KR101839347B1 - 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 생체 시료 내의 불순물 단백질을 제거하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 카본 비드(Carbon bead)를 이용하여 엑소좀(Exosome)을 포함하는 특정 시료로부터 매우 간단한 방법으로 빠른 시간 이내에 정제 대상인 엑소좀의 손실을 최소화하면서 불순물인 단백질은 최대한 제거할 수 있는 효율적인 방법, 및 이를 이용한 엑소좀 정제 디바이스 내지 키트에 관한 것이다.
본 발명은 세포 배양액은 물론, 혈액, 소변, 침 등 다양한 생체 시료 중에 존재하는 불순물 단백질을 간단한 과정과 재료로 짧은 시간에 제거할 수 있는바, 엑소좀의 순도를 높이기 위한 각종 시료의 전처리 과정에 매우 요긴하게 사용될 수 있다.

Description

카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법{METHOD FOR REMOVING IMPURITY PROTEINS IN EXOSOME-INCLUDED SAMPLES USING CARBON BEADS}
본 발명은 생체 시료 내의 불순물 단백질을 제거하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 카본 비드(Carbon bead)를 이용하여 엑소좀(Exosome)을 포함하는 특정 시료로부터 매우 간단한 방법으로 빠른 시간 이내에 정제 대상인 엑소좀의 손실을 최소화하면서 불순물인 단백질은 최대한 제거할 수 있는 효율적인 방법, 및 이를 이용한 엑소좀 정제 디바이스 내지 키트에 관한 것이다.
본 발명은 세포 배양액은 물론, 혈액, 소변, 침 등 다양한 생체 시료 중에 존재하는 불순물 단백질을 간단한 과정과 재료로 짧은 시간에 제거할 수 있는바, 엑소좀의 순도를 높이기 위한 각종 시료의 전처리 과정에 매우 요긴하게 사용될 수 있다.
일반적으로, 세포로부터 핵산 등의 물질을 분리하거나 세포가 배출한 엑소좀을 분리하거나 혈액 내지 소변 등의 임상 시료로부터 엑소좀을 분리하는 경우, 여전히 높은 농도의 단백질들이 존재하고 있으므로, 분리된 엑소좀 또는 핵산 등을 다른 목적으로 활용하기 위해서는 이러한 불순물 단백질들을 최대한 제거할 필요가 있다.
특히, 엑소좀(Exosome)은 다양한 세포에서 분비되어 혈액, 소변, 침 등과 같은 체액에서 발견되는 약 30~100 nm의 크기의 작은 세포막성 소포체로서, 특정 조직을 표적할 수 있고 세포막을 투과할 뿐만 아니라 소포체 내에 다양한 생물학적 정보들을 담고 있어 다양한 의학적, 약리학적 활용성을 지니는바, 이를 고순도로 정제하는 기술은 매우 중요하다고 할 수 있다.
그러나, 임상 시료 중의 불순물 단백질을 제거하는 종래의 방법들은 상당히 번거로운 절차를 포함하고 있고 불순물 단백질을 제거하는데 장시간이 소요되며 효율성이 떨어지는 문제가 있다. 예를 들어 세포 배양액으로부터 엑소좀을 분리하는 상용화된 시약을 사용하여도 여기에는 배양액으로부터 유래하는 단백질들이 여전히 많이 남아 있어, 질병의 진단이나 치료용 재료로 사용하기에 적합한 고순도의 엑소좀을 수득할 수 없게 된다.
한편, 불순물 단백질 제거 과정에서는 정제 대상인 엑소좀 역시 함께 제거될 가능성이 있다. 따라서 엑소좀의 손실은 최소화하면서 불순물 단백질만을 최대한으로 제거해 내는 점 또한 해결해야 할 중요한 이슈가 된다.
카본 비드(Carbon bead)는 소수성 성질이 높기 때문에 일반적인 정제 공정에서 단백질을 다른 물질로부터 분리하여 단백질을 정제할 때 사용될 수 있다.
