KR101794973B1 - 댕댕이나무의 식물체 배양 방법 - Google Patents

댕댕이나무의 식물체 배양 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 댕댕이나무의 식물체 배양 방법에 관한 것으로, 생장점 또는 액아가 존재하는 댕댕이나무의 줄기 부위를 생장 조절제로서 제아틴 또는 BAP가 포함된 WPM 배지에서 치상하여 신초 형성을 유도하고, 상기 형성된 신초를 성장 유도제로서 제아틴 또는 TDZ가 포함된 혼합 배지에서 치상하여 다경 및 발근을 유도하였다. 또한, 상기 방법에 따라 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하고 순화시킴으로써 생존율 및 성장이 우수한 댕댕이나무를 대량으로 증식시켰다. 따라서, 본 발명에 따른 방법은 댕댕이나무를 대량생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.

Description

댕댕이나무의 식물체 배양 방법{Plant tissue culture method of Lonicera caerulea var. edulis Turcz. ex Herder}
본 발명은 댕댕이나무의 식물체 배양 방법에 관한 것이다.
댕댕이나무( Lonicera caerulea var. edulis Turcz. ex Herder)는 인동과의 낙엽관목으로 만주, 일본, 동부 시베리아, 사할린 및 한국의 한라산과 강원도 이북의 해발 700 내지 2,000 m의 고산에 자생하는 한대성 식물이다. 한라산에서, 댕댕이나무는 정상 부근의 암석지 등에서 드물게 자라며, 잎의 생장은 4월 초순부터 8월 초순까지 이루어지나, 6월 초순부터 45일 동안에 주로 생장한다. 성숙한 잎의 길이는 평균 27.5 ㎜이고, 잎의 넓이는 평균 15.5 ㎜, 잎의 두께는 잎의 생장 단계에 관계없이 0.2 내지 0.3 ㎜이다. 꽃은 5 내지 6월에 피고, 액생하며 열매의 결실에는 6월 상순부터 9월 중순까지 110일 정도의 시간이 소요된다. 열매는 타원형 또는 거의 원형으로서, 7 내지 8월에 자흑색으로 익고 흰 가루로 덮이며, 그 맛은 달고 시며 약간 쓰다.
이러한 댕댕이나무의 열매 추출물은 간기능 활성화 및 세포 재생에 유의적인 효과가 있어 관련 질환에 대해 보조 치료제로 사용되고 있다. 그러나, 댕댕이나무는 자생지가 극히 한정적이고, 자생지의 자연환경 특성인 강한 바람, 건조한 토양조건 및 고온 등이 스트레스 요인으로 작용하여 식물의 생육이 저해되거나, 생태계의 변화에 따른 개체수의 감소가 우려되는 대표적인 고산식물이다.
한편, 식물의 종자를 이용한 실생번식은 유전적 다양성을 보존하면서 식물을 증식시킬 수 있는 장점이 있다. 그러나, 이는 발아율이 낮은 종자를 대량 번식시키는데는 적용하기 어렵고, 멸종위기종, 희귀종 등과 같이 개체수가 적은 식물을 증식시키기에는 한계가 있다.
식물의 세포, 조직 또는 기관으로부터 캘러스나 체세포배 등을 유도한 뒤, 이를 완전한 식물체로 재분화시킴으로써, 식물을 대량 증식시킬 수 있는 식물체 배양 방법은 유전적 형질이 동일한 식물을 동시에 대량으로 생산할 수 있다는 점에서 각광받고 있다. 그러나, 식물의 품종에 따라 배양 배지의 조건 또는 배양 방법 등이 상이하다는 점에서, 대량 생산하고자 하는 식물에 적합한 배양 방법을 확립할 필요성이 있다.
이와 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-1204896호는 약품, 건강식품 및 기능성 화장품 등의 원료로서 사용되는 청미래 덩굴을 짧은 시간에 대량으로 생산할 수 있는 청미래 덩굴의 조직배양 방법을 개시하고 있다.
이에, 본 발명자들은 생장점 또는 액아가 존재하는 댕댕이나무의 줄기 부위가 성장 조절제로서 제아틴 또는 BAP를 포함하는 WPM 배지에서 우수한 신초 생성능을 나타내고, 상기 신초가 성장 유도제로서 제아틴 또는 TDZ가 포함되고, WPM 배지 및 MS 배지가 혼합된 혼합 배지에서 유의적으로 다경 및 발근이 유도되었으며, 상기 다경 및 발근이 유도된 식물체를 토양에 식재하여 순화되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-1204896호
본 발명의 목적은 댕댕이나무의 식물체 배양 방법 및 상기 방법으로 배양된 댕댕이나무의 식물체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 식물체를 이용하여 댕댕이나무를 증식하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 댕댕이나무의 줄기 부위를 배양 배지에 치상하여 신초를 유도하는 단계; 및 상기 유도된 신초로부터 혼합 배지를 이용하여 다경 및 발근을 유도하는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 식물체 배양 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 배양된 댕댕이나무의 식물체를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 댕댕이나무의 식물체를 순화시키는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 증식 방법을 제공한다.
본 발명은 생장점 또는 액아가 존재하는 댕댕이나무의 줄기 부위를 생장 조절제로서 제아틴 또는 BAP가 포함된 WPM 배지에서 치상하여 신초 형성을 유도하고, 상기 형성된 신초를 성장 유도제로서 제아틴 또는 TDZ가 포함된 혼합 배지에 치상하여 다경 및 발근을 유도하였다. 또한, 상기 방법에 따라 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하고 순화시킴으로써 생존율 및 성장이 우수한 댕댕이나무를 증식시켰다. 따라서, 본 발명에 따른 방법은 댕댕이나무를 대량생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 MS 배지 또는 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 신초 발생율을 확인한 그래프이다.
도 2는 MS 배지 또는 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 생성된 신초의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 3은 MS 배지(A) 또는 WPM 배지(B)에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 신초가 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 4는 MS 배지 또는 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터의 신초 발생율을 확인한 그래프이다.
도 5는 MS 배지 또는 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 생성된 신초의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 6은 MS 배지(A) 또는 WPM 배지(B)에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 신초가 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 7은 성장 조절제로서 제아틴, BAP 또는 2,4-D가 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 첨가된 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터의 신초 발생율을 확인한 그래프이다.
