KR101850925B1 - 폴리머라아제 억제를 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바이러스 핵산 폴리머라아제, 예컨대 RNA 및 DNA 폴리머라아제의 억제를 위한 방법 및 조성물, 및 피험체에서 바이러스 감염을 치료하는데 유용한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 상기 방법은 치료적으로 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 상기 조성물 또는 방법은 선택적으로 하나 이상의 부가적인 항바이러스 제제를 포함할 수 있다.

Description

폴리머라아제 억제를 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITION OF POLYMERASE}
본 출원은 미국 특허 가출원 제61/393,522호(출원일: 2010년 10월 15일) 및 미국 특허 가출원 제61/492,054호(출원일: 2011년 6월 1일)의 우선권을 주장하며, 이들 출원은 모두 참조문헌으로서 본 명세서에 포함된다.
여기서 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 공개의 명세서는 이의 전문이 참조문헌으로서 여기에 포함된다.
바이러스성 질환은 전 세계적인 유행병 및 인플루엔자와 같은 매년 계절에 따른 유행병에 의해 발병한다. 이러한 발명은 강화된 독성으로 특징지어질 수 있으며, 갑자기 발병하여 심각한 사망률로 이어질 수 있다. 중요한 것은 바이러스성 질환은 인간에게만 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 인플루엔자는 인간에게 전염될 위험을 증가시키는 것에 더해서 식량 공급에 큰 충격을 줄 수 있는 가축류 및 조류에 또한 영향을 줄 수도 있다. 바이러스성 감염과 관련된 예시적인 질환은 예를 들면 인플루엔자, 천연두, 뇌염, 웨스터 나일 질병, 황열병, 뎅기열, 간염, 인간 면역 결핍, 소아마비 및 콕사키를 포함한다.
인플루엔자 A 바이러스 게놈은 세 개의 서브유닛(PA, PB1 및 PB2)의 이종 삼량체 착체인 RNA-의존 RNA 폴리머라아제이다. 상기 RNA 폴리머라아제는 바이러스 RNA 전사 및 복제에 촉매작용을 한다. 버이러스의 전사 및 복제는 RNA 폴리머라아제의 활성에 의존하므로, 이러한 효소는 특히 약물 내성 바이러스의 최근 출현에 뒤이어 신규의 항바이러스성 화합물의 개발을 위한 표적으로서 관심을 끌고 있다.
미국 등록 특허 제7,560,434호 "AZA nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases"
발명의 요약
본 발명은 바이러스 핵산 폴리머라아제의 억제를 위한 방법 및 조성물, 및 피험체에서 바이러스성 감염을 치료, 억제 및/또는 예방하기에 유용한 방법 및 조성물을 제공한다. 상기 방법은 치료적으로 유효량한 양이 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 피험체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 조성물 또는 방법은 선택적으로 하나 이상의 부가적인 항바이러스 제제를 포함할 수 있다. 상기 방법 및 조성물은 하나 이상의 타입의 바이러스에 의해 감염되어 야기될 수 있는 피험체에게서 바이러스 감염을 치료, 억제 및/또는 예방하기에 유용하다. 따라서 상기 방법 및 조성물은 넓은 범위의 항바이러스성 치료, 억제 및/또는 예방에 유용하다.
본 발명은 일부분 본 출원의 실시예 부분에서 보다 자세하게 기재하는 특정의 발견을 기초로 한다. 예를 들면, 본 발명은 일부분 식 I의 화합물로 치료할 시에 세포의 바이러스 역가 수준이 현저하게 감소한다는 발견을 기초로 한다. 따라서, 본 발명은 또한 식 I의 화합물이 상기 유액 또는 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 체액 또는 신체 세포에서의 바이러스 역가를 감소시키기 위한 방법도 제공한다. 본 발명은 일부분은 추가적으로 식 I의 화합물로 치료 시에 몇몇 바이러스에 있어서의 세포에서의 바이러스 역가 수준이 현저하게 감소한다는 발견을 기초로 하고, 이는 다양한 바이러스 균주에 대항하는 식 I의 화합물의 넓은 범위의 항바이러스성 활성을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 또한 식 I의 화합물과 상기 유액 또는 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 체액 또는 신체 세포에서 바이러스의 몇몇 형태, 아형 및/또는 계통에 있어서의 바이러스 역가를 감소시키는 방법도 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 효과적인 억제 양의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 용매 화합물 또는 수화물과 폴리머라아제를 접촉시키는 단계를 포함하는 바이러스성 RNA 또는 DNA 폴리머라아제를 억제시키는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 in vivo에서 실행한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료적으로 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 상기 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 RNA 바이러스성 감염으로부터 고통받는 피험체를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 체액은 혈액이다. 일부 구현예에서, 체액은 플라즈마이다. 일부 구현예에서, 체액은 혈액 혈청이다.
일부 구현예에서, 피험체는 포유류이다. 일부 구현예에서, 피험체는 인간이다. 일부 구현예에서, 피험체는 조류이다. 일부 구현예에서, 피험체는 멧돼지 또는 돼지이다.
본 발명의 이러한 및 다른 구현예는 상세한 설명, 실시예 및 청구의 범위를 포함하는 본 출원의 하기 부분에 추가로 설명하였다.
본 발명의 또 다른 목적 및 이점은 여기서 개시하는 것으로부터 당업자에게 명백할 것이며, 이는 단순히 예시적인것으로 제한적인 것은 아니다. 따라서 다른 구현예는 본 발명의 범주 및 정신을 벗어나지 않고 당업자가 인지할 것이다.
도 1은 인간 간세포 암(Huh-7) 세포에서의 화합물 1의 인산화를 나타낸다.
도 2는 Huh-7 세포에서의 3H 아데노신의 인산화를 나타낸다.
도 3은 Huh-7 세포에서의 3H 화합물 I의 인산화를 나타낸다.
도 4는 24 시간 후의 Huh-7 세포에서의 3H 화합물 1 및 3H 아데노신의 총 RNA 및 게놈 DNA 혼성을 나타낸다.
도 5는 in vitro에서 인플루엔자 상의 페라미비르(peramivir)(뉴라미니다아제 억제제) 및 화합물 1의 결합 효과를 나타낸다.
도 6은 H3N2 A/빅토리아/3/75 인플루엔자 바이러스로 감염된 쥐에서의 체중 감소에 미치는 화합물 1(근육내)의 효과를 나타낸다.
도 7은 H3N2 A/빅토리아/3/75 인플루엔자 바이러스로 감염된 쥐에서 체중 감소에 미치는 화합물 1(경구)의 효과를 나타낸다.
도 8은 에볼라 바이러스로 감염된 쥐의 생존에 미치는 화합물 1(복막내, 근육내 및 경구)의 효과를 나타낸다.
도 9는 에볼라 바이러스로 감염된 쥐에서의 체중 감소에 미치는 화합물 1(복막내, 근육내 및 경구)의 효과를 나타낸다.
도 10은 에볼라 바이러스로 감염된 쥐의 생존에 미치는 화합물 1(근육내 및 경구)의 효과를 나타낸다.
도 11은 에볼라 바이러스로 감염된 쥐에서의 체중 감소에 미치는 화합물 1(근육내 및 경구)의 효과를 나타낸다.
도 12는 황열병 바이러스로 감염된 햄스터의 생존에 미치는 화합물 1의 효과를 나타낸다.
도 13은 황열병 바이러스로 감염된 햄스터의 체중 감소에 미치는 화합물 1의 효과를 나타낸다.
도 14는 래트에서 측정하였을 때 10 mg/kg으로 투여한 화합물 1의 경구 약물 동태학적 곡선을 나타낸다.
본 발명은 RNA 및 DNA 폴리머라아제와 같은 바이러스성 핵산 폴리머라아제의 억제를 위한 방법 및 조성물, 및 피험체에서 바이러스성 감염을 치료하는데 유용한 방법 및 조성물을 제공한다. 상기 방법은 치료적으로 유효량의 식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 상기 조성물 또는 방법은 선택적으로 하나 이상의 부가적인 항바이러스 제제를 포함할 수 있다. 상기 방법 및 조성물은 하나 이상의 타입의 바이러스에의 감염에 의해 야기될 수 있는 피험체에서의 바이러스성 감염을 치료, 억제 및/또는 예방하기 위해 유용하다. 따라서, 상기 방법 및 조성물은 넓은 범위의 항바이러스성 치료, 억제 및/또는 예방에 유용하다.
특히, 본 발명은 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여를 포함하는 바이러스성 감염과 관련된 질병 또는 질환의 치료, 억제 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.
식 I의 화합물은 하기와 같다:
Figure 112013041948813-pct00001
(I), 여기서 상기 식에서, A는 OH 또는 NH2이며, B는 H 또는 NH2이다.
따라서, 식 I의 화합물의 일부 구현예에서, A는 NH2이다.
식 I의 화합물의 일부 구현예에서, B는 NH2이다.
식 I의 화합물의 일부 구현예에서, A는 OH이다.
식 I의 화합물의 다른 일부 구현예에서, B는 H이다.
식 I의 화합물의 또 다른 일부 구현예에서, A는 NH2이며, B는 H이다.
식 I의 화합물의 또 다른 일부 구현예에서, A는 OH이며, B는 NH2이다.
식 I의 화합물의 또 다른 일부 구현예에서, A는 NH2이며, B는 NH2이다.
식 I의 화합물의 또 다른 일부 구현예에서, A는 OH이며, B는 H이다.
본 발명은 일부분 본 출원의 실시예 부분에서 보다 상세하게 설명하고 있는 특정 발견을 기초로 한다. 예를 들면, 본 발명은 일부분 식 I의 화합물로 치료할 시에 세포에서의 바이러스 역가 수준이 현저하게 감소한 발견을 기초로 한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명은 식 I의 화합물과 체액 또는 세포를 접촉시키는 것을 포함하는 상기 유액 또는 세포에서의 바이러스 역가를 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 본 발명은일부분 추가적으로 식 I의 화합물로 치료 시에 몇몇 바이러스에 있어서의 세포의 바이러스 역가의 수준이 현저하게 감소한다는 발견에 기초하고, 이는 다양한 바이러스 계통에 대항하여 식 I의 화합물에 있어서의 광범위한 항바이러스 활성을 나타내는 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 식 I의 화합물과 상기 유액 또는 세포를 접촉시키는 것을 포함하는 체액 또는 세포에서의 바이러스의 몇몇 형태, 아형 및/또는 계통에 있어서의 바이러스 역가를 감소시키기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 화합물은 여러 형태, 예컨대 염, 수화물, 용매 화합물 또는 착체로 제조되며, 본 발명은 화합물의 모든 변형 형태를 포함하는 조성물 및 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물은 염의 수화물로서 제조된다.
약어 및 정의
약어 "PNP"는 퓨린 뉴클레오사이드 포스포릴라아제를 나타낸다.
여기서 사용하는 것으로서 용어 "본 발명의 화합물(들)"은 식 I의 화합물을 나타내며, 이의 염, 호변체 형태, 수화물 및 용매 화합물을 포함할 수 있다. 식 I의 화합물들은 또한 이의 염의 수화물 또는 용매 화합물을 포함할 수도 있다.
여기서 사용하는 용어 "용매 화합물"은 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 의미하며, 적당한 용매 화합물의 분자는 결정 격자에 포함된다. 적당한 용매는 투여되는 투여량에 생리적으로 허용할 수 있다. 적당한 용매의 예로는 에탄올, 물 등이 있다. 물을 용매로 하는 경우에 분자는 "수화물"이라고 한다.
"약제학적 조성물"은 여기서 기재하는 화합물들 중 하나, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물과 다른 화학적 성분들, 예컨대 생리학적으로 허용가능한 담체 및 부형제의 혼합물을 나타낸다. 약제학적 조성물의 목적은 유기체에 화합물의 투여를 촉진하기 위한 것이다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 예를 들면 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 인산, 포름산, 아세트산, 락트산, 말레산, 푸말산, 숙신산, 주석산, 글리콜산, 살리실산, 시트르산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 벤조산, 말론산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산, 나트탈렌-2 설폰산 및 다른 산들을 포함하는 무기 또는 유기 산으로부터 유도된 염을 포함하는 것으로 의도된다. 약제학적으로 허용가능한 염 형태는 또한 염에 포함되는 분자의 비율이 1:1이 아닌 형태를 포함할 수 있다. 예를 들면, 염은 염기 분자 당 하나 이상의 무기 또는 유기 산 분자, 예컨대 식 I의 화합물의 분자 당 두 개의 염화수소산 분자를 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, 염은 타르타르산 분자 당 식 I의 화합물의 두 개의 분자와 같은 염기 분자 당 하나 미만의 무기 또는 유기 분자를 포함할 수 있다. 염은 또한 용매 화합물 또는 수화물로서 존재할 수 있다.
용어 "산"은 약제학적으로 허용가능한 무기 또는 유기 산 모두를 생각할 수 있다. 무기 산은 미네랄 산, 예컨대 할로겐화수소산, 예컨대 브롬화수소산 및 염화수소산, 황산, 인산 및 질산을 포함한다. 유기 산은 모든 약제학적으로 허용가능한 지방족, 지환족 및 방향족 카르복실산, 디카르복실산, 트리카르복실산 및 지방산을 포함한다. 바람직한 산은 할로겐 또는 하이드록실 기로 선택적으로 치환되는 직쇄 사슬 또는 분지쇄형, 포화 또는 불포화 C1 내지 C20 지방족 카르복실산, 또는 C6 내지 C12 방향족 카르복실산이다.
이러한 산의 예로는 탄산, 포름산, 푸말산, 아세트산, 프로피온산, 이소프로피온산, 발레르산, 알파-히드록시산, 예컨대 글리콜산 및 락트산, 클로로아세트산, 벤조산, 메탄 설폰산 및 살리실산이 있다. 디카르복실산의 예로는 옥살산, 말산, 숙신산, 타르타르산 및 말레산이 있다. 트리카르복실산의 예로는 시트르산이 있다. 지방산은 탄소수 4 내지 24인 모든 약제학적으로 허용가능한 포화 또는 불포화 지방족 또는 방향족 카르복실산을 포함한다. 예로는 부티르산, 이소부티르산, sec-부티르산, 라우르산, 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산 및 페닐스테아린산이 포함된다. 다른 산은 글루콘산, 글리코헵톤산 및 락토비오닉산을 포함한다.
여기서 사용하는 것으로서 용어 "약"은 대략(approximately), 개략적으로(roμghly), 쯤(around) 또는 범위의(in the region of)를 의미하는 것으로서 여기에 사용된다. 용어 "약"이 수의 범위와 결합해서 사용되는 경우 수의 값 이상 및 이하의 경계를 연장시킨 범위로 출발하는 것으로 변경한다. 일반적으로 용어 "약"은 20 퍼센트 위 또는 아래의 가변성(높거나 또는 낮은)으로 상태 값 이상 및 이하의 수 값을 변형시키는 것으로서 여기에 사용된다.
여기서 사용하는 "유효량", "충분한 양" 또는 "치료적 유효량"은 임상 결과를 포함하는 이로운 또는 목적하는 결과에 영향을 주기에 충분한 화합물의 양이다. 이와 같이, 유효량은 예를 들면 바이러스성 감염 또는 하나 이상의 이의 증상의 심각성 및/또는 지속 기간을 감소 또는 개선시키고, 바이러스 감염의 진행을 예방하며, 재발, 진행 또는 바이러스성 감염에 수반된 하나 이상의 증상의 개시를 방지하고, 바이러스의 복제 또는 증가를 예방 또는 감소시키며, 바이러스성 입자의 생산 및/또는 방출을 방지 또는 감소시키고, 또 다른 치료의 예방 또는 치료 효과(들)를 강화 또는 개선시키기에 충분할 수 있다. 유효량은 또한 바람직하지 않은 부작용을 피하거나 또는 상당히 약화시키는 식 I의 화합물의 양을 포함한다.
여기서 사용하고 당업에 잘 알려져 있는 것과 같이 "치료"는 임상적 결과를 포함하는 이롭거나 또는 목적하는 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 이롭거나 또는 목적하는 임상 결과는 이에 제한하지는 않지만 하나 이상의 증상 또는 상태의 경감 또는 약화, 질병 정도의 축소, 질병의 안정화(즉, 악화되지 않음) 상태, 질병이 퍼지는 것의 예방, 질병 진행의 지연 또는 지체, 질병 상태의 개선 및 경감 및 검출가능하거나 또는 검출가능하지 않는 것의 여부 (일부 또는 전부) 완화를 포함할 수 있다. "치료"는 또한 치료받지 않는다면 기대 생존과 비교해서 연장된 생존을 의미할 수 있다.
용어 "담체"는 희석제, 보조제, 부형제 또는 화합물을 투여하는 비히클을 나타낸다. 이러한 약제학적 담체의 비-제한적인 예로는 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등과 같은, 석유, 동물, 식물 또는 합성 유래의 것들을 포함하는 오일 및 물과 같은 액체를 포함한다. 약제학적 담체는 또한 식염수, 아카시아 검, 젤라틴, 전분 페이스트, 탈크, 케라틴, 콜로이드성 실리카, 우레아 등일 수 있다. 또한, 보조제, 안정제, 증점제, 윤활제 및 착색제도 사용할 수 있다. 다른 적당한 약제학적 담체의 예가 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있는 E.W. Martin의 "Remington's Pharmaceutical Sciences"에 기재되어 있다.
여기서 사용하는 용어 "동물", "피험체" 및 "환자"는 이에 제한하지는 않지만 포유류, 동물(예를 들면, 고양이, 개, 말, 돼지 등) 및 인간을 포함하는 동물계의 모든 종류를 포함한다.
상세한 설명
본 발명은 바이러스성 핵산 폴리머라아제, 예컨대 DNA 및/또는 RNA 바이러스성 폴리머라아제의 억제를 위한 방법 및 조성물, 및 피험체에 바이러스성 감염을 치료하는데 유용한 방법 및 조성물을 제공한다. 상기 방법은 치료학적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 상기 조성물 또는 방법은 선택적으로 하나 이상의 부가적인 항바이러스성 제제를 포함할 수 있다. 상기 방법 및 조성물은 하나 이상의 바이러스의 패밀리, 속, 아형, 항원형 또는 계통에 의한 감염으로부터 야기될 수 있는 피험체에서의 바이러스성 감염의 치료, 억제 및/또는 예방에 유용하다.
식 I의 화합물은 그 합성이 예를 들면 WO 03/80620, Evans 등의 Tetrahedron 2000, 56, 30 및 J. Org. Chem. 2001, 66(17), 5723(이들 각각은 이의 전문에 참조로서 여기에 포함되어 있음)에 기재되어 있는, 일반적으로 이뮤노실린(immucillins)으로 알려진 9-디아자아데닌 유도체이다. 유사한 구조의 합성이 예를 들면 미국 특허 제5,985,848호, 제6,066,722호, 제6,228,741호 및 PCT 공개 WO 2003/080620 및 2008/030119(이들 각각은 여기에 이의 전문이 참조로서 포함되어 있음)에 논의되어 있다. 이뮤노실린 유도체는 PNP 억제제로서 연구되었다(Kicska 등, J. Biol. Chem. 2002, 277, 3219-3225 및 Kicska 등, J. Biol. Chem. 2002, 277, 3226-3231 참조; 이들 각각은 여기에 참조에 의해 이의 전문이 포함되어 있음). 몇몇 이뮤노실린은 또한 5'-메틸티오아데노신 포스포릴라아제(MTAP) 또는 5'-메틸티오아데노신 뉴클레오시다아제(MTAN) 억제제로서 연구되었다. 몇몇 기작이 암 및 세균성 감염의 치료와 관련이 있다(WO 03/080620 참조, 이는 이의 전문이 참조로서 여기에 ㅍ포함되어 있음).
식 I의 화합물은 호변체 특성을 나타낼 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 식 I의 화합물의 호변체 형태 및 이의 혼합물을 포함한다. 몇몇 화합물이 이들 각각이 본 발명의 범주 내에 있는 약제학적으로 허용가능한 염, 용매 화합물 및/또는 수화물로 존재한다는 것이 추가로 인식될 것이다.
일부 구현예에서, 식 I의 화합물은 약제학적으로 허용가능한 염으로 존재한다. 일부 구현예에서, 염의 형태는 산 및 식 I의 화합물이 약 1:1의 비율이다. 일부 구현예에서, 염의 형태는 산 및 식 I의 화합물의 약 1:1의 비율 이상이다. 일부 구현예에서, 염 형태는 산 및 식 I의 화합물이 약 2:1의 비율이다. 일부 구현예에서, 염 형태는 수화물로서 존재한다.
일부 구현예에서, 식 I의 화합물은 수화물 또는 용매 화합물로서 존재한다.
