KR101843573B1 - 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 효소가 처리된 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 영실 추출물의 항알레르기 효능을 극대화할 수 있다. 구체적으로, 본 발명자들은 OVA로 면역시킨 마우스의 비장세포에 효소처리 영실 추출물을 처리한 결과 효소를 처리하지 않은 영실 추출물에 비하여 IL-4 생성 억제활성이 현저하게 증진되며, in vivo에서 효소처리 영실 추출물의 경구 투여에 의해 OVA로 면역시킨 마우스의 혈중 IgE 함량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다. 또한, 천연물인 영실을 이용하므로 생체 친화적이고 안정성이 우수한 장점이 있으므로, 본 발명에 따른 조성물은 Th2-매개 면역질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 안전한 치료제, 건강기능성 식품, 및 화장품 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating of Ｔｈ2-mediated immune disease comprising enzyme-treated extracts from Rosae multiflorae Fructus as an active ingredient}
본 발명은 효소가 처리된 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
Thl(type 1 helper T)과 Th2(type 2 helper T) 세포가 생산하는 사이토카인에 의해 조절되는 면역균형을 Thl/Th2 균형이라고 하며, Thl 세포는 세포성 면역의 조절에 중요하고, Th2 세포는 체액성 조절에 중요한 역할을 한다. 정상상태에서는 Thl의 분화에 중요한 IFN-γ를 중심으로 한 사이토카인과 Th2의 분화에 중요한 IL-4를 중심으로 한 사이토카인이 서로 간섭하면서 Thl/Th2 균형을 일정하게 유지하고 있으나, Thl/Th2 균형이 깨지면 다양한 면역질환이 유발될 수 있다. 예컨대, Thl에 편향한 경우에는 세포성 면역이 부활하여 감염저항성이 증강하고, Th2에 편향한 경우에는 감염저항성이 감소하고, 역으로 알레르기가 증강한다고 알려져 있다.
알레르기(Allergy)는 면역시스템의 오작동으로 보통 사람에게는 별 영향이 없는 물질이 특정 사람에게만 두드러기, 가려움, 콧물, 기침 등의 과민반응을 유발하는 질환으로서, 환경오염, 식생활과 생활습관의 서구화, 스트레스와 같은 환경인자, 유전, 및 다양한 알레르겐에 의해 유발될 수 있다. 전 세계 인구의 20~25%가 알레르기성 질환에 노출되어 있으며, 유병률이 계속적으로 증가하는 추세이다.
알레르기 반응은 발현시간과 타입에 기초하여 전통적으로 4개의 부류로 나뉘는데, Ⅰ-Ⅲ형은 항체가 관여하는 체액성 면역반응(즉시형)이고, Ⅳ형은 세포가 직접 관여하는 세포성 면역반응(지연형)이다. 대부분의 알레르기 반응은 Ⅰ형으로 천식, 비염, 결막염, 식품 및 약물 알레르기, 및 아토피피부염 등이 대표적인 질환이고, 심한 경우 아나필락시스(anaphylaxis)가 유발될 수도 있다.
제 I형 즉시형 과민반응은 2단계로 나뉘는데, 제1단계는 알레르겐의 체내 침입에 의하여 IgE와 IgG1의 분비를 억제하고 IgG2a의 분비를 증가시키는 IL-12 및 IFN-γ를 생산하는 Th1 세포반응과 IL-4, IL-5 및 IL-13 등을 생산하는 Th2(type2 helper T) 세포반응의 균형이 Th2 쪽으로 기울어지게 되어 Th2의 과도한 면역반응으로 IL-4, IL-13 등이 분비되고, 그 영향으로 B 세포가 생산한 IgE 특이 항체들이 비만세포(mast cell)나 호염기구(basophil)의 표면에 부착되어 알레르기 발증이 준비된 단계로써 이를 알레르겐에 감작되었다고 한다.