도 8은 성장 조절제로서 제아틴, BAP 또는 2,4-D가 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 첨가된 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 생성된 신초의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 9는 WPM 배지(control), 0.1 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(A), 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(B), 1.0 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(C), 0.1 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(D), 0.5 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(E), 1.0 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(F), 0.1 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(G), 0.5 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(H) 또는 1.0 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(I)에 치상된 댕댕이나무의 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 신초가 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 10은 성장 조절제로서 제아틴, BAP 또는 2,4-D가 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 첨가된 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터의 신초 발생율을 확인한 그래프이다.
도 11은 성장 조절제로서 제아틴, BAP 또는 2,4-D가 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 첨가된 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 생성된 신초의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 12는 WPM 배지(control), 0.1 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(A), 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(B), 1.0 ㎎/ℓ의 제아틴이 포함된 WPM 배지(C), 0.1 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(D), 0.5 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(E), 1.0 ㎎/ℓ의 BAP가 포함된 WPM 배지(F), 0.1 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(G), 0.5 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(H) 또는 1.0 ㎎/ℓ의 2,4-D가 포함된 WPM 배지(I)에 치상된 댕댕이나무의 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 신초가 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 13은 혼합 배지에 치상된 댕댕이나무 신초로부터의 다경 발생율을 확인한 그래프이다.
도 14는 혼합 배지에 치상된 댕댕이나무의 신초로부터 생성된 다경의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 15는 혼합 배지-1(A), 혼합 배지-2(B) 또는 혼합 배지-3(C)에 치상된 댕댕이나무의 신초로부터 다경이 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 16은 혼합 배지에 치상된 댕댕이나무 신초로부터의 발근율을 확인한 그래프이다.
도 17은 혼합 배지에 치상된 댕댕이나무의 신초로부터 생성된 뿌리의 길이 및 수를 확인한 그래프이다.
도 18은 WPM 배지(control), 혼합 배지-1(A), 혼합 배지-2(B), 혼합 배지-3(C), 0.1 ㎎/ℓ의 IBA가 포함된 WPM 배지(D), 0.5 ㎎/ℓ의 IBA가 포함된 WPM 배지(E), 1.0 ㎎/ℓ의 IBA가 포함된 WPM 배지(F), 0.1 ㎎/ℓ의 NAA가 포함된 WPM 배지(G), 0.5 ㎎/ℓ의 NAA가 포함된 WPM 배지(H) 또는 1.0 ㎎/ℓ의 NAA가 포함된 WPM 배지(I)에 치상된 댕댕이나무의 신초로부터 발근이 유도된 것을 촬영한 사진이다.
도 19는 댕댕이나무의 캘러스가 배지에 치상된 직후(좌) 및 6주 후에 갈변된 모습(우)을 촬영한 사진이다.
도 20은 댕댕이나무의 입 조직이 배지에 치상된 직후(좌) 및 6주 후에 갈변된 모습(우)을 촬영한 사진이다.
도 21은 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생존율을 확인한 그래프이다.
도 22는 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생성된 뿌리의 개수를 확인한 그래프이다.
도 23은 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생성된 뿌리의 길이를 확인한 그래프이다.
도 24는 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생성된 신초의 길이를 확인한 그래프이다.
도 25는 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생성된 잎의 길이를 확인한 그래프이다.
도 26은 다경 및 발근이 유도된 식물체를 상토에 식재하여 순화시키고 생성된 잎의 폭을 확인한 그래프이다.
도 27은 순화에 사용된 다경 및 발근이 유도된 식물체(A) 및 순화박스(B); 무비상토(C), 무비상토 및 마사상토가 5:5로 혼합된 상토(D), 무비상토 및 마사상토가 7:3으로 혼합된 상토(E), 유비상토(F), 유비상토 및 마사상토가 5:5로 혼합된 상토(G) 및 유비상토 및 마사상토가 7:3으로 혼합된 상토(H)에 식재하여 순화된 댕댕이나무; 및 상기 수득된 댕댕이나무를 원예용 화분용기(I)에 이식하여 20일 경과된 후를 촬영한 사진이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 댕댕이나무의 줄기 부위를 배양 배지에 치상하여 신초를 유도하는 단계; 및 상기 유도된 신초로부터 혼합 배지를 이용하여 다경 및 발근을 유도하는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 식물체 배양 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 댕댕이나무의 식물체 배양 방법은, 댕댕이나무의 줄기 부위를 배양 배지에 치상하여 신초를 유도하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 댕댕이나무의 줄기 부위는 생장점 및 액아로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 조직을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어, "배양 배지"는 댕댕이나무의 줄기 부위로부터 신초를 유도하는 단계에 사용되는 배지로서, 조직배양을 위해 식물의 조직으로부터 신초를 유도하는데 사용될 수 있는 일반적인 기본 배지를 포함한다. 상기 배양 배지는 인위적으로 제조하여 사용하거나, 상업적으로 시판되는 것을 사용할 수 있다.
상기 배양 배지를 제조하여 사용할 때, 상기 배양 배지는 탄소원, 대량원소, 미량원소, 비타민 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 상기 탄소원은 수크로스, 글루코스, 말토오스, 락토오스 및 프룩토오스로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 수크로스일 수 있다. 상기 탄소원은 20 내지 40 g/ℓ, 구체적으로 23 내지 37 g/ℓ, 더욱 구체적으로 26 내지 33 g/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 대량원소는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O, K2SO4, KCl, KI, KNO3 및 NaH2PO4·H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O 및 K2SO4로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 더욱 구체적으로 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O 및 K2SO4를 포함할 수 있다.
상기 MgSO4·7H2O는 350 내지 390 ㎎/ℓ, 구체적으로 360 내지 380 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 365 내지 375 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CaCl2·2H2O는 90 내지 102 ㎎/ℓ, 구체적으로 92 내지 100 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 94 내지 98 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 NH4NO3는 370 내지 430 ㎎/ℓ, 구체적으로 380 내지 420 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 390 내지 410 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 KH2PO4는 140 내지 200 ㎎/ℓ, 구체적으로 150 내지 190 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 160 내지 180 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 Ca(NO)2·4H2O는 530 내지 580 ㎎/ℓ, 구체적으로 540 내지 570 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 550 내지 560 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 K2SO4는 960 내지 1020 ㎎/ℓ, 구체적으로 970 내지 1010 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 980 내지 1000 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 미량원소는 FeSO4·7H2O, MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, Na2-EDTA, Na2MnO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 FeSO4·7H2O, MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, Na2-EDTA 및 Na2MnO4·2H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 더욱 구체적으로 FeSO4·7H2O, MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, Na2-EDTA 및 Na2MnO4·2H2O를 포함할 수 있다.
