KR101876423B1 - 치매 모델 형질전환 마우스 및 이를 이용한 스크리닝 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 타우 올리고머 형성 스크리닝용 벡터 쌍이 도입된 마우스 수정란, 이로부터 수득한 치매 모델 형질전환 마우스, 및 이를 이용한 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.

Description

치매 모델 형질전환 마우스 및 이를 이용한 스크리닝 방법{Dementia Model Transgenic Mouse and Screening Method using thereof}
본 발명은 타우 올리고머 형성 스크리닝용 벡터 쌍이 도입된 마우스 수정란, 이로부터 수득한 치매 모델 형질전환 마우스, 및 이를 이용한 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
타우 단백질은 분자량이 50,000 내지 70,000을 나타내는 미소관결합단백질의 일종으로, 인산화에 의해 현저한 분자 다양성을 나타낸다. 인간에서 타우는 6 종류의 동형으로 구성되어 있는데, N 말단부분의 29 또는 58 아미노산 잔기의 삽입, C 말단의 3 개 또는 4 개의 반복구조(미소관 결합부위라고 함)의 이어맞추기에서 6 개의 동형이 생성된다. 이전에는 타우 단백질이 중추신경계에 특이적이고 주로 축삭에 존재한다고 생각했지만 현재는 비교적 많은 조직에, 신경세포 외의 성상세포, 올리고수지신경교에 발현하고 있다는 것, 또한 축삭만이 아니라 수상돌기에도 존재한다는 것이 알려져 있다. 타우는 미소관의 안정성에 기여하고, 인산화에 의한 과도한 타우 단백질 응집은 다양한 뇌신경 질환을 유발한다. 즉, 알츠하이머 병을 포함한 이마 측두엽 변성증(Frontotemporal lobar degeneration, FTLD), 픽병 (Pick’s disease), 피질기조퇴행 (Corticobasal degeneration, CBD), 퇴행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy, PSP) 등의 중추 신경계 질환들은 타우 (Tau) 단백질로 구성된 응집체를 포함하는 것으로 알려졌다. 이러한 병리학적인 특징 때문에 이 신경질환들을 통틀어 타우병증(tauopathies)이라고 부른다. 타우병증 환자에게서 보이는 타우 단백질의 응집체는 주로 신경세포의 세포체와 수상돌기에서 발견되며, 이를 신경원섬유덩굴 (Neurofibrillary tangles, NFT)과 신경그물실(neuropil threads)이라 부른다. 신경원섬유덩굴을 살펴보면 타우 단백질이 가는 실 같이 엉켜있는 이중 나선 섬유(paired helical filaments, PHFs)로 이루어지며 이는 정상적인 타우 단백질과는 다르게 응집되고 과인산화가 일어나 있다. 비록 타우병증에서 보이는 비정상적인 타우 단백질의 응집현상이 질병 심화 단계에서 어떤 역할을 하는지 정확히 알져지진 않았지만 헌팅턴, 파킨슨, 크로이츠펠트-야콥병(광우병) 등 퇴행성 뇌질환에서 공통적으로 나타나는 응집현상과 비슷하며, 신경원섬유덩굴 형성과 인지 능력상실 사이에 유의미한 상관 관계를 가지는 점 등을 비추어 볼 때 타우 단백질이 중요한 역할을 하는 것은 분명하다.
최근의 일련의 연구결과에 따르면, 신경섬유얽힘이 아닌 다양한 타우 올리고머가 직접적으로 신경세포 독성을 일으킬 뿐 아니라 뇌의 다른 부위로 전이되어 타우병증을 확산시킨다고 알려졌다. 예를 들어, Mirbaha 그룹은 타우삼합체 형태를 세포가 받아들일 수 있는 세포 내부의 타우를 위한 구조 변형 기반체로 제안하였다. 이와 반대로, Michel 그룹은 고해상 이미징을 통해 타우단량체가 적합한 기본 전이 형태라고 제안한 바 있다. 2013년에 Wu 그룹은 이량체 또는 삼량체 단위의 낮은 분자량의 타우가 세포간 전이 되는 기본 형태라고 제안하였다. 일련의 생화학적 실험기법을 통해 타우 단백질을 분리하여 독성 올리고머를 규명한 연구는 일부 발표된 바 있으나, 하지만 아직까지 뇌에서 타우 올리고머의 생성을 직접적으로 관찰한 예는 없었는데, 타우 올리고머의 관찰을 어렵게 하는 가장 큰 이유는 과량으로 존재하는 정상 타우 단백질로부터 응집초기의 올리고머를 선별적으로 구분할 수 있는 실험 방법의 부재이다. 또한, 신경세포 내의 타우 응집을 검출하기 위한 방법으로, 타우 항체를 이용하는 면역 요법 기술(미국 등록특허 US 8778343, 미국 공개특허 US 2013-0209453 및 US 2014-0161875)과 줄기세포를 이용한 타우-질병 세포 모델 (미국 공개특허 US 2014-0011197) 등의 기술이 개발되어 있으나, 살아있는 세포에서 실시간으로 타우 응집 기전을 모니터링할 수 있는 세포 모델에 관한 기술 개발은 미비한 실정이다.
