RU2309754C2 - Способ получения мембран эритроцитов - Google Patents
Способ получения мембран эритроцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2309754C2 RU2309754C2 RU2005114306/15A RU2005114306A RU2309754C2 RU 2309754 C2 RU2309754 C2 RU 2309754C2 RU 2005114306/15 A RU2005114306/15 A RU 2005114306/15A RU 2005114306 A RU2005114306 A RU 2005114306A RU 2309754 C2 RU2309754 C2 RU 2309754C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- membranes
- lanthanum
- added
- supernatant
- erythrocyte
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Способ включает выделение эритроцитов из крови и их гемолиз, при этом к гемолизату для осаждения мембран добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, проводят центрифугирование при 1000g в течение 5 мин, затем супернатант удаляют, а осадок промывают буферным раствором в присутствии лантана, после удаления супернатанта, добавляют 1 мМ ЭДТА. Изобретение обеспечивает создание быстрого, не требующего ультрацентрифугирования способа получения мембран эритроцитов, позволяющего сократить время получения мембран эритроцитов в 10 раз. 1 ил.
Description
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования.
Известно, что для электрофоретического разделения мембранных белков эритроцитов в системе додецилсульфат натрия - полиакриламидный гель необходимо получить мембраны, свободные от гемоглобина (Dodge J.T. et al., Arch. Biochem. Biophys. - 1963. - Vol.100. - P.118-130; Fairbanks et al., Biochemistry. - 1971. - Vol.10. - P.2606-2617).
Известен метод получения мембран эритроцитов, свободных от гемоглобина (Dodge J.T et al., Arch. Biochem. Biophys. - 1963. - Vol.100. - P.118-130), включающий выделение эритроцитов из крови и их гемолиз в буферной системе с низкой ионной силой, с последующим ультрацентрифугированием при 30000g. После ультрацентрифугирования супернатант удаляется. В результате получаются чистые мембраны, свободные от гемоглобина. Однако этот способ требует ультрацентрифугирование и длительного времени (ультрацентрифугирование 3 раза по 30 минут).
Поэтому создание быстрого, не требующего ультрацентрифугирования способа получения мембран эритроцитов является актуальной задачей.
Решение поставленной задачи достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, гемолизируют в растворе с низкой ионной силой, добавляют к гемолизату хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, после агрегации мембраны центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. После этого супернатант убирают, еще раз добавляют хлористый лантан и центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. По окончании центрифугирования супернатант убирают, а к мембранам эритроцитов для нейтрализации лантана добавляют 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты). Далее мембраны эритроцитов используют для электрофоретического разделения белков.
Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток крови центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Эритроциты гемолизируют в 20 мМ трис-HCl буфере (рН 8.5; 0-2°С). После гемолиза эритроцитов добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ. В этом диапазоне концентраций лантана происходит наиболее полное осаждение мембран. После агрегации мембран эритроцитов их центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. Супернатант удаляют, а к мембранам еще раз добавляют буферный раствор с лантаном. Центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. Супернатант убирают, а к мембранам для нейтрализации лантана добавляют 1 мМ ЭДТА. Полученные мембраны используют для электрофоретического разделения белков эритроцитов в системе додецилсульфат натрия - полиакриламидный гель (Steck T.L. J. Mol. Biol. - 1972. - Vol.66 - P.295-305).
Пример. На чертеже представлена электрофореграмма мембранных белков эритроцитов, полученных методом Dodge et al. 1963 (а) и лнтановым способом (б). Из чертежа видно, что электрофоретическое разделение мембран эритроцитов, полученных с использованием лантана, не отличается от классического метода.
Таким образом, способ не требует ультрацентрифугирования и сокращает время получения мембран эритроцитов в 10 раз.
Claims (1)
- Способ получения мембран эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и их гемолиз, отличающийся тем, что к гемолизату для осаждения мембран добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, проводят центрифугирование при 1000 g в течение 5 мин, затем супернатант удаляют, а осадок еще раз промывают буферным раствором в присутствии лантана, после удаления супернатанта добавляют 1 мМ ЭДТА.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005114306/15A RU2309754C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ получения мембран эритроцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005114306/15A RU2309754C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ получения мембран эритроцитов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005114306A RU2005114306A (ru) | 2006-11-20 |
| RU2309754C2 true RU2309754C2 (ru) | 2007-11-10 |
Family
ID=37501752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005114306/15A RU2309754C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ получения мембран эритроцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2309754C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2547573C2 (ru) * | 2013-04-15 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов |
| RU2558776C2 (ru) * | 2013-04-16 | 2015-08-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ выделения микровезикул эритроцитов |
-
2005
- 2005-05-11 RU RU2005114306/15A patent/RU2309754C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Dodge J.T. et al. Arch. Biochem. Biophys. 1963. Vol.100, p.118-130. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2547573C2 (ru) * | 2013-04-15 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов |
| RU2558776C2 (ru) * | 2013-04-16 | 2015-08-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ выделения микровезикул эритроцитов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005114306A (ru) | 2006-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cohn | The properties and functions of the plasma proteins, with a consideration of the methods for their separation and purification. | |
| Bastos-Amador et al. | Proteomic analysis of microvesicles from plasma of healthy donors reveals high individual variability | |
| Urbani et al. | Proteomic investigations on the effect of different membrane materials on blood protein adsorption during haemodialysis | |
| US7481941B2 (en) | Method for separating components from blood plasma | |
| Urbani et al. | Proteomic analysis of protein adsorption capacity of different haemodialysis membranes | |
| CN105153297B (zh) | 一种从Cohn组分Ⅳ沉淀中分离纯化α2-巨球蛋白的方法 | |
| Pieroni et al. | Biocompatibility assessment of haemodialysis membrane materials by proteomic investigations | |
| D'Alessandro et al. | Supernatant protein biomarkers of red blood cell storage hemolysis as determined through an absolute quantification proteomics technology | |
| RU2309754C2 (ru) | Способ получения мембран эритроцитов | |
| US20110177601A1 (en) | Method for concentration of low-molecular-weight proteins and peptides in body fluid sample | |
| D’Alessandro et al. | Proteomics for quality-control processes in transfusion medicine | |
| Jernej et al. | A simple and reliable method for monitoring platelet serotonin levels in rats | |
| RU2651521C1 (ru) | Способ изоляции микровезикул из крови | |
| CN102336828A (zh) | 一种多发性骨髓瘤特异性蛋白及其专用检测试剂盒 | |
| JP4847668B2 (ja) | 糖化アルブミンの検出方法 | |
| CA2883260A1 (en) | Composition for use as an abnormal coagulation control plasma in in vitro assays | |
| US2922745A (en) | Purification of profibrinolysin | |
| Greenblatt et al. | Identity of trypanosome growth factors in serum II. Active globulin components | |
| CN103145800A (zh) | 蜈蚣酶解物抗血栓性多肽 | |
| EP3838911A1 (en) | Method for extraction and purification of hirudin mutant and use thereof | |
| Jain | Presence of phosphatidylserine in the outer membrane bilayer of newborn human erythrocytes | |
| Sear et al. | Antiheparin activity of human serum and platelet factor 4 | |
| Pieniążek et al. | Carbamylation of proteins leadsto alterations in the membrane structure of erythrocytes | |
| CN1318035C (zh) | 一种人血小板代用品及其制备方法 | |
| Verano-Braga | Mass Spectrometry-Based Approaches for Treating Human Diseases and Diagnostics |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080512 |