KR101969384B1

KR101969384B1 - 항진균제 제조 방법

Info

Publication number: KR101969384B1
Application number: KR1020137029036A
Authority: KR
Inventors: 솔비 건네스; 하랄드 할보르센
Original assignee: 셀리아 파마슈티칼즈 에이피에스
Priority date: 2011-04-04
Filing date: 2012-03-26
Publication date: 2019-04-16
Also published as: AU2012238928B2; RS55371B1; US20140371422A1; DK2694531T3; JP6017534B2; JP2014510116A; PL2694531T3; CA2829511C; CN103492409B; AU2012238928A1; CA2829511A1; US8981055B2; EP2694531A1; KR20140026454A; RU2013147309A; WO2012136498A1; CN103492409A; BR112013023531A2; ES2603582T3; HRP20161519T1

Abstract

본 발명은 미카펀진의 향상된 제조 방법에 관한 것이다.

Description

항진균제 제조 방법{Methods for manufacturing an antifungal agent}

발명의 기술분야

본 발명은 미카펀진(Micafungin) 또는 이의 염의 향상된 제조 방법에 관한 것이다.

선행기술의 지위

미카펀진은 하기 화학식 (I)로 나타내는 항진균 활성을 지닌 에키노칸딘(echinocandin)이다:

미카펀진은 뉴모칸딘(Pneumocandin) A0, 1-[(4R,5R)-4,5-디하이드록시-N2-[4-[5-[4-(펜틸옥시)페닐]-3-이속사졸릴]벤조일]-L-오르니틴]-4-[(4S)-4-하이드록시-4-[4-하이드록시-3-(설포옥시)페닐]-L-트레오닌]으로도 알려져 있다. 미카펀진 소듐은 또한 FK-463으로 알려져 있다. [Chemical Abstracts]에 의해 부여된 등록 번호는 미카펀진의 경우 235114-32-6이고, 미카펀진 소듐의 경우 208538-73-2이다.

미카펀진의 항진균 활성은 1,3-β-D-글루칸 합성효소를 억제하는 능력에 기인하며, 이로 인해, 진균 세포 용해를 유도한다. 따라서, 미카펀진은 여러 감염; 그 중에서도, 균주, 예컨대 아스퍼질러스, 크립토코쿠스, 칸디다, 무코르, 액티노마이세스, 히스토플라즈마 ( Histoplasma ), 더마토파이트 ( Dermatophyte ), 말라세지아 및 푸사 리움에 의해 야기되는 감염의 치료에 유용하다. 미카펀진은 칸디다에 의해 야기되는 감염의 치료 및 예방에 사용되는 승인된 약제인 Mycamine® 및 Funguard®에서 활성 성분이다.

미카펀진은 에키노칸딘 시리즈 중에서 두 번째로 승인된 항진균제이고, 현재 생명을 위협하는 진균 감염에 대한 화학요법으로 전 세계적으로 사용되고 있다.

미카펀진 및 이의 제조법은 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd에 의해 출원된 미국 특허 번호 6,107,458에 개시되어 있다. 또한, 미카펀진 제조 방법은 학술 논문, ["Process Development of Micafungin, a Novel Lipopeptide Antifungal Agent" by Ohigashi et al. in Journal of Synthetic Organic Chemistry, Japan, vol. 64, No. 12, Dec. 2006.]에 개시되어 있다. 선행 기술에 기새되어 있는 방법에 따르면, 미카펀진은 균류인 코레오포마 엠페트리 ( Coleophoma empetri ) F-11899로부터 분리된 천연 생성물인 FR-901379를 통해 수득될 수 있다. FR-901379의 효소적 탈아실화에 이어서 4-[5-(4-펜틸옥시)페닐)이속사졸-3-일]벤조산의 아마이드 커플링에 의해 미카펀진이 제조될 수 있다.

