KR101777567B1 - 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 - Google Patents
저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101777567B1 KR101777567B1 KR1020150001356A KR20150001356A KR101777567B1 KR 101777567 B1 KR101777567 B1 KR 101777567B1 KR 1020150001356 A KR1020150001356 A KR 1020150001356A KR 20150001356 A KR20150001356 A KR 20150001356A KR 101777567 B1 KR101777567 B1 KR 101777567B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- strain
- kimchi
- knu
- culture
- present
- Prior art date
Links
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 23
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 title claims abstract description 13
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 claims abstract description 63
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 48
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims abstract description 16
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims abstract description 16
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims abstract description 15
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 30
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 30
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 30
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 5
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 5
- 241000220259 Raphanus Species 0.000 description 4
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 3
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 2
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 2
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 1
- 240000006108 Allium ampeloprasum Species 0.000 description 1
- 235000005254 Allium ampeloprasum Nutrition 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- 235000007862 Capsicum baccatum Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 235000005733 Raphanus sativus var niger Nutrition 0.000 description 1
- 244000178231 Rosmarinus officinalis Species 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002019 anti-mutation Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001728 capsicum frutescens Substances 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 1
- -1 glucose and fructose Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- 239000004533 oil dispersion Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000019614 sour taste Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B4/00—General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
- A23B4/14—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
- A23B4/18—Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12 in the form of liquids or solids
- A23B4/20—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B4/22—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B5/00—Preservation of eggs or egg products
- A23B5/08—Preserving with chemicals
- A23B5/12—Preserving with chemicals in the form of liquids or solids
- A23B5/14—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B5/16—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
- A23B7/10—Preserving with acids; Acid fermentation
- A23B7/105—Leaf vegetables, e.g. sauerkraut
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
- A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
- A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
- A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
- A23B9/00—Preservation of edible seeds, e.g. cereals
- A23B9/16—Preserving with chemicals
- A23B9/24—Preserving with chemicals in the form of liquids or solids
- A23B9/26—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23B9/28—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
- A23L19/20—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof by pickling, e.g. sauerkraut or pickles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/31—Leuconostoc
- A23V2400/321—Mesenteroides
-
- A23Y2260/35—
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Storage Of Fruits Or Vegetables (AREA)
Abstract
본 발명은 김치로부터 분리된, 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P), 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 김치를 제조하는 방법, 상기 방법에 의해 제조된 김치, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 제조용 미생물 제제, 상기 균주를 탄소원으로 프럭토스(fructose) 및 염으로 0.5~2.5%(w/v) NaCl이 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주의 배양방법, 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터 균주로 이용하여 발효식품을 제조하는 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 발효식품에 관한 것이다.
Description
본 발명은 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주 및 이의 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 김치로부터 분리된, 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P), 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 김치를 제조하는 방법, 상기 방법에 의해 제조된 김치, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 제조용 미생물 제제, 상기 균주를 탄소원으로 프럭토스(fructose) 및 염으로 0.5~2.5%(w/v) NaCl이 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주의 배양방법, 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터 균주로 이용하여 발효식품을 제조하는 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 발효식품을 제공한다.
김치는 우리나라 전통 고유의 발효식품으로서 한국인의 장 건강에 기여하는 대표적인 유산균 공급원이다. 최근 들어 김치는 배추와 무 등 김치 재료와 김치발효에 참여하는 여러 유산균의 기능이 복합적으로 나타나 항돌연변이와 항암 효과 등 여러 유용한 기능들을 보유하고 있다는 것이 알려지면서 1990년대 이후 본격적으로 상품화되어 국내 수요량과 수출량이 꾸준히 증가하고 있는 추세이다. 이러한 김치의 맛을 내기 위한 발효에 관여하는 미생물로는 락토바실러스 플랜타룸(L. plantarum), 락토바실러스 브레비스(L. brevis), 락토코커스(Lactococcus), 류코노스톡(Leuconostoc), 스트렙토코커스(Streptococcus), 페디오코커스(Pediococcus) 등이 있으며 발효단계에 따라 전체 균총을 형성하는 균의 종류와 구성비율이 변하게 된다.
김치는 발효 과정 중 젖산균의 증식으로 맛이 좋아지나 적숙기를 지나면 이상 발효균이 증식하여 산패되기 시작하면서 조직이 변화하고 군내가 나기 시작한다. 따라서, 숙성된 김치는 더 이상 발효가 진행되지 못하도록 미생물의 발육을 억제시키는 방법으로 숙성된 김치를 저온에서 냉장하는 것이 가장 좋은 방법이다.