따라서, 이를 역으로 이용하면 카본 비드를 통해 임상 시료 중에 불순물로 존재하는 단백질을 제거할 수 있어 정제 대상인 엑소좀의 순도를 높일 수 있을 것이며, 이때 카본 비드에 결합된 단백질은 비드의 특성상 원심분리 등의 방법으로, 자성 결합 카본 비드의 경우에는 자기력을 통해 쉽게 분리·제거가 가능할 것이다.
이에, 카본 비드를 특정 임상 시료, 즉 엑소좀을 포함하는 시료의 정제에 접목한 것으로서, 간단한 방법으로 신속하게 시료 중의 불순물 단백질을 최대한 제거할 수 있고, 또한 이러한 제거 과정 중 정제 대상인 엑소좀의 손실을 최소화할 수 있는 새로운 방법에 대한 개발이 요구되고 있다.
한국공개특허 제1992-0006367호
본 발명은 상기와 같은 종래의 요구를 충족시키기 위한 것으로, 카본 비드를 엑소좀이 포함된 시료로부터 불순물 단백질을 효율적으로 제거하기 위한 결합 도구로 사용하는 용도, 이에 최적화된 특정의 공정 조건, 및 이를 활용한 엑소좀 분리/정제 디바이스 내지 키트를 제공함을 기술적 과제로 한다.
상기한 기술적 과제를 달성하고자, 본 발명은 (a) 엑소좀(Exosome)을 포함하는 임상 시료를 준비하는 단계; (b) 엑소좀 포함 임상 시료에 카본 비드(Carbon bead)를 첨가 및 반응시켜, 카본 비드와 단백질을 결합시키는 단계; (c) 카본 비드와 단백질의 결합물을 분리 및 제거하여, 엑소좀을 정제하는 단계;를 포함하는, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
또한, 상기 엑소좀 포함 임상 시료는 세포 배양액, 혈액, 소변 또는 침인 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
아울러, 상기 카본 비드는 카본체인 수가 C4 내지 C30(대표적으로, C18, C8, C30)에 이르는 것이고, 상기 카본 비드는 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.01~1.0 g의 농도(0.01~1.0 g/mL)로 첨가되며, 상기 (b) 단계에서의 결합 반응은 10분~60분 동안 수행하는 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
구체적으로, 상기 카본 비드는 카본체인 수가 C18, C8 및 C30에 이르는 C18 비드, C8 비드 및 C30 비드로서, 상기 C18 비드, C8 비드 및 C30 비드는 각각 옥타데실기, 옥틸기 및 멜리실기로 말단이 캡핑된 고상 추출용 실리카 비드이고, 상기 카본 비드는 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.06~0.3 g의 농도(0.06~0.3 g/mL)로 첨가되며, 상기 (b) 단계에서의 결합 반응은 10분~60분 동안 수행하는 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
더욱 구체적으로, 상기 카본 비드는 C18 비드이고, 상기 카본 비드는 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.06~0.3 g의 농도(0.06~0.3 g/mL)로 첨가되며, 상기 (b) 단계에서의 결합 반응은 10분 동안 수행하는 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
또한, 상기 (c)에서의 카본 비드와 단백질의 결합물 분리는 원심분리법을 통해 수행되는 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
아울러, 상기 카본 비드는 탄소가 코팅된 마그네틱 비드(Magnetic bead)이고, 상기 (c)에서의 카본 비드와 단백질의 결합물 분리는 자력분리법을 통해 수행되는 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
더불어, 불순물 단백질의 제거율은 최소 30% 이상, 정제 대상인 엑소좀의 손실율은 25% 이하인 것인, 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 다른 측면으로, 상기와 같은 방법을 이용한, 엑소좀 정제 디바이스 및 엑소좀 정제 키트를 제공한다.
본 발명은 엑소좀을 포함하는 다양한 임상 시료 내의 불순물 단백질을 매우 간단한 방법과 재료로 신속하게 제거할 수 있다.
또한, 카본 비드에 결합된 불순물 단백질을 원심분리법, 자력분리법 등으로 쉽게 분리해 낼 수 있는 편리함이 있다.
아울러, 정제 대상인 엑소좀의 손실을 최소화하면서 불순물인 단백질을 최대한 제거해 낼 수 있는 장점이 있다.
