KR101911380B1 - 아스파라기닐-β-히드록실라제 발현 종양을 위한 수지상 세포 백신 - Google Patents

아스파라기닐-β-히드록실라제 발현 종양을 위한 수지상 세포 백신 Download PDF

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Abstract

포유동물 대상에서 AAH 발현 종양의 치료를 위한 AAH 로딩된 성숙 수지상 세포를 포함하는 백신. 감작된 수지상 세포를 제조하는 방법은 단리된 수지상 세포를 AAH와 같은 항원과 접촉시켜 수행된다. 상기 항원 접촉 단계 후, 수지상 세포는 GM-CSF 및 IFN-γ와 같은 사이토카인의 조합과 접촉된다.

Description

아스파라기닐-β-히드록실라제 발현 종양을 위한 수지상 세포 백신{DENDRITIC CELL VACCINES FOR ASPARAGINYL-β-HYDROXYLASE EXPRESSING TUMORS}
관련 출원
본 출원은 2009년 7월 24일자 출원된 미국 출원 제61/228,429호, 2009년 8월 4일자 출원된 미국 출원 제61/231,127호, 2009년 9월 2일자에 출원된 미국 출원 제61/239,288호 및 2009년 9월 9일자에 출원된 미국 출원 제61/240,745호의 이익을 청구하고 있으며, 이들의 내용은 전체로서 본원에서 참고적으로 인용된다.
간세포암(hepatocellular carcinoma)과 간내담도암(cholangiocellular carcinoma)을 포함한 간암은 전세계적으로 가장 흔한 암 중 하나이다. 미국에서, 간암은 남성의 경우 암 사망의 다섯번째로 흔한 요인이고 여성의 경우 아홉번째로 흔한 요인이다. 간암의 진단과 국지적 제어에 있어 눈부신 발전에도 불구하고, 미국에서 사망률은 꾸준히 증가하고 있다. 사망률이 증가하는 원인 중 하나는, 유방암과 대장암을 포함한 기타 암과 달리, 간암이 화학요법과 같은 전신(systemic) 치료에 저항성이 있다는 데 있다. 따라서, 일단 전신 질환으로 발전하면 간암에 대한 효과적인 치료법은 없다.
본 발명은 암이 있는 것으로 진단된 환자의 치료를 위한 화학요법에 대한 대안의 다년간의 문제에 대한 해결책을 제공한다. 대상(subject)에서 아스파틸 (아스파라기닐)-β-히드록실라제(AAH 또는 ASPH) 발현 종양의 성장을 감소시키는 방법은 대상에 단리된 성숙 AAH 로딩된 수지상 세포 또는 세포군(cell population)을 투여하는 단계를 수반한다. AAH 발현 종양의 성장은 이러한 수지상 세포 백신의 투여 후에 감소된다. 예를 들어, 종양 성장 및 종양 부담(tumor burden)이 10%, 20%, 50%, 75%, 2배, 5배, 10배 또는 그 이상 감소된다. 본 방법은 포유동물 대상, 예컨대 인간 환자로부터 AAH 발현 종양을 감소시키고 제거하는 데 사용된다. 본 조성물 및 방법은 또한 반려 동물 및 가축, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 말, 소 또는 돼지 대상에 사용하기 적합하다.
AAH 발현 종양은 대부분의 종양 형태, 예컨대 위장 조직암(예: 식도암, 위암, 대장암), 췌장암, 간암 (예: 간내담도암, 간세포암), 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 담낭암, 신장암, 방광암, 및 뇌암 (예: 교모세포종) 뿐만 아니라 후술된 다수의 다른 종양을 포함한다. AAH 발현 종양은 정상 조직에 비해 증가된 수준의 AAH를 발현하는 일차 종양뿐만 아니라 이러한 AAH 과발현 일차 종양에서 전이된 종양을 포함한다.
백신접종법에 사용된 수지상 세포는 바람직하게는 대상에 투여되기 이전에 GM-CSF 및 IFN-γ를 포함하는 사이토카인의 조합으로 생체 외(ex vivo) 활성화된다. 후자의 단계는 개선된 항종양 활성을 가진 수지상 세포군을 얻는다.
감작된(primed) 수지상 세포를 제조하는 개선된 방법은, 단리된 수지상 세포를 항원(예: AAH) 또는 종양 항원의 조합(예: AAH 및 α-페토프로테인(AFP))과 접촉시킨 다음 성숙되고 활성화된 항원 제시 세포군을 얻기 위해 상기 세포를 처리함으로써 수행된다. 상기 항원 접촉 단계 이후에, 수지상 세포는 사이토카인의 조합과 접촉된다. 예를 들어, 이러한 조합은 GM-CSF 및 IFN-γ를 포함한다. 다른 예에서, 조합은 IL-4를 추가로 포함한다. 임의적으로, 조합은 CD40L를 포함한다. 수지상 세포는 사이토카인의 조합과 10 시간 이상(예: 12, 24, 36, 40, 48 시간 또는 그 이상) 접촉된다. 항원은 가용성 형태이거나 고체 지지체에 결합된다. 예를 들어, 고체 지지체는 폴리스티렌 비드, 예컨대 생분해성 비드 또는 입자를 포함한다. 수지상 세포는 공지의 방법, 예컨대 백혈구성분채집술(leukapheresis) 또는 세포성분채집술(cytopheresis)에 의해 대상으로부터 얻어진다.
세포가 얻어지는 대상은 암을 앓고 있거나 암 발생 위험에 있다. 예를 들어, 종양, 예컨대 AAH 발현 종양을 가진 것으로 진단된 환자이다. AAH 함유 종양과 같은 암 발생 위험에 있는 환자는 그러한 암이 있는 것으로 확인된 개인들의 가족력이 있는 환자를 포함한다.
상술한 바와 같이 제조된 감작된 수지상 세포를 포함하는 백신 조성물이 또한 본 발명에 속한다. 백신은 종양 성장을 억제하고, 종양 성장을 예방하며, 전이를 억제하거나 감소시키는 데 유용하다. 포유동물에서 종양 성장을 억제하는 방법은 AAH 함유 종양을 앓고 있는 대상을 확인하고 상기 대상에 상술한 방법에 따라 감작된 자가 수지상 세포를 투여함으로써 수행된다. 포유동물에서 종양 발생을 예방하는 방법은 AAH 함유 종양의 발생 위험에 있는 대상(예: 암의 가족력이 있는 대상)을 확인하는 단계 및 상기 대상에 항원 감작되고 활성화된 자가 수지상 세포를 투여하는 단계를 포함한다. AAH 함유 종양의 전이를 예방하는 방법은 AAH 함유 종양을 앓고 있는 대상을 확인하고 상기 대상에 상술한 바와 같은 자가 수지상 세포를 투여함으로써 수행된다.
본 발명의 폴리펩티드 및 기타 조성물은 정제된다. 예를 들어, 실질적으로 순수한 AAH 폴리펩티드 변이체는 바람직하게는 상기 폴리펩티드를 암호화하는 재조합 핵산을 발현시키거나 상기 단백질을 화학적으로 합성함으로써 얻어진다. 폴리펩티드 또는 단백질은 자연 상태에서 동반되는 오염물(단백질 및 기타 천연 유기 분자)로부터 분리될 경우 실질적으로 순수하다. 일반적으로, 폴리펩티드는 제제(preparation)에서 60 중량% 이상의 단백질을 구성하는 경우 실질적으로 순수하다. 바람직하게는, 제제에서 단백질은 75 중량% 이상, 좀더 바람직하게는 90 중량% 이상, 가장 바람직하게는 99 중량% 이상의 AAH이다. 순도는 임의의 적절한 방법, 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 HPLC 분석에 의해 측정된다. 따라서, 실질적으로 순수한 폴리펩티드는 진핵생물에서 유래된 재조합 폴리펩티드를 포함하지만 대장균 또는 또다른 원핵생물, 또는 폴리펩티드가 본래 유래하는 진핵생물 이외의 진핵생물에서 생성된다.