또한, 미카펀진 제조 방법은 문헌[Fromtling et al., supra]에 개시되어 있다. Fromtling 등에 따르면, FR-901379의 탈아실화 후에 수득한 펩티드 코어는 활성화된 측쇄인 1-[4-[5-(4-펜틸옥시)페닐)이속사졸-3-일]벤조일]벤조트리아졸 3-옥사이드로 재아실화된다.

또한, 미카펀진 소듐의 여러 제조 방법이 문헌[Hashimoto et al., The Journal of Antibiotics (2009) 62, 27-35]에 개시되어 있다.

미카펀진의 향상된 생산법은 US7199248에 기재되어 있다. 또한, 상기 방법은 분리된 미카펀진 측쇄, 즉 1-[4-[5-(4-펜틸옥시)페닐)이속사졸-3-일]벤조일옥시]-1H-1,2,3-벤조트리아졸을 탈아실화 미카펀진 펩티드 코어에 첨가하는 단계를 포함한다.

문헌[Ohigashi et al., Organic Process Research & Development, 2005, vol. 9, page 179-184]은 활성화된 미카펀진 측쇄의 분리를 또한 포함하는, 최적화된 산업적 미카펀진 생산 방법을 개시하고 있다.

상기에 언급한 선행 기술에 개시되어 있는 미카펀진 제조 방법 모두에 있어서, 모든 공지된 방법은 미카펀진 펩티드 코어, 즉 FR-901379과의 반응에 앞서 활성화된 미카펀진 측쇄의 분리를 상정하고 있다는 점이 공통된 특징이다. 따라서, 모든 선행 기술 방법은 활성화된 미카펀진 측쇄의 분리된 형태를 거쳐 진행된다.

본 발명의 목적은 향상된, 그리고 보다 산업적으로 효율적인 미카펀진 제조 방법을 제공하는 것이다.

발명의 요약

일 측면에 있어서, 본 발명의 목적은, 원-포트(one-pot) 과정으로 미카펀진 측쇄의 활성화 및 미카펀진 펩티드 코어로의 상기 미카펀진 측쇄의 커플링을 포함하는 공정을 사용하여 달성된다. 즉, 본 발명의 공정은 미카펀진 측쇄가 존재하는 반응 혼합물로부터 활성화된 미카펀진 측쇄를 분리함 없이 미카펀진 펩티드 코어의 아실화를 포함한다. 다른 측면에서, 본 발명은 하나의 반응 혼합물에서 미카펀진 코어 펩티드로의 미카펀진 측쇄의 활성화 및 커플링을 포함한다. 따라서, 활성화된 미카펀진 측쇄를 분리하는 단계가 불필요한 방법이 제공된다.

펩티드 코어인 미카펀진 코어로의 산성 화합물인 미카펀진 측쇄의 커플링은 여러 원치 않는 부산물을 생성시킬 수 있다. 그 중에서도, 문헌[Ohigashi et al., 2006, supra]은 특히, 미카펀진 코어에서의 다수의 작용기의 존재로 인해 아실화 반응에서 부반응의 억제에 대한 필요성을 논의하고 있다. 또한, 문헌[Ohigashi et al. 2006]은 공정의 중간체를 위한 최적의 정제 조건에 대한 필요성이 있음을 교시한다. 선행 기술의 교시에도 불구하고, 본 발명자는 놀랍게도, 활성화된 미카펀진 측쇄를 분리하는 별개의 분리 단계에 대한 필요성이 없이 미카펀진 측쇄의 커플링이 활성화될 수 있고, 직접 미카펀진 코어에 커플링될 수 있으며, 이러한 커플링이 최소한의 불순물 발생이 달성되는 성공적인 커플링임을 발견하였다. 본 발명의 방법은, 활성화된 미카펀진 측쇄의 분리를 전제로 하는 선행 기술 방법과 비교하였을 때 이점을 제공한다. 예를 들면, 원-포트 공정은 분리 단계의 생략으로 인한 보다 짧은 공정 시간에 대한 산업적 관점에서 보다 효율적이다. 또한, 활성화된 미카펀진 측쇄의 보다 우수한 활용과 더불어, 분리/정제 단계로 인해 생성물이 손실되지 않기 때문에 보다 우수한 총 수율이 달성될 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 미카펀진 또는 이의 염의 원-포트 제조 방법을 제공한다:

