RU2239192C2 - Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей - Google Patents

Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей Download PDF

Info

Publication number
RU2239192C2
RU2239192C2 RU2001123422A RU2001123422A RU2239192C2 RU 2239192 C2 RU2239192 C2 RU 2239192C2 RU 2001123422 A RU2001123422 A RU 2001123422A RU 2001123422 A RU2001123422 A RU 2001123422A RU 2239192 C2 RU2239192 C2 RU 2239192C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
particles
magnetic
magnetic particles
probe
nucleic acids
Prior art date
Application number
RU2001123422A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2001123422A (ru
Inventor
Хелена СЕППЯНЕН (FI)
Хелена СЕППЯНЕН
Пекка ПАЛОМЯКИ (FI)
Пекка ПАЛОМЯКИ
Юкка ТУУНАНЕН (FI)
Юкка Туунанен
Тимо КЯРМИНИЕМИ (FI)
Тимо КЯРМИНИЕМИ
Original Assignee
Термо Электрон Ой
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Термо Электрон Ой filed Critical Термо Электрон Ой
Publication of RU2001123422A publication Critical patent/RU2001123422A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2239192C2 publication Critical patent/RU2239192C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C1/00—Magnetic separation
    • B03C1/005—Pretreatment specially adapted for magnetic separation
    • B03C1/01—Pretreatment specially adapted for magnetic separation by addition of magnetic adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Soft Magnetic Materials (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Compounds Of Iron (AREA)
  • Water Treatment By Sorption (AREA)
  • Hard Magnetic Materials (AREA)

Abstract

Способы относятся к очистке биологических веществ с применением магнитных частиц. Предложены способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей, содержащих нуклеиновые кислоты – ДНК и РНК, при этом магнитные частицы обработаны реагентом, связывающим магнитные частицы с нуклеиновыми кислотами, а также используют реагент, ослабляющий поверхностное натяжение. Данные способы облегчают полный сбор частиц. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 4 ил.

