KR101993937B1

KR101993937B1 - 염증 억제용 펩티드

Info

Publication number: KR101993937B1
Application number: KR1020137023270A
Authority: KR
Inventors: 다니엘 티. 라스코위츠; 하나 도슨; 브래드 콜스
Original assignee: 듀크 유니버시티
Priority date: 2011-03-18
Filing date: 2012-03-16
Publication date: 2019-06-27
Also published as: AU2012231268B2; KR20140026373A; CN103429610A; CN106905427A; ES2686274T3; US20170274037A1; US9687521B2; CA2830259C; EP2929890B1; CA2830259A1; WO2012129077A2; CN103429610B; EP2685999A2; SG192773A1; WO2012129077A3; US9018169B2; JP2014509594A; AU2012231268A1; EP2685999A4; US20140038898A1

Abstract

아포E 생물학적 활성을 나타내는 펩티드는 물론 상기 펩티드를 포함하는 조성물 및 제약 제제가 본원에서 제공된다. 본원에 개시된 펩티드, 조성물 및 방법은 광범위한 손상, 질환, 장애 및 임상적 징후를 치료하는 데에 사용될 수 있기 때문에 광범위한 적용분야를 가진다.

Description

염증 억제용 펩티드 {PEPTIDES FOR SUPPRESSING INFLAMMATION}

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2011년 3월 18일자 U.S. 특허 가출원 제61/454,342호에 대하여 우선권을 주장하는 바, 그것은 그 전체가 본원에 참조로써 포함된다.

기술분야

본 개시는 염증을 감소시키거나 억제하고, 신경염증을 감소시키거나 억제하고, 신경학적 병태를 치료하기 위한 펩티드, 방법 및 조성물에 관한 것이다.

서열 목록

본 출원의 출원과 함께 전자 형태로만 서열 목록을 제출하는 바, 본원에 참조로써 포함된다. 서열 목록 파일 9111-WO00_ASFILED_SequenceListing_Text.txt은 2012년 3월 15일에 생성되었으며, 크기가 10,938 바이트이다.

아포지질단백질 E ("아포E")는 주로 간 및 뇌에서 생성되며 다중적인 생물학적 기능을 나타내는 299개 아미노산 (34 kDa)의 당단백질이다. 콜레스테롤 수송 및 대사에서 그의 역할이 처음 인식된 아포E는 초-저-밀도 지질단백질 (VLDL) 및 고-밀도 지질단백질 (HDL) 복합체로 존재하며, 아포E는 저-밀도 지질단백질 (LDL) 수용체, LDL-수용체-관련 단백질 (LRP), 및 VLDL 수용체에 결합할 수 있다 (문헌 [Weisgraber, (1994) Adv . Protein Chem . 45:249-302]). 아포E는 또한 면역조절 특성을 가지고 있으며 (문헌 [Laskowitz, et al ., (2001) Exp . Neurol . 167:74-85]), 신경학적 질환 및 뇌 손상 반응에서 역할을 하는 것으로 (문헌 [Laskowitz and Vitek, (2007) Pharmacogenomics 8:959-69]) 알려져 있다.

아포E의 3차 구조는 수용체-결합 도메인을 포함하는 4-α-나선 모티프를 가지는 아미노-말단 영역, 및 지질 결합의 대부분을 담당하는 카르복시-말단 영역을 포함한다. 아포E의 수용체-결합 영역은 성숙한 전체-길이 단백질 잔기 130-150의 나선형 도메인으로 매핑되어 있는데, 아포E의 이와 같은 영역이 아교세포 활성화 및 CNS 염증을 억제하는 그의 능력을 좌우한다.

개요

한 측면에서, 본 개시는 하기 화학식 I을 포함하는 5, 6, 7, 8 또는 9개 아미노산 잔기의 단리된 펩티드 또는 그의 염을 제공한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

(상기 식에서, X1은 소수성 측쇄를 가지는 아미노산 또는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X2는 소수성 측쇄를 가지는 아미노산, 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산, 또는 극성 비하전 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X3은 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X4는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X5는 소수성 측쇄를 가지는 아미노산 또는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택됨).

이와 같은 측면의 일부 실시양태는 하기 화학식 II의 펩티드를 제공한다:

<화학식 II>

X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (서열 17)

(상기 식에서, X1, X2, X3, X4 및 X5는 상기한 바와 같고, X6, X7, X8 및 X9 각각은 독립적으로 임의의 아미노산에서 선택되고, 임의로 부재함).

한 측면에서, 본 개시는 하기 화학식 I의 단리된 펩티드 또는 그의 염을 제공한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

이와 같은 측면의 실시양태에서, 본 개시는 서열 1에 따르며, 식 중 X1은 V 또는 R이고; X2는 S, A 또는 H이고; X3은 K 또는 R이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 R, L 또는 K인 펩티드 또는 그의 염을 제공한다. 이와 같은 측면의 일부 실시양태에서, 본 개시는 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열 9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)을 포함하는 펩티드 또는 그의 염을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시는 화학식 I의 단리된 펩티드, 및 담체, 희석제, 비히클 또는 아주반트를 포함하는 조성물을 제공한다. 이와 같은 측면의 실시양태는 서열 1에 따르며, 식 중 X1은 V 또는 R이고; X2는 S, A 또는 H이고; X3은 K 또는 R이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 R, L 또는 K인 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 제공한다. 이와 같은 측면의 일부 실시양태에서, 본 개시는 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열 9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)의 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시는 유효량의 하기 화학식 I의 펩티드 또는 그의 염을 염증의 감소를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 염증을 감소시키는 방법을 제공한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

이와 같은 측면의 실시양태에서, 상기 방법은 서열 1에 따르며, 식 중 X1은 V 또는 R이고; X2는 S, A 또는 H이고; X3은 K 또는 R이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 R, L 또는 K인 펩티드 또는 그의 염을 포함한다. 이와 같은 측면의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열 9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)을 포함하는 펩티드 또는 그의 염을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시는 유효량의 하기 화학식 I의 펩티드 또는 그의 염을 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법을 제공한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

이와 같은 측면의 실시양태에서, 상기 방법은 서열 1에 따르며, 식 중 X1은 V 또는 R이고; X2는 S, A 또는 H이고; X3은 K 또는 R이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 R, L 또는 K인 펩티드 또는 그의 염을 포함한다. 이와 같은 측면의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열 9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)을 포함하는 펩티드 또는 그의 염을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 외상성 CNS 손상, 지주막하 출혈, 두개내 출혈, 뇌졸중, 실험적 알레르기성 뇌척수염, 다발성 경화증, 신경염증, 만성 신경학적 질환, ALS, 치매, 신경병증, 간질, 파킨슨병 및 알츠하이머병 중 하나 이상에서 선택되는 신경학적 병태를 치료하는 것을 포함한다.

다른 측면에서, 본 개시는 1종 이상의 화학식 I 펩티드를 포함하는 약제, 상기 약제의 제조 방법, 및 본원에서 기술되는 바와 같은 약제의 투여를 포함하는 방법을 제공한다.

상기에서 논의된 측면들의 다양한 실시양태에서, 본 개시는 언급되는 서열 및 화학식으로 필수적으로 구성되거나, 그것으로 구성되는 펩티드에 관한 것으로써, 그를 제공한다.

본 개시는 하기하는 도면 및 상세한 설명에 비추어 업계 일반의 숙련자에게 분명하게 드러나게 될 추가적인 측면 및 실시양태들을 제공한다.

도 1은 펩티드에 의한 소교 세포 TNF-α 분비의 억제를 도시한다. 배양된 BV-2 뮤린 소교 세포를 표시된 농도의 펩티드 (서열 3) 또는 음성 대조 펩티드 (서열 13) 중 어느 하나와 함께 인큐베이팅하고, 지질다당류 (LPS) (100 ng/mL)를 사용하여 6시간 동안 자극하였다. 6시간 후, 상청액을 수확하여, ELISA에 의해 분비된 TNF-α의 농도를 측정하였다 (** p<0.01; ANOVA).
도 2는 외상성 뇌 손상 후 펩티드로 처리된 마우스에 의한 전정운동 기능의 향상을 도시한다. 전정운동 기능은 로토로드(rotorod) 체류기(latency) 측면에서 평가하였다. 기준 로토로드 체류기는 무손상 두개골에 대한 조절되는 공압 충격에 의해 유도되는 외상성 뇌 손상 전에 (0일차) 및 그 후 각 일차에 평가하였다. 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 6시간에, 마우스는 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 펩티드 (서열 3; 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg) 또는 식염수 비히클 중 어느 하나를 투여받았다. 펩티드로 처리된 동물은 시험 기간 내내 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이 비히클을 사용한 처리에 비해 개선된 전정운동 성능을 나타내었다 (*p<0.05; ANOVA).
도 3은 외상성 뇌 손상 후 펩티드로 처리된 마우스에 의한 전정운동 기능의 향상을 도시한다. 전정운동 기능은 로토로드 체류기 측면에서 평가하였다. 기준 로토로드 체류기는 무손상 두개골에 대한 조절되는 공압 충격에 의해 유도되는 외상성 뇌 손상 전에 (0일차) 및 그 후 각 일차에 평가하였다. 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 6시간에, 마우스는 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg) 또는 식염수 비히클 중 어느 하나를 투여받았다. 펩티드로 처리된 동물은 시험 기간 내내 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이 개선된 전정운동 성능을 나타내었다 (*p<0.05; 반복 측정 ANOVA).
도 4는 두개골에 대한 조절되는 공압 충격에 의해 유도되는 외상성 뇌 손상 후 펩티드로 처리된 마우스에 의한 신경인지 결과의 향상을 도시한다. 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 6시간에, 마우스는 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg) 또는 식염수 비히클 중 어느 하나를 투여받았다. 신경인지 성능은 모리스 수중 미로(Morris water maze) 체류기 측면에서 평가하였다. 수중 미로 체류기는 외상성 뇌 손상 후 28일차에 시작하는 잠긴 플랫폼 시험에 의해 평가하였으며, 손상-후 연속되는 29, 30 및 31일차에 성능을 추가 평가하였다. 펩티드로 처리된 동물은 시험 기간 내내 감소된 수중 미로 체류기로 반영되는 바와 같이 개선된 신경인지 결과를 나타내었다 (*p<0.05; ANOVA).
도 5는 대뇌내 출혈 후 펩티드로 처리된 마우스에 의한 전정운동 기능의 개선을 도시한다. 전정운동 기능은 로토로드 체류기 측면에서 평가하였다. 기준 로토로드 체류기는 정위고정 콜라게나제 주사에 의해 유도되는 대뇌내 출혈 전에 (0일차) 및 그 후 각 일차에 평가하였다. 콜라게나제 주사 후 2시간 및 6시간에, 마우스는 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg) 또는 식염수 비히클 중 어느 하나를 투여받았다. 펩티드로 처리된 동물은 시험 기간 내내 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이 개선된 전정운동 성능을 나타내었다 (*p<0.05; 반복 측정 ANOVA).
도 6은 아포E 모방체 펩티드 (서열 4)로 처리된 배양물에서의 NMDA 노출 후 LDH 방출의 %억제를 도시한다.
도 7A-7B는 쇼크 튜브 폭발 모델 장치의 단면을 도시한다.
도 8은 모리스 수중 미로 체류기 측면에서의 폭발 손상이 있는 마우스의 신경인지 성능에 대한 아포E 모방체 펩티드 (서열 4)의 효능 (학습 경향 차이에서 p=0.7)을 도시한다.
도 9는 0.8 mg/kg의 단일 투여 후 시간 경과에 따른 마우스 혈장에서의 VSRRR (서열 4) 펩티드의 평균 및 개별 양을 도시한다.
도 10은 시간 경과에 따른 마우스로부터의 뇌 조직에서의 VSRRR (서열 4) 펩티드의 CNS 침투를 도시한다.
도 11A-11B는 VR-55 (서열 4), VL-5-1 (서열 5) 및 VL-5-3 (서열 10)에 의한 소교 세포 TNF-α 분비의 억제를 도시한다.
도 12A-12B는 변형된 중간 대뇌 동맥 폐색 후 펩티드로 처리된 마우스의 전정운동 기능을 도시한다.

