KR101882876B1 - 방향족 케톤계 화합물, 이의 생산 방법, 및 용도 - Google Patents

방향족 케톤계 화합물, 이의 생산 방법, 및 용도 Download PDF

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Abstract

방향족 케톤계 화합물, 이를 생산하는 방법, 및 이의 용도를 제공한다. 상기 화합물은 해열 및 통증 억제 활성이 있으므로, 해열 및 진통제로서 이용가능하다.

Description

방향족 케톤계 화합물, 이의 생산 방법, 및 용도{Acetophenone compound, preparing method and use thereof}
방향족 케톤계 화합물, 이의 생산 방법, 및 용도에 관한 것이다.
발열(fever)은 체온 조절 중추 작용으로 인해 체온이 정상 범위 이상으로 상승하는 상태를 말한다. 발열의 원인은 대단히 많다. 발열 자체가 인체에 해로울 경우선 열을 떨어뜨리는 것이 필요하다. 열을 떨어뜨리기 위해 해열제를 복용할 수 있다. 해열제는 발열시 체온 조절 중추에 작용하여, 체온을 정상 수준으로 되돌리는 작용을 갖는 약물을 말한다. 해열제는 해열 작용과 함께 일반적으로 통증 억제 작용을 병용한다. 예를 들어, 아세트아미노펜, 이부프로펜, 덱시부프로펜 등을 포함한 약물이 있다. 이들 중 아세트아미노펜은 간 대사 과정에서 생성되는 독성 물질로 인하여 간 손상을 유발하는 등 다양한 부작용이 보고되고 있다.
삼차고(三叉苦, Melicope pteleifolia (Champion ex Bentham) T.G. Hartley)는 운향과(Rutaceae) 속의 식물로서 동아시아와 남아시아에 자생하는 식물이다. 삼차고는 동명(synonym)으로 Euodia lepta (Spreng.) Merr.으로 명명되기도 하고, Melicope ptelefolia 또는 Evodia lepta로 기재되기도 한다. 삼차고의 잎으로부터 아세타페논류로서 2,4,6-트리히드록시-3-게라닐아세토페논(tHGA), 재배열된 프레닐 아세타페논 이성체인 (±)-멜리콜론(melicolone) A와 B, 크로멘(chromene) 골격의 에보디온(evodione), 이소에보디오놀(isoevodionol), 렙톨(leptol) A, 에틸렙톨(ethylleptol) A, 렙텐(leptene) A 및 퓨로퀴놀린(furoquinoline) 골격을 갖는 알카로이드 화합물 등 다양한 성분들이 알려지고 있다.
따라서, 해열 작용이 우수하고, 독성이 없는 신규한 화합물을 탐색할 필요가 있다.
방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 생산하는 방법을 제공한다.
방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다.
삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다.
방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 이용하여 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다.
삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 이용하여 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다.
일 양상은 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016055478415-pat00001
.
다른 양상은 상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 생산하는 방법을 제공한다.
다른 양상은 상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다.
다른 양상은 삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다.
다른 양상은 상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 이용하여 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다.
다른 양상은 삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 이용하여 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다.
방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염은 해열 또는 통증 억제 효과를 가지므로, 상기 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염, 또는 이를 함유한 삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 해열제 또는 진통제로서 사용할 수 있다.
도 1은 추출 조건에 따른 삼차고 분획물 중 화합물 1 내지 7의 존재를 보여주는 HPLC 스펙트럼 그래프이다.
도 2는 증류수로 진탕 추출한 삼차고 증류수 추출물을 HPLC로 분석한 스펙트럼이다.
도 3은 삼차고 증류수 추출물을 디아이온(Diaion) HP-20에 흡착시킨 후, 증류수를 이용하여 세척한 후 30% 에탄올 용출시킨 용리액을 HPLC로 분석한 스펙트럼이다.
도 4는 삼차고로부터 수득한 화합물 7의 1H과 13C의 핵 자기 공명(NMR)을 나타내는 그래프이다.
도 5a 및 도 5b는 각각 리포폴리사카라이드(LPS)에 의해 발열이 유도된 실험동물에서 삼차고 분획물의 투여에 의한 시간에 따른 체온 및 체온의 변화(Δ체온)를 나타내는 그래프이다 (x 축: LPS 및 시료 투여 후 경과된 시간(시), y 축: 측정된 체온(℃)).
도 6a 및 도 6b는 각각 LPS에 의해 발열이 유도된 실험동물에서 화합물 7 및 삼차고 분획물로부터 분리된 화합물 8(비교예)의 투여에 의한 시간에 따른 체온 및 체온의 변화(Δ체온)를 나타내는 그래프이다 (x 축: LPS 및 시료 투여 후 경과된 시간(시), y 축: 측정된 체온(℃)).
일 양상은 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016055478415-pat00002
.
상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물은 페논(phenone) 유도체일 수 있다. 상기 방향족 케톤계 화합물은 아세토페논(acetophenone), 또는 그의 유도체일 수 있다. 상기 방향족 케톤계 화합물은 플로로아세토페논(phloroacetophenone), 또는 그의 유도체일 수 있다. 상기 방향족 케톤계 화합물은 스피로(spiro) 화합물, 예를 들어 스피로케탈(spiroketal) 화합물일 수 있다.
상기 화학식 1에서, R1은 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알킬기일 수 있다. 상기 R1은 치환 또는 비치환된 C1 내지 C20, C1 내지 C10, C1 내지 C5, 또는 C1 내지 C3의 알킬기일 수 있다. 상기 R1은 치환 또는 비치환된 메틸기일 수 있다.
상기 화학식 1에서, R2는 수소, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알킬기, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 R1은 수소, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C20, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C10, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C5, 또는 치환 또는 비치환된 C1 내지 C3의 알킬기, 또는 이들의 조합일 수 있다.
상기 화학식 1에서, R3은 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 30의 시클릭고리기, 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 30의 헤테로시클릭고리기, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 시클릭고리기 또는 헤테로시클릭고리기는 포화 또는 불포화된 것일 수 있다. 상기 R3은 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 20, 3 내지 15, 3 내지 10, 3 내지 6의 시클릭고리기일 수 있다. 상기 R3은 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 30, 3 내지 20, 3 내지 15, 3 내지 10, 3 내지 6, 3 내지 5, 3 내지 4의 헤테로시클릭고리기일 수 있다. 상기 헤테로시클릭고리기는 1개, 2개, 3개, 또는 4개 이상의 헤테로 원자를 고리에 함유할 수 있다. 상기 헤테로시클릭고리기는 -(CH2)nORb(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, Rb는 수소, 트랜스-(ρ-쿠마르산))로 치환될 수 있다. 예를 들어, 상기 R3는 -(CH2)nORb(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, Rb는 수소, 트랜스-(ρ-쿠마르산))로 치환된 탄소수 3 내지 20의 헤테로시클릭고리일 수 있다. 예를 들어, 상기 R3는 -(CH2)ORb(여기서, Rb는 수소, 트랜스-(ρ-쿠마르산))로 치환된 탄소수 5 내지 10의 헤테로시클릭고리기일 수 있다. 상기 헤테로시클릭고리기는 피라노스(pyranose) 또는 피라노시드일 수 있다. 상기 헤테로시클릭고리기는 글루코피라노스 또는 글루코피라노시드일 수 있다.
상기 화학식 1에서,
Figure 112016055478415-pat00003
는 R2, R3가 서로 독립적으로 존재하거나 또는 R2, R3가 서로 연결되어 융합된 CY1 고리를 형성함을 나타내고, 상기 융합된 CY1 고리는 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 20의 시클릭고리기, 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 20의 헤테로시클릭고리기, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 융합된 CY1 고리는 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 15, 3 내지 10, 또는 3 내지 5의 시클릭 고리기일 수 있다. 상기 융합된 CY1 고리는 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 15, 3 내지 10, 또는 3 내지 5의 헤테로시클릭 고리기일 수 있다. 상기 융합된 CY1 고리는 하기 화학식 2로 표시되는 고리를 포함할 수 있다:
[화학식 2]
Figure 112016055478415-pat00004
.
