KR102054038B1 - 백혈병의 치료방법 및 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 사이클로헥센온 화합물을 사용한 백혈병의 치료방법 및 치료용 조성물을 제공한다.

Description

백혈병의 치료방법 및 치료용 조성물 {Methods and Compositions For Treating Leukemia}
백혈병은 혈액암 또는 골수암의 한 종류로서, "아세포(blast)"라 불리는 미숙 백혈구의 비정상적인 증가를 특징으로 한다. 백혈병은 질병들의 범위를 아우르는 광범위한 용어이다. 결국, 백혈병은 모두 혈액학적 종양으로 알려진, 혈액, 골수 및 림프계에 영향을 미치는 훨씬 더 광범위한 그룹의 질병들 중 하나이다.
백혈병은 임상적 및 병리적으로 다수의 큰 그룹으로 나뉜다. 1차 분류는 급성 유형 및 만성 유형이다. 급성 백혈병은 백혈병의 본래 진단에 관련된 심각한 의학적 상태의 한 종류이다. 급성 백혈병 유형에는 급성 골수성 백혈병, 급성 적혈구 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, T세포 급성 림프아구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병/림프종, 전구 T세포 급성 림프아구성 백혈병/림프종 및 만성 골수성 백혈병의 급성기(blast crisis)가 포함된다. 만성 백혈병은 백혈구가 비정상적으로 증가하는 것이다. 이는 급성 백혈병과는 상이한 것으로, 골수성 또는 림프구성으로 분류된다. 만성 백혈병으로는 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 및 모양 세포 백혈병을 언급할 수 있다. 추가로, 상기 질환들은 어떤 종류의 혈구가 영향을 받는지에 따라 세분된다. 이러한 구분으로 백혈병은 림프아구성 또는 림프구성 백혈병 및 골수성(myeloid/myelogenous) 백혈병으로 나뉜다.
유럽 특허 출원 공개 EP 2329816 A1
GEETHANGILI et al. Review of Pharmacological Effects of Antrodia camphorata and Its Bioactive Compounds. Evidence-Based Complementary And Alternative Medicine, 2011, vol. 2011, 1-17 TZONG-HUEI LEE et al. A New Cytotoxic Agent From Solid-State Fermented Mycelium of Antrodia camphorata. Planta Medica, 2007, vol. 73 (13), 1412-1415 HSEU YOU-CHENG et al. Induction of apoptosis by Antrodia camphorata in human premyelocytic leukemia HL-60 cells. Nutrition And Cancer, 2004, vol. 48 (2), 189-197
본원 발명의 한 양태는 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭(prodrug)의 치료학적 유효량을 백혈병을 앓고 있는 대상에 투여함을 포함하여, 상기 대상에서의 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험성을 감소시키는 방법이다.
Figure 112015089023518-pct00001
여기서,
각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되고;
각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
m은 1 내지 12이고;
n는 1 내지 12이다.
참고문헌의 도입
본원 명세서에서 언급된 모든 공보, 특허 및 특허원들은, 각각의 공보, 특허 및 특허원들이 참고로 도입된 것으로 구체적이고 개별적으로 제시되었던 것과 동일한 정도로 참고로 도입된다.
본원 발명의 신규한 특징들을 첨부된 청구항들에 특별히 나타내었다. 본원 발명의 특징 및 이점은 본원 발명의 원칙이 활용된 실증적 양태를 설명하는 하기 상세한 설명 및 첨부된 도면에 의해 보다 잘 이해될 것이다.
도 1은 화합물 1이 HepG2, A549 및 H838 세포주에서 ERK 인산화를 자극하는대표적 결과를 도시한 것이다. HepG2, A549 및 H838 세포주는 밤새 혈청을 고갈시키고, 1시간 동안 제시된 농도의 화합물 1로 챌린지하였다. 전체 세포 용해물을 포스포-ERK1/2 항체로 면역블로팅한 다음, β-액틴에 대한 항체로 재검출하였다. 복제막을 전체 ERK1/2 항체로 조사하였다. β-액틴에 대한 p-ERK1/2의 상대적 발현 수준을 농도계로 수량화하였다. 실험은 3회 실시하였다.
도 2a, 2b 및 2c는 예시 화합물 1이 암 세포주에서의 Ras 처리(processing)를 억제하는 실례가 되는 실질적 결과를 도시한 것이다. 도 2a의 A549 세포 및 H838 세포는 상이한 농도의 화합물 1로 처리하고, 24시간 동안 혈청 조건(10% FBS) 또는 무혈청 조건(FBS 부재)에서 성장시켰다. 도 2b의 H838 세포와 도 2c의 HepG2 및 K562 세포는 상이한 농도의 화합물 1로 처리하고, 24시간 동안 무혈청 조건(FBS 부재)에서 성장시켰다. 이어서, 전체 새포 용해물을 Ras 항체로 면역블로팅하였다. 복제막을 GAPDH 항체로 검출하였다. 처리된 Ras에 대한 비처리된 Ras의 상대적 발현 수준을 농도계로 수량화하였다. 실험은 3회 실시하였다. 그래프의 막대는 평균±SEM을 나타낸다. *P < 0.05, ** P < 0.01
도 3a, 3b 및 3c는 화합물 1이 시험관 내 파르네실트랜스퍼라제의 페닐화 활성을 억제하고 세포 내에서 FPP와 경쟁하는 실례가 되는 실질적 결과를 도시한 것이다. 도 3a는 화합물 1 및 FPP의 화학 구조이다. 도 3b는 제시된 바와 같이 화합물 1 또는 FPP로 24시간 동안 자극된 H838 세포이다. 전체 세포 용해물을 Ras 항체로 면역블로팅하였다. 복제막을 GAPDH 항체로 검출하였다. 처리된 Ras에 대한 비처리된 Ras의 상대적 발현 수준을 농도계로 수량화하였다. 실험은 3회 실시하였다. 도 3c는 FTase에 의해 매개된 NBD-FPP를 사용한 프레닐화 후의 형광 표지된 H-Ras-GST의 SDS-PAGE이다. 더 낮은 쪽 패널은 쿠마시 블루로 염색된 동일한 겔을 도시한 것이다.
도 4a, 4b, 4c 및 4d는 화합물 1과의 복합체에서의 사람 FTase의 모델 구조인 CIFM 유도된 L739, 750 펩티도미메틱(peptidomometic) 및 FPP 기재를 도시한 것이다. 도 4a는 화합물 1과 복합체화된 FTase의 리본 카툰이다. 도 4b는 화합물 1(녹색)과 FPP(퍼플)가 FTase에 동시에 결합한 것이다. 도 4c는 안트로퀴논올과 복합체화된 FTase의 리본 카툰이다. 추정되는 수소결합을 파선으로 나타냈다. 도 4d는 화합물 1 및 CIFM 유도된 L739, 750과 복합체화된 FTase의 리본 카툰이다.
도 5a, 5b 및 5c는 화합물 1이 H838 세포에서 자가 소화 활동을 유도하는 실례가 되는 실질적 결과를 도시한 것이다. H838 세포는 상이한 농도의 화합물 1로 처리하고, 무혈청 조건에서 성장시켰다. 도 5a는 세포를 처리한 후 0, 24 및 48시간째에 채취하고 베클린(Beclin)-1 항체로 면역블로팅한 것이다. 도 5b는 전체 세포 용해물을 처리 후 24시간째에 준비하고 LC3B 항체로 면역블로팅한 것이다. 복제막을 GAPDH 항체로 검출하였다. LC3B-II에 대한 LC3B-I의 상대적 발현수준을 농도계로 수량화하였다. 도 5c는 자가포식소체 내의 내생 LC3B의 분포를 공초점 현미경으로 검출한 것이다. 실험은 3회 실시하였다. 그래프 막대는 평균±SEM을 나타낸다. *P < 0.05, ** P < 0.01
도 6은 암 세포주에서의 화합물 1의 세포독성 활성과 Ras 및 EGFR의 단백질 수준사이의 구체적 상관관계를 도시한 것이다. 전체 세포 용해물은 SDS-PAGE로 분석하였고 Ras 항체로 면역블로팅하였다. 복제막을 EGFR 또는 GAPDH에 대한 항체로 검출하였다. 실험은 3회 실시하였다.
도 7은 화합물 1 작용의 제안된 기전을 설명하는 예시 개략도이다. 화살표는 활성화 및 상향조절을 나타내는 반면, 말단이 직각 막대로 표시된 선은 억제 및 하향조절을 나타낸다. 점들이 찍혀 있는 회색 원은 확인되지 않은 분자를 나타낸다. 가장자리가 파선으로 표시된 것은 확인되지 않은 상호작용을 나타낸다. "P"는 포스포릴화를 나타낸다.
Ras 단백질은 복잡하고 상이한 효과를 초래하는 복합 신호전달 경로에서 보이는 작은 GTPase이다. Ras 단백질의 활성화는 Ras의 FTase 매개된 프레닐화를 포함하는 번역후변형에 의해 조절된다. 프레닐화는 단백질의 Ras 상과(superfamily)의 정상 기능 및 형질전환 활동에 필수적이다. 따라서, Ras의 프레닐화를 차단하는 제제를 암세포 생존 및 증식의 방해를 위해 개발해왔다. 본원에 기재된 예시 화합물 1은 안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)로부터 분리된 신규한 파르네실화된 퀴논 유도체이다. 도킹 연구로 화합물 1의 파르네실 이소프레노이드 테일이 FPP의 파르네실 그룹과 유사한 FTase β-서브단위의 중앙 구멍으로 삽입됨을 알았다(도 5 참조). FTase 억제 검정으로 화합물 1이 FTase를 시험관내에서 용량 의존성 방식으로 억제하는 것으로 밝혀졌다(실시예 10 참조). 또한, 처리된 Ras에 대한 비처리된 Ras의 비율이 화합물 1의 투여 후 증가되었다(도 2 참조). 이러한 모든 데이터는 예시 화합물 1 등이 암세포 내 Ras 처리를 방지하기 위해 FTase와 상호작용한다는 것을 뒷받침한다.
본원에 기재된 암 세포주 내의 화합물 1의 IC50 값은 Ras 및 표피생장인자 수용체(EGFR)의 발현과 연관성이 있음을 보여준다. 본원에 기재된 데이터는 Ras 및 EGFR 유전자 내의 돌연변이의 존재보다는 Ras와 EGFR의 단백질 수준이 암세포에서의 안트로퀴논올 유도된 세포독성의 중요한 결정요인임을 제시한다.
분자 모델링 및 도킹을 기초로 한 접근법은 GGTase-I와 화합물 1 사이의 상호작용 가능성을 나타내는데 사용되었다. 이전 연구들은 화합물 1이 AMPK, PI3K 및 mTOR을 포함하는 몇몇 신호전달 분자를 통해 항종양 활성을 작동시킴을 밝혀냈다(참조: Kumar VB, et al., Mutat Res 2011 Feb 10;707(1-2):42-5229; Yu C-C, et al., The Journal of nutritional biochemistry 23 (8):900-907; Chiang P-C, et al., Biochemical Pharmacology 79 (2):162-171). 본원에서 몇몇 양태는 FTase 활성의 억제를 통해 Ras 처리를 억제하는 예시적인 사이클로헥센온 화합물(예를 들면, 화합물 1)을 제공한다. 화합물 1 매개된 항종양 활성에 기여하는 가능한 신호전달 경로는 도 7에 요약하였다. 증식, 운동성, 대사 및 분화와 관련된 Ras-PI3K-Akt-mTOR 경로는 화합물 1에 대한 응답으로 억제된다. ERK1/2 및 AMPK와 같은 다른 중요한 신호전달 분자는 화합물 1 처리에 대한 응답으로 유도되었다. 몇몇 연구로 ERK1/2 및 AMPK가 아폽토시스 및 자가소화 세포사의 다른 측면에 관련된 것으로 밝혀졌다. 복합 신호전달 경로가 화합물 1 자극에 대한 응답으로 동시에 활성화되는 것으로 추론된다. 따라서, 몇몇 양태의 경우, 상기 사이클로헥센온 화합물(예를 들면, 화합물 1)은 아폽토시스 및 자가소화를 야기하는 복잡한 신호전달 네트워크 내의 혼선을 조절함으로써 항종양 효과를 촉진시킨다.