이로 인해, 본 발명은 세포 배양액은 물론, 혈액, 소변, 침 등 진단에 필요한 다양한 임상 시료 중에 존재하는 불순물 단백질을 제거하여 순도 높은 엑소좀(또는 핵산, 임의의 세포, 순환 종양 세포(Circulating tumor cell) 등)을 얻을 수 있는바, 각종 바이오 관련 시료의 전처리(단백질 제거) 과정에 매우 요긴하게 활용될 수 있다.
나아가, 본 발명은 이미 상용화되어 있는 엑소좀 분리 키트 등에 직접 접목이 가능하며, 순도 높은 엑소좀 추출 제품의 개발에도 기여할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법과 관련된 공정을 개략적으로 보여주는 모식도이다.
도 2는 본 발명의 카본 비드를 이용한 불순물 단백질 제거 방법을 BSA(Bovine serum albumin)에 적용한 경우, 단백질 제거 정도를 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 카본 비드를 이용한 불순물 단백질 제거 방법을 인간 세포 파쇄 후 나온 단백질들(Cell lysate)에 적용한 경우, 단백질 제거 정도를 보여주는 그래프이다.
도 4 및 도 6은 본 발명의 카본 비드를 이용한 불순물 단백질 제거 방법을 세포 배양액으로부터 분리한 엑소좀 시료에 적용한 경우, 단백질 제거 정도를 보여주는 그래프이다.
도 5 및 도 7은 본 발명의 카본 비드를 이용한 불순물 단백질 제거 방법을 세포 배양액으로부터 분리한 엑소좀 시료에 적용한 경우, 엑소좀 손실 정도를 보여주는 그래프이다.
본 발명의 카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법은,
(a) 엑소좀(Exosome)을 포함하는 임상 시료를 준비하는 단계;
(b) 엑소좀 포함 임상 시료에 카본 비드(Carbon bead)를 첨가 및 반응시켜, 카본 비드와 단백질을 결합시키는 단계;
(c) 카본 비드와 단백질의 결합물을 분리 및 제거하여, 엑소좀을 정제하는 단계;를 포함하는 것이다(도 1 참조).
즉, 본 발명은 카본 비드를 특정 시료(엑소좀을 포함하는 임상 시료) 내의 불순물 단백질을 제거하기 위한 특정 용도로 사용한 것으로서, 제거 대상이 단백질, 정제 대상이 엑소좀인 것이며, 이러한 엑소좀의 손실은 최소화하면서 불순물 단백질의 제거 효율은 극대화되도록 하는 최적의 공정 조건들(카본 비드의 종류 및 사용량, 반응시간, 반응방식 등)을 함께 수립한 것이다.
상기 (a) 단계는 처리 대상으로서 엑소좀(Exosome)을 포함하는 임상 시료를 준비하는 단계이다.
상기 엑소좀 포함 임상 시료는 엑소좀과 단백질이 공존하는 임의의 생체 시료로서 그 종류가 특별히 한정되는 것은 아니며, 예를 들어 인간과 같은 포유동물에서 유래한 세포 배양액(구체적으로는, 세포 배양액으로부터 분리한 엑소좀 시료), 혈액, 소변 또는 침일 수 있다.
상기 (b) 단계는 (a) 단계에서 준비된 엑소좀 포함 임상 시료에 카본 비드(Carbon bead)를 소정량 첨가하여 시료 중의 단백질과 상호 결합되도록 하는 단계이다.
상기 카본 비드로는 본 발명에 따라 불순물 단백질과 결합할 수 있는 다양한 종류의 카본 비드가 사용될 수 있다.
예를 들어, 카본체인 수가 C4 내지 C30인 것, 예컨대 C18 비드, C8 비드 또는 C30 비드를 사용할 수 있으며, 이때 C18 비드, C8 비드 및 C30 비드는 각각 옥타데실기, 옥틸기 및 멜리실기로 말단이 캡핑된 고상 추출용 실리카 비드, 구체적으로 C18 endcapped octadecyl SPE일 수 있다(하기 그림 1 참조). 또한 상기 카본 비드로서 탄소가 코팅된 마그네틱 비드(또는 자성 비드; Magnetic bead)를 사용할 수도 있다.
