KR101845973B1 - 아민 - 싸이올의 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물 및 그 제조방법 - Google Patents

아민 - 싸이올의 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생체 내에 존재하는 베타-갈락토시데이즈의 탐지가 가능한 형광 화합물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 아민 싸이올 재배열을 이용한 베타 갈락토시데이즈 검츨용 형광 화합물 및 그 제조방법을 포함한다. 상기와 같은 본 발명에 생물 내에서 갈락토시다아제의 활성을 모니터링을 할 수 있으며, 생명 공학분야 또는 광역학적 치료, 세포 노화 조직 및 암 세포의 형광 표시등의 생물학적인 측면으로 다양하게 활용 될 수 있다.

Description

아민 - 싸이올의 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물 및 그 제조방법 {compound for detecting β-galactosidase using rearrangement of amin-thiol and Method for manufacturing thereof}
본 발명은 생명 공학 분야 또는 광역학적 치료, 암 세포의 형광 표시등의 생물학적인 측면으로 다양하게 활용할 수 있는 것으로서, 더욱 상세하게는 생체 내에 존재하는 베타-갈락토시데이즈 효소의 탐지가 가능한 형광 화합물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
세포 내의 베타-갈락토시데이즈는 노화된 조직에의 세포 내에 비정상적으로 축적되어 존재하므로, 노화 세포는 높은 베타-갈락토시데이즈 활성을 갖는다. 이에 베타-갈락토시데이즈는 노화 조직 및 세포를 검출하기 위한 중요한 생체 마커인 세포 노화표지로 사용되어왔으나, 현재 노화 세포 및 조직에 어떤 분자적 원인과 노화 및 노인성 질병의 연계성에 대한 연구가 미비한 실정으로, 살아있는 생물 내에서 갈락토시다아제의 활성을 모니터링 할 수 있는 연구가 필요하다.
한국공개특허 10-2016-0033868
본 발명의 목적은, 베타 갈락토시데이즈(beta-Galactosidase)와 반응한 화합물의 아민과 싸이올의 재배열을 일어나 형광 측정이 가능하도록 하는 화합물 및 그 제조방법을 제공함으로써, 생체 내에 존재하는 활성산소 또는 베타-갈락토시데이즈의 탐지가 가능 하도록 함에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 [화학식1]로 표시되는 아민 싸이올 재배열을 이용한 베타 갈락토시데이즈 검출용 형광 화합물을 제공한다.
[화학식1]
Figure 112016061283304-pat00001
상기 [화학식1]에서, X는 C(CH3)2 또는 S 또는 O 또는 NH 일 수 있다.
상기 [화학식1]에서, R1 및 R2는 탄소수 1 내지 10의 헤테로 원자를 포함하는 그룹일 수 있으며, 바람직하게는 (CH2)3CO2Et 또는 (CH2)2OH 또는 (CH2)2O(CH2)2OH일 수 있다.
본 발명의 일 형태에 따른 상기 [화학식1]로 표시되는 아민 싸이올 재배열을 이용한 베타 갈락토시데이즈 검출용 형광 화합물의 제조 방법은 (a) 극성용매 하에서, 실버옥사이드(Silver oxide)와 4-하이드록시벤즈알데히드(4-hydroxybenzaldehyde)및 α-디갈락토피라노실 브로마이드(α-Dgalactopyranosyl bromide)로 하기 [화학식2]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계; (b) 극성용매 하에서, 수소화붕소나트륨 (Sodium borohydride)과 상기 (a)단계에서 제조한 [화학식2]로 표시되는 화합물 및 시트르산(citric acid) 으로 하기 [화학식3]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계; (c) 극성용매 하에서, 1,1-카르보닐디이미다졸(1,1’-carbonyldiimidazole, CDI)과 상기 제조된 하기 [화학식3]으로 표시되는 화합물로 하기 [화학식4]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; (d) 극성용매 하에서, 시스테아민 염산염(Cysteamine hydrochloride)과 상기 제조된 하기 [화학식4]로 표시되는 화합물 및 트리에틸아민(triethylamine)으로 하기 [화학식5]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; e) 극성용매 하에서, 나트륨메톡시드(Sodium methoxide)와 상기 제조된 하기 [화학식5]로 표시되는 화합물로 하기 [화학식6]으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; 및 f) 극성용매 하에서, 사이아닌 염료와 상기 제조된 하기 [화학식6]으로 표시되는 화합물로 상기 [화학식1]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; 를 포함한다.