Description

Область техники
Настоящее изобретение относится к очистке биологических веществ с применением магнитных частиц, связывающих материал, специфически образом выделяя его из смеси. Изобретение может быть использовано, например, для очистки нуклеиновых кислот ДНК и РНК.
Уровень техники
Магнитные частицы можно покрыть сепарирующим реагентом, специфическим образом реагирующим с заданным биологическим веществом. Связанное вещество вместе с частицами выделяется из смеси, а затем освобождается от частиц для дальнейшей обработки. В настоящее время на практике это осуществляется следующим образом: частицы выводят магнитом на стенку сосуда, содержащего смесь, а жидкость сливают или отсасывают из сосуда. После этого в сосуд может быть помещена новая жидкость. Для такой технологии разделения имеются также серийно выпускаемые ручные и автоматические устройства, например Spherotec, Inc., AutoMag Processor (США), Merck Magnetic Rack (Германия), планшетный сепаратор с ячейками (лунками) PerSeptive Biosystems 96, Multi-6 Separator, Solo-Sep Separator (США), Dynal Magnetic Particles Concentrators.
Традиционная техника очистки в случае ДНК включает в себя ультрацентрифугирование в хлориде цезия при наличии градиента концентрации. Однако для очистки нуклеиновых кислот применялась также и описанная выше технология с использованием магнитных частиц.
В международной патентной публикации WO 94/18565 (Labsystems Oy) предлагается способ и устройство для проведения специфических анализов связывания магнитными частицами, обеспечивающих сепарирование указанных частиц из смеси с помощью зонда, содержащего стержень, способный к перемещению в вертикальном канале и на нижнем конце снабженный магнитом. Зонд со стержнем, находящимся в нижнем положении, вводят в смесь, в результате чего частицы собираются на зонде. Затем зонд переносят в другой сосуд и стержень вытягивают в верхнее положение, освобождая частицы. Таким образом, каждую из стадий анализа можно провести в отдельном сосуде, не прибегая к переносу жидкостей. В последнем сосуде проводят измерения.
В международной патентной публикации WO 94/12959 (Labsystems Oy) предлагается инструмент для переноса магнитных частиц, содержащий удлиненный компонент с вогнутой сужающейся концевой частью. Кроме того, компонент содержит средства, создающие продольное магнитное поле для сбора частиц у указанной концевой части. Для освобождения частиц предусмотрена возможность выключения магнитного поля. Этот инструмент особенно пригоден для сбора частиц из большого объема и освобождения их в очень маленький объем.
Сущность изобретения
Согласно изобретению, разработан новый способ, представленный в п.1 формулы изобретения. Некоторые предпочтительные варианты осуществления изобретения определены другими пунктами формулы.
Согласно изобретению, подлежащий очистке материал помещают в первую среду, содержащую магнитные частицы. Они покрыты реагентом, обладающим по отношению к материалу связывающими свойствами. Протекает реакция связывания, после которой частицы выделяют из среды посредством магнитного зонда и переносят во вторую среду, в которой может иметь место требуемая далее реакция, необходимая для очистки. Для проведения дальнейших стадий способа очистки частицы можно перенести таким же образом через последующие среды. К моменту, когда частицы переносят в сосуды, содержащаяся в сосудах среда, необходимая для проведения реакция, должна быть готова к употреблению. Предпочтительно также, чтобы частицы освобождались от зонда во всех средах, начиная со второй.
Согласно изобретению, по меньшей мере одна из сред содержит агент, ослабляющий поверхностное натяжение. Это способствует полному сбору частиц.
Некоторые из таких агентов применялись в таких же целях для облегчения связывания выделяемого вещества, см., например, Wipat et al., Microbiology (1994), 140, 2067. В этих известных способах частицы не переносят из одного сосуда в другой, и они во время удаления среды из сосуда удерживаются на его стенке посредством находящегося снаружи магнита.
Изобретение может быть применено специально для очистки нуклеиновых кислот, таких как ssДНК, dsДНК и mРНК.
Перечень фигур чертежей
Прилагаемые чертежи являются составной частью описания.
На фиг.1 показан эффект воздействия детергента на стадиях сбора и освобождения частиц, способных к намагничиванию.
На фиг.2 показан эффект воздействия соли и сахарозы в буфере для сбора и освобождения.
На фиг.3 показан эффект воздействия протеина в буфере для сбора и освобождения.
На фиг.4 показан эффект воздействия детергента в случае применения магнитных частиц, полученных от различных поставщиков.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Изобретение может быть применено, например, для очистки клеток, вирусов, субклеточных органелл, протеинов и в особенности материалов, содержащих нуклеиновые кислоты.
Магнитные частицы предпочтительно парамагнитны. Размер частиц составляет обычно величину менее 50 мкм, предпочтительно 0,1-10 мкм, наиболее предпочтительно 1-5 мкм. Концентрация частиц может равняться, например, 0,01-5 мг/мл, предпочтительно 0,05-3 мг/мл, наиболее предпочтительно 0,2-2 мг/мл.
