corneofix and Visioscan was found to be 18.96%. This is a statistically significant level (p<0.05) after use of the test sample, a decrease in the keratinization index (Desquamation index), it is determined that the test sample has an immediate keratin improvement effect of the skin (Fig. 10). In addition, no adverse skin reactions were observed from all subjects during the test period, which is considered to be a safe sample.

6. 피부 수분함량 개선 효능 평가 6. Evaluation of skin moisture content improvement efficacy

인간의 피부는 외부환경에서 유래하는 다양한 자극으로부터 인체를 보호하는 일차 방어막이다. 또한 생체 활성을 유지하기 위해 절대적으로 필요한 체내 수분이 외부로 빠져나가는 것을 막아 주는 방어막이기도 하다. 인체는 대부분의 시간을 불가피하게 피부에 비해 상대적으로 건조한 환경에 노출되어 있는데, 이 때문에 피부 특히 각질층에는 수분을 저장하고 증발을 막는 다양한 물질들이 있어 체내 수분유지에 매우 중요한 기능을 담당하고 있다. 각질층의 보습기능에 가장 중요한 두 가지 인자로는 먼저 각질세포 내 지질층 (intercellular lamellar lipids)이 있어 수분의 증발을 막는 필름으로써 작용하며, 다른 하나의 인자로서 각질세포 내 필라그린 (filaggrin)의 분해 산물들로 주로 구성된 자연보습인자 (natural moisturizing factor)가 있어 수분을 각질층 내에 붙잡아 두는 기능을 하고 있다. 다양한 피부질환이나, 노화된 피부에서는 이 두 가지 주요인자의 기능이 떨어지고 피부의 보습상태가 악화되어 건조증이 쉽게 발생할 수 있는데, 이 경우 건조증으로 인한 소양증이나 기타 피부 이상증을 완화하는데 보습제는 매우 중요한 치료수단이 될 수 있다. 또한 각질층 내 수분은 여러 가지 생리활성을 지니는 효소들의 활성 유지에 도움이 되어 피부장벽을 건강한 상태로 유지시키는 역할을 할 수 있으므로, 보습제는 건조증이 있는 피부뿐만 아니라 정상인의 피부를 건강하게 유지하는 역할을 할 수 있다. Human skin is the primary barrier to protect the human body from various stimuli originating from the external environment. It is also a protective barrier that prevents moisture from the body, which is absolutely necessary to maintain bioactivity, from escaping to the outside. The human body is inevitably exposed to a relatively dry environment compared to the skin most of the time, and because of this, the skin, especially the stratum corneum, has various substances that store moisture and prevent evaporation, which plays a very important role in maintaining moisture in the body. The two most important factors for the moisturizing function of the stratum corneum are the intercellular lamellar lipids, which act as a film to prevent evaporation of moisture, and as another factor, the decomposition product of the filarggrin in the keratinocytes. There is a natural moisturizing factor composed mainly of ole, which functions to trap moisture in the stratum corneum. In various skin diseases or aged skin, the function of these two main factors is deteriorated and the skin's moisturizing condition deteriorates and dryness can easily occur. In this case, the moisturizer is a very important treatment to relieve pruritus or other skin abnormalities caused by dryness. It can be a means. In addition, the moisture in the stratum corneum can help maintain the skin barrier in a healthy state by helping maintain the activity of enzymes with various physiological activities, so the moisturizer serves to keep the skin of normal people healthy as well as dry skin. can do.

본 실험에서는 상기에서 확인된 최적 농도의 배지에서 수득된 천문동 및 대두배아의 생물전환산물을 이용한 화장료 조성물(표 8, 바디 워시 조성물, 시험물질)의 사용 전후 시험 부위의 수분함량 개선 정도를 통해 시료가 나타내는 즉각적 피부 수분함량 개선 효능을 테스트하였다. 피험자 22명의 전완부에 시험 시료(표 8의 화장료 조성물)를 사용 후, Corneometer CM 825 (Courage & Khazaka, Germany)를 이용하여 분석하였다.In this experiment, the sample through the improvement of the moisture content of the test site before and after the use of the cosmetic composition (Table 8, body wash composition, test substance) using bioconversion products of astronomical dong and soybean embryo obtained from the medium having the optimum concentration identified above The immediate skin moisture content improvement efficacy indicated by was tested. After using the test sample (cosmetic composition of Table 8) in the forearm of 22 subjects, it was analyzed using Corneometer CM 825 (Courage & Khazaka, Germany).

