KR101871042B1 - 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법 - Google Patents

정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 시료 공간(sample chamber), 용해 공간(lysis chamber), 용리 공간(elution chamber) 및 상기 시료 공간, 용해 공간, 용리 공간을 연결하는 채널로 구성된 정지액체상 랩온어칩을 이용하여, 상기 시료 공간에 세포를 포함하는 시료와 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)를 첨가하여 세포-CCP 복합체를 형성하는 단계; 상기 세포-CCP 복합체를 용해공간으로 이동시키고, 상기 세포를 용해시켜서 핵산을 상기 세포로부터 방출하는 단계; 상기 생성된 핵산을 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP) 로 포획하여 핵산-NCP 복합체를 형성하는 단계; 및 상기 핵산-NCP 복합체를 용리 공간으로 이동시켜 핵산을 용리시키는 단계; 를 포함하는 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법에 관한 것이다.

Description

정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법{A method to prepare nucleic acid sample using a stationary liquid phase lab-on-a-chip}
본 발명은 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 정지액체상 랩온어칩에서 핵산 시료를 제조하는 방법에 관한 것이다.
혈액, 조직, 배양 세포, 음식과 같은 시료로부터 핵산을 추출하고 정제하는 핵산 시료 제조과정은 유전형질 분석(genotyping), 전사 분석(transcriptional analysis), 후생유전 분석(epigenetic analysis), 바이러스/박테리아 검출(virus/bacterial detection) 등 핵산을 이용하는 분석방법을 위해 반드시 필요한 과정이다. 핵산을 분석하는 방법은 급격하게 발전해왔지만, 핵산 시료 제조방법은 큰 발전이 없어 분석 과정에 가장 큰 장애가 되고 있다.
통상적으로, 핵산 시료 제조방법은 고체상 추출법(solid phase extraction, SPE) 을 이용하고 있다. 상기 고체상 추출법은 먼저 시료에서 핵산이 들어있는 세포를 용해하여 실리카 멤브레인(silica membrane)이나 실리카 코팅 자성입자(silica-coated magnetic particle) 에 핵산을 결합시키고, 몇 차례 세척과정을 거친 후, 멤브레인이나 입자로부터 핵산을 용리(elution) 시키게 된다.
그러나, 상술한 방법은 여전히 복잡하고, 시간이 많이 소요될 뿐만 아니라 여러가지 기기를 필요로 하여 현장검사에는 적용하기 어려운 단점이 있다. 또한, 핵산 시료 제조 과정을 쉽게 해주는 자동화기기가 있지만 가격이 비싸고, 현장에서는 사용하기 어려운 문제점이 있다.
Sur 등은 핵산 시료 제조를 위해 도 1에 도시한 것처럼 용해와 핵산 포획이 일어나는 용해 우물과 핵산이 용리되는 용리 우물로 구성된 카트리지를 개발했다(Journal of Molecular Diagnostics, Vol. 12, No. 5, pp620-628).
상술한 방법은 용해 우물에 핵산을 포획할 자성입자와 시료를 용해/포획 완충용액과 함께 더하고, 용리 우물에는 용리를 위한 완충용액을 넣은 후 두 우물 위를 액체 왁스로 덮는다. 상기 액체 왁스는 자성입자가 지나갈 수 있도록 두 우물을 연결하는 역할을 하며, 자성입자가 액체 왁스를 지나갈 때 세척도 함께 이루어진다. 따라서 자석의 이동에 의해 자성입자를 용해 우물로부터 용리 우물로 이동시킴으로써 핵산 시료를 제조할 수 있다.
그러나 상술한 핵산 시료 제조방법은 몇 가지 문제점을 가지고 있다.
보다 구체적으로, 첫째, 식품이나 배설물과 같이 찌꺼기가 많은 시료를 용해 우물에 직접 넣을 경우 자성입자에 다른 물질이 결합하여 오염시킬 가능성이 높으며, 다른 물질의 영향으로 용해나 DNA 결합 과정이 잘 이루어지지 못할 수도 있다. 이런 경우에는 세포만 포획하여 불순물로부터 분리한 후 사용하는 것이 바람직하다.