본원에서 기술되는 다양한 측면 및 실시양태들은 단순히 실례를 제공하고자 하는 것으로써, 청구범위의 영역을 제한하는 기능을 하지는 않는다는 것이 이해될 것이다.

관사 "a" 및 "an"은 본원에서 그 관사의 문법적 대상 하나 또는 하나 초과 (즉 하나 이상)을 지칭하는 데에 사용된다. 예를 들자면, "요소(an element)"는 하나 이상의 요소를 의미하며, 하나를 초과하는 요소를 포함할 수 있다. 다르게 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 용어들은 본 개시가 속하는 업계의 일반 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.

일반적인 의미에서, 본 개시는 아포E 활성 (본원에서는 "아포E 모방 활성"으로도 지칭됨)을 나타낼 수 있는 단리 및/또는 합성 펩티드를 포함한 펩티드에 관한 것이다. 본원에서 사용될 때, 아포E는 APOE 유전자에 의해 코딩되는 인간 아포지질단백질-E 단백질의 여러 동형들 (예컨대 대립유전자) 중 어느 것과 관련된다. 아포E의 비-제한적인 예에는 아포E3 (서열 14), 아포E2 (서열 15) 및 아포E4 (서열 16)가 포함된다. 아포E 활성에는 시험관내 또는 생체내 중 어느 하나에서의 아포E 단백질과 연관된 소정의 기능성인 생물학적 활성, 또는 생물학적 활성들의 조합이 포함된다. 아포E 활성은 예를 들면 콜레스테롤 대사, 생리학적 아포E 수용체 단백질에 대한 결합; 신경보호 활성, 항산화 활성, 항-엑시토틱(anti-excitotic) 활성, 아교 세포 활성의 조절, 염증, 신경염증의 조절 등 중 어느 하나 또는 이들의 조합과 관련될 수 있다. 최근의 연구들은 아포E 모방 활성을 가지는 펩티드가 예를 들면 알츠하이머병 (문헌 [Laskowitz et al., (2010) J Neurotrauma 27:1983-1995]); 다발성 경화증 (문헌 [Li et al., JPET, 2006]); 지주막하 출혈 (문헌 [Gao et al.; 2006], [Mesis et al., 2006]), 뇌졸중 (문헌 [Tukhovskaya, J Neurosci Res, 2006]); 및 신경병증 (문헌 [Li et al., JPET, 2010])을 포함한 수많은 동물 모델에서 유익한 영향을 줄 수 있음을 나타내고 있다. 따라서, 본원에서 개시되는 펩티드, 조성물 및 방법들은 넓은 적용분야를 가지는데, 그들이 아포E와 연관된 일련의 질환, 장애 및 임상적 징후들을 치료하는 데에 사용될 수 있기 때문이다.

아포E는 LDL 수용체, VLDL 수용체, LRP/α2M 수용체, ER-2 수용체, LR8 수용체, 아포E 수용체 2 (아포ER2), 및 메갈린/gp330 (집합적으로 "아포E 수용체")와 같은 스캐빈저 수용체들을 포함한 수용체들에 대한 공지의 리간드이다. 수용체-결합 상호작용에 참여하는 것으로 알려져 있는 아포E의 한 영역은 자연 아포E 폴리펩티드 (서열 14)의 잔기 130-150 사이에 위치하는 α-나선 도메인이이다. 이 나선 도메인을 포함하는 활성의 아포E 단편들은 아포E 모방 활성을 나타내었었다 (그 전체가 본원에 참조로 포함되는 U.S. 특허 제7,319,092호 및 7,205,280호 참조). 이러한 펩티드들은 수용체 결합 나선 도메인에 자연 아포E 1차 아미노산 서열을 유지하고 있어서, 자연 α-나선 2차 구조를 보존하고 있다 (문헌 [Laskowitz, et al. (2001) Exp . Neurol . 167:74-85]). 이들 펩티드의 활성은 자연 α-나선 2차 구조의 유지에 따라 달라지는 것으로 나타난 바 있다 (문헌 [Laskowitz, et al. (2006) Acta Neurol . Scand . 114 (Supp. 185):15-20]). 하기에서 더욱 상세하게 기술되는 바와 같이, 놀랍게도, 아포E에 대하여 1차 서열 동일성을 가지지 않는 소형의 펩티드 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개 아미노산 잔기 길이)가 아포E의 생물학적 활성을 조절, 유도 및/또는 모방하는 데에 효과적이어서, 아포E의 생물학적 기능과 관련되는 다양한 질환, 장애 또는 이상의 치료에 사용될 수 있다는 것이 발견되었다.

본원에서 사용될 때의 "펩티드"는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 화합물, 또는 그의 유도체, 또는 하나 이상의 아미노산 모방체를 포함하는 화합물을 지칭한다. 아미노산에 대해서는 업계에 잘 알려져 있는데, 예를 들면 이소류신, 류신, 알라닌, 아스파라긴, 글루타민, 리신, 아스파르트산, 글루탐산, 메티오닌, 시스테인, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 글리신, 발린, 프롤린, 세린, 티로신, 아르기닌, 히스티딘, 노르류신, 오르니틴, 타우린, 셀레노시스테인, 셀레노메티오닌, 란티오닌, 2-아미노이소부티르산, 데히드로알라닌, 히퓨신, 시트룰린, 3-아미노프로판산, 감마-아미노부티르산, 니트로아르기닌, N-메틸화 류신, 호모아르기닌, 디메틸 아르기닌, 아세틸 리신, 아자리신, 피롤리신 등이 포함된다. "아미노산 측쇄"는 도 다른 것으로부터 하나의 아미노산을 분화시키는 다양한 유기 치환체 기들을 지칭한다. 소수성 측쇄를 가지는 아미노산에는 알라닌 (A), 이소류신 (I), 류신 (L), 메티오닌 (M), 페닐알라닌 (F), 트립토판 (W), 티로신 (Y) 및 발린 (V)의 비-제한적인 예들이 포함된다. 통상적인 생리학적 조건하에서 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에는 아르기닌 (R), 히스티딘 (H) 및 리신 (K)의 비-제한적인 예들이 포함된다. 통상적인 생리학적 조건하에서 음으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에는 아스파르트산 (D) 및 글루탐산 (E)의 비-제한적인 예들이 포함된다. 극성 비하전 측쇄를 가지는 아미노산에는 세린 (S), 트레오닌 (T), 아스파라긴 (N) 및 글루타민 (Q)의 비-제한적인 예들이 포함된다. 이들 비-제한적인 예들을 참고한다면, 업계 숙련자가 상기에서 명시적으로 예시되지 않은 기타 아미노산 측쇄들의 특성 (예컨대 소수성, 양/음으로 하전, 극성 비하전 등)을 평가하여 결정할 수 있을 것이다. 아미노산 측쇄의 "유도체"는 구조적을 변형된 (예컨대 새로운 종을 형성시키는 화학 반응, 또 다른 분자에 대한 공유 결합 등을 통함) 아미노산 측쇄를 지칭한다. 변형이 본원에서 기술되는 바와 같은 펩티드의 생물학적 활성을 파괴하지 않는다는 전제하에, 일부 실시양태는 비제한적으로 글리코실화, 측쇄 산화, 아세틸화, 아미드화 또는 인산화를 포함한 변형들을 포함하는 펩티드를 제공한다. 예를 들면 일부 실시양태에서, 펩티드는 N-말단 아세틸화 및/또는 C-말단 아미드화에 의해 변형될 수 있다.

본원에서 사용될 때의 "아미노산 모방체"는 펩티도모방체, 펩토이드 (폴리-N-치환 글리신) 및 β-펩티드 (즉 α-탄소가 아닌 β-탄소에 결합된 아미노 기를 가지는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드)를 포괄하여 의미한다. 적합하게는, 아미노산 모방체는 분자 특성을 유리하게 조정하도록 설계되는 (예컨대 안정성, 활성, 감소된 면역원 반응, 용해도 등) 변경된 화학 구조를 포함한다. 통상적으로, 변경된 화학 구조는 자연에서는 발생하지 않는 것을 고려한다 (예컨대 변형된 백본을 도입하는 것, 비-자연 아미노산 등). 따라서, 아미노산 모방체의 비-제한적인 예에는 D-펩티드, 레트로-펩티드, 레트로-인버소(inverso) 펩티드, β-펩티드, 펩토이드, 그리고 하나 이상의 D-아미노산, 폴리-N-치환 글리신 또는 β-아미노산, 또는 이들의 임의 조합을 포함하는 화합물이 포함된다.

통상적으로, 펩티드는 아미노산 (아미노산 잔기) 또는 아미노산 모방체 3개 이상의 서열을 포함한다. 본 개시의 실시양태는 아미노산 잔기, 모방체 또는 이들의 조합 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9개 이상의 소형 펩티드에 관한 것이다. 본원에서 기술되는 일부 실시양태는 아미노산 잔기 및/또는 모방체 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2개 미만의 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태는 길이가 5개 아미노산인 펩티드에 관한 것이다. 본원에서 기술되는 펩티드는 통상적으로 순수 양전하를 가지는 하전된 형태로 제공될 수 있으며, 염 (예컨대 알칼리 금속염, 염기성 또는 산성 부가염)으로서 생성 및 사용될 수 있다. 그와 같은 염의 선택 및 형성은 업계 숙련자의 능력에 속한다. 예를 들면, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins, A Wolters Kluwer Company, Philadelphia, Pa (2005)]을 참조하라.

본 개시의 실시양태는 아포E 모방체 활성을 가지는 합성 펩티드를 제공한다. 그것이 아포E 모방체 활성을 나타낼 수 있기는 하지만, 개시되는 펩티드가 아포E 폴리펩티드 (서열 13)와 1차 단백질 서열 동일성을 공유하는 것은 아니다. 다른 말로 하면, 개시되는 펩티드 서열은 아포E 폴리펩티드의 1차 아미노산 서열을 나타내지 않으며, 자연 아포E 수용체-결합 도메인과 유사한 α-나선 2차 구조를 나타내지도 않는다. 한 실시양태에서, 합성 펩티드는 임의로 단일의 활성 종으로 단리 및/또는 정제된다.

본 개시의 한 측면에서, 펩티드는 하기의 화학식 I 또는 그의 염을 포함한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

(상기 식에서, X1은 소수성 측쇄를 가지는 아미노산 또는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X2는 소수성 측쇄를 가지는 아미노산, 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산, 또는 극성 비하전 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X3은 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X4는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택되고; X5는 소수성 측쇄를 가지는 아미노산 또는 양으로 하전된 측쇄를 가지는 아미노산에서 선택됨). 일부 실시양태는 식 중 X1은 V 또는 R이고; X2는 S, A 또는 H이고; X3은 K 또는 R이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 R, L 또는 K인 펩티드를 제공한다.