[화학식2]
Figure 112016061283304-pat00002
[화학식3]
Figure 112016061283304-pat00003
[화학식4]
Figure 112016061283304-pat00004
[화학식5]
Figure 112016061283304-pat00005
[화학식6]
Figure 112016061283304-pat00006
상기 극성용매는 아세토나이트릴(acetonitrile) 또는 클로로포름, 테트라하이드로퓨란 (Tetrahydrofuran, THF), 디클로로메탄(Dichloromethane), 아이소프로필 알코올, 메탄올 또는 에탄올 일 수 있다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 베타 갈락토시데이즈의 반응에 의해 화합물의 아민-싸이올의 재배열을 유도함에 의해 근적외선 영역의 형광을 측정할 수 있게 함으로써, 생체 내에 존재하는 베타 갈락토시데이즈의 근적외선 비례 형광 탐침으로 광역학적 치료, 암 세포의 형광 표시등의 활용과 응용이 가능하다.
도 1은 본 발명의 [화학식2]의 화합물에 대한 수소핵자기공명(1H NMR, Nuclear Magnetic Resonance) 및 탄소핵자기공명(13C NMR, Nuclear Magnetic Resonance)의 측정 결과이다.
도 2는 본 발명의 [화학식3]의 화합물에 대한 수소핵자기공명(1H NMR) 및 탄소핵자기공명(13C NMR)측정 결과이다.
도 3은 본 발명의 [화학식4]의 화합물에 대한 수소핵자기공명(1H NMR) 및 탄소핵자기공명(13C NMR)측정 결과이다.
도 4는 본 발명의 [화학식5]의 화합물에 대한 수소핵자기공명(1H NMR) 및 탄소핵자기공명(13C NMR)측정 결과이다.
도 5는 본 발명의 [화학식1]의 화합물에 베타 갈락토시데이즈를 첨가하여 반응시킨 후, UV- Vis 흡수(absorption) 및 형광 방출(fluorescence)량을 비교 측정한 실험 결과이다.
도 6은 본 발명의 [화학식1]의 화합물에 베타 갈락토시데이즈와 반응시킨 화합물의 pH에 따른 형광세기 변화를 측정한 결과이다.
도 7은 본 발명의 [화학식1]에 대한에 대한 효소의 친화도를 측정 결과이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 생명공학 기술 분야 또는 광역학적 치료, 암세포의 형광 표시등의 생물학적 측면으로 다양하게 활용될 수 있는 것으로서, 더욱 상세하게는 생체 내에 존재하는 베타 갈락토시데이즈의 탐지가 가능 한 형광 화합물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 형태에 따른 베타 갈락토시데이즈의 탐지가 가능 한 형광 화합물은 하기 [화학식1]로 표시되며, 베타 갈락토시데이즈와 반응하면 형광이 발현되는 화합물을 제공한다.
[화학식1]
Figure 112016061283304-pat00007
상기 [화학식1]에서, X는 C(CH3)2 또는 S 또는 O 또는 NH 일 수 있다.
상기 [화학식1]에서, R1 및 R2는 탄소수 1 내지 10의 헤테로 원자를 포함하는 그룹일 수 있으며, 바람직하게는 (CH2)3CO2Et 또는 (CH2)2OH 또는 (CH2)2O(CH2)2OH일 수 있다.
상기 [화학식1]로 표시되는 화합물은 하기 [반응식2]의 과정을 통해 [반응식1]의 아민 싸이올의 재배열에 의한 형광이 발현 될 수 있다.
[반응식1]
Figure 112016061283304-pat00008
[반응식2]
Figure 112016061283304-pat00009
본 발명의 화합물은 상기 [반응식2]에 따라, 페놀 작용기가 활성화되고, 연쇄반응으로 카바메이트 작용기가 끊어져 아민-싸이올 재배열이 일어나 구조 변화에 의해 형광 변화를 유도하게 된다.
본 발명의 일 형태에 따른 상기 [화학식1]로 표시되는 아민 싸이올 재배열을 이용한 베타 갈락토시데이즈 검출용 화합물의 제조 방법의 (a)단계는 하기 [화학식2]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식a]에 따라 제조 될 수 있다.
[반응식a]
Figure 112016061283304-pat00010
[화학식 2]
상기 [반응식a]에 따라, 극성용매 하에서, 실버옥사이드(Silver oxide)와 4-하이드록시벤즈알데히드(4-hydroxybenzaldehyde)및 α-디갈락토피라노실 브로마이드(α-D-galactopyranosyl bromide)혼합하고 실온에서 24시간 교반시키는 단계; 셀라이트(celite)로 필터링 한 후, 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc)로 세척하는 단계; 여과된 혼합물을 진공 하에서 농축시키는 단계; 에틸아세테이트(EtOAc) : 헥산(Hexane) 2:1(v/v)로 실리카겔의 플래시 크로마토그래피(flesh Chromatography)에 의해 정제하는 단계일 수 있다.
(b)단계는 하기 [화학식3]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식b]에 따라 제조될 수 있다.