최근에는 김치에서 유래되는 유산균을 분리한 후, 김치 제조시 스타터(starter)로 첨가함으로써 김치의 맛과 발효를 조절하려는 연구들이 많이 진행되고 있다. 그러나, 아직까지 김치의 발효가 점차 진행되면서도 김치의 신선한 맛을 지속적으로 유지시킬 수 있는 균주의 분리가 미흡하여, 김치의 품질을 향상시키고 건강을 위한 기능성을 부가할 수 있는 새로운 유산균 스타터에 대한 개발이 절실히 요구되는 실정이다.
한편, 한국등록특허 제1381547호에서는 '병원성 세균의 생육을 억제하는 김치에서 분리한 신규 류코노스톡 메센트로이드 및 이의 용도'가 개시되어 있고, 한국등록특허 제0536108호에서는 '김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 및 이를 이용한 맛있는 김치의 제조 방법'이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 '저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주 및 이의 용도'에 대해서는 밝혀진 바가 전혀 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 글루코스, 프럭토스 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균이 젖산발효에서 생성되는 젖산에 의해서 병원균과 유해세균의 생육이 저지된다는 사실에 기초하여, 주로 유제품, 김치류, 양조식품 등의 식품제조에 이용되며, 저온에서 젖산발효가 진행되는 식품군에 활용이 가능한 유산균을 선별하고자 하였다. 그 결과, 김치로부터 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주를 분리하였고, 상기 균주가 4℃의 저온에서뿐만 아니라 고염에서도 성장이 우수한 균주임을 확인하였다. 따라서, 본 발명에서 분리한 메센테로이데스 KNU-2 균주는 저온 및 염 내성의 특징이 있어, 김치뿐만 아니라 저온 발효 식품 제조에 중요하게 사용될 수 있는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 김치로부터 분리된, 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 김치를 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 김치를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 제조용 미생물 제제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주를 탄소원으로 프럭토스(fructose) 및 염으로 0.5~2.5%(w/v) NaCl이 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주의 배양방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 발효식품을 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 발효식품을 제공한다.
본 발명에서는 김치로부터 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주를 분리하였고, 상기 균주가 4℃의 저온에서뿐만 아니라 고염에서도 성장이 우수한 균주임을 확인하였다. 따라서, 본 발명에서 분리한 메센테로이데스 KNU-2 균주는 저온 및 염 내성의 특징이 있어, 김치뿐만 아니라 저온 발효 식품 제조에 중요하게 사용될 수 있어 관련 업계에 매우 중요한 발명으로 평가된다.
도 1은 본 발명에서 분리한 균주로부터 확보한 16S rRNA 염기서열을 이용하여 분석한 계통수이다.
도 2는 글루코스 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, △: K 200139)
도 3은 프럭토스 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, △: K 200139)
도 4는 글루코스, 1% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 5는 글루코스, 2% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 6은 프럭토스, 1% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 7은 프럭토스, 2% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 2는 글루코스 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, △: K 200139)
도 3은 프럭토스 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, △: K 200139)
도 4는 글루코스, 1% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 5는 글루코스, 2% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 6은 프럭토스, 1% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
도 7은 프럭토스, 2% NaCl 첨가 배지에서의 젖산균 성장곡선을 나타낸다. (●: KNU-2, ▼: KCTC 13388, ■: KCTC 13310, □: KCTC 13403)
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 김치로부터 분리된, 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P)를 제공한다.
본 발명에서 분리한 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주는 2014년 11월 26일에 한국생명공학연구원에 기탁하였다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 균주에서, 상기 저온은 2~18℃이고, 상기 염은 0.5~2.5%(w/v) NaCl일 수 있고, 바람직하게는 저온은 2~6℃이고, 상기 염은 1~2%(w/v) NaCl일 수 있고, 가장 바람직하게는 저온은 4℃이고, 상기 염은 1%(w/v) NaCl일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 김치를 제조하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 소금으로 절인 배추에 고춧가루, 마늘, 생강, 대파, 무채, 설탕과 같은 일반적인 김치 양념들을 혼합한 후, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 배양물을 첨가하여 김치를 제조할 수 있다. 상기 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 배양물은 김치 전체 중량에 대하여 0.5-5 중량% 첨가하는 것이 바람직하며, 1 중량%로 첨가하는 것이 가장 바람직하다.