a) 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 염, 및 하이드록시벤조트리아졸 및 에틸-2-시아노-2-(하이드록시이미노)아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 커플링 첨가제를 용매 중에서 혼합하는 단계;

b) 단계 a)에서 수득한 혼합물에 커플링 시료를 첨가하는 단계로서, 상기 커플링 시료가 카르보디이미드인 단계;

c) 단계 b)에서 수득한 혼합물에 염기 및 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염을 첨가하는 단계;

,

.

본 발명의 일 구현예에 따라, 상기 커플링 첨가제는 1-하이드록시-벤조트리아졸이다.

본 발명의 다른 구현예에 따라, 상기 커플링 첨가제는 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸이다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 상기 커플링 첨가제는 에틸-2-시아노(하이드록시이미노)아세테이트이다.

본 발명의 다른 구현예에 따라, 상기 커플링 시료는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드(EDC) 또는 이의 염이고, 바람직하게는 EDC의 하이드로클로라이드 염이다.

본 발명의 다른 구현예에 따라, 상기 단계 a)에서 사용되는 용매는 DMF이다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 본 발명의 단계 c)에서 사용되는 염기는 DIPEA이다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 화학식 II의 화합물이 첨가되기 전에, 상기 염기가 단계 b)에서 수득한 혼합물에 첨가된다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 화학식 II의 화합물이 첨가된 후에, 상기 염기가 단계 b)에서 수득한 혼합물에 첨가된다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 단계 c)에서 수득한 상기 미카펀진 염은 침전된다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 단계 c)에서 수득한 상기 미카펀진 염은 안티솔벤트(antisolvent)를 사용하여 침전된다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 단계 c)에서 수득한 상기 미카펀진 염은 에틸 아세테이트에 의해 침전된다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따라, 단계 c)에서 수득한 상기 미카펀진 염은 메탄올 및 아세톤의 첨가에 의한 반응의 퀀칭(quenching) 후에 침전된다.

도 1은 실시예 1에 기재된 반응, 즉 미카펀진 측쇄와 HOBt로 나타내는 커플링 첨가제의 분리 반응을 보여주는 반응 도식이다.
도 2는 실시예 2에 기재된 반응, 즉 미카펀진 펩티드 코어와 도 1에 나타낸 반응의 생성물의 분리 반응을 보여주는 반응 도식이다.
도 3은, 미카펀진 측쇄의 활성화 및 미카펀진 펩티드 코어와의 반응이 본 발명에 따른 원-포트 공정으로 수행되는 실시예 3 및 실시예 4에 기재된 반응을 보여주는 반응 도식이다.
도 4a는 실시예 2에 개시된 단계적 공정의 생성물에 대한 크로마토그램(chromatogram)을 나타낸다.
도 4b는 실시예 3에 개시된 원-포트 공정의 생성물에 대한 크로마토그램을 나타낸다.
도 4c는 실시예 4에 개시된 원-포트 공정의 생성물에 대한 크로마토그램을 나타낸다.

본 발명에 따른 미카펀진은 하기 구조식 또는 이의 염을 포함하는 임의의 화합물이다. 상기 표현 "이의 염"은 미카펀진의 제조 및/또는 정제라는 목적에 유용할 수 있는 미카펀진의 임의의 염, 또는 약학 제제의 활성 성분으로서 유용한 미카펀진의 임의의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하도록 의도된다. 이와 관련하여, 미카펀진 염의 비-제한적 리스트는 소듐 염, 포타슘 염, 디이소프로필에틸아민(DIPEA) 염 등이 있다.