상기 화학식 2에서,
Figure 112016055478415-pat00005
는 방향족 케톤 화합물에 융합된 부분을 표시하고; R'1, R'2, R'3, R'4는 서로 독립적으로 수소, 히드록시기, -(CH2)n1ORc (여기서, n1은 0 내지 5이다), 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알킬기, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알콕시기, 치환 또는 비치환된 C3 내지 C30의 시클로알킬기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 아릴기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 아릴옥시기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 헤테로아릴기, 또는 이들의 조합이고, 여기서, Rc는 수소, 또는 치환 또는 비치환된 C1 내지 C10의 알킬기일 수 있다.
상기 화학식 2로 표시되는 고리는 하기 화학식 2-1로 표시되는 고리일 수 있다:
[화학식 2-1]
Figure 112016055478415-pat00006
.
상기 화학식 1에서, R4, R5, 및 R6은 서로 독립적으로 수소, 할로겐 원자, 히드록시기, -C(=O)Ra, -C(=O)ORa, -OCO(ORa), 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알킬기, 치환 또는 비치환된 C1 내지 C30의 알콕시기, 치환 또는 비치환된 C3 내지 C30의 시클로알킬기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 아릴기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 아릴옥시기, 치환 또는 비치환된 C6 내지 C30의 헤테로아릴기, 치환 또는 비치환된 탄소수 5 내지 20의 방향족고리기, 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 30의 시클릭고리기, 치환 또는 비치환된 탄소수 3 내지 20의 헤테로시클릭고리기 또는 이들의 조합이고, 여기서 Ra는 수소, C1 내지 C10의 알킬기, 또는 C6 내지 C20의 아릴기일 수 있다. 예를 들어, 상기 R4는 히드록시기일 수 있다. 상기 R6은 히드록시기일 수 있다. 상기 R5는 피라노실기일 수 있다. 예를 들어, 상기 R5는 글루코피라노실일 수 있다.
상기 용어 "치환(substituted)"은 작용기에 포함된 하나 이상의 수소 원자가 할로겐 원자, 할로겐 원자로 치환된 C1 내지 C20의 알킬기(예: CCF3, CHCF2, CH2F, CCl3 등), C1 내지 C20의 알콕시, C2 내지 C20의 알콕시알킬, 히드록시기, 니트로기, 시아노기, 아미노기, 아미디노기, 히드라진, 히드라존, 카르복실기나 그의 염, 술포닐기, 술파모일(sulfamoyl)기, 술폰산기나 그의 염, 인산이나 그의 염, 또는 C1 내지 C20 알킬기, C2 내지 C20 알케닐기, C2 내지 C20 알키닐기, C1 내지 C20 헤테로알킬기, C6 내지 C20 아릴기, C6 내지 C20 아릴알킬기, C6 내지 C20 헤테로아릴기, C7 내지 C20헤테로아릴알킬기, C6 내지 C20 헤테로아릴옥시기, C6 내지 C20 헤테로아릴옥시알킬기 또는 C6 내지 C20 헤테로아릴알킬기로의 치환을 말한다.
상기 용어 "할로겐" 원자는 불소, 브롬, 염소, 요오드 등을 포함한다.
상기 용어 "알킬"은 완전 포화된 분지형 또는 비분지형 (또는, 직쇄 또는 선형) 탄화수소를 말한다. 알킬의 비제한적인 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, iso-아밀, n-헥실, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, 또는 n-헵틸 등을 들 수 있다.
상기 용어 "알콕시" 및 "아릴옥시"는 각각 산소 원자에 결합된 알킬 또는 아릴을 말한다.
상기 용어 "알케닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 갖는 분지형 또는 비분지형 탄화수소를 말한다. 알케닐기의 비제한적인 예로는 비닐, 알릴, 부테닐, 이소프로페닐, 또는 이소부테닐 등을 들 수 있다.
상기 용어 "알키닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합을 갖는 분지형 또는 비분지형 탄화수소를 말한다. 알키닐의 비제한적인 예로는 에티닐, 부티닐, 이소부티닐, 이소프로피닐 등을 들 수 있다.
상기 용어 "아릴"은 방향족 고리가 하나 이상의 탄소 고리에 융합된 그룹도 포함한다. 아릴의 비제한적인 예로는, 페닐, 나프틸, 또는 테트라히드로나프틸 등을 들 수 있다.
상기 용어 "헤테로아릴"은 N, O, P 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하고, 나머지 고리원자가 탄소인 모노시클릭(monocyclic) 또는 바이시클릭(bicyclic) 유기 화합물을 의미한다. 상기 헤테로아릴기는 예를 들어 1 내지 5개의 헤테로원자를 포함할 수 있고, 5 내지 10 고리 멤버(ring member)를 포함할 수 있다. 상기 S 또는 N은 산화되어 여러 산화 상태를 가질 수 있다. "헤테로아릴"의 비제한적인 예로는, 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴기, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 이소티아졸-3-일, 이소티아졸-4-일, 이소티아졸-5-일, 옥사졸-2-일, 옥사졸-4-일, 옥사졸-5-일, 이소옥사졸-3-일, 이소옥사졸-4-일, 이소옥사졸-5-일, 1,2,4-트리아졸-3-일, 1,2,4-트리아졸-5-일, 1,2,3-트리아졸-4-일, 1,2,3-트리아졸-5-일, 테트라졸릴, 피리드-2-일, 피리드-3-일, 2-피라진-2일, 피라진-4-일, 피라진-5-일, 2- 피리미딘-2-일, 4- 피리미딘-2-일, 또는 5-피리미딘-2-일 등을 들 수 있다.
상기 용어 "시클릭고리" 또는 "탄소고리" 기는 포화 또는 부분적으로 불포화된 비방향족(non-aromatic) 모노시클릭, 바이시클릭 또는 트리시클릭 탄화수소기를 말한다. 모노시클릭 탄화수소의 예로는, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 또는 시클로헥세닐 등을 들 수 있다. 바이시클릭 탄화수소의 예로는, 보르닐, 데카히드로나프틸, 비시클로[2.1.1]헥실, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.1]헵테닐, 또는 비시클로[2.2.2]옥틸 등을 들 수 있다. 그리고 트리시클릭 탄화수소의 예로는, 아다만틸(adamantyl) 등을 들 수 있다.
상기 용어 "헤테로시클릭고리" 또는 "헤테로고리" 기는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 고리식 탄화수소를 말한다. 헤테로고리는 5 내지 20개, 예를 들어 5 내지 10개의 탄소 원자를 함유할 수 있다. 상기 헤테로원자로는 황, 질소, 산소 및 붕소로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
상기 용어 "이성질체(isomer)"는 분자식은 같지만 분재 내에 있는 구성 원자의 연결 방식이나 공간 배열이 동일하지 않은 화합물을 말한다. 이성질체는 예를 들면, 구조 이성질체(structural isomers), 및 입체 이성질체(stereoisomer)를 포함한다. 상기 입체이성질체는 부분입체 이성질체(diasteromer) 또는 거울상 이성질체(enantiomer)일 수 있다. 거울상이성질체는 왼손과 오른손의 관계처럼 그 거울상과 겹쳐지지 않는 이성질체를 말하고, 광학 이성질체(optical isomer)라고도 한다. 거울상 이성질체는 키랄 중심 탄소에 4개 이상의 치환기가 서로 다른 경우 R(Rectus: 시계방향) 및 S(sinister: 반시계 방향)로 구분한다. 부분입체이성질체는 거울상 관계가 아닌 입체 이성질체를 말하고, 원자의 공간 배열이 달라 생기 시스(cis)-트랜스(trans) 이성질체로 나뉠 수 있다.
상기 용어 "유도체(derivative)"는 상기 화합물의 구조 일부를 다른 원자나 원자단으로 치환하여 얻어지는 화합물을 말한다.