1) 테스트 순서1) Test order

- 기준 세정제를 이용하여 세안 후 페이퍼 타올로 가볍게 두드려 물기를 제거한 후 30분간 항온항습 조건 (20~24℃, 40~60%RH)에서 안정을 취한다. -After washing with a standard cleaner, tap lightly with a paper towel to remove moisture, and then stabilize under constant temperature and humidity conditions (20~24℃, 40~60%RH) for 30 minutes.

- 평가 시마다 동일한 부위에서 측정이 이루어질 수 있도록 전완부에 측정 부위를 구획하고 기기 측정을 실시한다. -For each evaluation, segment the measurement site and measure the device so that the measurement can be made at the same site.

- Corneometer의 측정은 각각 5회씩 시행한 후 측정치의 평균값을 측정값으로 기록한다. -After measuring corneometer 5 times each, record the average of the measured values as the measured value.

- 2mg/cm2의 시험 시료를 시험 부위(전완부)에 사용하고 30분간 항온항습 조건 (20~24℃, 40~60%RH)에서 대기한 후, 시료 사용 전과 동일한 방법으로 동일한 부위에서 기기평가를 시행한다. -After using a test sample of 2mg/cm 2 at the test site (forearm) and waiting for 30 minutes under constant temperature and humidity conditions (20~24℃, 40~60%RH), evaluate the device at the same site in the same way as before using the sample. Enforce.

- 피부과 전문의가 이상반응 (소양증, 홍반 등의 자극증상) 유무를 확인한다. -The dermatologist checks for abnormal reactions (irritation symptoms such as pruritus and erythema).

2) 평가 방법2) Evaluation method

① Corneometer를 이용한 수분함량 개선 효과 평가 ① Evaluate the effect of improving moisture content using corneometer

- 시험 부위의 시료 사용 전과 후에 Corneometer를 이용하여 피부 수분함량 변화를 측정하고, 아래와 같이 그 개선율을 확인한다. -Before and after using the sample at the test site, measure the change in skin moisture content using a corneometer, and check the improvement rate as follows.

Figure 112019130414692-pat00016
Figure 112019130414692-pat00016

② 피부과 전문의에 의한 안전성 평가 ② Safety evaluation by dermatologist

- 시험기간 중 시료 사용에 의한 부작용 (홍반, 부종, 인설, 가려움, 자통, 작열감, 뻣뻣함, 따끔거림 및 기타 이상증) 발생 여부를 평가한다. -Evaluate the occurrence of side effects (redness, edema, swelling, itching, pain, burning sensation, stiffness, tingling, and other abnormalities) caused by the use of samples during the test period.

3) 시험결과3) Test result

[표 11][Table 11]

각질층 수분 함량 평가 결과Evaluation result of moisture content of stratum corneum

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Significant probability : *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 Significant probability : *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001

피부 수분함량을 나타내는 Corneometer 측정값 (A.U.)이 시료 사용 전과 비교하여 사용 후 10.72% 증가되어 시험 부위의 각질층 수분함량이 개선됨을 나타내었다. 시험 시료를 1회 사용한 시험 부위는 사용 전에 비해 통계적으로 유의한 수준(p<0.05)으로 각질층 수분함량이 증가하여, 시험 시료가 즉각적 피부 수분함량 개선 효과를 가지고 있는 것으로 판단된다. 또한 모든 피험자에서 특별한 이상반응이 관찰되지 않았는 바, 안전한 시료로 사료된다. Corneometer measurement value (A.U.) indicating skin moisture content increased by 10.72% after use compared to before sample use, indicating that the moisture content of the stratum corneum at the test site was improved. The test site where the test sample was used once is statistically significant (p<0.05) higher than before use, so the moisture content of the stratum corneum layer is increased, so it is judged that the test sample has an immediate skin moisture content improvement effect. Also, no adverse reactions were observed in all subjects, so it is considered a safe sample.