프레닐트랜스퍼라제 활성의 억제는 복합 신호전달 분자의 프레닐화를 억제하여 다운스트림 신호전달을 방해한다. Ras는 정상적인 세포 성장 및 악성 형질전환의 몇몇 측면을 조절하는 복잡한 네트워크에서의 중추 신호전달 단백질이다. Ras, 특히 K-Ras에서의 돌연변이 활성화는 빈번히 사람의 암을 유발한다. 따라서, Ras의 타겟화는 암 치료를 위한 가능성 있는 전략이다. 상기 사이클로헥센온 화합물(예를 들면, 화합물 1)은 생화학적 특성화 및 분자 도킹 분석을 기초로 하여 효소 파르네실트랜스퍼라제의 억제를 통해 Ras 처리를 억제하고, 결국 세포사를 초래한다.
백혈병은 골수 및 혈액의 악성 암이다. 백혈병은 제어되지 않는 혈액 세포의 성장이 특징이다. 급성 백혈병은 빠르게 진행되는 질환으로, 그 결과 골수 및 혈액에 미숙한 무기능 세포가 다량으로 축적된다. 골수는 종종 정상적인 적혈구, 백혈구 및 혈소판을 더 이상 생성하지 못한다. 적혈구 결핍증인 빈혈은 사실상 모든 백혈병 환자에게서 발병한다. 정상적인 백혈구의 결핍은 감염에 대항할 신체 능력을 손상시킨다. 혈소판 부족은 타박상 및 빈번한 출혈을 야기한다. 반면, 만성 백혈병은 좀 더 천천히 진행되고 조절되지 않는 증식을 야기하여 성숙한(분화된) 세포 범위의 현저한 과도팽창을 유발한다.
몇몇 양태에서, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물을 백혈병을 앓고 있는 대상(예를 들면, 사람)에 투여함으로써, 상기 대상에서의 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험성을 감소시키는 방법이 제공된다. 상기 사이클로헥센온 화합물은 백혈병을 치료해야 할 대상에 치료적 이득을 제공한다(실시예 1 내지 13 참조). 상기 사이클로헥센온 화합물은 몇몇 양태에서 천연 산물의 추출물로부터 수득되고, 감소된 합병증 및/또는 부작용을 제공한다. 몇몇 양태의 경우, 본원 발명은 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험성을 감소시키기 위한 예시적인 사이클로헥센온 화합물(예를 들면, 화합물 1)의 치료적 및 예방적 잠재력을 제공한다.
몇몇 양태에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭의 치료학적 유효량을 백혈병을 앓고 있는 대상에 투여함을 포함하여, 상기 대상에서의 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험성을 감소시키는 방법이 제공된다.
Figure 112015089023518-pct00002
여기서,
각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되고;
각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
m은 1 내지 12이고;
n는 1 내지 12이다.
몇몇 양태에서, 백혈병은 급성 골수성 백혈병, 급성 적혈구 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, T세포 급성 림프아구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병/림프종, 전구 T세포 급성 림프아구성 백혈병/림프종 또는 만성 골수성 백혈병의 급성기와 같은 급성 백혈병이다. 몇몇 양태에서, 백혈병은 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 또는 모양 세포 백혈병과 같은 만성 백혈병이다. 특정 양태에서, 만성 백혈병은 만성 골수성 백혈병이다. 몇몇 양태에서, 대상은 사람이다(실시예 2 내지 13 참조).
몇몇 양태에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물은 임의의 적합한 출발 물질로부터 합성 또는 반합성으로 제조된다.
Figure 112015089023518-pct00003
다른 양태에서, 상기 사이클로헥센온 화합물은 발효 등에 의해 제조된다. 예를 들면, 하기 화합물 1 및 3 내지 7은 유기 용매 추출물로부터 분리된다. 비제한적인 예시 화합물은 다음과 같다:
Figure 112015089023518-pct00004
Figure 112015089023518-pct00005
Figure 112015089023518-pct00006
다른 양태에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물은 안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)의 유기 용매 추출물로부터 분리된다.
Figure 112015089023518-pct00007
몇몇 양태에서, 상기 유기 용매는 알콜(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 등), 에스테르(예를 들면, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트 등), 알칸(예를 들면, 펜탄, 헥산, 헵탄 등), 할로겐화 알칸(예를 들면, 클로로메탄, 클로로에탄, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드 등) 등으로부터 선택된다. 예를 들면, 예시 화합물 1 내지 7은 유기 용매 추출물로부터 분리된다. 특정 양태의 경우, 상기 유기 용매는 알콜이다. 특정 양태에서, 상기 알콜은 에탄올이다. 몇몇 양태에서, 상기 사이클로헥센온 화합물은 안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)의 수성 추출물로부터 분리된다.
몇몇 양태에서, R은 수소, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5 또는 C(=O)CH3이다. 몇몇 양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 특정 양태에서, R2는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 몇몇 양태에서, R3는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 몇몇 양태에서, R4는 할로겐, NH2, NHCH3, N(CH3)2, OCH3, OC2H5, C(=O)CH3, C(=O)C2H5, C(=O)OCH3, C(=O)OC2H5, C(=O)NHCH3, C(=O)NHC2H5, C(=O)NH2, OC(=O)CH3, OC(=O)C2H5, OC(=O)OCH3, OC(=O)OC2H5, OC(=O)NHCH3, OC(=O)NHC2H5 또는 OC(=O)NH2이다. 몇몇 양태에서, R4는 C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된다. 특정 양태에서, R4는 CH2CH=C(CH3)2이다. 특정 양태에서, 상기 화합물은
Figure 112015089023518-pct00008
이다.
특정한 약제학적 및 의학적 용어
달리 명시되지 않는 한, 발명의 상세한 설명 및 청구항을 포함한 본원 명세서에 사용된 하기 용어들은 다음과 같이 정의된다. 발명의 상세한 설명 및 첨부된 청구항에 사용된 바와 같이, 문맥에 명백히 다르게 제시되지 않는 한, 단수형은 복수형을 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 질량분광학, NMR, HPLC, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 종래 방법들이 사용된다. 본원 명세서에서, 달리 명시되지 않는 한, "또는" 또는 "및"의 사용은 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는"과, 예를 들면, "포함하다" 및 "포함한"과 같은 다른 형태의 용어의 사용은 제한되지 않는다. 본원 명세서에서의 부문 제목은 정리용으로 사용된 것뿐이며, 기재된 내용을 제한할 의도는 아니다.
"알킬" 그룹은 지방족 탄화수소 그룹을 지칭한다. 상기 알킬 그룹은 포화 알킬 그룹(이는 탄소-탄소 이중결합 또는 탄소-탄소 삼중결합을 함유하지 않음을 의미한다) 또는 불포화 알킬 그룹(이는 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합 또는 탄소-탄소 삼중결합을 함유함을 의미한다)일 수 있다. 알킬 잔기는 포화 또는 불포화와 관계없이 측쇄 또는 직쇄일 수 있다.
"알킬" 그룹은 1 내지 12개의 탄소원자를 가질 수 있다(이러한 표현이 나올때마다 "1 내지 12"와 같은 수치 범위는 제시된 범위 내에서의 각 정수를 지칭한다; 예를 들면, "1 내지 12개의 탄소원자"는, 수치범위가 지정되지 않은 용어 "알킬"도 커버하지만, 알킬 그룹이 1개의 탄소원자, 2개의 탄소원자, 3개의 탄소원자 등으로부터 12개까지의 탄소원자로 이루어질 수 있음을 의미한다). 본원 명세서에 기재된 화합물의 알킬 그룹은 "C1-C8 알킬" 또는 이와 유사하게 지정된다. 단지 예로서, "C1-C8 알킬"은 알킬쇄에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소원자가 존재함을 나타낸다. 한 양태에서, 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 t-부틸로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 전형적인 알킬 그룹은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실, 알릴, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 사이클로프로필메틸, 사이클로부틸메틸, 사이클로펜틸메틸, 사이클로헥실메틸 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 한 양태에서, 알킬은 C1-C8 알킬이다.
용어 "알킬렌"은 2가 알킬 라디칼을 지칭한다. 위에서 언급된 1가 알킬 그룹 중 어느 것이라도 알킬로부터 두 번째 수소원자가 분리됨으로써 알킬렌이 될 수 있다. 한 양태에서, 알킬렌은 C1-C12 알킬렌이다. 다른 양태에서, 알킬렌은 C1-C8 알킬렌이다. 전형적인 알킬렌 그룹은 -CH2-, -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, -CH2CH2-, -CH2CH(CH3)-, -CH2C(CH3)2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 사용된 용어 "아릴"은, 환을 형성하는 각각의 원자가 탄소원자인 방향족 환을 지칭한다. 아릴환은 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 탄소원자에 의해 형성된다. 아릴 그룹은 임의로 치환된 것이다. 한 양태에서, 아릴은 페닐 또는 나프탈레닐이다. 한 양태에서, 아릴은 페닐이다. 한 양태에서, 아릴은 C6-C10 아릴이다. 아릴 그룹은 구조에 따라 모노라디칼 또는 디라디칼(즉, 아릴렌 그룹)일 수 있다. 한 양태에서, 아릴렌은 C6-C10 아릴렌이다. 아릴렌의 예에는 페닐-1,2-엔, 페닐-1,3-엔 및 페닐-1,4-엔이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "방향족"은 4n+2π개(여기서, n은 정수이다)의 전자를 함유하는 비국소 π-전자 시스템을 갖는 평면 환을 지칭한다. 방향족환은 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 원자로부터 형성된다. 방향족은 임의로 치환된 것이다. 용어 "방향족"은 카보사이클릭 아릴 그룹("아릴", 예를 들면, 페닐) 및 헤테로사이클릭 아릴(또는 "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족") 그룹(예를 들면, 피리딘)을 모두 포함한다. 상기 용어는 모노사이클릭 또는 융합환 폴리사이클릭(즉, 인접한 탄소원자쌍들을 공유하는 환) 그룹을 포함한다.
용어 "할로", 다르게는 "할로겐" 또는 "할라이드"는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
용어 "락톤"은 동일 분자 내의 알콜 그룹 -OH와 카복실산 그룹 -COOH의 축합 생성물에서 볼 수 있는 사이클릭 에스테르를 지칭한다. 락톤은 2개 이상의 탄소원자와 1개의 산소원자로 이루어진 폐환으로서, 상기 산소에 인접한 탄소들 중 하나에 케톤 그룹 =O를 갖는 것을 특징으로 한다.
용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭"은 환 내에 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 헤테로방향족 환(이는 헤테로아릴로도 공지됨) 및 헤테로사이클로알킬 환(이는 헤테로지환족 그룹으로도 공지됨)을 지칭하며, 상기 환 내의 각각의 헤테로원자는 O, S 및 N으로부터 선택되고, 각각의 헤테로사이클릭 그룹은 해당 환 시스템에 4 내지 10개의 원자를 갖고, 단 어떠한 환도 2개의 인접한 O 또는 S 원자를 함유하지 않는다. 비방향족 헤테로사이클릭 그룹(이는 헤테로사이클로알킬로도 공지됨)은 해당 환 시스템에 3개의 원자만 갖는 그룹을 포함하나, 방향족 헤테로사이클릭 그룹은 해당 환 시스템에 5개 이상의 원자를 가져야 한다. 헤테로사이클릭 그룹은 벤조 융합환 시스템을 포함한다. 3원 헤테로사이클릭 그룹의 예는 아지리디닐이다. 4원 헤테로사이클릭 그룹의 예는 아제티디닐이다. 5원 헤테로사이클릭 그룹의 예는 티아졸릴이다. 6원 헤테로사이클릭 그룹의 예는 피리딜이고, 10원 헤테로사이클릭 그룹의 예는 퀴놀리닐이다. 비방향족 헤테로사이클릭 그룹의 예는 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 옥사졸리디노닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 티옥사닐, 피페라지닐, 아지리디닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 피롤린-2-일, 피롤린-3-일, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디하이드로피라닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로푸라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 3H-인돌릴 및 퀴놀리지닐이다. 방향족 헤테로사이클릭 그룹의 예는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 푸리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐 및 푸로피리디닐이다. 상기 그룹은 가능한 경우 C-결합된 것이거나 N-결합된 것일 수 있다. 예를 들면, 피롤로부터 유도된 그룹은 피롤-1-일(N-결합된 것) 또는 피롤-3-일(C-결합된 것)일 수 있다. 또한, 이미다졸로부터 유도된 그룹은 이미다졸-1-일 또는 이미다졸-3-일(둘 다 N-결합된 것)이거나 이미다졸-2-일, 이미다졸-4-일 또는 이미다졸-5-일(모두 C-결합된 것)일 수 있다. 헤테로사이클릭 그룹은 벤조 융합환 시스템을 포함한다. 비방향족 헤테로사이클은, 예를 들면, 피롤리딘-2-온과 같이 1개 또는 2개의 옥소(=O) 잔기로 치환된 것일 수 있다.
