KR102032057B1

KR102032057B1 - 신규한 테트라펩타이드 유도체 및 이를 포함하는 항적조 또는 항균용 조성물

Info

Publication number: KR102032057B1
Application number: KR1020180065437A
Authority: KR
Inventors: 김중균; 조자영
Original assignee: 부경대학교 산학협력단
Priority date: 2018-06-07
Filing date: 2018-06-07
Publication date: 2019-10-14

Abstract

본 발명은 신규한 테트라펩타이드 유도체 및 이를 포함하는 항적조 또는 항균용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 테트라펩타이드 유도체는 무해성 또는 무독성 적조 생물을 제외하고 유독성 또는 유해성 적조 생물만을 선택적으로 저해하는 항적조 효과가 우수하다. 또한, 그람 음성균, 그람 양성균 및 항생제 내성 균주를 효과적으로 억제하는 향균 활성이 우수하다. 또한, 고등어(Scomber japonicas) 폐액 분해 산물에서 유래한 것으로, 생선 폐액의 재활용 방안을 마련할 수 있고 경제적이므로, 관련 산업에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

신규한 테트라펩타이드 유도체 및 이를 포함하는 항적조 또는 항균용 조성물{Novel analogues of tetrapeptide and composition for anti-algae or anti-bacteria containing the same}

본 발명은 신규한 테트라펩타이드 유도체 및 이를 포함하는 항적조 또는 항균용 조성물에 관한 것이다.

적조란(Red tides 또는 Harmful Algal Blooms) 바다에 사는 플랑크톤이 대량 번식하여 바닷물 색깔을 갈색이나 빨간색으로 변색시키며 생태계를 파괴시키는 현상이다. 적조생물의 종류는 전 세계적으로 200종이 넘고 우리나라 연안에서 나타나는 적조생물은 40종 여종이다. 적조로 인한 피해는 크게 두 가지로 나룰 수 있는데 첫째는 어패류의 대량폐사나 인명피해이고, 또 하나는 관광산업의 피해이다. 구체적으로 살펴보면, 적조생물이 독성이 있는 유독성일 경우 어폐류들이 먹이를 잡기 위하여 물을 빨아들이는 과정에서 유독성 적조생물을 먹으면 독소에 중독이 되고 결국 죽게 된다. 적조생물이 대량으로 번식한 뒤 질소, 인 등 영양 염류를 다 써 버리면 일시에 죽어 해저에 가라앉게 되는데 이때 세균들이 이들을 분해하며 이 분해과정에서 세균들이 산소를 모두 써버리고 결국 해저는 무산소 상태가 되는데 운동성이 크게 떨어지는 패류들은 질식하여 죽게 된다. 또한, 적조는 주로 수온이 높고 바람이 세지 않은 늦봄과 여름에 자주 발생한다. 이 시기는 많은 관광객들이 해변을 찾아 수영을 하거나 구경을 하는 때인데 관광객들이 수영할 때 독성 적조생물이 들어 있는 물을 마시고 죽거나 마비가 될 수 있어 미국과 스페인, 이탈리아 등 많은 유럽 국가들은 해수욕장을 폐쇄하므로 관광수입에 막대한 피해를 준다. 우리나라의 경우 남해안의 넓은 해역에서 발생하며 남해안에서 일어나던 적조가 동해, 서해안에서도 발생하며, 유해성 적조가 대규모로 발생하고 있다.

미생물은 우리 주변 도처에 존재하고 있다. 특히, 우리가 일상생활에서 쉽게 접할 수 있는 전화기, 핸드폰, 바닥재, 냉장고, 에어콘, 가습기, 장난감, 벽지 및 각종 가스 킷트 등은 각종 세균류 및 곰팡이 등이 번식하기 쉬워 악취를 발생하기도 하며, 심지어는 인체에 유해한 세균이 번식하여 각종 질병을 유발하기도 하고, 병원성 대장균 O-157에 의한 식중독, 목욕탕에서 발생하는 폐렴을 일으키는 레지오넬라균 등의 심각한 사회문제를 발생하기도 한다. 따라서 이를 방지하기 위한 고기능성 항균물질이 요구되는데, 현재까지 이러한 항균물질들에 대한 많은 연구가 진행되고 있으며, 최근에는 천연물로부터 새로운 항균물질을 분리하고자 하는 연구가 활발하게 진행되고 있다.

본 발명의 목적은 서열번호 1, 2 및 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 테트라펩타이드를 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 적조 억제용 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 약학 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 식품 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 사료 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 목적은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 생물 농약 조성물을 제공할 수 있다.

상기 목적의 달성을 위해, 본 발명은 서열번호 1, 2 및 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 테트라펩타이드를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 적조 억제용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 사료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 생물 농약 조성물을 제공한다.