본 발명자들은 타우 올리고머의 형성에 의해 뇌에서 형광을 발현하는 치매 모델 형질전환 마우스의 제조 방법을 개발하였다. 상기 개발된 형질전환 마우스는 이분자 형광 상보성 기술(BiFC)에 의해 타우 올리고머의 형성 여부를 탐지할 수 있는 마우스 모델이다. 특히, 본 발명은 마우스의 생체 조직 내에서 타우 올리고머의 형성을 탐지할 수 있게 해 주는 형질전환 마우스를 제공함으로써 조직, 특히 뇌 내에서의 타우 올리고머 형성을 직접적으로 탐지할 수 있고 나아가 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝을 가능하게 하며, 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 탐지, 나아가 아직까지 완치 방법이 개발되지 않은 치매 등의 질병의 치료제에 대한 접근을 가능하게 할 것으로 기대된다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본원에 기재된 다양한 구현예가 도면을 참조로 기재된다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략할 수 있다.
본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
명세서에서 특별한 정의가 없으면 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.
본원의 제 1 측면은, 서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 2로 표시되는 제 1 링커, 및 서열번호 3으로 표시되는 제 1 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 1 벡터; 및 서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 4로 표시되는 제 2 링커, 및 서열번호 5로 표시되는 제 2 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 2 벡터를 포함하는 타우 단백질 응집 스크리닝용 벡터 쌍이 도입된 마우스 수정란을 제공한다.
타우 단백질(Tau)은 분자량이 50,000~70,000을 나타내는 미소관결합단백질의 일종으로서, 뇌신경 세포 내의 비정상적인 타우 단백질(tau)의 응집은 알츠하이머병 (Alzheimer's disease, AD) 및 다른 여러 신경퇴행성 질병들 (집합적으로, 타우병증(tauopathies)이라 부름)에 있어서 주된 원인으로 알려져 있다 (Biochimica. et biophysica. acta. 1739: 331-354). 건강한 신경에서, 타우는 축색돌기(axon)로부터의 성장 및 신경 세포 분극화(polarization)를 촉진함으로써 마이크로세관(microtubules)을 안정화한다. 병리학적으로 과인산화(hyperphosphorylation)되는 경우에, 타우는 마이크로세관으로부터 분리되어 불용성 응집물을 생성한다(Mol. Neurodegener. 4: 13). 여러 해에 걸쳐서 타우 응집에 대한 구조적 골격이 제안된 바 있으며, 10 개의 가용성 모노머들로부터 불용성 필라멘트가 형성되고, 이러한 필라멘트가 신경섬유매듭(neurofibrillary tangles, NFTs)이라 불리우는 고차원 구조로 결합된다는 증거들이 제안된 바 있다. 그러나, 아직까지도 타우병증에 있어서 신경섬유매듭들의 병리생리학적 중요성, 이러한 과정을 유발하는 원인 및 분자적 메카니즘에 대해서는 그다지 알려진 바가 없는데, 이는 생리학적 조건 하에서 타우 응집을 모니터링하기 위한 신뢰성 있는 방법이 존재하지 않는다는 점 때문이다. 현재까지 타우 응집에 대한 대부분의 연구들은 정제된 타우 또는 타우 단편을 사용하여 비생리학적 조건 하에서 수행되었다. 더 나아가, 타우는 용해도가 극히 높기 때문에, 타우 응집은 헤파린과 같은 보조인자를 첨가함으로써 인위적으로 유도된다. 이러한 이유로, 살아있는 동물 내에서 타우 올리고머의 형성을 유도하고 이를 모니터링할 수 있는 동물 모델은 타우 병리학을 연구하고, 그 과정을 방지 및 되돌릴 수 있는 방법들을 개발하는데 유용한 도구가 될 수 있다.
본원발명은 이분자 형광 상보 기법(BiFC), 즉 관심 단백질에 부착된 비형광성 구성요소로부터 형광 단백질 복합체를 형성하는 기술에 기반을 둔 단백질-단백질 상호작용을 가시화하기 위한 방법(Annu. Rev. Biophys. 37: 465-487)을 응용한 것이다. 종래에는 분할 녹색 형광 단백질 (green fluorescent protein, GFP) 상보 기법이 타우 응집을 정량화하기 위해 사용되었는데, 이는 타우를 더 작은 GFP 단편들에 융합시키고(GFP 11), 더 큰 GFP 단편(GFP 1-10)을 갖는 세포들에서 발현키는 방법이었다. 타우가 모노머 또는 작은 응집체로 존재하는 경우에는 큰 GFP 단편이 타우에 융합된 작은 GFP 단편에 접근할 수 있으며, 이로 인해서 형광 활성을 갖는 GFP의 결합이 이루어진다. 그러나, 타우가 응집하는 경우에는 활성 GFP의 재구성이 억제되고, 세포들에서 GFP 형광이 감소하게 된다. 따라서 타우의 응집을 정량화하는 방법으로서 상기 분할-GFP 분석법이 제안되었지만, 분해능이 낮고 형광의 감소를 측정할 수 있는 범위가 제한적이므로, 신경 독성의 원인이 되는 타우 올리고머의 생성과정을 모니터링하기에는 적합하지 않은 문제점이 제기되었다.