본원 명세서에 사용된 용어 "알케닐"은 2 내지 10개의 탄소를 함유하고, 수소 2개의 제거에 의해 형성된 탄소-탄소 이중결합을 적어도 1개 함유하는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭(이 경우, "사이클로알케닐"로도 공지됨) 탄화수소를 의미한다. 몇몇 양태에서, 알케닐 그룹은 구조에 따라 모노라디칼 또는 디라디칼(즉, 알케닐렌 그룹)이다. 몇몇 양태에서, 알케닐 그룹은 임의로 치환된 것이다. 알케닐의 예에는 에테닐, 2-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 3-부테닐, 4-펜테닐, 5-헥세닐, 2-헵테닐, 2-메틸-1-헵테닐 및 3-데세닐이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 사용된 용어 "알키닐"은 2 내지 10개의 탄소를 함유하고, 수소 4개의 제거에 의해 형성된 탄소-탄소 삼중결합을 적어도 1개 함유하는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭(이 경우, "사이클로알키닐"로도 공지됨) 탄화수소를 의미한다. 몇몇 양태에서, 알키닐 그룹은 구조에 따라 모노라디칼 또는 디라디칼(즉, 알키닐렌 그룹)이다. 몇몇 양태에서, 알키닐 그룹은 임의로 치환된 것이다. 알키닐의 예에는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 헵티닐 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 사용된 용어 "알콕시"는 산소원자를 통해 모분자 잔기에 결합된, 본원 명세서에 정의된 바와 같은 알킬 그룹을 의미한다. 알콕시의 예에는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 2-프로폭시, 부톡시, tert-부톡시, 펜틸옥시 및 헥실옥시가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 사용된 용어 "사이클로알킬"은 탄소 및 수소만 함유하는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 라디칼을 의미하고, 포화되거나 부분적으로 불포화되거나 완전히 불포화된 형태를 포함한다. 사이클로알킬 그룹은 3 내지 10개의 환 원자를 갖는 그룹들을 포함한다. 사이클로알킬의 대표적 예에는 다음 구조가 포함되나, 이에 제한되지 않는다:
Figure 112015089023518-pct00009
Figure 112015089023518-pct00010
몇몇 양태에서, 사이클로알킬 그룹은 구조에 따라 모노라디칼 또는 디라디칼(예를 들면, 사이클로알킬렌 그룹)이다.
본원 명세서에 사용된 용어 "할로알킬", "할로알케닐", "할로알키닐" 및 "할로알콕시"는 적어도 하나의 수소가 할로겐 원자로 대체된 알킬, 알케닐, 알키닐 및 알콕시 구조를 포함한다. 2개 이상의 수소원자가 할로겐 원자로 대체된 특정 양태에서, 상기 할로겐 원자는 서로 동일하다. 2개 이상의 수소원자가 할로겐 원자로 대체된 다른 양태에서, 상기 할로겐 원자는 서로 상이하다. 용어 "플루오로알킬" 및 "플루오로알콕시"는 각각 할로가 불소인 할로알킬 그룹 및 할로알콕시 그룹을 포함한다. 특정 양태에서, 할로알킬은 임의로 치환된 것이다.
본원 명세서에 사용된 용어 "글루코실"은 D형 또는 L형 글루코실 그룹을 포함하고, 상기 글루코실 그룹은 글루코스 환의 임의의 하이드록실 그룹을 통해 결합되어 있다.
본원 명세서에 사용된, 제형, 조성물 또는 성분과 관련된 용어 "허용되는"은 치료 대상의 일반적인 건강에 지속적인 해로운 영향을 미치지 않음을 의미한다.
안트로디아(Antrodia)는 왕잎새버섯과(Meripilaceae)의 균류속이다. 안트로디아종은 성장 표면 위에 전형적으로 납작하게 있거나 퍼져 있는 자실체를 갖고, 외부로 노출된 자실체층을 가지며, 가장자리는 좁은 브래킷(bracket)을 형성하도록 방향을 바꿀 수 있다. 대부분의 종들은 온화한 북쪽 숲에서 발견되고 균핵병(brown rot)을 일으킨다
본원 명세서에 사용된 용어 "캐리어"는 화합물이 세포나 조직에 도입되는 것을 용이하게 만드는 상대적으로 비독성인 화학적 화합물 또는 제제를 지칭한다.
본원 명세서에 사용된 용어 "공동 투여" 등은 선택된 치료제를 단일 환자에게 투여함을 포함하는 것을 의미하고, 상기 치료제가 동일하거나 상이한 투여경로로 동일하거나 상이한 시간에 투여되는 치료요법을 포함한다.
용어 "희석제"는 관심 화합물을 전달하기 전에 상기 화합물을 희석하는데 사용되는 화학적 화합물을 지칭한다. 희석제는 또한 화합물을 안정화시키는데 사용하는데, 이는 희석제가 보다 안정한 환경을 제공할 수 있기 때문이다. 완충 용액에 용해된 염(이는 또한 pH를 조절하거나 유지시킬 수 있음)은 당해 분야에서 희석제로서 사용되며, 인산염 완충된 염 용액이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 사용된 용어 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 치료될 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시키는, 투여되는 제제 또는 화합물의 충분항 양을 지칭한다. 이로써 징후, 증상 또는 질환 요인의 감소 및/또는 경감, 또는 생물학적 계통의 임의의 기타 목적한 변화가 일어날 수 있다. 예를 들면, 치료학적 용도를 위한 "유효량"은 질환의 증상을 임상적으로 현저히 감소시키는데 필요한 본원 명세서에 기재된 화합물을 포함하는 조성물의 양이다. 임의의 각각의 경우에 적합한 "유효량"은 용량 증가 요법 연구와 같은 기술을 사용하여 결정할 수 있다.
본원 명세서에 사용된 용어 "개선시키다" 또는 "개선"은 목적한 효과를 효능 또는 기간 면에서 증가시키거나 연장시키는 것을 의미한다. 따라서, 치료제 효과의 개선에 대해서 용어 "개선"은 계통에 대한 다른 치료제의 효과를 효능 또는 기간 면에서 증가시키거나 연장시키는 능력을 지칭한다. 본원 명세서에 사용된 용어 "개선 유효량"은 목적한 계통에서 다른 치료제의 효과를 개선시키는데 적합한 양을 지칭한다.
본원 명세서에 사용된 화합물의 "대사 산물"은 화합물이 대사될 때 형성되는 상기 화합물의 유도체이다. 용어 "활성 대사 산물"은 화합물이 대사될 때 형성되는 화합물의 생물학적 활성 유도체를 지칭한다. 본원 명세서에 사용된 용어 "대사"는 특정 물질이 유기체에 의해 변하는 과정 전체(가수분해 반응 및 효소에 의해 촉매화되는 반응을 포함하나, 이에 제한되지 않음)를 지칭한다. 따라서, 효소는 화합물로의 특정한 구조적 변화를 제공할 수 있다. 예를 들면, 사이토크롬 P450은 우리딘 디포스페이트 글루쿠로닐트랜스퍼라제가 활성화된 글루쿠론산 분자의 방향족 알콜, 지방족 알콜, 카복실산, 아민 및 유리 설피드릴 그룹으로의 전환을 촉매하는 동안 다수의 산화 및 환원 반응에 촉매작용을 한다. 본원 명세서에 기재된 화합물의 대사 산물은 임의로 화합물의 숙주로의 투여 및 숙주로부터의 조직 샘플의 분석에 의해 또는 시험관내 간세포를 사용한 화합물의 배양 및 생성된 화합물의 분석에 의해 확인된다.
본원 명세서에 사용된 용어 "약제학적 배합물"은 하나 이상의 활성 성분을 혼합하거나 배합하여 생긴 생성물을 의미하고, 활성 성분의 고정 및 비고정 배합물을 포함한다. 용어 "고정 배합물"은 활성 성분, 예를 들면, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물) 및 보조 제제 둘 다를 단일 개체 또는 투여형의 형태로 환자에게 동시에 투여하는 것을 의미한다. 용어 "비고정 배합물"은 활성 성분, 예를 들면, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물) 및 보조 제제를 서로 별개의 개체로서 특정한 시간 간격의 제한 없이 동시에, 함께 또는 순차적으로 환자에게 투여하는 것을 의미하며, 이러한 투여는 환자 신체에 두 화합물을 효과적인 수준으로 제공한다. 후자의 경우는 또한 칵테일 치료, 예를 들면, 3개 이상의 활성 성분의 투여에도 적용된다.
용어 "약제학적 조성물"은 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)과 다른 화학적 성분, 예를 들면, 캐리어, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁제, 증점제 및/또는 부형제와의 혼합물을 지칭한다. 약제학적 조성물은 화합물을 유기체에 투여하는 것을 용이하게 한다. 당해 분야에서 화합물을 투여하는 다수의 기술은 정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안내, 폐 및 국소 투여를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "대상" 또는 "환자"는 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예에는 포유동물강의 임의의 구성원, 즉 사람, 사람이 아닌 영장류(예를 들면, 침팬지, 및 기타 유인원 및 원숭이종), 농장 가축(예를 들면, 소, 말, 양, 염소 및 돼지), 애완용 가축(예를 들면, 토끼, 개 및 고양이), 설치류(예를 들면, 래트, 마우스 및 기니 피그)를 포함한 실험실용 동물 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 한 양태에서, 포유동물은 사람이다.
본원 명세서에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상의 경감, 약화 또는 개선, 추가 증상의 방지, 질환 또는 상태의 억제, 예를 들면, 질환 또는 상태 진행의 저지, 질환 또는 상태의 완화, 질환 또는 상태의 원인 퇴행, 질환 또는 상태에 의해 야기된 상태의 완화, 또는 질환 또는 상태의 증상의 예방적 및/또는 치료적 중지를 포함한다.
투여 경로 및 투여형
적합한 투여 경로에는 경구, 정맥내, 직장, 에어로졸, 비경구, 안내, 폐, 경점막, 경피, 질내, 귀내, 비강내 및 국소 투여가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 비경구 전달은 근육내, 피하, 정맥내 및 골수내 주사뿐만 아니라 척추강내, 직접 심실내, 복강내, 림프내 및 비강내 주사를 포함하나, 이는 단지 예일 뿐이다.
특정 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은, 예를 들면, 상기 화합물을 종종 데포(depot) 제제 또는 지연 방출 제형으로 기관으로 직접 주사하는 전신 투여보다는 국소 투여로 투여된다. 특정 양태에서, 장시간 작용 제형은 주입(예를 들면, 피하 또는 근육내)에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여된다. 또한, 다른 양태에서, 제제는 목표하는 약제 전달 시스템, 예를 들면, 기관 특이적 항체로 도포된 리포좀에 전달된다. 이러한 양태에서, 상기 리포좀은 상기 기관을 목표로 하고 상기 기관에 의해 선택적으로 소비된다. 또 다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은 신속 방출 제형 형태, 지연 방출 제형 형태 또는 중간 방출 제형 형태로 제공된다. 또 다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은 국소 투여된다.
몇몇 양태에서, 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭은 비경구적으로 또는 정맥내로 투여된다. 다른 양태에서, 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭은 주사로 투여된다. 특정 양태에서, 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭은 경구 투여된다.
환자의 상태가 개선되지 않는 경우, 의사의 재량에 따라 본원 화합물을 임상적으로, 즉 환자의 질환 또는 상태의 증상을 개선하거나 달리는 조절하거나 제한하기 위해 환자의 삶의 기간 전체를 포함한 연장된 기간 동안 투여할 수 있다. 환자의 상태가 개선되는 경우, 의사의 재량에 따라 본원 화합물의 투여를 특정 기간 동안 지속적으로 또는 일시적으로 중지할 수 있다(즉, "휴약기") .
각각의 치료 요법에 대한 변수의 수가 많기 때문에 상기 범위들은 단지 제안적인 것이고, 이러한 제안된 변수로부터 상당히 벗어나는 경우는 통상적이다. 이러한 투여는 사용된 화합물의 활성, 치료될 질환 또는 상태, 투여 방법, 각 대상의 필요조건, 치료될 질환 또는 상태의 중증도 및 의사의 판단과 같은 다수의 변수에 따라 변할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이러한 치료 요법의 독성 및 치료 효능은 LD50(개체군의 50%를 치사시키는 용량) 및 ED50(개체군의 50%에 치료학적으로 효과적인 용량)의 측정을 포함하는 세포 배양물 또는 실험 동물에서의 표준 약제학적 방법으로 측정할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 독성 효과와 치료학적 효과 사이의 용량비는 치료 지수이고, LD50과 ED50 사이의 비율로서 나타낼 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 세포 배양물 검정 및 동물 연구로부터 수득한 데이터는 사람에 사용하기 위한 용량 범위를 구상하는 데 사용할 수 있다. 이러한 화합물의 용량은 바람직하게는 최소 독성을 갖는 ED50을 포함하는 유동 농도 범위내에 있다. 상기 용량은 사용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 상기 범위 내에서 변할 수 있다.