통계분석 방법Statistical analysis method

1) Minitab 19 (Minitabㄾ 19.2, Minitab Inc.) 프로그램을 이용해 유의성을 확인한다.1) Check the significance using the Minitab 19 (Minitab2 19.2, Minitab Inc.) program.

- 결과 값은 정규성 검정(Ryan-Joiner Normality Test)을 통해 정규 분포로 추정되는 경우, 아래의 모수적인 통계법을 통해 유의성을 확인한다.-If the result is estimated to be a normal distribution through the normal-test (Ryan-Joiner Normality Test), check the significance through the parametric statistical method below.

- 동일 그룹 내 전후 결과값 비교: 시험 전, 후 측정한 값의 비교는 paired t-검정을 이용하며, 3 회 이상 반복 측정한 경우, 반복측정분산분석(Repeated measure ANOVA)을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 유의성을 확인한다.-Comparison of the results before and after within the same group: The comparison of the measured values before and after the test uses a paired t-test. When repeated measurements are repeated three or more times, the significance level p <through repeated measurement ANOVA. Check the significance at the 0.05 level.

- 2 이상의 상이한 그룹간 결과값 비교: 두 그룹간 결과값의 비교는 Welch's t-검정을 이용하며, 3 이상의 그룹간 결과값 비교는 일원분산분석(one-way ANOVA)을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 유의성을 확인한다.-Comparison of results between two or more different groups: Comparison of results between two groups uses Welch's t-test, and comparison of results between groups of three or more uses significance level p <0.05 through one-way ANOVA. Check the significance at the level.

- 반복 측정한 2 이상의 상이한 그룹의 결과값 비교: 반복측정분산분석(Repeated measure ANOVA)을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 유의성을 확인하며, 그룹간 초기 측정 값이 유의하게 다른 경우 초기 측정값을 공변량으로 한 공분산분석(Analysis of Covariance)을 통해 그룹간 결과값의 차이를 확인한다.-Comparison of the results of two or more different groups measured repeatedly: Repeated measure ANOVA confirms the significance at the significance level p <0.05, and the initial measurement values are significantly different between groups. The difference in results between groups is checked through analysis of covariance using covariates.

- 정규성 검정(Ryan-Joiner Normality Test)에서 정규성이 기각되는 경우, 아래의 비모수적인 통계법을 통해 유의성을 확인한다.-When the normality is rejected in the Ryan-Joiner Normality Test, the significance is confirmed through the nonparametric statistical method below.

- 동일 그룹 내 전후 결과값 비교: 시험 전, 후 측정한 값의 비교는 Wilcoxon signed rank 검정을 이용하며, 3 회 이상 반복 측정한 경우, Friedman 검정을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 유의성을 확인한다.-Comparison of the results before and after within the same group: Wilcoxon signed rank test is used to compare the measured values before and after the test. When repeated measurements are repeated three or more times, the significance is checked at the significance level p <0.05 through the Friedman test. .

- 2 이상의 상이한 그룹간 결과값 비교: 두 그룹간 결과값의 비교는 Mann-Whitney U 검정을 이용하며, 3 이상의 그룹간 결과값 비교는 Kruskal-Wallis 검정을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 유의성을 확인한다.-Comparison of result values between two or more different groups: Mann-Whitney U test is used to compare the results between two groups, and comparison of result values between three or more groups is significant at the significance level p <0.05 through the Kruskal-Wallis test. To confirm.

- 반복 측정한 2 이상의 상이한 그룹의 결과값 비교: Friedman 검정을 통해 유의수준 p < 0.05 수준에서 그룹간 결과값의 차이를 확인한다.-Comparison of the results of two or more different groups measured repeatedly: The Friedman test is used to check the difference in results between groups at the significance level p <0.05.