Частицы покрывали или обрабатывали связывающим реагентом, например кремнием, пектином и/или другими реактивными функциональными группами, такими как олигонуклеотиды, антитела, антигены, стрептавидин или биотин.
Частицы переносят из одного сосуда в другой предпочтительно с применением зонда, содержащего стержень, способный к перемещению в вертикальном канале и на нижнем конце снабженный магнитом. Зонд со стержнем, находящимся в нижнем положении, вводят в смесь, в результате чего частицы собираются на зонде. Затем его переносят в другой сосуд и, когда стержень вытягивают в его верхнее положение, частицы освобождаются.
В способе могут быть применены различные типы соединений, ослабляющих поверхностное натяжение, в особенности это относится к водорастворимым соединениям. Примерами их являются:
А. Поверхностно-активные вещества (ПАВ), такие как
- Мыло различного типа
- Детергенты, включая анионные, катионные неионогенные и цвиттерионные соединения
Б. Спирты, такие как
- Полиэтиленовые и поливиниловые спирты, а также их протеиновые и другие производные
В. Протеины
Г. Соли и углеводы с высокими концентрациями, такие как
- NaCl
- Сахароза.
Могут применяться также и смеси указанных соединений.
В особенности пригодны ПАВ типа детергентов. К предпочтительным детергентам относятся сложные эфиры этоксилированного ангидросорбита. Сложные эфиры могут содержать, например, 4-20 этиленоксидных групп.
Концентрация ПАВ может составлять, например, 0,001-0,5% (вес/объем), предпочтительно 0,005-0,1% (вес/объем), наиболее предпочтительно 0,01-0,05% (вес/объем). Концентрация протеина может составлять, например, 0,1-10% (вес/объем), предпочтительно 0,25-5% (вес/объем), наиболее предпочтительно 0,5-2% (вес/объем). Концентрация соли может составлять, например, 0,1-10 М, предпочтительно 0,1-7 М.
Для очистки ДНК или mРНК, полученных из различных источников (например, ДНК из PCR (polymerace chain reaction, полимеразная реакция синтеза цепи) амплификации, ДНК из крови, костного мозга или культивированных клеток, mРНК из эукариотной общей РНК или из необработанных экстрактов тканей животных, клеток или растений) нуклеиновые кислоты иммобилизуют с применением магнитных частиц.
Связывание может осуществляться посредством взаимодействия стрептавидина и биотина, поэтому можно использовать частицы, покрытые стрептавидином, и биотинилированную ДНК. Кроме того, и сама ДНК может абсорбироваться на поверхности частиц. Связывание mРНК может осуществляться посредством препарата Oligo (dT)25, ковалентным образом присоединенного к поверхности частиц.
После иммобилизации нуклеиновые кислоты промывают несколько раз для удаления всех реакционных компонентов, образующихся в результате амплификации, или других загрязняющих веществ, в частности PCR ингибиторов.
Промывку можно проводить отсоединяющими и собирающими комплексами в промывающем буфере и путем переноса их в другую ячейку, содержащую свежий промывающий буфер.
В случае очистки ssДНК иммобилизованную двунитевую ДНК можно конвертировать в однонитевую форму путем инкубации с 0,1 М NaOH и применить магнитное разделение.
Для выделения mРНК ее можно отмыть от частиц с помощью буфера с низким содержанием соли.
Процесс очистки можно провести на установке, использующей магнитные частицы, в которой каждую среду приготавливают в отдельном сосуде. Агент, ослабляющий поверхностное натяжение, предпочтительно применять в каждой среде. Возможно применение пригодных планшетов одноразового действия, таких как микротитровальные планшеты, содержащих необходимые сосуды.
С помощью одного планшета можно совершить несколько параллельных процессов очистки.
Пример реагентов, применяемых для очистки ssДНК
1. Суспензия частиц, например, в физиологическом растворе с фосфатным, трифосфатным или боратным буфером, рН 7,4, содержащем 0,1% альбумина бычьей сыворотки (BSA), 15 мМ NaN3 и, например, 0,02% полиоксиэтилен(20)-сорбитанмонолаурата (Tween 20TM) в качестве отсоединяющего агента, снижающего поверхностное натяжение.
2. Связывающий и промывающий буфер (TEN): 10 мМ трис-HCl, 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота), 2 М NaCl, например, 0,02% Tween 20TM, 15 мМ NaN3, pH 7,5.
3. Переносящий буфер: 10 мМ трис-HCl, 1 мМ ЭДТА, например, 0,02% Tween 20TM, 15 мМ NаN3, рН7,5.
4. Плавящий раствор: 0,1 М NaOH, например, 0,02% Tween 20™.
5. Например, 0,02% Tween 20TM в дистиллированной воде, 15 мМ NaN3.
Пример реагентов, применяемых для прямой очистки mРНК
1. Суспензия частиц Олиго(dТ)25 в ФФБ (физиологический раствор с фосфатным буфером), рН 7,4, содержащим, например, 0,02% Tween 20TM и 15 мМ NaN3.
2. Лизисный/связывающий буфер: 100 мМ трис-HCl, рН 8,0, 500 мМ LiCl, 10 мМ ЭДТА, 1% LiDS (додецилсульфат лития), 5 мМ дитиотрейтола (ДТТ), 15 мМ NaN3, (например, 0,02% Tween 20™).
3. Промывающий буфер с додецилсульфатом лития (LiDS) или натрия (SDS): 10 мМ трис-HCl, рН 8,0, 0,15 М LiCl, 1 мМ ЭДТА, 0,1% LiDS, 15 мМ NaN3, (например, 0,02% Tween 20TM).
4. Промывающий буфер: 10 мМ трис-HCl, рН 8,0, 0,15 М LiCl, 1 мМ ЭДТА, например, 0,02% Tween 20TM, 15 мМ NaN3.
5. Элюирующий раствор: 2 мМ ЭДТА, рН 8,0, 15 мМ NaN3, например, 0,02% Tween.
6. Восстанавливающий раствор: 0,1 V NaOH, например, 0,02% Tween 20TM.
7. Сохраняющий буфер Олиго(dТ)25: 250 мМ трис-HCl, рН 8,0, 20 мМ ЭДТА, 0,1% Tween-20TM, 15мМ NаN3.