본 방법에 사용되는 수지상 세포 또는 다른 세포, 예를 들어 면역 세포(예: 대식세포, B 세포, T 세포)는 정제되거나 단리된다. 세포의 경우, 용어 "단리된(isolated)"은 세포가 자연상태로 존재하는 다른 세포 유형 또는 세포 물질이 실질적으로 존재하지 않음을 의미한다. 예를 들어, 특정 조직 유형 또는 표현형의 세포 샘플은 세포군의 60% 이상일 때 "실질적으로 순수"하다. 바람직하게는, 제제는 세포군의 75% 이상, 좀더 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 99% 이상 또는 100%이다. 순도는 임의의 적절한 표준 방법, 예를 들어 형광-활성화된 세포 분류(FACS)에 의해 측정된다.
항원 감작된 DC를 제조하는 방법은 기존의 방법에 비해 몇가지 이점을 가진다. 세포는 항원 로딩될 뿐만 아니라 후속의 사이토카인 배양이 개선된 항종양 및 항전이 활성을 가진 보다 우수하게 활성화된 항원 감작된 항원 제시 세포를 만들어낸다.
본 발명 그 자체와 함께 본 발명의 이러한 및 기타 효과는 하기의 도면, 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 충분히 이해될 것이다. 본원에서 인용된 모든 참고문헌은 참고적으로 인용된다.
도 1은 단리된 DC에 의한 IL-12 생성을 보여주는 막대 그래프이다.
도 2는 단리된 DC상에서 다양한 표면 DC 마커의 발현을 보여주는 일련의 선 그래프이다.
도 3은 표면 DC 마커에 대한 평균 형광을 보여주는 막대 그래프이다.
도 4는 사이토카인의 존재하에 성장한 CD8+ DC의 증가된 군을 보여주는 일련의 유세포 그래프 및 막대 그래프이다.
도 5는 IFN-γ 분비를 보여주는 막대 그래프이다.
도 6은 IL-4 분비를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 세포독성 분석 결과를 보여주는 선 그래프이다.
도 8은 세포에 의해 발현된 AAH의 모식도이다.
도 9는 성숙 항원 로딩된 DC를 생성하는 방법에 대한 모식도이다.
도 10은 AAH 로딩된 DC를 이용한 면역화 스케줄에 대한 흐름도이다.
도 11은 마우스에서 종양 성장에 대한 AAH 백신접종의 치료효과를 결정하는 프로토콜을 보여주는 모식도이다.
도 12는 마우스에서 종양 성장에 대한 AAH 백신접종의 치료 효과를 보여주는 선 그래프이다.
AAH는 단백질이고, 이의 발현은 다수의 암 유형과 관련된다(예: USPN 6,815,415; USPN 6,812,206; USPN 6,797,696; USPN 6,783,758; USPN 6,835,370; 및 USPN 7,094,556 참조). HAAH의 과발현은 다수의 암, 폐암(예: 선암(adenocarcinoma), 세기관지폐포종양(bronchioalveolar carcinoma), 및 기타 비소세포폐암, 예컨대 편평세포암종 아형(Luu et al., 2009, Hum. Pathol. 40:639-644)), 간암(예: 간세포암, 간내담도암, 및 담즙 내피세포암(Wang et al., 2010, Hepatology 52:164-173)), 위장 조직암(예: 대장암, 위암, 식도암), 췌장암, 전립선암, 난소암, 수담관(bile duct)암, 유방암, 신장암, 방광암, 및 뇌암(예: 교모세포종 및 신경모세포종)에서 면역조직화학적 염색(IHC)에 의해 검출된다. 종양 조직 샘플과 세포주에 대한 또다른 개론은 하기 부가적인 암: 후두암, 자궁경부암, 난관암, 간암(예, 담관암), 신장암, 유방암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 췌장암, 흉선암, 전립선암, 방광암, 식도암, 위암, 담낭암, 대장암, 및 직장암(Song et al., 2010, Chinese J. of Cell. and Mol. Immunol. 26: 141-144)에서 (정상 조직과 비교하여) AAH 발현을 뒷받침하고 있다. HAAH는 암에 매우 특이적이며; 시험된 종양 시편(n>1000)의 >99%에서 면역조직화학에 의해 검출되고 주변의 비병리 조직 또는 정상 개인의 조직 샘플에는 존재하지 않는다.
AAH 감작된 세포를 이용한 면역요법은 이러한 세포 표면상에서 AAH를 발현하는 종양을 지닌 환자에게 투여된다. 이러한 종양은 간암(예: 간세포암 및 간내담도암)과 유방 및 대장의 선암을 포함한다. 이러한 치료 방법은 암의 치료뿐만 아니라 예방에 효과적이다.
본 발명 이전에는, 간암 질환의 진단 및 국지적인 제어에 있어 진보에도 불구하고, 간암의 효과적인 전신 치료법은 없었다. 면역요법은 특이성으로 인해 전신 및 국부 간암을 치료하는 데 사용된다.
AAH를 이용한 수지상 세포 백신은 면역적격 마우스(immunocompetent mice)에서 익히 확립된 간암세포종을 치유하는 것으로 확인되었다. AAH 수지상 세포 백신은 AAH 발현 종양의 성장을 감소시켜 인간에게서 종양부담을 줄이고 종양을 제거한다.
면역요법
악성 종양의 면역요법은 종양 세포에 대한 특이 반응 측면에서 매력적이다. 면역요법에 대한 이론적 근거는, 암세포가 잠재성 항원이 풍부하고, 항원 제시 세포에 의해 헬퍼 및 세포독성 T 세포에 제시되면 면역성이 된다는 것이다. 간암에 대한 면역요법은, 전신성이든 아니든, 실용적인 임상적 접근법인데 그 이유는 간암 세포가 정상 조직에서는 발현되지 않거나 아주 약하게 발현되는 몇몇 종양관련 단백질을 발현시키기 때문이다. 예를 들어, 성인 조직에서 발현되지 않는 AFP는 간세포암(HCC)에서 대규모로 발현된다. 몇몇 연구는 AFP-특이적 면역 반응이 마우스 뿐만 아니라 인간에서 유도될 수 있음을 보여준다. 그러나, AFP를 타겟팅하는 HCC 면역요법의 임상적 시도는 심지어 부분적인 종양 반응도 보여주지 못했다. 몇몇 가능한 원인은, AFP가 암 진행에 관련되지 않기 때문에 APP-타겟팅 면역요법 동안 AFP를 발현하지 않는 암세포가 우세하기 때문이다. HCC 세포가 AFP-반응성 T 세포에 의해 인식되기 위해, AFP는 주조직 적합성 복합체 (MHC) 클래스 I 분자를 가진 세포 표면상에 제시되어야 하는데, 그 이유는 AFP가 상기 세포 표면상에 분포하지 않기 때문이다. 그러나, MHC 클래스 I 분자는 다수의 암세포에서 종종 하향조절되기 때문에, AFP는 T 세포에 의해 적절하게 인식될 수 없다. 간암 면역요법의 문제를 극복하기 위해, 세포계 요법을 위한 감작된 세포에 사용될 간암과 관련된 또다른 항원을 확인하기 위한 연구들이 착수되었다. AFP를 항원으로서 사용한 결과, AAH에 대한 항종양 결과는 놀라웠다.
ASPH로도 알려진 AAH는 간세포암 및 간내담도암에서 강하게 발현되지만, 이러한 조직 유형의 정상 세포에서는 발현되지 않는다. 따라서 AAH는 종양-관련 단백질이다. AAH는 독특한 성질로 인해 간암의 면역요법에 유용하다. 먼저, AAH는 암세포에 운동성을 부여하고, 이는 암 전이와 관련되며; 이에 따라 AAH 발현 세포를 타겟팅하는 요법은 일차 종양뿐만 아니라 전이성 병변을 억제하는 데 효과적이다. 둘째, AAH는 막 단백질이기 때문에, 이의 대부분이 세포외 공간에 노출되어 있어, 클래스 I 분자가 하향 조절되더라도 면역 세포가 상기 단백질로의 접근이 보다 쉬워진다. 셋째, AAH 이외에, 간내담도암에 특이적인 항원성 단백질은 알려져 있지 않다. 따라서, AAH는 간암에 대한 면역요법의 타겟 분자로서 유례없이 적격이다.