알레르기 발증의 제2단계는 초기반응과 후기반응으로 나뉘며, 초기반응은 알레르겐이 체내에 재침입하여 비만세포를 자극하고 탈과립 반응을 유발하며 이때 방출된 히스타민, 지질 대사물, 사이토카인 등에 의한 혈관확장 등이 일어나는 것이고, 후기반응은 해당조직에 호중구, 호산구, 대식세포, Th2 세포, 호염기구 등이 침윤하여 활성화됨으로써 염증이 유발되어 아토피피부염, 비염, 천식 등을 일으키는 것이다. 이 같은 탈과립 분비 물질 중 히스타민은 가장 잘 알려진 인자이며, 즉각형 과민반응과도 관련되어 알레르기 증상의 중요한 지표로 사용되고 있다.
알레르기 치료제는 21세기에 주류를 이루며 활발히 연구가 지속되고 있어 약 26조원의 세계시장이 형성되어 있으며, 건강기능성 식품 시장은 6.5조원으로 약 10%대로 성장할 것으로 예상되고 있다. 미국에서는 약 5,000만 명이 다양한 알레르기 질환을 보유하고 있으며 약 52억불의 의약품 시장이 형성되어 있다. 국내의 경우에는 알레르기 질환 치료제 시장이 4,400억 원, 건강기능성 식품시장은 1,450억 원 규모로 지속적으로 증가하고 있다.
그러나 현재 알레르기의 치료를 위한 대부분의 약물들은 알레르기 기전의 마지막 단계에서 분비되는 히스타민의 분비를 억제하거나, 알레르기에 의한 증상을 치료하는데 치중되어 있으며 확실한 효과를 보이는 치료제가 거의 없다. 알레르기 질환의 치료는 장기간 이루어질 수 있는데, 대부분 탁월한 치료효과를 보이는 약물들은 스테로이드제로써 아토피피부염, 알레르기 비염, 천식 등에 널리 사용되고 있으나, 장기간 사용은 심각한 부작용을 초래할 수 있다. 항히스타민제 또한 증상들이 완화되는 것처럼 느끼게 되나, 장기간의 사용은 우울증, 집중력 장애, 무기력증, 졸림, 간장장애 등의 부작용을 유발하고 사용을 중단하면 알레르기 질환이 재발하는 문제점이 있다. 더욱이, 알레르기 질환 특히, 아토피피부염은 소아, 청소년 환자들이 대부분이므로 독성과 부작용이 없는 안전성이 확보된 치료제의 개발이 매우 중요하며, 이러한 한계점을 극복하고자 하는 연구가 활발하게 이루어지고 있으나, 치료제 개발이 쉽지 않은 실정이다. 이에 따라 이러한 약물들의 복용량을 줄이고 어느 정도 대체할 수 있으며, 장기간 치료에도 부작용이 없는 안전한 기능성식품 개발의 필요성이 대두되고 있다.
한편, 영실(Rosae multiflorae Fructus)은 장미과에 속하는 찔레나무의 열매로써 우리나라 및 일본에 흔히 분포한다. 생김새는 구형 또는 타원형으로 바깥 면은 홍색이나 어두운 적갈색으로 광택이 있고, 과실의 끝에는 오각형의 암술머리가 남아있으며, 약간 신 냄새가 있고 맛은 조금 달다. 영실은 소변을 잘 보지 못하거나 부종, 불면증, 성기능 감퇴, 종기, 악창 등에 사용하며 혈액순환을 촉진하고 독을 제거하는 효능이 있다. 약리작용으로는 관상 동맥확장작용, 생쥐 수명연장, 지질, 단백질 대사개선 작용, 및 죽상동맥경화 형성억제작용 등이 보고되어 있다. 최근에는 영실에 포함되어 있는 페놀성(phenolic) 화합물인 탄닌(tannin) 계열의 화합물들이 우수한 항산화 효과를 나타냄이 보고된 바 있고, 영실의 프로토카테큐산(protocatechuic acid), 클로로겐산(chlorogenic acid), 및 퀘르세틴(quercetin) 등의 화합물은 헬리코박터파일로리(Helicobacter pylori)균에 대하여 항균효과를 나타낸다고 보고되었다(한국 공개특허 2010-0043882). 또한, 영실을 알레르기 질환의 예방 또는 치료용도로 이용하고자 하는 연구들도 이루어져 왔다. 그러나 일반적인 용매 추출법만으로 추출한 영실 추출물의 항알레르기 효과에는 한계가 있으므로, 그 효능을 향상시키거나 새로운 효과를 얻을 수 있는 연구가 필요하다.