둘째, 사용자가 시료와 용리 용액을 넣은 후 액체 왁스로 위를 덮음으로써 카트리지를 완성시켜야 하기 때문에 사용이 불편하고 일정한 결과를 기대하기 어려울 뿐만 아니라 자동화하기 어렵다. 가능하면 사용자는 시료만 넣고 시작하면 나머지 과정이 자동으로 수행되는 것이 바람직하다.
셋째, 자석의 이동이 수직방향과 수평방향의 두 방향으로 이루어져 복잡하고 비용이 증가한다. 자석의 이동을 위해서는 액츄에이터가 필요한데 한 방향 이동에 비해 두 방향 이동을 위한 액츄에이터는 구조가 복잡해지고 비용이 증가하게 된다.
최근에 정지액체상 랩온어칩에서 고체상인 입자를 이동시킴으로써 면역분석법을 시행하는 기술(등록특허 제10-1398764호)이 제안된 바 있다. 상기 정지액체상 랩온어칩은 서로 다른 과정이 수행되는 공간들과 그 공간들을 연결하는 채널들이 수평으로 배열되어 있어 자석의 수평 이동에 의해 입자의 이동이 가능한 장점이 있었다.
그러나, 상기 정지액체상 랩온어칩에서 핵산 시료를 제조하는 방법에 대해서는 개발되지 않은 실정이다.
1. KR 등록 제10-1398764호
1. Journal of Molecular Diagnostics, Vol. 12, No. 5, pp620-628
본 발명은 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 시료 공간(sample chamber), 용해 공간(lysis chamber), 용리 공간(elution chamber) 및 상기 시료 공간, 용해 공간, 용리 공간을 연결하는 채널로 구성된 정지액체상 랩온어칩을 이용하여, 상기 시료 공간에 세포를 포함하는 시료와 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)를 첨가하여 세포-CCP 복합체를 형성하는 단계; 상기 세포-CCP 복합체를 용해공간으로 이동시키고, 상기 세포를 용해시켜서 핵산을 상기 세포로부터 방출하는 단계; 상기 생성된 핵산을 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP) 로 포획하여 핵산-NCP 복합체를 형성하는 단계; 및 상기 핵산-NCP 복합체를 용리 공간으로 이동시켜 핵산을 용리시키는 단계; 를 포함하는 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법은 식품이나 배설물과 같이 불순물이 많이 포함된 시료로부터 간편하고 신속하게 핵산 시료를 제조할 수 있는 효과가 있다.
본 발명에 따른 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법은 소량의 시료로부터 특수한 장비를 사용하지 않고 빠르고 간편하게 세포로부터 핵산을 분리할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 종래기술의 핵산 시료 제조용 카트리지를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예 따른 정지액체상 랩온어칩에서 핵산 시료 제조 방법의 과정을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예 따른 건조된 형태의 PCR 혼합물(PCR mixture)이 들어있는 PCR 혼합물 저장 공간을 추가로 포함하고, PCR 혼합물 저장 공간이 회전이 가능한 밸브를 통해 상기 용리 공간과 분리되어 있는 정지액체상 랩온어칩을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 실시예에서 사용한 정지액체상 랩온어칩의 형태와 크기를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 실시예에서 제조된 박테리아 DNA 시료를 가지고 PCR을 수행한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하도록 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
도 2는 본 발명의 일 실시예 따른 정지액체상 랩온어칩에서 핵산 시료 제조 방법의 과정을 나타낸 도면, 도 3은 본 발명의 일 실시예 따른 건조된 형태의 PCR 혼합물(PCR mixture)이 들어있는 PCR 혼합물 저장 공간을 추가로 포함하고, PCR 혼합물 저장 공간이 회전이 가능한 밸브를 통해 상기 용리 공간과 분리되어 있는 정지액체상 랩온어칩을 나타낸 도면, 도 4는 본 발명의 실시예에서 사용한 정지액체상 랩온어칩의 형태와 크기를 나타낸 도면, 도 5는 본 발명의 실시예에서 제조된 박테리아 DNA 시료를 가지고 PCR을 수행한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 도 2 내지 도 5와 실시예를 통해 본 발명인 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법을 상세히 설명한다.