따라서 여기서 밝히고 있는 화합물은 숙주 또는 피험체에서의 바이러스성 감염을 치료 및/또는 예방하는데 유용하다. 본 발명의 방법은 이러한 바이러스성 감염에 의해 야기되거나 및/또는 이러한 감염과 관련된 질병 상태 또는 증상을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 바이러스성 감염의 예로는 이에 제한되지는 않지만 아데노바이러스, 리노바이러스, 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae)가 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 바이러스 관련 바이러스성 감염을 치료 또는 예방을 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스 타입에의 감염을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 바이러스류로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 리노바이러스, 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae) 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드(Pichinde), 푸타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라, 마르부르크, 황열병, 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 마르부르크이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 황열병이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B이다.
일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일 또는 뎅기열이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 뎅기열이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 바이러스의 복제 또는 전염성을 억제하기 위해 사용한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 바이러스로 감염된 세포의 성장을 억제하기 위해 사용된다. 상기 바이러스의 예로는 이에 제한되지는 않지만 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리의 바이러스류가 있다. 바이러스의 특이적 예로는 이에 제한되지는 않지만 아데노바이러스, 리노바이러스, 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae)가 있다.
따라서, 일부 구현예에서, 바이러스는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae) 바이러스의 바이러스류로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드(Pichinde), 푸타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스를 포함한다.
일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라, 마르부르크, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 마르부르크이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 황열병이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B이다.
일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일 또는 뎅기열이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 뎅기열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는, 피험체의 바이러스 RNA 또는 DNA 폴리머라아제를 억제하는 방법을 제공한다.
볼티모어 분류 체계에 따르면, RNA 폴리머라아제 바이러스는 예컨대 예를 들면 이중 가닥 바이러스, 양성센스 단일 가닥 바이러스 및 음성센스 단일 가닥 바이러스 군으로 분류될 수 있다. 양성센스 단일 가닥 패밀리는 예를 들면 코로나 바이러스, 피코나바이러스, 토가바이러스, 플라비바이러스 등을 포함한다. 음성센스 단일 가닥 패밀리는 예를 들면 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 오르토믹소바이러스, 필로바이러스 등을 포함한다. 바이러스 패밀리 각각은 또한 속, 종 및 항원형(또는 아형)으로 분류할 수 있다. 바이러스의 분류학상 명칭의 기타 명칭은 바이러스 분류 국제 위원회에 따른 분류 지침서에 의해 제시했다.
일부 구현예에서, RNA 폴리머라아제는 이중 가닥이다. 일부 구현예에서, RNA 폴리머라아제는 단일 가닥이다. 일부 구현예에서, RNA 폴리머라아제는 양성센스 단일 가닥이다. 일부 구현예에서, RNA 폴리머라아제는 음성센스 단일 가닥이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 하나 이상의 바이러스의 패밀리, 속, 아형, 계통 및/또는 항원형으로부터의 RNA 폴리머라아제 및/또는 바이러스의 넓은 범위의 억제를 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 바이러스의 패밀리, 속, 아형, 계통 또는 항원형에의 감염의 광범위한 스펙트럼의 치료, 억제 또는 예방을 제공한다. 일부 구현예에서, 광범위한 스펙트럼은 두 개 이상의 바이러스의 패밀리, 속, 아형, 계통 및/또는 항원형을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 바이러스 패밀리, 속, 아형, 항원형 또는 계통으로부터의 바이러스성 폴리머라아제의 억제 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 바이러스성 감염의 치료, 억제 및/또는 예방 방법을 제공하며, 상기 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스 패밀리, 속, 아형, 항원형 또는 계통에 의한 감염의 결과이다.
일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스류는 하나 이상의 바이러스 속으로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스류는 하나 이상의 바이러스 종으로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스류는 하나 이상의 아형 또는 항원형으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스류는 하나 이상의 계통으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리의 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바아러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae) 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터의 폴리머라아제를 포함한다.
일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드(Pichinde), 푸타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 에볼라, 마르부르크, 황열병, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 에볼라 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 마르부르크 바이러스성 폴리머아제이이다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 황열병 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, RNA 바이러스성 폴리머라아제는 인플루엔자 A 바이러스성 폴리머라아제 또는 인플루엔자 B 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제는 웨스트 나일 또는 뎅기열 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제는 웨스트 나일 바이러스성 폴리머라아제이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제는 뎅기열 바이러스성 폴리머라아제이다.
일부 구현예에서, 바이러스는 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 바이러스는 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 바이러스는 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드(Pichinde), 푸타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라, 마르부르크, 황열병, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 마르부르크이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 황열병이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B이다.
일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일 또는 뎅기열이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 뎅기열이다.
인플루엔자 A 바이러스의 게놈은 바이러스성 RNA 전사 및 복제의 촉매역할을 하는 RNA-의존적 RNA 폴리머라아제를 갖는다. 바이러스의 전사 및 복제가 RNA 폴리머라아제의 활성에 따라 달라지므로, 이 효소는 약물 내성 바이러스의 최근 출현에 뒤이은 신규의 항바이러스성 화합물 개발을 위한 표적으로서 주목을 받았다. 바이러스는 치료 시에 하나의 약물에 대한 내성을 나타내어, 약물의 효능이 감소하고, 피험체는 또 다른 항바이러스성 약물로 치료해야할 필요가 있을 수 있다. 따라서 광범위한 스펙트럼의 바이러스 균주에 대해 동시에 효능을 나타내는 약물 또는 치료가 유용하다.
또한, 상기 조성물 또는 방법은 식 I의 화합물과 결합한 하나 이상의 부가적인 항바이러스성 제제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 항바이러스성 제제의 예로는 이에 제한하지는 않지만, 싸이토빈, 간시클로비르, 트리소듐 포스포노포르메이트, 리바비린, 인터페론, d4T, ddI, AZT 및 아만타딘, 리만다틴, 및 다른 항인플루엔자 제제; 아시클로비르 및 관련된 제제, 포스카르네트 및 다른 항헤르페스 바이러스 제제가 있다. 뉴라미니다아제 억제제의 비-제한적인 예로는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르가 있다.
인플루엔자 폴리머라아제의 억제와 관련된 화합물은, 예를 들면 이들 각각의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있는 미국 특허 제7,388,002호; 제7,560,434호; 및 미국 특허 출원 제12/440,697호(미국 특허 공개 번호 제20100129317호로 공개됨); 및 제12/398,866호(미국 특허 공개 번호 제20090227524호로서 공개됨)에 기재되어 있다. 현재, T-705(파비피라비르; 6-플루오로-3-히드록시-2-피라진카르복사미드)로 공지되어 있는 임상 시험의 하나의 인플루엔자 폴리머라아제 억제제가 있다. T-705는 in vivo 및 in vitro의 복수 계통의 인플루엔자 바이러스 감염에 대항하는 강력하고 넓은 스펙트럼의 항바이러스성 활성을 갖는다(Kiso 등의 PNAS 2010, 107, 882-887; 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있음). T-705는 대부분의 항인플루엔자 바이러스성 약물과는 상이한 활성 기작이 특징이다.
항바이러스로서 사용되는 화합물의 또 다른 부류는 M2 억제제이다(Pielak, R., Schnell, J., & Chou, J. (2009) Proceedings of the National Academy of Sciences, 106 (18), 7379-7384 참조, 이의 전문에 참조로서 여기에 포함되어 있음). 이 부류의 예시적인 종류는 아만타딘 및 리만타딘을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 하나 이상의 부가적인 항바이러스성 제제의 투여를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 싸이토벤, 간시클로비르, 트리소듐 포스포노포르메이트, 리바비린, 인터페론, d4T, ddI, AZT 및 아만타딘, 리만다틴, T-705 및 다른 항인플루엔자 제제; 아시클로비르 및 관련된 제제, 포스카르네트 및 다른 항헤르페스 바이러스 제제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 항인플루엔자 제제이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 뉴라미니다아제 억제제이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 파라미비르이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 라니나미비르이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 오셀타미비르이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 자나미비르이다.
일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 M2 억제제이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 아만타딘 및 리만다틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 두 개의 부가적인 항바이러스성 제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 뉴라미디다아제 억제제 및 M2 억제제이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 1) 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르; 및 2) 아만타딘 및 리만다틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 부가적한 항바이러스성 제제는 페라미비르 및 아만타딘이다. 일부 구현예에서, 부가적인 항바이러스성 제제는 페라미비르 및 리만타딘이다.
본 발명은 효과적인 억제 양의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매 화합물과 폴리머라아제를 접촉시키는 단계를 포함하는 바이러스 RNA 또는 DNA 폴리머라아제의 억제 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스성 감염으로 고통받는 피험체를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 바이러스성 감염을 억제하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매 화합물을 피험체에 투여하는 단계를 포함하는 RNA 바이러스성 감염으로 고통받는 피험체를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리, 또는 이의 임의의 조합의 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 간염, 면역결핍 바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 리노, 웨스트 나일, 천연두, 뇌염, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푸타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 파친대(pachindae), 또는 이의 임의의 조합의 바이러스로부터 선택되는 감염이다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B(인간, 조류 및 돼지를 포함함), 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드(Pichinde), 푸타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라, 마르부르크, 황열병, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 에볼라이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 마르부르크이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 황열병이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B이다.
일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일 또는 뎅기열이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 웨스트 나일이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 뎅기열이다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, PIV, RSV, 쥬닌, 피친드, 리프트계곡열, 뎅기열, 홍역, 황열병 및 SARS-CoV, 또는 이의 임의의 조합의 바이러스로부터 선택된 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 인플루엔자 A 및 B, 이의 아형, 이의 계통, 또는 이의 임의의 조합으로부터 선택된 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 에볼라, 마르부르크 또는 황열병으로부터 선택된 감염이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 에볼라이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 마르부르크이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 황열병이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 웨스트 나일 또는 뎅기열이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 웨스트 나일이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염은 뎅기열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 이러한 바이러스성 감염과 관련되거나 또는 이에 의해 야기되는 바이러스성 감염 및/또는 질병 상태, 및/또는 증상의 치료 방법으로 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물로 이루어지는 약제학적 조성물 및/또는 약제의 사용을 제공한다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 하기 단계를 포함한다: i) 이러한 치료의 필요가 있는 피험체를 규명하는 단계; (ii) 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및 (iii) 이러한 치료를 필요로 하는 피험체에서 바이러스 DNA 또는 RNA 폴리머라아제의 활성을 억제하거나 또는 피험체에서 바이러스성 감염을 치료하기 위해 치료적 유효량의 상기 화합물 또는 조성물을 투여하는 단계.
일부 구현예에서, 치료 효험은 바이러스 DNA 또는 RNA 폴리머라아제의 억제로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 이러한 치료 효험은 하나 이상의 바이러스 패밀리로부터 바이러스성 폴리머라아제의 억제로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스는 하나 이상의 바이러스 속으로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스는 하나 이상의 바이러스 종으로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 바이러스성 폴리머라아제 또는 바이러스는 하나 이상의 아형, 항원형 또는 계통으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 in vivo에서 실행된다.
일부 구현예에서, 피험체는 포유류이다. 일부 구현예에서, 피험체는 인간이다. 일부 구현예에서, 피험체는 조류이다. 일부 구현예에서, 피험체는 멧돼지 또는 돼지이다.
일부 구현예에서, 체액은 혈액이다. 일부 구현예에서, 체액은 플라즈마이다. 일부 구현예에서, 체액은 혈청이다.
일부 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 정맥내, 복막내, 근육내 또는 경구로 투여된다.
일부 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 정맥내로 투여된다.
일부 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 복막내로 투여된다.
일부 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 근육내로 투여된다.
일부 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 경구로 투여된다.
상기 방법은 치료적 유효량의 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 피험체에 투여하는 단계를 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들면, 보조제, 희석제, 부형제, 필러, 윤활제 및 비히클을 포함한다. 흔히, 약제학적으로 허용가능한 담체는 활성 화합물에 대해서 화학적으로 불활성이며, 사용 조건하에서 비독성이다. 약제학적으로 허용가능한 담체의 예는, 예를 들면 물 또는 식염수 용액, 폴리에틸렌 글리콜, 카르보하이드레이트 및 이의 유도체와 같은 폴리머, 오일, 지방산, 또는 알코올이 있다. 일부 구현예에서, 담체는 식염수 또는 물이다. 일부 구현예에서, 담체는 식염수이다. 일부 구현예에서, 담체는 물이다.