본 발명의 테트라펩타이드 유도체는 무해성 또는 무독성 적조 생물을 제외하고 유독성 또는 유해성 적조 생물만을 선택적으로 저해하는 항적조 효과가 우수하다. 또한, 그람 음성균, 그람 양성균 및 항생제 내성 균주를 효과적으로 억제하는 향균 활성이 우수하다. 또한, 고등어(Scomber japonicas) 폐액 분해 산물에서 유래한 것으로, 생선 폐액의 재활용 방안을 마련할 수 있고 경제적이므로, 관련 산업에 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 테트라펩타이드의 합성 후 순도확인을 위하여, HPLC 분석을 수행한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 테트라펩타이드의 합성 후 분자량 확인을 위하여, 질량분석법(mass spectrometry) 분석을 수행한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 테트라펩타이드의 2차구조를 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 테트라펩타이드를 처리한 후, A. fundyense 및 A. catenella의 항적조 활성 효과를 확인한 도이다.
도 5는 본 발명의 테트라펩타이드를 처리한 후, E. coli 및 S. flexeri의 항균 활성 효과를 확인한 도이다.

본 발명에서 용어, "테트라펩타이드"는 올리고펩타이드(oligopeptide)에서 분류되는 펩타이드 중 하나로, 펩타이드 결합으로 연결된 4개의 아미노산만을 구성으로 한다. 테트라 펩타이드는 약리적 활성이 강하며, 단백질-단백질 신호 전달에서 다양한 수용체에 대한 친화도 및 특이성을 나타낸다. 선형(linear) 또는 환형(cyclic) 테트라펩타이드가 존재하며, 펩타이드 결합 또는 공유결합에 의하여 고리화될 수 있다.

상기 테트라펩타이드는 고등어(Scomber japonicas) 폐액 분해 산물에서 유래되고, 상기 고등어 폐액 분해 산물은 바실러스 속(Bacillus), 브레비바실러스 속(Brevibacillus) 및 이의 혼합 균주를 접종하고 배양하여 분해될 수 있다.

본 발명에서 용어 "배양"은 미생물을 적당히 인공적으로 조절한 환경조건에서 생육시키는 것을 의미한다.

상기 혼합 균주와 고등어 폐액은 통상의 배지에서 생육 가능하다. 특정 미생물을 배양하기 위하여 배양대상 즉 배양체가 되는 미생물이 필요로 하는 영양물질을 포함하는 것으로 특수한 목적을 위한 물질이 추가로 첨가되어 혼합된 것일 수 있다. 상기 배지는 배양기 또는 배양액이라고도 하며, 천연배지, 합성배지 또는 선택배지를 모두 포함하는 개념이다.

배양에 사용되는 배지는 적당한 탄소원, 질소원, 아미노산, 비타민 등을 함유한 통상의 배지 내에서 온도, pH 등을 조절하면서 적절한 방식으로 특정 균주의 요건을 충족해야 한다. 사용될 수 있는 탄소원으로는 글루코즈 및 자일로즈의 혼합당을 주 탄소원으로 사용하며 이외에 수크로즈, 락토즈, 프락토즈, 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 당 및 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유 등과 같은 오일 및 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤, 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 물질은 개별적으로 또는 혼합물로서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 질소원으로는 암모니아, 황산암모늄, 염화암모늄, 초산암모늄, 인산암모늄, 탄산안모늄, 및 질산암모늄과 같은 무기질소원; 글루탐산, 메티오닌, 글루타민과 같은 아미노산 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 효모 추출물, 맥아 추출물, 옥수수 침지액, 카세인 가수분해물, 어류 또는 그의 분해생성물, 탈지 대두 케이크 또는 그의 분해생성물 등 유기질소원이 사용될 수 있다. 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 상기 배지에는 인원으로서 인산 제1칼륨, 인산 제2칼륨 및 대응되는 소듐-함유 염이 포함될 수 있다. 사용될 수 있는 인원으로는 인산이수소칼륨 또는 인산수소이칼륨 또는 상응하는 나트륨-함유 염이 포함된다. 또한, 무기화합물로는 염화나트륨, 염화칼슘, 염화철, 황산마그네슘, 황산철, 황산망간 및 탄산칼슘 등이 사용될 수 있다. 마지막으로, 상기 물질에 더하여 아미노산 및 비타민과 같은 필수 성장 물질이 사용될 수 있다.