본 발명에 있어서, 김치 제조용 스타터(starter)란 김치 제조를 위해 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제 또는 조성물을 의미한다. 김치 제조 시에 첨가함으로써 발효된 김치에서 생장할 수 있는 미생물 또는 우점종으로 생장할 수 있는 미생물을 제공하기 위하여 사용된다. 상기 김치 발효용 스타터를 사용하여 김치를 제조하는 경우, 상기 김치 발효용 스타터에 포함된 미생물에 의하여, 김치의 품질을 일정하게 조절하거나, 특정한 목적, 일 예로 새콤한 맛을 강화시키기 위한 목적을 달성할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 김치를 제공한다. 상기 김치의 종류에는 특별한 제한은 없으나, 배추김치, 열무김치, 파김치, 갓김치, 부추김치, 깻잎김치, 총각김치, 고들빼기김치 및 얼갈이 김치 등을 예로 들 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 제조용 미생물 제제를 제공한다.
본 발명의 "함유하는 (comprising)" 용어는 함유하는 것에 한정되지 않으며, 일예로 다른 첨가제, 성분, 지수 또는 단계와 같은 것을 제외하지 않는다.
본 발명에 따른 김치 제조용 미생물 제제는 용액, 분말, 현탁액, 분산액, 에멀젼, 유성 분산액, 페이스트, 분진, 흩뿌림 물질 또는 과립제로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명은 상기 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P)를 탄소원으로 프럭토스(fructose) 및 염으로 0.5~2.5%(w/v) NaCl이 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주의 배양방법을 제공한다.
본 발명의 균주를 배양하는 방법은 당업계에 통상적으로 이용되는 방법에 따라 배양할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 저온 발효식품을 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 저온 발효식품을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 발효식품은 치즈, 김치 또는 발효생식제품일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주를 이용한 발효제품은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 본 발명의 류코노스톡
메센테로이데스
KNU
-2 균주의 분리 및 동정
본 발명에서는 김치를 비롯한 저온 발효식품에 사용할 수 있는 젖산균을 탐색하기 위하여 발효에 관여하는 젖산균을 김치로부터 분리하였다. 김치로부터 젖산균을 분리하기 위해 1 g의 김치를 파쇄하여 9 ㎖의 펩톤수와 균질화한 후 10-1배씩 단계적으로 희석하였다. 희석한 시료를 락토바실리 MRS (difco, USA) 한천 배지에 도말한 후, 30℃에서 24 시간 동안 평판 배양하였다. 한천 배지에서 단일 집락을 형성한 젖산균을 확보한 후 백금이로 취하여 락토바실리 MRS 액체 배지에 접종하여 30℃, 200rpm에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양액은 글리세롤과 혼합하여 초저온냉동고(-80℃)에 보관하였다. 분리한 균주는 ITS1 프라이머(5'-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3': 서열번호 1)와 ITS4(5'-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3' : 서열번호 2) 프라이머를 사용하여 젖산균의 16S rRNA 단편을 증폭하였다. 확보한 염기서열은 NCBI(National Center for Biotechnology Information, USA)의 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)를 사용하여, 기존에 알려진 균주들의 16S rRNA 단편의 염기서열과 비교 후, 상동성을 근거로 동정하였다. 동정결과 분리한 젖산균(KNU-2)의 16S rRNA 염기서열은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)의 16S rRNA 염기서열과 100% 동일함을 확인할 수 있었다(도 1).
또한, 분리한 균주를 API 시스템(API system, BIOMERIEUX, USA)으로 동정하였다. 우선, 멸균 백금이로 균 콜로니를 취한 후 MRS 배지 5㎖에 접종하였다. 24시간 배양 후, 세포 농도를 OD600에서 흡광도를 측정하였다. 측정한 흡광도를 이용하여 현탁 배지 5㎖에 2McFarland의 농도로 배양액을 부유시켰다. 다시 상기 균액을 API 50CHL 키트의 API 50CHL 배지에 2McFarland의 농도로 부유시켰다. 그 후, API 50CHL 키트의 50개 각 튜브에 200ul씩 접종하고, 30℃에서 48시간 동안 배양시켰다. 위의 배양액을 분석하여 49종의 탄수화물 발효패턴을 확인한 후, 이 결과를 동정 컴퓨터 시스템에 입력하여 동정하였다. 그 결과, 선별된 젖산균은 표 1의 탄수화물 발효패턴을 가지고 있는, 류코노스톡 메센테로이드에 속하는 균주인 것으로 판명되었다.