면역요법은 관련 단백질이 로딩된 수지상 세포(DC)의 주사(주입)를 수반한다. DC는 T 세포 매개 면역을 유도하고 제어하기 위해 항원을 포획하고, 가공한 다음 T 세포에 제시하는 특수 세포이다. DC는 실험실 동물뿐만 아니라 종양 함유 환자를 면역화하기 위해 널리 사용된다. 본원에 기재된 방법은 AAH에 대한 면역 유도를 위한 DC계 면역화를 포함한다. 본 방법은 해당 단백질이 로딩된 면역원성 마우스 DC를 생성하는 전술된 방법(Gehring et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332:18-30)을 두 가지 이상의 방식으로 개선한다. 하나는, DC를 자극하기 위해, 생체내(in vivo) 용도에 부적절할 수 있는 강한 발열물질(pyrogen)인 리포폴리사카라이드(LPS)를 미리 사용했다는 점이다. 둘째는, DC에 의한 IL-12 분비 및 다양한 표면 DC 마커의 발현에 의해 판단했을 때 DC 자극이 상대적으로 약했다는 점이다. 이에 따라 면역원성 DC의 생성방법을 개선하였다.
수지상 세포 백신
HCC 면역요법에 대한 가장 전도유망한 접근법은 DC를 사용하는 것인데, 이는 DC가 T 세포 매개 종양 면역 유도에 강한 능력을 보유하고 있기 때문이다. DC는 조혈모 세포에서 유래하고, 항원을 포획하여 가공하도록 특화되어, 단백질을 MHC 분자상에 제시하여 T 세포에 의해 인식되는 펩티드로 전환시킨다. DC는 T-세포 매개 면역을 강하게 유도 및 제어한다.
DC계 면역요법은, 종양에 잠재성 항원이 풍부하고 이러한 종양이 DC에 의해 제시되면 면역원성을 갖는다는 사실에 기초한다. DC는 대상(subject)으로부터, 예를 들어 세포성분채집술에 의해 얻어진다. 생체 외(ex vivo) 세포에 종양 항원(예: 종양 세포 용해물(lysate); 사멸(apoptotic) 또는 괴사(necrotic) 종양 세포; 재조합, 합성, 또는 정제된 종양 항원 펩티드 또는 단백질; 또는 핵산, 예컨대 종양 항원을 암호화하는 RNA)을 로딩(즉, 접촉)하고, 상기 세포를 성숙을 위해 자극한 다음, 환자에 주입하여 강한 T-세포 면역을 유도한다.
AAH 종양 항원
AAH는 C-말단 영역에서 촉매 도메인을 가진 타입 II 막 단백질이다. 상기 단백질의 대부분은 세포막의 외부에 위치하여, 면역 세포가 상기 단백질로의 접근을 가능하게 한다. AAH 단백질은 HCC, 간내담도암, 및 유방 또는 대장 기원의 선암에서 강하게 발현되고, 정상 조직에서는 거의 검출되지 않거나 전혀 검출되지 않는다. 이에, AAH는 HCC 및 기타 AAH 함유 종양의 DC계 면역요법을 위한 이상적인 타겟 분자이다.
종양 세포에서 과발현된 AAH는 세포 이동성을 증가시켜, 종양 세포에 악성 표현형을 부여한다. HCC에 대한 임상병리학적 연구에 따르면 AAH 과발현이 조직학 등급 및 간내 전이와 관련됨을 보여준다. 따라서, AAH 발현 종양세포군의 타겟팅은 AAH 함유 종양의 발생 및 진행을 억제한다.
표 1: 인간 AAH 의 아미노산 서열
MAQRKNAKSS GNSSSSGSGS GSTSAGSSSP GARRETKHGG HKNGRKGGLS GTSFFTWFMV
61 IALLGVWTSV AVVWFDLVDY EEVLGKLGIY DADGDGDFDV DDAKVLLGLK ERSTSEPAVP
121 PEEAEPHTEP EEQVPVEAEP QNIEDEAKEQ IQSLLHEMVH AEHVEGEDLQ QEDGPTGEPQ
181 QEDDEFLMAT DVDDRFETLE PEVSHEETEH SYHVEETVSQ DCNQDMEEMM SEQENPDSSE
241 PVVEDERLHH DTDDVTYQVY EEQAVYEPLE NEGIEITEVT APPEDNPVED SQVIVEEVSI
301 FPVEEQQEVP PETNRKTDDP EQKAKVKKKK PKLLNKFDKT IKAELDAAEK LRKRGKIEEA
361 VNAFKELVRK YPQSPRARYG KAQCEDDLAE KRRSNEVLRG AIETYQEVAS LPDVPADLLK
421 LSLKRRSDRQ QFLGHMRGSL LTLQRLVQLF PNDTSLKNDL GVGYLLIGDN DNAKKVYEEV
481 LSVTPNDGFA KVHYGFILKA QNKIAESIPY LKEGIESGDP GTDDGRFYFH LGDAMQRVGN
541 KEAYKWYELG HKRGHFASVW QRSLYNVNGL KAQPWWTPKE TGYTELVKSL ERNWKLIRDE
601 GLAVMDKAKG LFLPEDENLR EKGDWSQFTL WQQGRRNENA CKGAPKTCTL LEKFPETTGC
661 RRGQIKYSIM HPGTHVWPHT GPTNCRLRMH LGLVIPKEGC KIRCANETRT WEEGKVLIFD
721 DSFEHEVWQD ASSFRLIFIV DVWHPELTPQ QRRSLPAI (서열 번호 1; GENBANK Accession No. S83325; His 모티프에 밑줄그어져 있고; 촉매 도메인내의 보존 서열은 볼드체로 표시되어 있으며; 촉매 도메인은 서열번호 1의 잔기 650-700을 포함한다).