<화학식 II>

X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (서열 17)

(상기 식에서, X1, X2, X3, X4 및 X5는 상기한 바와 같고, X6, X7, X8 및 X9 각각은 독립적으로 임의의 아미노산에서 선택되고, 임의로 부재함). 이와 같은 실시양태에서, 화학식 II의 펩티드는 5개의 아미노산 잔기, 6개의 아미노산 잔기, 7개의 아미노산 잔기, 8개의 아미노산 잔기, 또는 9개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 개시는 하기 화학식 I의 펩티드 또는 그의 염을 제공한다:

<화학식 I>

X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)

화학식 I에 따른 펩티드의 수많은 비-제한적인 실시양태가 표 1에 개시되어 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열 9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I에 따른 펩티드는 VSRKR (서열 2), VSKRR (서열 3), VSRRR (서열 4), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RARRL (서열 7), RSKKL (서열 8), RHKRR (서열9), VARRL (서열 10), VARRK (서열 11) 또는 RSKRR (서열 12)이다.

본원에서 기술되는 모든 측면의 일부 실시양태에서, 펩티드는 필수적으로 본원에서 개시되는 아미노산 서열 및 화학식으로 구성된다. 본원에서 기술되는 모든 측면의 일부 실시양태에서, 펩티드는 본원에서 개시되는 아미노산 서열 및 화학식으로 구성된다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 1종 이상의 아포E 모방체 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들면 일부 실시양태에서, 개시되는 펩티드는 예컨대 아교 세포에 의해 발현되는 세포-표면 수용체는 물론, N-메틸-D-아스파르테이트 (NMDA) 노출과 연관된 신경 세포 사멸 및 칼슘 유입 (흥분독성)을 억제하는 기능을 하는 수용체와 같은 1종 이상의 생리학적 아포E 수용체들에 결합하거나; TNF-α 및 IL-6의 LPS-유도 생성으로부터 보호하거나 (예컨대 생체내 패혈증 모델에서); 죽상동맥경화증, 관절염 또는 염증성 장 질환과 같은 염증성 장애를 예방, 치료 또는 완화하거나; 아교세포 또는 소교 세포 활성화를 억제하거나; 대식세포 활성화를 억제하거나; 림프구 활성화를 억제하거나; 염증을 억제하거나; CNS 염증을 억제하거나; 신경병증을 치료하거나; 및/또는 신경변성 질환 (예컨대 경증 인지 손상, 치매, 파킨슨병 또는 알츠하이머병) 및/또는 급성 CNS 외상 (예컨대 외상성 뇌 손상)에서의 신경 손상을 개선할 수 있다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 아포E와 유사한 친화성으로 특정 수용체에 결합하게 된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 대략 50 nM의 해리 상수 (K_d)로 대식세포에 결합하는 앞에서 개시한 더 긴 20개-아미노산 아포E 모방체 펩티드와 유사한 친화성으로 특정 수용체에 결합하게 된다 (문헌 [Misra et al., (2001) J. Leukocyte Biol . 70:677-683]). 예를 들면, 펩티드는 약 100 μM, 약 90 μM, 약 80 μM, 약 70 μM, 약 60 μM, 약 50 μM, 약 40 μM, 약 30 μM, 약 20 μM, 약 10 μM, 약 5 μM, 약 1 μM, 약 100 nM, 약 90 nM, 약 80 nM, 약 70 nM, 약 60 nM, 약 50 nM, 약 40 nM, 약 30 nM, 약 20 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 약 100 pM, 약 90 pM, 약 80 pM, 약 70 pM, 약 60 pM, 약 50 pM, 약 40 pM, 약 30 pM, 약 20 pM, 약 10 pM, 약 5 pM 또는 약 1 pM 이하의 K_d로 수용체에 결합할 수 있다. 펩티드는 약 1 pM, 약 5 pM, 약 10 pM, 약 20 pM, 약 30 pM, 약 40 pM, 약 50 pM, 약 60 pM, 약 70 pM, 약 80 pM, 약 90 pM, 약 100 pM, 약 1 nM, 약 5 nM, 약 10 nM, 약 20 nM, 약 30 nM, 약 40 nM, 약 50 nM, 약 60 nM, 약 70 nM, 약 80 nM, 약 90 nM, 약 100 nM, 약 1 μM, 약 5 μM, 약 10 μM, 약 20 μM, 약 30 μM, 약 40 μM, 약 50 μM, 약 60 μM, 약 70 μM, 약 80 μM, 약 90 μM 또는 약 100 μM 이상의 K_d로 수용체에 결합할 수 있다. 펩티드는 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 5 pM 내지 약 15 pM, 약 10 pM 내지 약 20 pM, 약 20 pM 내지 약 30 pM, 약 30 pM 내지 약 40 pM, 약 40 pM 내지 약 50 pM, 약 50 pM 내지 약 60 pM, 약 60 pM 내지 약 70 pM, 약 70 pM 내지 약 80 pM, 약 80 pM 내지 약 90 pM, 약 90 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 5 nM 내지 약 15 nM, 약 10 nM 내지 약 20 nM, 약 20 nM 내지 약 30 nM, 약 30 nM 내지 약 40 nM, 약 40 nM 내지 약 50 nM, 약 50 nM 내지 약 60 nM, 약 60 nM 내지 약 70 nM, 약 70 nM 내지 약 80 nM, 약 80 nM 내지 약 90 nM, 약 90 nM 내지 약 100 nM, 약 100 nM 내지 약 1 μM, 약 1 μM 내지 약 10 μM, 약 5 μM 내지 약 15 μM, 약 10 μM 내지 약 20 μM, 약 20 μM 내지 약 30 μM, 약 30 μM 내지 약 40 μM, 약 40 μM 내지 약 50 μM, 약 50 μM 내지 약 60 μM, 약 60 μM 내지 약 70 μM, 약 70 μM 내지 약 80 μM, 약 80 μM 내지 약 90 μM, 약 90 μM 내지 약 100 μM, 약 100 μM 내지 약 1 μM 범위의 K_d로 수용체에 결합할 수 있다. 예를 들면, 펩티드는 약 100 μM, 약 90 μM, 약 80 μM, 약 70 μM, 약 60 μM, 약 50 μM, 약 40 μM, 약 30 μM, 약 20 μM, 약 10 μM, 약 5 μM, 약 1 μM, 약 100 nM, 약 90 nM, 약 80 nM, 약 70 nM, 약 60 nM, 약 50 nM, 약 40 nM, 약 30 nM, 약 20 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 약 100 pM, 약 90 pM, 약 80 pM, 약 70 pM, 약 60 pM, 약 50 pM, 약 40 pM, 약 30 pM, 약 20 pM, 약 10 pM, 약 5 pM 또는 약 1 pM 이하의 K_d로 대식세포에 결합할 수 있다.

아포E 수용체에 대한 결합 정도는 예를 들면 통상적인 결합 검정 (예컨대 경쟁 결합 검정), ELISA, 기능성 검정 (예컨대 실시예에 예시되어 있는 것) 등과 같이 업계에 알려져 있는 소정의 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드의 크기는 개선된 약동학을 제공하거나, 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 것을 촉진하거나, 비내 투여를 가능케 하거나, 제조 비용을 감소시키거나, 효능을 증가시키거나 (예컨대 그램 당 기준으로), 및/또는 펩티드 면역원성을 감소시킬 수 있다.

펩티드는 예컨대 합성법 및 재조합법을 포함하여, 업계에 알려져 있는 어떠한 폴리펩티드 제조 수단을 사용하여서도 제조될 수 있다. 예를 들면 일부 실시양태에서, 펩티드는 고체-상 합성, 메리필드(Merrifield)-유형 고체-상 합성, t-Boc 고체-상 합성, Fmoc 고체-상 합성, BOP 고체-상 합성 및 용액-상 합성과 같은 합성 화학 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 예를 들면, 문헌 [Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis , 2^nd ed., (1984) Pierce Chem. Co., Rockford Ill.]; [The Peptides : Analysis , Synthesis , Biology , Gross and Meienhofer, Eds., vols. 1-2 (1980) Academic Press, New York]; [Bodansky, Principles of Peptide Synthesis , (1984) Springer-Verlag, Berlin]을 참조하라. 다른 실시양태에서, 펩티드는 예를 들면 업계 숙련자에게 익숙한 재조합 기술에 따라 세포 또는 무-세포 시스템 중에서 펩티드를 코딩하는 핵산으로부터 펩티드를 발현시키는 것에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 각각 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Sambrook et al, Molecular Cloning : A Laboratory Manual , (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology , (2002) John Wiley & Sons, Somerset, NJ]을 참조하라. 펩티드는 본원에서 기술되거나, 아니면 예컨대 문헌 [McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry , (1973) Plenum Press, New York]에 기술되어 있는 것들과 같이, 업계 숙련자에게 알려져 있는 다양한 변형 및 보호 기들 중 어느 것을 도입할 수 있다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 자연 아포E 폴리펩티드 (서열 14)의 잔기 130-150 사이에 위치하는 α-나선 수용체-결합 도메인의 물리적, 화학적 및/또는 구조적 특징을 모방하도록 설계될 수 있다. 예를 들면 일부 실시양태에서, 펩티드는 나선의 각 하강 주기 전환에 의해 자연 아포E 수용체-결합 나선의 극성 표면에 노출되는 각 다음 잔기의 1종 이상의 특성 (예컨대 상대적 크기/입체 차폐, 극성, 비극성, 하전, 비하전, 소수성 지수(hydropathy index) (예컨대 소수성, 친수성), 산성, 염기성, 결합 (예컨대 공유 결합, 수소 결합, 반 데르 발스 상호작용)을 형성하는 능력 등)을 흉내내도록 시도하는 것에 의해 펩티드의 각 다음 위치상 아미노산이 선택되는 "선형 진행(linear walk)" 펩티드-설계 접근법을 사용하여, 자연 아포E 수용체-결합 나선 3-차원 구조의 외부 표면을 따라 연장되는 극성 표면의 물리적, 화학적 및/또는 구조적 특징을 모방하도록 설계될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 1종 이상 아포E 수용체의 아포E-결합 도메인의 물리적, 화학적 및/또는 구조적 특징을 바탕으로 하여 설계될 수도 있다. 예를 들면, 분자간 수용체-리간드 결합 상호작용으로 아포E와 상호작용하는 결합 포켓 또는 표면을 가지는 아포E 수용체의 경우, 펩티드는 수용체의 아포E 결합 포켓/표면을 따라 결합 상호작용을 나타낼 것으로 예상되는 펩티드 아미노산 잔기를 선택하는 것에 의해, 펩티드와 수용체 아포E 결합 포켓/표면 사이의 예상 결합 친화성을 최대화하도록 설계될 수 있다.

한 측면에서, 본 개시는 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II 펩티드, 또는 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II 펩티드를 포함하는 조성물 또는 제제, 또는 이들의 조합을 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 신경학적 병태를 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 개시는 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II 펩티드, 또는 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II 펩티드를 포함하는 조성물 또는 제제, 또는 이들의 조합을 염증의 감소를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 염증을 감소시키는 방법을 제공한다.