본 발명은 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "랩온어칩"이라 함은 실험실에서 행해지는 혼합, 반응, 분리, 분석 등의 여러 가지 조작이 구현되도록 제작된 칩으로, "정지 액체상 랩온어칩"은 랩온어칩 내에서 액체가 전혀 움직이지 않는 것을 의미하는 것이 아니라, 액체상을 이동시키는 종래의 방법과는 달리 주요 분석단계에서 액체상을 이동시키는 대신 고체상을 이동시킴으로써 분석을 수행할 수 있는 것을 의미하는 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어, "핵산"이라 함은 푸린염기 및 피리미딘 염기·당·인산으로 이루어진 고분자 물질을 의미한다.
이하에서는 도 2를 참조하여, 본 발명의 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조 방법을 상세히 설명하도록 한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 정지액체상 랩온어칩은 시료 공간(sample chamber), 용해 공간(lysis chamber), 용리 공간(elution chamber) 및 상기 시료 공간, 용해 공간 및 용리 공간을 연결하는 채널로 구성된다.
본 발명에서 사용되는 용어, "시료공간" 이라 함은 세포를 포함하는 시료가 담겨지는 공간을 의미하며, "용해 공간"이라 함은 세포를 용해시켜 핵산을 세포로부터 방출시키는 동시에 핵산이 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP)에 결합되도록 도와줄 수 있는 용해 완충용액이 담겨지는 공간을 의미한다.
특히, 상기 용해공간에는 구아니딘 티오시안네이트(guanidine thiocyanate), 구아니딘 하이드로클로라이드(guanidine hydrochloride), 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulfate), 소듐 하이드록시드(sodium hydroxide), EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid), 트리톤(Triton) X-100 및 폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르(NP-40) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 포함하는 용해 완충용액으로 채워질 수 있다. 일 예로, 상기 용해공간에는 구아니딘 티오시안네이트(guanidine thiocyanate)가 채워질 수 있다.
또한, 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP) 는 시료공간에 시료와 함께 넣을 수도 있지만, 시료에 불순물이 많을 경우에는 용해 공간에 넣어놓는 것이 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 용어, "용리 공간"은 증류수 또는 10mM Tris, pH8.5 완충용액과 같이 낮은 농도의 완충용액이 채워진 공간으로, 실리카에 결합한 핵산은 낮은 이온 농도에서 실리카로부터 해리되는 성질을 가지고 있다.
또한, 증류수나 10mM Tris(tris-[hydroxymethyl]-aminomethane), pH8.5 완충용액은 PCR 과 같은 이후 과정에 영향을 미치지 않는 장점이 있다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법은 시료 공간(sample chamber), 용해 공간(lysis chamber), 용리 공간(elution chamber) 및 상기 시료 공간, 용해 공간, 용리 공간을 연결하는 채널로 구성된 정지액체상 랩온어칩을 이용하여, 상기 시료 공간에 세포를 포함하는 시료와 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)를 첨가하여 세포-CCP 복합체를 형성하는 단계 (1단계); 상기 세포-CCP 복합체를 용해공간으로 이동시키고, 상기 세포를 용해시켜서 상기 세포로부터 핵산을 방출하는 단계 (2단계); 상기 생성된 핵산을 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP) 로 포획하여 핵산-NCP 복합체를 형성하는 단계 (2단계); 및 상기 핵산-NCP 복합체를 용리 공간으로 이동시켜 핵산을 용리시키는 단계 (3단계); 를 포함한다.