일부 구현예에서, 바이러스성 감염 또는 질병 상태의 예방 또는 억제 방법은 하기 단계를 포함한다: i) 이러한 치료가 필요한 피험체를 규명하는 단계; (ii) 식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및 (iii) 이러한 치료를 필요로 하는 피험체에서 바이러스 DNA 또는 RNA 폴리머라아제 활성을 억제하거나 또는 피험체에서 바이러스성 감염 또는 질병 상태를 예방 또는 억제하기 위해 치료학적으로 유효한 양의 상기 화합물 또는 조성물을 투여하는 단계.
본 발명의 화합물은 여러 형태, 예컨대 염, 수화물, 용매 화합물, 호변체 또는 착체로 제조되며, 본 발명은 모든 다양한 형태의 화합물을 둘러쌓는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 식 I의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 식 I의 화합물은 또한 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들면 산 부가 염 및 이의 착체로서 제제화될 수 있다. 이러한 염의 제제화는 이의 생리학적 효과를 막지 않고 제제의 물리적 특성들을 변경하여 약리학적 사용을 용이하게 할 수 있다. 물리적 특성에서의 유용한 변경의 예로,는 이에 제한하지는 않지만 점막 관통 투여를 촉진시키기 위해 용융점을 낮추는 것과 고 농도의 약물의 투여를 촉진시키기 위해 용해도를 증가시키는 것이 있다.
본 발명의 피험체는 in vitro 및 in vivo 시스템이며, 예를 들면 분리되거나 또는 배양된 세포 또는 조직, 비-세포 in vitro 분석 시스템 및 동물(예를 들면, 양서류, 조류, 어류, 포유류, 유대 동물, 인간, 가축, 예컨대 예를 들면 고양이, 개, 원숭이, 쥐 또는 래트; 또는 시판되는 동물, 예컨대 예를 들면 소 또는 돼지)을 포함한다.
본 발명의 화합물은 in vivo 투여에 적당한 생물학적으로 양립할 수 있는 형태로 피험체에게 투여하기 위한 약제학적 조성물로 제제화할 수 있다. 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 희석제 및/또는 담체와 혼합하여 식 I의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 조성물의 다른 성분들과 양립할 수 있고, 이의 수용체에 해를 주지 않는 의미의 "허용가능함"이어야 한다. 여기서 이용하는 약제학적으로 허용가능한 담체는 약제학적 제제용 재료로서 상용되며, 진통제, 완충제, 결합제, 붕괴제, 희석제, 유화제, 부형제, 증량제, 활주제, 용해제, 안정제, 현탁화 제제, 탄력 제제, 비히클 및 점도 증가 제제로서 포함되는 다양한 유기 또는 무기 재료로부터 선택될 수 있다. 약제학적 첨가제, 예컨대 항산화제, 방향성 물질, 착색제, 향-개선 제제, 보존제 및 감미제도 또한 첨가될 수 있다. 허용가능한 약제학적 담체의 예로는 다른 것 중에서도 카르복시메틸 셀룰로스, 결정성 셀룰로스, 글리세린, 검 아라빅, 락토스, 마그네슘 스테아레이트, 메틸 셀룰로스, 분말, 식염수, 나트륨 알지네이트, 슈크로스, 전분, 탈크 및 물이 있다. 일부 구현예에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한"은 동물 및 보다 특히 인간에서 사용하기 위한 미국 약적 또는 다른 일반적으로 인지된 약전에 나열되어 있거나 또는 연방 또는 주 정부의 규제 기관에서 승인한 것을 의미한다.
계면활성제, 예컨대 예를 들면 세정제는 제제에 사용하기 적당해야 한다. 계면활성제의 특이적 예로는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 알코올, 비닐 아세테이트 및 비닐피롤리돈의 코폴리머, 폴리에틸렌 글리콜, 벤질 알코올, 만니톨, 글리세롤, 소르비톨 또는 소르비탄의 폴리옥시에틸렌화 에스테르; 레시틴 또는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스; 또는 아크릴 유도체, 예컨대 메타크릴레이트 및 다른 것들, 음이온성 계면활성제, 예컨대 알칼리성 스테아레이트, 특히 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 스테아레이트; 칼슘 스테아레이트 또는 트리에탄올아민 스테아레이트; 알킬 설페이트, 특히 나트륨 라우릴 설페이트 및 나트륨 세틸 설페이트, 나트륨 도데실벤젠 설포네이트 또는 나트륨 디옥틸 설포숙시네이트; 또는 지방산, 특히 코코넛 오일로부터 유도된 것들, 양이온성 계면활성제, 예컨대 식 N+R'R''R'''R''''Y-(여기서, R 라디칼은 선택적인 히드록실화 탄화수소 라디칼과 동일하거나 또는 상이하며, Y-는 할로겐화물, 설페이트 및 설포네이트 음이온과 같은 강산의 음이온임)의 수용성 제4 암모늄 염이 있고; 세틸트리메틸암모늄 브로마이드는 사용할 수 있는 양이온성 계면활성제 중의 하나이며, 식 N+R'R''R'''(여기서, R 라디칼은 선택적 히드록실화 탄화수소 라디칼과 동일하거나 또는 상이함)의 아민 염이며; 옥타데실아민 염화수소염은 사용할 수 있는 양이온성 계면활성제 중의 하나이고, 비이온성 계면활성제, 예컨대 소르비탄의 선택적 폴리옥시에틸렌화 에스테르이며, 특히 폴리소르베이트 80 또는 폴리옥시에틸렌화 알킬 에테르이며; 폴리에틸렌 글리콜 스테아레이트, 피마자유의 폴리옥시에틸렌화 유도체, 폴리글리세롤 에스테르, 폴리옥시에틸렌화 지방 알코올, 폴리옥시에틸렌화 지방산 또는 에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드의 코폴리머, 양쪽성 계면활성제, 예컨대 베타인의 치환형 라우릴 화합물이 있다.
피험체에 투여한 경우 식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체는 살균한 것일 수 있다. 일부 구현예에서,식 I의 화합물을 정맥 내 투여하는 경우 물이 담체이다. 일부 구현예에서, 담체는 식 I의 화합물을 정맥 내 투여하는 경우에 식염수 용액이다. 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 또한 액체 담체로서, 특히 주입가능한 용액으로 이용할 수 있다. 적당한 약제학적 담체는 또한 부형제, 예컨대 전분, 글루코스, 락토스, 슈크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 나트륨 클로라이드, 건조형 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 300, 물, 에탄올, 폴리소르베이트 20 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적한다면 소량의 습윤 또는 유화 제제 또는 pH 완충 제제를 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 제제는 약제학 분야에서 잘 알려진 방법으로 제조한다. 예를 들면 식 I의 화합물은 현탁액 또는 옹액으로서 담체 및/또는 희석제와 결합시킨다. 선택적으로, 하나 이상의 부속 성분(예를 들면, 완충제, 향료, 계면 활성제 등)도 또한 첨가한다. 담체의 선택은 화합물의 용해도 및 화학적 특성, 선택된 투여 경로 및 표준 약제학적 실행에 의해 결정한다. 일부 구현예에서, 제제는 식 I의 화합물 및 물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 식 I의 화합물 및 식염수를 포함한다.
부가적으로, 본 발명의 화합물은 경구 투여, 혀밑샘 또는 구강 투여, 비경구 투여, 경피성 투여, 흡입을 통한 투여, 또는 비강 내, 질, 직장 및 근육 내를 포함하는, 그러나 이에 제한되지 않는, 공지된 절차에 의해 인간 또는 동물 피험체에 투여한다. 본 발명의 화합물은 근막상, 피막 내, 두개 내, 피부 내, 척추 강내, 근육 내, 안와 내, 복막 내, 수강 내, 흉골 내, 혈관 내, 정맥 내, 실질 조직 내, 피하 또는 혀밑샘 주입 또는 카테터에 의해 비경구적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 근육내 운반에 의해 피험체에 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 복막 내 운반에 의해 피험체에 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 정맥 내 운반에 의해 피험체에 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물은 경구로 투여된다.
경구 투여에 있어서, 본 발명의 화합물의 제제는 캡슐, 정제, 분말, 과립으로서 또는 현탁액 또는 용액으로서 존재할 수 있다. 캡슐 제제는 젤라틴, 소프트-겔 또는 고체일 수 있다. 정제 및 캡슐 제제는 추가로 하나 이상의 보조제, 결합제, 희석제, 붕괴제, 부형제, 필러 또는 윤활제를 함유할 수 있으며, 이들 각각은 당업에 공지되어 있다. 상기의 예로는 카보하이드레이트, 예컨대 락토스 또는 슈크로스, 2염기 칼슘 포스페이트 무수물, 옥수수 전분, 만니톨, 크실리톨, 셀룰로스 또는 이의 유도체, 미세결정성 셀룰로스, 젤라틴, 스테아레이트, 실리콘 이산화물, 탈크, 나트륨 전분 글리콜레이트, 아카시아, 향미제, 보존제, 완충제, 붕괴제 및 착색제가 있다. 경구 투여 조성물은 하나 이상의 선택 제제, 예컨대 예를 들면 감미제, 예컨대 플락토스, 아스파탐 또는 사카린; 향미제, 예컨대 페퍼민트, 윈터녹색 오일 또는 체리; 착색제; 및 보존제를 포함하여 약제학적으로 맛좋은 제제를 제공할 수 있다.
비경구 투여(즉, 소화관 이외의 경로를 통한 주입에 의한 투여)에 있어서, 본 발명의 화합물은 피험체의 혈액과 등장인 멸균 수용액과 결합할 수 있다. 이러한 제제는 수용액을 제조하고, 이후에 상기 용액을 멸균하기 위해, 생리학적으로 혼화가능한 물질, 예컨대 나트륨 클로라이드, 글리신 등을 함유하고, 생리학적 조건과 양립가능한 완충 pH를 갖는 물에 고체 활성 성분을 용해시켜 제조된다. 상기 제제는 단위 또는 다중 투여량 컨테이너, 예컨대 밀봉된 앰플 또는 병에 존재할 수 있다. 상기 제제는 제한 없이 근막상, 피막 내, 두개 내, 피부 내, 척추 강내, 근육 내, 안와 내, 복막 내, 수강 내, 흉골 내, 혈관 내, 정맥 내, 실질 조직 내, 피하 또는 혀밑샘 주입 또는 카테터에 의한 것을 포함하는 임의의 주입 방식으로 피험체의 몸체로 운반될 수 있다.
비경구 투여는 수성 및 비수성계 용액을 포함한다. 이들의 예는 예를 들면 물, 식염수, 수성 당 또는 당 알코올 용액, 알콜성(예컨대 에틸 알코올, 이소프로판올, 글리콜), 에테르, 오일, 글리세라이드, 지방산 및 지방산 에스테르를 포함한다. 일부 구현예에서, 물은 비경구 투여용으로 사용된다. 일부 구현예에서, 식염수는 비경구 투여용으로 사용된다. 비경구 주입용 오일은 동물, 식물, 합성 또는 석유계 오일을 포함한다. 용액용 당의 예는 슈크로스, 락토스, 덱스트로스, 만노스 등을 포함한다. 오일의 예는 미네랄 오일, 광유, 대두, 옥수수, 면실, 땅콩 등을 포함한다. 지방산 및 에스테르의 예는 올레산, 미리스트산, 스테아르산, 이소스테아르산 및 이의 에스테르를 포함한다.
경피 투여에 있어서, 본 발명의 화합물은 피부 침투 증진제, 예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이소프로판올, 에탄올, 올레산, N-메틸피롤리돈 등과 결합하며, 이는 본 발명의 화합물의 투과력을 증가시키고, 피부를 통해 혈류로의 화합물을 침투시킨다. 화합물/증진제 조성물은 또한 폴리머 물질, 예컨대 에틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 에틸렌/비닐아세테이트, 폴리비닐 피롤리돈 등과 추가로 결합하여, 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 목적하는 점도로 증발되며, 이후에 패치를 제공하기 위해 안감 물질에 적용되는 겔 형태의 조성물을 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 캡슐 또는 단일-투여량 병으로 제공된다. 적당한 단위 투여량, 즉 치료적으로 유효한 양은 선택된 화합물의 투여가 지시되는 조건 각각에 적당하게 설계된 임상 시험 중에 결정될 수 있으며, 물론 목적하는 임상 종료점에 따라 달라질 것이다.
본 발명은 또한 피험체에서 질병, 예컨대 바이러스성 질병을 치료 및 예방하기 위한 제조 물품을 제공한다. 제조 물품은 선택적으로 여기서 기재하는 것과 같이 하나 이상의 부가적인 항바이러스성 화합물을 추가로 포함하는 식 I의 화합물의 약제학적 조성물을 포함한다. 제조 물품은 약제학적 조성물이 치료 및/또는 예방할 수 있는 다양한 질병을 위한 지시와 함께 포장된다. 예를 들면, 제조 물품은 특정 질병의 치료 또는 예방이 가능한 여기서 기재하는 화합물을 단위 투여량, 및 예를 들면 바이러스성 감염과 같은 특정 질병을 치료 및 예방할 수 있는 단위 투여량에 관한 지시가 포함된다.
본 발명의 방법에 따르면, 식 I의 화합물은 피험체, 특히 피험체의 세포에 바이러스 양을 감소시키는 것을 제한 또는 예방하기 위해 효과적인 양으로 피험체에 투여(또는 피험체의 세포와 접촉)된다. 상기 양은 in vivo 역가 곡선 분석 및 여기서 기재하는 방법 및 분석을 포함하는 공지된 절차를 기본으로 당업의 기술자에 의해 용이하게 결정된다. 일부 구현예에서, 피험체에서 바이러스성 입자의 양의 증가를 제한하거나 또는 막는데 효과적인 본 발명의 화합물의 적당한 양은 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 1000 mg/kg/일의 범위이며, 및/또는 약 300 ng/mL 내지 약 1000 ng/mL 또는 그 이상의 범위의 플라즈마 수준을 획득하기에 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물의 양은 약 5 mg/kg/일 내지 약 1000 mg/kg/일의 범위이다. 일부 구현예에서, 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 500 mg/kg/일이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 300 mg/kg/일이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 200 mg/kg/일이 투여된다. 몇몇 구현예에서, 약 0.05 mg/kg/일 내지 약 100 mg/kg/일이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 0.05 mg/kg/일 내지 약 50 mg/kg/일이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 0.05 mg/kg/일 내지 약 30 mg/kg/일이 투여된다. 일부 구현예에서, 약 0.05 mg/kg/일 내지 약 10 mg/kg/일이 투여된다.
조성물에 이용되는 정확한 투여량은 또한 투여 경로 및 감염 또는 질병의 심각성에 따라 달라질 것이며, 의사의 판정 및 각 환자의 환경에 따라 결정되어야 한다. 그러나, 근육 내 투여에 있어서 적당하고 효과적인 투여량 범위는 일반적으로 체중 1 kg 당 식 I의 화합물의 약 0.5 내지 약 1000 mg이다. 특정 구현예에서, 근육 내 투여량은 약 500 내지 약 1000 mg/kg, 약 300 내지 약 500 mg/kg, 약 200 내지 약 300 mg/kg, 약 100 내지 약 200 mg/kg, 약 50 내지 약 100 mg/kg, 약 10 내지 약 50 mg/kg 또는 약 5 내지 약 10 mg/kg(또는 체표면적 1 평방 미터 당으로 표현되는 균등한 투여량)이다. 대안적으로, 정맥 내 투여용의 적당한 투여 범위는 환자의 체중 또는 체표면적에 있어서의 조정 없이 약 5 내지 약 1000 mg의 투여량을 사용하여 수득될 수 있다. 대안적으로, 복강 내 투여용의 적당한 투여 범위는 환자의 체중 또는 체표면적에 있어서의 조정 없이 약 5 내지 약 1000 mg의 투여량을 사용하여 수득될 수 있다. 경구 조성물은 식 I의 하나 이상의 화합물 단독으로 또는 또 다른 치료 제제와 결합한 것의 약 10 중량% 내지 약 95 중량%를 함유할 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 경구, 복강 내 또는 근육 내 투여용의 적당한 투여량 범위는 일반적으로 체중 1 kg 당 화합물의 약 5 내지 약 1000 mg, 바람직하게는 약 5 내지 약 500 mg 또는 체표면적의 1 평방 미터 당으로 표현되는 이들의 균등 투여량인 것이 일반적이다. 일부 구현예에서, 경구, 복강 내 또는 근육 내 투여량은 약 5 내지 약 50 mg/kg, 약 50 내지 약 80 mg/kg, 약 80 내지 약 150 mg/kg, 약 150 내지 약 250 mg/kg, 약 250 내지 약 350 mg/kg, 약 350 내지 약 450 mg/kg, 약 450 내지 약 550 mg/kg, 약 550 내지 약 700 mg/kg, 약 700 내지 약 1000 mg/kg(또는 체표면적의 1 평방 비터 당으로 표현되는 균등 투여량)이다. 일부 구현예에서, 경구, 복강 내 또는 근육 내 투여용의 적당한 투여량 범위는 환자의 체중 또는 체표면적에 있어서의 조정 없이 약 5 내지 약 2000 mg이다. 다른 효과적인 투여량은 in vitro에서 유래되는 투여량-반응 곡선 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 추정할 수 있다. 이러한 동물 모델 및 시스템은 당업에 잘 알려져 있다.
특정 측면에서, 바이러스성 감염의 맥락에서의 화합물의 "유효량"은 바이러스의 생활 주기의 하기 단계 중 하나 이상을 감소시키기에 충분한 양이다: 세포로의 바이러스 입자의 도킹, 바이러스 유전자 정보의 세포로의 도입, 바이러스 단백질의 발현, 신규의 바이러스 입자의 생성 및 5% 이상, 바람직하게는 10% 이상, 15% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 100%까지의 세포로부터의 바이러스 입자의 방출. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염의 맥락에서 화합물의 유효량은 바이러스의 복제, 증가 또는 전파를 5% 이상, 바람직하게는 10% 이상, 15% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 100%까지 감소시키다. 일부 구현예에서, 바이러스성 감염의 맥락에서 화합물의 유효량은 감염된 피험체의 생존율을 5% 이상, 바람직하게는 10% 이상, 15% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 100%까지 증가시킨다.
당업자는 단지 일반적인 실험을 사용해서, 여기서 기재하는 본 발명의 특이적 구현예에 대한 많은 균등물을 인지하거나 또는 확정할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 간주한다.
본 발명은 하기의 비-제한적인 실시예에 의해서 추가로 기재한다.
실시예
실시예 1: (2 S ,3 S ,4 R ,5 R )-2-(4-아미노-5 H - 피롤로[3,2- d ]피리미딘 -7-일)-5-(히 드록시메 틸) 피롤리딘 -3,4-디올[HC1 염으로서 화합물 1(식 I, 여기서, A = NH2　및 B = H임)]의 합성.
Figure 112013041948813-pct00002
단계-1:
물 및 메탄올(1:1, 2.4L) 중의 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤리딘-2-일)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(1-1)[(Evans, Gary B.; Furneaux, Richard FT; Hutchison, Tracy L.; Kezar, Hollis S.; Morris, Philip E., Jr.; Schramm, Vern L.; Tyler, Peter C의 Journal of Organic Chemistry (2001), 66(17), 5723-5730에서 보고된 절차에 따라 제조함, 상기는 이의 전문이 참조로서 여기에 포함됨), 115 g, 390 mmol] 용액에 트리에틸아민(113 mL, 1.12 mol)을 실온에서 첨가하고, 이후에 (Boc)20(227 g, 1.04 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 고제 생성물을 여과로 수집하고, 물로 세척한 다음에 진공하에 건조시켜 (2R,3R,4S,5S)-tert-부틸 3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)-5-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (1-2)(100%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 7.85 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.73 - 4.53 (m, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.70 - 3.53 (m, 2H), 1.36 및 1.04 (s, 3H, 6H 로토머).
단계-2:
피리딘(184 mmol, 2.26 mol) 중의 (2R,3R,4S,5S)-tert-부틸 3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)-5-(4-옥소-4, 5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-1-카르복실레이트(1-2) 용액에 DMAP(0.79 g, 6.46 mmol) 및 아세트산 무수물(107 mL, 1131 mmol)을 실온에서 첨가했다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 클로로포름으로 희석하고, 물, 수성 HCl, 물 및 수성 포화 나트륨 비카르보네이트로 세척했다. 유기 층을 건조시키고, 여과하며, 진공하에 농축해서 다음 단계로 사용하기에 충분하게 순수한 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]