약제학적 제형
몇몇 양태에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭의 치료학적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
Figure 112015089023518-pct00011
여기서,
각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되고;
각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
m은 1 내지 12이고;
n는 1 내지 12이다.
몇몇 양태에서, 상기 약제학적 조성물의 상기 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭은 하기 구조를 갖는다:
Figure 112015089023518-pct00012
여기서,
각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되고;
각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
m은 1 내지 12이고;
n는 1 내지 12이다.
몇몇 양태에서, R은 수소, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5 또는 C(=O)CH3이다. 몇몇 양태에서, 각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸 또는 옥틸이다. 몇몇 양태에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 특정 양태에서, R2는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 특정 양태에서, R3는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 몇몇 양태에서, R4는 할로겐, NH2, NHCH3, N(CH3)2, OCH3, OC2H5, C(=O)CH3, C(=O)C2H5, C(=O)OCH3, C(=O)OC2H5, C(=O)NHCH3, C(=O)NHC2H5, C(=O)NH2, OC(=O)CH3, OC(=O)C2H5, OC(=O)OCH3, OC(=O)OC2H5, OC(=O)NHCH3, OC(=O)NHC2H5 또는 OC(=O)NH2이다. 몇몇 양태에서, R4는 C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된다. 특정 양태에서, R4는 CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된다.
특정 양태에서, 상기 화합물은 하기 화합물들로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
Figure 112015089023518-pct00013
Figure 112015089023518-pct00014
Figure 112015089023518-pct00015
Figure 112015089023518-pct00016
및
Figure 112015089023518-pct00017
특정 양태에서, 상기 화합물은 하기 화합물들로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
Figure 112015089023518-pct00018
Figure 112015089023518-pct00019
Figure 112015089023518-pct00020
Figure 112015089023518-pct00021
및
Figure 112015089023518-pct00022
몇몇 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물을 약제학적 조성물로 제형화한다. 특정 양태에서, 약제학적 조성물을, 활성 화합물의 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로의 가공을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 약리학적으로 허용되는 캐리어를 하나 이상 사용하여 통상의 방법으로 제형화한다. 적합한 제형은 선택된 투어 경로에 좌우된다. 임의의 약제학적으로 허용되는 기술, 캐리어 및 부형제를 본원 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 제형화하기에 적합한 것으로 사용한다[참조: Remington : The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; and Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 1999)].
화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물) 및 약제학적으로 허용되는 희석제, 부형제 또는 캐리어를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 특정 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은 약제학적 조성물로서 투여되는데, 여기서 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)은 다른 활성 성분들과 혼합되어 배합물 치료로서 투여된다. 이에 포함되는 배합물은 후술하는 배합물 치료 부문 및 본원 명세서 전반에 걸쳐 기재된 활성 성분들의 모든 배합물이다. 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함한다.
본원 명세서에서 사용하는 약제학적 조성물은 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)과 다른 화학적 성분, 예를 들면, 캐리어, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁제, 증점제 및/또는 부형제와의 혼합물을 지칭한다. 특정 양태에서, 약제학적 조성물은 화합물의 유기체로의 투여를 용이하게 한다. 몇몇 양태에서, 본원 발명의 치료방법 또는 용도를 실현하기 위해 치료학적 유효량의 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 치료될 질환 또는 상태를 갖는 포유동물에게 약제학적 조성물로 투여한다. 특정 양태에서, 상기 포유동물은 사람이다. 특정 양태에서, 상기 치료학적 유효량은 질환의 중증도, 대상의 연령 및 상대적 건강, 사용된 화합물의 효능 및 기타 요인에 따라 변한다. 본원 명세서에 기재된 화합물은 단독으로 사용되거나 혼합물의 성분으로서 하나 이상의 치료제와의 배합물로 사용된다.
한 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 수용액으로 제형화한다. 특정 양태에서, 상기 수용액은 약리학적으로 상용성인 완충액, 예를 들면, 행크 용액, 링거 용액 또는 약리학적 염 완충액으로부터 선택되나, 이는 예일 뿐이다. 다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)은 경점막 투여형으로 제형화한다. 특정 양태에서, 경점막 제형은 침투될 배리어에 적합한 침투제를 포함한다. 본원 명세서에 기재된 화합물이 다른 비경구 주사제로 제형화된 또 다른 양태에서, 적합한 제형은 수성 또는 비수성 용액을 포함한다. 특정 양태에서, 상기 용액은 약리학적으로 상용성인 완충제 및/또는 부형제를 포함한다.
다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물을 경구 투여형으로 제형화한다. 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함하는 본원 명세서에 기재된 화합물은 활성 화합물을, 예를 들면, 약제학적으로 허용되는 캐리어 또는 부형제와 배합하여 제형화한다. 다양한 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은 경구 투여형으로 제형화하며, 이에는 정제, 산제, 환제, 드라제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 엘릭시르제, 슬러리제, 현탁액제 등이 포함되나, 이는 예일 뿐이다.
특정 양태에서, 경구용 약제학적 제제는 하나 이상의 고체 부형제를 본원 명세서에 기재된 화합물 하나 이상과 혼합하고, 임의로, 생성된 혼합물을 분쇄하고, 상기 혼합물을 과립으로 가공하고, 필요한 경우, 적합한 보조제를 가한 다음, 정제 또는 드라제 코어를 수득함으로써 수득한다. 적합한 부형제는 특별히 충전제, 예를 들면, 락토즈, 수크로즈, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로즈 제제, 예를 들면, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸트, 메틸셀룰로즈, 미세결정성 셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈; 기타, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈(PVP 또는 포비돈) 또는 인산칼슘이다. 특정 양태에서, 붕해제는 임의로 첨가된다. 붕해제는 가교결합된 크로스카멜로즈 나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 이의 염(예를 들면, 나트륨 알기네이트)을 포함하나, 이는 예일 뿐이다.
한 양태에서, 드라제 코어 및 정제와 같은 투여형은 하나 이상의 적합한 코팅제로 도포된다. 특정 양태에서, 농축된 당 액을 상기 투여형을 도포하는데 사용한다. 상기 당 용액은 임의로 추가 성분, 예를 들면, 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 이산화티탄, 래커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함하나, 이는 예일 뿐이다. 임의로 염료 및/또는 안료도 식별을 목적으로 코팅제에 첨가된다. 추가로, 염료 및/또는 안료는 임의로 활성 화합물 용량의 상이한 배합물들을 특징화하는데 사용된다.
특정 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물 하나 이상의 치료학적 유효량을 기타 경구 투여형으로 제형화한다. 경구 투여형에는 젤라틴으로 제조된 끼워맞춤식 캡슐제(push-fit capsule) 뿐만 아니라 젤라틴 및 가소제(예를 들면, 글리세롤 또는 소르비톨)로 제조된 연질 봉합 캡슐제가 포함된다. 특정 양태에서, 끼워맞춤식 캡슐은 활성 성분을 하나 이상의 충전제와의 혼합물로 함유한다. 충전제는 락토즈, 결합제(예를 들면, 전분) 및/또는 윤활제(예를 들면, 활석 또는 마그네슘 스테아레이트) 및 임의로 안정화제를 포함하나, 이는 예일 뿐이다. 다른 양태에서, 연질 캡슐제는 적합한 액체에 용해되거나 현탁된 하나 이상의 활성 화합물을 함유한다. 적합한 액체는 하나 이상의 지방 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜을 포함하나, 이는 예일 뿐이다. 추가로, 안정화제가 임의로 첨가된다.
다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물 하나 이상의 치료학적 유효량을 구강 또는 설하 투여용으로 제형화한다. 구강 또는 설하 투여에 적합한 제형은 정제, 로젠지제 또는 겔을 포함하나, 이는 예일 뿐이다. 또 다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물은 1회 주사 또는 연속 투입에 적합한 제형을 포함한 비경구 주사용으로 제형화된다. 특정 양태에서, 주사용 제형은 단위 투여형(예를 들면, 앰플)으로 또는 다중용량 용기 내에 존재한다. 임의로 방부제가 주사 제형에 첨가된다. 또 다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 약제학적 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중 살균 현탁액, 용액 또는 유화액으로서 비경구 주사에 적합한 형태로 제형화된다. 비경구 주사 제형은 임의로 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화 제제를 함유한다. 특정 양태에서, 비경구 투여용 약제학적 제형은 수용성 형태의 활성 화합물의 수용액을 포함한다. 추가 양태에서, 활성 화합물의 현탁액이 적합한 유성 주사 현탁액으로서 제조된다. 본원 명세서에 기재된 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 친지성 용매 또는 비히클은 지방 오일(예를 들면, 참깨유), 합성 지방산 에스테르(예를 들면, 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드) 또는 리포좀을 포함하나, 이는 예일 뿐이다. 특정 양태에서, 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예를 들면, 나트륨 카복시메틸 셀룰로즈, 소르비톨 또는 덱스트란을 함유한다. 임의로, 상기 현탁액은 화합물의 용해도를 증가시켜 고농도 용액을 제조하기에 적합한 안정화제 또는 제제를 함유한다. 그렇지 않으면, 다른 양태로, 활성 성분은, 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들면, 살균 발열성 물질 비함유 물과의 구성을 위해 분말 형태이다.
한 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 본원 명세서에 기재된 바와 같이 또는 당해 분야에 공지된 바와 같이 비경구 주사용 용액으로 제조하고, 자동 주사기를 통해 투여한다. 자동 주사기는, 예를 들면, 미국 특허 제4,031,893호, 제5,358,489호, 제5,540,664호, 제5,665,071호 및 제5,695,472호, 및 WO 2005/087297호(이들 각각은 그 기재내용에 대해 참조로 본원에 도입된다)에 기재된 것들이 공지되어 있다. 일반적으로, 모든 자동 주사기는, 주사될 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함하는 다량의 용액을 함유한다. 일반적으로, 자동 주사기는, 약제 전달용 바늘을 갖는 유체 소통장치인, 용액을 유지시키기 위한 저장소와, 상기 바늘을 자동으로 배치하고 상기 바늘을 환자에 삽입하고 투여량을 환자에게 전달하는 장치를 포함한다. 예시적으로 주사기는 용액 1mL당 약 0.5 내지 50mg의 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 농도로 용액을 약 0.3mL, 0.6mL, 1.0mL 또는 기타 적합한 용적으로 제공한다. 각각의 주사기는 화합물의 1회 투여량만 전달할 수 있다.
또 다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 국소 투여한다. 본원 명세서에 기재된 화합물은 다양한 국소 투여할 수 있는 조성물, 예를 들면, 용액, 현탁액, 로션, 겔, 페이스트, 약제가 든 스틱, 향유, 크림 또는 연고로 제형화된다. 이러한 약제학적 조성물은 임의로 가용화제, 안정화제, 탄력성(tonicity) 개선제, 완충제 및 방부제를 함유한다.
또 다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 경피 투여용으로 제형화한다. 특정 양태로, 경피 제형은 경피 전달 장치와 경피 전달 패치를 사용하고, 중합체 또는 접착제에 용해되고/되거나 분산된 친지성 유액 또는 완충된 수용액일 수 있다. 다양한 양태에서, 이러한 패치는 약제학적 제제의 연속적 전달, 박동성 전달 또는 필요에 의한 전달을 위해 구성된다. 추가 양태로, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 경피 전달은 이온영동 패치 등에 의해 이루어진다. 특정 양태에서, 경피 패치는 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 제어 전달한다. 특정 양태에서, 속도 조절 막을 사용하거나 상기 화합물을 중합체 매트릭스 또는 겔에 트랩핑하여 흡수 속도를 늦춘다. 다른 양태로, 흡수를 증가시키기 위해 흡수 개선제를 사용한다. 흡수 개선제 또는 캐리어는 피부를 통한 통과를 용이하게 하는 약제학적으로 허용되는 흡수성 용매를 포함한다. 예를 들면, 한 양태에서, 경피 장치는 지지 부재를 포함하는 붕대, 임의로 캐리어와 함께 상기 화합물을 함유하는 저장소, 임의로 상기 화합물을 제어되고 예정된 속도로 연장된 기간 동안 대상의 피부로 전달하기 위한 속도 조절 배리어 및 상기 장치를 피부에 안전하게 붙이는 수단의 형태이다.