[반응식b]
Figure 112016061283304-pat00011
[화학식3]
상기 [반응식b]에 따라, 0℃의 극성용매 하에서, 수소화붕소나트륨 (Sodium borohydride)과 상기(a)단계에서 제조한 [화학식2]의 화합물을 실온에서 3시간 동안 교반하여 혼합하는 단계; 상기 교반한 혼합물에 시트르산(citric acid)솔루션을 첨가하는 단계; 10% 탄산수소나트륨 용액 15mL로 3회 세척 후, 물 15mL로 1회 세척하여, 유기용액을 무수 황산나트륨으로 물을 완전히 제거하는 단계; 진공 하에서 용매를 증발시키는 단계; 및 EtOAc: Hexan 1:1(v/v)로 실리카 겔의 플래시크로마토그래피에 의해 정제하는 단계;를 포함할 수 있다.
(c)단계는 하기 [화학식4]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식c]에 따라 제조 될 수 있다.
[반응식c]
Figure 112016061283304-pat00012
[화학식4]
상기 [반응식c]에 따라, 극성용매 하에서, 1,1-카르보닐디이미다졸(1,1’-carbonyldiimidazole, CDI) 상기 (b)단계에서 제조한 [화학식3]의 화합물을 실온에서 4시간 동안 교반하여 혼합하는 단계; 상기 교반한 혼합물의 휘발성 물질을 제거 하는 단계; 및 EtOAc : Hexane 2:1(v/v)로 실리카겔의 플래시 크로마토그래피(flesh Chromatography)에 의해 정제하는 단계를 포함할 수 있다.
(d)단계는 하기 [화학식5]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식d]에 따라 제조될 수 있다.
[반응식d]
Figure 112016061283304-pat00013
[화학식5]
상기 [반응식d]에 따라, 극성용매 하에서, 시스테아민염산염(Cysteamine hydrochloride)과 상기 (c)단계에서 제조한 [화학식4]의 화합물 및 트리에틸아민 (triethylamine)을 실온에서 24시간 동안 교반하여 혼합하는 단계; 상기 교반한 혼합물의 휘발성 물질을 제거하는 단계; 및 EtOAc : Hexane 1:1(v/v)로 실리카겔의 컬럼크로마토그래피(column Chromatography)에 의해 정제하는 단계;를 포함 할 수 있다.
(e)단계는 하기 [화학식6]으로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식e]에 따라 제조 될 수 있다.
[반응식e]
Figure 112016061283304-pat00014
[화학식6]
상기 [반응식e]에 따라, 극성용매 하에서, 나트륨메톡시드(Sodium methoxide)와 상기 (d)단계에서 제조한 [화학식5]의 화합물을 실온에서 1시간 동안 교반하여 혼합하는 단계; 상기 교반한 혼합물의 휘발성 물질을 제거 하는 단계; 를 포함 할 수 있다.
(f)단계는 [화학식1]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계로써, 하기 [반응식f]에 따라 제조될 수 있다.
[반응식f]
Figure 112016061283304-pat00015
[화학식1]
상기 [반응식f]에 따라, 극성용매 하에서, 사이아닌 염료(cyanine dye)와 상기 (e)단계에서 제조한 [화학식6]의 화합물을 실온에서 1시간 동안 교반하여 혼합하는 단계; 휘발성 물질을 제거하고 극성용매로 세척하는 단계;를 포함할 수 있다.
실시예 1. [화학식1]로 표시되는 화합물의 합성.
아세토나이트릴(acetonitrile) 11ml에, 실버옥사이드(Silver oxide) 2.0 mmol 와 4-하이드록시벤즈알데히드(4-hydroxybenzaldehyde) 110 mmol 및 α-디갈락토피라노실 브로마이드(α-Dgalactopyranosyl bromide) 1.0 mmol을 더하여 실온에서 밤새(Overnight) 교반하여, 셀라이트(celite)로 필터를 실시한 후, EtOAc로 그 패드를 세척하였다. 여과된 혼합물을 진공 하에서 농축시킨 후, EtOAc-Hexane 2:1(v/v)로 실리카겔에서 플래시 크로마토그래피(flash Chromatography)에 의해 정제하였다. Rf=0.71로 68%의 수득률로 424mg의 하얀색 분말의 [화학식2]의 화합물을 얻었다. 도 1의 1H, 13C NMR(nuclear magnetic resonance, NMR) 분석 및 HRMS(high-resolution mass spectrometer, HRMS)의 결과를 확인 하였다.
1H NMR (CD3OD,400MHz):δ = 9.88 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.6, 2H), 7.20 (d, J = 8.6, 2H), 5.52-5.43 (m, 3H), 5.32 (dd, J = 3.3, 10.0, 1H), 4.41 (t, J = 6.3, 1H), 4.21 (d, J = 6.3, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H). 13C NMR (CD3OD,100MHz):δ 191.4, 170.66, 170.63, 170.1, 169.8, 161.5, 131.7, 131.6, 116.5, 97.8, 71.1, 70.7, 68.6, 61.4, 19.5 19.49, 19.41, 19.3. HRMS (MALDI+,DHB):m/z found 475.1215, calcd. 475.1211 for C21H24O11Na[M+Na]+.