피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 다아세테이트 (1-3)(150 g)을 수득했다. MS (ES+) 493.1 (M+l), 515.1 (M+Na); (ES~) 491.4 (M-l).
단계-3:
아세토니트릴(660 mL) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-옥소-4, 5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-3)(150 g, 300 mmol) 용액에 벤질트리에틸암모늄 클로라이드(137 g, 600 mmol), 디메틸아닐린(57 mL, 450 mmol) 및 이후에 POCl3(164 mL, 1800 mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 80℃에서 가열했다. 반응 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 진공하에서 건조될 때까지 농축했다. 수득된 잔류물을 클로로포름에 용해하고, 수성 포화 나트륨 비카르보네이트, 즉 소금물로 세척하고, 건조시키고, 여과 및 건조로 농축했다. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이(1-4)의 잔류물을 정제 없이 다음 단계에 사용했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 12.54 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.85 (m, 1H), 5.45 (m, 1H), 5.10 (m, 1H), 4.49 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 2.07 - 1.99 (m, 9H), 1.19 (2 bs, 9H, 로토머).
단계-4:
DMF(540 mL) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-
부톡시카르보닐)-5-(4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-4)(300 mmol)에 나트륨 아지드(97.5 g, 1500 mmol)를 첨가하고, 80℃에서 밤새 가열했다. 반응 혼합물을 진공으로 농축하고, 수득된 잔류물을 클로로포름에 용해했다. 클로로포름 층을 물로 세척하고, 건조시키며, 여과하고진공으로 눙축했다. (아세톤:헥산 = 1:2)로부터의 결정화에 의해 정제로 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-5)를 수득했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 13.56 -13.00 (bs, 1H), 9.86 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 5.78 (m, 1H), 5.40 (m, 1H), 5.26 - 5.14 (m, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.16 - 4.03 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 6H), 1.14 (bs, 9H); MS (ES+) 540.0 (M+l); (ES-) 515.9 (M-l).
단계-5:
메탄올(1 L) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-
디일 디아세테이트(1-5)(300 mmol) 용액에 Pd(OH)2(30 g)을 첨가했다. 반응 혼합물을 (160 psi)에서 밤새 수소화하고, 여과해서 셀라이트를 통해 촉매를 제거했다. 여과액을 진공하에 농축해서 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(113 g)을 수득했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 12.47 - 11.92 (m, 1H), 8.84 - 8.03 (m, 3H), 7.90 - 7.68 (m, 1H), 5.70 - 5.51 (m, 1H), 5.38 (m, 1H), 5.12 (m, 1H), 4.42 (m, 2H), 4.17 - 4.00 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.14 (s, 9H); MS (ES+) 492.1 (M+l), (ES-) 490.0 (M-l).
단계-6:
메탄올(500 mL) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(111 g, 226 mmol) 용액에 NaOMe(메탄올 중의 25% w/w, 4.88g, 22.6 mmol)을 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하고, 진공으로 농축해서 (2S,3S,4R,5R)-tert-부틸 2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤로딘-1-카르복실레이트(1-7)를 수득했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.40 - 10.73 (bs, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.39 (2s, 1H), 6.90 (s, 2H), 4.83 (m, 2H), 4.45 (m, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.58 (m, 3H), 1.31 and 0.99(s, 3H, 6H, 로토머); MS (ES+) 366.0 (M+l), 388.0 (M+Na); (ES-) 363.8 (M-l).
단계-7:
수성 HCl(농축 HCl 160 mL 및 물 400 mL) 중의 (2S,3S,4R,5R)-tert-부틸 2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(1-7) 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음에 진공으로 건조 농축했다. 수득된 잔류물을 물에 용해시키고, 활성화 차콜로 처리하여, 30분 동안 환류시켰다. 뜨거운 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 농축하여 반-고형 생성물을 수득하고, 물 및 에탄올로 재결정화하여 백색 결정으로서 (2S,3S,4R,5R)-2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일-5-(히드록시메틸)피롤리딘-3,4-디올(1)(50 g, 7 단계에 있어서의 전체 수율: 42.6%)을 수득했다. 1H NMR (300 MHz, D20) δ 8.41 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 4.99 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.45 (dd, J = 3, 1.5 Hz, 1H), 3.97 (m, 2H), 3.90 (m, 1H); MS (ES+) 266.2 (M+l), (ES-) 264.0 (M-l); 분석: C11H15N503　·2HCl에 대하여 계산: C, 39.07; H, 5.07; N, 20.71; Cl, 20.97; 확인: C, 39.09; H, 5.10; N, 20.49; Cl, 20.84.
실시예 2: (2 S ,3 S ,4 R ,5 R )-2-(4-아미노-5 H - 피롤로[3,2- d ]피리미딘 -7-일)-5-(히 드록시메틸 ) 피롤리딘 -3,4-디올[HCl 염으로서 화합물 1(식 I, 여기서, A = NH2　및 B = H임)]의 대량 합성
단계-1:
물: 메탄올 혼합물(1:1, 10.4 L) 중의 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤리딘-2-일)-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-4(5H)-온(1-1)[(Evans, Gary B.; Furneaux, Richard H.; Hutchison, Tracy L.; Kezar, Hollis S.; Morris, Philip E., Jr.; Schramm, Vern L.; Tyler, Peter의 Journal of Organic Chemistry (2001), 66(17), 5723-5730에 보고된 절차에 따라 제조함, 500.0 g, 1.474 mol, 1 eq)] 현탁액에 트리에틸아민(621 mL, 4.422 mol, 3.0 eq)을 실온에서 첨가하고, 이후에 (Boc)20 (987 g, 4.53 mol, 3.1 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물은 28℃ 내지 33℃의 내부 온도를 약간 증가시켜 (Boc)2O를 첨가한 후에 투명한 색상의 용액이 된다. 용액은 교반 1 시간 후에 약간의 혼탁도를 보이기 시작한다. 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 고체 생성물을 여과로 수집하고, 물(5.0 L)로 세척하며, 50℃에서 높은 진공하에 건조하여 (2R,3R,4S,5S)-tert-부틸 3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)-5-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤로딘-1-카르복실레이트(1-2)(482 g, 89%)를 수득했다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.92 (s, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.32 (d, J= 22.7
Hz, 1H), 5.73 - 5.20 (m, 1H), 5.05 - 4.91 (m, 1H), 4.87 - 4.76 (m, 1H), 4.74 - 4.49 (m, 1H), 4.33 - 4.17 (m, 1H), 4.09 - 3.86 (m, 2H), 3.64 - 3.48 (m, 2H), 1.39 - 1.00 (m, 9H); MS (ES+) 755.1 (2M+Na), (ES-) 731.7 (2M-1); 분석; C16H22N4O6에 대하여 계산; C, 52.45; H, 6.05; N, 15.29; 확인: C, 52.24; H, 6.02; N, 15.05.
단계-2:
피리딘(740 mL, 9.21 mole, 7 equiv.) 중의 (2R,3R,4S,5S)-tert-부틸 3,4-디히드록시-2-(히드록시메틸)-5-(4-옥소-4,5-
디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤로딘-1-카르복실레이트(1-2)(482 g, 1.32 mole, 1.0 equiv.) 현탁액에 DMAP(3.22 g, 26.32 mmol, 0.02 equiv.) 및 아세트산 무수물(435 mL, 4.61 mmol, 3.5 eq)을 실온에서 첨가했다. 내부 온도를 아세트산 무수물을 첨가하여 올리기 시작한 다음에 얼음 배스 냉각을 실행하였다. 전체 무수물 첨가시에 온도를 67℃까지 올린 다음에 실온으로 감소시켰다. 얼음 배스를 반응이 25℃에 도달한 후에 제거했다. 현탁액은 투명한 용액이 되지 않았지만 더 밝은 현탁액이 관찰되었다. 반응 혼합물을 14 시간 동안 실온에서 교반하고 투명하지 않은 용액을 수득했다. 워크-업 분취액에 있어서 TLC(9:1의 클로로포름:메탄올)에 의해서는 더 이상의 개시 물질 및 두 개의 주요한 스팟이 없었으며, MS로는 생성물의 (493.0, M+l) 및 테트라아세틸레이트화 생성물의 (M+l=535)에서 두 개의 주요 피크가 나타났다. 반응 혼합물을 3.0 L의 클로로포름으로 희석하고, 10 분 동안 교반한 다음에 탈이온수 2.0 L를 첨가했다. 유연한 백색 생성물이 수성 유기상 인터페이스에 형성되었다. 분할을 실행한 후에 수성 상에서는 상기 생성물이 잔류했다. 유기 상을 분리하고, 2.0 L의 물로 다시 세척했다. 결합한 물 세척물을 다시 1.0의 클로로포름으로 추출했다. 결합한 유기 상을 수성 2.0 N HCl(2 × 1.0 L), 물(2 × 1.0 L), 포화 나트륨 비카르보네이트(2 × 1.0 L) 및 소금물(2 × 1.0 L)로 세척했다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하며, 진공 및 50 내지 55℃ 수조에서 건조 농축하였다. 진공은 더 이상 증류액이 보이지 않을 때까지 고진공 오일 펌프로 스위칭하여 농후한 시럽 생성물을 수득했다. 생성물을 14 시간 동안 고진공 오일 펌프에 두어 잔류 피리딘을 최소화하였다. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤로딘-3,4-디일 디아세테이트(1-3)의 농후한 잔류물 및 고운 백색 고형물로 바뀐 고형 폼의 결합물을 수득했다(715, 110% 수율). 상기 퍼센트는 테트라아세틸레이트화 화합물의 양을 반영한다. 상기 생성물은 다음 단계에 사용하기에 충분히 순수했다. 분석 샘플을 플레쉬 컬럼 크로마토그래피[실리카 겔, 헥산 중의 에틸 아세테이트/메탄올(9:1) 0 내지 100%로 희석]를 사용해서 혼합물의 정제에 의해 준비하여 백색 고형물로서 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-옥소-4,5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-3)를 수득했다;　1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 12.13 (s, 1H, D20 교환가능함) 11.98 (s, 1H, D20 교환가능함), 7.82 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 5.76 (s, 1H), 5.37 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.55 (dd, J = 11.3, 6.6 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.03 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 12.6 Hz, 9H), 1.23 (dd, J = 39.9, 32.8 Hz, 9H); MS (ES+) 493.0 (M+l); (ES-) 526.7 (M+Cl); 분석: C22H28N409에 대하여 계산: C, 53.65; H, 5.73; N, 11.38; 확인: C, 53.18; H, 5.89; N, 11.10
단계-3:
아세토니트릴(2.75 L) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-옥소-4, 5-디히드로-3H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-3)(622 g, 1.26 mol, 1.0 eq) 용액에 벤질트리에틸암모늄 클로라이드(575 g, 2.5 mol, 2.0 eq), 디메틸아닐린(240 mL, 1.9 mol, 1.5 eq), 다음에는 POCl3(706 mL, 7.58 mol, 6.0 eq)을 실온에서 첨가했다. 투명하고 밝은 황색 용액이 수득되었다. 반응 혼합물을 서서히 80℃로 가열하고, 이 온도에서 10 분 동안 유지했다. 9:1 클로로포름:메탄올의 TLC에서 반응이 98% 이상 완료된 것을 확인했다. 검은색 균질한 용액을 50.0℃까지 냉각시키고, 진공(수조 70 내지 73℃) 하에 농축하여 POCl3를 제거하고, 잔류물을 더 이상의 증류액이 보이지 않을 때까지 오일 펌프 고진공하에 두었다. 잔류물을 3.0 L 클로로포름에 용해시키고, 조심스럽고 재빠르게 수성 포화 나트륨 비카르보네이트로 중성 pH가 수득될 때까지 세척했다. 유기 층을 분리하고, 물(2 L), 소금물(2 L)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시킨 다음 진공(50 내지 53℃ 수조)으로 건조 농축하였다. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-4)의 검은 생성물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
단계-4:
DMF(1.5 L) 중의 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4-클로로-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-4)(622 g, 1.26 mol, 1 eq) 용액에 나트륨 아지드(411 g, 6.32 mol, 5 equiv.)를 첨가하고, 반응이 완료되는 10 시간 동안 60℃에서 교반하여 가열했다(9:1의 클로로포름 메탄올 및 1:1 헥산:에틸아세테이트 TLC). 반응을 25℃로 냉각하고, 얼음(2L) 중에 넣고, 클로로포름(2 × 1L)로 추출했다. 클로로포름 층을 결합하고, 물(2 × 2L), 소금물(2L)로 세척하고, 건조시킨 다음 여과하고진공(70 내지 80℃의 수조)하에 농축하여 검은 슬러지를 수득했다. 슬러지 정제는 컬럼 크로마토그래피(검은 슬러지 987g, 8 × 30 인치 컬럼, 1/2 채운 실리카 겔, 용출 프로파일 헥산:에틸 아세테이트; 9:1(40.0L); 7:3(20.0L); 6:4(20.0L); 1:1(20L); 4:6(20.0L) 및 2:8(20.0L)로 획득했다. 적당한 분획을 넣고, 진공(50.0℃ 수조)하에 농축해서 농후한 붉은색의 꿀과 같은 생성물로서 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-5)(407.05 g, 두 단계로 62.3% 수율)를 수득했다. 분석 샘플은 플래쉬 컬럼 크로마토그래피[헥산 중의 0 내지 100% 에틸 아세테이트] 정제로 준비하여 오랜지 색 고체로서 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-5)를 수득했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 13.08 (d, J = 155.6 Hz, 1H, D20 교환가능함), 9.86 (s, 1H), 7.61 (d, J = 76.8 Hz, 1H), 5.78 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.55 (dd, J = 11.4, 6.4 Hz, 1H), 4.41 (dd, J = 11.4, 3.9 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.01 (d, J = 9.9 Hz, 6H), 1.23 (dd, J = 39.8, 32.7 Hz, 9H); MS (ES+) 518.0 (M+l), 540 (M+23); (ES-) 516.4 (M-l); 분석: C22H27N7O8에 대하여 계산: C, 51.06; H, 5.26; N, 18.95 확인: C, 50.97; H, 5.30; N, 18.62.
단계-5:
(2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-5)를 하기와 같이 세 개의 별개의 배치로 환원시켰다:
배치 1: 2.0L의 파 수소화기(Parr hydrogenator), 테플론 인서트에 (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아지도-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-
(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-5)(108.01 g, 메탄올 중의 300 mmol, 800 mL), Pd(OH)2( 21.6 g, 20% w/w)를 첨가함.
배치 2: 2.0 L의 파 수소화기, 테플론 인서트에 (1-5)(140.70 g, 메탄올 중의 271.9 mmol, 1.0 L), Pd(OH)2(28.14 g, 20% w/w)를 첨가함.
배치 3: 2.0 L 파 수소화기, 테플론 인서트에 (1-5)(140.7 g, 메탄올 중의 271.9 mmol, 1.0 L), Pd(OH)2(28.14 g, 20% w/w)를 첨가함.
상기 반응 혼합물을 15 내지 18 시간 동안 150 psi에서 수소화하였다. 반응 혼합물을 여과하여 셀라이트를 통해 촉매를 제거했다. 여과액을 일정한 중량까지 진공(60 내지 70℃ 수조) 농축시켜 어두운 색의 생성물인 (2R, 3R, 4S, 5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤로딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(328.8 g, 89% )를 수득하였다. 생성물은 다음 단계에 사용하기에 충분히 순수했다. 분석 샘플은 플레쉬 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 중의 0 내지 10% 메탄올)를 사용해서 혼합물의 정제에 의해 제조하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.06 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.94 (s, 2H), 5.86 (s, 1H), 5.44 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.56 (dd, J = 11.3, 6.9 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 11.3, 4.2 Hz, 1H), 4.16 - 3.98 (m, 1H), 2.09 - 1.94 (m, 9H), 1.48 - 1.14 (m, 9H); MS (ES+) 492.1 (M+l); (ES-) 526.4 (M+Cl); 분석: C22H29N508·1.25H20에 대하여 계산: C, 51.41; H, 6.18; N, 13.62; 확인: C, 51.24; H, 5.92; N, 13.33.
단계-6:
배치 1. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(81.5 g, 165.8 mmol)에 실온에서 무수 메탄올(370 mL)와 이후에 NaOMe(나트륨 메톡시드, 메탄올 중의 25 중량% 용액, 4.49 g , 20.76 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 TLC(클로로포름:메탄올=9:1)가 모든 개시 물질이 반응한 것을 보여줄 때까지 교반하였다.