[그림 1] 본 발명에서 사용되는 카본 비드의 구조(예시)
Figure 112016109385355-pat00001
또한, 본 발명에서는 카본 비드의 농도(사용량)과 반응시간 등 공정변수를 조절하여, 불순물 단백질은 제거하면서 엑소좀의 손실은 최소화할 수 있다.
상기 카본 비드의 사용량은 구체적인 시료의 종류 내지 예상되는 불순물 단백질의 양에 따라 적절히 조절될 수 있다. 예를 들어 상기 카본 비드는 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.01~1.0 g의 농도(0.01~1.0 g/mL)로 첨가될 수 있다.
일 구체예로, 상기 카본 비드는 높은 단백질 제거율과 낮은 엑소좀 손실율을 동시에 구현하는 측면에서, 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.06~0.3 g의 농도(0.06~0.3 g/mL)로 첨가하여 사용할 수 있다. 카본 비드의 농도는 임상 시료 중 단백질 불순불의 양에 따라 달리 사용할 수 있다.
본 단계에서, 카본 비드와 단백질의 결합 반응을 진행하는 시간은 불순물 단백질의 농도에 따라 달라질 수 있지만, 약 10분~60분의 짧은 시간 이내에 쉽게 단백질을 제거할 수 있음을 확인하였다. 또한 이러한 반응시간의 범위에서 불순물 단백질은 효율적으로 제거하되, 정제 대상인 엑소좀의 손실은 최소화할 수 있음을 확인하였다. 이는 사용하는 카본 비드의 농도를 달리하여 조절할 수 있다.
상기 (c) 단계는 (b) 단계를 통해 생성된 카본 비드와 단백질의 결합물을 소정의 방법으로 분리 및 제거하여, 정제 대상인 엑소좀을 고순도로 수득하는 단계이다.
본 단계에서, 카본 비드와 단백질의 결합물 분리는 원심분리법을 통해 수행될 수 있다. 구체적으로 카본 비드에 결합된 불순물 단백질은 비드의 특성상 원심분리를 통해 쉽게 분리·제거할 수 있으며, 단백질이 대부분 제거된 엑소좀 포함 시료는 상층액에 남게 된다.
또한, 카본 비드로서 탄소가 코팅된 마그네틱 비드를 사용한 경우라면, 결합 반응 이후 자석을 이용한 자력분리법을 수행하여 매우 간단하게 카본 비드와 단백질의 결합물을 분리·제거할 수 있다.
본 발명은 정제 대상인 엑소좀의 손실은 최소화하면서 불순물인 단백질은 최대한 제거할 수 있는 효율적인 방법인바, 예를 들어 본 발명에 따를 경우 불순물 단백질의 제거율은 최소 30% 이상, 정제 대상인 엑소좀의 손실율은 최대 25% 이하 수준으로 엑소좀을 정제해 낼 수 있다. 즉 정제 과정에서 엑소좀의 손실도 일부 발생하기는 하지만, 단백질 제거량에 비하면 그 정도는 매우 경미한 수준이다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 전술한 바와 같은 카본 비드를 이용한 불순물 단백질 제거 방법을 활용한, 엑소좀 정제용 디바이스 내지 키트가 제공된다.
즉, 본 발명의 불순물 단백질 제거 방법은 엑소좀 포함 시료 중 불순물 제거를 위한 기존의 상용화된 키트나 디바이스에도 직접 적용이 가능한 장점이 있다.
상기 엑소좀 정제용 디바이스 내지 키트를 제작하는 방법은 특별히 제한되지 않으며, 카본 비드, 원심분리장치, 자력분리장치 등을 유닛으로 포함하여 당분야의 통상적인 방법에 따라 제작할 수 있다.
이하, 실시예 및 실험예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐 어떠한 의미로든 본 발명의 범위가 이들 예로 한정되는 것은 아니다.
실시예 및 실험예
1. BSA 및 Cell lysate의 단백질 제거
본 발명의 효과를 실험적으로 검증하기 위해, 우선 BSA(Bovine serum albumin) 및 세포 파쇄 후 나온 단백질들(Cell lysate)에 카본 비드를 첨가하여 단백질의 제거 정도를 측정하였다.