상기 FeSO4·7H2O는 24 내지 30 ㎎/ℓ, 구체적으로 25 내지 29 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 26 내지 28 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 MnSO4·H2O는 19 내지 25 ㎎/ℓ, 구체적으로 20 내지 24 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 21 내지 23 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 ZnSO4·7H2O는 6 내지 10 ㎎/ℓ, 구체적으로 7 내지 9.5 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 8 내지 9 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CuSO4·5H2O는 0.1 내지 0.4 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.2 내지 0.3 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 H3BO3는 5 내지 7 ㎎/ℓ, 구체적으로 5.5 내지 6.8 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 6 내지 6.5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 Na2-EDTA는 25 내지 50 ㎎/ℓ, 구체적으로 30 내지 45 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 35 내지 40 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 Na2MnO4·2H2O는 0.1 내지 0.4 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.2 내지 0.3 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 비타민 및 아미노산은 글리신, 이노시톨, 니코틴산, 피리독신 및 티아민으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 글리신, 이노시톨, 니코틴산, 피리독신 및 티아민을 포함할 수 있다. 상기 글리신은 1 내지 3 ㎎/ℓ, 구체적으로 1.2 내지 2.8 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 1.5 내지 2.5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 이노시톨은 50 내지 200 ㎎/ℓ, 구체적으로 60 내지 150 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 80 내지 120 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 니코틴산은 0.1 내지 1.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.2 내지 0.8 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 피리독신은 0.1 내지 1.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.2 내지 0.8 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 티아민은 0.1 내지 3 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.5 내지 2 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.8 내지 1.5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 시판되고 있는 배양 배지의 구체적인 예는 MS(Murashige and Skoog basal), WPM(woody plant medium), B5(Gamborg B5), W(White), LMWP(Lloyd and McCown Woody Plant basal), VW(Vacin and Went), Km(Knudson C modified orchid), M(Mitra replate/maintenance), NN(Nitsch and Nitsch), AS(Anderson Salt), BDS(modified B5 of Dunstan and Short) 및 SH(Schenk & Hildebrandt basal salt) 배지 등이 있다.
상기 배양 배지는 배양 목적에 따라 액체 배지 또는 고체 배지로서 제조될 수 있고, 고체 배지로 제조하는 경우에는 한천 또는 젤라이트와 같은 성분이 추가로 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 배양 배지는 생장 조절제를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어, "생장 조절제"는 식물의 조직으로부터 신초를 유도하는 것을 촉진하기 위해 배양 배지에 포함되는 물질을 의미한다. 상기 생장 조절제는 사이토키닌 또는 옥신 계통의 생장 조절제를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 생장 조절제는 제아틴, BAP(N6-benzylaminopurine) 또는 이의 혼합물일 수 있고, 이는 배양 배지에 0.01 내지 5.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.05 내지 4 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.08 내지 3 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 댕댕이나무의 식물체 배양 방법은 상기 유도된 신초로부터 혼합 배지를 이용하여 다경 및 발근을 유도하는 단계를 제공한다.
본 명세서에 사용된 용어, "혼합 배지"는 댕댕이나무의 다경 및 발근을 유도하기 위해 사용되는 배지를 의미한다.
상기 혼합 배지는 탄소원, 대량원소, 미량원소, 비타민 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 탄소원은 수크로스, 글루코스, 말토오스, 락토오스 및 프룩토오스로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 수크로스일 수 있다. 상기 탄소원은 20 내지 40 g/ℓ, 구체적으로 23 내지 37 g/ℓ, 더욱 구체적으로 26 내지 33 g/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 대량원소는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O, K2SO4, KCl, KI, KNO3 및 NaH2PO4·H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O, K2SO4, KCl, KI 및 KNO3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 더욱 구체적으로 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO)2·4H2O, K2SO4, KCl, KI 및 KNO3를 포함할 수 있다. 상기 대량원소는 1,500 내지 3,000 ㎎/ℓ, 구체적으로 1,800 내지 2,000 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 2,000 내지 2,500 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 MgSO4·7H2O는 230 내지 280 ㎎/ℓ, 구체적으로 240 내지 270 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 245 내지 260 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CaCl2·2H2O는 50 내지 70 ㎎/ℓ, 구체적으로 55 내지 67 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 60 내지 65 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 NH4NO3는 450 내지 550 ㎎/ℓ, 구체적으로 430 내지 520 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 480 내지 500 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 KH2PO4는 150 내지 210 ㎎/ℓ, 구체적으로 160 내지 200 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 170 내지 190 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 Ca(NO)2·4H2O는 410 내지 480 ㎎/ℓ, 구체적으로 420 내지 470 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 430 내지 450 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 K2SO4는 960 내지 1020 ㎎/ℓ, 구체적으로 930 내지 1010 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 980 내지 1000 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, KCl은 6 내지 11 ㎎/ℓ, 구체적으로 7 내지 10 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 8 내지 9 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 아울러, KI는 10 내지 20 ㎎/ℓ, 구체적으로 12 내지 18 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 14 내지 16 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, KNO3는 200 내지 250 ㎎/ℓ, 구체적으로 210 내지 245 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 220 내지 240 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 미량원소는 FeSO4·7H2O, MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, Na2-EDTA, Na2MnO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 FeSO4·7H2O, MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, Na2-EDTA, Na2MnO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O를 포함할 수 있다. 상기 미량원소는 50 내지 150 ㎎/ℓ, 구체적으로 60 내지 120 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 70 내지 100 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 FeSO4·7H2O는 20 내지 30 ㎎/ℓ, 구체적으로 21 내지 28 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 23 내지 26 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 MnSO4·H2O는 12 내지 20 ㎎/ℓ, 구체적으로 14 내지 18 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 15 내지 17 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 ZnSO4·7H2O는 4 내지 9 ㎎/ℓ, 구체적으로 5 내지 8 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 6 내지 7 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CuSO4·5H2O는 0.01 내지 0.5 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.05 내지 0.3 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.09 내지 0.2 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 H3BO3는 2 내지 7 ㎎/ℓ, 구체적으로 3 내지 6 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 4 내지 5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 Na2-EDTA는 25 내지 40 ㎎/ℓ, 구체적으로 28 내지 37 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 30 내지 34 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 Na2MnO4·2H2O는 0.05 내지 0.25 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.08 내지 0.23 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.1 내지 0.2 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, CoCl2·6H2O는 0.001 내지 0.03 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.005 내지 0.02 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.009 내지 0.015 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 비타민 및 아미노산은 글리신, 이노시톨, 니코틴산, 피리독신 및 티아민으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 구체적으로 글리신, 이노시톨, 니코틴산, 피리독신 및 티아민을 포함할 수 있다. 상기 비타민 및 아미노산은 30 내지 100 ㎎/ℓ, 구체적으로 40 내지 90 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 50 내지 80 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 글리신은 0.8 내지 2.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 1.0 내지 1.7 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 1.2 내지 1.4 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 이노시톨은 57 내지 73 ㎎/ℓ, 구체적으로 60 내지 70 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 63 내지 67 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 니코틴산은 0.1 내지 0.6 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.2 내지 0.5 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.3 내지 0.4 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 상기 피리독신은 0.1 내지 0.6 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.2 내지 0.5 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.3 내지 0.4 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있고, 상기 티아민은 0.5 내지 1.2 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.7 내지 1.1 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.8 내지 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 혼합 배지를 시판되는 배지를 이용하여 제조하는 경우에는, MS 및 WPM 배지를 혼합하여 제조할 수 있다. 이때, 상기 MS 및 WPM 배지는 중량비를 기준으로 1:0.5 내지 4, 구체적으로 1:1 내지 3.5, 더욱 구체적으로 1:2 내지 3의 비율로 혼합될 수 있다.