배치 2. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]
피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(117.8 g, 239.6 mmol)에 무수 메탄올(530 mL)과 이후에 NaOMe(나트륨 메톡사이드, 메탄올 중의 25 중량% 용액, 6.58g, 30.45 mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 모든 개시 재료가 반응한 것이 TLC(클로로포름:메탄올=9:1)가 보여줄 때까지 실온에서 교반했다;
배치 3. (2R,3R,4S,5S)-2-(아세톡시메틸)-5-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]
피리미딘-7-일)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-3,4-디일 디아세테이트(1-6)(129.5 g, 263.5 mmol)에 무수 메탄올(584 mL)과 이후에 NaOMe(나트륨 메톡사이드, 메탄올 중의 25 중량%, 6.99g , 32.35 mmol)를 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 TLC(클로로포름:메탄올=9:1)가 모든 개시 물질이 반응한 것을 보여줄 때까지(7 내지 8 시간) 실온에서 교반했다.
상기 용액을 농축(65 내지 75℃ 수조)하여 다음 단계에 사용하기 충분하게 순수한 (2S,3S,4R,5R)-tert-부틸 2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(1-7)를 수득했다. 분석 샘플은 플레쉬 컬럼 크로마토그래피(클로로포름 중 0 내지 10% 메탄올)를 사용해서 혼합물의 정제에 의해 제조했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 10.77 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.82 (s, 3H), 5.04 - 4.91 (m, 1H), 4.87 - 4.74 (m, 1H), 4.56 - 4.35 (m, 2H), 4.04 - 3.90 (m, 2H), 3.72 - 3.63 (m, 1H), 3.59 - 3.41 (m, 1H), 1.15 (2s, 9H); MS (ES+) 366.1 (M+l); (ES-) 400.3 (M+Cl); 분석: C16H23N505·0.25H2O에 대하여 계산: C, 51.33; H, 6.46; N, 18.71; 확인: C, 51.04; H, 6.43; N, 18.48.
단계-7:
(2S,3S,4R,5R)-tert-부틸 2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(1-7)를 세 개의 배치로 하기와 같이 치료했다.
배치 1. (1-7)을 수성 HCl(농축 HCl 118 mL 및 물 293 mL)에 용해했다;
배치 2. (1-7)을 수성 HCl(농축 HCl 169 mL 및 물 421)에 용해했다.
배치 3. (1-7)을 수성 HCl(농축 HCl 186 mL 및 물 468 mL)에 용해했다.
반응 혼합물을 실온에서 30분 동안(CO2 가스의 강한 발전) 교반한 다음에 각 배치를 진공 농축하여 건조했다(80 내지 90℃). 배치 2 및 3을 넣어 226 g의 습식 투명한 황색 생성물을 수득했다. 배치 1에서는 91.4 g의 어두운 회색 생성물을 수득했다. 결정화는 하기와 같이 실행했다: 배치 2 및 3의 습식 생성물에 대해서: 226 mL의 물을 생성물에 첨가한 다음에 50℃로 가열하고, 이때 결정화가 개시될 때까지 뜨거운 에탄올을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 10 분 동안 50℃에서 유지한 다음에 여과 전에 강하게 교반하면서 25℃까지 도달하도록 하여 밝은 황색의 분말인 (2S,3S,4R,5R)-2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-3,4-디올(1)(88 g)을 수득했다. 배치 1은 이와 동일한 방식으로 정제하여 33.O g의 밝은 회색 생성물을 수득했다. 총 수율은 고진공의 55℃에서 건조 후에 121.0 g이다. 배치 1 및 2의 결정화로부터의 모액을 재처리하여 15.0 g의 밝은 황색의 분말 생성물(1)을 수득했다. 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 14.60 (s, 1H), 13.25 (s, 1H), 10.23 (s, 1H), 9.13 (s, 2H), 8.84 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.11 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 5.55 (s, 2H), 4.78 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 8.8, 5.0 Hz, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 1H), 3.73 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 3.52 (s, 1H); 1H NMR (300 MHz, D20) δ 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 4.90 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.37 (dd, J = 4.8, 3.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.81 (dd, J = 8.1, 4.5 Hz, 1H); MS (ES+) 266.3 (M+l); 선택적 회전 -52.69; (H20,C=1.15); MP: 238℃; 분석: C11H15N5O3·2HCl·0.25H2O에 대하여 계산: C, 38.55; H, 5.15; Cl, 20.44; N, 20.69; 확인: C, 38.67; H, 5.05; Cl, 20.45; N, 20.42.
실시예 3: 화합물 1의 인산화(식 I, 여기서 A = NH 2 　및 B = H임) 및 DNA / RNA 혼입 연구
인간 간세포 암(Huh-7) 세포를 3H-화합물 1과 24 시간 배양한 다음에 메탄올 추출 및 SAX 컬럼 및 방사선 검출기를 사용해서 HPLC 분석을 실행했다. 도 1은 Huh-7 세포에서의 화합물 1의 인산화를 보여주며, 이는 세포에서 효과적인 인산화가 이루어 진 것을 나타낸다.
도 2 내지 4에서는 화합물 1이 인산화되었지만 포유류 RNA 또는 DNA(DP는 디포스페이트를 나타내며, TP는 트리포스페이트를 나타냄)에 포함되어 있지 않다는 것을 보여준다. 도 2는 Huh-7 세포에서의 아데노신의 인산화를 보여준다. 도 3은 Huh-7 세포에서의 화합물 1의 인산화를 보여준다. 도 4는 Huh-7 세포에서의 아데노신과 화합물 1의 총 RNA 및 게놈 DNA 혼입을 보여준다.
실시예 4: 바이러스성 RNA 폴리머라아제 억제제(식 1, 여기서 A = NH 2 　및 B = H임: 화합물 1)가 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포에서의 홍역 바이러스의 복제에 미치 는 효과
재료 및 방법: Vero 76 세포(아프리카 녹색 원숭이 신장 세포)는 미국 미생물 보존 센터(American Type culture collection, ATCC, Manassas, VA)에서 수득하였다. 세포는 5% 소태아 혈청(FBS, Hyclone)을 보충한 최소 기본 배지(0.15% NaHC03가 있는 MEM; Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA)에서 일상적으로 계대배양하였다. 화합물을 평가하는 경우, 혈청을 최소 농도 2.5%로 감소시키고, 젠타마이신을 시험 배지에 첨가해서 최종 농도가 50 μg/mL가 되도록 했다. 시카고 계통의 홍역 바이러스(MV)는 질병 제어 센터(Atlanta, GA)에서 수득했다.
항바이러스성 시험 절차:
세포 병리학적 효과 억제 분석(시각적 분석)
세포를 적당한 세포 농도에서 96-웰 바닥이 편평한 조직 배양 플레이트(Corning Glass Works, Corning, NY)에 0.2 mL/웰로 접종하고, 세포 단층을 성립하기 위해서 37℃에서 밤새 배양했다. 단층이 성립되면 성장 배지를 따르고, 다양한 시험 화합물 희석액을 각 웰(3웰/희석액, 0.1 mL/웰)에 첨가했다. 화합물 희석액 배지를 세포 및 바이러스 컨트롤 웰에 첨가했다(0.1 mL/웰). 시험 배지로 희석한 바이러스를 화합물 시험 웰(3 웰/화합물 희석액) 및 바이러스 컨트롤 웰(6 웰)에 0.1 mL/웰로 첨가했다. 바이러스(바이러스 MOI = 0.001)를 화합물 첨가 후 약 5 분에 첨가했다. 바이러스 없는 시험 배지를 모든 독성 컨트롤 웰(2 웰/각 시험 화합물의 희석액) 및 세포 컨트롤 웰(6 웰)에 0.1 mL/웰로 첨가했다. 플레이트를 바이러스 컨트롤 웰이 적당한 세포 병리학적 효과(CPE) 판독 (세포 파괴 80 내지 100%)이 될 때까지 5% C02 및 95% 공기 대기의 습식 배양기의 37℃에서 배양했다. 상기는 바이러스에 따라 다르게, 세포에 바이러스가 노출된 후 4 내지 11일에 획득된다. 다음에 세포를 CPE에 있어서 현미경으로 시험하고, 상기를 0(정상 세포) 내지 4(최대, 100% CPE)로 평가하였다. 독성 컨트롤 웰의 세포는 세포 독성에 기여하는 형태학적 변화에 있어서 현미경으로 관찰했다. 이러한 세포 독성(세포 파괴 및/또는 형태학적 변화)도 또한 100% 독성, 80% 세포 독성, 60% 세포 독성, 40% 세포 독성, 20% 세포 독성 및 0(정상 세포)로 평가했다. 50% 유효 투여량(EC50) 및 50% 세포 독성 투여량(IC50)을 바이러스 CPE 데이터 및 독성 컨트롤 데이터 각각의 회귀 분석으로 산출했다. 시험한 화합물 각각에 있어서의 선택적 지표(SI)를 식: SI = CC50 ÷ EC50을 사용해서 산출했다.
CPE 억제의 뉴크럴 레드 업테이트 분석(Neutral Red(NR) Uptake Assay)
NR 레드를 Smee 등의 발견(J. Virol. Methods 2002, 106: 71-79; 여기에 이의 전문이 참조로서 포함되어 있음)을 기초로 항바이러스성 역물을 평가하기 위한 염료 정량 방법으로서 선택했다. 이러한 분석은 시각적 관찰에 의해 관찰된 세포 독성 및 억제 활성을 증명하기 위해 상기에서 기재한 CPE 억제 시험 플레이트와 동일하게 실행했다. NR 분석은 Barnard 등(Antiviral Chem. Chemother. 2001, 12:220-231; 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있음)에 의해 기술된 것과 같이 Cavenaμgh 등(Invest. New Drμgs 1990, 8:347-354; 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있음)의 변형 방법을 사용해서 실행했다. 요약하면, 배지를 CPE 억제 분석으로부터 CPE에 대해 평가된 플레이트의 각 웰로부터 제거하고, 0.034% NR을 플레이트 각 웰에 첨가하며, 암실의 37℃에서 2 시간 동안 배양했다. 다음에 NR 용액을 웰에서 제거했다. 세정(때때로 세포가 플레이트에서 벗겨져 뉴트럴 레드를 잘못 낮게 야기함) 및 흡인 건조 후에, 남아있는 염료를 소렌손 시트레이트 완충액으로 완충된 순수 에탄올을 사용해서 세포로부터 실온의 암실에서 30 분 동안 추출했다. 540 nm/405 nm에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기(Opsys MRTM, Dynex Technologies, Chantilly, VA, USA)로 판독했다. 흡광도 값은 비처리 대조군의 퍼센트로서 나타내고, EC50, CC50 및 SI는 상기에서 기재한 것과 같이 산출했다.
바이러스 산출량 감소 분석
바이러스 산출량 감소 분석은 기본적으로 이전에 기재한 것과 같이 세포 배양 50% 감염 투여량(CCID50) 분석을 사용해서 실행했다(Antimicrob . Agents Chemother. 1992, 3: 1837-1842; 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있음). 요약하면, 각 웰로부터의 상청액을 Vero-76 세포가 포함된 96-웰 플레이트의 3개 웰에서 연속적으로 희석했다. 플레이트를 6일 동안 배양한 다음에 바이러스-유도 CPE를 확인했다. 바이러스 산출량 역가의 정량평가를 Reed 및 Muench(Am. J. Hyg. 1938, 27:493-498; 이의 전문이 참조로서 여기에 포함되어 있음)의 앤드 포인트 방법으로 실행했다. 90%까지의 바이러스 산출량의 억제 또는 바이러스 역가에서의 1 log10 감소에 필수적인 농도를 평가하기 위하여 EC90 값은 직선 회귀를 사용해서 산출하였다.
결과 및 논의
홍역 바이러스는 화합물 1에 의해 잠재적으로 억제되었다(표 1). 홍역 바이러스에 대항하는 EC50 값은 각각 가시적인 분석 및 NR 분석에 의해 0.6 및 1.4 μg/mL였다. 화합물은 가시적인 또는 NR 분석에서 어떠한 세포 독성도 갖지 않았다(IC50 > 100). 따라서, 둘 다의 분석에 의한 선택적 지표로 화합물 1이 홍역 바이러스(MV)에 큰 활성을 갖는다는 것을 알 수 있었다. MV에 대항하는 잠재적인 억제 활성은 감염된 세포에서 생성되는 바이러스에서 1 log10 강하를 나타내는 EC90 = 0.36 μg/mL로 바이러스 산출량 감소 분석으로 확인했다.
결론
화합물 1은 잠재적이며 선택적 억제 활성을 나타냈다. 바이러스 산출량 감소 분석에 의해서, 화합물 1은 또한 MV의 잠재적인 억제제임이 확인되었다(EC90 = 0.37 μg/mL). 따라서, 화합물 1은 여러 RNA 바이러스의 잠재적인 억제제임이 확인되었고, 화합물 1은 선택된 RNA 바이러스의 광범위한 스펙트럼 억제제로서 in vivo 및 in vitro 평가에서 추가로 입증된 것이 확인되었다.
실시예 5: 바이러스 RNA 폴리머라아제 억제제(식 I, 여기서 A = NH 2 　및 B = H임: 화합물 1)의 다양한 RNA 바이러스 복제에 미치는 효과
재료 및 방법
세포 및 바이러스
아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(MA-104)는 Whitaker MA Bioproducts, Walkersville, MD, USA에서 수득했다. 모든 Vero 세포(아프리카 녹색 원숭이 신장 세포, 후두 세포의 인간 암종(A-549) 및 Madin-Darby 개 신장 세포를 미국 세포 보존 센터(ATCC, Manassas, VA)에서 수득했다. A-549 세포를 0.15% NaHC03(Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA) 및 10% 소태아 혈청(FBS, Hyclone)이 보충된 Dulbecco의 최소 기본 배지(DMEM)에서 배양했다. 나머지 세포는 5% 소태아 혈청(FBS, Hyclone)이 보충된 최소 기본 배지(0.15% NaHC03가 있는 MEM; Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA)에서 규칙적으로 계대 배양했다.
화합물을 평가할 때, 혈청은 최소 농도가 2.5%가 되도록 감소시키고, 젠타마이신을 최종 농도 50 μg/mL로 시험 배지에 첨가했다. 인플루엔자 분석용 시험 배지는 혈청없는 MEM, 0.18% NaHC03, 20 μg 트립신/mL, 2.0 μg EDTA/mL, 및 50 μg 젠타마니신/mL로 구성하였다.
활발하게 증대하는 세포에서의 독성 평가를 위해서, 세포 독성은 몇개 농도의 화합물에 3일 노출 후에 NR 흡수 분석에 의해 반영되는 것으로서 세포의 총 수를 판정하여 평가했다. 약물의 유무에 따라 72 시간에 세포 성장을 정량하기 위해서, 플레이트에 1 × 103 MDCK 세포를 깔고, 4 시간(모든 세포가 플레이트 웰에 부착되도록) 후에 MEM 또는 MEM 중의 약물의 선택된 농도에 노출시킨다. 72 시간 후 플레이트를 상기에서 기재한 것과 같이 NR 분석을 위해 처리했다. 흡광도 값은 비처리 대조군의 퍼센트로서 나타냈고, CC50 값은 회귀 분석으로 산출했다.
뎅기 바이러스 2(DV-2), 계통 뉴 기니아 C, 호흡기 합포체 바이러스(RSV) A2, 리노바이러스 2(RV-2), 계통 HGP, 타카리브(TCV), 계통 TRVL 11573, 베네주엘라 마뇌염 바이러스(VEE) 및 황열병 바이러스(YFV), 계통 17D는 모두다 미국 세포 보존센터(ATCC; Manassas, VA)에서 구입했다. 모든 인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스(MV), 계통 시카고, SARS 코로나 바이러스(SARS-CoV), 계통 우르바니 및 웨스트 나일 바이러스(WNV), 원형 뉴욕 1999 분리 지정 계통 996625는 질병 제어 센터(Atlanta, GA)에서 수득했다. 푼타 토로 바이러스(PTV), 아다메스 계통은 Ft. Detrick(Frederick, MD) 감염 질환을 위한 미국 군 의학 연구소의 도미니크 피팻 박사로부터 수득했다. 리프트 계곡 열 바이러스(RVFV) 백신 계통, MP-12 및 쥬닌 바이러스(JUNV) 백신 계통, Candid 1은 로버트 테시 박사(World Reference Center for Emerging and Viruses and Arboviruses, University of Texas Medical Branch, Galveston, TX)가 친절하게 제공해 주셨다. 피친데 바이러스(PICV), 계통 An 4763은 데이비드 간제미 박사(Clemson University, Clemson, South Carolina)가 제공했다. 파라인플루엔자 바이러스 타입 3(PIV-3), 계통 14702/5/95는 자퀴렌 보이빈(Hospitale St. Justin, Montreal, Canada) 으로부터 수득했다. 아데노바이러스(AV-1) 타입 1, 계통 시카고/95은 소아환자의 기관 세척물로부터 분리했고, M.F. 스마론(Department of Medicine, University of Chicago, Chicago IL)이 제공했다.
항바이러스 시험 절차
세포 병리학적 효과 억제 분석(시각적 분석)
세포를 적당한 세포 농도에서 0.2 mL/웰로 96-웰 바닥이 편평한 조직 세포 플레이트(Corning Glass Works, Corning, NY)에 도포하고, 세포 단층이 성립되도록 37℃에서 밤새 배양했다. 단층이 성립되면, 성장 배지를 제거하고, 다양한 시험 화합물 희석액을 각 웰에 첨가했다(3 웰/희석액, 0.1 mL/웰). 화합물 희석 배지를 세포 및 바이러스 컨트롤 웰에 첨가하였다(0.1 mL/웰). 시험 배지로 희석한 바이러스를 화합물 시험 웰(3 웰/화합물 희석액) 및 바이러스 컨트롤 웰(6 웰)에 0.1 mL/웰로 첨가했다. 바이러스(바이러스 MOI = 0.001)를 화합물 첨가 후 약 5 분에 첨가했다. 바이러스 없는 시험 배지를 모든 독성 컨트롤 웰(2 웰/각 시험 화합물의 희석액) 및 세포 컨트롤 웰(6 웰)에 0.1 mL/웰로 첨가했다. 플레이트를 바이러스 컨트롤 웰이 세포 파괴(80 내지 100%)로 판독되는 적당한 세포 병리학적 효과(CPE)를 가질 때까지 5% C02 및 95% 공기 대기의 습식 배양기의 37℃에서 배양했다. 상기는 바이러스에 따라 다르게, 세포에 바이러스가 노출된 후 4 내지 11일에 획득된다. 다음에 세포를 CPE에 있어서 현미경으로 시험하고, 상기를 0(정상 세포) 내지 4(최대, 100% CPE)로 평가하였다. 독성 컨트롤 웰의 세포는 세포 독성에 기여하는 형태학적 변화에 있어서 현미경으로 관찰했다. 이러한 세포 독성(세포 파괴 및/또는 형태학적 변화)도 또한 100% 독성, 80% 세포 독성, 60% 세포 독성, 40% 세포 독성, 20% 세포 독성 및 0(정상 세포)로 평가했다. 50% 유효 투여량(EC50) 및 50% 세포 독성 투여량(IC50)을 바이러스 CPE 데이터 및 독성 컨트롤 데이터 각각의 회귀 분석으로 산출했다. 시험한 화합물 각각에 있어서의 선택적 지표(SI)를 식 SI = CC50 ÷ EC50을 사용해서 산출했다.
CPE 억제 및 화합물 세포 독성의 뉴트럴 레드 업테이크 분석(Neutral Red(NR) Uptake Assay)
NR 레드를 Smee 등의 발견(상기와 동일함)을 기초로 항바이러스성 약물을 평가하기 위한 염료 정량 방법으로서 선택했다. 이러한 분석은 바이러스성 관찰에 의해 관찰된 세포 독성 및 억제 활성을 증명하기 위해 상기에서 기재한 CPE 억제 시험 플레이트와 동일하게 실행했다. NR 분석은 Barnard 등(상기와 동일함)에 의해 기술된 것과 같이 Cavenaμgh 등(상기와 동일함)의 변형 방법을 사용해서 실행했다. 요약하면, 배지를 CPE 억제 분석으로부터 CPE에 대해 등급이 정해진 플레이트의 각 웰로부터 제거하고, 0.034% NR을 플레이트 각 웰에 첨가하며, 암실의 37℃에서 2 시간 동안 배양했다. 다음에 NR 용액을 웰에서 제거했다. 세정(때때로 잘못된 뉴트럴 레드를 낮게 야기하는 플레이트로부터의 세포 슬라우) 및 흡인 건조 후에, 남아있는 염료를 소렌손 시트레이트 완충액으로 완충된 순수 에탄올을 사용해서 세포로부터 암실에서 실온 30 분 동안 추출했다. 540 nm/405 nm에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기(Opsys MRTM, Dynex Technologies, Chantilly, VA, USA)로 판독했다. 흡광도 값은 비치료 대조군의 퍼센트로서 나타내고, EC50, CC50 및 SI는 상기에서 기재한 것과 같이 산출했다.
[표1] 다양한 바이러스의 복제에 미치는 폴리머라아제 억제제(화합물 1)의 효과
Figure 112013041948813-pct00003