C18 비드(C18 endcapped octadecyl SPE)(0.06, 0.30 g/mL 사용)를 이용하여 BSA(100 μg/mL)와 60분간 반응시킨 후, 원심분리를 하여 상층액에 남아 있는 BSA의 양을 측정하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 보듯이, C18 비드의 양이 증가할수록 BSA의 제거량이 증가하였으며, 0.30 g/mL의 C18 비드를 사용한 경우 단백질이 대부분 제거됨을 확인할 수 있었다.
또한, C18 비드(C18 endcapped octadecyl SPE)(0.06, 0.30 g/mL 사용)를 이용하여 인간 세포를 파쇄하여 나온 단백질 집단(혼합 단백질)과 60분간 반응시킨 후, 원심분리를 하여 상층액에 남아 있는 단백질의 양을 측정하고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 보듯이, C18 비드의 양이 증가할수록 세포 단백질들의 제거량이 증가하였으며, 0.30 g/mL의 C18 비드를 사용한 경우 단백질이 대부분 제거됨을 확인할 수 있었다.
2. 세포 배양액으로부터 엑소좀을 분리한 시료의 단백질 제거
앞서 실험한 결과를 바탕으로, 세포 배양액으로부터 엑소좀을 분리한 시료(엑소좀과 단백질이 공존하는 세포 배양액 시료) 중의 단백질을 제거하는 실험을 진행하였다.
배양액으로부터 엑소좀을 분리하는 상용화된 시약을 사용하여도, 여기에는 배양액으로부터 유래하는 단백질들이 여전히 많이 남아 있다. 따라서 분리된 엑소좀 등을 질병의 진단이나 치료용 재료로 사용하기 위해서는 이들 불순물들을 제거할 필요가 있기 때문이다.
C18 비드(C18 endcapped octadecyl SPE)(0.06, 0.30 g/mL 사용)를 이용하여 세포 배양액으로부터 분리한 엑소좀 시료(엑소좀 + 불순물 단백질(혼합 단백질))와 60분간 반응시킨 후, 원심분리를 하여 상층액에 남아 있는 단백질의 양을 측정하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에서 보듯이, C18 비드의 양이 증가할수록 세포 단백질들의 제거량이 증가하였으며, 0.30 g/mL의 C18 비드를 사용한 경우 단백질이 대부분 제거됨을 확인할 수 있었다.
한편, 이러한 과정에서 엑소좀 역시 C18 비드에 의해 제거될 수 있기 때문에, 비드를 넣기 전과 후(0.06 g/mL) 상층액에 남아 있는 엑소좀의 양을 Nanosight로 정량하고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 보듯이, 비드와의 반응 후 77.7%의 엑소좀이 남아 있는 것을 확인할 수 있었다. 반면 상기 도 4에서와 같이 동일한 조건에서 불순물 단백질은 53%가 남아 있었다.
엑소좀 역시 표면과 내부에 단백질 등을 지니고 있으며, 이러한 엑소좀 유래의 단백질도 단백질 농도 측정시 함께 포함되어 결과로 산출된다. 따라서 상기 단백질 잔존율 53% 안에는 엑소좀에 해당되는 것들도 포함되어 있음을 고려하면, i) 실제 불순물 단백질의 제거율은 측정치보다 더욱 높고, ii) 불순물 단백질의 제거량에 비해 엑소좀이 제거되는 양은 상대적으로 극히 적은 것임을 알 수 있다.
또한, C18 비드(C18 endcapped octadecyl SPE))(0.06, 0.30 g/mL 사용)를 이용하여 세포 배양액으로부터 분리한 엑소좀 시료(엑소좀 + 불순물 단백질(혼합 단백질))와 10분간 반응시킨 후, 원심분리를 하여 상층액에 남아 있는 단백질의 양을 측정하고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에서 보듯이, C18 비드의 양이 증가할수록 세포 단백질들의 제거량이 증가하였으며, 0.30 g/mL의 C18 비드를 사용한 경우 단백질이 대부분 제거됨을 확인할 수 있었다.