황색 형광 단백질(yellow fluorescence protein, YFP)의 일종인 비너스(Venus) 단백질을 이용한 BiFC는 서로 다른 두 표적 단백질들이 상호작용을 하기 위해 근접하게 되면 표적 단백질에 연결된 형광단백질 절편 또한 가까워지게 되고, 그 결과 형광 절편 단백질 사이에 재구성(reconstruction)이 일어나게 되어 형광을 발하게 되는 원리를 이용한 것이다. 이를 이용하면 두 표적 단백질간에 상호작용이 일어났음을 시각적으로 확인할 수 있으므로, 세포 또는 조직 내, 즉 단백질간 상호작용이 일어나고 유지될 수 있는 최적의 물리·화학적인 환경하에서 단백질간 상호작용을 직접 눈으로 확인할 수 있는 장점이 있다. 이 기술은 세포 또는 조직 내에서 단백질 상호작용이 일어나는 위치뿐만 아니라 이들의 움직임 정보까지도 확인 가능하게 한다.
본원에서 사용되는 형광 단백질은 비너스 단백질일 수 있는데, 비너스 단백질은 (1) 빠르고 효과적으로 성숙되고 (maturation), (2) 자가-조립 (self-assembly) 속도가 다른 BiFC 쌍들에 비해서 낮으며, (3) 비너스계 BiFC의 형광 강도가 EYFP계 BiFC의 형광 강도보다 10 배 더 높은 특징을 보이므로 (Biotechniques 40: 61-66.; Biotechniques 49: 793-805) 타우 단백질과 같이 시공간적으로 분석하기 어려운 세포내 단백질 분석에 유용하게 사용될 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 전장타우 유전자는 인간 전장타우 유전자 Tau-P301L일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 Thy1 프로모터를 포함하는 제 1 벡터 및 제 2 벡터는 각각 Thy1 프로모터를 포함하는 pTSC21K 벡터일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. Thy1 프로모터는 신경세포에서 특이적으로 발현하기 때문에, 신경 세포 또는 신경 조직, 특히 뇌조직 내에서 상기 벡터에 삽입된 유전자를 발현시킬 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 전장타우 유전자, 제 1 링커 펩타이드 및 제 1 형광 단백질, 및 상기 전장타우 유전자, 제 2 링커 펩타이드 및 제 2 형광 단백질은 각각 pTSC21K 벡터의 Xho I 자리에 삽입된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 제1 벡터는 서열번호 6의 염기서열을 포함하고, 상기 제 2 벡터는 서열번호 7의 염기서열을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 마우스 수정란은 생물자원센터에 수탁번호 KCTC13076BP로 기탁된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 제 2 측면은, 본원의 제 1 측면에 따른 마우스 수정란으로부터 수득한 치매 모델 형질전환 마우스를 제공한다.
상기 형질전환 마우스에서는 인간 전장 타우 단백질 및 이와 연결된 두 종류의 비너스 단백질 (VN173 및 VC155)이 Thy1 프로모터에 의해 발현된다. 상기 Thy 프로모터는 신경세포에서 특이적으로 작동하기 때문에, 상기 마우스의 뇌에서 VN173 및 VC155를 각각 가지는 타우 단백질이 올리고머를 형성하면 상기 비너스 단백질에 의해 BiFC 형광이 발현된다. 이러한 원리로 인해, 마우스의 뇌 조직 내에서의 타우 올리고머의 형성 여부 및 정도를 시각화하여 관찰하는 것이 가능하다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 마우스는 상기 제 1 벡터로부터 발현되는 전장타우와 상기 제 2 벡터로부터 발현되는 전장타우가 올리고머를 형성하는 경우 상기 제 1 형광 단백질 및 상기 제 2 형광 단백질에 의해 형광이 발현되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 제 3 측면은, 본원의 제 2 측면에 따른 형질전환 마우스의 뇌에서 타우 올리고머의 형성을 유도하는 단계; 상기 형질전환 마우스의 뇌의 타우 올리고머의 형성 정도를 평가하는 단계; 상기 형질전환 마우스에 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질을 투여하는 단계; 상기 형질전환 마우스의 뇌의 타우 올리고머 형성 정도를 평가하는 단계; 및 상기 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질 투여 전후의 타우 올리고머의 형성 정도를 비교하는 단계를 포함하는, 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝 방법을 제공한다. 예를 들어, 상기 타우 올리고머의 형성 정도를 평가하는 단계는 형광 단백질, 즉 비너스 단백질의 형광 발광 정도를 정량화하여 평가하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 형질전환 마우스의 뇌에서 타우 올리고머의 형성을 유도하는 단계는, 형질전환 마우스에 폴스코린(forskolin) 또는 오카다산(okadaic acid)을 투여하는 것을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 폴스코린 및 오카다산은 타우 단백질의 과인산화를 유도하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명에 따르면, 마우스의 뇌 내에서 일어나는 타우 올리고머의 형성을 형광을 통해 직접적으로 가시화함으로써 뇌 내에서의 타우 올리고머화 과정을 모니터링하고 정량할 수 있다. 이러한 기술을 이용하면 타우 단백질이 관여하는 치매와 같은 질병의 발생을 연구하고 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝이 가능하여 치매 치료제의 개발에 있어서 유용한 수단으로 활용될 수 있다.