본 발명에 따른 미카펀진은 우선 a) 미카펀진 측쇄와 커플링 첨가제를 혼합하고, 이어서 b) 단계 a)의 혼합물에 커플링 시료를 첨가하며, 최종적으로 c) 이러한 혼합물에 염기 및 상기에 나타낸 화학식 II의 화합물, 즉 미카펀진 펩티드 코어를 첨가함으로써 원-포트로 제조된다.

산성 형태의 미카펀진 측쇄는 화학명이 4-[5-(4-펜틸옥시)페닐]이속사졸-3-일]벤조산인 화합물이다. [Chemical abstracts]에 의해 부여된 등록 번호는 179162-55-1이고, Fujisawa에 의해 부여된 이름은 FR-195752이다. 이러한 산성 형태의 화합물(본원에서, 미카펀진 측쇄라고도 언급됨)은 하기 화학식 III으로 나타내어질 수 있다:

.

미카펀진 펩티드 코어는 하기 화학식 II로 나타낸다:

.

본원에서 사용되는 용어 "미카펀진 펩티드 코어"는 또한, 화학식 II의 화합물의 염을 포함하도록 의도된다. 예를 들어, 상기 화합물의 소듐 염은 FR-179642으로도 알려져 있다(문헌[Fromtling et al., in Drugs of the Future, 1998, Vol 23, No 12, page 1273-1278]).

미카펀진에서, 미카펀진 측쇄는 아마이드 결합에 의해 미카펀진 펩티드 코어에 커플링된다. 아마이드 결합의 형성, 즉 카르복실산과 아민의 반응을 위한 여러 방법들이 선행 기술에 개시되어 있으며, 펩티드의 합성에서 사용된다. 대부분의 경우, 아마이드 결합의 형성은 커플링 시료 및 커플링 첨가제를 이용하는 카르복실산의 활성화의 사용을 필요로 한다(문헌[Madeleine M. Joullie and Kenneth M. Lassen, in Arkivoc, 2010 (viii), 189-250 and Eric Valeur and Mark Bradley, 2009, Chem. Soc. Rev., 38, 606-631] 참고). 또한, 매우 간단한 펩티드 구조가 원-포트 과정으로 아마이드 결합 형성에 의해 제조되는 예들이 존재하며, 여기서 펩티드의 제조 방법은 수성 에탄올 혼합물에서 이루어진다(문헌[Pu et al., 2009, Organic Process Research & Development, 13, 321-314] 참조).

그러나, 제시된 미카펀진 펩티드 코어와 같은 복잡한 분자의 아민기로의 카르복실산의 커플링을 위한 원-포트 과정은 선행 기술 어디에서도 찾아볼 수 없다.

본원에서 사용되는 용어 "미카펀진 펩티드 코어" 또는 "미카펀진 코어"는 상기에 제시된 화학식 II로 나타내는 FR-901379로부터 팔미토일 잔기(palmitoyl moiety)의 효소적 탈아실화에 의해 생성되는 화합물이다. Fujisawa는 미카펀진 펩티드 코어에 대해 FR-179642라는 명칭을, 미카펀진 펩티드 코어의 소듐 염에 대해서는 FR-133303라는 명칭을 부여했다. [Chemical Abstracts]에 의해 상기 화합물들에 대해 부여된 등록 번호는 168110-44-9이다. 본원에서 사용되는 경우, 미카펀진 펩티드 코어는 상기 화합물뿐만 아니라 이러한 화합물의 염, 예컨대 소듐 염 FR-133303을 포함하도록 의도된다.

본 발명에 따른 원-포트 방법의 제 1 단계는 미카펀진 측쇄와 커플링 첨가제의 혼합이다. 상기 혼합 후에, 커플링 시료가, 미카펀진 측쇄의 활성화 및 반응 첨가제와의 반응에 의해 생성되는 혼합물에 첨가된다.