한편, 본 발명의 정지액체상 랩온어칩에서 상기 채널은 소수성의 액체로 채워지는 것을 특징으로 한다. 여기서, 소수성 이라 함은 친수성에 대한 반대말로 물에 대해 친화력이 없는 성질을 의미하며, 물과는 혼합되지 않는 성질을 의미할 수 있다.
일 예로, 상기 채널은 올리브 오일, 미네랄 오일, 액체 왁스 등 물과 섞이지 않는 액체로 채워질 수 있다.
상기 액체는 서로 다른 공간에 있는 용액들이 서로 섞이지 않도록 할 뿐만 아니라 세포-CCP 복합체나 핵산-NCP 복합체가 채널을 지나갈 때, 세척하여 불순물을 제거하는 작용도할 수 있다. 한편, 상기 소수성 액체는 이웃하는 공간으로 쉽게 이동하지 않기 위해서는 소정의 점성이 있는 것이 바람직하다.
특정 양태로서, 냉장 조건에서는 고체 상태로 존재하고 실온 에서는 액체 상태로 존재하는 액체 왁스(liquid wax)와 같은 물질을 상기 채널에 채워서 냉장고에 보관할 경우 랩온어칩의 서로 다른 공간을 확실하게 분리하는 효과가 있다.
일 예로, 상기 무극성의 액체는 10 내지 20℃ 이하의 온도에서는 고체상태이며, 10 내지 20℃ 이상의 온도에서는 액체 상태로 존재하는 왁스일 수 있다.
먼저, 본 발명에 따른 핵산 시료의 제조방법은 시료공간에 시료와 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)를 넣어 세포-CCP 복합체를 형성한다. 이때, 상기 세포 포획입자는 자성입자에 상기 세포에 대한 항체를 고정시켜 제조할 수 있다.
이에 더하여, 상기 세포의 표면에는 상기 항체에 특이적인 항원이 포함될 수 있다. 한편, 상기 세포 포획입자의 제조방법은 이 기술분야에 알려져 있는 공지기술일 수 있다.
다음으로, 상기 랩온어칩 하부에 자석을 이용하여, 상기 세포-CCP 복합체를 용해 공간으로 이동시킬 수 있다. 이때, 상기 시료공간에 있던 불순물은 복합체가 채널을 지날 때 제거되고, 용해 공간에는 세포-CCP 복합체만 이동하게 된다.
그리고, 용해 공간에서 용해 완충용액의 작용으로 세포막이 분해되면, 상기 세포막 내의 핵산이 방출되고, 방출된 핵산은 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP)에 결합하여 핵산-NCP 복합체를 형성할 수 있다.
한편, 상기 용해 완충용액은 일 예로 구아니딘 티아시안네이트(Guanidine thiocyanate)를 주성분으로 할 수 있으며, 이 화합물은 핵산-NCP 복합체 형성을 촉진하는 작용을 할 수 있다.
특정 양태로서, 상기 핵산 포획입자 표면은 핵산에 특이적인 결합을 하는 물질로 코팅될 수 있으며, 이러한 핵산 포획입자 제조방법은 이 기술분야에 알려져 있는 공지기술일 수 있다.
이에 더하여, 다시 자석을 이용하여, 상기 용해공간에 있는 핵산-NCP 복합체를 용리 공간으로 이동시킬 수 있다. 그러면, 용해 완충용액에 포함되어 있던 이온들은 채널을 지날 때 제거되고, 핵산-NCP 복합체만 용리공간으로 이동하게 된다.
이에 따라, 상기 용리공간에서 낮은 이온 농도로 인하여 NCP 에 결합하고 있던 핵산이 용리되고, 자석이 CCP와 NCP 를 모은 상태에서 용리 공간이 용액을 취하면, PCR 과 같은 다음 분석 과정에 직접 사용할 수 있는 핵산 시료를 얻을 수 있다.
다음으로, 도 3을 참조하여, 본 발명의 다른 실시예에 따른 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법을 설명하도록 한다.