상기 혼합 배지는 pH 3.5 내지 6.0, 구체적으로 pH 4.0 내지 5.8, 더욱 구체적으로 pH 4.5 내지 5.5로 조절될 수 있다.
상기 배양 배지는 배양 목적에 따라 액체 배지 또는 고체 배지로서 제조될 수 있고, 고체 배지로 제조하는 경우에는 한천 또는 젤라이트와 같은 성분이 추가로 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 혼합 배지는 성장 유도제를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어, "성장 유도제"는 식물의 조직으로부터 다경 및 발근 등과 같은 기관으로의 분화를 유도하여 식물체의 형성을 활성화시키는 물질을 의미한다. 상기 성장 유도제는 사이토키닌 계통일 수 있다. 구체적으로, 상기 성장 유도제는 제아틴, TDZ(thidiazuron) 또는 이의 혼합물일 수 있다.
상기 제아틴은 0.01 내지 3.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.5 내지 2.0 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.1 내지 1.5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 한편, 상기 TDZ는 0.001 내지 1.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.05 내지 0.5 ㎎/, 더욱 구체적으로 0.01 내지 0.25 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 댕댕이나무의 줄기로부터 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 채취한 뒤, 이를 이용하여 신초를 유도하기 위한 배지 및 생장 조절제를 선별하였다. 그 결과, MS 배지에 비해 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 줄기 부위로부터 유도된 신초의 생장율이 높고, 신초의 길이가 길며, 신초의 수가 많은 것을 확인하였다(표 2 및 도 1 내지 6 참조).
또한, 상기 선별된 WPM 배지에 생장 조절제로서 제아틴, BAP 또는 2,4-D를 첨가하여 댕댕이나무의 줄기 부위로부터 신초를 유도한 결과, 제아틴 또는 BAP를 첨가한 WPM 배지에 치상된 댕댕이나무의 줄기 부위로부터 유도된 신초의 생장율이 높고, 신초의 길이가 길며, 신초의 수가 많은 것을 확인하였다(표 3 및 도 7 내지 12 참조).
아울러, 상기 수득된 신초로부터 댕댕이나무의 다경 및 발근을 유도하기 위해 WPM 배지 및 MS 배지를 혼합한 뒤, 여기에 성장 유도제로서 제아틴 또는 TDZ를 포함하는 혼합 배지를 제조하였다. 상기 제조된 혼합 배지에 신초를 치상하고, 이로부터 유도되는 다경 및 발근의 효과를 확인한 결과, 혼합 배지-3을 이용하여 배양한 신초가 다경 및 발근 활성이 우수함을 알 수 있었다(표 5 및 6, 및 도 13 내지 18 참조).
그러나, 댕댕이나무의 캘러스 또는 잎의 조직을 치상하여 배양하면 상기 캘러스 또는 잎의 조직이 갈변될 뿐, 신초가 유도되지 않았다(도 19 및 20 참조).
따라서, 상기로부터 댕댕이나무의 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 이용하여 생장 조절제가 포함되는 배양 배지에서 신초를 유도하고, 유도된 신초를 성장 유도제가 포함되는 혼합 배지에 치상하여 다경 및 발근을 유도하는 상기 방법은 댕댕이나무의 식물체 배양에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 배양된 댕댕이나무 식물체를 제공한다.
상기 배양된 댕댕이나무 식물체는 상술한 바와 같은 방법으로 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 생장이 유도된 것일 수 있다. 상기 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 배양 배지에 치상함으로써 댕댕이나무의 신초를 수득할 수 있다. 이때, 사용된 배양 배지는 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있으며, 상기 배양 배지는 생장 조절제를 추가로 포함할 수 있다. 일례로, 상기 생장 조절제는 제아틴, BAP(N6-benzylaminopurine) 또는 이의 혼합물일 수 있고, 이는 배양 배지에 0.01 내지 5.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.05 내지 4 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.08 내지 3 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 상기 댕댕이나무의 신초를 상술한 바와 같은 특징을 갖는 혼합 배지에 치상함으로써, 다경 및 발근이 유도된 댕댕이나무의 식물체를 수득할 수 있다. 이때, 상기 혼합 배지는 성장 유도제를 포함할 수 있고, 상기 성장 유도제는 제아틴, TDZ(thidiazuron) 또는 이의 혼합물일 수 있다. 상기 제아틴은 0.01 내지 3.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.5 내지 2.0 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.1 내지 1.5 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다. 한편, 상기 TDZ는 0.001 내지 1.0 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.05 내지 0.5 ㎎/, 더욱 구체적으로 0.01 내지 0.25 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 댕댕이나무 식물체를 순화시키는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 증식 방법을 제공한다.