도 1a 및 도 1b는 각각 본원의 일 실시예에서 사용된 pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21K-TauP301L-VC155 재조합 플라스미드의 구조를 나타낸 개략도이다.
도 2a 및 도 2b는 각각 본원의 일 실시예에서 사용된 pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21K-TauP301L-VC155 재조합 플라스미드의 서열 확인 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본원의 일 실시예에 따라 pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21K-TauP301L-VC155 재조합 플라스미드가 도입된 SH-SY5Y 세포에서 타우 올리고머의 형성에 의해 발현되는 BiFC 형광을 확인한 이미지이다.
도 4는 본원의 일 실시예에 따라 제조된 pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21K-TauP301L-VC155 재조합 플라스미드를 각각 선형화한 뒤 전기영동한 결과를 나타낸 이미지이다.
도 5는 본원의 일 구현예에 따른 형질전환 생쥐의 제작 방법을 나타낸 개략도이다.
도 6은 본원의 일 실시예에 따라 형질전환된 마우스에서 TauP301L-VN173 및 TauP301L-VC155 단백질이 정상적으로 발현되는지 여부를 확인한 웨스턴 블롯 결과이다.
도 7은 본원의 일 실시예에 따라 제작된 형질전환 마우스의 뇌조직에서 타우 올리고머 형성에 따라 관찰되는 BiFC 형광을 나타낸 사진 이미지이다.
도 8은 본원의 일 실시예에 따라 제작된 형질전환 마우스의 뇌조직에서 타우 올리고머 형성에 따라 관찰되는 BiFC 형광과 AT8 면역형광염색을 비교하여 나타낸 사진 이미지이다.
도 9는 본원의 일 실시예에 따라 타우 올리고머 형성 유도 물질을 주입한 형질전환 마우스의 뇌조직에서 BiFC 형광 발현을 관찰한 사진 이미지이다.
본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해 될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
[실시예]
1. 신경세포-특이적 타우 올리고머 형성 스크리닝용 벡터 제작
마우스의 신경세포 특이적으로 타우단백질을 발현하기 위해, tau-VN173, tau-VC155 두 개의 이분자 형광 상보 기법(BiFC) 컨스트럭트(construct)를 Thy1 프로모터가 포함된 323-pTSC21K 벡터에 클로닝하였다.
특히, 본원에서는 비너스 (Venus) 기반의 BiFC 시스템을 사용하여 벡터를 제작하였다. 이를 위해, 포유류 발현 벡터 pCMV6-hTau40-GFP를 미국 OriGene Technologies Inc. (Rockville, MD)로부터 구입하였고 위치지정돌연변이 (site directed mutagenesis)를 이용하여 301번째 아미노산 proline을 leucine으로 치환하여 pCMV6-hTau40P301L-GFP를 제작하였다. 사용된 전방 및 후방 프라이머 서열은 아래의 표 1에 나타내었다.
[표 1]
Figure 112016098000648-pat00001
GFP를 비너스 형광 단백질 단편으로 치환하기 위하여 pBiFC-VN173 및 pBiFC-VC155를 Addgene (Cambridge, MA)으로부터 구입 후, XhoI/PmeI 제한효소 서열을 갖는 PCR 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 각각의 전방 및 후방 프라이머 서열은 아래의 표 2에 나타내었다. 이 후, 치환된 인간 전장 타우 (441개 아미노산)를 형광 단백질인 비너스의 N-말단 단편 (1-172, VN173)(제 1 형광 단백질) 및 C-말단 단편 (155-238, VC155)(제 2 형광 단백질)에 융합시켰다.
[표 2]
Figure 112016098000648-pat00002
pCMV6-TauP301L-GFP 및 PCR 증폭된 인써어트를 XhoI/PmeI를 사용하여 절단하고 접합시킴으로써 삽입 유전자인 pCMV6-TauP301L-VN173 및 pCMV6-TauP301L-VC155를 제작하였다. 각각의 제작에 사용된 링커 펩타이드 및 형광 단백질의 서열을 아래의 표 3 및 표 4에 나타내었다.