또한, 배양 배지에 적절한 전구체들이 사용될 수 있다. 상기된 원료들은 배양과정에서 배양물에 적절한 방식에 의해 회분식, 유가식 또는 연속식으로 첨가될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다. 수산화나트륨, 수산화칼륨, 암모니아와 같은 기초 화합물 또는 인산 또는 황산과 같은 산 화합물을 적절한 방식으로 사용하여 배양물의 pH를 조절할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 고등어 폐액의 생물학적 분해를 위해 사용된 복합 미생물은 11종으로, KR 10-0822239에 기재된 혼합 균주인 Pknufermbacteria(KACC 91274P)와 KR 10-1058245에 기재된 혼합 균주인 Wormbacteria(KACC 91409P)을 이용하였다. 구체적으로, 상기 Pknufermbacteria는 총 7종의 균이며 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)(DQ219358), 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis)(AY468373), 바실러스 코아굴란스(Bacillus coagulans)(AF466695), 바실러스 써큐란(Bacillus circulans)(Y13064), 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis)(AY138279), 바실러스 푸시포미스(Bacillus fusiformis)(AY548950) 및 바실러스 아그리(Brevibacillus agri)(AY319301) 이다. Wormbacteria는 총 4종의 균이며 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis)(EF113324), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)(DQ923487), 브레비바실러스 아그리(Brevibacillus agri) (AJ586388) 및 브레비바실러스 파라브레비스(Brevibacillus parabrevis)(AB215101)를 이용하여 고등어 폐액에 접종하여 배양 및 분해하였다. 유해성 또는 유독성 적조 미세조류에 대한 항적조 효과를 확인하고, 상기 고등어 폐액 분해 산물에서 본 발명의 테트라펩타이드를 동정하였다.

상기 테트라펩타이드는 무해성 또는 무독성 적조 생물의 활성은 억제하지 않고, 유독성 또는 유해성 적조 생물의 활성을 선택적으로 억제할 수 있다. 상기 상기 유독성 또는 유해성 적조 생물은 헤테로캅사 속(Heterocapsa), 프로로센트럼 속(Prorocentrum), 알렉산드리움 속(Alexandrium), 코클로디니움 속(Cochlodinium), 지로디니움 속(Gyrodinium), 디노파이시스 속(Dinophysis), 슈도-니츠시아 속(Pssudo-nitzschia) 및 짐노디니움 속(Gymnodinium)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이나, 바람직하게는, 헤테로캅사 속(Heterocapsa), 프로로센트럼 속(Prorocentrum) 또는 알렉산드리움 속(Alexandrium)이고, 더욱 바람직하게는 알렉산드리움 카테넬라(Alexandrium catenella) 또는 알렉산드리움 펀뎬세(Alexandrium fundyense)이나, 본 발명의 테트라펩타이드가 항적조를 억제할 수 있다면 이에 제한되지 않는다.

상기 무해성 또는 무독성 적조 생물은 스켈레토네마 속(Skeletonema), 키토세로스 속(Chaetoceros), 탈라씨오시라(Thalassiosira), 유캄피아 속(Eucamphia), 아카시우 속(Akashiwo), 세라티움 속(Ceratium), 유트렙티엘라 속(Eutreptiella) 및 헤테로시그마 속(Heterosigma)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이나, 바람직하게는, 스켈레토네마 속(Skeletonema)이고, 더욱 바람직하게는 스켈레토네마 코스타툼(Skeletonema costatum)(diatom)이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 테트라펩타이드는 그람 음성균, 그람 양성균 또는 항생제 내성균에 대해 항균 활성을 갖을 수 있다. 상기 그람 음성균은 에스케리치아 속(Escherichia)이고, 바람직하게는 대장균(Escherichia coli)이나, 이에 제한되지 않는다. 상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속(Staphylococcus)이고, 바람직하게는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 항생제 내성균은 항생제 내성을 갖는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 표제네스(Streptococcus pyogenes), 대장균(Escherichia coli), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis) 및 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상이나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)는 주요 항생제 내성균으로서, 항생제 내성 및 정도에 따라, 다제내성 황색포도상구균 (multi-drug resistant Staphylococcus aureus, MDRSA), 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA), 반코마이신 내성 황색포도상구균(vancomycin resistant Staphylococcus aureus, VRSA) 및 반코마이신 중등도 내성 황색포도상구균(vancomycin intermediate Staphylococcus aureus, VISA)으로 분류될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 항생제는 베타-락탐계 또는 비 베타-락탐계로베타-나눌 수 있고, 락탐계 항생제, 페니실린(penicillin) 계열 항생제, 세팔로스포린(Cephalosporin) 계열 항생제, 카바페넴(Carbapenem) 계열의 항생제가 포함될 수 있다. 또한, 비 베타-락탐계 항생제는 아미노글리코사이드(aminoglycoside) 계열, 테트라사이클린(Tetracycline) 계열, 마크로라이드(Macrolide) 계열, 퀴놀론(quinolone) 계열, 리팜피신(rifampicin) 계열, 설폰아미드(Sulfonamides) 계열, 폴리펩타이드(Polypeptide) 계열, 린코사마이드(Lincosamide) 계열, 플로르퀴놀론(fluoroquinolone) 계열 및 세파로스포린(Cephalosporin) 계열을 포함할 수 있으며, 본 발명의 항생제 내성균은 상기 항생제로 인하여 발생된 내성균을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 테트라펩타이드의 범위는 고등어 폐액 분리 산물로부터 분리된 서열번호 1, 2 또는 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다. "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 1, 2 또는 3으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 1, 2 또는 3으로 표시되는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다. 본 발명의 테트라펩타이드는 이의 천연형 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 아미노산 서열 변이체가 또한 본 발명의 범위에 포함된다.