화합물 1에 의해 현저하게 억제된 것으로 여겨진 다른 바이러스(SI > 10)는 DV-2(EC50 = 15, 13 μg/mL), JUNV(EC50 = 29, 16 μg/mL), YFV(EC50 = 8.3, 8.3 μg/ML)였다(표 1). 하기 바이러스는 화합물 1에 의해 약간 억제되었다(10<SI>3): PIV-3(EC 50 = 7.1, 10 μg/mL), SARS-CoV(EC50 = 14, 16 μg/mL), PICV(EC50 = 61, 28 μg/mL) 및 RVFV(EC50 = 75, 64 μg/mL). 화합물 1은 인플루엔자 바이러스성 계통의 서브세트에 대항하여 시험했으며(표 2), 다수의 계통에 대항해서 광범위한 스펙트럼의 항-인플루엔자 활성을 나타냈다.
[표2] 화합물 1의 광범위한 스펙트럼의 항-인플루엔자 활성
Figure 112013041948813-pct00004

결론
화합물 1은 시험한 인플루엔자 바이러스 모두에 대한 강력한 활성을 나타냈다. 화합물 1은 인플루엔자 바이러스 복제에 잠재적인 억제제임이 확인되었으며, 화합물 1은 모든 인플루엔자 바이러스를 포함하는 선택된 RNA 바이러스의 광범위한 스펙트럼의 억제제로서 효과적이라는 것이 제시되었다.
실시예 6: 화합물 1의 in vitro 항바이러스 활성
화합물 1의 항바이러스성 활성을 in vitro 에서 수개의 바이러스에서 평가했다. EC50 값은 마르버르크(필로바이러스), 쥬닌 캔디드 1(아레나바이러스), 피친데(아레나바이러스), Chikungunya 181/25(토가바이러스) 및 백시니아 NY(폭스바이러스)에 대해서 약 10 μg/mL 내지 약 300 μg/mL 이상의 범위였다.
실시예 7: MDCK 세포에서 뉴라미니다아제 억제제 및 화합물 1의 상승적 항바이러스성 활성
Madin Darby Canine Kidney(MDCK) 세포에 인플루엔자 바이러스 H3N2(A/빅토리아/3/75) 바이러스를 감염시키고, 72 시간 동안 페라미비르 및 화합물 1의 다양한 결합물로 처리했다. 세포 병리학적 효과를 뉴트럴 레드 염료 업테이트 분석으로 판정했다. 결과는 표 3에 나타냈다.
[표3] 인플루엔자 감염 세포에서의 세포 병리학적 효과의 억제율(%)
Figure 112013041948813-pct00005