한편, 이러한 과정에서 엑소좀 역시 C18 비드에 의해 제거될 수 있기 때문에, 비드를 넣기 전과 후(0.06 g/mL) 상층액에 남아 있는 엑소좀의 양을 Nanosight로 정량하고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에서 보듯이, 비드와의 반응 후 81.3%의 엑소좀이 남아 있는 것을 확인할 수 있었는바, 불순물 단백질의 제거량 대비 엑소좀의 손실량은 상대적으로 극히 적은 것임을 알 수 있다.
3. 결과 검토
본 발명은 카본 비드를 이용하여 엑소좀 등이 포함된 시료로부터 불순물 단백질을 10분~60분 이내에 간단한 조작으로 제거할 수 있었다.
카본 비드의 농도, 종류, 반응시간, 반응방식 등을 조절하면 엑소좀의 손실은 최소화하면서 불순물 단백질 제거 효율은 최대화할 수 있음을 고려할 때, 본 발명은 향후 질병의 진단, 치료와 엑소좀 관련 분석 등의 기술 분야에서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
구체적으로, 혈액, 소변, 침 등의 임상 시료로부터 엑소좀을 분리하여 진단 등의 목적으로 활용할 경우, 불순물 단백질의 간단한 제거 방법이 필요한데(시료 전처리), 이에 대한 본 발명의 활용성이 매우 클 것으로 예상된다.
본 발명은 이미 상용화되어 나온 엑소좀 분리 키트에 접목이 가능하고, 세포 배양액으로부터 고순도 엑소좀을 추출하는 제품 내지 임상 시료 전처리 제품의 생산에 효율적으로 적용될 수 있다.
그 결과, 임상 시료 전처리 등 관련 시장에 대한 새로운 수요를 창출하고 응용도를 증가시켜 시장의 확대에 기여할 수 있을 것으로 기대된다.

Claims (10)

  1. (a) 엑소좀(Exosome)을 포함하는 임상 시료를 준비하는 단계;
    (b) 엑소좀 포함 임상 시료에 카본 비드(Carbon bead)를 첨가 및 반응시켜, 10분~20분 동안 카본 비드와 단백질을 결합시키는 단계;
    (c) 카본 비드와 단백질의 결합물을 분리 및 제거하여, 엑소좀을 정제하는 단계;를 포함하며,
    상기 카본체인 수가 C8, C18 및 C30에 이르는 C8 비드, C18 비드 및 C30 비드로서, 상기 C8 비드, C18 비드 및 C30 비드는 각각 옥틸기, 옥타데실기 및 멜리실기로 말단이 캡핑된 고상 추출용 실리카 비드이고,
    카본 비드는 엑소좀 포함 임상 시료 1 mL 당 0.06~0.3 g의 농도(0.06~0.3 g/mL)로 첨가되는 것을 특징으로 하는,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 엑소좀 포함 임상 시료는 세포 배양액, 혈액, 소변 또는 침인 것인,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 카본 비드는 C18 비드이고,
    상기 (b) 단계에서의 결합 반응은 10분 동안 수행하는 것인,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 (c)에서의 카본 비드와 단백질의 결합물 분리는 원심분리법을 통해 수행되는 것인,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 카본 비드는 탄소가 코팅된 마그네틱 비드(Magnetic bead)이고,
    상기 (c)에서의 카본 비드와 단백질의 결합물 분리는 자력분리법을 통해 수행되는 것인,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    불순물 단백질의 제거율은 최소 30% 이상, 정제 대상인 엑소좀의 손실율은 25% 이하인 것인,
    카본 비드를 이용한 엑소좀이 포함된 시료의 불순물 단백질 제거 방법.
  9. 제1항, 제2항 또는 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 방법을 이용한 엑소좀 정제 디바이스.
  10. 제1항, 제2항 또는 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 방법을 이용한 엑소좀 정제 키트.

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2022092352A1 (ko) * 2020-10-29 2022-05-05 연세대학교 산학협력단 질병 특이적 엑소좀의 분리 방법
EP3867638A4 (en) * 2018-10-17 2022-07-27 Immutrix Therapeutics, Inc. ADSORPTION AND BINDING OF PLASMA MOLECULES AND PARTICLES TO CARBON

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