테트라펩타이드의 변이체란 테트라펩타이드의 천연 아미노산 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 단백질을 의미한다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다 (H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 또한, 테트라펩타이드 또는 이의 변이체는 천연에서 추출하거나 합성 (Merrifleld, J. Amer. chem. Soc. 85:2149-2156, 1963) 또는 DNA 서열을 기본으로 하는 유전자 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다 (Sambrook et al, Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 2판, 1989).

상기 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 갖으며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.

변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스 (hydropathic index)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소루이신 (+4.5); 발린 (+4.2); 루이신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글라이신 (-0.4); 쓰레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 타이로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 라이신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5).

단백질의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다.

한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌 (+3.0); 라이신 (+3.0); 아스팔테이트(+3.0± 1); 글루타메이트 (+3.0± 1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글라이신 (0); 쓰레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5 ± 1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 루이신(-1.8); 아이소루이신 (-1.8); 타이로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5); 트립토판 (-3.4).

친수성 값을 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 친수성 값 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다.

분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H. Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.

본 발명에 따른 테트라펩타이드는 통상적인 펩타이드 합성기를 사용한 고체상 방법에 의하여 합성될 수 있다.

통상적으로, 사용되는 아미노산은 N-말단이 보호된 형태 그리고 반응성 측쇄가 보호된 형태로 사용된다. N-말단을 보호하는 보호기로는 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐기(Fmoc)가 일반적으로 사용된다. 반응성 측쇄를 보호하기 위한 보호기로는 트리페닐메틸, 부틸옥시카르보닐, t-부틸에스테르, 펜타메틸크로만-6-술포닐 등이 사용된다.

고체상 반응을 위하여 사용되는 수지는 폴리펩타이드의 C-말단의 형태가 카복실산인지 아마이드 형태인지에 따라 다르게 적용한다. C-말단의 형태가 카복실산인 경우는 2-클로로트리틸 클로라이드(2-Chlorotrityl chloride, CTC), 4-벤질옥시벤질알콜(Wang), 하이드록시메틸페녹시아세틸(HMPA) 수지가 사용될 수 있으며, C-말단의 형태가 아마이드인 경우는 수지의 말단이 아민기로 만들어진 것으로서, 예를 들어 트리알콕시벤즈하이드릴아민(Trialkoxybenzhydrylamine, Rink amide), 메틸벤즈하이드릴아민(MBHA) 수지가 사용될 수 있다.

위의 모든 수지를 사용함에 있어서 펩타이드는 C-말단에서부터 N-말단 방향으로 합성된다. 커플링시 아미노산의 카르복실기를 활성제로 활성화시키고, 커플링 후 N-말단의 보호기는 피페리딘으로 제거되고, 다음 커플링이 수행된다. 카르복실기 활성제로는 HATU(N-[(dimethylamino-)-1H -1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-ylmethylene]-N-methylmethanaminium hexafluorophosphate N-oxide)와 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸(1-hydroxy-7-azabenzotriazole, HOAt) 혹은 HBTU(N-[(1H-benzotriazol-1-yl)(dimethylamino)methylene]-Nmethylmethanaminium hexafluorophosphate N-oxide)와 1-히드록시벤조트리아졸(1-hydroxybenzotriazole, HOBt)에 DIEA(N,N-diisopropylethylamine)가 함께 이용 될 수 있고, N,N'-디이소프로필카르보디이미드(DIC)와 첨가 보조제로 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸(HOAt) 혹은 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)이 함께 사용될 수 있다.

본 발명에서는 4개의 아미노산이 커플링 된 후에는 N-말단의 아민기는 원하는 아실기를 가지는 아실 활성체, 예를 들어, 아실안하이드라이드(acyl anhydride)와 DMAP(4-(N,N-dimethylamino)pyridine))를 함께 반응하여 N-말단에서 아마이드 결합을 형성하거나 카르복실산(Fatty acid)과 N,N-디이소프로필카르보디이미드(DIC), 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸(HOAt) 혹은 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)이 함께 사용되어 아마이드 결합을 형성할 수 있다. 그런 후 트리플루오로아세트산(TFA)을 포함하는 절단용액에 의하여 폴리펩타이드 유사체는 고체 수지로부터 분리되고 또한 그것의 측쇄에 결합된 보호기가 제거된다.

본 발명의 테트라펩타이드는 이를 코딩하는 유전자를 벡터에 삽입하여, 생산할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "벡터"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터; 파지미드 벡터; 코즈미드 벡터; 그리고 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터 같은 바이러스 벡터 등을 포함될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 벡터에서 테트라펩타이드를 코딩하는 유전자는 프로모터와 작동적으로 결합(operatively linked)되어 있다.