상기 용어 "염"은 화합물의 무기산염, 유기산염, 또는 금속염의 부가염을 말한다. 상기 염은 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 염은 화합물이 투여되는 유기체에 심각한 자극을 유발하지 않고 화합물의 생물학적 활성과 물성들을 손상시키지 않는 염일 수 있다. 상기 무기산염은 염산염, 브롬산염, 인산염, 황산염, 또는 이황산염일 수 있다. 상기 유기산염은 포름산염, 초산염, 아세트산염, 프로피온산염, 젖산염, 옥살산염, 주석산염, 말산염, 말레인산염, 구연산염, 푸마르산염, 베실산염, 캠실산염, 에디실염, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산염, 벤조산염, 글루콘산염, 메탄술폰산염, 글리콜산염, 숙신산염, 4-톨루엔술폰산염, 갈룩투론산염, 엠본산염, 글루탐산염, 메탄설폰산, 에탄술폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔술폰산, 또는 아스파르트산염일 수 있다. 상기 금속염은 칼슘염, 나트륨염, 마그네슘염, 스트론튬염, 또는 칼륨염일 수 있다.
다른 양상은 삼차고(Melicope pteleifolia)를 물, C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 또는 이들의 혼합물로 침지하여 삼차고 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 삼차고 추출물로부터 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 분리하는 단계를 포함하는, 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 생산하는 방법을 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이성질체, 유도체, 및 염은 전술한 바와 같다.
상기 방법은 물, C1 내지 C4의 알코올, 에틸아세테이트, 또는 이들의 혼합물로 침지하여 삼차고 추출물을 수득하는 단계를 포함한다.
삼차고는 운향과(Rutaceae) 속의 식물로서 동아시아와 남아시아에 자생하는 식물이다. 상기 삼차고는 삼차고의 잎, 줄기, 열매, 뿌리, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 삼차고는 상업적으로 입수 가능하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것일 수 있다.
상기 C1 내지 C4의 알코올은 에탄올, 메탄올, 부탄올, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 상기 알코올은 30%(v/v) 에탄올 수용액, 70%(v/v) 에탄올 수용액, 또는 100%(v/v) 에탄올일 수 있다.
상기 침지는 용매에 삼차고를 담가 적시는 것을 말한다. 상기 침지는 약 O℃ 내지 약 100℃, 약 O℃ 내지 약 50℃, 약 O℃ 내지 약 30℃, 약 4℃, 또는 실온에서 수행될 수 있다. 상기 침지는 약 1분, 약 10분, 약 30분, 약 1 시간, 약 6 시간, 약 12 시간, 약 1일, 약 3일, 약 10일, 약 20일, 약 1개월 이상 수행될 수 있다.
상기 삼차고 추출물은 삼차고로부터 적합한 용매를 사용하여 추출하여 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물 또는 정제물의 형태를 모두 포함한다.
상기 삼차고 추출물은 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
상기 방법은 삼차고 추출물을 물, C1 내지 C4 알코올, 또는 이들의 조합으로 분획하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 삼차고 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 또는 이들의 조합으로 분획될 수 있다. 예를 들어, 상기 삼차고 추출물은 에탄올로 분획된 것일 수 있다.
상기 방법은 삼차고 추출물로부터 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 분리하는 단계를 포함한다.
상기 방법은 삼차고 추출물을 농축, 원심분리, 여과, 흡착, 또는 크로마토그래피를 수행하는 단계를 더 포함할 수 있다.
예를 들어, 삼차고 추출물을 방향족계 무치환 수지를 흡착제로 사용하여 분획할 수 있다. 상기 방향족계 무치환 수지는 디아이온(Diaion) HP-20, SP825, AXT204, XAD1600T, MN200, 또는 이들의 조합일 수 있다.
예를 들어, 삼차고 추출물을 n-부탄올로 분획하고, 크로마토그래피를 수행하여 분획할 수 있다. 분획물은 고속 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography; HPLC), 역상(reversed phase) 컬럼 크로마토그래피, 또는 크기 배제(size exclusion) 크로마토그래피를 수행하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 분리할 수 있다.
다른 양상은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다. 또다른 양상은 다른 양상은 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물을 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이성질체, 유도체, 염, 삼차고 추출물, 및 분획물은 전술한 바와 같다.
상기 약학적 조성물은 활성 성분으로서 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이성질체, 유도체, 및 염을 포함할 수 있다.
상기 용어 "해열" 또는 "통증억제" 은 개체의 체온 또는 통증을 정상 범위로 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다. 해열은 발열 상태의 체온을 내리게 하거나 정상 체온은 내리지 않게 하는 것을 말한다. 발열은 체온이 정상 범위 이상으로 상승하는 상태를 말한다. 인간의 경우, 구강 체온이 약 37.8℃ 이상이거나 직장 체온이 약 38.2℃인 경우 발열이 있다고 할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 해열 활성 또는 통증 억제 활성을 갖는 공지의 유효 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 공지의 유효 성분은 살리실산 유도체(아스피린 등), 아닐린유도체 (아세트아미노펜, 페나세틴 등), 비라조론유도체 (술피린, 아미노피린 등), 비스테로이드성 항염증제 (인도메타신, 메페남산, 이부프로펜 등), 또는 이들의 조합이다.
상기 약학적 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 담체, 부형제, 또는 희석제는 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알기네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 또는 광물유를 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형을 갖는 것일 수 있다. 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
상기 약학적 조성물에 있어서, 경구 투여를 위한 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 또는 캡슐제일 수 있다. 상기 고형 제제는 부형제 또는 윤활제를 더 포함할 수 있다. 부형제는 예를 들면, 전분, 칼슘 카르보네이트(calcium carbonate), 수크로스, 락토스, 또는 젤라틴일 수 있다. 또한, 상기 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 또는 탈크일 수 있다. 상기 약학적 조성물에 있어서, 경구를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 또는 시럽제일 수 있다. 상기 액상 제제는 물, 또는 리퀴드 파라핀을 포함할 수 있다. 상기 액상 제제는 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 또는 보존제를 포함할 수 있다. 상기 약학적 조성물에 있어서, 비경구 투여를 위한 제제는 크림, 로션, 연고, 액제, 패취, 향낭(sachet), 주사제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 또는 및 좌제일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 상기 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 유효한 양으로 포함할 수 있다. 상기 유효한 양은 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 상기 약학적 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 유효한 양은 상기 약학적 조성물 당 약 10 mg 내지 약 10 g, 약 100 mg 내지 약 8 g, 약 250 mg 내지 약 6 g, 약 약 500 mg 내지 약 4 g, 약 500 mg 내지 약 2 g, 또는 약 500 mg 내지 약 1 g일 수 있다. 상기 약학적 조성물은 경구, 경피, 피하, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 국소, 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다. 상기 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 성인 기준으로 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 또는 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 1 ㎎/kg의 범위 내이고, 1일 1회 내지 6회, 2 일 내지 3일에 1회, 또는 수일 1회 투여될 수 있다.
다른 양상은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 염을 포함하는 발열 예방 또는 발열 개선용 식품 조성물 또는 사료 첨가용 조성물을 제공한다. 또다른 양상은 다른 양상은 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물을 포함하는 발열 예방 또는 발열 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이성질체, 유도체, 염, 삼차고 추출물, 및 분획물은 전술한 바와 같다.
상기 식품용 조성물은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 염, 또는 삼차고 추출물 또는 이의 분획물을 캡슐화, 분말화, 또는 현탁액 등으로 제제화하여 기능성 식품으로 이용하거나 각종 식품에 첨가할 수 있다. 상기 식품은 예를 들어, 음료류, 비타민 복합제, 및 건강보조 식품류이다.
상기 사료 첨가용 조성물은 제제에 따라 해열 또는 통증 억제 활성을 향상시키기 위해 첨가 가능한 공지의 첨가물을 더 포함할 수 있다. 상기 사료 첨가용 조성물은 고농축액, 분말 또는 과립 형태일 수 있다. 상기 사료 첨가용 조성물은 동물의 식이 요구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분을 더 포함할 수 있다. 상기 사료 첨가용 조성물은 동물 사료에 침지, 분무, 또는 혼합으로 첨가하여 이용될 수 있다.
다른 양상은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 열이 나거나 통증이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다. 다른 양상은 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물을 열이 나거나 통증이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법을 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 방향족 케톤계 화합물, 이성질체, 유도체, 염, 삼차고 추출물, 분획물, 해열, 및 통증 억제는 전술한 바와 같다.