실시예
2. 본 발명의 류코노스톡
메센테로이데스
KNU
-2 균주의 저온 배양 결과
동정한 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주를 대상으로 글루코스와 프럭토스를 탄소원으로 하는 MRS 배지를 사용하여 저온(4℃)에서 성장속도를 비교하였다. 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 대조구로 공시균주인 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388와 류코노스톡 메센테로이데스 K 200139를 사용하였다. 저온(4℃)에서 96시간 동안 진탕배양(200rpm)하였으며, 24시간 간격으로 상등액을 채취하여 세포 농도를 측정하였다. 글루코스를 탄소원으로 하는 MRS 배지에서 3점의 젖산균을 배양하였다(도 2). 실험구와 대조구 모두 24시간 이후부터 균주의 성장이 나타났으며, 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 성장이 대조구보다 우수하였다. 프럭토스를 함유한 MRS 배지에서 3점의 젖산균을 배양하였으며, KNU-2는 도 3과 같이 프럭토스 함유배지에서 대조구보다 우수한 성장을 나타냈다. 글루코스 첨가 MRS에서 배양하였을 때보다 1.6배 높은 비성장속도를 나타냈으며 저온에서 우수한 성장을 확인하였다(도 3).
실시예
3. 본 발명의 류코노스톡
메센테로이데스
KNU
-2 균주의 염 포함 배지에서 저온 배양 결과
김치 제조 과정에서 젖산균은 약 2% 이상의 염도의 환경에 노출된다. 염분에 내성이 우수한 내염성 젖산균이 김치 발효를 주도하므로 염의 환경에서도 성장이 가능한 균주를 확보하고자 했다. 저온에서 균주의 성장을 조사한 결과를 바탕으로 성장이 가장 미비하였던 류코노스톡 메센테로이데스 K 200139 균주를 배제하고, 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13310과 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13403 균주를 추가하여 염도에 따른 젖산균의 성장을 조사하였다(도 4).
위와 마찬가지로 동정한 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주를 대상으로 글루코스와 프럭토스를 탄소원으로 하는 MRS 배지에 1%, 2%의 염에서 농도별 성장속도를 비교하였다. 염은 NaCl를 사용하였으며, 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 대조구로 공시균주인 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388, 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13310, 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13403를 사용하였다. 저온인 4℃와 교반속도 200rpm에서 96시간 동안 배양하였으며, 24시간 간격으로 균주를 채취하여 세포 농도를 측정하였다.
글루코스와 1%의 NaCl을 첨가한 배지를 사용하여 저온(4℃)에서 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2와 공시균주의 성장곡선을 조사하였다(도 4). 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388 균주가 가장 낮은 성장률을 나타냈으며, 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2는 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC13310와 비슷한 비성장속도를 나타냈다. 2%의 NaCl을 함유한 배지에서 배양시 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388은 성장하지 못하였다(도 5). NaCl을 1% 첨가한 경우보다 젖산균의 세포농도가 전체적으로 낮아졌으나 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2는 대조구와 비교하여 우수한 균체 성장을 나타냈다. 결과적으로, 글루코스와 NaCl을 첨가한 배지를 이용하여 저온에서 젖산균의 성장을 조사한 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주가 저온, 염도에 대한 내성이 우수하였고, 특히 2%의 염을 첨가한 배지에서 공시균주와 비교하여 우수한 성장을 나타냈다.
다음으로, 프럭토스를 탄소원으로 사용한 MRS 배지에 NaCl을 1%와 2%의 농도로 첨가하여 저온(4℃)에서 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2와 공시균주를 배양하였다(도 6 및 도 7). 1%의 NaCl을 첨가한 배지에서 배양한 결과 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주는 NaCl을 첨가하지 않은 경우보다 우수한 성장을 나타냈으며 내염성이 우수한 것으로 판단되었다. 공시균주 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388은 1% NaCl을 첨가한 배지에서 성장을 하지 못하였지만, 2% NaCl을 첨가한 배지에서 48시간 이후 성장이 나타났다. 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2와 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388을 제외한 균주들은 NaCl이 1% 첨가된 배지보다 2% 첨가된 배지에서 더 저조한 성장을 보였으며, 이는 고농도의 염에 의해 세포성장이 저해되는 것으로 판단되었다. 결론적으로, 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2의 경우 다른 균주와 비교하였을 때 우수한 비성장속도와 내염성을 나타냈으며, 글루코스보다 프럭토스를 선호하였다. 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13388 균주는 저온에서 성장이 적합하지 않았으며, 프럭토스 함유배지에서 성장이 나타났으나, NaCl의 추가에 따라 성장속도가 급격히 감소하는 경향을 나타냈다.