Пример реагентов, применяемых для очистки mРНК
1. Связывающий буфер: 20 мМ трис-HCl, рН 7,5, 1,0 М LiCl, 2 мМ ЭДТА, 15 мМ NaN3, например, 0,02% Tween-20TM.
2. Промывающий буфер: 10 мМ трис-HCl, рН 8,0, 0,15 мМ LiCl, 1 мМ ЭДТА, 15 мМ NaN3, например, 0,02% Tween 20TM.
3. Элюирующий раствор: 2 мМ ЭДТА, рН 8,0, 15 мМ NaN3, например, 0,02% Tween 20TM.
Пример реагентов, применяемых для выделения РНК
1. 4 М изотиоцианата гуанидиния, 25 мМ цитрата натрия рН 7,0, 0,5% N-лаурилсаркозина, 0,01 М β-меркаптоэтанола.
Пример реагентов, применяемых для прямой очистки ДНК
1. Суспензия частиц в лизисном буфере (например, 50 мМ трис-HCl, рН 7,2, 50 мМ ЭДТА, 3% SDS, 1% 2-меркаптоэтанола; 50 мМ KCl, 10-20 мМ трис-HCl, 2,5 мМ MgCl2, рН 8,3, 0,5% Tween-20TM, 100 мкг/мл протеиназы К; 100 мМ трис-HCl, рН 8,5, 5 мМ ЭДТА, 1% SDS, 500 мкг/мл протеиназы К), содержащем 15 мМ NaN3.
2. Промывающий буфер, содержащий 15 мМ NaN3 и, например, 0,02% Tween 20TM.
3. Ресуспендирующий буфер, содержащий 15 мМ NaN3 и, например, 0,02% Tween 20TM.
Пример очищающего процесса PCR продуктов при комнатной температуре на установке с магнитными частицами
Реагенты размещают в ячейки, последовательно расположенные на планшете.
Пример конфигурации расположения реагентов:
Ячейка 1. Образец (биотинилированная ДНК, PCR ампликоны).
Ячейка 2. Покрытые стрептавидином магнитные частицы в промывающем буфере.
Ячейки 3-5. Промывающий буфер.
Ячейка 6. NaOH.
Ячейка 7. Переносящий буфер.
Ячейка 8. Дистиллированная вода.
Пример стадий процесса:
Ячейка 2. Смешивание, промывание и сбор частиц, перемещение их в ячейку 3.
Ячейка 3. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 4.
Ячейка 4. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 1.
Ячейка 1. Десятиминутная инкубация образца, перемещение частиц в ячейку 4.
Ячейка 4. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 5.
Ячейка 5. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 6.
Ячейка 6. Пятиминутная инкубация в плавящем растворе, перемещение частиц в ячейку 4.
Ячейка 4. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 5.
Ячейка 5. Промывание частиц, перемещение их в ячейку 7.
Ячейка 7. Прополаскивание частиц, перемещение их в ячейку 8.
Ячейка 8. Освобождение частиц.
Эффект воздействия агента, ослабляющего поверхностное натяжение (АОПН), на стадиях сбора и освобождения магнитных частиц
Покрытые стрептавидином магнитные частицы (размеры: Scigen стрептавидин 3 мкм, Scigen; SPHEROTM стрептавидин 4-4,5 мкм, Spherotec; Dynabeads M-280 стрептавидин 2,8 мкм, Dynal) пропитывали биотинилированной щелочной фосфатазой (Calbiochem, США) в течение 1 ч при 37°С. Пропитанные частицы сначала промыли с целью удаления несвязанной щелочной фосфатазы, а затем использовали для оценки эффекта воздействия АОПН на стадиях сбора и освобождения при работе установки с магнитными частицами. Инструмент, примененный в этих примерах, был настроен на интервал 20-200 мкл, а производительность устройства находилась в интервале 1-24 образца за цикл. В устройстве был использован стержневой магнит (цилиндрический NdFeB с аксиальным намагничиванием, длина 2 мм, диаметр 3 мм) в полипропиленовой трубке (наружный диаметр 4,5 мм).
Опуская подробности, можно резюмировать, что частицы последовательно подвергали освобождению и сбору, переводя их из одной ячейки в другую таким образом, чтобы весь процесс содержал 10 стадий. Количество частиц, оставшихся в ячейках после сбора, устанавливали путем количественного анализа с использованием щелочной фосфатазы. Образцы (10 мкл) из каждой ячейки перенесли на пустой микротитровальный планшет (ячейки с круглым дном, диаметр 6,5 мм).
В этом анализе в качестве стандарта применяли щелочную фосфатазу, пропитавшую частицы (0,016 мкг-1 мкг частиц/10 мкл разбавителя). В ячейки, содержащие 10 мкл образцов и стандартов, добавили 100 мкл pNPP-субстрата, разведенного в диэтаноламиновом (ДЭА) буфере (Labsystems). Субстрат инкубировали в течение 15 мин при 37°С с непрерывным взбалтыванием (900 об/мин) в виброустановке Labsystems iEMS Incubator/Shaker. Реакцию прекратили добавлением в каждую ячейку 100 мкл 1М NaOH и измерили поглощение у 405 нм на фотометре (Labsystems Multiskan).
Количество оставшихся частиц определили по линейному градуировочному графику и конечные результаты выразили в виде процентов от исходного количества частиц (0,2 мг/ячейка).
На фиг.1 показан эффект воздействия детергента (Tween 20TM) при различных концентрациях. В том случае, когда в собирающий и освобождающий буфер не добавляли агент, ослабляющий поверхностное натяжение, содержание остающихся частиц (Scigen стрептавидин) составило более 3%/ячейка. Когда концентрация детергента составляла ≥0,00125%, имел место эффективный сбор частиц.
На фиг.2 показан эффект воздействия соли и сахарозы, содержащихся в буфере для сбора и освобождения. При добавлении этих компонентов в буфер эффективность сбора частиц (Scigen стрептавидин) повышалась.
На фиг.3 показан эффект воздействия протеина (казеина), который в какой-то степени улучшал процесс на стадиях сбора частиц (SPHEROTM стрептавидин).
На фиг.4 показан эффект воздействия детергента в случае применения магнитных частиц, полученных от различных поставщиков.