이에, 본 발명자들은 영실 추출물에 효소를 처리한 후 항알레르기 활성 증진 효과를 연구하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명자들은 영실 추출물에 대하여 알레르기와 같은 Th2 면역 반응에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료 효과를 증진시키기 위해 예의 연구한 결과, 효소를 처리한 영실 추출물이 효소를 처리하지 않은 추출물에 비하여 IL-4 및 IgE 생성 억제활성이 현저히 증진되는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환 예방, 개선, 또는 치료용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 Th2-매개 면역질환은 알레르기 질환일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 효소는 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 인터류킨-4(IL-4)의 생성을 억제할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 면역글로불린 E(IgE)의 생성을 억제할 수 있다.
또한, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, Th2-매개 면역질환 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, Th2-매개 면역질환 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물의 Th2-매개 면역질환 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 영실 추출물의 항알레르기 효능을 극대화할 수 있다. 구체적으로, 본 발명자들은 OVA로 면역시킨 마우스의 비장세포에 효소처리 영실 추출물을 처리한 결과 효소를 처리하지 않은 영실 추출물에 비하여 IL-4 생성 억제활성이 현저하게 증진되며, in vivo에서 효소처리 영실 추출물의 경구 투여에 의해 OVA로 면역시킨 마우스의 혈중 IgE 함량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다. 또한, 천연물인 영실을 이용하므로 생체 친화적이고 안정성이 우수한 장점이 있으므로, 본 발명에 따른 조성물은 Th2-매개 면역질환의 예방, 개선, 또는 치료를 위한 안전한 치료제, 건강기능성 식품, 및 화장품 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 베타-글루코시다아제를 처리하거나 처리하지 않은 영실 추출물(영실 물 추출물, 영실 상온 주정 추출물, 및 영실 주정 후 물 추출물) 각각을 농도를 달리하여 OVA로 면역시킨 마우스 비장세포에 처리하고, 72시간 동안 세포를 배양한 후 배양액으로부터 IL-4의 양을 ELISA로 측정한 결과이다.
도 2는 OVA로 면역시킨 마우스에 대조군인 영실 추출물 또는 효소처리 영실 추출물을 경구 투여한 후 마우스의 혈중 IgE 함량을 ELISA를 통해 측정한 결과이다(영실: 영실 추출물 투여군, β-glucosidase 처리: 효소처리 영실 추출물 투여군).
본 발명은 효소 처리를 통해 활성이 증진된 영실 추출물 및 이의 용도에 관한 것이다.
이에, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “예방”이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 Th2-매개 면역질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 Th2-매개 면역질환에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 천연물 소재인 “영실”은 장미과에 속하며 우리나라 및 일본에서 흔히 자라는 찔레나무의 열매로써 구형 또는 타원형으로 바깥 면은 홍색이나 어두운 적갈색으로 광택이 있고, 과실의 끝에는 오각형의 암술머리가 남아있는 생김새이다. 약간 신 냄새가 있고 맛은 조금 달며, 소변을 잘 보지 못하거나 부종, 불면증, 성기능 감퇴, 종기, 악창 등에 사용하며 혈액순환을 촉진하고 독을 제거한다. 또한, 관상 동맥확장작용, 생쥐 수명연장, 지질, 단백질 대사개선 작용, 죽상동맥경화 형성억제작용 등의 약리작용이 보고되어 있다. 본 발명에서 영실은 추출 원료로써 형태의 제한 없이 열매 그대로를 사용할 수 있고, 분말 형태를 사용할 수도 있다.