[표 3]
Figure 112016098000648-pat00003
[표 4]
Figure 112016098000648-pat00004
마우스 thy1.2 유전자로부터 유래한 Thy1 프로모터는 마우스 뇌 신경세포에서 특이적으로 발현하는 프로모터이다. 마우스 Thy1 유전자(Mouse Thy-1.2 glycoprotein gene)는 총 5572 bp이며, 3 개의 엑손 부위와 3 개의 인트론 부위를 포함하는데, TauP301L-VN173 및 Tau-P301L-VC155는 Thy1 유전자의 엑손 3 번 부위에 삽입되었다.
삽입 유전자로 준비된 pCMV6-TauP301L-VN173 및 pCMV6-TauP301L-VC155의 2 가지 타우-BiFC 플라스미드를, 323-pTSC21K 벡터의 Xho 1 자리에 클로닝하였다. 이와 같이 제조된 재조합 플라스미드 pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21K-TauP301L-VC155의 개략도는 각각 도 1a 및 도 1b에 나타나 있다. 재 클로닝 과정을 거친 후, pTSC21K-TauP301L-VN173 및 pTSC21KTauP301L-VC155가 성공적으로 제작되었는지 여부를 확인하기 위해 상기 2 가지 재조합 플라스미드의 삽입 부위(insert)와 그 주변부의 서열을 재확인하였다. 확인된 재조합 플라스미드들의 서열은 도 2a 및 도 2b에 나타나 있다. 이어서, Thy1 프로모터의 작동하에 TauP301L-BiFC의 발현을 확인하기 위해 재조합 플라스미드들을 SH-SY5Y 세포에 형질도입하였으며, 24 시간 후 신경세포 내에서 TauP301L-BiFC 의 정상적인 발현을 확인하였다. TauP301L-BiFC를 발현하는 SH-SY5Y 세포의 형광현미경 관찰 이미지가 도 3에 나타나 있다.
2. 형질전환 마우스 모델 제작
마우스 수정란에 주입하기 위해, 먼저 재조합 플라스미드 Thy1-TauP301L-VN173 및 Thy1-Tau-P301L-VC155를 EcoRI 제한효소로 잘라 선형화(linearization) 하였다. EcoRI에 의해 선형화된 플라스미드를 전기영동으로 확인한 결과가 도 4에 나타나 있다. 형질전환 마우스를 만들기 위해서 확인된 플라스미드를 수정란에 주입하였다. 먼저, 수정란을 얻기 위해서 C57BL/6N 암컷쥐에게 임신말 혈청성 성선 자극 호르몬 (pregnant mare serum gonadotropin)와 사람 융모막성 성선자극호르몬(Human chorionic gonadotropin)을 주입하여 과배란을 유도하였다. 과배란이 유도된 C57BL/6N 암컷쥐는 C57BL/6N 수컷쥐와 교배하고, 교배 후 임신이 확인 된 C57BL/6N 암컷으로부터 수정란을 확보하였다. 확보된 수정란 중 남성 전핵 (male pronucleus of zygote)에 Thy1-TauP301L-VN173 및 Thy1-Tau-P301L-VC155를 발현하는 벡터를 주입하고 주입된 수정란은 다시 ICR 대리모에 이식되었다. 이 후, 지노타이핑(genotyping)을 통해 TauP301L-VN173 및 TauP301L-VC155 두 가지 유전자를 모두 가지고 있는 마우스를 확보하였다 (도 5). 이후, 상기 유전자들의 도입에 의해 TauP301L-VN173 및 TauP301L-VC155 단백질 모두가 정상적으로 발현되는지를 확인하기 위해 웨스턴 블로팅(western blotting)을 진행하였다. 먼저, 3 개월령의 유전자변형 마우스를 마취하여 뇌를 적출하고, 적출된 뇌를 포스포타제(phosphatase)와 프로테아제(protease)가 혼합된 RIPA에서 용해하여 단백질 분석이 가능한 뇌 용출물(lysate) 샘플을 준비하였다. 40 ㎍의 샘플을 로딩하여 인산화된 타우를 표지하는 타우 항체 pS199와 pS396과의 항원-항체 반응을 확인하였으며, 그 결과 정상적인 대조군 마우스와 비교하였을 때, 벡터가 주입된 마우스 수정란으로부터 수득된 마우스에서 TauP301L-VN173 및 TauP301L-VC155가 정상적으로 발현되는 것을 확인하였다 (도 6).