Claims (13)

1. Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, введенному в биологические жидкости для выделения ДНК или РНК, причем способ предусматривает помещение в биологические жидкости перед тем, как частицы прилипнут к зонду, агента, ослабляющего поверхностное натяжение.
2. Способ выделения магнитных частиц из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда, включающий этап улучшения прилипания магнитных частиц к магнитному зонду, выполняемый согласно способу, заявленному в п.1.
3. Способ очистки биологических жидкостей, содержащих нуклеиновые кислоты – ДНК и РНК, согласно которому материал, содержащий нуклеиновые кислоты, и магнитные частицы, покрытые или обработанные реагентом, который связывает частицы с нуклеиновыми кислотами, размещают в первой среде; создают возможность для протекания связывающей реакции, в которой нуклеиновые кислоты связываются с частицами; выделяют магнитные частицы с помощью магнитного зонда и зонд вместе с частицами и нуклеиновыми кислотами, связанными с ними, переносят во вторую среду и, при необходимости, выделяют из второй среды и переносят в третью среду, причем указанное выделение магнитных частиц из среды осуществляют согласно способу, заявленному в п.2.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что агент, ослабляющий поверхностное натяжение, представляет собой тенсид, спирт, протеин, соль или углевод.
5. Способ по п.3 или 4, отличающийся тем, что агент, ослабляющий поверхностное натяжение, представляет собой тенсид, такой как детергент.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что концентрация тенсида составляет 0,001-0,5% (вес/объем), предпочтительно 0,005-0,1% (вес/объем), а наиболее предпочтительно 0,01-0,05% (вес/объем).
7. Способ по п.3 или 4, отличающийся тем, что агент, ослабляющий поверхностное натяжение, представляет собой протеин.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что концентрация протеина составляет 0,1-10% (вес/объем), предпочтительно 0,25-5% (вес/объем), а наиболее предпочтительно 0,5-2% (вес/объем).
9. Способ по п.3 или 4, отличающийся тем, что агент, ослабляющий поверхностное натяжение, представляет собой соль.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что концентрация соли составляет 0,1-10 М, предпочтительно 0,1-7 М.
11. Способ по любому из пп.3-9, отличающийся тем, что он применяется для очистки нуклеиновых кислот ДНК и РНК, входящих в состав клеток, вирусов, субклеточных органелл, протеинов.
12. Способ по любому из пп.3-11, отличающийся тем, что размер магнитных частиц меньше чем 50 мкм, предпочтительно 0,1-10 мкм, а наиболее предпочтительно 1-5 мкм.
13. Способ по любому из пп.3-12, отличающийся тем, что концентрация магнитных частиц составляет 0,01-5 мг/мл, предпочтительно 0,05-3 мг/мл, наиболее предпочтительно 0,2-2 мг/мл.
RU2001123422A 1999-01-18 2000-01-18 Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей RU2239192C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI990082A FI990082A0 (fi) 1999-01-18 1999-01-18 Puhdistusprosessi magneettipartikkeleita käyttäen
FI990082 1999-01-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2001123422A RU2001123422A (ru) 2003-10-10
RU2239192C2 true RU2239192C2 (ru) 2004-10-27