본 발명에서 대상으로 하는 질병인 “Th2-매개 면역질환”은 알레르겐-특히 Th2 세포의 생성 및 활성화에 의한 IgE 및 비만세포가 관여하는 질환을 의미하고, 예컨대 알레르기를 포함하며, 보다 구체적으로는 아토피피부염을 포함하는 피부질환, 급성 및 만성 알레르기성 비염, 천식, 식품 및 약물 알레르기, 및 아나필락시스(anaphylaxis) 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어 “효소”란, 생명체 내 화학 반응의 촉매가 되는 것으로, 생체 세포가 생산하는 단백질성의 고분자 유기 촉매를 의미한다. 동물, 식물 등 모든 생물의 세포 속에는 여러 종류의 효소가 존재하며, 생명체의 화학적 반응에 관여한다. 효소는 그 화학 구조가 매우 복잡하므로 기질의 종류나 반응 형식에 따라 분류하며, 반응의 종류에 따라 가수 분해 효소(hydrolase), 전이 효소(transferase), 리아제(lyase) 및 신테타아제(synthetase), 이소메라아제(isomerase)로 분류된다. 효소는 의약품, 아밀라아제에 의한 녹말 당화의 대규모 이용, 치즈 제조, 과즙의 청정, 섬유공업, 비타민과 아미노산 등의 합성 등 다양한 용도로 이용되고 있다. 본 발명에서는 영실의 활성을 증진시키기 위하여 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)를 이용하였다. 상기 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)는 두 개의 글루코오스(glucose) 또는 글루코오스 치환 분자(glucose-substituted molecules)를 연결하는 β1->4 결합에 대해 작용하는 효소로써, 셀룰로오스(cellulose) 또는 연관된 다당류의 분해에 관여하는 셀룰라아제(cellulase), 보다 구체적으로는 다양한 베타-D-글루코시드(beta-D-glucoside) 기질 특이성을 갖는 엑소셀룰라아제(exocellulase)이다.
본 발명의 효소처리 영실 추출물은 영실 추출물을 수득하는 단계; 및 상기 영실 추출물에 효소를 첨가하여 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 구체적으로, 상기 효소를 첨가하여 반응시키는 단계는 37℃에서 15시간 내지 40시간, 보다 바람직하게는 20 내지 30시간 동안 이루어질 수 있다.
상기 영실 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에서 영실 추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있고, 바람직하게는 물 또는 에탄올을 사용하여 추출할 수 있다. 또한, 영실 추출물을 추출하는 방법은 상온 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 마이크로웨이브 추출, 및 초음파 추출 등의 다양한 방법을 통하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 상온 추출 또는 환류 추출 방법을 이용할 수 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 용매로 추출한 추출물은 이후 부탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 분획과정을 더욱 실시할 수도 있다. 상기 분획 시 온도는 4℃ 내지 120℃일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 일실시예에서는 효소가 처리된 영실 추출물에 대하여 Th2-매개 면역질환의 개선 또는 치료효과를 확인하기 위해 하기와 같은 실험을 진행하였다.
본 발명의 일실시예에서는, OVA로 면역한 마우스로부터 분리하여 배양한 비장세포에 OVA, 효소처리하지 않은 영실 추출물 또는 효소가 처리된 영실 추출물을 다양한 농도로 처리한 후 세포를 배양한 결과 효소 처리를 통해 영실 추출물의 IL-4 억제활성이 현저히 증진된 것을 확인하였다(실시예 2 참조).
본 발명의 다른 실시예에서는, OVA로 면역한 마우스에 효소처리하지 않은 영실 추출물 또는 효소가 처리된 영실 추출물을 경구 투여한 후 혈중 IgE 함량을 비교분석한 결과, 영실 추출물 투여군에 비해 효소처리 영실 추출물 투여군에서 IgE 함량 감소 정도가 증진된 것을 확인하였다(실시예 3 참조).