본원에서 사용되는 용어 "커플링 첨가제"는 활성화된 미카펀진 측쇄의 반응성을 강화시키고, 미카펀진 펩티드 코어의 1차 아민에 대한 커플링을 용이하게 하는 임의의 화합물을 나타낸다. 커플링 첨가제를 사용하는 것의 이점은 커플링 첨가제가 부산물의 형성을 감소시킨다는 점이다.

수많은 커플링 첨가제의 집합이 존재한다(문헌[Chem. Soc. Rev., 2009, vol 38, page 606-631 by Valeur and Bradley] 참조). 용어 하이드록시벤조트리아졸은 하이드록시벤조트리아졸, 하이드록시아자벤조트리아졸, 및 이들의 치환된 유도체, 예컨대 1-하이드록시벤조트리아졸, 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸, 6-클로로-1-하이드록시벤조트리아졸 등을 포함하도록 의도된다.

본 발명의 방법에 따르면, 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 및 에틸 2-시아노-2-(하이드록시이미노) 아세테이트(Oxyma Pure®, CAS no 3849-21-6, 이하 옥시마(Oxyma))가 유용함을 보여준다. 상기 커플링 첨가제의 사용은 적은 불순물 형성 및 원하는 미카펀진의 고 수율을 유도한다.

본 발명에 따라 사용되는 용어 "커플링 시료"는 커플링 첨가제의 존재 하에, 미카펀진 측쇄의 카르복실산을 활성화시킴으로써, 미카펀진 코어 구조의 아민과의 반응을 용이하게 하는 임의의 화합물이다.

본 발명에 따른 커플링 시료로서, 다음의 화학식으로 나타내는 카르보디이미드 유도체가 사용될 수 있다: Ra-N=C=N-Rb, 여기서 Ra 및 Rb는 동일하거나 상이하고, 이들 각각은 독립적으로 지방족, 헤테로지방족, 카르보사이클릭 또는 헤테로사이클릭기를 나타내며, 모든 상기 기들은 임의적으로 치환된다. 본 발명의 일 측면에 따라, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드(EDC)가 커플링 시료로 사용된다. 본 방법의 바람직한 측면에 따라, EDC의 하이드로클로라이드 염이 커플링 시료로 사용된다.

카르보디이미드가 커플링 시료로 사용될 수 있다는 것이 선행 기술에 공지되어 있다(예컨대, 문헌[Valeur and Bradley, Chem. Soc. Rev June 2008] 참조). 미카펀진 측쇄의 음전하 산소는 디이미드기의 중심 탄소를 공격하는 친핵체로서 이상적으로 행동할 것이다. 커플링 첨가제로서 옥시마 및 커플링 시료로서 EDC를 사용한 본 발명의 방법이 하기에 나타나 있으며, 도식 1을 참조해라.

원-포트 반응에 적합한 용매는 극성 비양성자성 유기 용매를 포함한다. 적합한 용매의 비-제한적 리스트는 디메틸포름아마이드(DMF), 디메틸아세트아마이드(DMA), 디메틸설폭사이드(DMSO) 등 및 이들의 혼합물을 포함한다.

원-포트 반응에 적합한 염기는 미카펀진 펩티드 코어 상의 아민기를 양자화시킬 수 있는 무기 또는 유기 염기를 포함한다. 적합한 염기의 비-제한적 리스트는 DIPEA, NaHCO₃, Na₂CO₃ 등을 포함한다.

미카펀진 측쇄의 활성화에 적합한 온도는 0℃ 내지 40℃이며, 바람직하게는 20℃ 내지 30℃이다.

미카펀진 펩티드 코어로의 미카펀진 측쇄의 커플링에 적합한 온도는 -5℃ 내지 10℃이고, 바람직하게는 0℃이다. 또한, 염기의 첨가 전에 상기 온도에 도달하는 것이 바람직하다.