본원 명세서에 기재된 경피 제형은 당해 분야에 기재된 다양한 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 예를 들면, 이러한 장치는 미국 특허 제3,598,122호, 제3,598,123호, 제3,710,795호, 제3,731,683호, 제3,742,951호, 제3,814,097호, 제3,921,636호, 제3,972,995호, 제3,993,072호, 제3,993,073호, 제3,996,934호, 제4,031,894호, 제4,060,084호, 제4,069,307호, 제4,077,407호, 제4,201,211호, 제4,230,105호, 제4,292,299호, 제4,292,303호, 제5,336,168호, 제5,665,378호, 제5,837,280호, 제5,869,090호, 제6,923,983호, 제6,929,801호 및 제6,946,144호에 기재된 것들이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 기재된 경피 투여형은 당해 분야에서 통상적인 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있다. 한 양태로, 본원 명세서에 기재된 경피 제형은 다음의 적어도 세 가지 성분을 포함한다: (1) 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 제형, (2) 투여 개선제 및 (3) 수성 보조제. 또한, 경피 제형은 추가 성분, 예를 들면, 겔화제, 크림 및 연고 기재 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특정 양태에서, 경피 제형은 흡수를 개선시키고 상기 경피 제형이 피부에서 제거되는 것을 방지하기 위해 직물 또는 부직포 지지 재료를 추가로 포함한다. 다른 양태에서, 본원 명세서에 기재된 경피 제형은 피부로의 확산을 촉진시키기 위해 포화 또는 불포화 상태로 유지한다.
다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 흡입 투여용으로 제형화한다. 흡입 투여에 적합한 다양한 형태는 에어로졸, 미스트 또는 분말을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 약제학적 조성물은 가압 팩 또는 네불라이저로부터 적합한 추진제(예를 들면, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로디플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적합한 기체)를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 용이하게 전달한다. 특정 양태에서, 가압 에어로졸의 투여 단위는 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 장착하여 결정한다. 특정 양태에서, 흡입기 또는 취입기에 사용되는, 예를 들면, 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 상기 화합물과 적합한 분말 기재, 예를 들면, 락토즈 또는 전분과의 분말 믹스를 함유하도록 제형화되나, 이는 예일 뿐이다.
비강내 제형은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 미국 특허 제4,476,116호, 제5,116,817호 및 제6,391,452호에 기재되어 있으며, 상기 특허들은 각각 본원에 구체적으로 참조로 도입된다. 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함하고 당해 분야에 공지된 기술 및 기타 기술에 따라 제조되는 제형은 벤질 알콜 또는 기타 적합한 방부제, 플루오로카본 및/또는 당해 분야에 공지된 기타 가용화제 또는 분산제를 사용하여 염 중 용액으로서 제조한다[참조: Ansel, H. C. et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Sixth Ed. (1995)]. 바람직하게는 이러한 조성물 및 제형은 약제학적으로 허용되는 적합한 비독성 성분들을 사용하여 제조한다. 이러한 성분들은 당해 분야의 표준 참고문헌(참조: REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 21st edition, 2005)에서 확인된다. 적합한 캐리어의 선택은 목적한 비강내 투여형, 예를 들면, 용액, 현탁액, 연고 또는 겔의 정확한 특성에 크게 좌우된다. 비강내 투여형은 일반적으로 활성 성분과 함께 다량의 물을 함유한다. 소량의 기타 성분, 예를 들면, pH 조절제, 유화제, 분산제, 방부제, 계면할성제, 겔화제, 완충제, 기타 안정화제 및 가용화제가 또한 존재할 수 있다. 바람직하게는 비강내 투여형은 비강내 분비물로 등장성이어야 한다.
흡입에 의한 투여의 경우, 본원 명세서에 기재된 화합물은 에어로졸, 미스트 또는 분말 형태일 수 있다. 본원 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 가압 팩 또는 네불라이저로부터 적합한 추진제(예를 들면, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적합한 기체)를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 용이하게 전달한다. 가압 에어로졸의 경우, 투여 단위는 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 장착하여 결정한다. 흡입기 또는 취입기에 사용되는, 예를 들면, 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 본원 명세서에 기재된 화합물과 적합한 분말 기재, 예를 들면, 락토즈 또는 전분과의 분말 믹스를 함유하도록 제형화되나, 이는 예일 뿐이다.
또 다른 양태에서, 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을, 예를 들면, 코코아 버터, 기타 글리세라이드 및 합성 중합체(예를 들면, 폴리비닐피롤리돈, PEG 등)와 같은 통상의 좌제 기재를 함유하는 관장제, 직장 겔, 직장 발포체, 직장 에어로졸, 좌제, 젤리 좌제 또는 잔류 관장제와 같은 직장 조성물로 제형화한다. 조성물의 좌제 형태에서, 저용융 왁스, 예를 들면, 지방산 글리세라이드 혼합물이, 임의로 코코아 버터와의 배합물(이에 제한되지 않는다)로 먼저 용융된다.
특정 양태에서, 약제학적 조성물은 활성 화합물을 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 약리학적으로 허용되는 캐리어를 사용하여 임의의 통상의 방법으로 제형화한다. 적합한 제형은 선택된 투여 경로에 좌우된다. 당해 분야에서 적합하고 공지된 임의의 약제학적으로 허용되는 기술, 캐리어 및 부형제를 임의로 사용한다. 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함하는 약제학적 조성물을 통상의 방법, 예를 들면, 통상의 혼합, 용해, 제립, 드라지 제조, 분쇄, 유화, 캡슐화, 트랩핑 또는 압착 공정으로 제조할 수 있으나, 이는 예일 뿐이다.
약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 캐리어, 희석제 또는 부형제와 본원 명세서에 활성 성분으로서 기재된 하나 이상의 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함한다. 상기 활성 성분은 유리산 또는 유리 염기 형태이거나 약제학적으로 허용되는 염 형태이다. 또한, 본원 명세서에 기재된 방법 및 약제학적 조성물은 결정성 형태(다형체로도 공지됨)의 사용뿐만 아니라 동일 유형의 활성을 갖는 화합물의 대사 산물의 사용도 포함한다. 본원 명세서에 기재된 화합물의 모든 토오토머는 본원 명세서에 기재된 화합물의 범위에 포함된다. 추가로, 본원 명세서에 기재된 화합물은 약제학적으로 허용되는 용매, 예를 들면, 물, 에탄올 등과의 비용매화 형태 및 용매화 형태를 포함한다. 본원 명세서에 기재된 화합물의 용매화 형태는 또한 본원 명세서에 기재된 것으로 간주한다. 또한, 약제학적 조성물은 임의로 기타 의학적 또는 약제학적 제제, 캐리어, 보조제(예를 들면, 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해 개선제, 삼투압 조절 염, 완충제) 및/또는 기타 치료학적으로 유용한 물질을 포함한다.
본원 명세서에 기재된 화합물을 포함하는 조성물의 제조방법은 상기 화합물을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 불활성 부형제 또는 캐리어와 제형화하여 고체, 반고체 또는 액체를 형성함을 포함한다. 고체 조성물은 분말, 정제, 분산성 과립, 캡슐제, 카시에 및 좌제를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 액체 조성물은 본원 명세서에 기재된 화합물이 용해된 용액, 상기 화합물을 포함하는 유화액, 또는 상기 화합물을 포함하는 리포좀, 미셀 또는 나노입자를 함유하는 용액을 포함한다. 반고체 조성물은 겔, 현탁액 및 크림을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본원 명세서에 기재된 약제학적 조성물의 형태는 액체 용액 또는 현탁액, 사용 전에 액체로 용액 또는 현탁액을 만들기에 적합한 고체 형태, 또는 유화액을 포함한다. 이러한 조성물은 또한 임의로 소량의 비독성 보조제 물질, 예를 들면, 습윤제, 유화제, pH 완충제 등을 함유한다.
몇몇 양태에서, 적어도 본원 명세서에서 설명한 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)을 포함하는 약제학적 조성물은, 제제가 용액, 현택액 또는 둘 다에 존재하는 액체 형태를 띤다. 전형적으로, 상기 조성물을 용액 또는 현탁액으로 투여하는 경우, 제제의 첫 번째 부분이 용액에 존재하고 제제의 두 번째 부분이 액체 매트릭스 중 현탁액에 특정 형태로 존재한다. 특정 양태에서, 액체 조성물은 겔 형성제를 포함한다. 다른 양태에서, 액체 조성물은 수성이다.
특정 양태에서, 약제학적 수성 현탁액은 현탁제로서 하나 이상의 중합체를 포함한다. 중합체는 수용성 중합체, 예를 들면, 셀룰로즈성 중합체(예: 하이드록시프로필 메틸셀룰로즈)와 수불용성 중합체, 예를 들면, 가교결합된 카복시-함유 중합체를 포함한다. 본원 명세서에 기재된 특정 약제학적 조성물은, 예를 들면, 카복시메틸셀룰로즈, 카보머(아크릴산 중합체), 폴리(메틸메타크릴레이트), 폴리아크릴아미드, 폴리카보필, 아크릴산/부틸 아크릴레이트 공중합체, 나트륨 알기네이트 및 덱스트란으로부터 선택된 점막부착성 중합체를 포함한다.
약제학적 조성물은 또한 임의로 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)의 용해를 돕는 가용화제를 포함한다. 용어 "가용화제"는 일반적으로 교질입자 용액 또는 완전 용액을 형성하는 제제를 포함한다. 특정한 허용되는 비이온성 계면할성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80이 가용화제로서 유용하고, 눈에 허용되는 글리콜, 폴리글리콜, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 400, 및 글리콜 에테르를 사용할 수 있다.
추가로, 약제학적 조성물은 임의로 하나 이상의 pH 조절제 또는 완충제를 포함하며, 이에는 산, 예를 들면, 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예를 들면, 수산화나트륨, 인산나트륨, 붕산나트륨, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 나트륨 락테이트 및 트리스하이드록시메틸아미노메탄; 및 완충제, 예를 들면, 시트레이트/덱스트로즈, 중탄산나트륨 및 염화암모늄이 포함된다. 이러한 산, 염기 및 완충제는 조성물의 pH를 허용되는 범위로 유지시키는데 필요한 양으로 포함한다.
또한, 약제학적 조성물은 임의로 하나 이상의 염을, 조성물의 삼투압을 허용되는 범위로 만드는데 필요한 양으로 포함한다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 양이온과 클로라이드, 시트르산염, 아스코르브산염, 붕산염, 인산염, 중탄산염, 황산염, 티오황산염 또는 중아황산염 음이온을 갖는 염을 포함하고, 적합한 염에는 염화나트륨, 염화칼륨, 나트륨 티오설페이트, 중아황산나트륨 및 황산암모늄이 포함된다.
다른 약제학적 조성물은 임의로 미생물 활동을 억제하는 하나 이상의 방부제를 포함한다. 적합한 방부제는 수은-함유 물질, 예를 들면, 메르펜(merfen) 및 티오메르살(thiomersal); 안정화된 이산화염소; 및 4급 암모늄 화합물, 예를 들면, 벤즈알코늄 클로라이드, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드 및 세틸피리디늄 클로라이드를 포함한다.
또 다른 약제학적 조성물은 물리적 안정성을 증가시키거나 다른 목적을 위해 하나 이상의 계면활성제를 포함한다. 적합한 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 지방산 글리세라이드 및 식물성 오일, 예를 들면, 폴리옥시에틸렌 (60) 수소화 피마자유; 및 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 및 알킬페닐 에테르, 예를 들면, 옥톡시놀 10 및 옥톡시놀 40을 포함한다.
또 다른 약제학적 조성물은 화학적 안정성을 증가시키기 위해 필요에 따라 하나 이상의 항산화제를 포함할 수 있다. 적합한 항산화제는 아스코르브산 및 나트륨 메타바이설파이트를 포함하나, 이는 예일 뿐이다.
특정 양태에서, 약제학적 수성 현탁액 조성물은 다시 밀봉할 수 없는 단일 용량 용기에 포장된다. 그렇지 않으면, 다시 밀봉할 수 있는 다중 용량 용기가 사용되는데, 이 경우 통상 조성물에 방부제를 포함시킨다.
대안 양태에서, 소수성 약제학적 성분을 전달하는 다른 시스템이 사용된다. 본원에서 전달 비히클 또는 캐리어의 예는 리포좀 및 유화액이다. 특정 양태에서, N-메틸피롤리돈과 같은 유기 용매도 사용된다. 추가 양태에서, 본원 명세서에 기재된 화합물을 지연 방출 시스템, 예를 들면, 치료제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 사용하여 전달한다. 다양한 지연 방출 재료가 본원에 유용하다. 특정 양태에서, 지연 방출 캡슐은 화합물을 수 시간 내지 24시간 이상 동안 방출한다. 치료제의 화학적 특성 및 생물학적 안정성에 따라, 단백질 안정화를 위한 추가의 전략을 사용할 수 있다.