상기한 측면과 관련된 실시양태에서, 펩티드 및/또는 조성물은 급성 및/또는 만성 CNS 손상의 소정 징후, 증상 및/또는 유해한 신경학적 효과를 치료, 개선 또는 예방하는 데에 사용될 수 있다. 본원에서 사용될 때, 급성 CNS 손상에는 뇌졸중 (혈전증, 색전증 또는 혈관수축에 의해 야기), 폐쇄성 두부 손상, 외상성 뇌 손상, 통괄 대뇌 허혈 (예컨대 심근 경색, 심장 부정맥, 출혈성 쇼크, 및 관상동맥 우회술 후 뇌 손상을 포함하여, 소정 원인의 전신성 저혈압에 기인하는 허혈), 허혈성 뇌졸중, 통괄 무산소증, 국소 허혈, 지주막하 출혈, 및 두개내 출혈이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 중추 신경계의 허혈성 손상은 통괄 또는 국소 허혈성 이상 중 어느 하나에 기인할 수 있다. 통괄 허혈은 심장 정지시와 같이 전체 뇌로의 혈류가 일정 시간 기간 동안 중지되는 경우에 발생한다. 국소 허혈은 대뇌 혈관의 혈전색전성(thromboembolytic) 폐색, 외상성 두부 손상, 부종 및 뇌 종양시와 같이 뇌의 일부에서 정상적인 혈류가 박탈되는 경우에 발생한다. 대뇌 허혈로 인한 많은 CNS 손상이 허헐성 이상 후 수시간 또는 심지어는 수일 동안 발생하는 바, 손상된 조직에 의한 세포독성 생성물의 방출에서 파생된다. 만성 CNS 손상에는 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병, 간질, 및 HIV-연관 뇌병증이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아포E 펩티드가 아교세포 활성화를 억제할 수 있다는 발견은 소교 세포 활성화와 관련된 소정의 신경학적 질환을 치료하는 개시되는 방법, 펩티드 및 조성물의 역할을 제공한다. 예를 들면, 소교 세포는 AD에서의 활성화 마커를 발현함으로써, AD에서의 중요한 염증 사례가 소교 세포와 관련됨을 암시하고 있다. 그와 같이 활성화된 소교 세포는 밀집하여 아밀로이드 플라크가 된다. 소교 세포는 간질에서도 활성화된다.

일부 실시양태에서, 펩티드 및/또는 조성물은 신경계 (예컨대 CNS)에 영향을 주는 염증성 이상과 연관되어 있는 임상의 신경학적 징후 및 증상을 예방, 치료 또는 개선하는 데에 사용될 수 있다. 비-제한적인 예에는 다발성 경화증, 혈관염, 급성 파종성 뇌척수염 및 길랑-바레 증후군이 포함된다. 이와 관련하여, 개시되는 아포E 모방체 펩티드는 CNS 염증 이상 치료용 제약 조성물을 제제화하는 데에 단독으로, 또는 다른 공지의 항-염증 약물 또는 시토카인과의 조합으로써 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 펩티드 및/또는 조성물은 NMDA 흥분독성과 연관되어 있는 이상을 예방, 치료 또는 개선하는 데에 사용될 수 있다. NMDA 흥분독성은 신경성 라티리즘(neurolathyrism), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 정신분열증, HIV 치매 및 뇌화농(encephalopy), 헌팅턴 무도병, 파킨슨병, 양극성 장애, 인간에서의 다발성 경화증 및 동물에서의 실험적 알레르기성 뇌척수염 (EAE), 통증, 우울증, 뇌졸중, 간질, 유전성 d-2-히드록시글루타르산 산뇨, AD, 및 외상성 뇌 손상과 연관되어 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 및/또는 조성물은 NMDA 수용체 매개 흥분독성을 차단함으로써, 신경보호를 제공할 수 있다. NMDA 길항제는 임상 마취에서도 사용되며, 만성 통증, 약물 내성 및 알콜 의존성을 억제하는 것으로 나타난 바 있다. 따라서 일부 실시양태에서, 개시되는 방법, 펩티드 및 조성물은 마취용 제제, 그리고 기술된 이상을 치료하는 데에 유용한 다른 공지의 화합물을 함유하는 조합 치료 조성물에 성분으로서 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 펩티드 및/또는 조성물은 패혈증에서의 LPS-유도 시토카인 생성을 방지하는 데에 사용될 수 있다. 무손상 아포E는 세균성 LPS-유도 치사로부터 마우스를 보호하는 것으로 나타난 바 있다. 다른 가능한 패혈증 공동-요법에는 IL-10, 전환 성장 인자-베타, 과립구 집락-자극 인자, IFN-파이, 대식세포 이동 억제 인자 및 고도 이동성 군 1 단백질, 그리고 항-내독소 항체, 항-종양 괴사 인자 항체 및 항-CD14 항체를 포함한 모노클로날 항체를 포함한 항-염증성 시토카인들을 투여하는 것이 포함된다. 이에 따라, 실시양태는 단독, 또는 다른 공지의 항-염증성 시토카인 및 항체와의 조합으로써의 펩티드의 패혈증을 치료하기 위한 조성물 및 방법에서의 용도를 제공한다.

개시되는 방법, 펩티드 및 조성물의 효과는 세포 또는 조직 수준에서 (예컨대 조직학적으로 또는 형태계측에 의해), 또는 대상체의 신경학적 상태를 평가함으로써 평가될 수 있다. 아교세포 활성화의 억제 또는 감소는 업계의 사람에게는 분명하게 드러나게 될 바와 같은 다양한 방법에 의해 평가될 수 있는데; 그와 같은 한 가지 방법은 활성화된 아교세포에 의해 생성되는 것으로 알려져 있는 화합물의 생성 또는 존재를 측정하고, 해당 측정치를 대조 상황에서의 동일 화합물의 농도와 비교하는 것이다. 다르게는, 소교 세포 활성화의 억제, 감소 또는 예방에 있어서의 본 발명 방법 및 화합물의 효과는 치료 및 대조 대상체에서의 CNS 질환의 징후 및/또는 증상을 비교하는 것에 의해 평가될 수 있는데, 여기서 상기 징후 및/또는 증상은 소교 세포의 활성과 연관되어 있거나, 거기에서 파생되는 것이다.

통상적으로, 질환 또는 치료를 필요로 하는 대상체와 관련하여 사용될 때의 "치료하는 것" 및 "치료"라는 용어에는 질환 진행의 중지 또는 완화, 질환의 진정, 증상 및/또는 임상 지표의 예방 또는 경감, 질환 및/또는 증상 중증도의 감소, 또는 미치료 대상체 및/또는 치료의 부재와 비교하였을 때의 질환 기간의 감소가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 실시양태에서, 치료 방법은 치료되는 특정 질환의 1종 이상의 임상 지표를 완화하거나 개선할 수 있다. 아포E 활성과 연관되어 있는 질환 또는 이상의 치료 방법에 관한 소정 실시양태는 치료적 유효량의 화학식 I 또는 화학식 II 펩티드, 또는 서열 2, 서열 3, 서열 4, 서열 5, 서열 6, 서열 7, 서열 8, 서열 9, 서열 10, 서열 11, 서열 12에서 선택되는 1종 이상의 펩티드는 물론, 그의 제약 조성물의 투여를 포함한다. 실시양태에서, 치료 방법은 질환 및/또는 증상의 더 이상의 진행을 예방하거나, 질환 및/또는 증상의 더 이상의 진행을 완화 또는 감소시키거나, 또는 아포E 활성과 연관되어 있는 질환 및/또는 임상 증상을 반전시키는 소정의 방법에 관한 것일 수 있다.

본원에서 기술되는 방법에 의해 치료되는 대상체에는 인간 대상체 및 비-인간 (동물) 대상체 모두, 예컨대 개, 고양이, 토끼, 염소, 말, 돼지, 소 등 (수컷 및 암컷 대상체 모두, 그리고 유아, 소아, 청소년 및 성인 대상체를 포함한 모든 연령의 대상체 포함)을 포함한 포유동물 대상체가 포괄된다. 대상체는 염증을 감소시키는 것, 소교 세포 활성화를 억제하는 것, 만성 질환을 개선하는 것 등과 같은 소정의 목적을 위하여 치료될 수 있다. 본원에서 사용될 때의 "동시에 투여되는"이라는 용어는 조합된 면역학적 효과를 달성하기 위하여 2종의 화합물이 시간적으로 충분히 근접하여 투여되는 것을 의미한다. 따라서, 동시 투여는 순차적 투여 또는 동시 투여 (예컨대 공통이거나 동일한 담체 중에서의 동시 투여)에 의해 수행될 수 있다.

일부 실시양태에서, 개시되는 펩티드 및 조성물은 비제한적으로 주사 (피하, 복강내, 정맥내, 수막강내, 근육내, 대뇌뇌실내 및 척수 주사), 비내, 경구, 경피, 비경구, 흡입, 비인두 또는 점막통과 흡수를 포함한 어떠한 적합한 투여 경로에 의해서도 투여될 수 있다. 투여는 제약 조성물로 제제화된 본원에서 기술되는 바와 같은 1종 이상의 펩티드 (예컨대 화학식 I, 화학식 II, 및/또는 서열 1-12의 것)를 제공하는 것을 포함한다. 뇌에 직접 활성 작용제 (예컨대 화합물, 펩티드 등)을 투여하는 것에 대해서는 업계에 알려져 있다. 수막강내 주사는 뇌 뇌실 및 척수액에 직접 작용제를 전달한다. 척수액에의 작용제의 직접적인 지속 투여를 제공하는 데에는 수술-이식가능 주입 펌프가 가용하다. 척수 주사에는 뇌척수액에의 제약 화합물의 주사를 사용한 요추 천자가 포함된다. 투여에는 또한 본 개시에 따른 펩티드가 신체의 표적 영역 (예컨대 뇌 조직)에서만 활성인 표적화된 전달은 물론, 펩티드가 조절되는 방식으로 일정 시간 기간에 걸쳐 방출되는 지속 방출 제제가 포함된다. 지속 방출 제제 및 표적화 전달 방법에 대해서는 업계에 알려져 있는데, 예를 들면 리포좀, 약물 적재 생분해성 미세구체, 약물-중합체 접합체, 약물-특이적 결합제 접합체 등의 사용이 포함된다. 제약상 허용되는 담체에 대해서는 업계 숙련자에게 잘 알려져 있으며, 키토산 나노입자 또는 기타 관련 장 중합체 제제가 포함된다. 주어진 치료를 위한 구체적인 제약 제제 및 치료적 유효량 및 투여 처방계획의 결정은 예컨대 환자의 연령, 체중, 성, 인종, 장기 (예컨대 간 및 신장) 기능, 원하는 치료 정도, 질환 및 관련 증상의 단계 및 중증도, 그리고 치료에 대한 환자의 내성을 고려하는 업계 숙련자의 능력에 속한다.

본원에서 기술되는 방법의 일부 실시양태는 예를 들면 다발성 경화증, 알츠하이머병, 간질, 파킨슨병, 관절염, 염증성 장 질환, 백혈병 또는 죽상동맥경화증과 같은 만성 질환을 가지는 대상체에 대한 본원에서 기술되는 1종 이상 펩티드, 또는 펩티드를 포함하는 조성물의 비내 전달을 제공한다. 비내 및 흡입 투여에 적절한 제제 및 방법에 대해서는 업계에 알려져 있다.

치료 적용과 관련된 실시양태에서, 투여는 이미 해당 장애에 걸린 대상체에서 수행될 수 있다. 질환의 인큐베이션 단계 또는 급성 단계에 있는 대상들이 구체적인 질환/이상, 환자 및 조합에 기초하여 적합하게 단독, 또는 다른 치료와의 조합 중 어느 하나인 본원에서 기술되는 방법에 의해 치료될 수 있다. 업계 숙련자라면, 조합 치료가 적합한 경우, 또는 적합하지 않은 경우를 결정할 수 있을 것이다.