- 모든 자료는 연속형 변수는 평균과 표준편차로, 범주형 변수는 빈도와 백분율로 요약한다.-All data are summarized as mean and standard deviation for continuous variables and frequency and percentage for categorical variables.

<제조예><Production Example>

이하, 본 발명에 따른 상기 생물전환산물 유효성분으로 함유하는 화장품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, an example of manufacturing a cosmetic product containing the bioconversion product according to the present invention as an active ingredient will be described, but the present invention is not intended to limit it, but only to be specifically described.

1. 바디 워시의 제조1. Manufacture of body wash

- 미세먼지 세정, 각질개선 및 보습에 도움을 주는 바디 워시 -Body wash that helps to clean fine dust, improve keratin and moisturize

Figure 112019130414692-pat00018
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2. 클렌징 워터의 제조 (약산성 (pH 6.0)의 가볍게 메이크업 및 노폐물을 닦아내는 용도의 제품)2. Manufacture of cleansing water (product for lightly acidic makeup (pH 6.0) and light makeup and waste products)

- 보습 및 피부를 건강하게 가꾸는데 도움을 주는 주요성분과 메이크업 및 노폐물을 제거하는 계면활성제가 적절한 함량으로 함유된 무색의 투명한 액상의 클렌징 워터-Colorless and transparent liquid cleansing water containing moisturizing and skin care ingredients and appropriate ingredients to remove makeup and wastes

- 끈적임 없이 가볍고 산뜻하게 메이크업 및 노폐물을 제거한 후, 피부는 촉촉하고 윤기있게 가꾸어 줌-After removing makeup and waste materials lightly and without stickiness, the skin is moist and shiny.

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3. 약산성 폼클렌져의 제조3. Preparation of weakly acidic foam cleanser

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4. 클렌져의 제조4. Preparation of cleanser

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Claims (12)