0℃의 클로로포름:이소프로필 알콜 (CHCl3 : i PrOH)을 9ml:3ml로 혼합용매에, 하에서, Sodium borohydride (2.07 mmol) 와 상기 (a)단계에서 제조한 [화학식2]로 표시되는 화합물 0.94 mmol 및 10% 시트르산(citric acid)수용액(w/w) 20mL을 추가하였다. 그 다음, 10% 탄산수소나트륨 용액으로 세 번 씻고, 물로 1번 씻은 후, 유기용액을 무수 황산나트륨으로 물을 완전히 제거하였다.
진공 하에서 용재를 증발시키고, 에틸아세테이트 : 헥산 (EtOAc-Hexane 1:1)로 실리카겔의 플래시 크로마토그래피(flash Chromatography)에 의해 정제하여, Rf=0.15로 68%의 수득률로 290mg의 하얀색 고형분의 [화학식3]의 화합물을 얻었다. 도 2의 1H, 13C NMR분석 및 HRMS의 결과를 확인 하였다.
1H NMR (CD3OD,400MHz):δ = 7.32 (d, J = 8.6, 2H), 7.02 (d, J = 8.6, 2H), 5.46 (d, J = 3.3, 1H), 5.40-5.36 (m, 1H), 5.30-5.25 (m, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.30 (t, J = 6.5, 1H), 4.19 (d, J = 6.5, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.99 (s, 3H). 13C NMR (CD3OD,100MHz):δ 170.66, 170.63, 170.1, 169.9, 156.2, 128.1, 116.3, 98.9, 70.8, 70.7, 68.8, 67.4, 63.3, 61.3, 19.33, 19.30, 19.21, 19.19. HRMS (MALDI+,DHB):m/z found 477.1365, calcd. 431.1365 for C21H26O11Na[M+Na]+.
테트라 하이드로 푸란 (Tetrahydrofuran, THF) 5 mL에, 1,1-카르보닐디이미다졸 (1,1’-carbonyldiimidazole, CDI) 1.90 mmol와 상기 (b)단계에서 제조한 [화학식3]로 표시되는 화합물 0.63 mmol을 추가하여 실온에서 4시간 동안 교반 후, 감압으로 휘발성 물질을 제거하여, 에틸아세테이트:헥산 (EtOAc-Hexane 2:1, v/v, Rf=0.51)로 실리카겔의 컬럼 크로마토그래피(column Chromatography)에 의해 정제하여, 99%의 수득률로 344mg의 하얀색 고형분의 [화학식4]의 화합물을 얻었다. 도 3의 1H, 13C NMR분석 및 결과를 확인 하였다.
1H NMR (CD3OD,400MHz):δ = 8.24 (s, 1H), 7.54 (t, J = 1.4, 1H), 7.48 (d, J = 8.6, 2H), 7.09-7.04 (m, 3H), 5.46 (d, J = 2.9, 1H), 5.44-5.35 (m, 4H), 5.28 (dd, J = 3.4, 10.1, 1H), 4.32 (t, J = 6.5, 1H), 4.18 (d, J = 6.5, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.98 (s, 3H). 13C NMR (CD3OD,100MHz):δ 170.6, 170.5, 170.1, 169.9, 157.4, 148.4, 137.3, 130.4, 129.3 129.1, 117.5, 116.6, 98.6, 70.9, 70.8, 69.3, 68.7, 67.3, 61.3, 19.38, 19.37, 19.27, 19.24.
클로로포름(CH2Cl2) 6mL에서, 시스테아민염산염(Cysteamine hydrochloride) 3.7 mmol와 [화학식4]로 표시되는 화합물 1.9 mmol 및 트리에틸아민 (triethylamine) 3.72 mmol을 추가하고 실온에서 overnight으로 교반하여 혼합하였다. 혼합 후 감압하여 휘발물질을 제거하고, 에틸아세테이트:헥산 (EtOAc-Hexane 1:1)로 실리카겔의 컬럼크로마토그래피(column Chromatography)에 의해 정제하여, Rf=0.62로 68%의 수득률로 671mg의 하얀색 고형분인 [화학식5]의 화합물을 얻었다. 도 4의 1H, 13C NMR 분석 및 HRMS의 결과를 확인하였다.