표 2: 인간 AAH cDNA 서열
cggaccgtgc aatggcccag cgtaagaatg ccaagagcag cggcaacagc agcagcagcg 61
gctccggcag cggtagcacg agtgcgggca gcagcagccc cggggcccgg agagagacaa 121
agcatggagg acacaagaat gggaggaaag gcggactctc gggaacttca ttcttcacgt 181
ggtttatggt gattgcattg ctgggcgtct ggacatctgt agctgtcgtt tggtttgatc 241
ttgttgacta tgaggaagtt ctaggaaaac taggaatcta tgatgctgat ggtgatggag 301
attttgatgt ggatgatgcc aaagttttat taggacttaa agagagatct acttcagagc 361
cagcagtccc gccagaagag gctgagccac acactgagcc cgaggagcag gttcctgtgg 421
aggcagaacc ccagaatatc gaagatgaag caaaagaaca aattcagtcc cttctccatg 481
aaatggtaca cgcagaacat gttgagggag aagacttgca acaagaagat ggacccacag 541
gagaaccaca acaagaggat gatgagtttc ttatggcgac tgatgtagat gatagatttg 601
agaccctgga acctgaagta tctcatgaag aaaccgagca tagttaccac gtggaagaga 661
cagtttcaca agactgtaat caggatatgg aagagatgat gtctgagcag gaaaatccag 721
attccagtga accagtagta gaagatgaaa gattgcacca tgatacagat gatgtaacat 781
accaagtcta tgaggaacaa gcagtatatg aacctctaga aaatgaaggg atagaaatca 841
cagaagtaac tgctccccct gaggataatc ctgtagaaga ttcacaggta attgtagaag 901
aagtaagcat ttttcctgtg gaagaacagc aggaagtacc accagaaaca aatagaaaaa 961
cagatgatcc agaacaaaaa gcaaaagtta agaaaaagaa gcctaaactt ttaaataaat 1021
ttgataagac tattaaagct gaacttgatg ctgcagaaaa actccgtaaa aggggaaaaa 1081
ttgaggaagc agtgaatgca tttaaagaac tagtacgcaa ataccctcag agtccacgag 1141
caagatatgg gaaggcgcag tgtgaggatg atttggctga gaagaggaga agtaatgagg 1201
tgctacgtgg agccatcgag acctaccaag aggtggccag cctacctgat gtccctgcag 1261
acctgctgaa gctgagtttg aagcgtcgct cagacaggca acaatttcta ggtcatatga 1321
gaggttccct gcttaccctg cagagattag ttcaactatt tcccaatgat acttccttaa 1381
aaaatgacct tggcgtggga tacctcttga taggagataa tgacaatgca aagaaagttt 1441
atgaagaggt gctgagtgtg acacctaatg atggctttgc taaagtccat tatggcttca 1501
tcctgaaggc acagaacaaa attgctgaga gcatcccata tttaaaggaa ggaatagaat 1561
ccggagatcc tggcactgat gatgggagat tttatttcca cctgggggat gccatgcaga 1621
gggttgggaa caaagaggca tataagtggt atgagcttgg gcacaagaga ggacactttg 1681
catctgtctg gcaacgctca ctctacaatg tgaatggact gaaagcacag ccttggtgga 1741
ccccaaaaga aacgggctac acagagttag taaagtcttt agaaagaaac tggaagttaa 1801
tccgagatga aggccttgca gtgatggata aagccaaagg tctcttcctg cctgaggatg 1861
aaaacctgag ggaaaaaggg gactggagcc agttcacgct gtggcagcaa ggaagaagaa 1921
atgaaaatgc ctgcaaagga gctcctaaaa cctgtacctt actagaaaag ttccccgaga 1981
caacaggatg cagaagagga cagatcaaat attccatcat gcaccccggg actcacgtgt 2041
ggccgcacac agggcccaca aactgcaggc tccgaatgca cctgggcttg gtgattccca 2101
aggaaggctg caagattcga tgtgccaacg agaccaggac ctgggaggaa ggcaaggtgc 2161
tcatctttga tgactccttt gagcacgagg tatggcagga tgcctcatct ttccggctga 2221
tattcatcgt ggatgtgtgg catccggaac tgacaccaca gcagagacgc agccttccag 2281
caatttagca tgaattcatg caagcttggg aaactctgga gaga
(서열번호 2; GENBANK Accession No. S83325; 개시 메티오닌을 암호화하는 코돈에는 밑줄이 그어져 있다).
임상적 사용
DC와 같은 항원 제시 세포 (APC)는 백혈구성분채집술을 이용하여 대상, 예를 들면 암을 앓고 있거나 암 발생 위험에 놓인 인간 환자로부터 얻어진다. 이러한 과정은 일반적으로 페레시스(apheresis) 센터에서 수행된다 (1일). 수지상 세포는 공지의 방법을 이용하여 정제되며 항원, 예컨대 AAH 또는 AAH 및 AFP와 접촉한다. 항원 접촉 이후에, 세포를 사이토카인의 혼합물과 함께 배양한다 (2-3일). 이후 항원 감작되고 활성화된 DC를 환자에 투여한다 (3-4일). 예시적인 치료 과정은 4주에 걸쳐 DC의 3회 투여를 포함한다.
하기의 재료 및 방법을 사용하여 본원에 기재된 데이터를 얻었다.
동물
7-8주 된 늙은 암컷 BALB/c (H-2d) 마우스를 Harlan Sprague Dawley 사로부터 구입한 다음 특정 병원균이 없는 조건하에 유지하였다.
자기 마이크로비드의 제조
면역자기 비드 (1.3 ㎛; Calbiochem)를 pH 8.5에서 50 mM 보레이트 버퍼로 3회 세척하고 50 mM 보레이트 버퍼, pH 9.0에서 0.1 mg/ml AAH 또는 GFP 단백질을 이용하여 재현탁하였다. 이후, 현탁액을 실온에서 일정한 교반하에 밤새 배양하였다. 비드를 펠릿화하고, PBS로 세척한 다음, 30 mg 고체 함량/ml 농도의 PBS에서 재현탁하였다.
DC 단리
공지의 방법(예, Gehring et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332:18-30)을 사용하여 DC 단리를 수행하였다. 백혈구성분채집술에 의해 세포를 임의적으로 얻는다. 10 ㎍의 pUMVC3-hFLex, Fms-형 티로신 키나제 수용체-3 리간드(FLT3L)를 암호화하는 발현 플라스미드를 0 및 6일째에 마우스 꼬리 정맥에 주사하였다. NH4C1 적혈구 세포용해 버퍼를 이용하여 FLT3L-주입된 마우스로부터 비장세포를 준비하고, 5 x 107 세포를 10 ㎕의 자기 마이크로비드가 있는 무혈청 DMEM에서 4-6시간 동안 배양하였다. 세포를 모은 다음 MACS MS 컬럼 (Miltenyi)을 이용하여 자기장을 통과시켜 자기 비드를 섭취하는 세포를 농축시켰다. 이후, 세포를 림프구 M (Cedarlane)을 이용하여 밀도-구배 원심분리하여 유리 비드 및 죽은 세포를 제거하였다. 살아있는 세포를 모은 다음, 행크스 완충 식염액(Hanks' buffered salt solution, HBSS)으로 2회 세척하고 후속 실험에 사용하였다. 단리된 세포의 생존율은 > 90%였으며, 단리된 세포에서 CD11 c-양성 개체군의 퍼센티지는 70-80%였다.
세포 배양
DC를 6-웰 초-저 부착 플레이트(Corning)상에서 10% 마우스 혈청 (Equitech Bio), 2 mM L-글루타민, 50 uM의 2-머캅토에탄올, 100 U/ml의 페니실린, 100 ㎍/m1의 스트렙토마이신, 20 ng/ml의 GMCSF, 100 ng/ml의 IL-4, 20 ng/ml의 IFN-γ 및 1 ㎍/ml의 CD40L (모든 사이토카인을 Peprotech로부터 구입하였음)이 보충된 HEPES-완충 RPMI1640에서 40시간 동안 배양하였다. 사이토카인 방출을 위해, 비장세포를 2 mM의 L-글루타민, 50 nM의 2-머캅토에탄올, 100 U/ml의 페니실린, 및 100 ㎍/m1의 스트렙토마이신이 보충된 무혈청 X-VIVO 15 (Lonza)에서 성장시켰다. 세포독성 분석을 위해, 비장세포를 10% 태소혈청 (Atlantic Bio), 2 mM의 L-글루타민, 50 uM의 2-머캅토에탄올, 100 U/ml의 페니실린, 100 ㎍/ml의 스트렙토마이신, 1 x 비필수 아미노산(Lonza), 0.5 x 아미노산 용액 (Invitrogen), 및 1 mM 피루브산나트륨이 보충된 HEPES-완충 RPMI1640으로 구성된 완전 배지에서 성장시켰다. SP2/0 세포를 20% 태소혈청, 2 mM의 L-글루타민, 100 U/ml의 페니실린, 및 100 ㎍/ml의 스트렙토마이신이 보충된 Dulbecco 최소 필수 배지에서 배양하였다.
효소결합 면역흡수 분석 ( ELISA )
DC 또는 비장세포를 AAH 단백질의 존재 또는 부재하에 무혈청 배지에서 48시간 동안 성장시켰다. 이후, 배양 상층액을 모아 원심분리한 다음 ELISA 분석을 수행하였다. 제조사의 지시에 따라 ELISA Ready-SET-Go! 키트(eBioscience)를 이용하여 IL-12, p70, IFN-γ 및 IL-4에 대한 ELISA를 수행하였다.