3. 형질전환 마우스에서 타우병증의 관찰
제작된 Tau-P301L BiFC 형질전환 마우스는 뇌 내에서 타우 단백질이 올리고머를 형성했을 때 형광이 발현하게 된다. 실제로 Tau-P301L BiFC 형질전환 마우스의 뇌조직에서 타우 올리고머 형성에 의해 형광이 관찰되는지를 확인하기 위해, 7 개월령의 마우스의 뇌를 관류 후 고정하여 적출하고, 적출된 뇌를 40 ㎛의 두께로 절편화 하였다. 면역형광염색 없이 다양한 영역의 뇌조직 절편의 이미징 결과, BiFC 형광이 관찰되었다. 구체적으로, 종래에 타우를 발현하는 동물모델에서 타우 응집이 나타난다고 알려진 해마(hippocampus), 피질(cortex), 편도체(amygdala) 등에서 BiFC 형광의 확인이 가능하였다. 뇌조직 절편에서 발현되는 BiFC 형광의 이미지가 도 7에 나타나 있다. 상기 마우스 뇌조직에서 발현되는 BiFC 형광이 타우 올리고머의 형성에 의한 것임을 검증하기 위하여, 인산화된 타우를 표지하는 타우 항체인 AT8을 이용하여 동일한 뇌조직 절편에서 면역형광염색을 진행하였다. 그 결과, BiFC 형광 발현이 AT8에 의해 표지되는 형광반응과 일치하는 것을 확인하였다 (도 8).
4. 형질전환 마우스에서 타우 올리고머 형성 유도 확인
아직 타우의 응집현상이 나타나지 않는 4 개월령의 Tau-P301L BiFC 형질전환 마우스에서, 타우의 응집을 유도하는 물질을 주입함에 따라 타우 올리고머 BiFC형광을 관찰할 수 있는지를 확인하였다. 약물 주입 키트에 타우 응집 유도 약물인 폴스코린(forskolin)을 채운 후 약물이 약 5 개월령의 Tau-P301L BiFC 형질전환 마우스의 뇌 내 뇌실(ventricle)을 통해 흘러들어갈 수 있도록 하였다 (도 9). 약 10 일의 약물 주입 시간이 지난 후, BiFC 형광 관찰을 위하여 뇌절편 샘플을 제작하였다. 그 결과, 대조군으로 주입된 DMSO에 비하여 폴스코린이 주입된 Tau-P301L BiFC 형질전환 마우스의 뇌에서 주입된 영역 주변부에서 BiFC 형광이 관찰되었다. 본 결과는 폴스코린 약물 주입에 의해 마우스의 뇌 내에서 타우 올리고머 형성이 가속화되었음을 보여주는 것이다. 뿐만 아니라 별도의 항체 표지 없이 타우 올리고머의 형성 정도를 직접적으로 관찰 할 수 있음이 증명되었다.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 겹합된 형태로 실시될 수 있다.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> Korea Institute Of Science And Technology <120> Dementia Model Transgenic Mouse and Screening Method using thereof <130> 1 <160> 7 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1323 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggctgagc cccgccagga gttcgaagtg atggaagatc acgctgggac gtacgggttg 60 ggggacagga aagatcaggg gggctacacc atgcaccaag accaagaggg tgacacggac 120 gctggcctga aagaatctcc cctgcagacc cccactgagg acggatctga ggaaccgggc 180 tctgaaacct ctgatgctaa gagcactcca acagcggaag atgtgacagc acccttagtg 240 gatgagggag ctcccggcaa gcaggctgcc gcgcagcccc acacggagat cccagaagga 300 accacagctg aagaagcagg cattggagac acccccagcc tggaagacga agctgctggt 360 cacgtgaccc aagctcgcat ggtcagtaaa agcaaagacg ggactggaag cgatgacaaa 420 aaagccaagg gggctgatgg taaaacgaag atcgccacac cgcggggagc agcccctcca 480 ggccagaagg gccaggccaa cgccaccagg attccagcaa aaaccccgcc cgctccaaag 540 acaccaccca gctctggtga acctccaaaa tcaggggatc gcagcggcta cagcagcccc 600 ggctccccag gcactcccgg cagccgctcc cgcaccccgt cccttccaac cccacccacc 660 cgggagccca 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180 cacatggtcc tgctggagtt cgtgaccgcc gccgggatca ctctcggcat ggacgagctg 240 tacaagtaa 249 <210> 6 <211> 2816 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pTSC21K-TauP301L-VN173 <400> 6 gagctctata ggtcttaagt tccagaagaa acgtaatgaa gtcacccagc aggaggtgct 60 cagggacagc aagacacaca cacccaggac actaggctcc cacttccttg gctttctctg 120 agtggcaaag gaccttaggc agtgtcactc cctaagagaa ggggataaag agaggggctg 180 aggtattcag tcatgtgctc cgtggatctc aagccctcaa ggtaaatggg gacccacctg 240 tcctaccagc tggctgacct gtagctttcc ccaccacaga atccaagtcg gaactcttgg 300 cacctagagg atctcgactg gatccggtac cgaggagatc tgccgccgcg atcgccatgg 360 ctgagccccg ccaggagttc gaagtgatgg aagatcacgc tgggacgtac gggttggggg 420 acaggaaaga tcaggggggc tacaccatgc accaagacca agagggtgac acggacgctg 480 gcctgaaaga atctcccctg cagaccccca ctgaggacgg atctgaggaa ccgggctctg 540 aaacctctga tgctaagagc actccaacag cggaagatgt gacagcaccc ttagtggatg 600 agggagctcc cggcaagcag gctgccgcgc agccccacac ggagatccca gaaggaacca 660 cagctgaaga agcaggcatt ggagacaccc ccagcctgga 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gtgtctgggg 1560 acacgtctcc acggcatctc agcaatgtct cctccaccgg cagcatcgac atggtagact 1620 cgccccagct cgccacgcta gctgacgagg tgtctgcctc cctggccaag cagggtttga 1680 cgcgtacgcg gccgctcgag tctagaagat ccatcgccac catggtgagc aagggcgagg 1740 agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca 1800 agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagc 1860 tgatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgggct 1920 acggcctgca gtgcttcgcc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt 1980 ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact 2040 acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga 2100 agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca 2160 acagccacaa cgtctatatc accgccgaca agcagaagaa cggcatcaag gccaacttca 2220 agatccgcca caacatcgag tagggatccc gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg 2280 cctctcctgg ccctggaagt ttaaacggcc ggccgcggtc atagctgttt cctgaacaga 2340 tcccgggtgg catccctgtc gaggtccttc ctctgcagag gtcttgcttc tcccggtcag 2400 ctgactccct ccccaagtcc ttcaaatatc tcagaacatg gggagaaacg gggaccttgt 2460 ccctcctaag gaaccccagt gctgcatgcc atcatccccc ccaccctcgc ccccaccccc 2520 gccacttctc cctccatgca taccactagc tgtcattttg tactctgtat ttattctagg 2580 gctgcttctg attatttagt ttgttctttc cctggagacc tgttagaaca taagggcgta 2640 tggtgggtag gggaggcagg atatcagtcc cctggggcga gttcctccct gccaaccaag 2700 ccagatgcct gaaagagata tggatgaggg aagttggact gtgcctgtac ctggtacagt 2760 catactctgt tgaaagaatc atcggggagg ggggggggct caagagggga gagctc 2816 <210> 7 <211> 2510 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pTSC21K-TauP301L-VC155 <400> 7 gagctctata ggtcttaagt tccagaagaa acgtaatgaa gtcacccagc aggaggtgct 60 cagggacagc aagacacaca cacccaggac actaggctcc cacttccttg gctttctctg 120 agtggcaaag gaccttaggc agtgtcactc cctaagagaa ggggataaag agaggggctg 180 aggtattcag tcatgtgctc cgtggatctc aagccctcaa ggtaaatggg gacccacctg 240 tcctaccagc tggctgacct gtagctttcc ccaccacaga atccaagtcg gaactcttgg 300 cacctagagg atctcgactg gatccggtac cgaggagatc 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aataagaagc 1200 tggatcttag caacgtccag tccaagtgtg gctcaaagga taatatcaaa cacgtcccgg 1260 gaggcggcag tgtgcaaata gtctacaaac cagttgacct gagcaaggtg acctccaagt 1320 gtggctcatt aggcaacatc catcataaac caggaggtgg ccaggtggaa gtaaaatctg 1380 agaagcttga cttcaaggac agagtccagt cgaagattgg gtccctggac aatatcaccc 1440 acgtccctgg cggaggaaat aaaaagattg aaacccacaa gctgaccttc cgcgagaacg 1500 ccaaagccaa gacagaccac ggggcggaga tcgtgtacaa gtcgccagtg gtgtctgggg 1560 acacgtctcc acggcatctc agcaatgtct cctccaccgg cagcatcgac atggtagact 1620 cgccccagct cgccacgcta gctgacgagg tgtctgcctc cctggccaag cagggtttga 1680 cgcgtacgcg gccgctcgag aagcagaaga acggcatcaa ggccaacttc aagatccgcc 1740 acaacatcga ggacggcggc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg 1800 gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag ctaccagtcc aaactgagca 1860 aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga 1920 tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aagcggccgc ggggatccag acatgataag 1980 atacattgat gagtttaaac ggccggccgc ggtcatagct gtttcctgaa cagatcccgg 2040 gtggcatccc tgtcgaggtc cttcctctgc agaggtcttg cttctcccgg tcagctgact 2100 ccctccccaa gtccttcaaa tatctcagaa catggggaga aacggggacc ttgtccctcc 2160 taaggaaccc cagtgctgca tgccatcatc ccccccaccc tcgcccccac ccccgccact 2220 tctccctcca tgcataccac tagctgtcat tttgtactct gtatttattc tagggctgct 2280 tctgattatt tagtttgttc tttccctgga gacctgttag aacataaggg cgtatggtgg 2340 gtaggggagg caggatatca gtcccctggg gcgagttcct ccctgccaac caagccagat 2400 gcctgaaaga gatatggatg agggaagttg gactgtgcct gtacctggta cagtcatact 2460 ctgttgaaag aatcatcggg gagggggggg ggctcaagag gggagagctc 2510

Claims (10)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 2로 표시되는 제 1 링커, 및 서열번호 3으로 표시되는 제 1 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 1 벡터; 및
    서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 4로 표시되는 제 2 링커, 및 서열번호 5로 표시되는 제 2 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 2 벡터를 포함하는 타우 올리고머 형성 스크리닝용 벡터 쌍이 도입되며,
    상기 제 1 벡터는 서열번호 6의 염기서열을 포함하고, 상기 제 2 벡터는 서열번호 7의 염기서열을 포함하는 것인, 마우스 수정란.