치료 방법 및 사용에서, 본원에서 기술되는 펩티드 및 조성물은 증상 및/또는 합병증을 치료하거나 적어도 부분적으로 중지시키기에 충분한 양으로 대상체에 투여될 수 있다. 이를 수행하는 데에 적당한 양은 종종 "치료적 유효 투여량"으로 지칭된다. 이와 같은 사용에 효과적인 양은 부분적으로 펩티드, 조성물, 투여 양식, 치료되는 이상의 단계 및 중증도, 환자의 연령, 체중 및 일반적인 건강, 그리고 처방 의사의 판단에 따라 달라지게 된다.

실시양태에서, 본원에서 개시되는 조성물 및 펩티드의 유효량에는 펩티드 약 100 mg/kg 미만, 약 50 mg/kg 미만, 약 25 mg/kg 미만, 약 10 mg/kg 미만, 약 1 mg/kg 미만, 약 0.1 mg/kg 미만, 약 0.05 mg/kg 미만, 약 0.01 mg/kg 미만, 약 0.005 mg/kg 미만 및 약 0.001 mg/kg 미만이 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에서 개시되는 조성물 및 펩티드의 유효량에는 펩티드 약 0.0001 mg/kg 이상, 약 0.001 mg/kg 이상, 약 0.005 mg/kg 이상, 약 0.01 mg/kg 이상, 약 0.05 mg/kg 이상, 약 0.1 mg/kg 이상, 약 0.5 mg/kg 이상, 약 1 mg/kg 이상, 약 5 mg/kg 이상 및 약 10 mg/kg 이상이 포함될 수 있다. 여기에는 예를 들면 약 0.0001 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 0.5 mg/kg, 및 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.05 mg/kg 범위의 펩티드 양이 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 기술되는 방법, 펩티드 및 조성물은 심각한 질환 상태, 즉 생명-위협 또는 잠재적 생명 위협 상황에서 사용될 수 있다. 그와 같은 경우에는, 실질적 과량의 본 조성물을 투여하는 것이 가능하며, 치료하는 의사에게 바람직하게 느껴질 수 있다. 또한, 업계 일반의 숙련자라면, 경우에 따라 해당 대상체에 대한 투약량, 투약 일정 및 투여 경로와 같은 변수들을 조정 또는 변경하는 방법도 알고 있을 것이다.

그렇게 하지 않을 경우 발생하게 되는 증상의 진행을 감소시키거나 개선하기 위하여, 개시되는 펩티드 및 조성물은 급성으로 (즉 발병시, 또는 치료를 요하는 이상으로 이어지는 사례 직후에), 예방적으로 (예컨대 예정된 수술 전에, 또는 신경학적 징후 또는 증상의 출현 전에), 또는 변성 질환의 과정 동안 투여될 수 있다. 투여 시점 및 간격은 대상체의 증상에 따라 가변적인데, 업계 숙련자에 의해 결정되게 될 바와 같이, 수시간, 수일, 수주 또는 그 이상의 시간 과정에 걸쳐 수분, 수시간 또는 수일에 달하는 간격으로 투여될 수 있다.

치료 또는 예방적 치료용 제약 조성물과 관련된 일부 실시양태는 점막 (경구, 비내, 흡입, 직장, 질, 기관 등), 비경구, 국소 또는 국부 투여 중 어느 것에 특화된 제제를 제공한다. 본원의 목적상, 점막 투여는 국소 투여와 상이한데, 점막 투여는 기도, 위장 관로, 생식 관로 등의 표면과 같은 점막 표면에 대한 백신의 적용을 지칭하기 때문이다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 적합하게는 비경구, 예를 들면 정맥내, 피하, 피내 또는 근육내로 투여된다. 국소 투여 (즉 비-점막)는 수성 또는 비-수성 액체 (예컨대 액적), 에멀션, 페이스트, 연고, 크림 등과 같은 임의의 적절한 형태에서의 눈, 귀, 손톱, 모발 또는 피부와 같은 대상체의 비-점막 표면에 대한 것일 수 있다. 이에 따라, 본 개시는 허용되는 담체, 예컨대 수성 담체에 용해 또는 현탁된 1종 이상의 소형 아포E 모방체 펩티드를 포함하는 국소 (점막 또는 비-점막) 또는 비경구 투여용 조성물을 제공한다. 실시양태에서, 제약 조성물은 비내로 투여된다. 임의의 다양한 수성 담체들, 예컨대 물, 완충된 물, 0.9% 식염수, 0.3% 글리신, 히아루론산 등이 사용될 수 있다. 이들 조성물은 통상적인 잘 알려져 있는 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있거나, 또는 멸균 여과될 수 있다. 생성 용액은 그대로 사용하기 위하여 포장되거나 동결건조될 수 있는데, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 용액과 조합된다. 조성물은 필요에 따라 생리학적 조건에 가까워지도록 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대 완충제, 장성 조절제, 습윤제 등, 예를 들면 나트륨 아세테이트, 나트륨 락테이트, 나트륨 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 등을 함유할 수 있다. 다르게는, 본원에서 기술되는 제약 조성물은 건조 분말 제형일 수도 있다. 건조 분말 백신 제제와 관련된 실시양태에서는, 통상적으로 액체 백신이 빠르게 냉동된 후, 1종 이상의 팽화제 (예컨대 트레할로스 또는 기타 당)의 존재하에 진공 중에서 건조 (예컨대 냉동-건조)됨으로써, 뛰어난 온도 안정성을 가지는 백신 제제를 제공한다. 그와 같은 건조 분말 백신 제제는 건조 분말로서 숙주에게 투여될 수 있어서, 액체 재구성에 대한 필요성이 없다.

제약 조성물 및 제제를 포함하여, 본원에서 기술되는 조성물과 관련된 측면에서, 일부 실시양태는 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트와의 조합으로써의 서열 1에 따른 1종 이상의 펩티드 (예컨대 서열 1-12)를 포함하는 조성물을 제공한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트와의 조합으로써의 서열 2-12 중 어느 것에서 선택되는 펩티드, 또는 이들 중 2종 이상 펩티드의 임의 조합을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 개시는 필수적으로 서열 1 또는 서열 17의 펩티드, 및 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트로 구성되는 조성물을 제공한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 필수적으로 서열 2-12 중 어느 것에서 선택되는 펩티드, 또는 이들 중 2종 이상 펩티드의 임의 조합, 및 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트로 구성된다.

한 측면에서, 본 개시는 유효량의 화학식 I 및/또는 화학식 II 펩티드를 포함하는, 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 신경학적 병태의 치료를 위한 약제를 제공한다.

한 측면에서, 본 개시는 유효량의 화학식 I 및/또는 화학식 II 펩티드를 포함하는, 염증의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 염증의 치료를 위한 약제를 제공한다.

하기의 실시예가 본 개시 소정 측면 및 실시양태에 대한 더욱 상세한 설명을 제공하고 있기는 하지만, 그것은 단순한 예시로써, 어떠한 방식으로도 청구범위의 영역으로 제한되지는 않는 것으로 간주되어야 한다.

실시예

실시예 1: 아교세포 활성화의 세포 배양물-기준 평가를 위한 재료 및 방법

아교세포 활성화를 억제하는 펩티드와 같은 화합물의 능력을 평가하는 데에 배양된 세포를 사용하는 시험관내 방법이 개발되어 있다 (문헌 [Laskowitz et al., (2001) Exp . Neurol , 167:74-85]). 아교 세포 배양물을 성장시킨 후, 표준 조건하에서 유지하였다. 배양된 아교 세포는 1차 뮤린 혼합 아교 세포 배양물, 뮤린 BV-2 미세아교 세포, 및 인간 C3 미세아교 세포를 포함할 수 있다. 유착성인 아교 세포를 OptiMEM^® 배지 (인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corp.) 사로부터 구입가능)로 세척하여 혈청을 제거한 후, 펩티드를 함유하는 새로운 OptiMEM^® 배지로 피복하였다.

길이가 5개 아미노산인 펩티드를 약 0 내지 약 50 μM 범위, 예컨대 0.3, 3 및 30 μM의 농도로 하나 이상의 세포 샘플에 동시에 적용하였다. 더 긴 펩티드인 (각각 12개 아미노산) 펩티드 AL-10-1 (서열 18) 및 VL-17-9 (서열 19)를 각각 음성 및 양성 대조로 사용하였다. 모두 그 전체가 참조로써 포함되는 문헌 [Aono et al., Neuroscience (2003) 116:437] 및 [Aono et al., Neurobiology of Disease (2002) 11:214]에 기술되어 있는 방법을 사용하여, NMDA에 노출된 1차 래트 뉴런성 피질 배양물 중에서 일련의 펩티드들을 스크리닝하였다 (표 2 참조). NMDA에 대한 노출 24시간 후 비히클 처리된 배양물과 비교한 LDH의 %감소로써, 1차 뉴런성 배양물에서의 NMDA 매개 세포 사멸로부터의 신경보호를 나타내었다 (표 2). LDH 방출은 NMDA 노출 후 뉴런 사멸의 지표이다. 펩티드 VR-55 (서열 4)는 1 μM의 농도에서 NMDA 매개 흥분독성 세포 사멸을 대략 19% 감소시켰다. 효과는 특이적이어서, 모든 펩티드가 신경보호를 나타낸 것은 아니었다. 양성 대조 펩티드 VL-17-9는 LDH 방출을 31% 감소시켰다. 비교해보면, 더 짧은 VL-5-2가 LDH 방출을 31% 감소시킴으로써, 더 짧은 펩티드 역시 NMDA 매개 흥분독성 세포 사멸을 감소시킨다는 것을 나타내었다.

아포E 모방체 펩티드 VR-55 (서열 4)에 대하여, 1차 뉴런성 배양물에서의 NMDA 흥분독성으로부터의 신경보호의 투여량 반응을 측정하였다. 도 6은 VR-55 (서열 4)에 대한 노출의 함수로서의 LDH 방출의 %억제가 투여량 의존성이라는 것을 보여준다. 표 3은 모두 1 μM 농도에서의 그들의 억제 능력에 대한 동일한 생물검정에서 스크리닝된 관련 족 내의 모든 펩티드의 누적 데이터를 나타낸다. "0"은 5% 미만의 억제를 나타내며; "+"는 5-10% 억제를 나타내고; "++"는 11-20% 억제를 나타내며; "+++"는 20% 초과의 억제를 나타낸다. VL-17-9 이외에도, VR-55, VL-5-1, VL-5-2 및 VR-52를 포함한 수종의 다른 후보들이 20%를 초과하는 억제율을 가졌다.

더 큰 펩티드 또는 단백질은 측정가능한 아교세포 활성화의 억제를 관찰하기 위하여 더 높은 농도에서 시험될 필요가 있을 수 있다. 1차 뮤린 세포 및 BV-2 세포를 사용하는 경우, 100 ng/ml의 E. coli LPS (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) Co. 사에서 구입가능)를 사용하여 세포를 자극하고, LPS 자극 6시간 후 상청액을 수집하여, 니트리트 (프로메가 코포레이션(Promega Corp.) 사에서 구입가능한 비색 그레이스(Greiss) 시약 시스템 사용) 및/또는 TNF-α (인비트로겐 코포레이션 사에서 구입가능한 고체-상 ELISA 키트 사용)에 대해 검정한다. 인간 C3 세포를 사용하는 경우, 200 ㎍/ml의 폴리이노신산 5' (시그마-알드리치 Co. 사에서 구입가능)를 사용하여 세포를 자극하고, 자극 5일 후 상청액을 수집하여, 고체-상 ELISA 키트 (인비트로겐 코포레이션 사에서 구입가능)를 사용하여 TNF-α에 대해 검정한다.