따라서 본 발명의 상기 조성물은 IL-4 및 IgE의 생성을 억제할 수 있음을 확인하였다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하며, 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 사이클로덱스트린, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 등을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액 등 다른 통상의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 레밍턴의 문헌에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 제형에 특별한 제한은 없으나 주사제, 흡입제, 피부 외용제 등으로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 “약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 ㎏ 당 0.001 내지 150 ㎎, 바람직하게는 0.01 내지 100 ㎎을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환 개선용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “개선”이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이때 상기 건강기능성 식품 조성물은 Th2-매개 면역질환의 개선을 위하여 해당 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “건강기능성 식품 조성물”은 담체, 희석제, 부형제, 및 첨가제 중 하나 이상을 포함하여 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제, 및 액제 제형으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 제형된 것을 특징으로 한다. 본 발명의 추출물에 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 식품류 등이 있다. 상기 본 발명에 더 포함될 수 있는 첨가제로는, 천연 탄수화물, 향미제, 영양제, 비타민, 광물(전해질), 풍미제(합성 풍미제, 천연 풍미제 등), 착색제, 충진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH조절제, 안정화제, 방부제, 산화 방지제, 글리세린, 알코올, 탄산화제 및 과육으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 성분을 사용할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 외에 본 발명에 따른 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명에 다른 조성물은 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 담체, 부형제, 희석제, 및 첨가제의 구체적인 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 락토오스, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로즈, 폴리비닐키롤리돈, 셀룰로즈, 폴리비닐피로리돈, 메틸셀룰로즈, 물, 설탕시럽, 메틸 하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1종 이상이 사용되는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 효소처리 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 효소처리 영실 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 효소처리 영실 추출물 이외에, 효소처리 영실 추출물과 반응하여 피부보호 효과를 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 유기 자외선 차단제를 혼합하여 사용할 수도 있다. 상기 유기 자외선 차단제로는 글리세릴파바, 드로메트리졸트리실록산, 드로메트리졸, 디갈로일트리올리에이트, 디소듐페닐디벤즈이미다졸테트라설포네이트, 디에틸헥실부타미도트리아존, 디에틸아미노하이드록시벤조일헥실벤조에이트, 디이에이-메톡시신나메이트, 로우손과 디하이드록시아세톤의 혼합물, 메틸렌비스-벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀, 4-메틸벤질리덴캠퍼, 멘틸안트라닐레이트, 벤조페논-3(옥시벤존),벤조페논-4, 벤조페논-8(디옥시페벤존), 부틸메톡시디벤조일메탄, 비스에틸헥실옥시페놀메톡시페닐트리아진, 시녹세이트, 에틸디하이드록시프로필파바, 옥토크릴렌, 에틸헥실디메틸파바, 에틸헥실메톡시신나메이트, 에틸헥실살리실레이트, 에틸헥실트리아존, 이소아밀-p-메톡시신나메이트, 폴리실리콘-15(디메치코디에틸벤잘말로네이트), 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드 및 그 염류, 티이에이-살리실레이트 및 아미노벤조산(파바)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 효소처리 영실 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001-30 중량%이며, 바람직하게는 0.5-20%이며, 보다 바람직하게는 1.0-10 중량%이다. 상기 효소처리 영실 추출물의 함량이 0.00001 중량% 미만이면 자외선 흡수 효과가 크게 감소되고, 30 중량%를 초과하는 경우에는 피부 자극을 초래할 수 있으며, 제형상의 문제점이 발생할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 실험 준비 및 방법
1-1. 영실 추출물 제조
영실은 충청남도 부여산으로 ㈜토종마을에서 구입하여 실험에 사용하였다. 영실 추출물은 추출방법을 각각 달리하여 3가지 종류의 추출물 즉, 영실 물 추출물, 영실 상온 주정 추출물, 및 영실 주정 후 물 추출물로 준비하여 실험을 진행하였다.
구체적으로, 영실 물 추출물은 영실과 물을 1:10의 중량비로 혼합한 다음, 85℃에서 3시간 동안 환류 추출함으로써 수득하였다. 영실 상온 주정 추출물은 영실과 주정(95% 에탄올)을 1:10의 중량비로 혼합한 후 진탕 항온수조(shaking water bath)에 담그고 25℃에서 15시간 동안 45 rpm의 속도로 흔들어주며 추출물을 수득하였다. 마지막으로 영실 주정 후 물 추출물은 상기 방법에 따라 영실 상온 주정 추출물을 얻은 후 주정을 모두 회수하고, 영실 잔여물 중량의 10배의 물을 첨가하여 85℃에서 3시간 동안 환류추출 함으로써 수득하였다. 이후 상기 각각의 추출물에 대하여 필터페이퍼(filter paper)를 이용한 여과, 농축, 및 동결건조 과정을 수행하였다.