상기 댕댕이나무의 조직은 상술한 바와 같은 특징을 갖는 방법에 따라 수득될 수 있다. 일례로, 상기 댕댕이나무 조직은 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 성장이 유도된 것일 수 있고, 이의 유도는 생장 조절제가 포함된 상술한 바와 같은 배양 배지에 치상함으로써 수행될 수 있다. 이를 통해 댕댕이나무의 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 신초를 수득할 수 있고, 상기 수득된 신초로부터 상술한 바와 같이 성장 유도제가 포함된 혼합 배지를 이용하여 다경 및 발근이 유도된 댕댕이나무 식물체를 수득할 수 있다.
본 발명은 상기 수득된 댕댕이나무 식물체를 순화시키는 단계를 제공한다.
상기 순화는 통상의 기술분야에 알려진 어떠한 방법을 사용하여도 무방하며, 순화를 거친 댕댕이나무 식물체는 증식된 댕댕이나무로서 수득될 수 있다. 상기 순화는 무비상토, 유비상토 및 마사상토로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 상토에서 배양될 수 있다. 이때, 상기 상토를 혼합하여 사용하는 경우에는 무비상토 또는 유비상토를 마사상토와 혼합하여 사용할 수 있다. 이때, 혼합은 무비상토 또는 유비상토, 및 마사상토를 0.5:1 내지 5:1, 구체적으로 0.7:1 내지 4.5:1, 더욱 구체적으로 0.9:1 내지 4.0:1의 중량비로 혼합될 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 본 발명의 방법에 따라 수득된 댕댕이나무 식물체를 다양한 조건의 상토에 식재하여 순화시킨 결과, 상기 식물체가 효과적으로 증식되는 것을 확인하였다(표 7 및 도 21 내지 27 참조).
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 댕댕이나무의 신초 배양을 위한 조직의 준비
먼저, 댕댕이나무(강원도, 대한민국)로부터 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 채취하였다.
구체적으로, 채취된 줄기에서 액아가 존재하는 줄기 부위는 액아를 2개씩 포함하도록 절편하였고, 이를 수돗물에서 5분 동안 세척한 뒤, 70% 에탄올에 넣어 3분 동안 멸균하였고, 이를 다시 증류수로 3회 세척하여 눈이 안튼 상태로 가지 일부를 붙여 준비하였다. 한편, 생장점이 존재하는 줄기부위는 상기 준비한 액아가 존재하는 줄기부위로부터 생장점만을 채취하여 사용하였다.
상기와 같이 준비된, 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 트윈 20이 2 내지 3 방울 첨가된 2.5% 차아염소산나트륨(NaCIO) 용액에 넣어 30분 동안 멸균시키고, 이를 멸균수로 5회 세척하여 준비하였다.
실시예 2. 댕댕이나무의 신초 배양을 위한 배지 선별
상기 실시예 1에서 준비한 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 MS(Murashige and Skoog basal) 또는 WPM(woody plant medium) 배지를 이용하여 신초를 배양하였다.
구체적으로, 하기 표 1에 나타낸 조성을 갖는 MS 또는 WPM 배지를 pH 5.0이 되도록 조절한 뒤, 0.8%(w/v)의 한천을 첨가하였다. 한천을 첨가한 배지를 8 ㎖씩 시험관에 분주한 뒤, 121℃에서 15분 동안 고압멸균기를 사용하여 멸균하여 고체배지를 제조하였다.
조성(㎎/ℓ) MS WPM
대량원소 MgSO4·7H2O 35 370
CaCl2·2H2O - 96
NH4NO3 1,000 400
KH2PO4 300 170
Ca(NO)2·4H2O 347 556
K2SO4 - 990
KCl 37.3 -
KI 65 -
KNO3 1,000 -
NaH2PO4·H2O - -
미량원소 FeSO4·7H2O 27.8 27.8
MnSO4·H2O 6.06 22.3
ZnSO4·7H2O 4.0 8.6
CuSO4·5H2O 0.025 0.25
H3BO3 2 6.2
Na2-EDTA 37.3 37.3
Na2MoO4·2H2O 0.025 0.25
CoCl2·6H2O 0.025 -
기타 글리신 - 2.0
이노시톨 1.0 100
니코틴산 0.1 0.5
피리독신·HCl 0.1 0.5
티아민·HCl 1.0 1.0
수크로즈 30,000 30,000
한천 8,000 8,000
상기 제조한 고체배지에 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위를 각각 4개씩 3회 반복하여 치상 한 뒤, 6주 동안 관찰하고 신초의 발생율과 발생된 신초의 길이 및 수를 조사하여 표 2 및 도 1 내지 6에 나타내었다.
사용부위 배지 치상한
수(개)		 발생한
신초 수(개)		 신초
발생율(%)		 신초 길이
(㎝)		 평균 발생한
신초의 수(개)
생장점 MS 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
WPM 12 2 16.7 0.4±0.0 1.0±0.0
액아 MS 12 2 16.7 1.8±0.0 1.0±0.0
WPM 12 3 25.0 2.3±0.0 1.0±0.0
그 결과, 표 2 및 도 1 내지 3에 나타난 바와 같이, MS 배지에서와 달리 WPM 배지에 치상하였을 때만 생장점이 존재하는 줄기 부위로부터 신초가 생장하였다. 특히, WPM 배지에서는 16.7%의 신초 발생율을 나타낸 반면, MS 배지에서는 치상한 조직이 고사하여, WPM 배지에 치상했을 때 신초의 생육이 더욱 활발하였다(표 2 및 도 1 내지 3).
한편, 표 2 및 도 4 내지 6에 나타난 바와 같이, 액아가 존재하는 줄기부위를 사용하여 신초를 유도한 경우에는, WPM 배지를 이용하였을 때 치상 1주 후부터 신초가 발생하였고, 2주 후에는 엽신의 생장과 개엽이 시작되었지만, MS 배지를 이용하였을 때는 치상 4주 후에 신초가 발생하였다. 치상 6주 후에는 MS 배지 또는 WPM 배지에서 신초 발생율이 16.7% 또는 25.0%였고, 발생한 신초의 길이 및 수 또한 WPM 배지에 치상한 경우가 더 우수하였다(표 2 및 도 4 내지 6).
따라서, 상기로부터 WPM 배지를 사용하였을 때, 생장점 또는 액아가 존재하는 줄기 부위로부터 신초를 효과적으로 발생시킬 수 있음을 알 수 있었다.