1H NMR (CD3OD,400MHz):δ 7.33 (d, J = 8.4, 2H), 7.02 (d, J = 8.4, 2H), 5.46 (d, J = 3.2, 1H), 5.39-5.24 (M, 3H), 4.83 (S, 2H), 4.31 (t, J = 6.4, 1H), 4.19 (d, J = 6.4, 2H), 3.27 (t, J = 6.8, 2H), 2.59 (t, J = 6.8, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.99 (s, 3H) 13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ170.6, 170.5, 170.0, 169.9, 157.4, 156.7, 131.6, 129.2, 116.3, 98.7, 70.8, 70.7, 68.8, 67.3, 65.6, 61.2, 43.9, 23.5, 19.27, 19.26, 19.15, 19.14. HRMS (MALDI+,DHB): m/z found 580.1462, calcd. 584.1460 for C24H31NO12SNa[M+Na]+.
메탄올 1.0mL에, 나트륨메톡시드(Sodium methoxide) 0.21 mmol와 [화학식5]로 표시되는 화합물 0.21 mmol을 추가하여 실온에서 1시간 동안 교반 후, 감압으로 휘발성 물질을 제거하고 실리카젤 크로마토 그래피를 실시하여 분리하고 (Silica, MeOH/CH2Cl210:1v/v, Rf=0.10) [화학식6]의 화합물을 얻었다.
[화학식6]의 화합물은 추가 정제 없이 바로 다음 반응에 사용될 수 있으며, 메탄올 2mL에 [화학식6]의 화합물 0.21mmol과 사이아닌 염료 (Cy7) 0.21mmol을 첨가하고 트리에틸아민 0.21mmol을 추가하여, 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨다. 반응 후, 휘발성 물질을 제거하고 클로로포름(CH2Cl2)로 세척하여 Rf=0.01로 72%의 수득률로 80mg의 초록색 고형분인 [화학식1]의 화합물을 얻었다. 실리카젤 크로마토 그래피를 실시하여 분리하고 (Silica, MeOH/CH2Cl2 10:1v/v) 1H, 13C NMR 분석 및 HRMS의 결과를 확인하였다.
1H NMR (CD3OD,400MHz):δ 8.86 (d, J = 14.4, 2H), 7.46-7.35 (m, 6H), 7.29-7.24 (m, 4H), 7.05 (d, J = 8.4, 2H), 6.43 (d, J = 14.4, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.85 (d, J = 8.0, 1H), 4.39 (t, J = 4.8, 4H), 3.95-3.91 (m, 5H), 3.84-3.91 (m, 4H), 3.68 (t, J = 6.0, 2H), 3.63-3.54 (m, 10H), 2.96 (t, J = 6.8, 2H), 2.80-2.54 (m, 3H), 1.94-1.91 (m, 2H), 1.90 (s, 12H). 13C NMR (CD3OD, 100MHz): δ173.2, 157.6, 157.1, 155.8, 145.4, 142.6, 140.9, 133.6, 130.4, 129.2, 128.3, 124.8, 121.9, 116.3, 111.0, 101.7, 101.4, 75.4, 73.4, 72.5, 70.8, 68.8, 67.7, 65.8, 61.0, 60.8, 49.1, 44.4, 40.7, 36.5, 27.1, 25.9, 20.8. HRMS (FAB+, m-NBA):m/z found 984.4677, calcd. 984.4675 for C54H70N3O12S ([M]+)
실시예 2. [ 화학식1 ]로 표시되는 화합물의 갈락토시데이즈 검출 측정.
PBS buffer(0.10M, pH 7.4)와 로 DMSO를 부피비 4:6으로 혼합하여 5 unit의 갈락토시데이즈(Galactosidase, Gal) 2ml을 10μM의 [화학식1]의 화합물과 2시간 반응시킨 결과를 도 5에 기재하였다.
UV-vis를 통해 785 nm에서의 흡수가 급격하게 늘어나는 것을 확인할 수 있다. 형광 변화를 통해 갈락토시데이즈와의 반응 여부를 확인하였다.
형광 측정 결과, [화학식1]의 화합물은 약 800nm에서 형광 그래프를 확인하였고, [화학식1]의 화합물+Gal는 약 740nm에서 강한 형광 값을 확인하였다.
실시예 3. pH에 따른 [화학식1]로 표시되는 화합물의 형광 측정.
[화학식 1]로 표시되는 화합물 10 uM에 갈락토시데이즈(5 unit/ 2mL) 를 첨가하고 2시간을 반응시켜, 750 내지 805nm에서의 형광 세기를 측정하여 pH에 영향을 받는지를 확인하기 위한 측정결과를 도 6에 기재하였다. 갈락토시데이즈를 포함하지 않는 [화학식1]의 화합물 및 갈락토시데이즈와 반응된 [화학식1]의 화합물의 경우가 pH 3~10 사이에서는 거의 변화가 없음을 알 수 있다. 이것은 [화학식1]로 표시되는 화합물이 pH에 영향을 받지 않고도 세포 및 생체에도 유용하게 적용될 수 있음을 예상할 수 있다.
실시예 4. [화학식1]의 화합물과 효소의 친화도 측정
도7은 [화학식1]의 화합물의 양을 고정하였을 때, 효소의 반응을 측정한 것이며, 효소의 양을 고정하였을 때, [화학식1]의 화합물의 반응속도를 측정한 것이다. 본 발명의 화합물의 농도가 높아질수록 친화도가 높아지며, 효소의 농도가 높을수록 화합물의 반응 또한 상승함을 확인 하였다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