상기 개체는 생쥐, 래트, 개, 돼지, 고양이, 소, 말, 원숭이, 낙타, 및 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염, 또는 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 상기 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염, 또는 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물은 예를 들면, 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg, 약 0.01 ㎎/kg 내지 약 10 ㎎/kg, 또는 약 0.1 ㎎/kg 내지 약 1 ㎎/kg의 범위 내이고, 1일 1회, 1일 다회, 수일 1회 투여될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염, 또는 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물은 단독으로 또는 다른 약학적 활성 화합물과 함께 투여될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 유도체, 또는 약학적으로 허용가능한 염, 또는 삼차고 추출물, 또는 이의 분획물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방법은 경구, 또는 비경구 투여일 수 있다. 투여 방법은 예를 들어, 경구, 경피, 피하, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 국소, 또는 피내 경로일 수 있다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 방향족 케톤계 화합물의 분리
1. 삼차고 추출물의 준비
(1) 삼차고로부터 활성 화합물의 용매 추출조건의 확인
삼차고 식물의 잎은 2014년 베트남 하노이의 녹하 약초거리(Ngoc Ha herbal distract)에서 구입한 후 생태 생물자원 연구소(Institute of Ecology and Biological Resources)의 Tran The Bach의 검증을 받아 사용하였다.
10 g의 삼차고를 각각 100 ㎖의 증류수, 30%(v/v) 에탄올 수용액, 70%(v/v) 에탄올 수용액, 100% 에탄올(대정화금, 대한민국), 100% 메탄올(대정화금, 대한민국), 및 100% 에틸아세테이트(대정화금, 대한민국)을 가하여 2시간 동안 초음파 추출기(화신기계, 대한민국)로 3회 반복하고, 3회 반복 추출된 추출물을 합하여 각 용매에 의한 추출물을 준비하였다.
준비된 추출물에서 고형분을 제거하고 추출액을 감압 농축하여 각 추출물 당 약 0.33 g 내지 약 2.08g의 삼차고 추출물을 수득하였다.
고성능 액체크로마토그래피/질량분석기(HPLC/MS)를 사용하여 삼차고 추출물 중 화합물 7의 함량을 측정하였다.
HPLC/MS 분석을 위해, 0.1%(v/v)의 물 중 포름산과 아세토니트릴(MeCN)의 혼합 조성을 이동상으로 이용하고, Agilent Series 1100 MSD single quadropole이 장착된 고성능액체크로마토그래피/질량분석기(Agilent Technologies)를 사용하여 정하였다. 컬럼은 Column INNO C18 HPLC column (4.6 × 250 mm, 5 μm)을 사용하였다. HPLC의 구체적인 분석 조건을 표 1에 나타내었다.
이동상
(구배)
 0 내지 3분 3 내지 33분 33 내지 43분 43 내지 53분 53 내지 54분 54 내지 60분
0.1%(v/v) 포름산 + MeCN

MeCN(3)		 0.1%(v/v) 포름산 + MeCN

MeCN(3→20)		 0.1%(v/v) 포름산 + MeCN


MeCN(20→100)		 0.1%(v/v) 포름산 + MeCN


MeCN(100→100)		 0.1%(v/v) 포름산 + MeCN


MeCN(100→3)		 0.1%(v/v) 포름산 + MeCN


MeCN(3)
유속 0.6 ㎖/분
흡광도 UV 300 nm
HPLC/MS 분석을 통한 삼차고 추출물 중 화합물 7의 함량 결과를 표 1에 나타내었다.
추출 용매 추출량 추출물 중 화합물 7의 함량(%(w/w))
증류수 2.08g 4.38%
30%(v/v) 에탄올 1.55g 2.86%
50%(v/v) 에탄올 1.19g 5.60%
70%(v/v) 에탄올 1.59g 6.07%
95%(v/v) 에탄올 0.62g 1.45%
메탄올 1.12g 5.39%
에틸아세테이트 0.33g 0%(검출안됨)
표 2에 나타난 바와 같이 화합물 7의 함량은 다른 조건에 비해 70% 에탄올을 용매로 추출한 조건에서 화합물 7의 함량이 가장 높았다. 그러나, 추출되는 추출량 및 화합물 7을 함유한 분획을 최적화하기 위한 흡착제(레진)의 사용 편이성을 고려하여 증류수를 사용하여 초음파 추출기로 3회 추출하는 방법을 추출 조건으로 설정하였다.
(2) 삼차고 분획물 MP -001의 준비
삼차고 잎을 절단하여 추출기에 넣고 약 5 내지 8 배량의 정제수를 가하였다. 그 후 약 30℃ 내지 50℃에서 약 1 내지 2시간 동안 초음파 추출기를 사용하여 삼차고 증류수 추출액을 얻었다. 3회 추출한 추출액을 합하고 여과하여 여액을 수득하였다(감압농축기로 여액을 농축시 수득율 20.8%).
삼차고 증류수 추출액을 삼차고 원물대비 약 5 내지 10배 중량의 디아이온 HP-20 레진(합성 흡착제 수지, Mitsubishi Chemical)에 통과시켜 흡착시켰다. 흡착된 레진을 약 10배 부피의 증류수를 사용하여 세척한 후 약 3 내지 5배량의 증류수, 30%(v/v) 에탄올, 50%(v/v) 에탄올, 70%(v/v) 에탄올, 및 95%(v/v) 에탄올을 사용하여 각각 용출하였다. 용리액 중 화합물 7의 함량을 1.(1)에 기재한 바와 같이 HPLC/MS로 측정하고, 그 결과를 표 3에 나타내었다.
용출 용매조건 증류수 30% 에탄올 50% 에탄올 70% 에탄올 95% 에탄올
화합물 7의
함량(%(w/v))		 0.28% 25.32% 0.01% 0%(검출안됨) 0%(검출안됨)
표 3에 나타난 바와 같이, 화합물 7의 함량이 용출 용매로 30%(v/v) 에탄올을 사용한 경우 다른 용출 용매에 비해 가장 높았다. 따라서, 이후, 30%(v/v) 에탄올에 용출된 용출액을 여과, 감압농축, 그 후 동결건조하여 건조엑스를 수득하였다(이하, "MP-001"이라 함. 수득률 3.34%).
(3) 삼차고 정제물 MP -002의 제조
1.(2)에 기재된 바와 같이 수득된 건조엑스 MP-001를 약 3 내지 5배량의 정제수를 가하여 용해시켰다. 그 후, 건조엑스 MP-001의 양의 약 2 내지 5배량의 RP-18 레진이 충진된 RP-18 컬럼 크로마토그래피(RP-18 column chromatography)에 흡착시켰다. 10%(v/v) 메탄올을 용매로 이용하여 불필요한 부분을 제거하고, 40% 메탄올을 전개 용매로 이용하여 화합물 7을 함유한 활성분획의 정제를 수행하였다. 이후, 40%(v/v) 메탄올 용매를 이동상으로 하여 유출되는 정제물을 수득하였다. 수득된 정제물을 약 60℃ 이하에서 감압농축 후 동결건조하여 건조엑스를 얻었다(이하, "MP-002"이라 함. 수득률 1.2%).
2. 삼차고 에탄올 추출물로부터 화합물의 분리
1 kg의 삼차고에 70%(v/v) 에탄올(4 L × 3회)를 가하고 실온에서 초음파를 조사하여 삼차고 에탄올 추출물을 수득하였다. 수득한 에탄올 추출물을 감압농축하여 건조시켜 30% 에탄올 추출물(약 97 g)을 수득하였다. 수득된 30% 에탄올 추출물을 3 L의 물에 현탁시킨 후, 1 L의 에틸아세테이트(대정화금, 대한민국)로 추출한 후 동량의 n-부탄올(OCI, 대한민국)로 분획하여 활성 물질을 분리하였다.
부탄올 분획물(19.8g)을 에틸아세테이트-메탄올(20:1→0:1[v:v])의 농도구배 용출 조건에 따른 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(컬럼 크기: 10×25 ㎝, 입자 크기: 63 내지 200 ㎛)로 분획하여 7개의 소분획물(F1 내지 F7)을 수득하였다. 소분획물 F3(약 2.2 g)은 메탄올:물(50:50[v:v])을 이동상으로 하여 RP-18 컬럼 크로마토그래피(LiChroprep® RP-18, 컬럼 크기: 2.0×40 ㎝, 입자 크기: 40 내지 63 ㎛)로 분획하여 6개의 소분획을 얻었다(F3.1 내지 F3.6).