본 발명에 있어서, 용어 "작동적으로 결합된"은 유전자 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절 인자 결합 위치의 어레이)과 다른 유전자 서열 사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 유전자 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다.

본 발명의 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook et al.(2001), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.

본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예컨대, tac 프로모터, lac 프로모터, lacUV5 프로모터, lpp 프로모터, pLλ 프로모터, pRλ 프로모터, rac5 프로모터, amp 프로모터, recA 프로모터, SP6 프로모터, trp 프로모터 및 T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 숙주 세포로서 E. coli(예컨대, HB101, BL21, DH5α 등)가 이용되는 경우, E. coli 트립토판 생합성 경로의 프로모터 및 오퍼레이터 부위(Yanofsky, C.(1984), J. Bacteriol., 158:1018-1024) 그리고 파아지 λ의 좌향 프로모터(pLλ 프로모터, Herskowitz, I. and Hagen, D.(1980), Ann. Rev. Genet., 14:399-445)가 조절 부위로서 이용될 수 있다.

한편, 본 발명에 이용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예: pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파아지미드(예: pComb3X), 파아지 (예: gt4·B, -Charon, z1 및 M13 등) 또는 바이러스 (예: SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.

한편, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 유전체로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 사 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.

본 발명의 벡터는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위하여, 필요에 따라 다른 서열과 융합될 수도 있으며, 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG (IBI, USA) 및 6x His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 발현 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.

본 발명에서, 용어 "적조 억제"란 항적제, 적조 방지, 살조 및 항조류 등의 여러가지 용어로 사용되며, 적조를 일으키는 조류(algae)의 생장을 억제하거나, 사멸시키거나, 운동성을 억제하는 등 조류의 증식을 막아 적조를 일으키는 현상을 제거하는 것을 의미한다. 또한, 보다 넓게는 적조를 일으키는 원인 조류를 사멸시키거나 생육을 억제한다는 의미도 포함한다.

본 발명의 목적 상, 무해성 또는 무독성 조류는 억제하지 않고, 유해성 또는 유독성 조류만을 선택적으로 억제하는 효과를 갖는다.

본 발명의 약학 조성물에는 테트라펩타이드 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 효과를 증가시킬 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 테트라펩타이드의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.

본 발명에 따른 테트라펩타이드는 그람 음성균, 그람 양성균 또는 항생제 내생 균주에 의한 감염 질환에 대한 항균 효과를 나타내어 감염 질환의 예방 및 치료 효과를 나타낼 수 있다. 상기 감염 질환은 여드름, 아토피 피부염, 화농증, 염증 치주질환, 위질환, 식중독, 패혈증, 패혈성 쇼크, 심장 내막염, 장염, 뇌수막염, 골수염, 척추 카리에스, 폐렴, 골수염, 임균 감염 및 수막구균 감염으로 이루어진 질환에서 선택된 1종 이상이나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 식품 조성물은 유효성분인 테트라펩타이드를 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 기능성 식품 조성물은 허혈성 뇌손상의 예방 또는 치료 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능성 식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축 성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

본 발명의 테트라펩타이드를 포함하는 조성물은 항생제 내성균 감염성 피부 질환의 예방 또는 개선용 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨, 에센스 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 팩, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 추출물로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 추출물로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다. 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산 부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산 에틸,리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산 트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산 이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴, 카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜 틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인 산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르 계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산 및 메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산 및 메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈 및 에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈 및 헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들수 있다. 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산 콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린 지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POE 및 POP (폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌) 공중합체, POE 및 POP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산업, 알킬아미드 인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산 디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아 미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다. 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드 술포 베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트 수지,디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠 및 스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모 노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시 계피산 이소프로필, 디이소프로필 및 디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 피부 미백 및 피부 노화방지용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 밀크 로션, 아스트린젠트, 로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 헤어로션, 헤어토닉, 헤어에센스, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화 아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 사료 조성물은 기존의 항생제를 대체하고 유해한 식품 병원성균의 생장을 억제하는 바, 동물체의 건강상태를 양호하게 하고, 가축의 증체량과 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 효과를 기대할 수 있다. 본 발명의 사료 조성물은 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태 및 사일레지 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 발효사료는 본 발명의 펩타이드 이외의 여러 가지 미생물군 또는 효소들을 첨가함으로서 유기물을 발효시켜 제조할 수 있으며, 배합사료는 여러 종류의 일반사료와 본 발명의 펩타이드를 혼합하여 제조할 수 있다. 펠렛 형태의 사료는 상기 배합사료 등을 펠렛기에서 열과 압력을 가하여 제조할 수 있으며, 사일레지는 청예 사료를 본 발명에 따른 미생물로 발효시킴으로써 제조할 수 있다. 습식발효사료는 음식물 쓰레기 등과 같은 유기물을 수집 및 운반하여 살균과정과 수분조절을 위한 부형제를 일정비율로 혼합한 후, 발효에 적당한 온도에서 24시간 이상 발효하여, 수분함량이 약 70%으로 포함되도록 조절하여 제조할 수 있다. 발효건조사료는 습식 발효 사료를 건조과정을 추가로 거쳐 수분함량이 30% 내지 40% 정도 함유되도록 조절하여 제조할 수 있다.