Family

ID=8553387

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001123422A RU2239192C2 (ru) 1999-01-18 2000-01-18 Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP1145010B1 (ru)
JP (1) JP3546410B2 (ru)
AT (1) ATE298087T1 (ru)
DE (1) DE60020810T2 (ru)
FI (1) FI990082A0 (ru)
NO (1) NO20013541L (ru)
RU (1) RU2239192C2 (ru)
WO (1) WO2000042432A1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006033596A1 (fr) * 2004-08-16 2006-03-30 Anatolij Ivanovich Malakhov Systeme d'alimentation de chaleur
RU2451747C2 (ru) * 2009-08-13 2012-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" Способ гомогенизации биологических образцов, содержащих магнитные наночастицы, при выделении днк в процессе автоматической пробоподготовки для пцр анализа
RU2515933C2 (ru) * 2008-12-11 2014-05-20 Басф Се Обогащение ценных руд из отходов горнодобывающих предприятий (хвостов обогащения)
RU2547874C2 (ru) * 2009-11-30 2015-04-10 Басф Се Модифицированный способ сепарации в сильном магнитном поле (ссмп)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9425138D0 (en) 1994-12-12 1995-02-08 Dynal As Isolation of nucleic acid
EP1069131B1 (en) * 1999-07-15 2006-03-15 Qiagen GmbH Methods for separating particulate substrates from solution while minimizing particle loss
US20010009759A1 (en) * 1999-12-08 2001-07-26 Jsr Corporation Virus-binding particles, virus-separating reagent, separation of viruses, and detection of viruses
WO2001079456A2 (en) * 2000-04-18 2001-10-25 Cancer Research Technology Limited Materials and methods relating to increasing viral titre
US8110351B2 (en) * 2002-01-16 2012-02-07 Invitrogen Dynal As Method for isolating nucleic acids and protein from a single sample
JP5845156B2 (ja) * 2005-12-21 2016-01-20 メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法
EP1963853B1 (en) 2005-12-21 2016-03-09 Meso Scale Technologies, LLC Assay modules having assay reagents and methods of making and using same
CA3241457A1 (en) 2005-12-21 2008-05-15 Meso Scale Technologies, Llc Assay apparatuses, methods and reagents
US8222048B2 (en) 2007-11-05 2012-07-17 Abbott Laboratories Automated analyzer for clinical laboratory
US8784734B2 (en) 2010-05-20 2014-07-22 Abbott Laboratories Reusable sheaths for separating magnetic particles
RU2484139C1 (ru) * 2012-05-17 2013-06-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-Производственное Объединение ДНК-Технология" Устройство для выделения нуклеиновых кислот
RU2630642C1 (ru) * 2016-11-15 2017-09-11 Общество с ограниченной ответственностью "Научно Производственное Объединение ДНК-Технология" Устройство для выделения нуклеиновых кислот
US11340244B2 (en) 2019-03-15 2022-05-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Method and apparatus for magnetic bead manipulation