1-2. β-glucosidase의 처리
영실 추출물에 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)를 처리하기 위하여, 상기 1-1의 방법으로 제조한 각각의 영실 추출물을 50% DMSO(dimethyl sulfoxide)에 100 ㎎/㎖의 농도로 용해시킨 후, 0.05 M sodium acetate buffer(pH 5.0)에 10 ㎎/㎖ 농도가 되도록 희석하였다. 이렇게 희석된 각 영실 추출물에 β-glucosidase를 10 unit/㎖로 처리하고, 37℃에서 24시간 동안 배양한 후 각 추출물을 실험에 사용하였다.
1-3. OVA로 면역한 마우스 비장세포의 배양
5주령된 암컷 BALB/c 마우스에 알레르기를 유발시키기 위하여, 10 ㎍의 오브알부민(ovalbumin; OVA)과 1 ㎎의 알럼(alum)을 30분간 섞어준 혼합액을 마우스 한 마리 당 100 ㎕씩 1주일 간격으로 2차례 복강투여 하였다(n=5). 면역 1주일 후 마우스를 경추탈골로 희생시키고 무균상태에서 비장을 적출한 후 1 ㎖의 기본배지 즉, 2-머캅토에탄올(2-mercaptoethanol)과 항생제가 첨가된 RPMI1640 배지가 담긴 작은 페트리디쉬에 옮겨 아이스 위에 보관하였다. 이후 상기 비장을 메쉬를 이용하여 단세포화 시키고 5 ㎖의 기본배지로 2회 세척한 후 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리 하였다. 상층액을 제거한 후 1 ㎖의 RBC(red blood cell) lysing buffer(SIGMA R7757)를 첨가하여 현탁하고 3분 동안 아이스 위에서 반응시킨 후 10 ㎖의 기본배지를 더 첨가하고 재현탁한 다음 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리를 2회 실시하였다.
한편, 96웰 플레이트에 항원인 OVA를 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고, 상기 실시예 1-1의 방법에 따라 제조한 3종류의 영실 추출물 각각을 100, 200, 또는 400 ㎍/㎖의 농도로 첨가하거나, 1-2의 방법에 따라 제조한 β-glucosidase가 처리된 3종류의 영실 추출물 각각을 10, 50, 200 ㎍/㎖의 농도로 첨가하였으며, 상기 방법으로 배양한 마우스의 비장세포를 5x106 cells/well로 처리하였다. 이후 37℃의 CO2 배양기에서 72시간 동안 배양한 후 세포 배양액을 회수하였다.
1-4. ELISA를 이용한 비장세포 배양액의 사이토카인 분석
상기 실시예 1-3의 방법에 따라 회수한 마우스 비장세포의 배양액으로부터 IL-4 사이토카인의 양을 측정하기 위해, IL-4 BD OptEIATM MOUSE ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) kit와 TGF-β kit(R&D Systems)를 이용하여 실험을 수행하였다.
구체적으로, 96웰 플레이트에 캡쳐 항체(capture antibody)를 첨가하고 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켜 플레이트를 항체로 코팅시키고, washing buffer(phosphate buffered saline with Tween20; PBST)로 세척한 후 assay diluent(10% FBS in PBS)를 각 웰에 넣고 상온에서 1시간 동안 반응시켜 블로킹(blocking) 과정을 수행하였다. 다음으로 표준용액(standard solution)과 상기 실시예 1-3의 방법을 통해 회수한 마우스 비장세포의 배양액을 100 ㎕씩 상기 각 웰에 분주한 후 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후 IL-4를 검출할 수 있는 IL-4 특이적 1차 항체와 스트렙타비딘-홀스래디쉬 퍼옥시다제(streptoavidin-HRP)가 접합된 2차 항체를 각 웰에 100 ㎕씩 분주한 후 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 이후 100 ㎕의 기질용액(0.01% TMB in phosphate-citrate buffer)을 첨가하고 상온에서 30분 동안 발색시킨 다음, 2 M의 H2SO4를 각 웰에 50 ㎕씩 넣어 발색반응을 중지시킨 후 450 nm에서 micro plate reader로 흡광도를 측정하였다.