소분획물 F3.1(약 200 mg)은 HPLC에서 이동상에 0.1%(v/v) HCO2를 포함한 20%(v/v) MeOH의 조건으로 이동 속도 2 ㎖/분으로 분리하여 화합물 2(tR=16 분, 69.3 mg)을 수득하였다. 화합물 8과 9는 소분획물 F3.5(100 mg)을 HPLC에서 이동상에 0.1%(v/v) HCO2를 포함한 20%(v/v) MeCN 조건으로 화합물 8(tR=23 분, 8.5 mg)과 화합물 9(tR=24 분, 2.5 mg)을 각각 분리하였다. 화합물 10(tR=17 분, 5.0 mg)은 소분획물 F3.6(80 mg)을 22%(v/v) MeCN 용매를 사용하여 이동속도 2 ㎖/분으로 용출한 HPLC 조건에서 분리하였다.
소분획물 F4(0.6 g)을 역상 (RP-18) 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 소분획물 F4.1(100 mg)을 얻었고, 이를 HPLC(0 내지 25 분: H2O 중 8%(v/v) ACN)을 실시하여 화합물 5(tR=14 분, 4.5 mg)를 얻었다. 소분획물 F6(2.1 g)은 역상 (RP-18) 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 소분획물 F6.1(200 mg)를 얻었고 이를 HPLC (0 내지 30 분: H2O 중 8%(v/v) ACN)을 실시하여 화합물 3(tR=29 분, 10.3 mg), 화합물 1(tR=32 분, 43.2 mg)과 화합물 4(tR=34 분, 27.2 mg)을 얻었다.
소분획물 F1(2.5 g)은 역상 (RP-18) 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 3개의 소분획물을 얻었다(F7.1-3). F7.1(1.6 g)의 일부분을 취하여 50%(v/v) MeOH로 크기배제(LH-20) 컬럼 크로마토그래피(Sephadex, 2×40 ㎝)를 실시하여 주 화합물 7(13.0 mg)을 얻었다. F7.3(30 mg)은 HPLC(0 내지 25 분: H2O 중 24% ACN)을 실시하여 화합물 6(tR=24 분, 3.5 mg)를 얻었다.
상기 화합물 1 내지 7에 대한 HPLC 스펙트럼 결과는 도 1에 나타내었으며, 이의 조건은 하기와 같다:
Optima Pak-C18 컬럼: 250×10 ㎜ ID, 입자 크기 10 ㎛, 한국;
파장: 205 nm (파란선) 및 254 nm(빨간색 선);
용출: 0.1%(v/v) 포름산 함유하는 H2O 중 MeCN (0 내지 10 분: 0.1%(v/v) 포름산 함유하는 35%(v/v) MeCN; 0 내지 45 분: 10%(v/v) MeCN; 45 내지 55 분: 100%(v/v) MeCN);
유속: 2.0 ㎖/분.
3. 삼차고로부터 분리된 화합물의 물리 화학적 구조의 확인
(1) 멜리코스피로케탈 A( Melicospiroketal A, 화합물 1)
화합물 1은 갈색의 진액으로서 수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D 값은 +78.7 (c 0.3, MeOH)이었다. [M+H]+인 분자이온 피크의 분자식은 측정치인 C20H27O13이고, HRESIMS 475.1433(예측치 475.1446)로부터 결정되었다. 적외선 분광광도법(Infrared Spectrophotometry: IR) 측정을 통해 3696 cm-1, 3351 cm-1에서 히드록시기를, 1628 cm-1에서 카르보닐기의 존재를 확인하였다. 13C-NMR과 HSQC 분석 결과로부터 δc 100-170에서 7개의 신호(δc 164.8, 163.4, 156.2, 120.4, 105.1, 102.4, 101.1)을 확인함으로써 모든 자리가 치환된 하나의 벤젠 고리의 존재를 확인하였다. 아세틸기 또한 δH 2.61(3H, s, H3-8)에서 메틸기 일중선(singlet) δc 203.0(s)에서의 케톤기를 통해 확인되었고, 방향족 고리에서의 치환 위치는 HMBC에서 H3-8(δH 2.61)로부터 C-1(δc 105.1)으로의 연결로부터 결정하였다. δH 4.36(1H, d, J = 10.0 Hz)에서의 이중선(doublet) 피크는 C-글리코시드 당 아노머 양성자의 특징과 HMBC 결과에서 H-1''(δH 4.36)와 C-4/5/6(δc 163.4, 101.1, 164.8)와의 연결로부터 확인하였다.
당 부분은 ROESY 결과에서 H-1''(δH 4.36)과 H-3''(δH 3.18), H-5''(δH 3.14) 사이, H-2''(δH 3.88)과 H-4''(δH 3.09), H-6''(δH 3.38, 3.66) 사이의 연결과 기존 논문의 3,5-디-C-β-D-글루코피라노실 플로로아세토페논(glucopyranosyl phloroacetophenone)에 관한 결과와의 비교를 통해 β-D-글루코스로 결정하였다. 또 다른 당은 스피로케탈 구조를 가지는 화합물인 핀나티피노시드(pinnatifinoside) A와 아우일아리노시드(auilarinoside) A의 NMR 결과와의 비교와 HMBC 결과에서 H-1'(δH 2.79, 3.36)과 비당체 부분의 C-2/3/4(δc 156.2, 102.4, 163.4)과의 연결, H-1'(δH 2.79, 3.36)과 C-2'/3'(δc 120.4, 80.9)과의 연결을 통하여 결정하였다.
ROESY 결과에서 H-3'(δH 4.05)과 H-5'(δH 3.84) 사이, 3'-OH(δH 5.74)와 H-4'(δH 3.76), 4'-OH(δH 5.33)과 H-3'(δH 4.05), H-4'(δH 3.76)과 H-1'(δH 2.79) 사이의 연결을 통해 상대 배열을 정하였다. 화합물 1의 절대 배열은 기존의 알려진 스피로케탈 물질의 NMR 결과와의 비교를 통해 (2'R, 3'S, 4'S, 5'S)로 결정하였고 멜리코스피로케탈 A (melicospiroketal A, 화합물 1)로 명명하였다(도 1 및 2).
멜리코스피로케탈 A (1)
갈색 검(gum)
[α]D +78.7 (c 0.3, MeOH).
IR (KBr) ν max 3696, 3351, 1627, 1445, 1371, 1313 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε) (nm) 232(3.48), 288(3.49).
CD (c.0.5,.MeOH).225(-8.30),.284(+3.00),.328(-1.49).
HRESIMS[M+H]+ m/z 475.1433 (C20H27O13 예측치 475.1446).
(2) 멜리코스피로케탈 B( Melicospiroketal B, 화합물 2)
화합물 2는 갈색의 진액으로서 수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D 값은 +27.6(c 0.3, MeOH)이었다. [M+H]+인 분자이온 피크의 분자식은 측정치인 C20H27O13으로 HRESIMS 475.1450(예측치 475.1446)로부터 결정되었다. 화합물 2는 화합물 1과 매우 유사한 NMR 결과를 보이므로, 하기와 같은 방법으로 화합물을 구조동정 하였다.
ROESY 결과에서 H-3'(δH 4.10)과 H-4'(δH 3.81), H-5'(δH 3.90) 사이, H-4'(δH 3.81)과 H-5'(δH 3.90) 사이의 연결을 통해 3개의 인접한 수소들이 동일한 면에 있음을 확인하였다. 더욱이, H-3', H-5'가 H3-8(δH 2.55)과 연결로부터 상대배열을 결정하였다. 화합물 2의 NMR 결과의 경우 스피로케탈-헥소푸라노스 구조가 C-β-D-칼락토피라노스로부터 생합성 된다고 여겨지는 우푸보메올(upubomeol) B의 NMR 결과와 일치하였다.
위의 정보들을 종합하여 화합물 2의 절대배열을 (2'R, 3'S, 4'R, 5'R)로 결정하였고 멜리코스피로케탈 B(melicospiroketal B, 화합물 2)로 명명하였다.