실시예 3. 댕댕이나무의 신초 배양을 위한 생장 조절제의 선별
WPM 배지를 사용하여 댕댕이나무의 신초를 배양하는 과정에서 적절한 생장 조절제를 선별하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 실험은 생장 조절제로서 제아틴(zeatin), BAP(N6-benzylaminopurine) 또는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxy acetic acid)를 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 처리한 WPM 배지를 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 2와 동일한 조건 및 방법으로 수행되었다. 6주 동안 관찰한 신초의 발생율과 발생된 신초의 길이 및 수를 표 3 및 도 7 내지 12에 나타내었다.
사용부위 생장 조절제
(㎎/ℓ)		 치상한 수(개) 발생한
신초 수(개)		 신초
발생율(%)		 신초 길이
(㎝)		 평균 발생한 신초의 수(개)
생장점 대조군
WPM 배지		 12 2 16.7 0.4±0.0 1.0±0.0
제아틴(0.1)
+WPM 배지		 12 1 8.3 0.2±0.0 1.0±0.0
제아틴(0.5)
+WPM 배지		 12 1 8.3 0.3±0.0 1.0±0.0
제아틴(1.0)
+WPM 배지		 12 4 33.3 0.4±0.0 1.0±0.0
BAP(0.1)
+WPM 배지		 12 1 8.3 0.3±0.0 1.0±0.0
BAP(0.5)
+WPM 배지		 12 2 16.7 0.4±0.0 1.0±0.0
BAP(1.0)
+WPM 배지		 12 3 25.0 0.2±0.0 1.0±0.0
2,4-D(0.1)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
2,4-D(0.5)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
2,4-D(1.0)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
액아 대조군
WPM 배지		 12 3 25.0 2.3±0.0 1.0±0.0
제아틴(0.1)
+WPM 배지		 12 7 58.3 1.2±0.0 1.0±0.0
제아틴(0.5)
+WPM 배지		 12 7 58.3 3.8±0.7 1.4±0.5
제아틴(1.0)
+WPM 배지		 12 4 33.3 3.8±0.0 1.0±0.0
BAP(0.1)
+WPM 배지		 12 4 33.3 1.4±0.0 1.0±0.0
BAP(0.5)
+WPM 배지		 12 3 25.0 1.7±0.3 1.3±0.6
BAP(1.0)
+WPM 배지		 12 6 50.0 2.1±0.0 1.0±0.0
2,4-D(0.1)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
2,4-D(0.5)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
2,4-D(1.0)
+WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
그 결과, 표 3 및 도 7 내지 9에 나타낸 바와 같이, 제아틴 또는 BAP가 첨가된 WPM 배지에 치상된 생장점이 존재하는 줄기 부위에서 치상 2주 후부터 신초가 발생하였다. 구체적으로, 생장 조절제가 첨가되지 않은 대조군이 16.7%의 신초 발생율을 나타낸 것과 비교하여, 0.1 또는 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴이 첨가된 배지에서 8.3%, 1.0 ㎎/ℓ의 제아틴이 첨가된 배지에서 33.3%의 신초 발생율을 나타내었다. 한편, 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 BAP가 첨가된 배지에서 배양한 경우에는 8.3%, 16.7% 또는 25.0%의 신초 발생율을 나타내었다. 그러나, 생장 조절제로서 2,4-D가 포함된 배지에서 배양하였을 때는 모든 경우에서 캘러스만 유도되었고, 신초는 발생하지 않았다(표 3 및 도 7 내지 9).
한편, 표 3 및 도 10 내지 12에 나타난 바와 같이, 액아가 존재하는 줄기부위를 사용하여 신초를 유도한 경우에는 치상 6주 후, 25.0%의 신초 발생율을 보인 대조군과 비교하여, 0.1 또는 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴이 첨가된 배지에서 58.3%, 및 1.0 ㎎/ℓ의 제아틴이 첨가된 배지에서 33.3%의 신초 발생율을 나타내었다. 또한, 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴이 첨가된 배지에서 배양한 경우에 발생한 신초 길이가 평균 3.8±0.7 ㎝이고, 평균 발생한 신초 수가 1.4±0.5개로 가장 우수한 신초 생육 활성을 보였다.
한편, 1.0 ㎎/ℓ의 BAP가 첨가된 배지에서 배양한 경우에는 50.0%의 신초 발생율을 나타내었다. 그러나, 생장 조절제로서 2,4-D가 포함된 배지에서 배양하였을 때는 모든 경우에서 캘러스만 유도되었고, 신초는 발생하지 않았다(표 3 및 도 10 내지 12).
따라서, 상기로부터 생장점이 존재하는 줄기 부위는 생장 조절제로서 1.0 ㎎/ℓ의 제아틴을, 액아가 존재하는 줄기 부위는 생장 조절제로서 0.1 또는 0.5 ㎎/ℓ의 제아틴을 포함하는 배지를 사용하는 경우에 신초 발생율 및 발생된 신초의 생육이 우수한 것을 알 수 있었다.
실시예 4. 댕댕이나무의 신초로부터 다경 유도를 위한 배지의 선별
유도된 댕댕이나무의 신초로부터 다경을 유도하기 위한 배지를 다음과 같은 방법으로 선별하였다.
구체적으로, 다경 유도를 위한 배지는 1 ℓ의 증류수에 약 1.8075 g의 WPM 배지, 약 0.6625 g의 MS 배지, 8 g의 한천 및 30 g의 수크로스를 첨가하여 제조한 혼합 배지를 사용하였다. 이때, 상기 혼합 배지에 성장 유도제로서 제아틴 또는 TDZ(thidiazuron)를 하기 표 4와 같은 조건으로 첨가하여 혼합 배지-1, 혼합 배지-2 또는 혼합 배지-3을 제조하여 사용하였고, 생장점 배양과 액아 배양을 통해 유도된 신초들을 상기 각각의 혼합 배지에 치상하여 다경을 유도하였다.
배지명 생장 조절제 함량(㎎/ℓ)
혼합 배지-1 제아틴 0.3
TDZ 0.04
혼합 배지-2 제아틴 0.6
TDZ 0.07
혼합 배지-3 제아틴 1.0
TDZ 0.1
그 결과, 6주 동안 관찰한 생장점이나 액아로부터 유도된 다경의 발생율과 발생된 다경의 길이 및 수를 표 5 및 도 13 내지 15에 나타내었다.