  6. 서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 2로 표시되는 제 1 링커, 및 서열번호 3으로 표시되는 제 1 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 1 벡터; 및
    서열번호 1로 표시되는 전장타우 유전자, 서열번호 4로 표시되는 제 2 링커, 및 서열번호 5로 표시되는 제 2 형광 단백질 유전자가 작동가능하게 연결된, Thy1 프로모터를 포함하는 제 2 벡터를 포함하는 타우 올리고머 형성 스크리닝용 벡터 쌍이 도입되며,
    수탁번호 KCTC13076BP로 기탁된, 마우스 수정란.
  7. 제 5 항의 마우스 수정란으로부터 수득한, 치매 모델 형질전환 마우스.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 제 1 벡터로부터 발현되는 전장타우와 상기 제 2 벡터로부터 발현되는 전장타우가 올리고머를 형성하는 경우 상기 제 1 형광 단백질 및 상기 제 2 형광 단백질에 의해 형광이 발현되는 것인, 치매 모델 형질전환 마우스.
  9. 제 7 항에 따른 형질전환 마우스의 뇌에서 타우 올리고머의 형성을 유도하는 단계;
    상기 형질전환 마우스의 뇌의 타우 올리고머의 형성 정도를 평가하는 단계;
    상기 형질전환 마우스에 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질을 투여하는 단계;
    상기 형질전환 마우스의 뇌의 타우 올리고머 형성 정도를 평가하는 단계; 및
    상기 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질 투여 전후의 타우 올리고머의 형성 정도를 비교하는 단계를 포함하는, 타우 올리고머 형성 저해 후보 물질의 스크리닝 방법.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 형질전환 마우스의 뇌에서 타우 올리고머의 형성을 유도하는 단계는, 형질전환 마우스에 폴스코린(forskolin) 또는 오카다산(okadaic acid)을 투여하는 것을 포함하는 것인, 스크리닝 방법.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102230812B1 (ko) 2019-04-26 2021-03-23 한국과학기술연구원 세포 내 티디피 43의 올리고머 형성을 모니터링하기 위한 이분자 형광 상보성 아미노산 서열 쌍
CN110841059A (zh) * 2019-12-03 2020-02-28 南通大学 老年性痴呆小鼠模型的制备方法
CA3233101A1 (en) * 2021-09-24 2023-03-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Microtubule associated protein tau (mapt) irna agent compositions and methods of use thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4343695B2 (ja) * 2001-12-20 2009-10-14 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア アルツハイマー病のトリプル・トランスジェニックマウス・モデル
KR20130091288A (ko) * 2012-02-07 2013-08-16 (주)나노몰 타우 단백질 응집현상 검출 시스템

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US287682A (en) * 1883-10-30 Yoke for draft-animals
AU4322999A (en) * 1998-06-01 1999-12-20 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Methods and compositions for diagnosing tauopathies
CA2772379C (en) 2009-08-28 2019-09-24 Rakez Kayed Antibodies that bind tau oligomers
EP2560681A4 (en) 2010-04-22 2013-09-25 Janssen Alzheimer Immunotherap USE OF TAU FOR MONITORING IMMUNOTHERAPY
WO2012112737A2 (en) 2011-02-16 2012-08-23 The Regents Of The University Of California Alzheimer's disease cellular model for diagnostic and therapeutic development
GB201112056D0 (en) 2011-07-14 2011-08-31 Univ Leuven Kath Antibodies
WO2014089104A1 (en) * 2012-12-03 2014-06-12 Washington University Method for detection of aggregates in biological samples
KR101546485B1 (ko) * 2013-10-08 2015-08-26 한국과학기술연구원 세포내 타우 단백질의 상호작용을 모니터링하기 위한 이분자 형광 상보성 아미노산 서열 쌍
KR101721920B1 (ko) * 2015-04-07 2017-04-11 한국과학기술연구원 외상성 자극에 반응하는 타우 응집 세포주

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4343695B2 (ja) * 2001-12-20 2009-10-14 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア アルツハイマー病のトリプル・トランスジェニックマウス・モデル
KR20130091288A (ko) * 2012-02-07 2013-08-16 (주)나노몰 타우 단백질 응집현상 검출 시스템

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Kitazawa, M. et al., Current Pharmaceutical Design, 2012, 18:1131-1147 *
Tak, H. et al., PLOS ONE, December 2013, 8(12):e81682 *
논문(ENEURO, 2016) *
논문(PLOS ONE., 2013) *
뉴클레오타이드 서열(2015) *
뉴클레오타이드 서열(2016.09.) *

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