본 발명의 사료 조성물은 종래 사료에 첨가되는 성분을 더 포함할 수 있다. 이러한 사료에 첨가되는 성분의 일예로서 곡류분말, 고기분말, 및 두류 등을 포함할 수 있다. 상기에서 곡류분말은 쌀가루, 밀가루, 보리가루, 및 옥수수가루 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다. 상기에서 고기분말은 닭고기, 소고기, 돼지고기, 및 타조고기 중에서 선택된 어느 하나 이상을 분말화한 고기분말을 사용할 수 있다. 상기에서 두류는 대두, 강낭콩, 완두콩, 및 검정콩 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.

본 발명의 사료 조성물은 상기에서 언급한 종래 사료에 첨가되는 성분인 곡류분말, 고기분말, 및 두류 이외에도 사료의 영양성을 증대시키기 위해 영양제, 및 무기물 중에서 선택된 어느 하나 이상을 첨가할 수 있으며, 사료 품질의 저하를 막기 위해 항곰팡이제, 항산화제, 항응고제, 유화제, 및 결착제 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 용어 "생물농약(biotic pesticide)"이란, 천적곤충, 천적미생물, 길항미생물 등을 이용하여 화학농약과 같은 형태로 살포 또는 방사하여 병해충 및 잡초를 방제하는 약제를 의미하는데, 천적곤충제, 천적미생물제와 같은 해충방제용 생물농약, 균핵을 살멸하는 병해방제용 생물농약, 잡초방제용 생물농약 등을 포함한다.

본 발명의 용어 "생물농약 보조용 조성물"이란, 상술한 해충방제용 생물농약, 병해방제용 생물농약, 잡초방제용 물농약의 활성을 향상시키거나 또는 범위를 확장시키는 등의 보조적인 역할을 수행하는 조성물을 의미한다

상기 조성물은 의료기기, 의료용 재료 또는 의료용 이식물에 코팅될 수 있다. 일례로, 상기 코팅용 조성물로 피부, 치아와 같은 생물체 유래 조직 또는 기관을 코팅할 수 있으며, 각종 의료용 설비, 장비, 기구, 임시 또는 영구용 인공삽입 보형물인 렌즈, 인공판막, 페이스메이커, 수술용 핀, 삽입 도관, 카테터 등 의료용 물건을 코팅할 수 있으나, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 조류(Algae)의 배양

본 발명에 사용된 조류는, 마비성 패류중독(paralytic shellfish poisoning, PSP)을 일으키는 유해 와편모조류인 알렉산드리움 카테넬라(Alexandrium catenella) 및 알렉산드리움 펀뎬세(Alexandrium fundyense)이다. 상기 조류는 한국해양과학기술원 남해연구소 해양시료도서관(LIMS, Library of Marine Samples Korea)에서 분양 받았다. 2종의 유해한 조류는 변형된 Guillard's f/2-si 배지(걸러진 해수)에서 배양하였다. 2종의 조류 모두 40μmol/m²/s의 광 세기, 광암 조건은 14:10시간, 20℃ 조건에서 배양하였으며 세포 농도의 유지는 혈구 계산판(hemocytometer) 및 Sedwick chamber를 이용하여 세포를 계수 후 계대하였다.

<실시예 2> 본 발명의 펩타이드 합성

본 발명의 항균 항적조 활성 테트라펩타이드로부터 유래한 유도체 펩타이드들의 합성은 Fmoc(9-fluorenyl-methoxycarbonyl) chemistry(PTI SYMPHONY Auto synthesizer 이용)를 이용한 고체상 방법(solid phase method)으로 AnyGen Co., Ltd.(Kwangju, Korea)에서 진행하였다. C-terminal로 왕 레진(wang resin)을 이용하였고 Fmoc-L-amino acids의 coupling은 O-Benzotriazole-N,N,N, HBTU(N'-tetramethyl-uronium-hexafluoro-phosphate)로 수행하였다. 아미노산 사이드 체인(Amino acid side chains)은 터트-부틸과 터트-부틸옥시카보닐(tert-butyloxycarbonyl)로 보호하였고 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid), 물, 티오아니솔(thioanisole) 및 1,2-에탄디올(1,2-ethandithiol)(87.5, 5.0, 5.0, 2.5, v/v)의 혼합물을 이용하여 deprotection과 절단을 수행하였다. Crude 펩타이드는 디에틸에테르(diethylether)로 반복 수세 후 진공 건조 시키고 RP-HPLC, Shimadzu 5-μm Shimpak ODS C18 칼럼(20Х250 mm)으로 정제하였다. 정제된 펩타이드는 분석용 RP-HPLC, Shimpak ODS C18 칼럼(4.6Х250 mm)으로 확인하였다. 합성한 펩타이드의 분자 질량(molecular masses)은 matrix-assisted laser desorption ionization MALDI-mass spectrometer(Shimadzu Axima Assurance)를 이용하여 확인하였다. 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, RP-HPLC chromatogram로 순도를 확인해본 결과 원하는 적절한 순도의 펩타이드를 얻을 수 있었다.