실시예 2. Th1/Th2 사이토카인 균형조절 활성시험
β-glucosidase가 처리된 영실 추출물에 의한 Th2 면역반응의 억제 활성을 평가하기 위해, 상기 실시예 1-3 및 1-4의 방법에 따라 마우스 비장세포의 배양액으로부터 IL-4 사이토카인의 양을 측정하였다.
각 추출물의 IL-4 생성 억제활성을 비교한 결과, β-glucosidase를 처리하지 않은 영실 추출물의 경우 400 ㎍/㎖의 농도에서 물, 주정, 및 주정 후 물 추출물은 각각 26%, 14%, 및 65%의 IL-4 생성 억제활성을 나타내었다. 반면, β-glucosidase를 처리하여 제조한 영실 추출물의 경우 200 ㎍/㎖의 농도에서 물, 주정, 및 주정 후 물 추출물은 각각 89%, 92%, 및 90%의 IL-4 생성 억제활성을 나타내었다. 또한, 동일한 200 ㎍/㎖의 농도에서 β-glucosidase를 처리하지 않은 영실 추출물은 거의 IL-4 억제활성을 나타내지 않았다.
결론적으로, β-glucosidase의 처리를 통해 영실 추출물의 IL-4 억제활성이 약 10배 정도로 현저히 증진되는 것을 확인하였다.
실시예 3. In vivo 에서 효소처리 영실 추출물에 의한 항알레르기 효과 확인
상기 실시예 2의 결과를 바탕으로, in vivo 알레르기 유발 마우스 모델에서 효소처리 영실 추출물에 의한 항알레르기 활성을 평가하고자 하였다. 이를 위해, 6주령의 BALB/c 마우스에 10 ㎍의 오브알부민(OVA)과 1 ㎎의 알럼(alum)을 30분 동안 섞어준 다음, 마우스 마리당 100 ㎕씩 실험시작 7일 및 21일째에 1차 및 2차 면역을 실시하였다. 또한, 실험시작 14일부터 27까지 생리식염수에 상기 실시예 1-1에서 제조한 영실 물 추출물 및 실시예 1-2에서 제조한 β-glucosidase가 처리된 영실 추출물을 준비하여 마리당 200 ㎎/㎏을 14일 동안 매일 경구투여 하였으며, 실험 28일 차에 생쥐를 희생하여 혈액 및 비장세포를 채취하여 실험을 진행하였다.
상기 방법에 따라 영실 추출물 또는 효소처리 영실 추출물을 투여한 마우스로부터 채취한 혈액에서 IgE의 함량을 분석하기 위해, BD사의 mouse IgE ELISA kit를 이용해 총 IgE 양을 측정하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 영실추출물을 투여한 경우(영실)에도 양성대조군(Sham)에 비해 IgE의 함량이 다소 감소하였으나, β-glucosidase가 처리된 효소처리 영실 추출물(β-glucosidase 처리)을 투여한 경우에는 영실 추출물을 투여한 경우에 비교하여 IgE 함량이 통계적으로 유의하게 감소한 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해 β-glucosidase의 처리에 의해 영실 추출물의 IgE 생성 억제활성이 현저하게 증진되는 것을 알 수 있었다.
상기 진술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (8)

  1. 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)를 처리한 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 알레르기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 인터류킨-4(IL-4)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 면역글로불린 E(IgE) 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  7. 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)를 처리한 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 알레르기 질환 개선용 건강기능성 식품 조성물.
  8. 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)를 처리한 영실(Rosae multiflorae Fructus) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 알레르기 질환 개선용 화장료 조성물.
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KR1020160160179A KR101843573B1 (ko) 2015-12-09 2016-11-29 효소처리 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물

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KR102132267B1 (ko) * 2017-08-30 2020-07-10 한국식품연구원 찔레열매 추출물의 분획물을 유효성분으로 포함하는 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

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