유세포 분석
앞서 기재한 바와 같이 (Gehring, et al., 2008) 세포 표면 마커의 발현을 유세포 분석에 의해 분석하였다. 3-6 x 105 세포를 염색을 위해 사용하였다. 세포를 염색 버퍼 (5% FBS 함유 HBSS)를 세척하고, 2.5 ㎍/ml 마우스 BD Fc 블록 (BD Biosciences)과 함께 4℃에서 5분간 배양한 다음, 염색 항체와 함께 4℃에서 30분간 추가로 배양하였다. 사용된 항체는 항-CD11c (HL3; BD Biosciences), 항-CD40 (3/23; BD Biosciences), 항-CD54 (3E2; BD Biosciences), 항-CD80 (16-10A1; BD Biosciences), 항-CD86 (GLI; BD Biosciences), 항-I-Ad (AMS-32.1; BD Biosciences), 및 항-CD8a (53-6.7; eBioscience) 였으며, 이들 모두를 형광색소(fluorochrome)와 결합시켰다. 햄스터, 래트, 및 마우스 면역글로불린 G 동형 매칭 대조군(isotype-matched control)을 대조 염색을 위해 사용하였다. 2회 세척 후, 세포를 염색 버퍼에서 재현탁한 다음 FACSCalibur (BD Biosciences)를 이용하여 유세포 분석을 수행하였다. 세포를 7-아미노-액티노마이신 D (eBioscience)로 염색함으로써 분석시 죽은 세포를 제거하였다. CellQuest 소프트웨어 (BD Biosciences)에 이은 FlowJo 소프트웨어 (Tree Star)로 데이터를 처리하였다.
백신접종
40시간 동안 사이토카인과 함께 배양한 후, 2.5 x 105 세포를 0 및 14일째에 오른쪽 및 왼쪽 옆구리에 피하 주사하였다 (마우스 당 5 x 105 세포). 28일 째, 면역화된 마우스를 사이토카인 방출 및 세포독성 분석을 포함한 추가 실험에 사용하였다.
세포독성 분석
면역화된 마우스로부터 비장세포를 준비하고, 5 x 107 비장세포를 0.5 ㎍/ml AAH 단백질이 있는 완전 배지에서 2일간 배양한 다음, 10 ng/ml의 IL-2 첨가 후 2일간 추가 배양하였다. 2 x 104 타겟 SP2/0 세포를 무혈청 배지에서 6 - 60 x 104 작동(effector) 비장세포와 혼합하고, 200 x g에서 5분간 원심분리한 다음 CO2 배양기에서 4시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 모은 다음, 상층액에서 방출된 락테이트 데히드로게나제 활성을 제조사의 지시에 따라 LDH 세포독성 검출 키트(Roche)를 사용하여 측정하였다. % 타겟 세포 용해를 하기 식을 이용하여 계산하였다:
((A작동 + 타겟 - A작동-A타겟) / (A타겟 + 트리톤 X-A타겟)) x 100
여기서 A는 490 nm에서의 흡광도를 나타낸다.
시험관내에서 다양한 사이토카인에 의해 자극된 단리된 DC 에 의한 IL -12 분비
앞서 사용된 프로토콜은 DC의 생체내 팽창, LPS 및 항-CD40 항체를 포함한 DC 항원 및 자극제가 코팅된 자기 마이크로비드의 섭취, 및 자기 컬럼을 통과함으로써 DC의 단리를 포함한다. 비드상에 코팅된 자극제를 이용하여 DC를 자극하는 대신에, 개선된 방법은 단리된 DC를 다양한 사이토카인의 존재하에 2일간 성장시킴으로써 자극하는 단계를 수반하는 데, 자극제는 세포 표면상의 상응하는 수용체와 상호작용해야 하지만 DC에 의해 섭취된 비드상의 자극제는 이와 상호작용할 수 없기 때문이다. IL-4, IFN-γ 및 CD40L를 포함한, DC의 성숙을 자극하고 촉진하는 몇몇 사이토카인이 존재한다. 따라서, DC 성숙에 대한 이들 사이토코인의 조합 효과를 조사하였다. DC의 팽창, 섭취 및 단리를 수행하였다. 단리된 세포를 GM-CSF 및/또는 IL-4, 및/또는 IFN-γ 및/또는 CD40L의 존재하에 40 시간 동안 배양하였다. GM-CSF는 DC 생존에 필수적이기 때문에 항상 첨가되었다. 성숙, 그러나 미성숙되지 않은, DC는 헬퍼 및 세포독성 T 세포를 분극화하는 데 필수적인 IL-12를 활발하게 생성한다. 따라서, IL-12 수준을 DC 자극의 지표로 사용하였다. 배양 상층액을 모은 다음 IL-12 p70의 농도를 ELISA로 측정하였다. 결과에 따르면, IL-12 p70은 모든 사이토카인이 DC 배양액에 존재할 때 가장 높았다 (도 1). 사이토카인 각각은 단독으로 혹은 조합하여 자극에 사용된다. 바람직하게는, DC 자극을 위해 모든 사이토카인이 사용된다. 그러나, CD40L은 임의적이다.
자극된 DC 표면상에서 성숙 DC 마커의 발현
성숙 DC 마커의 발현에 대한 사이토카인 자극 효과를 조사하기 위해, 사이토카인 존재하에 40시간 동안 성장한 DC의 발현 마커와 사이토카인 무배양 DC의 발현 마커를 측정하였다. pan-DC에 대한 마커인 CD11c의 발현은 배양 후 변화하지 않았다 (도 2, 3). 그러나, CD40, CD54, CD80, CD86, 및 MHC 클래스 II (I-Ad)를 포함한 모든 성숙 DC 마커는 40시간 동안 성장한 DC에서 크게 상향조절되었다(도 2, 3). CD8a+ DC는 CTL을 효율적으로 자극할 수 있는 DC의 서브셋이다. CD8a+ DC 개체군에 대한 사이토카인 자극 효과를 평가하였다. 도 4에 도시된 바와 같이, DC에서 CD8a+ 개체군의 퍼센티지는 자극 동안 크게 증가하였다. 이러한 결과는 LPS없이 본 방법에 의해 생성된 세포가 DC계 면역화에 대해 충분한 능력을 가짐을 보여준다.
AAH 에 반응하여 AAH -면역화된 마우스의 비장세포에 의한 IFN -γ 분비
TH1 반응이 AAH 면역화에 의해 유도되는지를 조사하기 위해, AAH 단백질에 반응하여 그에 따라 생성되는 TH1 사이토카인 IFN-γ을 측정하였다. AAH 또는 GFP-코팅된 비드, 또는 임의의 항원이 없는 비드를 섭취하는 DC를 이용하여 마우스를 2주 간격으로 2회 면역화하였다. 최종 면역화 후 2주째, 면역화된 마우스로부터 비장세포를 준비하고, AAH의 존재하에 48시간 동안 배양한 다음, 배양 상층액에서의 IFN-γ 농도를 측정하여 AAH-면역화된 마우스가 AAH 자극에 반응하여 IFN-γ를 생성하는 지를 조사하였다. AAH-면역화된 마우스의 비장세포는 투여량 의존적인 방식으로 IFN-γ를 활발하게 생성하였다 (도 5). 비록 세 그룹의 비장세포가 콘카나발린 A (Con A)의 존재하에 상당량의 IFN-γ를 생성했지만, 대조군 비장세포는 AAH로 자극시 오직 포착이 어려운 IFN-γ를 생성하였다(도 5). 이러한 결과는 AAH에 반응성인 TH1 세포가 면역화된 마우스에서 생성되었음을 의미한다.