멜리코스피로케탈 B (2)
갈색 검.
[α]D; +27.6(c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3364, 2929, 1629, 1445, 1369, 1303 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 240(3.48), 264(3.49), 335(3.37).
CD(c 0.5, MeOH) 276(-0.50), 299(+2.63), 315(+1.65).
HRESIMS[M+H]+m/z 475.1450 (C20H27O13 예측치 475.1446).
(3) 멜리코스피로케탈 C( Melicospiroketal C, 화합물 3)
화합물 3은 갈색의 진액으로서 수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D값은 -25.4 (c 0.3, MeOH)이었다. [M+H]+인 분자이온 피크의 분자식은 측정치인 C20H27O13으로 HRESIMS 475.1440(예측치 475.1446)로부터 결정되었으며 화합물 1과 매우 유사한 NMR 패턴을 보여 화합물 1과 2와 비슷한 방법으로 화합물의 구조를 동정하였다. ROESY 결과에서 H-3'(δH 3.76)과 H-4'(δH 4.05)사이, 3'-OH(δH 5.56), 4'-OH(δH 5.06)과 H-5'(δH 3.91) 사이의 연결을 통해 H-3'과 H-4'가 동일한 면에 있고 H-5'와 반대 면에 있음을 확인하였다. 더욱이 3'-OH(δH 5.56)와 H-1'(δH 3.37) 사이, H-5'(δH 3.91)과 H-1' (δH 2.85) 사이에서 연결을 보임으로 화합물 3의 상대배열을 결정하였다.
화합물 3의 NMR 결과의 경우 C-β-D-알로피라노시드 유래 스피로케탈 고리를갖는 플라보노이드의 일종인 핀나티피노시드(pinnatifinoside) C의 NMR 결과와 매우 유사하였다. 위의 정보들을 종합하여 화합물 3의 절대배열을 (2'S, 3'R, 4'S, 5'R)로 결정하였고 멜리코스피로케탈 C(melicospiroketal C)로 명명하였다.
멜리코스피로케탈 C (3)
갈색 검.
[α]D; -25.4(c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3379, 2935, 1627, 1444, 1371, 1315 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 229(3.37), 288(3.36).
CD(c 0.5, MeOH) 221(-6.30), 248(+0.05), 286(-4.4).
HRESIMS[M+H]+m/z 475.1450 (C20H27O13 예측치 475.1446).
(4) 멜리코스피로케탈 D 및 E( Melicospiroketal D and E, 화합물 4와 5)
화합물 4는 갈색의 진액으로서 수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D 값은 -20.2(c 0.3, MeOH)이었다. [M+H]+인 분자이온 피크의 분자식은 측정치인 C20H27O13으로 HRESIMS 475.1442(예측치 475.1446)로부터 결정되었으며 화합물 1과 매우 유사한 NMR 패턴을 보였다.
ROESY 결과에서 4'-OH(δH 5.44)와 H-3'(δH 3.86), H-5'(δH 3.74) 사이, H-3'(δH 3.86)과 H-5'(δH 3.74) 사이, H-5'(δH 3.74)과 H-1'(δH 2.98) 사이의 연결을 화합물 4의 상대배열을 결정하였다. 화합물 4는 화합물 5와 동일한 상대배열이며 NMR 결과 비교를 통해 서로 반대의 절대배열을 가지고 있음을 확인하였다. 두 개의 배열을 구분하기 위해 Chem3D 모델을 사용하여 최소 에너지 모드(MM2)를 측정한 결과 두 개의 배열은 H-4'과 H-8 사이의 공간상의 거리에서 차이를 보였다. 모델 A(2'R, 3'R, 4'R, 5'S)의 경우 거리는 5 Å 이상이었음에 비해, 모델 B(2'S, 3'S, 4'S, 5'R)의 경우 3 Å을 보임으로서 모델 B 만이 H-4'와 H-8 사이의 연결을 보일 수 있다는 것을 확인하였다.
실제로 화합물 4와 화합물 5 중에서 화합물 5 만이 ROESY에서 H-4'(δH 3.94)과 H-8(δH 2.57) 사이의 연결을 나타내었다. 이러한 결과들을 종합하여 화합물 4의 절대배열은 (2'R, 3'R, 4'R, 5'S), 화합물 5는 (2'S, 3'S, 4'S, 5'R)로 결정하였으며 각각 멜리코스피로케탈 D(melicospiroketal D), 멜리코스피로케탈 E(melicospiroketal E)로 명명하였다.
멜리코스피로케탈 D (4)
갈색 검.
[α]D; -20.2 (c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3365, 2925, 1629, 1446, 1372, 1321 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 2230(3.22), 288(3.19).
CD(c 0.5, MeOH) 261(-0.56), 282(-1.13), 330(-0.50).
HRESIMS[M+H]+m/z 475.1442 (C20H27O13 예측치 475.1446).
멜리코스피로케탈 E (5)
갈색 검.
[α]D; +7.6 (c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3370, 2938, 1626, 1440, 1369, 1294 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 230(2.98), 284(2.92).
CD(c 0.5, MeOH) 215(-2.79), 228(-4.79), 284(+2.93).
HRESIMS[M+H]+m/z 475.1447 (C20H27O13 예측치 475.1446).
(5) 5- C- βc -D- 글루코피라노실 -3- C -(6- O-트랜스-ρ - 쿠마로일 )- β -D- 글루코피라노시드 플로로아세토페논 (화합물 6)
화합물 6은 무색의 진액으로서 분리수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D 값은 -5.5 (c 0.3, MeOH)이었다. 화합물 6의 분자식 C29H34O16은 [M + Na]+인 분자이온 피크의 HRESIMS 661.1731(예측치 661.1739)로부터 결정되었다. 1H과 13C-NMR 결과는 트랜스-p-쿠마르산(coumaric acid) 구조의 특징인 δH 6.78(2H, d, J = 8.5Hz)와 δH 7.55(2H, d, J = 8.5Hz)에서의 2개의 겹쳐진 오르토(ortho) 위치의 방향족 신호와 δH 6.42(1H, d, J = 16.0Hz)와 δH 7.55(1H, d, J = 16.0Hz)에서 트랜스(trans) 위치의 올레핀 신호, 및 δc 166.6(q)에서 에스테르 탄소를 나타내므로 트랜스-p-쿠마르산 구조임을 확인하였다.
위의 도출은 기존의 보고된 결과와의 비교를 통해서 추가 확인될 수 있었다. 나머지 탄소의 신호는 3,5-디-C-β-D-글루코피라노실 플로로아세트페논의 NMR 결과와 일치하였으며 추가적으로 HMBC 결과를 통해 확인할 수 있었다. p-쿠마로일기가 당의 C-6에 연결되었음은 HMBC에서 H-6''(δH 4.23, dd, J = 6.0, 12.0Hz/δH 4.44, d, J = 12.0Hz)이 p-쿠마르산의 C-9(δc 166.6)과 연결되었음을 통해 확인할 수 있었다. 위의 사실들을 종합하여 볼 때 화합물 6는 C-글리코스드인 5-C-β-D-글루코피라노실-3-C-(6-O-트랜스-ρ-쿠마로일)-β-D-글루코피라노시드 플로로아세토페논으로 동정하였다.
5-C-β- D - 글루코피라노실 -3-C-(6-O-트랜스-p- 쿠마로일 )- β - D - 글루코피라노시드 플로로아세토페논 (6)
무색 검.
[α]D; -5.5(c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3703, 1691, 1615, 1518, 1274, 1042, 1024 cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 230(3.18), 290(3.18).
HRESIMS[M+Na]+ m/z 661.1731 (C29H34O16Na 예측치 661.1739).
(6) 3,5-디- C - β - D -글루코피라노시드 플로로아세토페논(화합물 7)
화합물 7은 갈색의 진액으로서 분리수득하였다. 20℃에서 측정한 [α]D 값은 +56.4 (c 0.3, MeOH)이었다. 화합물 7의 13C-NMR 분석 결과 100 내지 160 ppm 사이에서 4개의 탄소 신호 (δc 161.3, 161.3, 104.8, 104.0)를 보여주었고, 1H-NMR 분석 결과, 아노머 수소가 (2H, d, J = 10.0Hz) 관찰된 결과로부터 2개의 탄소에 연결된 포도당이 방향족 환에 대칭으로 존재하는 것으로 결정하였다. 또한, 한 개의 아세틸 기가 존재함을 δH 2.60 (3H, s) 메틸기와 δc 203.5의 케톤기 신호를 통하여 확인하였다.