특정 양태에서, 본원 명세서에 기재된 제형은 하나 이상의 항산화제, 금속 킬레이트제, 티올 함유 화합물 및/또는 기타 일반적인 안정화제를 포함한다. 이러한 안정화제의 예는 (a) 약 0.5% 내지 약 2% w/v의 글리세롤, (b) 약 0.1% 내지 약 1% w/v의 메티오닌, (c) 약 0.1% 내지 약 2% w/v의 모노티오글리세롤, (d) 약 1mM 내지 약 10mM의 EDTA, (e) 약 0.01% 내지 약 2% w/v의 아스코르브산, (f) 약 0.003% 내지 약 0.02% w/v의 폴리소르베이트 80, (g) 약 0.001% 내지 약 0.05% w/v의 폴리소르베이트 20, (h) 아르기닌, (i) 헤파린, (j) 덱스트란 설페이트, (k) 사이클로덱스트린, (l) 펜토산 폴리설페이트 및 기타 헤파리노이드, (m) 2가 양이온, 예를 들면, 마그네슘 및 아연, 또는 (n) 이들의 배합물을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
배합물 치료
일반적으로, 본원 명세서에 기재된 조성물 및, 본원 명세서에 기재된 작용 방식을 기초로 배합물 치료가 사용되는 양태에서의 기타 제제는 동일한 약제학적 조성물로 투여될 필요는 없고, 특정 경우 상이한 물리적 및 화학적 특성으로 인해 다른 경로로 투여된다. 특정 경우, 설정된 프로토콜에 따라 초기 투여가 수행되고, 관찰된 효과, 투여량, 투여 방식 및 투여 시간에 따라 숙련된 임상의가 수정한다.
특정 경우, 약제가 배합물 치료에 사용되는 경우 치료학적으로 유효한 용량은 변한다. 배합물 치료는 환자의 임상적 관리를 돕기 위해 다양한 시간에 개시하고 종결하는 주기적 치료를 추가로 포함한다. 본원 명세서에 기재된 배합물 치료의 경우, 공동 투여되는 화합물의 용량은 사용된 공동 약제의 종류, 사용된 특정 약제, 치료될 질환, 질병 또는 상태 등에 따라 변한다.
특정 양태에서, 경감시키고자 하는 상태의 치료, 예방 또는 개선을 위한 투여 요법은 다양한 요인에 따라 수정된다. 이러한 요인은 병을 앓고 있는 대상의 장애 뿐만 아니라 대상의 연령, 체중, 성별, 식이 및 의학적 상태를 포함한다. 따라서, 다른 양태에서, 실제로 사용되는 투여 요법은 광범위하게 달라지고, 이에 따라 본원 명세서에 기재된 투여 요법에서 벗어난다. 기타 백혈병 치료제와 화합물(즉, 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물)과의 배합물을 커버하고자 한다. 특정 양태에서, 골수의 차도를 일으키는 백혈병 치료제의 예는 프레드니손, L-아스파라기나제, 빈크리스틴 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특정 양태에서, 임의의 잔류된 백혈병 세포를 제거하기 위한 합동 치료 또는 심화 백혈병 치료제의 예는 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린(6-MP) 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물과 기타 백혈병 치료제와의 배합물은 특정 양태로 기타 제제를 사용한 추가의 치료 및 치료 요법을 포함한다. 이러한 추가의 치료 및 치료 요법은 특정 양태로 기타 백혈병 치료를 포함한다. 그렇지 않으면, 다른 양태로, 추가의 치료 및 치료 요법은 백혈병과 관련된 부가 상태 또는 배합물 치료에서의 제제의 부작용을 치료하기 위해 사용되는 기타 제제를 포함한다. 추가 양태로, 본원 명세서에 기재된 배합물 치료에 보조제 또는 개선제가 투여된다.
특정 양태에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사 산물, 용매화물 또는 프로드럭의 치료학적 유효량 및 하나 이상의 백혈병 치료제를 포함하는, 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험을 감소시키기 위한 조성물이 제공된다.
Figure 112015089023518-pct00023
여기서,
각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 치환되지 않거나 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되고;
각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
m은 1 내지 12이고;
n는 1 내지 12이다.
실시예
실시예 1: 예시적인 사이클로헥센온 화합물의 제조
안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)로부터의 균사, 자실체 또는 이들의 혼합물 100g을 플라스크에 넣었다. 적합한 양의 물 및 알콜(70 내지 100% 알콜 용액)을 플라스크에 첨가하고 20 내지 25℃에서 1시간 이상 교반하였다. 상기 용액을 필터 및 0.45㎛ 막을 통해 여과하고 여액을 추출물로 수집하였다.
안트로디아 캄포라타 여액을 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. RP18 컬럼 상에서 메탄올(A)과 0.3% 아세트산(B)으로 이루어진 이동상으로 95%-20% B로 0 내지 10분, 20%-10% B로 10 내지 20분, 10%-10% B로 20 내지 35분, 10%-95% B로 35 내지 40분의 구배조건을 사용하여 1mL/분의 유속으로 분리하였다. 컬럼 배출물을 UV 가시성 검출기로 모니터링하였다.
21.2 내지 21.4분에서 수집된 분획을 모으고 농축시켜 화합물 5를 담황색 액체 생성물로서 수득하였다. 화합물 5는 분자량이 408인 4-하이드록시-5-(11-하이드록시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥스-2-엔온(분자식: C24H40O5)으로 분석되었다.
1 H-NMR(CDCl3 )δ(ppm): 1.21, 1.36, 1.67, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.68, 4.05, 5.71 및 5.56. 13C-NMR(CDCl3)δ(ppm): 12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 25.67, 26.44, 26.74, 27.00, 30.10, 40.27, 43.34, 59.22, 60.59, 71.8, 120.97, 123.84, 124.30, 131.32, 134.61, 135.92, 138.05, 160.45 및 197.11.
Figure 112015089023518-pct00024
화합물 5: 4-하이드록시-5-(11-하이드록시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥스-2-엔온
23.7 내지 24.0분에서 수집된 분획을 모으고 농축시켜 화합물 7을 담황색 액체 생성물로서 수득하였다. 화합물 7은 분자량이 422인 4-하이드록시-2,3-디메톡시-5-(11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-6-메틸사이클로헥스-2-엔온(분자식: C25H42O5)으로 분석되었다.
1 H-NMR(CDCl3)δ(ppm) = 1.21, 1.36, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.24, 3.68, 4.05, 5.12, 5.50 및 5.61. 13C-NMR(CDCl3)δ(ppm): 12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 24.44, 26.44, 26.74, 27.00, 37.81, 39.81, 40.27, 43.34, 49.00, 59.22, 60.59, 120.97, 123.84, 124.30, 135.92, 138.05, 160.45 및 197.12.
Figure 112015089023518-pct00025
화합물 7: 4-하이드록시-2,3-디메톡시-5-(11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-6-메틸사이클로헥스-2-엔온
25 내지 30분에서 수집된 분획을 모으고 농축시켜 담황갈색 액체 생성물로서 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5-(3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐)사이클로헥스-2-엔온(화합물 1)을 수득하였다. 화합물 1은 분자식이 C24H38O4이고, 분자량이 390이며, 융점이 48 내지 52℃인 것으로 분석되었다. NMR 스펙트럼은 다음을 나타냈다: 1 H-NMR(CDCl3)δ(ppm)=1.51, 1.67, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.68, 4.05, 5.07 및 5.14. 13C-NMR(CDCl3)δ(ppm)=12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 25.67, 26.44, 26.74, 27.00, 39.71, 39.81, 40.27, 43.34, 59.22, 60.59, 120.97, 123.84, 124.30, 131.32, 135.35, 135.92, 138.05, 160.45 및 197.12.
Figure 112015089023518-pct00026
화합물 1: 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5-(3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐)사이클로헥스-2-엔온
동물 연구에서 화합물 1을 식이 공급한 래트의 뇨 샘플로부터 화합물 1의 대사 산물인 화합물 27을 수득하였다. 화합물 27은 분자량이 312인 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5-(3-메틸-2-헥센산)사이클로헥스-2-엔온(C16H24O6)으로 측정되었다. 정제 공정으로부터 2,3-디메톡시-5-메틸-6-((2E,6E)-3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐)사이클로헥사-2,5-디엔-1,4-디온으로 측정된 화합물 25(분자량 386.52, C24H34O4)를 수득하였다.
Figure 112015089023518-pct00027
Figure 112015089023518-pct00028
정제 공정을 통해 분자량이 350.53인 화합물 26, 4-하이드록시-2-메톡시-6-메틸-5-((2E,6E)-3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐)사이클로헥스-2-엔온(C23H36O3)을 또한 제조하였다. 화합물 28도 제조하였다.
Figure 112015089023518-pct00029
Figure 112015089023518-pct00030
대안으로, 예시 화합물을 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥사-2,5-디엔온 등으로부터 제조할 수 있다. 유사하게, 구조식
Figure 112015089023518-pct00031
를 갖는 기타 사이클로헥센온 화합물을 안트로디아 캄포라타로부터 분리하거나 적합한 출발 물질로부터 합성적으로 또는 반합성적으로 제조한다. 당해 분야의 통상의 기술자는 이러한 합성에 적합한 조건을 용이하게 사용할 것이다.
실시예 2: 세포주 및 세포 배양물의 제조
사람 간암(HepG2, Hep3B), 사람 폐 선암(A549, H838) 및 사람 골수성 백혈병(K562) 세포주를 ATCC(American Type Culture Collection)(미국 메릴랜드주 로크빌)으로부터 수득하였다. 사람 전립선암 세포주(LNCaP 및 DU145), 사람 유방암(MCF-7), 사람 방광암(TSGH 8301) 및 사람 췌장 선암(BxPC-3)을 BCRC(Bioresource Collection and Research Center, 타이완 신주)로부터 수득하였다. HepG2, DU145 및 MCF-7 세포주를 최소필수배지 알파(Minimum Essential Medium Alpha)(Invitrogen/Gibco BRL, 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드)에서 배양하였다. A549 세포를 둘베코 수정 이글 배지(Invitrogen/Gibco BRL)에서 배양하였다. H838, TSGH 8301, BxPC-3 LNCaP 및 K562 세포주를 RPMI-1640 배지(Invitrogen/Gibco BRL)에서 배양하였다. 모든 세포를 10% 소 태아 혈청(FBS)(Invitrogen/Gibco BRL), 100U/mL 스트렙토마이신 및 페니실린(Invitrogen/Gibco BRL)으로 보충된 배양 배지 속에서 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 처리를 위해 세포를 식스-웰 플레이트(six-well plate)에서 6.25 × 105 세포/웰로 시딩하였다. 다음 날에 배지를 무혈청 배지로 바꾸고, 24시간 동안 세포에서 혈청을 결핍시켰다. 화합물 1을 DMSO에 용해시키고 무혈청 배지로 원하는 농도로 희석시켰다. 이어서 배양물을 제시된 대로 희석된 화합물 1로 처리하였다. 처리 후, 세포를 차가운 인산염 완충액(PBS)으로 세척하고 인산염 및 프로테아제 억제제를 함유하는 RIPA 완충액을 사용하여 세정하였다.
실시예 3: 면역블로팅 분석
브래드퍼드(Bradford) 분석을 사용하여 측정한 총 단백질 용해물(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트루이스) 60㎍을 12.5% SDS-폴리아크릴아미드 겔에 용해시킨다. 정전압 180V에서 50분 동안 전기영동을 실시하였다. 겔을 정전류 280mA에서 90분 동안 PVDF 막으로 이동시켰다. 블롯을 3% 소 혈청 알부민(BSA)으로 블로킹하고, 포스포-P44/42((ERK1/2)(Thr202/Tyr204)(Cell Signaling Technology, 미국 매사추셋주 덴버스), p44/42MAPK(ERK1/2), 베클린-1(Cell Signaling Technology), LC3B(Novus Biologicals, 영국 캠브릿지), EGFR(Epitomics Inc, 캐나다 산타 클라라), Ras, GAPDH 또는 β-액틴(Sigma-Aldrich)에 대하여 항체를 1:1,000의 희석비로 검출하였다. 2차 항체를, 3,3'-디아미노벤지딘 기재 키트(Vector Laboratories, 캐나다 벌링에임)를 사용하여 검출한 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase)에 컨주게이트시켰다. 면역반응성 밴드를 이미지-프로 플러스 소프트웨어(Media Cybernetics, 매릴랜드주 실버 스프링)를 사용하여 농도계로 수량화하였다.