본 발명에 따른 정지액체상 랩온어칩은 PCR 혼합물 저장공간을 포함할 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 PCR 혼합물 저장공간은 건조된 형태의 PCR 혼합물(PCR mixture)이 포함될 수 있으며, 상기 PCR 혼합물 저장공간은 핵산을 용리하는 단계 이후에 상기 용리 공간의 용액을 PCR 혼합물 저장 공간으로 이동시켜, PCR 을 수행하는 것을 특징으로 한다.
상기 PCR 혼합물 저장공간은 상기 PCR 을 수행하는 과정 외에도 다른 분석과정을 수행할 수 있으며, 이때, 보관의 안정성을 높이기 위해서 혼합물을 건조된 상태로 보관하는 것이 바람직하다.
여기서, PCR 혼합물이라 함은 PCR(중합연쇄반응) 반응에 필요한 모든 효소 및 화합물 등을 하나로 혼합시켜 사용이 쉽도록 한 혼합물을 의미할 수 있다.
특정 양태로서, 상기 용리 공간과 PCR 혼합물 저장공간은 추가의 밸브에 의해 분리될 수 있다. 보다 구체적으로, 용리공간의 핵산 시료용액을 PCR 혼합물 저장 공간으로 이동시키는 대신 PCR 혼합물 저장공간과 용리공간을 회전이 가능한 밸브로 분리할 수 있으며, 밸브의 회전에 의해 두 공간이 하나로 합쳐지게 함으로써, PCR 이 수행되도록 할 수 있다.
본 발명에 따른 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법은 핵산시료를 간편히 제조할 수 있으며, PCR 을 수행함으로써, DNA 추출 여부를 확인할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
< 실시예 >
실시예 1. 정지액체상 랩온어칩을 이용한 장염비브리오균 DNA 시료 제조
본 실시예에서는 정지액체상 랩온어칩을 이용하여 장염비브리오균의 DNA 시료를 제조하였으며, 실시간 PCR (real time PCR) 방법으로, DNA 추출 여부를 확인하였다.
본 실시예에서 사용한 랩온어칩은 도 4에 나타난 바와 같이, 전체 크기가 60×15×5mm3 이고, 시료 공간, 용해 공간, 용리 공간 및 세 공간을 연결하는 두 개의 채널로 구성되어 있다.
용해 공간은 용해 완충용액(5.5 M guanidine thiocyanate, 20mM Tris-HCl, pH7.6, 20mM EDTA) 50㎕로 채우고, 2mg/㎖ NCP 10㎕를 넣어주었다. 용리 공간에는 증류수 20㎕로 채워주었다. 그리고, 나머지 두 채널(크기 15×1×1mm3)은 액체 왁스(Bio Rad, USA)로 채워주었다. NCP는 실리카로 코팅된 자성입자를 사용하였다.
시료공간에 0~105 cfu/ml 의 장염비브리오균을 포함하는 시료 100㎕와 1mg/㎖ CCP 10㎕ 를 넣고 5분동안 랩온어칩에 진동을 가하여 세포-CCP 복합체 형성을 촉진하였다. CCP는 자성입자 표면에 장염비브리오균에 특이적인 항체를 고정시켜 제조하였다.
그 후에 진동을 가하는 상태에서 자석을 30초간 시료공간 하부에 위치시켜 세포-CCP 복합체를 모은 후 자석을 용해 공간 하부로 이동시켜 세포-CCP 복합체가 용해 공간으로 이동하게 하였다. 자석이 용해 공간 하부에 위치한 상태에서 5분동안 진동을 가하였으며, 이에 따라 세포가 용해되고 핵산-NCP 복합체가 형성되었다.
마지막으로 진동을 가하는 상태에서 자석을 용리 공간 하부로 이동시켜 핵산-NCP 복합체가 용리 공간으로 이동하게 한 후 5분동안 진동을 가하여 핵산이 NCP 로부터 용리되게 하였다. 용리 공간의 용액을 취함으로써 장염비브리오균의 핵산 시료가 완료되었다.