위의 도출된 결과로부터 화합물 7은 3,5-디-C-β-D-글루코피라노시드 플푸오로아세토페논임을 확인하였다. 화합물 7의 분자량은 신호를 m/z 475 [M-H2O+H]+, 491 [M-H]- 값을 확인하여, 화합물 7의 분자량은 492인 것으로 확인하였다.
갈색 검.
[α]D; +56.4 (c 0.3, MeOH).
IR(KBr) ν max 3354, 1621, 1447, 1277, 1048cm-1.
UV λmax(MeOH)(logε)(nm) 234(3.48), 286(3.49).
HESIMS m/z 475[M-H2O+H]+,491[M-H]-.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ): 9.15(1H, s, 6-OH), 4.71(2H, d, J= 10.0 Hz, H-1', 1"), 3.61(4H, m, H-6', 6), 3.47(2H, t, J= 9.0 Hz, H-2', 2"), 3.33(2H, t, J= 9.0 Hz, H-4', 4"), 3.26(4H, m, H-3', 3, 5', 5"), 2.60(3H, s, H-8).
13C NMR(125 MHz, DMSO-d 6 ): 104.8(C-1), 161.3(C-2, 6), 104.0(C-3, 5), 161.1(C-4), 203.5(C-7), 32.9(C-8), 74.6(C-1', 1"), 72.1(C-2', 2"), 77.8(C-3', 3"), 69.2(C-4', 4"), 81.1(C-5', 5"), 60.0(C-6', 6"). ESI-MS m/z : 287[M+H]+.
(7) 3,5,4'- 트리히드록시 -8,3'- 디메톡시 -7-(3- 메틸부트 -2- 에닐옥시 )플라본 (화합물 8)
삼차고 추출물로부터 분리된 방향족 케톤계 화합물에 대한 비교예로서, 삼차고 분획물 MP-001로부터 분리된 화합물 8을 준비하였다.
노란색 분말.
UV λmax (MeOH) (log ε) (nm) 257 (3.40), 380 (3.34).
IR (KBr) νmax 3729, 3361, 1598, 1513, 1318, 1204, 1125 cm-1.
ESIMS m/z 415 [M+H]+, 413 [M-H]-.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6): 12.24 (1H, s, 5-OH), 9.83 (1H, s, 4'-OH), 9.56 (1H, s, 3-OH), 7.78 (1H, brs, H-2'), 7.73 (1H, d, J= 8.1 Hz, H-6'), 6.98 (1H, d, J= 8.1 Hz, H-5'), 6.57 (1H, brs, H-6), 5.46 (1H, t-like, H-2"), 4.68 (2H, d, J= 6.9 Hz, H-1"), 3.84 (3H, s, 3'-OMe), 3.82 (3H, s, 8-OMe), 1.76 (3H, s, H-4"), 1.74 (3H, s, H-5").
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6): 146.8 (C-2), 135.9 (C-3), 176.2 (C-4), 103.3 (C-4a), 155.6 (C-5), 96.2 (C-6), 157.0 (C-7), 128.4 (C-8), 147.7 (C-8a), 122.1 (C-1'), 111.3 (C-2'), 147.4 (C-3'), 148.9 (C-4'), 115.7 (C-5'), 121.7 (C-6'), 65.7 (C-1"), 119.2 (C-2"), 138.3 (C-3"), 25.5 (C-4"), 18.1 (C-5"), 60.9 (8-OMe), 55.5 (3'-OMe).
Figure 112016055478415-pat00007
a125 MHz. b150 MHz. 모든 시료는 DMSO-d 6 에서 측정됨.
Figure 112016055478415-pat00008
[표 5에서 계속]
Figure 112016055478415-pat00009
a500 MHz. b600 MHz. 모든 시료는 DMSO-d 6 에서 측정됨.
실시예 2. 삼차고 추출물의 활성 확인
1. 삼차고 추출물 및 화합물 7의 해열 활성의 확인
삼차고 분획물 MP-001과 삼차고 속에 존재하는 다량으로 존재하는 주 화합물 7의 해열 활성를 확인하였다.
구체적으로, 실험동물로서 7주령의 ICR 수컷 마우스를((주)코아텍, 대한민국) 구입하여 이용하였다. 7주령의 ICR 수컷 마우스를 대상으로 군 당 6마리씩 준비하였으며, 1주간의 적응 기간을 가진 후, 개별 우리에 분리하여 12 시간 간격의 낮 (오전 7시 내지 오후 19시)과 밤의 주기에 따라 관리하였다.
상기 실험동물을 이용한 해열작용 활성을 확인하기 위해 세균성 내독소인 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide: LPS) 유도성 발열 실험은 Vilela FC 등 (Vilela FC et al., Anti-inflammatory and antipyretic effects of Sonchus oleraceus in rats., J. Ethnopharmacol., vol.127(3), p.737-41 (2010))을 응용하여 수행하였다.
상기 실험동물 중 임의로 6마리 선택하여 1 군으로 하고, LPS(Sigma, USA)를 500 ㎍/kg 체중의 용량으로 복강 주사(i.p.)하여 발열을 유도시켰다. 체온 측정은 직장 체온측정기(Portable Thermocouple Thermometer(Physitemp Instruments, USA) 및 Stainless Steel Rectal Probe for Rats(Physitemp Instruments, USA))를 이용하여 직장 체온을 측정하였고, 실험전 마우스의 체온을 측정하여 온도 측정 스트레스로 인한 온도 상승을 최소화하였다.
시료에 의한 해열 활성을 확인하기 위하여, 실시예 1.1.(1)에 기재된 바와 같이 수득된 삼차고 분획물 MP-001, 또는 삼차고로부터 분리한 단일 화합물인 화합물 7을 경구투여하였다. 아무런 시료를 투여하지 않은 음성 대조군(LPS)과 기존 해열 활성이 확인된 아세트아미노펜(Acetaminophen, APAP, Sigma, USA)을 100 ㎎/kg 체중의 용량으로 경구투여한 제1 양성 대조군(APAP) 및 덱사메타손(Dexamethasone, Sigma, USA)을 5 ㎎/kg 체중의 용량으로 경구투여한 제2 양성 대조군(Dexamethasone)을 사용하였다.
실험동물에 투여된 약물 및 투여 용량을 하기 표 6에 기재하였다.
군(n=6) 투여 약물 및 투여 용량
음성 대조군 LPS (500 ㎍/kg 체중)
MP-300 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 삼차고 분획물 MP-001 (300 mg/kg 체중)
MP-100 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 삼차고 분획물 MP-001 (100 mg/kg 체중)
MP-50 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 삼차고 분획물 MP-001 (50 mg/kg 체중)
화합물 7 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 화합물 7 (30 mg/kg 체중)
화합물 7 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 화합물 7 (10 mg/kg 체중)
화합물 7 LPS (500 ㎍/kg 체중) + 화합물 7 (5 mg/kg 체중)
화합물 8(비교예) LPS (500 ㎍/kg 체중) + 화합물 8 (100 mg/kg 체중)
제1 양성 대조군(APAP) LPS (500 ㎍/kg 체중) + 아세트아미노펜 (100 mg/kg 체중)
제2 양성 대조군(덱사메타손) LPS (500 ㎍/kg 체중) + 덱사메타손 (5 mg/kg)
발열물질 투여 후 8 시간 동안 실험동물의 직장 체온을 측정하였다. 측정 결과를 표 7, 표 8, 및 도 3에 나타내었다. 하기 표 7 및 표 8의 수치는 각 시간별로 측정한 체온(℃)의 평균을 의미한다(*: p < 0.05, **: p < 0.01).