실시예 4: CCK -8 세포 생존력 분석
세포 증식 및 세포독성 분석으로 세포 생존력을 측정하기 위해 감도가 좋은 열량측정 분석이 세포 계수 키트-8(CCK-8)로 가능하다. CCK-8의 검출 민감도는 MTT, XTT, MTS 또는 WST-1과 같은 기타 테트라졸륨 염을 사용한 분석보다 높다.
세포 생존력은 세포 계수 키트-8(CCK-8, Enzo Life Sciences, 뉴욕주 파밍데일)을 사용하여 측정하였다. 이 분석에서, WST-8이 탈수소효소에 의해 세포내에서 감소되어 배양 배지에 가용성인 황색 생성물(포마잔, formazan)을 생성시킨다. 생성된 포마잔의 양은 생세포 수에 정비례한다. 처리 후, CCK-8 용액을 각각의 웰에첨가하고 4시간 동안 배양하였다. 포마잔 농도를 분광광도계를 사용하여 450nm의 흡수 파장에서 측정하였다. 세포 생존력은 상응하는 대조군의 백분율로 나타내었다.
실시예 5: SDS-PAGE를 기초로 한 프레닐트랜스퍼라제 분석
시험관 내 프레닐화 반응을 다양한 농도의 안트로퀴논올의 존재 또는 부재하에 3㎍ FTase(Jena, 독일)와 혼합된 20㎕ 반응 완충액(50mM HEPES, pH 7.2, 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 5mM DTT 및 20μM GDP), 25μM NBD-FPP 및 2㎍ H-RasGST 중에서 수행하였다. 반응물을 37℃에서 3시간 동안 배양하고, 20㎕(2회) SDS-PAGE 샘플 완충제를 첨가하고 95℃에서 3분 동안 비등시켜 급랭하였다. 최종적으로, 혼합물을 15% SDS-PAGE로 용해시켰다. Typhoon 9400 스캐너(GE Healthcare, 영국)(여기 레이저, 473nm; 방출 방지 필터, 510nm)를 사용하여 겔을 스캔한 다음, 쿠마시 블루로 염색하였다. Image-Pro Plus 소프트웨어(Media Cybernetics, 미국 매릴랜드주 실버 스프링)를 사용하여 형광성 밴드를 수량화하였다.
실시예 6: 면역형광성 및 DAPI 염색
세포를 식스-웰 플레이트의 유리 커버슬립 위에 시딩하였다. 세포를 밤새 배양한 후 제시된 농도의 화합물 1로 24시간 동안 처리하였다. 처리 후, 세포를 PBS 중의 4% 파라포름알데히드로 5분 동안 고정시키고, PBS 중의 0.1% 트리톤 X-100으로 5분 동안 투과성으로 만들었다. 세포를 블로킹제로서의 3% BSA에서 30분 동안 배양시켰다. 이어서, 세포를 LC3B(Sigma-Aldrich)에 대한 래빗 다클론성 항체로 실온에서 90분 동안 배양시켰다. 세포를 PBS 중의 0.1% 트리톤 X-100으로 3회 연속 세척한 후, 세포를 플루오레세인 이소티오시아네이트-공액된 2차 항체(Invitrogen Life Technologies, 영국 스코틀랜드 페이즐리)와 함께 실온에서 60분 동안 배양하였다. 세포를 Dapi-Fluoromount-GTM(SouthernBiotech, 미국 알라바마주 버밍엄)를 사용하여 적재하고, Zeiss LSM 780 plus ELYRA S.1.을 사용하여 공초점 형광성 현미경으로 시각화하였다.
실시예 7: 화합물 1 및 이의 유도체, 동족체 및 대사 산물의 세포독성 효과의 측정
화합물 1의 세포독성 효과가 Ras 돌연변이와 상관관계가 있는지를 알아보기 위해 야생형 Ras(H838, Hep3B 및 K562) 또는 돌연변이 Ras(A549, HepG2 및 THP-1)를 사용하여 사람 폐암(A549 및 H838), 간암(HepG2 및 Hep3B) 및 백혈병(K562 및 THP-1)으로부터 유도한 세포주를 사용하였다. 화합물 1로 처리한 지 48시간 후 세포 생존력을 측정하였다. 세포주 및 이의 IC50은 증가하는 순으로 THP-1(2.22μM) < A549(3.24μM) < H838(3.32μM) < Hep3B(3.74μM) < K562(5.12μM) < HepG2(6.42μM)이다(표 1). 화합물 1은 본원 명세서에 기재된 모든 세포주에서 우수한 세포독성 활성을 나타내기 때문에, 화합물 1에 대한 감도는 Ras 유전자 종류와 상관관계가 없다.
표 1. CCK-8 세포 생존력 분석으로 측정된 구조식 X의 예시 화합물들의 IC50
Figure 112015089023518-pct00032
상기 값들은 평균±S.E.M.을 나타냄.
상기 결과는, 예시 화합물 1은 모든 세포주에서 우수한 세포독성 활성을 나타내기 때문에 예시 화합물 1은 Ras 유전자 종류와 상관관계가 없음을 가리킨다. 또한, H838 세포 중의 화합물 1 동족체(화합물 25 내지 31)의 IC50 값을 기초로 화합물 1의 2'-하이드록시 그룹 및 파르네실 그룹이 화합물 1의 세포독성 효과에 중요함을 가리킨다.
실시예 8: 포스포릴화 ERK1 /2의 수준에 대한 화합물 1의 영향 평가
화합물 1의 MAP 키나제 신호전달에 대한 영향을 평가하기 위해, HepG2, A549 및 H838 세포를 다양한 농도 범위의 화합물 1로 처리하고 포스포릴화 ERK1/2 및 전체 ERK1/2에 대한 면역블로팅을 수행하였다. 화합물 1은 HepG2 및 A549 세포에서의 ERK1/2의 포스포릴화를 유도한 반면, 전체 ERK1/2 발현 수준은 영향을 받지 않았다(도 1). 그러나, H838 세포에서는 화합물 1 처리 후, ERK1/2 포스포릴화의 증가가 전체 ERK1/2의 발현 증가와 동시에 이루어졌다. 따라서, 일반적으로, 화합물 1은 암 세포주에서의 ERK1/2 포스포릴화를 증가시킨다.
실시예 9: 화합물 1에 의한 A549 세포에서의 ERK1 /2 포스포릴화 연구
선행 리포트에서 화합물 1은 A549 세포에서의 PI3K 신호전달을 억제하는 것으로 나타났다(참조: Kumar VB, et al., Mutat Res 2011 Feb 10;707(1-2):42-52). 이제 예시 화합물 1이 A549 세포에서의 ERK1/2 포스포릴화를 업레귤레이트(upregulate)하는 것으로 나타났다. Ras는 PI3K 및 ERK1/2의 업스트림 조절자이다. 화합물 1 유도된 암세포 사멸을 유도하고 화합물 1의 세포독성 타겟을 보다 정확하게 확인하기 위한 세포 신호전달 경로를 보다 잘 이해하기 위해, Ras의 기여를 조사하였다. 상이한 농도의 화합물 1로 24시간 동안 처리된 A549 및 H838 세포를 사용하여 혈청 조건 및 무혈청 조건에서 실험을 수행하였다. 두 개의 뚜렷한 밴드가 Ras에 대해 조사된 면역블롯에서 검출되었다. 좀 더 느린 이동 밴드는 비처리된 Ras에 해당되고, 좀 더 빠른 이동 밴드를 완전히 처리된 Ras를 나타낸다. 화합물 1은 혈청 조건 및 무혈청 조건에서 두 세포주 모두에서 비처리된 Ras의 축적을 일으켰다(도 2a). 또한, 화합물 1은 H838, HepG2 및 K562 세포에서의 비처리된 Ras의 용량 의존성 축적을 일으켰다(도 2b 및 2c). 상기 결과로부터 화합물 1이 암세포에서의 Ras 처리를 억제하는 것으로 나타났다.
실시예 10: 세포 배양물에서의 단백질 FTase 활성 및 FPP -의존성 Ras 프레닐화에 대한 화합물 1의 영향 평가
Ras의 번역 후 변형은 그 활성화를 위해 필수적이다. Ras를 활성화시키기 위한 제1 단계는 효소 FTase에 의한 프레닐화이다. Ras에 대한 프레닐 그룹 공여체인 화합물 1과 FPP의 화학 구조를 비교하면, 두 화합물 모두 동일한 C15 지방쇄를 갖는 다는 것을 알 수 있었다(도 3a). 이렇게 하여, 세포 배양물에서의 단백질 FTase 활성 및 FPP-의존성 Ras 프레닐화에 대한 화합물 1의 효과를 평가하였다. 그 결과는 화합물 1이 단독으로 비처리된 Ras의 축적을 현저히 증가시키는 것으로 나타났다. 추가로, FPP는 단독으로 H838 세포에서의 Ras 처리를 증가시켰다. 경쟁 분석은 FPP가 Ras 처리에 대해 화합물 1의 효과를 10μM의 낮은 농도로 중화시키는 것을 보여주었다(도 3b). 또한, 시험관 내 효소 활성 검정은 화합물 1이 FTase 활성을 용량 의존적으로 억제함을 증명하였다(도 3c). 그 결과는 화합물 1이 단백질 FTase 활성을 억제하고 세포 배양물에서 FPP와 경쟁적임을 보여주었다.
실시예 11: 단백질 FTase에 대한 화합물 1의 분자 도킹
FTase에 대한 아미노산 서열(서열 번호: IJCQ_A)을 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 단백질 데이터로부터 다운로드하였다. CDOCKER-A CHARMm 기초한 분자 도킹 알고리즘을 화합물 1과 FTase CAAX 박스간의 상호작용을 예측하고 평가하기 위해 적용하였다[참조: Wu G, et al., Vieth M (2003) Detailed analysis of grid-based molecular docking: A case study of CDOCKER―A CHARMm-based MD docking algorithm. Journal of Computational Chemistry 24 (13):1549-1562]. 바이어스를 제한하기 위해, 모든 사용자 조절가능한 매개변수들을 디폴트 세팅으로 유지시켰다.
FTase와 본원 명세서에 기재된 예시 사이클로헥센온(예를 들면, 화합물 1) 사이의 추정되는 상호작용을 예측하기 위해, 도킹 리간드(CDOCKER) 프로그램을 사용하여 분자 도킹 접근법을 수행하였다. 견본으로서 FTase의 결정 구조(PDB ID 1JCQ)를 사용하여, 도킹 모델을 제조하여 화합물 1과 FTase CAAX 모티프 사이의 상호작용을 특징화하였다. 도킹 연구는 화합물 1과 FPP가 FTase 활성 위치에 유사한 방향으로 결합되어 있음을 보여주었다(도 4a 및 도 4b). 화합물 1의 파르네실 그룹은 소수성 구멍 안에 있고 다수의 보존된 방향족 잔기와 상호작용을 한다. 화합물 1의 관능성 그룹과 FPP의 디포스페이트 잔기를 갖는 환 구조는 α/β 서브단위 계면 근처에 위치한다. 화합물 1 동족체의 세포독성 효과는 이소프렌 단위의 길이 및 2'-하이드록시 그룹이 세포독성 활성을 중재하는 데 필수적인 역할을 함을 나타낸다.
도킹 모델은 또한 화합물 1 동족체들의 세포독성 프로파일상의 차이를 설명하는 데 사용할 수 있다. 이소프렌 단위의 수가 FTase에 대한 이소프레노이드의 결합 친화력에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 화합물 1의 2'-하이드록시 그룹은 티로신 잔기 Y300b와 분자내 수소결합을 형성할 수 있다(도 4c). 또한, 화합물 1의 환 구조의 공간 배열은 3-메톡시 그룹이 FTase 서브단위의 계면 근처 빈 공간에 위치하고 있음을 나타냈다. 이에 따라, 메톡시 제거된 화합물 1은 원형 화합물 1보다 아주 약간 작은 IC50을 나타낼 것이다. 이러한 결과는 화합물 1과 FTase CAAX 모티프의 특정 구조를 통찰하는 중요 구조를 제공하고(도 4d), 이는 본원 명세서에 기재된 활성 사이클로헥센온 화합물(예를 들면, 화합물 1)의 합리적인 디자인을 돕는다.