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5705628A (en) * 1994-09-20 1998-01-06 Whitehead Institute For Biomedical Research DNA purification and isolation using magnetic particles
FI944938A0 (fi) * 1994-10-20 1994-10-20 Labsystems Oy Foerflyttningsanordning
GB9425138D0 (en) * 1994-12-12 1995-02-08 Dynal As Isolation of nucleic acid
US6027945A (en) * 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006033596A1 (fr) * 2004-08-16 2006-03-30 Anatolij Ivanovich Malakhov Systeme d'alimentation de chaleur
RU2515933C2 (ru) * 2008-12-11 2014-05-20 Басф Се Обогащение ценных руд из отходов горнодобывающих предприятий (хвостов обогащения)
RU2451747C2 (ru) * 2009-08-13 2012-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" Способ гомогенизации биологических образцов, содержащих магнитные наночастицы, при выделении днк в процессе автоматической пробоподготовки для пцр анализа
RU2547874C2 (ru) * 2009-11-30 2015-04-10 Басф Се Модифицированный способ сепарации в сильном магнитном поле (ссмп)

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000042432A1 (en) 2000-07-20
JP3546410B2 (ja) 2004-07-28
EP1145010A1 (en) 2001-10-17
DE60020810T2 (de) 2006-05-18
DE60020810D1 (de) 2005-07-21
NO20013541D0 (no) 2001-07-17
EP1145010B1 (en) 2005-06-15
FI990082A0 (fi) 1999-01-18
NO20013541L (no) 2001-09-17
JP2002535620A (ja) 2002-10-22
ATE298087T1 (de) 2005-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2239192C2 (ru) Способ улучшения прилипания магнитных частиц из биологических жидкостей к магнитному зонду, способ их выделения из биологических жидкостей с помощью магнитного зонда и способ очистки биологических жидкостей
JP7408229B2 (ja) ポリヌクレオチド捕捉材料およびその使用方法
EP1548441B1 (en) Method for transfer of a substance
US9976136B2 (en) Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples
JP4856831B2 (ja) 磁性粒子を流体と混合するための装置および方法
JP4291247B2 (ja) 核酸を単離する方法
EP2309278B1 (en) Device and method for separating, mixing and concentrating magnetic particles with a fluid and use thereof in purification methods
JP2702450B2 (ja) 液体中の被検成分を磁気的に分離する方法
CA2203020A1 (en) Multisample magnetic separation device
US9803230B2 (en) One-step procedure for the purification of nucleic acids
US6958372B2 (en) Magnetic, silanised polyvinylalcohol-based carrier materials
CN103695419B (zh) 一种病毒核酸提取试剂
RU2721121C1 (ru) Способ и система для выделения компонентов в жидком образце с помощью магнитных частиц
KR20200128558A (ko) 자기장 및 장치 사용을 통해 고효율의 입자 처리 방법 및 시스템
JP2004286749A (ja) アッセイサンプルを調製するための方法
JP4067684B2 (ja) 固相担体を用いた分離方法
JP2005508192A (ja) 安定な複合試薬配合物を含む反応チャンバーならびに病原性微生物核酸の検出および単離用の検査キット
CN118176307A (zh) Rna的选择性纯化