핵산 시료에 장염비브리오균 DNA가 추출되었는지 확인하기 위해 실시간 PCR을 시행하였다. 제조된 핵산 시료 용액 가운데 6㎕ 를 PCR 에 사용하였으며, 나머지 조건은 PCR 키트의 매뉴얼과 동일하게 하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 장염비브리오균 수가 많을수록 증폭속도가 빠른 것으로 나타나 DNA 가 정량적으로 추출된 것을 알 수 있었다. 또한, 최저 101cfu/㎖ 농도의 시료에서도 음성 대조 실험(negative control)보다 빠른 증폭속도가 관찰되어 DNA 추출 효율이 매우 높은 것을 확인할 수 있었다.
이상의 실시예를 통해 시료공간에 있던 장염비브리오균이 CCP에 의해 포획되어 용해 공간으로 이동하여 용해되었고, 그 결과 방출된 핵산이 NCP 에 의해 포획되어 용리 공간으로 이동하여 용리됨으로써 핵산 시료가 제조되었음을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시예일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. 시료 공간(sample chamber), 용해 공간(lysis chamber), 용리 공간(elution chamber) 및 상기 시료 공간, 용해 공간, 용리 공간을 연결하는 채널로 구성된 정지액체상 랩온어칩을 이용하여,
    상기 시료 공간에 세포를 포함하는 시료와 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)를 첨가하여 세포-CCP 복합체를 형성하는 단계;
    상기 세포-CCP 복합체를 용해공간으로 이동시키고, 상기 세포를 용해시켜서 핵산을 상기 세포로부터 방출하는 단계;
    상기 생성된 핵산을 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP) 로 포획하여 핵산-NCP 복합체를 형성하는 단계; 및
    상기 핵산-NCP 복합체를 용리 공간으로 이동시켜 핵산을 용리시키는 단계; 를 포함하며,
    상기 채널은 소수성의 액체로 채워지며, 상기 소수성의 액체는 냉장상태에서 고체상태이며, 실온에서 액체 상태로 존재하는 왁스인 것을 특징으로 하는 정지액체상 랩온어칩을 이용한 핵산 시료의 제조방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 용해공간은
    구아니딘 티오시안네이트(guanidine thiocyanate), 구아니딘 하이드로클로라이드(guanidine hydrochloride), 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulfate), 소듐 하이드록시드(sodium hydroxide), EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid), 트리톤(Triton) X-100 및 폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르(NP-40) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 포함하는 용해 완충용액으로 채워지는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 용해공간은
    상기 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP)를 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 용리공간은
    증류수 또는 10mM Tris(tris-[hydroxymethyl]-aminomethane), pH 8.5 완충용액 가운데 하나로 채워져 있는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 세포 포획입자(cell capture particle, CCP)는
    자성입자에 상기 세포와 특이적 반응을 하는 항체가 고정된 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 핵산 포획입자(nucleic acid capture particle, NCP)는
    실리카로 코팅된 자성입자인 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 정지액체상 랩온어칩의 용리공간은 PCR 혼합물(PCR mixture) 저장공간이 추가로 연결되며,
    상기 핵산을 용리시키는 단계 이후에 상기 용리 공간의 용액을 PCR 혼합물 저장 공간으로 이동시켜 PCR 을 수행하는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 정지액체상 랩온어칩의 용리공간은 PCR 혼합물(PCR mixture) 저장공간이 추가로 연결되며,
    상기 용리공간과 PCR 혼합물 저장공간은 회전 가능한 밸브에 의해서 분리되며, 상기 밸브의 회전에 의해 상기 PCR 혼합물 저장 공간과 상기 용리공간이 하나로 합쳐짐으로써 상기 용리된 핵산을 PCR 수행하는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    상기 PCR 혼합물(PCR mixture)은 건조된 상태로 저장되는 것을 특징으로 하는 핵산 시료의 제조방법.
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