실시예 12: 암세포에서의 화합물 1의 개선된 자가소화 활성
본원 출원인에 의한 이전 조사는 화합물 1이 PI3K/mTOR 경로를 통해 사람 암세포주에서의 아폽토시스 및/또는 자가소화 세포사를 유도하는 것을 나타냈다. Ras는 P13K의 업스트림에 있고 RasVal12-형질변환된 NIH3T3 세포에서의 자가소화 활성을 소극적으로 조절하는 것으로 나타났다. 여기서 폐암 세포주에서의 화합물 1 유도된 자가소화의 수준은 베클린-1 및 LC3B의 면역블롯 분석으로 측정하였다. LC3B 함유 자가포식소체는 공초점 현미경으로 가시화하였다. 그 결과는 화합물 1로 처리한 지 24시간 및 48시간 후 베클린-1 발현이 증가하는 것으로 나타났다(도 5a 및 도 5b). 화합물 1은 또한 LC3B-I의 LC3B-II로의 자가소화 전환을 유도하였다. 또한, LC3B-II 관련된 자가포식소체(녹색 형광성 스팟)가 공초점 현미경으로 관찰되었다(도 5c).
통계 분석
실시예의 결과는 3개의 독립적인 실험의 평균±평균의 표준오차(SEM)로 기재하였다. 차이의 유효성을 결정하는데 단일 팩터 페어 와이즈 아노바(single factor pair-wise ANOVA) 통계 분석을 수행하였다. 0.05 미만의 양방(two-tailed) P 값이 유효한 것으로 간주되었다.
실시예 13: 백혈병 암 이종이식 모델에 대한 화합물 1의 효능 실험
BioLasco Taiwan Co., LTD.로부터 6주 내지 7주령의 숫컷 CB.17 SCID 마우스를 구입하고 1주 동안 격리시켰다. 실험 기간 동안, 5마리의 마우스를 하나의 케이지에 넣었다. 모든 동물을 19 내지 25℃에서 12시간 명/12시간 암 주기로 Da-Hu 동물 시설에서 관리하였다. 동물들이 자유롭게 설치류 펠렛 식이와 물을 무제한으로 섭취하도록 하였다. 동물 연구의 실험 프로토콜을 검토하고 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)와 DCB로부터 승인을 받았다. 화합물 1을 올리브유로 희석시켜 최종 농도를 12mg/mL로 하였다.
종양 세포주: THP-1 세포(백혈병)를 10% 열 불활성화된 소 태아 혈청으로 보충된 RPMI-1640 배지 또는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 세포를 37℃의 가습 인큐베이터 내의 조직 배양 플라스크에서 5% CO2 및 95% 공기 대기하에 배양하였다.
생체내 이식
이식에 사용된 사람 암세포를 지수증식기 동안 수거하고, 50% 마트리겔(Matrigel) 용액(BD Biosciences, 미국 매사추셋주) 0.1mL 중 THP-1 1mL당 2 x 107 세포를 함유하는 농도로 인산염 완충된 염수에 재현탁시켰다. 평균 종양 용적이 150mm3에 달하면, 마우스를 랜덤하게 두 개의 그룹으로 나누고 실험 물질을 투여하였다. 용적은 다음 식을 사용하여 계산하였다: 종양 용적 = (w2×l)/2 (여기서, w는 종양의 너비이고, l은 종양의 직경 길이(nm)이다)
처리
하기 표는 처리 계획을 요약한 것이다. 화합물 1의 모든 처리는 4주 동안 1주에 5일씩 1일 2회(bID) 경구 위관 영양법(PO)에 의한 투여였다. 모든 투여량은 체중 1kg당 10mL의 용적이었다. 비히클 그룹에는 종양 성장 억제율의 계산을 위해 대조군과 동일한 용적의 올리브유를 투여하였다.
Figure 112015089023518-pct00033
종양 용적 및 체중의 평가
종양은 칼리퍼를 사용하여 매주 2회 측정하였다. 종양 성장 억제(TGI) 백분율은 다음 식을 사용하여 계산하였다: TGI(%)=[1-(T/C)]×100% (여기서, T 및 C는 각각 처리 그룹의 평균 종양 용적 및 대조군의 평균 종양 용적을 나타낸다). 동물들의 체중을 연구가 종결될 때까지 매주 2회 측정하였다. 체중 변화를 초기 체중에 대한 체중 증가 백분율로 계산하였다.
데이터 분석
데이터는 평균±SEM으로 표시하였다. 상기 두 그룹간의 비교는 스튜던트 t검정(Student's t test)을 사용하여 수행하였다. p<0.05가 통계적으로 유의한 차이인것으로 간주되었다.
결과
도 8은 실험 화합물로 처리된 THP-1 이종이식 마우스의 체중 변화가 거의 없음을 보여준다. 종양을 갖고 있는 마우스를 비히클(올리브유) 또는 화합물 1로 4주 동안 1주에 5일씩 1일 2회 경구 위관 영양법으로 120mg/kg을 투여하였다. 체중을 매주 2회 측정하였다.
도 9는 실험 화합물로 처리된 THP-1 이종이식 마우스의 종양 용적의 감소를 보여준다. 종양을 갖고 있는 마우스를 비히클(올리브유) 또는 안트로퀴논올로 4주 동안 1주에 5일씩 1일 2회 경구 위관 영양법으로 120mg/kg을 투여하였다. 체중을 매주 2회 측정하였다. 비히클 대조군 대비 ***p<0.005.
도 10은 실험 화합물로 처리된 THP-1 이종이식 마우스의 종양 질량의 감소를 보여준다.
이러한 결과는 이종이식 모델을 기초로 한 백혈병 암 처리에 대한 예시 화합물 1의 효과 및 효능을 명백히 증명한다.
실시예 14: 급성 골수성 백혈병, 골수이형성, 비호지킨 림프종 또는 다발성 골수종을 앓는 환자의 치료를 위한 화합물 1의 용도
화합물 1과 같은 본원 명세서에 기재된 사이클로헥센온 화합물의 급성 골수성 백혈병, 골수이형성, 비호지킨 림프종 또는 다발성 골수종을 앓는 환자의 치료 에 대한 효과 연구를 위한 임상 시험
연구 유형: 개입
연구 디자인: 마스킹: 오픈 라벨
주요 목적: 치료
목적:
급성 골수성 백혈병, 골수이형성, 비호지킨 림프종 또는 다발성 골수종을 앓는 환자의 치료에 대한 화합물 1의 능력 측정.
상기 환자에 대한 상기 치료 요법의 효과 측정.
상기 환자에 대한 상기 치료 요법의 안정성 및 잠재적인 항종양 효능 측정.
개요: 환자들에게 화합물 1을 1 내지 12일에 걸쳐 경구 투여하였다. 치료에 반응하는 급성 골수성 백혈병을 앓는 환자들에게는 제1 코스 종결 후 약 10일 동안 제2 코스를 투여하였다. 이들 환자에서의 후속 코스 및 다른 모든 환자에서의 추가 코스를 질병이 진행되지 않고 허용되지 않는 독성이 없는 상태에서 21 내지 28일 동안 반복하였다.
규정
연구에 적합한 연령: 18세 이상
연구에 적합한 성별: 남녀 모두
예상 인원: 총 20명의 환자가 이 연구에 참여.
기준
질병 특성: 다음의 종양 질환 중 하나로 진단됨.
급성 골수성 백혈병, 골수이형성, 저도(low grade) 또는 중도(intermediate grade)의 비호지킨 림프종, 다발성 골수종
종래 실패한 치료법이 존재하고 기타 공지된 치료 요법은 존재하지 않는다.
비호지킨 림프종을 앓는 환자들은 골수천자 또는 천자/흉막천자에 무리가 없는 골수 또는 악성 유출물에 종양 세포를 갖고 있어야 한다. 주목: 성인 비호지킨 림프종에 대한 새로운 분류 도식이 PDQ에 의해 채택되었다. 용어 "서서히 성장하는" 또는 "공격적" 림프종은 예전 용어인 "저도", "중도" 또는 "고도(high grade)" 림프종을 대체할 것이다. 그러나, 본 계획에서는 예전 용어를 사용한다.
환자 특성:
연령: 18세 이상
활동 상태: 카르노프스키(Karnofsky) 60 내지 100%
기대 수명: 특정되지 않음
조혈: 백혈병 또는 골수종이 없는 환자; 백혈구 2,500/㎣ 이상, 혈소판수 75,000/㎣ 이상
간: 빌리루빈 2.5mg/dL 이하
신장: 크레아티닌 2.5mg/dL 이하
기타: 임산부 또는 수유부 아님; 음성 임신 테스트; 생식력 있는 환자들은 연구 후 4주 동안 효과적으로 피임해야 함.
선행 병행 요법:
생물학적 요법: 특정되지 않음
화학요법: 백혈병을 앓지 않는 환자들; 세포독성 화학요법 전부터 적어도 3주
내분비 요법: 특정되지 않음
방사선요법: 백혈병을 앓지 않는 환자들; 방사선요법 전부터 적어도 3주
수술: 특정되지 않음
실시예 15: 경구 제형
경구 전달용 약제학적 조성물을 제조하기 위해, 100mg의 예시 화합물 1을 100mg의 옥수수기름과 혼합하였다. 혼합물을 경구 투여에 적합한 캡슐인 경구 투여 단위에 넣었다.
몇몇 경우에, 본원 명세서에 기재된 화합물 100mg을 750mg의 전분과 혼합한다. 혼합물을 경구 투여에 적합한 경질 젤라틴 캡슐과 같은 경구 투여 단위에 넣는다.
실시예 16: 설하 (경질 로젠지 ) 제형
경질 로젠지와 같은 구강 전달을 위한 약제학적 조성물을 제조하기 위해, 본원 명세서에 기재된 화합물 100mg을 분말 혼합당 420mg, 연한 옥수수 시럽 1.6mL, 증류수 2.4mL 및 민트 추출물 0.42mL와 혼합한다. 혼합물을 부드럽게 블렌딩하고 몰드에 부어 구강 투여에 적합한 로젠지를 형성한다.
실시예 17: 흡입 조성물
흡입 전달을 위한 약제학적 조성물을 제조하기 위해, 본원 명세서에 기재된 화합물 20mg을 무수 시트르산 50mg 및 0.9% 염화나트륨 용액 100mL와 혼합한다. 혼합물을 흡입 투여에 적합한 네불라이저와 같은 흡입 전달 단위에 넣는다.
본원 발명의 바람직한 양태들을 나타내고 기재하였지만, 당해 분야의 숙련가에게는 이러한 양태들은 단지 예로서 제공된 것임이 명백하다. 당해 분야의 숙련가에 의해 본원 발명에서 벗어나지 않고 다수의 변형, 변화 및 치환이 가능할 것이다. 본원 명세서에 기재된 양태들에 대한 다양한 대체가능한 양태들이 본원 발명을 실시하는 데 사용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 후술하는 청구항들은 본원 발명의 범위를 한정하기 위함이고 이에 의해 이들 청구항 및 그 등가물의 범위 내에서 방법 및 구조를 커버하려고 한다.

Claims (20)

  1. 대상에서의 백혈병을 치료하거나 백혈병의 위험성을 감소시키는 데 사용하기 위한, 하기 구조를 갖는 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물:
    Figure 112019067759446-pct00055

    여기서,
    각각의 X 및 Y는 독립적으로 산소, NR5 또는 황이고;
    R은 수소 또는 C(=O)C1-C8 알킬이고;
    각각의 R1, R2 및 R3는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 메틸 또는 (CH2)m-CH3이고;
    R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 아릴 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환되고;
    각각의 R5 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-C8 알킬이고;
    R7은 C1-C8 알킬, OR5 또는 NR5R6이고;
    m은 1 내지 12이고;
    n는 1 내지 12이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 백혈병이 급성 백혈병인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 백혈병이 만성 백혈병인, 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 급성 백혈병이 급성 골수성 백혈병, 급성 적혈구 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, T세포 급성 림프아구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병/림프종, 전구 T세포 급성 림프아구성 백혈병/림프종 또는 만성 골수성 백혈병의 급성기(blast crisis)인, 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 만성 백혈병이 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 또는 모양(毛樣) 세포 백혈병인, 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 만성 백혈병이 만성 골수성 백혈병인, 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이클로헥센온 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 경구, 비경구, 정맥내 또는 주사로 사용되는, 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상이 사람인, 조성물.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R이 수소, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5 또는 C(=O)CH3인, 조성물.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R1, R2 및 R3가 독립적으로 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸 또는 옥틸인, 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 각각의 R1 및 R2가 독립적으로 수소 또는 메틸인, 조성물.
  12. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, 아릴 또는 글루코실이고, 상기 5원 또는 6원 락톤, 아릴 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 것인, 조성물.
  13. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 C1-C8 알킬인, 조성물.
  14. 제13항에 있어서, R4가 CH2CH=C(CH3)2인, 조성물.
  15. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이
    Figure 112019067759446-pct00056
    인, 조성물.
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