원-포트 과정에 대한 적합한 총 반응 시간은 약 4 시간 내지 20 시간이다. 바람직하게는, 미카펀진 측쇄의 활성화에 2 내지 4 시간, 및 미카펀진 펩티드 코어로의 상기 활성화된 미카펀진의 커플링에 90 분 내지 2 시간이 소요된다.

커플링 첨가제 및 미카펀진 측쇄의 혼합 후에 커플링 시료가 첨가되는 것이 중요하다.

하기의 반응 도식 1은, 본 발명의 원-포트 공정에서 일어나는, 미카펀진 측쇄의 활성화 및 상기 활성화된 미카펀진 측쇄와 미카펀진 펩티드 코어의 반응을 도시한다.

반응 도식 1:

미카펀진 펩티드 코어로의 미카펀진 측쇄의 커플링 후에, 이의 생성물은 미카펀진 염으로 침전될 수 있다. 이러한 측면에 있어서, 용어 "미카펀진 염"은 임의의 약학적으로 활성화된 염 또는 미카펀진의 추가 정제에 유용한 염일 수 있다. 후자의 경우에 있어서, 미카펀진의 염은 예를 들면, N,N-디이소프로필 에틸아민(DIPEA) 염일 수 있다. 미카펀진의 임의의 약학적으로 허용가능한 염은 본 발명에 따라 제조되는 미카펀진 생성물을 사용하여 추가로 제조될 수 있다. 유용한 약학적 허용가능한 염은 소듐 염 및 포타슘 염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

또한, 본 발명에 따라 제조되는 미카펀진은 임의적으로 통상의 기술자에게 잘 알려진 방법을 사용하여 정제될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따라, 본 발명의 단계 c)의 생성물은 미카펀진의 DIPEA 염으로 변환된 이후에, 미카펀진의 소듐 염과 같은 미카펀진의 약학적으로 허용가능한 염으로 변경되며, 추가로 크로마토그래피에 의해 정제된다.

본 발명에 따라 제조되는 미카펀진은 인간 및 동물을 포함하는 포유동물에서의 감염성 질병의 치료 및 예방에 유용한 약학 조성물의 제조에 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물은 당해 기술분야에서 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 또한, 약학 조성물은 살균과 같은 종래의 약학 공정으로 처리될 수 있다.

예를 들면, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 첨가제와 함께, 다른 활성 성분과 조합되거나 단독으로 정해진 양의 정제된 미카펀진을 함유하는 투여 단위의 형태로 제조될 수 있다. 용어 "약학적 허용가능한 첨가제"는 이를 필요로 하는 환자에게 약학 조성물에 함유된 미카펀진의 전달을 수행하거나 향상시키는데 적합한 하나 이상의 포뮬레이션(formulation) 물질을 나타낸다. 또한, "약학적 허용가능한 첨가제"는 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 완충제 등과 같은 보조제의 존재로 나타낼 수 있다. 특히 동결건조된 형태의 락토오스는 미카펀진을 위한 적합한 안정화제의 예이다. 통상의 기술자는 미카펀진과 같은 항진균 화합물을 포함하는 약학적 포뮬레이션의 제조에 이용가능한 여러 약학적 첨가제를 쉽게 인식할 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 비경구 투여, 예컨대 정맥내 투여가 가능하도록 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물을 필요로 하는 환자에게 적합한 투여량의 미카펀진이 투여될 수 있다. 인간 또는 포유동물에 적합한 일일 복용량은 환자의 상태 및 다른 인자에 따라 폭넓게 변할 수 있다. 일일 복용량은 Mycamine®을 투여하는 경우에 감염의 치료 및 예방에 흔히 사용되는 통상적 방법을 사용하여 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다.

통상의 기술자는 다음의 실시예로부터 본 발명의 여러 이점을 인식할 것이다. 또한, 하기의 실험 및 결과는 단지 비-제한적 실시예로서 제공되는 것임이 이해되어야 한다.