실시예 2: 아포 E 모방체 펩티드에 의한 소교 세포 활성화의 억제

뮤린 BV-2 배양물을 제조하여, 실시예 1에서 기술된 바와 같이 소교 세포 활성화 억제를 평가하는 데에 사용하였다. 펩티드 없이, 0.3 μM, 3 μM 또는 30 μM 중 어느 하나의 아포E 모방체 펩티드 (VSKRR; 서열 3)과 함께, 또는 0.3 μM, 3 μM 또는 30 μM 중 어느 하나의 음성 대조 펩티드 (VSKKR; 서열 13)와 함께, BV-2 세포의 반복 샘플들을 인큐베이팅하였다. LPS를 사용하여 각 샘플을 자극한 후, 실시예 1에서 기술된 바와 같이 TNF-α 생성에 대하여 평가하였다. 도 1에 도시되어 있는 바와 같이, 시험된 각 투약량의 아포E 모방체 펩티드 (서열 3)를 사용한 처리는 미처리 세포 또는 음성 대조 펩티드 (서열 13)로 처리된 세포에 비해 감소된 TNF-α 생성으로 이어졌다. 데이터는 본원에서 개시되는 펩티드가 전-염증 매개체들의 방출을 감소시키는 데에 유용하였음을 나타내고 있다.

아포E 모방체 펩티드인 VR-55 (서열 4), VL-5-1 (서열 5) 및 VL-5-3 (서열 10)에 대하여, 뇌 손상-하향조절 CNS 염증 반응에 대한 보호 활성을 측정하였다. 도 11A 및 11B는 VR-55, VL-5-1 및 VL-5-3이 혼합 아교세포 1차 배양물에서 LPS에의 노출 후에 염증성 시토카인인 TNF-α의 방출을 억제한다는 것을 보여준다.

실시예 3: 생체내에서 신경학적 결핍을 시험하기 위한 재료 및 방법

외상성 뇌 손상의 실험용 뮤린 모델이 개발되어 있다 (문헌 [Laskowitz, et al. (2010) J. Neurotrauma , 27:1983-95]). 수컷 마우스 (연령 12-14주)를 마취 유도 박스에서 산소 중 4.3% 이소플루란을 사용하여 90초 동안 마취시켰다. 기관에 삽관하고, 산소와 질소의 50/50 혼합물 중 1.4% 이소플루란을 사용하여 폐를 기계적으로 환기시켰다. 표면 가열/냉각을 사용하여 체온을 37℃로 유지하였다. 해부학적 지표를 식별하기 위하여 정중선 절개에 의해 두개골의 상부를 노출시키고, 접착제를 사용하여 오목한 3-mm 금속제 디스크를 정확하게 정중선의 브레그마쪽 미주의 두개골 표면에 고정시켰다. 디스크는 충격 에너지를 분산시키고, 움푹 들어가는 두개골 골절의 발생률을 10% 미만으로 감소시켰다. 일반적인 마취 후, 마우스를 정위고정 장치(stereotactic device)에 위치시키고, 두개골을 노출시켰다. 3 mm의 두부 전위를 동반하여 6.8 ± 0.2 m/s로 발사되는 공압 충격기 (직경: 2.0 mm; 에어-파워(Air-Power), Inc. 사에서 구입가능)를 사용하여 디스크 표면에 1회의 정중선 충격을 가하였다.

대뇌내 출혈용 실험 뮤린 모델 역시 제공되어 있다 (문헌 [James, et al. (2009) Stroke , 40:632-39]). 수컷 마우스 (연령 16-20주)를 마취 유도 박스에서 산소 중 4.6% 이소플루란을 사용하여 90초 동안 마취시켰다. 기관에 삽관하고, 질소/산소의 70/30 혼합물 중 1.6% 이소플루란을 사용하여 폐를 기계적으로 환기시켰다. 신체하 가온 시스템을 사용하여 체온을 37℃로 유지하였다. 동물의 두부를 정위고정 프레임에 고정시키고, 국소 마취제를 주사한 후, 두피를 절개하였다. 두개골의 노출 후, 브레그마의 2 mm 좌측 옆으로 천두공(burr hole)을 생성시키고, 0.5 μL 주사기 바늘 (해밀턴(Hamilton) Co. 사에서 구입가능)을 피질로부터 3 mm의 깊이로 전진시켰다. 5분의 기간에 걸쳐 유형 IV-S 클로스트리디움 콜라게나제 (시그마-알드리치 Co. 사에서 구입가능)을 주사하였다 (0.4 μL 정상 식염수 중 0.1 U). 다음에, 절개부를 폐쇄하고, 이후 삽관해제하여, 동물이 자발적 환기를 회복하도록 하였다.

신경학적 결핍을 측정하기 위한 실험 절차를 개발하였다. 자동화된 로토로드 (우고 바질 노스 아메리카(Ugo Basile North America) Inc. 사에서 구입가능)를 사용하여 전정운동(vestibulomotor) 기능을 평가하였다. 신경학적 병태 또는 손상 (예를 들자면 상기한 바와 같은 외상성 뇌 손상 또는 대뇌내 출혈)의 실험적 유도 전일에, 마우스를 고정된 회전 속도 (분당 16 회전)에서의 60초 동안의 2회의 연속 컨디셔닝 시험후 이어지는 회전 속도 가속에 의한 3회의 추가 시험에 적용하였다. 나중 3회 시험에서 회전하는 실린더로부터 떨어지는 평균 시간을 기준 체류기로 기록하였다. 손상 후, 마우스를 회전 속도를 가속하는 3회의 시도를 사용하는 연속되는 매일 시험에 적용하였다 (시험간 간격 15분). 로드로부터 떨어지는 평균 체류기를 기록하고, 로드를 잡을 수 없는 마우스는 0초의 체류기로 점수화하였다.

모리스 수중 미로를 사용하여, 신경학적 결핍을 측정하기 위한 또 다른 실험 절차를 개발하였다. 상기 절차는 이동가능한 플랫폼 (7.5 cm 직경)을 포함하며 분말 유유를 사용하여 불투명화된 25-27℃의 물이 채워진 흑색의 알루미늄 풀을 사용하였다. 각 훈련 또는 시험 기간은 시험 사이에 20-30분의 간격을 가지는 일 당 4회 시험으로 구성되었다. 시험 1일 전에, 시인성 플랫폼 (플랫폼에 기를 꽂고, 4분원 습관화를 최소화하기 위하여 매 시험마다 상이한 4분원에 위치시킴, 미로-외 시각 신호 없음)을 사용하여, 마우스가 조작 및 수영이 습관화되도록, 그리고 마우스에게 시험 목표 (플랫폼에 등정함으로써 물을 벗어나는 것)를 가르치도록, 마우스를 훈련시켰다. 훈련일 후, 물 표면 아래 1 cm에 잠긴 숨겨진 플랫폼을 사용하여 마우스를 시험하였다 (4일 연속, 모든 시험에서 서쪽 4분원에 플랫폼을 잠수시켰으며, 수회의 미로-외 시각 신호를 주었음). 각 시험에 있어서, 마우스를 주변부를 향하도록 풀에 위치시키고, 최대 90초 동안 플랫폼을 탐색하게 하였다. 매 시험마다 상이한 4개의 4분원 중 하나에서 마우스를 출발시켰으며, 출발 4분원 순서는 매일 무작위로 정하였다. 컴퓨터화 비디오 추적 시스템 (에토비젼(Ethovision) 2.2.14; 버지니아 리스버그 소재 놀두스 인포메이션 테크놀로지(Noldus Information Technology) 사에서 구입가능)을 사용하여, 플랫폼을 발견하는 체류기 및 수영 속도를 기록하였다.

실시예 4: 외상성 뇌 손상 후 신경학적 결과에 대한 아포 E 모방체 펩티드의 효과

실시예 3에서 기술된 바와 같이 유도된 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 다시 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 아포E 모방체 펩티드 (서열 3; 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg) 또는 담체 (식염수) 중 어느 하나를 마우스 군에 투여하였다. 실시예 3에서 기술된 바와 같이, 손상 전 및 후에 측정된 로토로드 체류기에 의해 전정운동 기능에 대하여 각 마우스를 시험하였다. 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이, 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg의 아포E 모방체 펩티드 (서열 3)로 처리된 동물들은 담체 처리에 비해 상당히 향상된 전정운동 성능을 나타내었다. 도 2를 참조하라. 효과는 5일의 시험 기간 내내 지속되었다. 데이터는 본원에서 개시되는 펩티드가 외상성 뇌 손상을 치료함에 있어서 유용하다는 것을 나타낸다.

실시예 5: 외상성 뇌 손상 후 신경학적 결과에 대한 아포 E 모방체 펩티드의 효과

실시예 3에서 기술된 바와 같이 유도된 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 다시 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 아포E 모방체 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg) 또는 담체 (식염수) 중 어느 하나를 마우스 군에 투여하였다. 실시예 3에서 기술된 바와 같이, 손상 전 및 후에 측정된 로토로드 체류기에 의해 전정운동 기능에 대하여 각 마우스를 시험하였다. 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이, 0.05 mg/kg의 아포E 모방체 펩티드 (서열 4)로 처리된 동물들은 향상된 전정운동 성능을 가졌다. 도 3을 참조하라. 효과는 5일의 시험 기간 내내 지속되었다. 실시예 3에서 기술된 바와 같이 유도된 외상성 뇌 손상 후 2시간 및 다시 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 아포E 모방체 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg) 또는 담체 (식염수) 중 어느 하나를 다른 마우스 군에 투여하였다. 실시예 3에서 기술된 바와 같이, 모리스 수중 미로를 사용하여 손상-후 28, 29, 30 및 31일차에 신경인지 성능에 대하여 각 마우스를 시험하였다. 수중 미로 체류기로 반영되는 바와 같이, 0.05 mg/kg 또는 0.2 mg/kg 중 어느 하나의 아포E 모방체 펩티드 (서열 4)로 처리된 동물들은 향상된 신경인지 결과를 나타내었다. 도 4를 참조하라. 데이터는 본원에서 개시되는 펩티드가 외상성 뇌 손상을 치료함에 있어서 유용하다는 것을 나타낸다.

실시예 6: 대뇌내 출혈 후 신경학적 결과에 대한 아포 E 모방체 펩티드의 효과

실시예 3에서 기술된 바와 같이 유도된 대뇌내 출혈 후 2시간 및 다시 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 아포E 모방체 펩티드 (서열 4; 0.05 mg/kg) 또는 담체 (식염수) 중 어느 하나를 마우스 군에 투여하였다. 실시예 3에서 기술된 바와 같이, 대뇌내 출혈 유도 전 및 후에 측정된 로토로드 체류기에 의해 전정운동 기능에 대하여 각 마우스를 시험하였다. 증가된 로토로드 체류기로 반영되는 바와 같이, 0.05 mg/kg의 아포E 모방체 펩티드 (서열 4)으로 처리된 동물들은 향상된 전정운동 성능을 가졌다. 도 5를 참조하라. 효과는 5일의 시험 기간 내내 지속되었다. 데이터는 본원에서 개시되는 펩티드가 대뇌내 출혈을 치료함에 있어서 유용하다는 것을 나타낸다.