또한 도 2에 나타낸 바와 같이, MS spectrum을 분석한 결과, 각 펩타이드의 이론적인 질량 (theoretical mass)과 비교했을 때 펩타이드의 변형 및 변성이 일어나지 않았음을 알 수 있었다.

<실시예 3> 펩타이드의 2차구조 및 특성 분석

본 발명의 활성 물질에서 확인된 펩타이드의 2차 구조를 분석하고 이의 특성을 파악하기 위하여, 펩타이드의 2차 구조 분석은 PepLook (http://peplook.gembloux.ulg.ac.be/)을 이용하였다. [Thomas, A., Deshayes, S., Decaffmeyer, M., Van Eyck, M. H., Charloteaux, B., and Brasseur, R. (2006) Proteins-Structure Function and Bioinformatics 65(4), 889-897, Etchebest, C., Benros, C., Hazout, S., and de Brevern, A. G. (2005) Proteins-Structure Function and Bioinformatics 59(4), 810-827, Deshayes, S., Decaffmeyer, M., Brasseur, R., and Thomas, A. (2008) Biochimica et biophysica acta 1778(5), 1197-1205]. 생성된 PDB파일은 Molmil viewer (http://gjbekker.github.io/molmil/)를 이용하여 변환 후 이미지화 하였다. 펩타이드의 특성 분석은 ExPASy(the Expert Protein Analysis System)과 ProtParam algorithm을 이용하여 확인하였다. 그 결과를 표 1 및 도 3에 나타내었다.

표 1 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 유도체 펩타이드는 선형 구조(linear structure)를 가지고, 4-mer이며, 분자량은 각 488.61, 510.66, 478.55 g/mol인 신규한 테트라펩타이드임을 확인하였다.

Peptide	Sequence	Hydrophobic Ratio (%)	Net Charge (pH7-8)	Experimental mass (Da)	Theoretical mass (Da)	Accession number (Library)	pI
F32-1-A1	KMNP	50	1	488.8	488.61	ND	10.1
F32-1-A2	IMTF	100	0	510.7	510.66	ND	6
F32-1-A3	KANF	50	1	478.7	478.55	ND	10.1

<실시예 4> 본 발명의 테트라펩타이드 유도체의 항적조 활성 분석

개발한 테트라펩타이드 유도체의 항적조 활성 효과 및 항적조 활성이 향상되었는지 확인하기 위해 유해한 조류인 A. fundyense 및 A. catenella에 노출시켜 보았다. A. fundyense 및 A. catenella를 배양 후, 대수증식기(exponential growth phase)의 조류를 24웰 플레이트에 분주하였다. 본 발명의 1mg 유도체 펩타이드를 조류를 분주한 24-웰 배양 플레이트에 넣고 총 부피 1 ml로 맞추었다. 유도체 펩타이드는 조류 배양과 동일한 배지에 녹여서 사용하였고, 24-웰 배양 플레이트는 조류 배양과 동일한 조건에서 배양하였고, 현미경으로 조류 세포의 변화를 관찰하였다. 항적조 활성의 정도는 조류 세포의 유효율(effective rate)로부터 도출하였으며 이는 다음과 같은 수학식으로 계산하였다: 유효율(%)=(Nc-Nt)/NcХ100. Nc는 대조군에서 총 조류 세포 수를 의미하고, Nt는 처리군에서 총 조류 세포 수를 의미한다. 영향을 받은 조류는, 움직임이 없고, 조류 세포의 형태학적인 변화(색이 달라짐, 탈각, 부풀어오름, 터짐, 세포질의 수축 등)로 정의하여 계산하였다. 그 결과를 하기 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 유도체 3개 중 2개의 유도체가 항적조 활성이 우수했다. 유도체 F32-1-A1은 모체가 되는 F32-1 테트라펩타이드 보다 최대 20% 향상된 결과를 확인하였다. 또한 유도체 F32-1-A3은 F32-1 테트라펩타이드와 비슷한 효과를 나타냄을 확인하였다. 따라서 본 발명의 유도체 펩타이드 및 동정한 펩타이드의 결과로 KMNF한 아미노산 서열, KMNP한 아미노산 서열, KANF한 아미노산 서열이 항적조 활성을 나타냄을 알 수 있었다.