실시예 1: 활성화된 미카펀진 측쇄의 제조

FR-195752(10.0 g) 및 HOBt(5.2 g)(12%의 물 포함)을 DMF(142 ㎖)에서 현탁하였고, 5 분 동안 교반시켰다. EDC HCl(6.6 g)을 상기 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 426 ㎖의 아세토니트릴(ACN)에 부었으며, 25℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 백색 현탁액을 여과하였고, 2 시간 동안 필터 상에서 건조시켰다. 분리된 양은 12.6 g(95%)였으며, HPLC 순도는 98.0%였다.

실시예 2: 미카펀진 펩티드 코어로의 활성화된 미카펀진 측쇄의 커플링

25℃에서 10 분 동안 교반시킴으로써, FR-179642(10.0 g)을 무수 DMF(200 ㎖)에서 현탁시켰다. 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 미카펀진 측쇄(4.50 g) 및 실시예 1에 기재된 활성화된 산을 첨가하였고, 이어서 DIPEA(2.25 ㎖)을 첨가하였다. 모든 물질이 5 분 후에 용해되었고, 혼합물을 0℃에서 90 분 동안 교반하였다. 메탄올(50 ㎖) 및 아세톤(100 ㎖)의 혼합물을 첨가하였고, 온도를 10℃까지 상승시켰다. 이러한 온도에서 60분 동안 상기 혼합물을 교반하였다. 에틸 아세테이트(1000 ㎖)을 2.5 시간에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 생성된 현탁액을 15 시간 동안 교반하였고, 파인 코스 유리 소결 필터 디스크(fine coarse glass sinter filter disk)가 장착된 Aldrich 1000 ㎖ 유리 압력 필터를 사용하는 가압 여과에 의해 생성물을 수집하였다. 필터 케이크(filter cake)를 에틸 아세테이트(1500 ㎖)로 세척하였고, 필터 상에서 15 분 동안 건조시켰다. 25℃에서 3 시간 동안 진공 캐비넷에서 추가 건조시켜 백색 고체로서 12.8 g(86%)을 얻었다.

실시예 3: 미카펀진 펩티드 코어로의 미카펀진 측쇄의 활성화 및 커플링

FR-195752(394 mg) 및 HOBt 하이드레이트(197 mg)를 25℃에서 DMF(15 ㎖) 중에 현탁시켰다. EDC HCl(166 mg)을 첨가하였고, 혼합물을 4 시간 동안 25℃에서 교반하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시켰고, DIPEA(0.223 ㎖) 첨가하였으며, 이어서 FR-179642(1.00 g)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 90 분 동안 교반하였다. 메탄올(2.5 ㎖) 및 아세톤(5 ㎖)의 혼합물을 첨가하였고, 혼합물을 10℃까지 가열하였으며, 60 분 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(100 ㎖)를 30 분에 걸쳐 첨가하였고, 생성된 현탁액을 10℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 고체 생성물을 여과로 수집하였고, 에틸 아세테이트(150 ㎖)으로 세척하였으며, 필터 상에서 15 분 동안 건조시켰다. 25℃에서 2 시간 동안 진공 캐비넷에서 추가 건조시켜 백색 고체로서 1.47 g(98% 수율)을 얻었다. HPLC 순도는 96.6%였다.

실시예 4: 미카펀진 펩티드 코어로의 미카펀진 측쇄의 활성화 및 커플링

FR-195752(2.06 g) 및 옥시마(Oxyma, 834 mg)를 25℃에서 DMF(60 ㎖) 중에 현탁시켰다. EDC HCl(1.07 g)을 첨가하였고, 혼합물을 2 시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물은 밝은 황색 용액이 되었다. 상기 황색 용액을 0℃까지 냉각시켰고, DIPEA(1.1 ㎖)을 첨가하였으며, 이어서 FR-179642(5.00 g)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 90 분 동안 교반하였다. 메탄올(15 ㎖) 및 아세톤(30 ㎖)의 혼합물을 첨가하였고, 혼합물을 10℃까지 가열하였으며, 60 분 동안 교반시켰다. 에틸 아세테이트(300 ㎖)를 30 분에 걸쳐 첨가하였고, 생성된 현탁액을 10℃에서 20 시간 동안 교반하였다. 고체 생성물을 여과하여 수집하였고, 에틸 아세테이트(100 ㎖)으로 세척하였으며, 15 분 동안 필터 상에서 건조시켰다. 25℃에서 2 시간 동안 진공 캐비넷에서 추가 건조시켜 황백색의 고체로서 6.68 g(90% 수율)을 얻었다.