Claims (2)

  1. 하기 [화학식1]로 표시되며, 아민 싸이올 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물.
    [화학식 1]
    Figure 112017111784622-pat00016


    상기 [화학식1]에서, X는 C(CH3)2, R1 및 R2는 (CH2)2O(CH2)2OH 인 것을 특징으로 하는 아민 싸이올 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물.
  2. (a) 극성용매 하에서, 산화은과 4-하이드록시벤즈알데히드 및 α-디갈락토피라노실 브로마이드를 혼합하여, 하기 [화학식2]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계;
    (b) 극성용매 하에서, 수소화붕소나트륨과 상기 (a)단계에서 제조한 하기 [화학식2]로 표시되는 화합물 및 시트르산을 혼합하여, 하기 [화학식3]로 표시되는 화합물을 제조하는 하는 단계;
    (c) 극성용매 하에서, 1,1-카르보닐디이미다졸과 상기 (b)단계에서 제조된 하기 [화학식3]로 표시되는 화합물을 혼합하여, 하기 [화학식4]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계;
    (d) 극성용매 하에서, 시스테아민염산염과 상기 (c)단계에서 제조된 하기 [화학식4]로 표시되는 화합물 및 트리에틸아민을 혼합하여, 하기 [화학식5]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계;
    (e) 극성용매 하에서, 나트륨메톡시드과 상기 (d)단계에서 제조된 하기 [화학식5]로 표시되는 화합물을 혼합하여, 하기 [화학식6]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; 및
    (f) 극성용매 하에서, 사이아닌 염료와 상기 (e)단계에서 제조된 하기 [화학식6]으로 표시되는 화합물을 혼합하여, 하기 [화학식1]로 표시되는 화합물을 제조하는 단계; 를 포함하는 아민 싸이올 재배열을 이용한 베타 갈락토시데이즈 검출용 화합물의 제조 방법.
    [화학식 1]
    Figure 112017111784622-pat00017


    상기 [화학식1]에서, X는 C(CH3)2, R1 및 R2는 (CH2)2O(CH2)2OH 인 것을 특징으로 하는 아민 싸이올 재배열을 이용한 갈락토시데이즈 검출용 화합물의 제조방법.
    [화학식2]
    Figure 112017111784622-pat00018

    [화학식3]
    Figure 112017111784622-pat00019

    [화학식4]
    Figure 112017111784622-pat00020

    [화학식5]
    Figure 112017111784622-pat00021

    [화학식6]
    Figure 112017111784622-pat00022
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