AAH 에 반응하여 AAH -면역화된 마우스의 비장세포에 의한 IL -4의 분비
AAH에 대한 체액성 면역이 AAH 로딩된 DC에 의해 유도되는지를 조사하기 위해, IFN-γ와 동일 샘플에서 TH2 사이토카인 IL-4의 농도를 측정하였다. Con A-자극된 비장세포는 면역화에 상관없이 다량의 IL-4를 생성하였다 (도 6). 반면, 세 종류의 DC로 면역화된 마우스에서 준비된 비장세포는 오직 소량의 IL-4를 생성하였는데 (도 6), 이는 AAH 반응성 TH2 세포가 AAH 면역화에 의해 효과적으로 유도되지 않았음을 의미한다.
AAH -면역화된 마우스에서 AAH -발현 세포에 대한 CTL 활성
AAH-면역화된 마우스에서 AAH 반응성 CTL이 유도되는지를 확인하기 위해, 타겟 세포로서 AAH-발현 SP2/0 세포를 이용하여 세포독성을 평가하였다. SP2/0 세포를, AAH 단백질 및 IL-2로 활성화 후, 면역화된 마우스의 비장세포와 함께 4시간 동안 공배양하였다. 죽어가는 타겟 세포에서 방출된 락테이트 데히드로게나제 활성을 측정함으로써 타겟 세포 용해 효율을 평가하였다. 도 7에 나타낸 바와 같이, AAH-면역화된 마우스의 비장세포는 다른 대조군 비장세포보다 높은 CTL 활성을 가졌으며, 이는 AAH 면역화가 AAH-반응성 CTL을 유도했음을 시사한다.
AAH -면역화된 마우스에서 AAH -반응성 T 세포
마우스를 AAH 로딩된 DC로 면역화했을 때, AAH-반응성 TH1 세포와 CTL이 유도되었다. 항원-특이적 T 세포 팽창은 항원-반응성 T 세포가 생성되었음을 의미하는 또다른 중요한 지표이다.
생체내에서 AAH 면역화의 항종양 효과
AAH 감작된 DC를 이용한 AAH 면역화는 항종양 면역을 유도한다. 마우스를 2주 간격으로 2회 AAH 로딩된 DC로 면역화하고, 최종 면역화 후 2주째, SP2/0 세포를 피부하에 이식한 다음 이식된 종양 크기의 성장을 측정한다. 이러한 종양 부담 모델에서 얻어진 데이터는 면역화의 예방 효과를 반영한다. AAH 면역화의 치료 효과를 평가하기 위해, SP2/0 세포를 최초 이식한 다음 종양이 직경 5 mm까지 성장할 때 마우스를 AAH 로딩된 DC로 면역화하고 종양 성장에 대한 효과를 측정한다.
AAH-타겟화된 면역요법은 전이를 또한 억제한다. 마우스를 AAH 로딩된 DC로 면역화한 다음 SP2/0 세포를 꼬리 정맥에 주사하였다. 2주 후, 폐를 절개하여 형성된 노듈(nodules)의 개수를 센다. 비면역화된 마우스에 대한 면역화된 마우스에서의 노듈 양 감소는 AAH 로딩된 DC 면역 요법이 AAH 함유 종양의 전이를 억제함을 보여준다.
AAH 로딩된 성숙 수지상 세포를 이용한 백신접종은 AAH 발현 종양의 종양 부담 (종양 부피)을 극적으로 감소시켰다. 마우스에서 종양 성장에 대한 AAH 백신접종의 치료 효과는 도 11 및 12에 도시되어 있다. 5 x 105 BNL 1ME A.7R.1 마우스 간종양 세포를 6주된 늙은 BALB/c 마우스의 옆구리에 피하 이식하였다. 10 및 15일 째, AAH 또는 GFP가 로딩된 5 x 105 성숙 DC 또는 HBSS를 종양 함유 마우스에 피하 주사하였다. 종양 크기를 주 단위로 측정하였다. 종양 부피는 하기 식 0.52 x (길이) x (폭)2 에 의해 결정하였다. 각각의 데이터 점은 평균 종양 부피 ± 표준 오차 (n = 6)를 나타낸다. 종양 부피는 AAH 로딩된 DC로 면역화 후 크게 감소한 것으로 나타났다. 업계에 인지된 종양 모델을 이용한 이러한 데이터는 AAH 로딩된 성숙 DC를 이용한 치료 방법이 생체내 AAH 함유 종양을 감소시키고 제거하는 데 효과적임을 보여준다. 이러한 수지상 세포 백신은 임의의 AAH 발현 종양에 대한 강력한 항종양 효과를 입증해 준다.
AAH 및 AFP 를 동시에 면역화함으로써 항종양 효과의 증진
AFP는 마우스와 인간에 대해 항원성일 수 있는 유일한 HCC-관련 단백질이다. 그러나, 항종양 효과는 인간 HCC 환자에게 충분하지 않은 것으로 확인되고 있다. 그러나, AAH 및 AFP의 동시 면역화는 HCC와 마찬가지로 AAH 및 AFP 모두를 발현하는 종양에 대한 면역 반응을 증진시킨다.
AFP 발현 플라스미드 DNA를 도입함으로써 안정적인 AFP-발현 SP2/0 세포주를 제작한다. 상기 세포를 사용함으로써, AFP-로딩 및 AAH-로딩된 DC로 면역화된 마우스에서 시험관내 CTL 활성을 측정한다. 면역화 후 증가된 세포독성은 면역화가 AAH 및/또는 AFP 함유 종양 성장에 대한 AAH 및 AFP 조합 면역화의 항종양 효과를 유도함을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> Wands, Jack R. Shimoda, Masafumi <120> DENDRITIC CELL VACCINES FOR ASPARAGINYL-Beta-HYDROXYLASE EXPRESSING TUMORS <130> 21486-593001WO <140> PCT/US2010/043056 <141> 2010-07-23 <150> 61/228,429 <151> 2009-07-24 <150> 61/231,127 <151> 2009-08-04 <150> 61/239,288 <151> 2009-09-02 <150> 61/240,745 <151> 2009-09-09 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 758 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Gln Arg Lys Asn Ala Lys Ser Ser Gly Asn Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser Ala Gly Ser Ser Ser Pro Gly Ala 20 25 30 Arg Arg Glu Thr Lys His Gly Gly His Lys Asn Gly Arg Lys Gly Gly 35 40 45 Leu Ser Gly Thr Ser Phe Phe Thr Trp Phe Met Val Ile Ala Leu Leu 50 55 60 Gly Val Trp Thr Ser Val Ala Val Val Trp Phe Asp Leu Val Asp Tyr 65 70 75 80 Glu Glu Val Leu Gly Lys Leu Gly Ile Tyr Asp Ala Asp Gly Asp Gly 85 90 95 Asp Phe Asp Val Asp Asp Ala Lys Val Leu Leu Gly Leu Lys Glu Arg 100 105 110 Ser Thr Ser Glu Pro Ala Val Pro Pro Glu Glu Ala Glu Pro His Thr 115 120 125 Glu Pro Glu Glu Gln Val Pro Val Glu Ala Glu Pro Gln Asn Ile Glu 130 135 140 Asp Glu Ala Lys Glu Gln Ile Gln Ser Leu Leu His Glu Met Val His 145 150 155 160 Ala Glu His Val Glu Gly Glu Asp Leu Gln Gln Glu Asp Gly Pro Thr 165 170 175 Gly Glu Pro Gln Gln Glu Asp Asp Glu Phe Leu Met Ala Thr Asp Val 180 185 190 Asp Asp Arg Phe Glu Thr Leu Glu Pro Glu Val Ser His Glu Glu Thr 195 200 205 Glu His Ser Tyr His Val Glu Glu Thr Val Ser Gln Asp Cys Asn Gln 210 215 220 Asp Met Glu Glu Met Met Ser Glu Gln Glu Asn Pro Asp Ser Ser Glu 225 230 235 240 Pro Val Val Glu Asp Glu Arg Leu His His Asp Thr Asp Asp Val Thr 245 250 255 Tyr Gln Val Tyr Glu Glu Gln Ala Val Tyr Glu Pro Leu Glu Asn Glu 260 265 270 Gly Ile Glu Ile Thr Glu Val Thr Ala Pro Pro Glu Asp Asn Pro Val 275 280 285 Glu Asp Ser Gln Val Ile Val Glu Glu Val Ser Ile Phe Pro Val Glu 290 295 300 Glu Gln Gln Glu Val Pro Pro Glu Thr Asn Arg Lys Thr Asp Asp Pro 305 310 315 320 Glu Gln Lys Ala Lys Val Lys Lys Lys Lys Pro Lys Leu Leu Asn Lys 325 330 335 Phe Asp Lys Thr Ile Lys Ala Glu Leu Asp Ala Ala Glu Lys Leu Arg 340 345 350 Lys Arg Gly Lys Ile Glu Glu Ala Val Asn Ala Phe Lys Glu Leu Val 355 360 365 Arg Lys Tyr Pro Gln Ser Pro Arg Ala Arg Tyr Gly Lys Ala Gln Cys 370 375 380 Glu Asp Asp Leu Ala Glu Lys Arg Arg Ser Asn Glu Val Leu Arg Gly 385 390 395 400 Ala Ile Glu Thr Tyr Gln Glu Val Ala Ser Leu Pro Asp Val Pro Ala 405 410 