상기 실험 데이터는 맥 시너지 IITM 소프트웨어 프로그램(Prichard 및 Shipman, 1990; 참조에 의해 이의 전문이 여기에 포함되어 있음)을 이용해서 3차원 분석으로 평가했다. 상기 소프트웨어로 개개 약물의 투여량-반응 곡선으로부터의 이론적 부자적 상호작용을 산출했다. 예상되는 부가적 상호작용을 나타내는 산출된 부가적 표면은 다음에 실험 표면으로부터 빼서 예상 상호작용보다 더 크거나(시너지) 또는 적은(길항작용) 영역임을 밝혀냈다. 페라미비르 및 화합물 1의 세포 배양 연구에서의 결합으로 92 uM2 유닛%과 동일한 시너지 부피로 상승적 항바이러스성 효과를 나타냈다(도 5).
실시예 8: 쥐의 인플루엔자 모델에서의 화합물 1의 근육내 주입( IM )의 효험
6 내지 8 주령의 Balb/C 마우스를 H3N2 바이러스(A/빅토리아/3/75)에 적응시켰다. 0, 30, 100 및 300 mg/kg/d qd의 투여량을 감염 전 1 시간 개시하여 5일 동안 근육내(IM) 주입했다. N = 50 마리 동물이다. 모든 동물에서 16일 동안 시행했다. 엔트포인트는 치사, 사망 평균 일 및 체중 감소를 포함한다. 효과를 표 6에 나타냈다.
쥐의 인플루엔자 바이러스에서의 화합물 1(IM) 결과는 또한 표 4에 나타냈다. IM으로 주입한 화합물 1은 인플루엔자 바이러스로 감염된 쥐에서 생존 및 체중 감소을 개선시켰다.
[표4] 쥐의 인플루엔자 모델 바이러스 - H3N2 A/Vic/3/75에서의 화합물 1(IM)
Figure 112013041948813-pct00006

실시예 9: 쥐의 인플루엔자 모델에서의 화합물 1 경구 투여의 효험
6 내지 8 주령의 Balb/C 마우스를 H3N2 바이러스(A/빅토리아/3/75)에 적응시켰다. 0, 30, 100 및 300 mg/kg/d qd의 투여량 및 100 mg/kg/d bid 투여량을 경구로 투여했다. N = 60 마리 동물이다. 모든 동물에서 16일 동안 시행했다. 엔트포인트는 치사, 사망 평균 일 및 체중 감소를 포함한다. H3N2 A/Vic/3/75 인플루엔자 바이러스로 감염된 쥐에서의 체중 감소에 미치는 경구 투여 화합물 1의 효과는 표 7에 나타냈다.
쥐의 인플루엔자 모델 바이러스에서의 화합물 1의 경구 투여 결과는 또한 표 5에 나타냈다. 경구로 주입한 화합물 1은 인플루엔자 바이러스로 감염된 쥐에서 생존 및 체중 감소을 개선시켰다.
[표5] 쥐의 인플루엔자 모델 바이러스 - H3N2 A/Vic/3/75에서의 화합물 1(경구)
Figure 112013041948813-pct00007

실시예 10: 쥐에서의 약물동력학적 연구
암컷 Balb/C 쥐(N = 30)에 100 mg/kg의 화합물 1을 경구로 투여했다. 쥐에서 t = 0.17, 0.5, 1.0, 3, 6, 및 24 시간에 안와 정맥 만곡부를 통해 채혈했으며(각 시간에 5 마리의 쥐에서)하고, 원심분리해서 플라즈마를 -80℃에 보관했다. 플라즈마 약물량은 LC/MS/MS 분석으로 측정했다.
경구 투여 후의 화합물 1의 쥐의 플라즈마 양을 표 6에 나타냈다.
[표6] 경구 투여 이후의 쥐에서의 화합물 1 플라즈마 양
Figure 112013041948813-pct00008