실시예 7: 폭발 손상 후 신경학적 결과에 대한 아포 E 모방체 펩티드의 효과 데이터

쇼크 튜브 폭발 모델을 사용하여 폭발 손상 마우스 연구를 수행하였다. 실제적인 최대 과압, 등급화된 기간 및 임펄스로 일련의 폭발 조건을 제공하기 위하여, 3개의 쇼크 튜브 세트 (도 7A)를 구성하였다. 펩티드 시험에는, 1240 mm 길이, 78 mm 직경의 쇼크 튜브를 사용하였다. 드라이버(driver) 부문은 모든 시험에서 일정하였으며, 드리븐 파이프(driven pipe)에 결합된 상응하는 블라인드 플랜지(blind flange) 및 슬립-온 플랜지(slip-on flange)와 서로 볼트연결된 25 mm 두께의 스페이서 플랜지(spacer flange)로 구성되었다. 이와 같은 드라이버 부문 프로필은 튜브의 과압 특성을 변경하기 위하여 달라질 수 있다. 누출을 방지하기 위하여, 각 플랜지 사이에는 전면 개스킷 (흑연/부나-N 물질)을 설치하였다. 격막은 드라이버 스페이서 플랜지와 드리븐 부문에 결합된 플랜지 사이에 설치된 수많은 폴리에틸렌 테레프탈레이트 (PET) 필름의 시트로 구성되었다. 격막이 파열되어 쇼크 파장이 드리븐 튜브 부문으로 하향 전달될 때까지, 드라이버 부문을 블라인드 플랜지의 배후에 결합시킴으로써 고압 헬륨으로 충전하였다.

3개의 진동-감쇠 U-볼트를 사용하여, 쇼크 튜브를 압출된 알루미늄 프레임에 수직으로 탑재하였다. 3개의 플러시-탑재 압전저항형 압력 변환기 (PT) (엔데브코(Endevco) 8530B; 엔데브코 코포레이션 사, 캘리포니아 산 후안 카피스트라노 소재)를 쇼크 튜브의 개방 단부로부터 6 mm 돌출하여 직경 부근에 120° 이격시켰다. 튜브의 벽 두게가 PT 길이 미만이기 때문에, 6 mm 두께의 칼라(colla) (19 mm 길이)를 튜브의 단부상에 설치하고, 제 자리에 용접함으로써, 추가적인 PT용 탑지 지지물을 제공하였다. 격막이 파열될 때의 폭발 압력을 측정하기 위하여, 드라이버 부문에 추가 PT를 설치하였다. 마우스에 대한 흉부 보호를 제공하는 데에는, 알루미늄 고정물을 사용하였다 (도 7B). 전기 시험에서, 최대 과압 및 임펄스는 10배를 초과하여 감소되었다. 각 시험마다 3개의 단부-튜브 PT에서 최대 입사 과압, 양-단계 기간, 및 최대 입사 임펄스를 기록하였다 (데이터 미도시). 드라이버 폭발 압력의 수준은 일련의 격막 두께 (0.58 내지 0.84 mm)를 사용하여 조절하였으며, 드라이버 기체 탱크 압력은 7.0 MPa로 조절하였다. 각 시험 전에, 대기 조건 (온도, 기압, 습도)을 기록하였다. 모든 센서는 500 kHz 잡음방지(anti-aliasing) 필터를 사용하여 1 MHz에서 샘플링하였다. 40 kHz의 컷오프 주파수에 의한 8^th-오더 로-패스 버터워스(8^th-order low-pass Butterworth) 필터를 사용하여 데이터를 후-가공하였다.

야생형 마우스 (잭슨 랩스(Jackson Labs) 사)를 하나는 펩티드가 주사되고 (서열 4) 하나는 비히클-단독 대조인 15마리 2개 군으로 폭발에 노출시켰다. 상기한 바와 같은 모리스 수중 미로를 사용하여 손상된 마우스에서 신경학적 결핍을 측정하였다. 모리스 수중 미로를 사용하여 측정하였을 때와 같이, 폭발 손상이 있는 마우스에서 신경인지 성능에 대한 아포E 모방체 펩티드의 효능을 조사하였다 (도 8). 도 8은 아포E 모방체 펩티드가 폭발 손상 후 신경인지 결핍을 감소시킨다는 것을 보여준다. 이전에 학습된 숨겨진 플랫폼이 있는 4분원에서의 증가된 시간 (즉 문헌 [Laskowitz et al., J. Neurotrauma , 24:1093-1107 (2007)]에 기술되어 있는 바와 같이 기억력을 평가하는 탐사 시험)으로 입증되는 바와 같이, 펩티드의 투여는 향상된 인지 성능으로 이어지는 경향을 초래하였다 (데이터 미도시). 비히클 처리된 동물은 17.8 ± 1.9초를 올바른 4분원에서 보낸 것에 비해, 아포E 모방체 펩티드 (서열 4) 처리된 동물은 올바른 4분원에서 21.8 ± 2.7초를 보냈다 (p=0.24). 경향은 모리스 수중 미로에서의 학습 향상으로 이어지는 것이었다 (p=0.07). 경향은 탐사 시험에서의 성능 향상으로 이어지는 것이었다 (p=0.25).

마우스 무호흡 데이터를 다른 종에 대비하면, 우수한 모델 시스템이 될 수 있다. 폭발 손상 모델은 운동 기능 회복, 그리고 지속 및 초기 인지 결핍에 있어서 둔체 손상 모델(blunt injury model)에 비해 독특하다. 로토로드 결과에 따르면, 폭발 마우스는 빠르게 운동 기능을 되찾는 것으로 나타난다. 폭발-후 허위(sham) 및 손상 조건 사이에 상당한 결핍은 존재하지 않는다. 모리스 수중 미로 결과에 따르면, 폭발 마우스는 수중 미로 시험 내내 상당한 인지 결핍을 나타내었다.

실시예 8: 정맥내 전달에 있어서의 혈액 및 CNS 에서의 약동학

하기와 같이 혈장 및 CNS에서의 아포E 모방체 펩티드 VSRRR (서열 4)의 양을 측정하였다:

LC /선택 이온 모니터링 ( SIM )/ MS 를 사용한 마우스 혈장에서의 VSRRR 정량

2 ml 96-웰 플레이트의 웰에, 48 μL 분취량의 마우스 혈장을 측정 투입하였다. 안정성 동위원소 표지된 (SIL) 형태의 VSRRR 펩티드 ("VSRRR[10]"; 서열 4) (암모늄 비카르보네이트 50 mM 중 5 피코몰/μL, pH 8, 버퍼) 6 μL를 첨가하였다. 암모늄 비카르보네이트 50 mM 중 합성 형태의 VSRRR 펩티드 ("VSRRR"; 서열 4) 6 μL를 표준 및 품질 대조 (QC)로서 첨가하고, 마우스 PK 샘플을 함유하는 모든 웰에 동일 부피의 50 mM 암모늄 비카르보네이트를 첨가하였다. 1140 μL의 50 mM 암모늄 포르메이트, pH 10을 첨가하여 최종 부피를 1200 μL로 하였다. 하기와 같은 오아시스(OASIS)® HLB 고체 상 추출 (SPE) 프로토콜을 사용하여 염 및 단백질을 제거하였다.

1. 500 μL 메탄올 (MeOH)을 각 웰에 통과시킴 × 1

2. 500 μL의 25% 아세토니트릴 (ACN)/1% 트리플루오로아세트산 (TFA) × 1 (예비-용리로서)

3. 500 μL의 MeOH × 1

4. 500 μL의 50 mM 암모늄 포르메이트 × 2

5. 1 mL의 각 샘플 혼합물을 바로 오아시스® HLB 플레이트 (친수성-친지질성-균형 역상 흡수제; 워터스 코포레이션(Waters Corp.) 사)의 상응하는 웰에 피페팅하고, 천천히 진공을 적용함.

6. 500 μL의 50 mM 암모늄 포르메이트 × 1

7. 500 μL의 10% ACN/50 mM 암모늄 포르메이트 × 2

8. 500 μL의 25% ACN/50 mM 암모늄 포르메이트 × 1

9. 제거된 플레이트 수집물을 세척/유통시켜, 수집 플레이트에 위치시킴.

10. 100 μL의 25% ACN/1% TFA를 사용한 용리 × 3, 진공을 사용한 느린 용리. 최종 용출액은 대략 300 μl이어야 함.

진공 원심분리를 사용하여 SPE 용출액을 건조시켰다. 1% 아세토니트릴 (ACN), 0.1% 트리플루오로아세트산 (TFA) 및 0.02% 헵타플루오로부티르산 (HFBA)을 함유하는 버퍼 50 μL 중에서 샘플을 재구성하였다. 2 마이크로리터의 재구성된 샘플을 고해상도의 정밀 질량 직렬 질량 분광측정기와 연계된 나노규모 모세관 LC에 의해 분석하였다. 구체적으로, 나노규모 LC 컬럼 (1.7 ㎛ BEH130 C18 150 ㎛ ID × 100 mm 길이; 워터스 코포레이션 사)을 사용하여, 0.1% 포름산 (이동상 A = 0.1% 포름산/0.001% HFBA)과의 3% 내지 19% ACN의 10-분 구배로, 그리고 16.5분의 총 LC 전개 시간, 유량 = 1.8 μL/분 및 35℃의 컬럼 온도로, 나노록스프레이(NanoLockSpray)™ (워터스 코포레이션 사) 및 나노액퀴티(nanoAcquity) UPLC® 시스템 (워터스 코포레이션 사)이 구비된 전기분무 이온화 공급원을 사용하였다. 시냅트(SYNAPT)™ G1 HDMS™ 고해상도 질량 분광측정기 (워터스 코포레이션 사)를 사용하였다. 360 Da에서 인핸스드 듀티 사이클(Enhanced Duty Cycle) 스캔 기능을 사용하여, 50-4000 Da의 질량 영역에 걸쳐 풀 스캔 MS 데이터를 수득하였다.

고해상도에서의 (m/z 357.7 및 362.7) 이중으로 하전된 이온의 선택 이온 크로마토그램의 곡선하 면적 (AUC)을 측정함으로써, VSRRR 및 VSRRR[10]의 양을 정량하였다. 최종적인 VSRRR 정량의 양은 AUC의 비 (VSRRR/VSRRR[10])를 사용하여 측정하였다. 5마리 동물로부터의 비를 시점 당으로 평균하고, 보정 표준을 사용하여 표준 곡선을 생성시켰다. QC 샘플의 2반복 분취량을 분석 재현성을 확인하기 위하여 3반복으로 LC/MS에 의해 분석하였다.

도 9는 펩티드 0.8 mg/kg 단일 투여 후 시간에 따른 혈장 샘플 중 펩티드의 양을 나타낸다. 낮은 정량 수준 (LLOQ)이 표시되어 있다. 표 4는 정맥내 (IV)의 결과를 나타낸다.

치료용 펩티드인 VSRRR 에서의 마우스 뇌 PK - 샘플 제조 절차

1.5 mL 에펜도르프 튜브에서 마우스 뇌를 칭량하였다. 전체 뇌를 14 mL 배양 튜브로 옮겼다. 습윤 조직 중량 100 mg 당 SIL 펩티드 2.5 pmol/mL를 포함하는 50 mM 암모늄 포르메이트 (pH 10) 중 8 M 우레아 1 mL를 첨가하였다. 표준 대조 및 QC를 위하여, 뇌 조직 매 100 mg 당 10 μL (1%)의 펩티드 표준을 상기언급된 버퍼 990 μL에 첨가함으로써, 조직 매 100 mg 당 총 부피 1 mL를 형성시켰다. 각 샘플에 약 20초 동안 조직 티어러(tearor)를 사용하였다. 1.5 mL의 샘플을 2-mL 에펜도르프 튜브로 옮겼다. 각 샘플을 폭발 당 5초의 3회 폭발에 대하여 탐색 초음파처리하였다. 다음에, 샘플을 37℃로 30분 동안 가열하였다. 15,000 rpm으로 30분 동안 샘플을 원심분리하였다. 각 튜브의 저부에서 매우 적은 침전물을 볼 수 있었으며, 1 ml의 샘플 (1.5 mL의 총 부피로부터의 것)을 피펫팅하여 바로 오아시스® 플레이트상에 위치시켰을 경우에는 방지되었다. 혈장 샘플에 대하여 상기한 오아시스® HLB 고체 상 추출 (SPE) 프로토콜을 사용하여 염 및 단백질을 제거하였다. 추출 후, 스피드(Speed) Vac에서 샘플을 건조시키고, 1% ACN/0.1% TFA/0.02% HFBA 25 μL 중에서 재구성하였다. 총 16.5분의 전개 시간으로 풀 스캔 MS법을 사용하여, 3 μL의 샘플을 시냅트™ G2 HDMS™ (워터스 코포레이션 사)에 주사하였다. 3-8분 사이에, 해당 펩티드(들)을 모니터링하였다.