<실시예 5> 본 발명의 펩타이드 유도체의 항균 활성 분석

5-1. 그람 음성 또는 양성균에 대한 항균 활성

펩타이드 유도체의 항균활성 분석을 하였다. 사용된 미생물은 그람 음성(gram-negative)의 Shigella flexneri (KCCM409483)와 Escherichia coli (KCCM11234)이며 한국미생물보존센터 (Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에서 구입하였다. 배양 배지로 E. coli는 Luria-Bertani broth (pH 7.0)를, S. flexeri는 Nutrient broth medium를 사용하였으며 agar diffusion test로 항미생물 활성을 분석하였다. 본 발명의 펩타이드를 1mg/ml의 농도로 하여 항미생물 활성을 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 유도체는 E. coli 및 S. aureus의 콜로니를 형성을 효과적으로 억제시키는 바, 항미생물 효과가 존재함을 확인하였다.

5-2. 항생제 내성 균주에 대한 항균 활성

항생제에 내성을 가진 다중 약재 내성균으로 MDR-Escherichia coli (CCARM 1302)을 사용하였으며 서울여자대학교 항생제 내성 균주 은행(Culture Collection of Antimicrobial Resistant Microbes)에서 분양받았다. MDR-Escherichia coli (CCARM 1302)는 Luria bertani broth (LB)에서 37 ℃, 130 rpm에서 하루 동안 배양하였다. 항균 활성 분석은 상기 5-1의 방법에 따라 분석하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.

표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 항생제 내성균주인 MDR-Escherichia coli(CCARM 1302)의 콜로니 형성을 효과적으로 억제함을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 펩타이드는 그람 양성균(gram positive) 및 음성균 (negative) 뿐만 아니라, 항생제 내성균주에 대한 항균 효과가 우수함을 확인하였다.

Microorganisms			Antimicrobial activity (1 mg/ml)
			F32-1-A1 (KMNP)	F32-1-A3 (KANF)
Gram	Negative	E. coli KCCM11234	+++	+++
		MDR-E. coli CCARM 1302	++	++
		S. flexneri KCCM409483	++	+++
Clear zone diameter (cm)/ +:<0.5/ ++:0.5~1.0/ +++: >1.0

<110> inje university industry-academic cooperation foundation <120> Novel analogues of tetrapeptide and composition for anti-algae or anti-bacteria containing the same <130> PN1709-328 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> analogues of tetrapeptide 1 <400> 1 Lys Met Asn Pro 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> analogues of tetrapeptide 2 <400> 2 Ile Met Thr Phe 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> analogues of tetrapeptide 3 <400> 3 Lys Ala Asn Phe 1

Claims

서열번호 1 및 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 테트라펩타이드.
제1항에 있어서,
상기 테트라펩타이드는 고등어(Scomber japonicas) 폐액 분해 산물에서 유래된 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제2항에 있어서,
상기 고등어 폐액 분해 산물은 바실러스 속(Bacillus), 브레비바실러스 속(Brevibacillus) 및 이의 혼합 균주로 분해된 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제1항에 있어서,
상기 테트라펩타이드는 무해성 또는 무독성 적조 생물의 활성은 억제하지 않고, 유독성 또는 유해성 적조 생물의 활성을 선택적으로 억제하는 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제4항에 있어서,
상기 유독성 또는 유해성 적조 생물은 헤테로캅사 속(Heterocapsa), 프로로센트럼 속(Prorocentrum), 알렉산드리움 속(Alexandrium), 코클로디니움 속(Cochlodinium), 지로디니움 속(Gyrodinium), 디노파이시스 속(Dinophysis), 슈도-니츠시아 속(Pssudo-nitzschia) 및 짐노디니움 속(Gymnodinium)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제4항에 있어서,
상기 무해성 또는 무독성 적조 생물은 스켈레토네마 속(Skeletonema), 키토세로스 속(Chaetoceros), 탈라씨오시라(Thalassiosira), 유캄피아 속(Eucamphia), 아카시우 속(Akashiwo), 세라티움 속(Ceratium), 유트렙티엘라 속(Eutreptiella) 및 헤테로시그마 속(Heterosigma)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제1항에 있어서,
상기 테트라펩타이드는 그람 음성균, 그람 양성균 또는 항생제 내성균에 대해 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제7항에 있어서,
상기 그람 음성균은 에스케리치아 속(Escherichia) 및 시겔라 속(Shigella)인 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제7항에 있어서,
상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속(Staphylococcus)인 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제7항에 있어서,
상기 항생제 내성균은 항생제 내성을 갖는 항생제 내성을 갖는 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코커스 표제네스(Streptococcus pyogenes), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis) 및 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 테트라펩타이드.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 적조 억제용 조성물.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 약학 조성물.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 식품 조성물.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 화장료 조성물.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 사료 조성물.
제1항의 테트라펩타이드를 포함하는 항균용 생물 농약 조성물.