실시예 5: 실시예 2-4의 크로마토그램의 비교

실시예 2-4의 크루드(crude) 생성물의 HPLC 크로마토그램을 HPLC(역상 크로마토그래피)로 분석하였다. 표 1은 3 가지 상이한 공정(도 4a-4c 참고)을 비교한 HPLC 크로마토그램의 결과를 보여준다. 실시예 2는 단계적 공정이고, 실시예 3 및 4는 커플링 첨가제로서 각각 HOBt 및 옥시마를 사용한 원-포트 과정이다. 옥시마는 크루드 생성물의 크로마토그램에 존재하지 않는다. 반응 혼합물에서, 옥시마가 8.5 분에 나타난다.

공정 3 및 4는 보다 적은 용매가 사용되기 때문에 보다 효율적이고, 활성화된 산의 분리를 회피하기 때문에 반응 시간이 감소된다. 중량으로 나타낸 수율은, 선행 기술 방법에서 단지 82%인 것과 비교하였을 때 실시예 3 및 4에서는 각각 98% 및 95%로, 원-포트 과정에서 상당히 우수하다. 실시예에서 나타난 것처럼, 본 발명에 따른 원-포트 방법은 보다 우수한 수율 및 도 4a-c에 나타낸 바와 같이 대략 동일한 순도의 크루드 생성물을 지니면서, 단계적 선행 기술 방법만큼 순수한 미카펀진의 생산을 허용한다.

Claims

a) 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 염, 및 하이드록시벤조트리아졸 및 에틸-2-시아노-2-(하이드록시이미노)아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 커플링 첨가제를 용매 중에서 혼합하는 단계;
b) 단계 a)에서 수득한 혼합물에 커플링 시료를 첨가하는 단계로서, 상기 커플링 시료가 카르보디이미드인 단계;
c) 단계 b)에서 수득한 혼합물에 염기, 및 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 염을 첨가하는 단계
를 포함하는 미카펀진(Micafungin) 또는 이의 염의 원-포트(one-pot) 제조 방법:

,

.
제 1항에 있어서,
커플링 첨가제가 1-하이드록시-벤조트리아졸인 방법.
제 1항에 있어서,
커플링 첨가제가 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸인 방법.
제 1항에 있어서,
커플링 첨가제가 에틸-2-시아노(하이드록시이미노)아세테이트인 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
커플링 시료가 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드(EDC) 또는 이의 염인 방법.
제 5항에 있어서,
커플링 시료가 EDC의 하이드로클로라이드 염인 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 a)에서 사용되는 용매가 DMF인 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 c)에서 사용되는 염기가 DIPEA인 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
염기가 화학식 (II)의 화합물이 첨가되기 전에 단계 b)에서 수득한 혼합물에 첨가되는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
염기가 화학식 (II)의 화합물이 첨가된 후에 단계 b)에서 수득한 혼합물에 첨가되는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
단계 c)에서 수득한 미카펀진 염이 침전되는 방법.
제 11항에 있어서,
단계 c)에서 수득한 미카펀진 염이 안티솔벤트(antisolvent)를 사용하여 침전되는 방법.
제 12항에 있어서,
안티솔벤트가 에틸 아세테이트인 방법.
제 11항에 있어서,
단계 c)에서 수득한 미카펀진 염이 메탄올 및 아세톤의 첨가에 의한 반응의 퀀칭(quenching) 후에 침전되는 방법.