천문동 분말 및 대두배아 분말을 포함하는 배양배지에 치마버섯을 접종 및 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 피부 세정용 화장료 조성물로서,
상기 배양배지는 글루코스 65 ~ 75 중량부, 천문동 분말 72 ~ 82 중량부, 대두배아 분말 0.5 ~ 5 중량부, 질산나트륨 15 ~ 25 중량부, 인산칼륨 10 ~ 20 중량부 및 황산마그네슘 1 ~ 7 중량부를 포함하며,
상기 생물전환산물은 베타글루칸, 아미노산 및 플라보노이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 세정용 화장료 조성물.
As a cosmetic composition for cleaning the skin containing the bio-converted product obtained by inoculating and cultivating skirt mushrooms in a culture medium containing astronomical powder and soybean embryo powder as an active ingredient,
The culture medium is 65 to 75 parts by weight of glucose, 72 to 82 parts by weight of astronomical dong powder, 0.5 to 5 parts by weight of soybean embryo powder, 15 to 25 parts by weight of sodium nitrate, 10 to 20 parts by weight of potassium phosphate and 1 to 7 parts by weight of magnesium sulfate Includes wealth,
The bioconversion product cosmetic composition for cleaning the skin, characterized in that it comprises beta-glucan, amino acids and flavonoids.
삭제delete 청구항 1에 있어서,
상기 치마버섯은 액상배지에 배양된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The skirt mushroom is a cosmetic composition, characterized in that cultured in a liquid medium.
청구항 1에 있어서,
상기 치마버섯은 정치용 액상 배지에서 5 ~ 7일간 배양 후, 1~3일간 진탕배양되어 수득된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The skirt mushroom is a cosmetic composition, characterized in that obtained by incubating for 5 to 7 days in a liquid medium for stationary, and shaking culture for 1 to 3 days.
삭제delete 삭제delete 청구항 1에 있어서,
상기 배양은 치마버섯 5 ~ 15 %(v/v)가 접종되어 수행된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The culture is a cosmetic composition characterized in that 5 ~ 15% (v / v) of the shiitake mushroom was inoculated.
삭제delete 삭제delete 천문동 분말 및 대두배아 분말을 포함하는 배양배지에 치마버섯을 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 미세먼지 세정용 화장료 조성물로서,
상기 배양배지는 글루코스 65 ~ 75 중량부, 천문동 분말 72 ~ 82 중량부, 대두배아 분말 0.5 ~ 5 중량부, 질산나트륨 15 ~ 25 중량부, 인산칼륨 10 ~ 20 중량부 및 황산마그네슘 1 ~ 7 중량부를 포함하며,
상기 생물전환산물은 베타글루칸, 아미노산 및 플라보노이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 미세먼지 세정용 화장료 조성물.
As a cosmetic composition for cleaning fine dust containing the bio-conversion product obtained by inoculating the skirt mushrooms in a culture medium containing astronomical dong powder and soybean embryo powder as an active ingredient,
The culture medium is 65 to 75 parts by weight of glucose, 72 to 82 parts by weight of astronomical dong powder, 0.5 to 5 parts by weight of soybean embryo powder, 15 to 25 parts by weight of sodium nitrate, 10 to 20 parts by weight of potassium phosphate and 1 to 7 parts by weight of magnesium sulfate Includes wealth,
The bioconversion product cosmetic composition for cleaning fine dust, characterized in that it comprises beta-glucan, amino acids and flavonoids.
천문동 분말 및 대두배아 분말을 포함하는 배양배지에 치마버섯을 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 각질 개선용 화장료 조성물로서,
상기 배양배지는 글루코스 65 ~ 75 중량부, 천문동 분말 72 ~ 82 중량부, 대두배아 분말 0.5 ~ 5 중량부, 질산나트륨 15 ~ 25 중량부, 인산칼륨 10 ~ 20 중량부 및 황산마그네슘 1 ~ 7 중량부를 포함하며,
상기 생물전환산물은 베타글루칸, 아미노산 및 플라보노이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 각질 개선용 화장료 조성물.
As a cosmetic composition for keratin improvement comprising a bio-converted product obtained by inoculating a skirt mushroom in a culture medium containing astronomical dong powder and soybean embryo powder as an active ingredient,
The culture medium is 65 to 75 parts by weight of glucose, 72 to 82 parts by weight of astronomical dong powder, 0.5 to 5 parts by weight of soybean embryo powder, 15 to 25 parts by weight of sodium nitrate, 10 to 20 parts by weight of potassium phosphate and 1 to 7 parts by weight of magnesium sulfate Includes wealth,
The bioconversion product cosmetic composition for improving keratin, comprising beta-glucan, amino acid, and flavonoid.
천문동 분말 및 대두배아 분말을 포함하는 배양배지에 치마버섯을 접종 후 배양하여 수득한 생물전환산물을 유효성분으로 포함하는 피부 수분 함량 개선용 화장료 조성물로서,
상기 배양배지는 글루코스 65 ~ 75 중량부, 천문동 분말 72 ~ 82 중량부, 대두배아 분말 0.5 ~ 5 중량부, 질산나트륨 15 ~ 25 중량부, 인산칼륨 10 ~ 20 중량부 및 황산마그네슘 1 ~ 7 중량부를 포함하며,
상기 생물전환산물은 베타글루칸, 아미노산 및 플라보노이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 수분 함량 개선용 화장료 조성물.
As a cosmetic composition for improving the moisture content of the skin containing the bio-converted product obtained by inoculating the skirt mushrooms and incubating the culture medium containing astronomical powder and soybean embryo powder as an active ingredient,
The culture medium is 65 to 75 parts by weight of glucose, 72 to 82 parts by weight of astronomical dong powder, 0.5 to 5 parts by weight of soybean embryo powder, 15 to 25 parts by weight of sodium nitrate, 10 to 20 parts by weight of potassium phosphate and 1 to 7 parts by weight of magnesium sulfate Includes wealth,
The bioconversion product cosmetic composition for improving skin moisture content, comprising beta-glucan, amino acids and flavonoids.
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