음성 대조군 MP -300 MP -100 MP -50 APAP 덱사메타손
0 시간 36.8±0.12 36.9±0.07 37.0±0.07 36.9±0.17 37.3±0.10 37.2±0.09
1 시간 36.7±0.11 36.2±0.19 36.9±0.12 36.9±0.15 36.6±0.16 36.7±0.11
2 시간 36.7±0.23 35.8±0.27* 36.7±0.22 36.4±0.06 35.6±0.28* 36.7±0.16
3 시간 37.0±0.25 36.6±0.15 36.9±0.19 37.0±0.13 35.9±0.27* 37.0±0.09
4 시간 37.2±0.17 36.5±0.25* 36.9±0.12 37.0±0.10 36.1±0.20** 37.0±0.14
5 시간 37.4±0.06 36.3±0.29* 37.0±0.19 36.9±0.09** 35.7±0.19** 36.9±0.23
6 시간 37.4±0.05 36.5±0.19** 37.0±0.18 36.9±0.09** 36.3±0.26** 36.9±0.34
음성 대조군 화합물 7
(30 mg/kg)		 화합물 7
(10 mg/kg)		 화합물 7
(5 mg/kg)		 화합물 8
(100mg/kg)		 APAP 덱사메타손
0 시간 36.8±0.12 36.8±0.13 37.3±0.27 37.0±0.09 37.0±0.16 37.3±0.10 37.2±0.09
1 시간 36.7±0.11 36.9±0.09 36.8±0.20 36.7±0.27 36.7±0.28 36.6±0.16 36.7±0.11
2 시간 36.7±0.23 36.6±0.24 36.9±0.21 36.7±0.18 36.3±0.50 35.6±0.28* 36.7±0.16
3 시간 37.0±0.25 36.8±0.20 36.8±0.13 36.8±0.17 36.6±0.37 35.9±0.27* 37.0±0.09
4 시간 37.2±0.17 36.6±0.09* 36.8±0.11 37.1±0.12 36.9±0.23 36.1±0.20** 37.0±0.14
5 시간 37.4±0.06 36.7±0.14** 36.5±0.32* 37.1±0.14 37.1±0.13 35.7±0.19** 36.9±0.23
6 시간 37.4±0.05 36.7±0.09** 36.6±0.27* 37.2±0.12 37.3±0.11 36.3±0.26** 36.9±0.34
상기 표 7에 나타난 바와 같이, 발열물질(LPS)을 투여한 후 3 시간이 경과된 시점부터 체온이 상승하기 시작하여 6 시간에 도달하였을 때에는 초기 체온보다 약 0.6℃ 증가하였다. 그러나, 삼차고 분획물(MP-001)을 투여한 경우, 발열물질을 투여했음에도 불구하고 체온이 증가하지 않고 오히려 초기 체온보다 감소하였다. 발열물질(LPS) 투여 후 6 시간에 대조군의 체온은 37.4±0.05℃로 상승한 반면, 삼차고 분획물 MP-001을 300 mg/kg 농도로 투여한 군에서는 36.5±0.19℃의 체온을 유지하였다. 또한, 삼차고 분획물 MP-001을 50 mg/kg 및 100 mg/kg 농도 투여군에서도 체온이 평균 37.0℃ 수준에 머물러, 체온이 대조군보다 약 0.5℃ 정도로 낮았다. 따라서, 삼차고 분획물은 통계적으로 유의한 체온 증가 억제 효능을 갖는다는 것을 확인하였다.
한편, 양성대조군으로서, 발열물질 투여 후 6시간에 APAP를 투여한 군에서 36.3±0.26℃, 덱사메타손 투여군에서는 36.9±0.34℃를 각각 나타내었다. 삼차고 분획물 MP-001을 300 mg/kg 농도로 투여한 MP-300군(36.5±0.19℃)과 비교하면, APAP 투여군의 체온은 MP-300군의 체온보다 약 0.2℃ 낮았고, 덱사메타손 투여군의 체온은 MP-300군의 체온보다 약 0.4℃ 높았다. 따라서, 삼차고 분획물은 APAP 보다는 다소 약하지만 덱사메타손보다는 좀더 우수한 체온상승 억제효능을 갖고 있는 것으로 판단되었다.
또한, 표 8에 나타난 바와 같이, 화합물 7을 30 및 10 mg/kg으로 투여한 군의 평균 체온은 발열물질 투여 후 6시간에 각각 36.7±0.09℃ 및 36.6±0.27℃이었고, 대조준의 평균 체온은 동일한 시간에 37.4±0.05℃이었다. 화합물 7 투여군의 평균 체온이 대조군의 평균 체온보다 약 0.7 내지 약 0.8℃ 낮았다. 따라서, 화합물 7이 발열물질 투여에 따른 체온상승은 유의하게 억제하는 활성을 갖는다는 것을 확인하였다. 또한, 양성대조군의 APAP 및 덱사메타손 투여군과 비교하면, 화합물 7 투여군의 평균 체온이 약 0.2℃ 내지 0.4℃ 정도의 차이는 있었지만, 화합물 7이 양성 대조군인 APAP 및 덱사메타손과 유사한 정도의 체온상승 억제 효능을 갖는다는 것을 확인하였다. 하지만, 화합물 7을 5 mg/kg으로 투여하였을 경우에는 이와 같은 체온상승 억제 효과를 관찰할 수 없었고, 삼차고 분획물 MP-001에 존재하는 화합물 8(비교예)의 경우에도 체온상승 억제 효과를 관찰할 수 없었다.
그러므로, 삼차고 분획물 MP-001 및 화합물 7은 해열 활성이 있음을 확인하였다.
2. 삼차고 분획물 MP -001의 독성 확인
(1) 급성 독성
삼차고 분획물 MP-001을 단기간에 과량을 섭취하였을 때의 급성적(24시간 이내)으로 동물 체내에 미치는 독성을 확인하고, 치사율을 결정하였다.
일반적인 마우스인 ICR 마우스 계통 20마리(코아텍, 대한민국)를 준비하였고, 각 군별로 10마리씩 배정하였다. 음성 대조군에는 30%(v/v) PEG-400만을 투여하고, 실험군은 상기 삼차고 분획물 MP-001을 1.0 g/㎏ 체중의 용량으로 경구 투여하였다. 약물 투여 약 24시간 후에 각각의 치사율을 조사한 결과, 대조군과 1.0g/㎏ 용량의 삼차고 분획물 MP-001을 투여한 실험군에서는 모두 생존하였다.
(2) 장기 및 조직 독성 실험
장기 독성 실험은 C57BL/6J 생쥐를 대상으로 동물의 각 장기(조직)에 미치는 영향을 조사하였다.
삼차고 분획물 MP-001을 1.0g/㎏ 체중의 용량으로 투여한 실험군과 용매만을 투여한 대조군의 마우스로부터 8주 후 혈액을 채취하여 GPT(glutamate-pyruvate transferase) 및 BUN(blood urea nitrogen)의 혈액 내 농도를 Select E(Vital Scientific NV, Netherland) 기기를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 간독성과 관계있는 것으로 알려진 GPT와 신장 독성과 관계있는 것으로 알려진 BUN의 경우, 대조군과 비교하여 실험군은 별다른 차이를 보이지 않았다. 또한, 각 동물로부터 간과 신장을 절취하여 통상적인 조직 절편 제작 과정을 거쳐 광학 현미경으로 조직학적 관찰을 시행하였으며 특이한 이상이 관찰되지 않았다.

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  13. 하기 화학식의 3,5-디-C-β-D-글루코피라노시드 플로로아세토페논(3,5-di-C-β-D-glucopyranosyl phloroacetophenone), 이의 입체이성질체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 해열용 또는 통증억제용 약학적 조성물:
    Figure 112018048273681-pat00023
    .
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  15. 유효성분인 하기 화학식의 3,5-디-C-β-D-글루코피라노시드 플로로아세토페논, 이의 입체이성질체, 또는 약학적으로 허용가능한 염을 열이 나거나 통증이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 해열시키거나 통증을 억제시키는 방법으로서,
    상기 개체는 인간을 제외한 포유동물인 것인 방법:
    Figure 112018048273681-pat00024
    .
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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논문(Chinese Traditional and Herbal Drugs, 45(14), 2014)*
논문(Journal of Biomedicine and Biotechnology, Volume 2010, Article ID 937642, 6 pages)*
논문(Phytochemistry, Volume 65, Issue 1, January 2004, Pages 127-137)*

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