사용부위 배지 치상한 수(개) 발생한
다경 수(개)		 다경
발생율(%)		 다경 길이
(㎝)		 평균 발생한
다경의 수(개)
생장점 대조군
WPM 배지		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
혼합 배지-1 12 8 66.7 1.6±0.3 2.0±0.0
혼합 배지-2 12 9 75.0 1.8±0.6 2.0±0.0
혼합 배지-3 12 11 91.7 2.3±1.1 3.6±1.0
표 5 및 도 13 내지 15에 나타낸 바와 같이, 치상 1주 후, 혼합 배지-1에서 배양한 댕댕이나무의 신초에서 엽신이 관찰되었고, 2주 후부터는 성장 유도제가 포함되지 않은 혼합 배지를 사용한 경우를 제외한 모든 신초에서 엽신이 관찰되었다. 한편, 다경의 발생율은 혼합 배지-3을 사용한 경우가 91.7%로 가장 높았고, 6주 후, 배양된 다경의 길이는 2.3±1.1 ㎝이고 다경 수는 평균 3.6±1.0개로 나타났다(표 5 및 도 13 내지 1).
실시예 5. 댕댕이나무의 신초로부터 발근 유도를 위한 배지의 선별
실시예 4에서 유도된 댕댕이나무의 다경 줄기를 이용한 것을 제외하고는, 실시예 4와 동일한 조건 및 방법으로 발근을 유도하였다. 이때, 대조군으로서는 생장조절제가 첨가되지 않은 WPM 기본배지를 사용하였다. 또한, WPM 기본 배지에 발근 유도용 성장 유도제인 IBA(indole-3-butyric acid) 또는 NAA(α-naphthalene acetic acid)를 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 첨가한 배지에서의 발근 유도 효과를 확인하였다.
6주 동안 관찰한 신초의 발근율과 발생된 뿌리의 길이 및 뿌리의 수를 표 6 및 도 16 내지 18에 나타내었다.
사용부위 배지 치상한
수(개)		 발생한
뿌리 수(개)		 발근율(%) 뿌리 길이
(㎝)		 평균 발생한 뿌리의 수(개)
다경 줄기 혼합 배지 12 3 25.0 0.3±0.0 0.3±0.5
혼합 배지-1 12 8 66.7 2.1±1.1 1.1±0.9
혼합 배지-2 12 10 83.3 4.9±1.2 1.7±1.1
혼합 배지-3 12 10 83.3 6.1±2.0 3.2±2.0
WPM 배지+
IBA(0.1)		 12 0 0.0 0.0±0.0 0.0±0.0
WPM 배지+
IBA(0.5)		 12 4 33.3 0.1±0.0 0.7±0.1
WPM 배지+
IBA(1.0)		 12 7 58.3 0.4±0.1 1.2±1.1
WPM 배지+
NAA(0.1)		 12 5 41.7 0.3±0.2 0.8±1.0
WPM 배지+
NAA(0.5)		 12 9 75.0 1.0±0.2 1.3±0.9
WPM 배지+
NAA(1.0)		 12 7 58.3 0.4±0.1 1.1±1.1
그 결과, 표 6 및 도 16 내지 18에 나타난 바와 같이, 0.1 ㎎/ℓ의 IBA가 포함된 WPM 배지에 치상된 경우를 제외하고는, 치상 2주 후부터 대부분의 조건에서 배양된 다경 줄기로부터 발근이 시작되었다. 그러나, WPM 배지에 성장 유도제로서 IBA 또는 NAA를 첨가한 경우는 혼합 배지에서 배양한 경우보다 세근의 발달이 미약하였다. 특히, 혼합 배지-3을 이용한 경우가 83.3%의 가장 높은 발근율을 보였고, 뿌리 길이가 평균 6.1±2.0 ㎝이고, 발생한 뿌리 수가 평균 3.2±2.0개로써 가장 우수한 생육을 보였다(표 6 및 도 16 내지 18).
비교예 1. 댕댕이나무의 캘러스로부터의 신초 배양
실시예 2에서 댕댕이나무의 신초를 유도하는 과정에서 발생한 캘러스를 이용하여, 캘러스로부터 신초를 유도하였다.
구체적으로, 실험은 배양 배지로서 WPM 배지에 제아틴, BAP 또는 2,4-D를 0.1, 0.5 또는 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 각각 첨가하거나, 상술한 바와 같은 혼합 배지-1, 혼합 배지-2 또는 혼합 배지-3을 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 2와 동일한 조건 및 방법으로 수행하였다.
그 결과, 도 19에 나타난 바와 같이, 치상 1주 후, 캘러스의 증식이 관찰되었다. 치상 2주 후부터는 증식을 유지하였으나, 10%의 캘러스가 갈변하는 현상을 보였다. 6주 후부터는 모든 캘러스가 고사하였다(도 19). 따라서, 상기로부터 캘러스를 이용하여 기관을 재분화하는 것은 댕댕이나무의 대량 증식에 사용하기 어렵다는 것을 알 수 있었다.
비교예 2. 댕댕이나무의 잎으로부터의 신초 배양
치상을 위해 댕댕이나무의 잎을 1.0×0.5 ㎝ 크기의 절편으로 잘라서 사용한 것을 제외하고는, 상기 비교예 1과 동일한 조건 및 방법으로 실험을 수행하였다.
그 결과, 도 20에 나타난 바와 같이, 치상 2주 후부터 잎 조직이 갈변하거나 곰팡이에 오염되기 시작하였고, 약 4주 후에는 모든 처리구에서 잎 조직이 거의 갈변하였다. 또한, 치상 6주 후에는 모든 잎 조직이 고사하였다(도 20). 따라서, 상기로부터 잎 조직을 이용하여 기관을 재분화하는 것은 댕댕이나무의 대량 증식에 사용하기 어렵다는 것을 알 수 있었다.
실험예 1. 배양된 식물체 순화
상기 실시예 5에서 발근까지 유도된 식물체를 이용하여 외부환경에 적응하고 포지이식을 위한 적절한 토양조건을 확인하기 위해 다음과 같은 방법으로 순화실험을 하였다.