표 5 및 도 10은 펩티드 0.8 mg/kg 단일 투여 후 시간에 따른 5마리 동물로부터의 CNS 샘플 중 펩티드의 평균 양을 나타낸다. 도 10은 1.4 pg/mg에서의 최저 정량 수준을 나타낸다.

표 6은 2×3-분 뇌 및 2×10-분 뇌에서의 분석물 농도를 나타낸다. 분석물 농도는 단일-점 내부 표준 정량으로부터 계산하였다. 예비 데이터는 CNS 침투를 암시하고 있다. 분석물 농도는 1.4 pg 분석물/mg 조직 및 89.2 pg/mg (2× 연속 희석) 사이의 샘플들을 사용하여 생성된 7-점 표준 곡선 보정 곡선 방정식으로부터 계산하였다. 뇌 분석의 동물-간 재현성은 높다 (21%를 초과하는 CV). 단일-투여된 뇌에서의 약물 분자 C_max는 약 9 pg 분석물/mg 조직이다.

실시예 9 - 뮤린 뇌졸중 연구에서의 아포 E 모방체 펩티드의 효과

국소 허혈 - 재관류 모델

변형된 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델 (문헌 [Huang et al., (1994) Science, 265:1883-1885]; [Laskowitz et al., (1997) J. Cereb . Blood Flow Metab ., 17:753-758])을 사용하여 뇌졸중 후 신경학적 기능에 대한 모방체 펩티드의 효과를 측정하고, 뇌졸중 치료제로서의 펩티드의 효능을 평가하였다. 마우스를 4.6% 이소플루란을 사용한 마취 유도 후 기관내로 삽관하고, 30% O₂/70% N₂ 중 1.6% 이소플루란을 사용하여 폐를 기계적으로 환기시켰다. 정중선 경부 피부 절개를 통하여, 우측 총경동맥을 확인하였다. 외부 경동맥을 결찰한 후 가로절단하였다. 내부 경동맥을 익구개 동맥의 시원이 보일 때까지 멀리 절개하였다. 실리콘으로 가볍게 코팅된 무딘 단부를 가지는 6-0개의 나일론 모노필라멘트를 인접 외부 경동맥 절단단에 삽입하고, 내부 경동맥으로 11 mm 전진시켜 중간 대뇌 동맥을 폐색시켰다. 90분 후, 필라멘트를 제거하여 혈액 관류를 복구하고, 봉합사를 사용하여 피부 절개부를 봉합하였다. 이소플루란을 중단하고, 자발적 호흡을 회복시 마우스를 삽관해제하였다. 손상-후 마우스를 1시간 동안 산소-풍부 환경 (FIO₂ = 50%)에 위치시킨 다음, 해당 케이지로 복귀시켰다. 계속하여 직장 온도를 모니터링하고, 표면 가열/냉각을 사용하여 절차 내내 37℃로 서보조절하였다.

운동 결핍의 시험

10-12주령의 수컷 C57Bl/6J 마우스 2개 군 (대조 군 (n=12) 및 VR-55-처리 군 (n=9))에 MCAO를 적용하였다. 대조 군 마우스는 재관류 손상 후 30분 및 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 100 μL의 멸균 정상 식염수 비히클을 제공받은 반면, VR-55-처리 군 마우스는 재관류 손상 후 30분 및 6시간에 정맥내 꼬리 정맥 주사에 의해 100 μL의 멸균 정상 식염수 비히클, 및 VR-55 (서열 4; 0.05 mg/kg)를 제공받았다.

자동화된 로토로드 (우고 바질 사, 이탈리아 코메리오 소재)를 사용하여, 위에서 전기한 바와 같이 전정운동 기능을 평가하였다. MCAO 전일에, 마우스를 고정된 회전 속도 (16 rpm)에서의 60초 동안의 2회의 연속 컨디셔닝 시험 후 이어지는 회전 속도 가속을 사용한 3회의 추가 시험에 적용하였다. 나중 3회 시험에서 회전하는 실린더로부터 떨어지는 평균 시간을 기준 기능성 로토로드 체류기로 기록하였다. MCAO 후 1일차부터 시작하여, 마우스를 회전 속도를 가속하는 3회의 시도를 사용하는 연속되는 매일 시험에 3일 동안 적용하였다 (시험간 간격 15분). 로드로부터 떨어지는 평균 체류기를 기록하였다. 회전하는 로드를 잡을 수 없는 마우스는 0초의 체류기를 할당받았다.

도 12A 및 12B에 나타낸 바와 같이, 대조 및 VR-55-처리 마우스는 유사한 기준 기능성 로토로드 체류기를 가졌다. 대조 마우스는 217 +/- 20초의 기준 기능성 로토로드 체류기를 가진 반면 ("식염수"), VR-55-처리 마우스는 214 +/- 22초의 기준 기능성 로토로드 체류기를 가졌다 ("VR-55"). 손상-후 1일차에도, 역시 대조와 VR-55-처리 마우스는 유사한 기능성 로토로드 체류기를 가졌다. 그러나, 손상-후 3일차에는, VR-55-처리 마우스가 대조 마우스에 비해 기능성 로토로드 체류기에서 개선을 나타내었다. VR-55-처리 마우스는 216 +/- 26초의 기능성 로토로드 체류기를 가진 반면, 대조 마우스는 161 +/- 32초의 기능성 로토로드 체류기를 가졌다. 이러한 결과는 염증 반응에 부수되는 지연된 신경 손상의 감소와 일치한다.

처리된 마우스는 개선된 조직학적 종료점을 나타낼 것으로 기대된다. 본원에서 기술되는 다른 모방체 펩티드들은 다양한 투약량으로 투여될 것인 바, 역시 마우스 뇌졸중의 MCAO 모델에서 개선된 기능성 및 조직학적 종료점을 나타낼 것으로 기대된다.

SEQUENCE LISTING <110> DUKE UNIVERSITY <120> PEPTIDES FOR SUPPRESSING INFLAMMATION <130> 028193-9111-WO00 <140> New Internation Application <141> 2012-03-16 <150> US 61/454,342 <151> 2011-03-18 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Xaa is any amino acid <400> 1 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Val Ser Arg Lys Arg 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Val Ser Lys Arg Arg 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Val Ser Arg Arg Arg 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Val Ala Arg Lys Leu 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Arg His Lys Lys Leu 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala 165 170 175 Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Val Arg Ala 180 185 190 Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gln Pro Leu Gln Glu Arg Ala Gln 195 200 205 Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg 210 215 220 Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gln Val Ala Glu Val Arg 225 230 235 240 Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ala 245 250 255 Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met 260 265 270 Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gln Ala Ala Val Gly 275 280 285 Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 290 295 <210> 16 <211> 299 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu Arg Gln 1 5 10 15 Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg 20 25 30 Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr Leu Ser Glu Gln Val Gln 35 40 45 Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val Thr Gln Glu Leu Arg Ala Leu Met 50 55 60 Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu 65 70 75 80 Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser Lys Glu 85 90 95 Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Arg 100 105 110 Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly Glu Val Gln Ala Met Leu Gly Gln 115 120 125 Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu 130 135 140 Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala 145 150 155 160 Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala 165 170 175 Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Val Arg Ala 180 185 190 Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gln Pro Leu Gln Glu Arg Ala Gln 195 200 205 Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg 210 215 220 Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gln Val Ala Glu Val Arg 225 230 235 240 Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ala 245 250 255 Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met 260 265 270 Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gln Ala Ala Val Gly 275 280 285 Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His 290 295 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(9) <223> Xaa is any amino acid, optionally absent <400> 17 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Ala Ser His Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu 1 5 10 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser Leu Leu Arg Lys Leu 1 5 10

Claims

VSRRR (서열 4), VSKRR (서열 3), VSRKR (서열 2), VARKL (서열 5), RHKKL (서열 6), RHKRR (서열 9), 또는 VARRL (서열 10)인 하기 화학식 I의 단리된 펩티드 또는 그의 염:
<화학식 I>
X1-X2-X3-X4-X5 (서열 1)
여기서, 임의로 상기 펩티드는 N-말단 아세틸화 및/또는 C-말단 아미드화된다.
제1항에 있어서, N-말단 아세틸화 및/또는 C-말단 아미드화된 펩티드.
제1항에 있어서, VSKRR (서열 3)인 화학식 I의 펩티드.
제3항에 있어서, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화된 펩티드.
제1항에 있어서, VSRRR (서열 4)인 화학식 I의 펩티드.
제5항에 있어서, N-말단 아세틸화 및 C-말단 아미드화된 펩티드.
제1항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 염증의 감소를 필요로 하는 대상체에서 염증을 감소시키기 위한 조성물.
제1항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 두개내 출혈, 지주막하 출혈, 외상성 CNS 손상, 뇌졸중, 실험적 알레르기성 뇌척수염, 다발성 경화증, 신경염증, 만성 신경학적 질환, ALS, 치매, 신경병증, 파킨슨병 및 알츠하이머병 중 하나 이상에서 선택되는 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하기 위한 조성물.
제8항에 있어서, 신경학적 병태가 외상성 CNS 손상, 지주막하 출혈, 두개내 출혈 및 뇌졸중 중 하나 이상에서 선택되는 것인 조성물.
제4항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 염증의 감소를 필요로 하는 대상체에서 염증을 감소시키기 위한 조성물.
제4항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 두개내 출혈, 지주막하 출혈, 외상성 CNS 손상, 뇌졸중, 실험적 알레르기성 뇌척수염, 다발성 경화증, 신경염증, 만성 신경학적 질환, ALS, 치매, 신경병증, 파킨슨병 및 알츠하이머병 중 하나 이상에서 선택되는 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하기 위한 조성물.
제11항에 있어서, 신경학적 병태가 외상성 CNS 손상, 지주막하 출혈, 두개내 출혈 및 뇌졸중 중 하나 이상에서 선택되는 것인 조성물.
제6항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 염증의 감소를 필요로 하는 대상체에서 염증을 감소시키기 위한 조성물.
제6항에 따른 펩티드, 및 제약상 허용되는 담체, 비히클, 희석제 또는 아주반트를 포함하는, 두개내 출혈, 지주막하 출혈, 외상성 CNS 손상, 뇌졸중, 실험적 알레르기성 뇌척수염, 다발성 경화증, 신경염증, 만성 신경학적 질환, ALS, 치매, 신경병증, 파킨슨병 및 알츠하이머병 중 하나 이상에서 선택되는 신경학적 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 신경학적 병태를 치료하기 위한 조성물.
제14항에 있어서, 신경학적 병태가 외상성 CNS 손상, 지주막하 출혈, 두개내 출혈 및 뇌졸중 중 하나 이상에서 선택되는 것인 조성물.
제7항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 주사, 흡입, 경피, 정맥내, 비내, 두개내 및/또는 수막강내 경로에 의해 투여되는 조성물.
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