실시예 11: 에볼라 바이러스 쥐 예방 연구
화합물 1을 8 내지 10 주령의 C57BI/6 쥐(군 당 N = 10, 4 군 - 하나의 식염수 및 3개의 약물 치료 군)에 복막 내, 근육 내 및 경구로 투여했다(300 mg/kg/일, BID). 주입 전 4 시간에 8일의 치료를 시작했다. 에볼라 바이러스(Zaire) 도전에 적응한 쥐에 복막 내에 투여했다. 사망률 및 체중을 주입 후 14일 동안 모니터링했다.
쥐의 생존 퍼센트를 표 8에 나타냈다. 식염수 처리 쥐에 에볼라 바이러스를 감염시키면 모두 8일에 사망했다. 화합물 1을 복막 내 또는 근육 내에 투여한 모든 쥐는 연구 종료일에 생존했다(14일). 화합물 1을 경구 투여한 쥐의 80 퍼센트가 연구 종료일(14일)에 생존했다.
쥐의 체중 변화를 도 9에 나타냈다. 에볼라 바이러스로 감염된 식염수 처리 쥐는 전체적인 체중이 8일까지 손실되었다(모든 대조군 쥐는 8일에 사망함). 화합물 1을 복막 내 또는 근육 내 치료한 쥐는 12일에 개시 중량 중 95% 이상이 유지되었다. 화합물 1을 경구 치료한 쥐는 12일에 개시 중량의 80% 이상까지 유지되었다. 모든 약물 치료 쥐는 12일 후에 체중이 계속적으로 증가했다.
실시예 12: 에볼라 바이러스 쥐 예방 연구
화합물 1을 8 내지 12 주령 C57IB/6 쥐에 근육 내 및 경구로 투여했다. 연구 피험체를 6 군으로 나누었다(군 당 N = 10). 군 1은 식염수 대조군이며, 군 2에는 150 mg/kg 화합물 1(PO, BID)를 투여했고; 군 3에는 250 mg/kg 화합물1(PO, BID)를 투여했으며; 군 4에는 150 mg/kg 화합물 1(IM, BID)를 투여했다. 군 5에는 식염수(PO, BID)로 처리한 비감염 쥐이며, 군 6은 250 mg/kg 화합물 1(PO, BID)로 처리한 쥐이다. 처리는 감염 전 4 시간에 시작해서 9일 동안 진행한다. 에볼라 바이러스(Zaire) 감작에 적응된 쥐에 1,000 pfu로 복막내 투여했다. 사망률 및 체중을 감염 후 14일 동안 모니터링했다.
쥐의 생존 퍼센트를 도 10에 나타냈다. 식염수 치료 쥐에 에볼라 바이러스를 감염시키면 8일에 모두 사망했다. 화합물 1을 근육 내 처리한 모든 쥐는 연구 종료일까지 생존했으며, 이는 화합물 1의 IM 투여량이 완벽하게 보호했음을 나타낸다. 화합물 1을 경구 치료한 쥐의 80 퍼센트 이상이 연구 종료일까지 생존했다.
쥐의 체중 변화를 도 11에 나타냈다. 식염수 처리 쥐에 에볼라 바이러스를 감염시키면 7일(모든 대조군 쥐는 8일에 사망함)까지 전체적으로 체중 감소이 나타났다. 화합물 1을 근육 내 처리한 쥐는 11일에 비감염 대조군에서와 유사한 체증 증가를 나타냈다. 화합물 1을 경구로 처리한 쥐는 가역적인 체중 감소을 나타냈으며, 11일에는 개시 체중의 100% 이상으로 유지되었다.
실시예 13: 황열병 바이러스( YFV ) 타임 윈도우 골든 햄스터 연구
황열병 바이러스(Jimenez 계통)를 IP로 암컷 시리안 골든 햄스터(99 g)에 햄스터 당 20 CCID50으로 IP 주입했다(약 6.25 × LD50). 군은 하기와 같이 나누었다: 1) 화합물 1을 최초 -4h에 투여했다(N = 15); 2) 화합물 1을 최초 1 dpi(감염 후 일수) 투여했다(N = 10); 3) 화합물 1을 최초 2 dpi 투여했다(N = 10); 4) 화합물 1을 3 dpi 투여했다(N = 10); 5) 화합물 1을 4 dpi 투여했다(N = 10); 6) 리바비린을 최초 -4h에 투여했다(N = 10); 7) 식염수 비히클을 최초 -4h에 투여했다(N = 16); 8) 화합물 1을 비감염 햄스터에 최초 -4h에 투여했다(N = 3); 9) 비감염 햄스터에 식염수 비히클을 최초 -4h에 투여했다(N = 3); 및 10) 비감염, 비치료 정상 대조군(N = 3). 치료 투여량은 7일 동안 100 mg/kg IP, BID였다. 연구 종료일은 21일에 생존율, 체중은 0, 3, 5 및 6일에 측정했으며; 혈청 및 간 바이러스 역가(4일, -4h에 화합물 1 및 -4h에 비히클), 및 ALT 및 AST는 6일에 측정했다.
연구로 플라시보와 비교해서 지연 치료로 화합물 1에 있어서의 강화된 생존을 보여주었다(도 12). YFV로 감염시킨 햄스터에 바이러스 도전 후 다양한 시간에 시작하여 7일 동안 하루에 2회 화합물 1을 치료한 후 생존을 나타냈다(플라시보와 비교해서, ***P<0.001, **P<0.1). 생존율은 감연 전 최초 화합물 1에 있어서는 100%였고, 감염 후 3일까지 치료를 지연했다. 생존율은 감염 후 초기 4일에 화합물 1에서 80%였고, 이는 지연된 치료 군에서의 플라시보 보다 현저하게 개선된 것을 나타낸다. 대조적으로, 리바비린은 감염 전 초기에 90% 생존을 제공했으며, 비히클은 감염 전 초기에 12.5% 생존을 제공했다. 대부분의 사망은 감염 10일 내에 발생했다. 생존 동물은 감염 후 21일에 YFV로 다시 감작될 것이다.
햄스터의 체중 변화를 도 13에 나타냈다. YFV로 감염되고, 감염 전 부터 감염 후 4일까지 화합물 1로 치료받은 햄스터는, 플라시보 및 감염 전 투여된 리바비린보다 체중이 증가했다. YFV로 감염되고 바이러스 적용 전 후에 초기 다양한 시간 7일 동안 매일 2회 화합물 1을 치료받은 햄스터의 체중 변화 퍼센트를 나타냈다.
실시예 14: 래트에서의 화합물 1의 경구 생체이용율
화합물 1을 래트에 10 mg/kg PO로 투여했다. 래트 플라즈마에서 6시간까지 화합물 1의 농도를 측정한 약물동력학적 곡선을 도 14에 나타냈다.
실시예 15: 화합물 1의 마르부르크 바이러스 연구
화합물 1을 1000 pfu 쥐-적용 MARV-Ravn으로 (복막 내) 감작시킨투여한 10 내지 12 주령의 BALB/c 쥐에 IM으로 투여했다. 연구를 10 군으로 나누었다(군 당 N = 10). 투여 방법, 경로 및 투여량을 표 7에 나타냈다. 화합물 1을 투여 전에 0.9% 식염수에 용해했다. 건강 및 체중을 감염 후 14일 동안 모니터링했다.
[표7] 마르부르크 감염에 있어서의 화합물 1에 의한 예방 및 치료에 대한 연구 설계
Figure 112013041948813-pct00009

본 연구에서 12일까지 10 군에서의 생존 퍼센트를 표 8에 나타냈다. 비히클만(0.9% 식염수)으로 처리한 쥐의 생존율은 7일에 60% 및 8 내지 12일에 30%였다. 화합물 1은 7일에 90% 이상까지 생존을 증가시켰고, 모든 투여량에서 8 내지 12일에 적어도 80%로 증가시켰다.
[표8] 마르부르크 감염에 있어서 화합물 1에 의한 예방 및 치료의 생존율 퍼센트
Figure 112013041948813-pct00010

본 발명은 이전의 일례의 구현예로 기재 및 설명하였지만, 본 발명은 예시로서만 기재된 것이며, 본 발명의 구연의 상세한 것에서의 다양한 변화를 하기의 첨구의 범위에서 제한하는 것으로 본 발명의 정신 및 범주를 벗어나지 않고 가능하다는 것을 이해해야 한다. 상세한 구현예의 특성은 본 발명의 정신 및 범주 내에서 다양한 방식으로 결합 및 재배열할 수 있다.

Claims (92)

  1. RNA 바이러스성 폴리머라아제를 식 I의 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물과 접촉시키는 단계를 포함하는, in vitro에서 RNA 바이러스성 폴리머라아제를 억제하는 방법:
    Figure 112017094104077-pct00033

    상기 식에서, A는 NH2 이며; 및 B는 H 이고, 상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 (a) 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리머라아제; 또는,
    (b) 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 피친드(pichinde) 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리머라아제이다.
  2. 제 1항에 있어서,
    제2 RNA 바이러스성 폴리머라아제가 억제되고, 상기 제2 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 (a) 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리머라아제; 또는
    (b) 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 쥬닌, 피친드, 리프트계곡열, 뎅기열, 홍역, 황열병, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 SARS-CoV 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리머라아제인, 방법.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 제2 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 쥬닌, 피친드, 리프트계곡열, 뎅기열, 홍역, 황열병, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 SARS-CoV 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포(machuppo), 구아나리토(guanarito), 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브(Tacaribe) 및 피친드(pichinde) 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 뎅기열, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B, 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드, 푼타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, SARS-CoV, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리머라아제인 방법.
  6. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 에볼라, 황열병, 마르부르크, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 바이러스성 폴리머라아제로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리머라아제인 방법.
  7. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 에볼라 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  8. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 홍역 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  9. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 황열병 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  10. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  11. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 마르부르크 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  12. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 웨스트 나일 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  13. 제 4항에 있어서,
    상기 RNA 바이러스성 폴리머라아제는 뎅기 바이러스성 폴리머라아제인 방법.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
    RNA 바이러스성 폴리머라아제를 부가적인 항-바이러스성 제제와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하고, 상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  18. 제 17항에 있어서,
    상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 페라미비르인 방법.
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 치료적 유효량의 하기 식 I의 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 포함하는 피험체에 바이러스성 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물:
    Figure 112017094104077-pct00034

    상기 식에서, A는 NH2 이며; 및 B는 H 이고,
    상기 바이러스성 감염은 (a) 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스; 또는
    (b) 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스를 포함한다.
  24. 제 23항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스로 감염되는 것을 포함하는, 약제학적 조성물.
  25. 제 23항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  26. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드, 푼타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, SARS-CoV, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  27. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 에볼라, 황열병, 마르부르크, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  28. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 에볼라인 약제학적 조성물.
  29. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 홍역인 약제학적 조성물.
  30. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 황열병인 약제학적 조성물.
  31. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 마르부르크인 약제학적 조성물.
  32. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B인 약제학적 조성물.
  33. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 웨스트 나일인 약제학적 조성물.
  34. 제 25항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 뎅기열인 약제학적 조성물.
  35. 제 23항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 피험체는 포유류인 것인, 약제학적 조성물.
  36. 제 35항에 있어서,
    상기 피험체는 인간인 약제학적 조성물.
  37. 삭제
  38. 제 23항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서,
    부가적인 항-바이러스성 제제를 추가로 포함하고, 상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  39. 제 38항에 있어서,
    상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 페라미비르인 약제학적 조성물.
  40. 제 23항 내지 제 34항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 복강 내, 근육 내 또는 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  41. 제 40항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥내로 투여되는 약제학적 조성물.
  42. 제 40항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 근육 내로 투여되는 약제학적 조성물.
  43. 제 40항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  44. 치료학적 유효량의 하기 식 I의 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 포함하는 피험체에서 바이러스성 감염을 억제하기 위한 약제학적 조성물:
    Figure 112017094104077-pct00035

    상기 식에서, A는 NH2 이며; 및 B는 H 이고, 상기 바이러스성 감염은 (a) 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스; 또는
    (b) 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드로 이루어진 군으로부터 선택되는 바이러스를 포함한다.
  45. 제 44항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스로 감염되는 것을 포함하는, 약제학적 조성물.
  46. 제 44항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  47. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드, 푼타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, SARS-CoV, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  48. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 에볼라, 황열병, 마르부르크, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  49. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 에볼라인 약제학적 조성물.
  50. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 홍역인 약제학적 조성물.
  51. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 황열병인 약제학적 조성물.
  52. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 마르부르크인 약제학적 조성물.
  53. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B인 약제학적 조성물.
  54. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 웨스트 나일인 약제학적 조성물.
  55. 제 46항에 있어서,
    상기 바이러스는 뎅기열인 약제학적 조성물.
  56. 제 44항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 피험체는 포유류인, 약제학적 조성물.
  57. 제 56항에 있어서,
    상기 피험체는 인간인 약제학적 조성물.
  58. 삭제
  59. 제 44항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서,
    부가적인 항-바이러스성 제제를 추가로 포함하고, 상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  60. 제 59항에 있어서,
    상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 페라미비르인 약제학적 조성물.
  61. 제 44항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 복막 내, 근육 내 또는 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  62. 제 61항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥내로 투여되는 약제학적 조성물.
  63. 제 61 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 근육 내로 투여되는 약제학적 조성물.
  64. 제 61항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  65. 치료학적 유효량의 하기 식 I의 화합물; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 포함하는 피험체에서 바이러스성 감염을 예방하기 위한 약제학적 조성물:
    Figure 112017094104077-pct00036

    상기 식에서, A는 NH2 이며; 및 B는 H 이고,
    상기 바이러스성 감염은 (a) 오르토믹소바이러스, 파라믹소바이러스, 아레나바이러스, 부니아바이러스, 플라비바이러스, 필로바이러스, 토가바이러스, 피코나바이러스 및 코로나바이러스 패밀리로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스; 또는
    (b) 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스를 포함한다.
  66. 제 65항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 하나 이상의 바이러스로 감염되는 것을 포함하는, 약제학적 조성물.
  67. 제 65항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 리노바이러스, 소아마비, 홍역, 에볼라, 콕사키, 웨스트 나일, 천연두, 황열병, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 라사, 림프구성 맥락 수막염, 쥬닌, 마추포, 구아나리토, 한타바이러스, 리프트계곡열, 라크로스, 캘리포니아 뇌염, 크림-콩고, 마르부르크, 일본 뇌염, 키야사나 삼림, 베네스웰라형 마뇌염, 동부형 마뇌염, 서부형 마뇌염, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 파라인플루엔자, 호흡기 합포체, 푼타 토로, 타카리브 및 피친드 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 바이러스에 의한 감염을 포함하는 약제학적 조성물.
  68. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 아데노바이러스, 뎅기열, 인플루엔자 A, 인플루엔자 B, 쥬닌, 홍역, 파라인플루엔자, 피친드, 푼타 토로, 호흡기 합포체, 리노바이러스, 리프트계곡열, SARS-CoV, 타카리브, 베네스웰라형 마뇌염, 웨스트 나일 및 황열병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  69. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 에볼라, 황열병, 마르부르크, 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  70. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 에볼라인 약제학적 조성물.
  71. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 홍역인 약제학적 조성물.
  72. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 황열병인 것인, 약제학적 조성물.
  73. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 마르부르크인 약제학적 조성물.
  74. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스성 감염은 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B인 약제학적 조성물.
  75. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 웨스트 나일인 약제학적 조성물.
  76. 제 67항에 있어서,
    상기 바이러스는 뎅기열인 약제학적 조성물.
  77. 제 65항 내지 제 76항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 피험체는 포유류인, 약제학적 조성물.
  78. 제 77항에 있어서,
    상기 피험체는 인간인 약제학적 조성물.
  79. 삭제
  80. 제 65항 내지 제 76항 중 어느 한 항에 있어서,
    부가적인 항-바이러스성 제제를 추가로 포함하고, 상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 라니나미비르, 오셀타미비르, 자나미비르 및 페라미비르로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  81. 제 80항에 있어서,
    상기 부가적인 항-바이러스성 제제는 페라미비르인 약제학적 조성물.
  82. 제 65항 내지 제 76항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥 내, 복막 내, 근육 내 또는 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  83. 제 82항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정맥 내로 투여되는 약제학적 조성물.
  84. 제 82항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 근육 내로 투여되는 약제학적 조성물.
  85. 제 82항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 경구로 투여되는 약제학적 조성물.
  86. 삭제
  87. 삭제
  88. 삭제
  89. 삭제
  90. 삭제
  91. 삭제
  92. 삭제
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