415 Asp Leu Leu Lys Leu Ser Leu Lys Arg Arg Ser Asp Arg Gln Gln Phe 420 425 430 Leu Gly His Met Arg Gly Ser Leu Leu Thr Leu Gln Arg Leu Val Gln 435 440 445 Leu Phe Pro Asn Asp Thr Ser Leu Lys Asn Asp Leu Gly Val Gly Tyr 450 455 460 Leu Leu Ile Gly Asp Asn Asp Asn Ala Lys Lys Val Tyr Glu Glu Val 465 470 475 480 Leu Ser Val Thr Pro Asn Asp Gly Phe Ala Lys Val His Tyr Gly Phe 485 490 495 Ile Leu Lys Ala Gln Asn Lys Ile Ala Glu Ser Ile Pro Tyr Leu Lys 500 505 510 Glu Gly Ile Glu Ser Gly Asp Pro Gly Thr Asp Asp Gly Arg Phe Tyr 515 520 525 Phe His Leu Gly Asp Ala Met Gln Arg Val Gly Asn Lys Glu Ala Tyr 530 535 540 Lys Trp Tyr Glu Leu Gly His Lys Arg Gly His Phe Ala Ser Val Trp 545 550 555 560 Gln Arg Ser Leu Tyr Asn Val Asn Gly Leu Lys Ala Gln Pro Trp Trp 565 570 575 Thr Pro Lys Glu Thr Gly Tyr Thr Glu Leu Val Lys Ser Leu Glu Arg 580 585 590 Asn Trp Lys Leu Ile Arg Asp Glu Gly Leu Ala Val Met Asp Lys Ala 595 600 605 Lys Gly Leu Phe Leu Pro Glu Asp Glu Asn Leu Arg Glu Lys Gly Asp 610 615 620 Trp Ser Gln Phe Thr Leu Trp Gln Gln Gly Arg Arg Asn Glu Asn Ala 625 630 635 640 Cys Lys Gly Ala Pro Lys Thr Cys Thr Leu Leu Glu Lys Phe Pro Glu 645 650 655 Thr Thr Gly Cys Arg Arg Gly Gln Ile Lys Tyr Ser Ile Met His Pro 660 665 670 Gly Thr His Val Trp Pro His Thr Gly Pro Thr Asn Cys Arg Leu Arg 675 680 685 Met His Leu Gly Leu Val Ile Pro Lys Glu Gly Cys Lys Ile Arg Cys 690 695 700 Ala Asn Glu Thr Arg Thr Trp Glu Glu Gly Lys Val Leu Ile Phe Asp 705 710 715 720 Asp Ser Phe Glu His Glu Val Trp Gln Asp Ala Ser Ser Phe Arg Leu 725 730 735 Ile Phe Ile Val Asp Val Trp His Pro Glu Leu Thr Pro Gln Gln Arg 740 745 750 Arg Ser Leu Pro Ala Ile 755 <210> 2 <211> 2324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 cggaccgtgc aatggcccag cgtaagaatg ccaagagcag cggcaacagc agcagcagcg 60 gctccggcag cggtagcacg agtgcgggca gcagcagccc cggggcccgg agagagacaa 120 agcatggagg acacaagaat gggaggaaag gcggactctc gggaacttca ttcttcacgt 180 ggtttatggt gattgcattg ctgggcgtct ggacatctgt agctgtcgtt tggtttgatc 240 ttgttgacta tgaggaagtt ctaggaaaac taggaatcta tgatgctgat ggtgatggag 300 attttgatgt ggatgatgcc aaagttttat taggacttaa agagagatct acttcagagc 360 cagcagtccc gccagaagag gctgagccac acactgagcc cgaggagcag gttcctgtgg 420 aggcagaacc ccagaatatc gaagatgaag caaaagaaca aattcagtcc cttctccatg 480 aaatggtaca cgcagaacat gttgagggag aagacttgca acaagaagat ggacccacag 540 gagaaccaca acaagaggat gatgagtttc ttatggcgac tgatgtagat gatagatttg 600 agaccctgga acctgaagta tctcatgaag aaaccgagca tagttaccac gtggaagaga 660 cagtttcaca agactgtaat caggatatgg aagagatgat gtctgagcag gaaaatccag 720 attccagtga accagtagta gaagatgaaa gattgcacca tgatacagat gatgtaacat 780 accaagtcta tgaggaacaa gcagtatatg aacctctaga aaatgaaggg atagaaatca 840 cagaagtaac tgctccccct gaggataatc ctgtagaaga ttcacaggta attgtagaag 900 aagtaagcat ttttcctgtg gaagaacagc aggaagtacc accagaaaca aatagaaaaa 960 cagatgatcc agaacaaaaa gcaaaagtta agaaaaagaa gcctaaactt ttaaataaat 1020 ttgataagac tattaaagct gaacttgatg ctgcagaaaa actccgtaaa aggggaaaaa 1080 ttgaggaagc agtgaatgca tttaaagaac tagtacgcaa ataccctcag agtccacgag 1140 caagatatgg gaaggcgcag tgtgaggatg atttggctga gaagaggaga agtaatgagg 1200 tgctacgtgg agccatcgag acctaccaag aggtggccag cctacctgat gtccctgcag 1260 acctgctgaa gctgagtttg aagcgtcgct cagacaggca acaatttcta ggtcatatga 1320 gaggttccct gcttaccctg cagagattag ttcaactatt tcccaatgat acttccttaa 1380 aaaatgacct tggcgtggga tacctcttga taggagataa tgacaatgca aagaaagttt 1440 atgaagaggt gctgagtgtg acacctaatg atggctttgc taaagtccat tatggcttca 1500 tcctgaaggc acagaacaaa attgctgaga gcatcccata tttaaaggaa ggaatagaat 1560 ccggagatcc tggcactgat gatgggagat tttatttcca cctgggggat gccatgcaga 1620 gggttgggaa caaagaggca 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Claims (22)

  1. 대상체에서 아스파틸 (아스파라기닐)-β-히드록실라제 (AAH) 발현 종양의 성장을 감소시키기 위한 약학 조성물로서, 상기 약학 조성물은 단리된 성숙 AAH 로딩된(loaded) 수지상 세포를 포함하고, 상기 AAH 발현 종양의 성장은 상기 조성물의 투여 후 감소되고, 상기 종양은 간암, 위장(gastrointestinal)암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 담낭암, 신장암, 방광암, 및 뇌암으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 수지상 세포는 상기 대상체에 투여되기 이전에 GM-CSF 및 IFN-γ를 포함하는 사이토카인의 조합으로 생체 외에서(ex vivo) 활성화되는 것인 약학 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 감작된(primed) 수지상 세포의 제조 방법으로서, 단리된 수지상 세포를 AAH를 포함하는 항원과 접촉시키는 단계 및 상기 항원 접촉 단계 이후에 상기 수지상 세포를 사이토카인의 조합과 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 조합은 GM-CSF 및 IFN-γ를 포함하는 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 조합은 IL-4를 추가로 포함하는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조합은 CD40L을 추가로 포함하는 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 수지상 세포를 상기 사이토카인의 조합과 10시간 이상 동안 접촉시키는 것인 약학 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 수지상 세포를 상기 사이토카인의 조합과 40시간 이상 동안 접촉시키는 것인 약학 조성물.