구체적으로, 토양의 종류에 따른 식물체의 순화를 확인하기 위해, 유비상토(생생상토, 홍농, 대한민국), 무비상토(원예용상토2호, 한아름, 대한민국) 및 마사상토(김해 마사, 대한민국)를 각각 또는 중량비로 혼합하여 준비하였다. 상기 준비된 상토를 순화용 박스(25×12×23 ㎝)에 넣고, 여기에 식물체를 식재하였다. 식재는 각 상토별로 5본씩 3회하였고, 이를 배양실에서 2주 동안 랩으로 외부 공기를 차단하여 순화한 뒤, 2주 후부터 랩에 구멍을 내어 외부 공기를 유입시키면서 순화하였다. 외부 공기를 유입시키면서 순화한지 2주 후에는 최종적으로 생존한 개체를 원예용 화분용기에 이식하여 경화시켰다. 이때, 관수는 2 내지 3일 간격으로 하였다. 그 결과, 생존한 개체 뿌리의 수 및 길이, 신초 길이, 및 잎의 길이 및 넓이를 조사하여 표 7 및 도 21 내지 27에 나타내었다.
항목 사용된 상토의 종류
무비
(10)		 무비:마사(5:5) 무비:마사(7:3) 유비
(10)		 유비:마사(5:5) 유비:마사(7:3)
생존율(%) 86.6 93.3 93.3 60.0 100 80.0
뿌리 수
(개)		 평균 6.8 6.4 5.4 2.4 4.3 3.7
편차 3.6 3.0 2.9 1.6 1.7 1.7
최소 5.7 4.2 5.0 1.3 3.4 3.2
최대 7.5 7.7 6.0 3.5 4.8 4.0
뿌리 길이(㎝) 평균 12.2 8.7 10.0 9.3 7.3 11.3
편차 5.7 2.7 4.3 3.3 4.0 6.3
최소 6.1 5.2 2.6 4.3 2.3 1.6
최대 26.8 14.2 15.1 14.0 16.4 19.3
신초 길이(㎝) 평균 4.9 4.5 4.7 4.9 5.2 5.2
편차 2.5 1.8 2.2 1.2 2.3 1.7
최소 2.0 2.0 2.5 3.5 2.7 2.5
최대 11.5 8.0 8.2 6.6 11.3 7.6
잎의 길이(㎝) 평균 0.8 0.8 0.7 1.3 1.2 1.2
편차 0.2 0.2 0.3 0.3 0.4 0.5
최소 0.5 0.4 0.4 0.8 0.7 0.4
최대 1.2 1.1 1.3 1.8 1.9 2.0
잎의 넓이(㎝) 평균 0.5 0.5 0.5 0.8 0.8 0.7
편차 0.1 0.1 0.1 0.3 0.3 0.3
최소 0.3 0.3 0.3 0.4 0.4 0.3
최대 0.8 0.7 0.8 1.2 1.2 1.2
표 7 및 도 21 내지 27에 나타낸 바와 같이, 순화 4주 후 무비상토에서 순화된 식물체의 생존율이 86.6%로 나타난 반면, 무비상토와 마사상토를 5:5 또는 7:3으로 혼합한 상토에서 순화된 식물체는 93.3%의 생존율을 나타냈다. 한편, 유비상토에서 순화된 식물체의 생존율은 60.0%였으나, 유비상토와 마사상토를 5:5 또는 7:3으로 혼합한 상토에서 순화된 식물체는 100% 또는 80.0%의 생존율을 나타냈다(도 22). 이로부터 유비상토와 마사상토를 5:5의 중량비로 혼합한 토양이 가장 우수한 식물체 생존율을 나타냄을 알 수 있었다.
또한, 생성된 식물체의 뿌리 수 및 길이는 무비상토에 식재된 식물체에서 평균 6.8±3.6개 및 12.2±5.7 ㎝로 나타난 반면, 신초의 길이나 잎의 길이 및 폭은 유비상토 또는 유비상토와 마사상토를 혼합하여 사용한 경우가 더 우수한 것으로 확인되었다(도 23 내지 26).
결론적으로, 발근까지 유도된 식물체의 순화는 유비상토 및 마사상토를 5:5의 중량비로 혼합한 토양에서 수행하는 것이 식물체의 생존율을 포함하는 전반적인 생육상황이 우수한 것으로 나타났다.

Claims (14)

1) 댕댕이나무의 줄기 부위를 배양 배지에 치상하여 신초를 유도하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 유도된 신초로부터 혼합 배지를 이용하여 다경 및 발근을 유도하는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 식물체 배양 방법으로서,
상기 배양 배지가 생장 조절제로서 제아틴, BAP(N6-benzylaminopurine) 또는 이의 혼합물을 추가로 포함하고,
상기 혼합 배지가 성장 유도제로서 제아틴, TDZ(thidiazuron) 또는 이의 혼합물을 추가로 포함하는 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
제1항에 있어서, 상기 줄기 부위가 생장점 및 액아로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 조직을 포함하는, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
제1항에 있어서, 상기 배양 배지 또는 혼합 배지가 탄소원, 대량원소, 미량원소, 비타민 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 생장 조절제가 0.01 내지 5.0 ㎎/ℓ의 농도로 포함되는, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
제1항에 있어서, 상기 혼합 배지가 pH 3.5 내지 6.0인, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 성장 유도제로서 제아틴이 0.01 내지 3.0 ㎎/ℓ의 농도로 포함되는, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
제1항에 있어서, 상기 성장 유도제로서 TDZ가 0.001 내지 1.0 ㎎/ℓ의 농도로 포함되는, 댕댕이나무의 식물체 배양 방법.
제1항의 방법으로 배양된 댕댕이나무 식물체.
제12항의 댕댕이나무 식물체를 순화시키는 단계를 포함하는 댕댕이나무의 증식 방법.
제13항에 있어서, 상기 순화가 무비상토, 유비상토 및 마사상토로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 상토로 배양되는, 댕댕이나무의 증식 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110521478A (zh) * 2019-08-30 2019-12-03 山东康花生物开发有限公司 一种提高金银花产量的栽培方法
CN111213542A (zh) * 2020-01-14 2020-06-02 东北师范大学 一种蓝靛果忍冬扦插恢复退耕地沼泽植被的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
S.J. Ochatt, Requirements for plant regeneration from protoplasts of the shrubby, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1991년 발간, 25, p.161-167*
서영통 외 8명, 산겨릅나무의 액아배양으로부터 다신초 형성을 통한 대량증식, Journal of Agriculture & Life Scienced, 2016년 발간, 50(1), p.23-32*

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110521478A (zh) * 2019-08-30 2019-12-03 山东康花生物开发有限公司 一种提高金银花产量的栽培方法
CN111213542A (zh) * 2020-01-14 2020-06-02 东北师范大学 一种蓝靛果忍冬扦插恢复退耕地沼泽植被的方法

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