  9. 삭제
  10. 제4항에 있어서, 상기 항원은 AAH 및 AFP 둘 다를 포함하는 것인 방법.
  11. 제4항에 있어서, 상기 항원은 가용성 형태인 방법.
  12. 제4항에 있어서, 상기 항원은 고체 지지체에 결합되는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 고체 지지체는 폴리스티렌 비드를 포함하는 것인 방법.
  14. 제12항에 있어서, 상기 고체 지지체는 생분해성인 방법.
  15. 제1항에 있어서, 상기 수지상 세포는 백혈구성분채집술(leukapheresis)에 의해 대상체로부터 얻어지는 것인 약학 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 대상체는 암을 앓고 있거나 암 발생 위험에 있는 것인 약학 조성물.
  17. 제4항의 방법에 의해 제조된 감작된 수지상 세포를 포함하는 백신 조성물.
  18. 포유동물 대상체에서 AAH 발현 종양을 치료하기 위한 AAH 로딩된 성숙 수지상 세포를 함유하는 백신으로서, 상기 수지상 세포는 GM-CSF 및 IFN-γ를 포함하는 사이토카인의 조합으로 생체 외에서(ex vivo) 활성화된 것인 백신.
  19. AAH 발현 종양을 지닌 대상체에서 종양 성장을 억제하기 위한 약학 조성물로서, 상기 약학 조성물은 자가 수지상 세포를 포함하고, 상기 자가 수지상 세포는 제4항의 방법에 따라 감작되고, 상기 종양은 간암, 위장(gastrointestinal)암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 담낭암, 신장암, 방광암, 및 뇌암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학 조성물.
  20. AAH 발현 종양을 지닌 대상체에서 종양의 발생을 예방하기 위한 약학 조성물로서, 상기 약학 조성물은 자가 수지상 세포를 포함하고, 상기 자가 수지상 세포는 제4항의 방법에 따라 감작되고, 상기 종양은 간암, 위장(gastrointestinal)암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 담낭암, 신장암, 방광암, 및 뇌암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학 조성물.
  21. 대상체에서 AAH 보유 종양의 전이를 예방하기 위한 약학 조성물로서, 상기 약학 조성물은 자가 수지상 세포를 포함하고, 상기 자가 수지상 세포는 제4항의 방법에 따라 감작되고, 상기 종양은 간암, 위장(gastrointestinal)암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 난소암, 난관암, 후두암, 폐암, 갑상선암, 담낭암, 신장암, 방광암, 및 뇌암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 약학 조성물.
  22. 제1항, 제15항, 제16항, 제19항, 제20항 또는 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간, 개, 고양이, 말, 소 또는 돼지 대상체인 약학 조성물.
KR1020127004697A 2009-07-24 2010-07-23 아스파라기닐-β-히드록실라제 발현 종양을 위한 수지상 세포 백신 KR101911380B1 (ko)

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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9687537B2 (en) 2009-07-24 2017-06-27 Rhode Island Hospital Dendritic cell vaccines for asparaginyl-β-hydroxylase expressing tumors
CA2903212A1 (en) * 2013-03-07 2014-09-12 Neostem Oncology, Llc Individualized high purity hepatocellular carcinoma stem cells, methods and use of the same
US9744223B2 (en) * 2013-03-15 2017-08-29 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic cancer vaccine targeted to HAAH (aspartyl-[asparaginyl]-β-hydroxylase)
CN103405759B (zh) * 2013-07-23 2014-12-10 蔡颖 一种应用脐血cd34+细胞制备肿瘤特异性dc疫苗方法
WO2015164826A2 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Rhode Island Hospital ASPARTATE-β-HYDROXYLASE INDUCES EPITOPE-SPECIFIC T CELL RESPONSES IN TUMORS
KR20210129634A (ko) * 2018-12-13 2021-10-28 로드아일랜드하스피틀 Asph 발현 종양의 성장 및 진행 억제

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003519365A (ja) 1999-11-08 2003-06-17 ロード アイランド ホスピタル， ア ライフスパン パートナー 悪性新生物の診断および処置
US20050113329A1 (en) * 1999-11-08 2005-05-26 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Diagnosis and treatment of malignant neoplasms
US20060057129A1 (en) * 2004-08-10 2006-03-16 Lebkowski Jane S Preloaded dendritic cell vaccines for treating cancer
KR100675761B1 (ko) 2005-09-01 2007-01-30 주식회사 바이넥스 1,2-디옥타노일-ｓｎ-글리세롤3-포스페이트를 이용한 급성골수성 백혈병 세포의 수지상 세포로의 전이분화 유도 방법

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU731937B2 (en) * 1996-12-10 2001-04-05 Hadasit Medical Research Services & Development Company Ltd Serum-derived factor inducing cell differentiation and medical uses thereof
US20050123545A1 (en) * 1999-11-08 2005-06-09 Wands Jack R. Diagnosis and treatment of malignant neoplasms
EP1450814B1 (en) 2001-10-01 2016-11-30 Geistlich Pharma AG Methods of inhibiting metastases
TWI259206B (en) * 2002-09-24 2006-08-01 Univ Nat Cheng Kung A DNA vaccine containing a tumor associated gene and a cytokine gene and the method producing thereof
CN101185754A (zh) * 2002-10-02 2008-05-28 霍夫曼-拉罗奇有限公司 新mhc ii相关肽
DK1604016T3 (da) * 2003-02-27 2009-05-18 Northwest Biotherapeutics Inc In vitro-fremgangsmåde til differentiering af monocytiske dendritiske precursorceller i umodne dendritiske celler
WO2005049802A2 (en) 2003-11-14 2005-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Anti-hydroxylase antibodies and uses thereof
CN101014367B (zh) 2004-08-24 2012-07-04 中外制药株式会社 使用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的辅助疗法
GB2426581A (en) 2005-05-27 2006-11-29 Univ Nottingham Immunoassay methods
US20080254537A1 (en) * 2005-12-08 2008-10-16 Northwest Biotherapeutics, Inc. Compositions and Methods for Inducing the Activation of Immature Monocytic Dendritic Cells
CN101755045B (zh) * 2007-05-17 2014-02-12 生物载体株式会社 树突状细胞的制备方法
CN101754768B (zh) * 2007-07-19 2013-07-10 健康研究股份有限公司 用作癌症疫苗的存活蛋白肽
US9687537B2 (en) 2009-07-24 2017-06-27 Rhode Island Hospital Dendritic cell vaccines for asparaginyl-β-hydroxylase expressing tumors

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003519365A (ja) 1999-11-08 2003-06-17 ロード アイランド ホスピタル， ア ライフスパン パートナー 悪性新生物の診断および処置
US20050113329A1 (en) * 1999-11-08 2005-05-26 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Diagnosis and treatment of malignant neoplasms
US20060057129A1 (en) * 2004-08-10 2006-03-16 Lebkowski Jane S Preloaded dendritic cell vaccines for treating cancer
KR100675761B1 (ko) 2005-09-01 2007-01-30 주식회사 바이넥스 1,2-디옥타노일-ｓｎ-글리세롤3-포스페이트를 이용한 급성골수성 백혈병 세포의 수지상 세포로의 전이분화 유도 방법

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Publication number Publication date
CN102596234A (zh) 2012-07-18
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