<110> KNU-Industry Cooperation Foundation
<120> Leuconostoc mesenteroides KNU-2 strain having low-temperature and
salt resistance and uses thereof
<130> PN14369
<160> 2
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 1
tccgtaggtg aacctgcgg 19
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
tcctccgctt attgatatgc 20
Claims (8)
- 김치로부터 분리된, 4℃의 저온 및 0.5~2.5%(w/v)의 염에 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KNU-2 균주(기탁번호 KCTC18342P).
- 삭제
- 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 김치를 제조하는 방법.
- 제3항의 방법에 의해 제조된 김치.
- 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 김치 제조용 미생물 제제.
- 제1항의 균주를 탄소원으로 프럭토스(fructose) 및 염으로 0.5~2.5%(w/v) NaCl이 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 류코노스톡 메센테로이데스 KNU-2 균주의 배양방법.
- 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 스타터(starter) 균주로 이용하여 저온 발효식품을 제조하는 방법.
- 제7항의 방법에 의해 제조된 저온 발효식품.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150001356A KR101777567B1 (ko) | 2015-01-06 | 2015-01-06 | 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150001356A KR101777567B1 (ko) | 2015-01-06 | 2015-01-06 | 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20160084947A KR20160084947A (ko) | 2016-07-15 |
| KR101777567B1 true KR101777567B1 (ko) | 2017-09-13 |
Family
ID=56505879
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020150001356A KR101777567B1 (ko) | 2015-01-06 | 2015-01-06 | 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101777567B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109234165A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-01-18 | 辽宁省农业科学院 | 一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100536108B1 (ko) | 2002-12-11 | 2005-12-14 | 주식회사 두산 | 김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 및 이를 이용한 맛있는 김치의 제조 방법 |
-
2015
- 2015-01-06 KR KR1020150001356A patent/KR101777567B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100536108B1 (ko) | 2002-12-11 | 2005-12-14 | 주식회사 두산 | 김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 및 이를 이용한 맛있는 김치의 제조 방법 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Korean J Food Sci Technol. 1995, vol. 27, no. 4, pp. 506-515. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20160084947A (ko) | 2016-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102066550B (zh) | 具有抗微生物及免疫调节特性的副干酪乳杆菌副干酪亚种新菌株 | |
| KR101074340B1 (ko) | 신규 효모 및 그를 이용한 빵의 제조방법 | |
| Yuliana et al. | Phenotypic identification of lactic acid bacteria isolated from Tempoyak (fermented durian) made in the Philippines | |
| CN110257285A (zh) | 一株具有高效降解亚硝酸盐及强产酸功能的植物乳杆菌及其应用 | |
| RU2018124246A (ru) | Молочнокислые бактерии для изготовления ферментированных пищевых продуктов с усиленным природным сладким вкусом и хорошей текстурой | |
| CN112251385B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌scu-e及其应用 | |
| CN112063542A (zh) | 一种副干酪乳杆菌cicc 6277及其在新疆特色辣椒发酵中的应用 | |
| WO2007074951A1 (en) | Acid tolerant leuconostoc mesenteroides with excellent mannitol productivity and method for producing a kimchi using the same | |
| CN112251383A (zh) | 一株产苯乳酸的干酪乳杆菌及其应用 | |
| Ali et al. | Use of starter cultures of lactic acid bacteria and yeasts in the preparation of kisra, a Sudanese fermented food | |
| KR101777567B1 (ko) | 저온 및 염 내성이 있는 류코노스톡 메센테로이데스 knu-2 균주 및 이의 용도 | |
| KR102616843B1 (ko) | 류코노스톡 메센테로이데스 PBio03 균주 및 이를 이용한 김치의 제조방법 | |
| JP5407035B2 (ja) | ドレッシング及びその製造方法 | |
| CN112029673A (zh) | 一种发酵乳杆菌cicc 6278及其在新疆特色辣椒发酵中的应用 | |
| KR101055949B1 (ko) | 신규한 류코노스톡 메센테로이드 ｄｓｒ 218 균주 및 이의 용도 | |
| KR20080077390A (ko) | 만니톨 생성능이 우수한 내산성 류코노스톡 메센테로이드및 이를 이용한 김치의 제조 방법 | |
| KR20070071911A (ko) | 신규한 락토바실러스 사케이 및 이의 용도 | |
| KR101767475B1 (ko) | 내염성 및 저온생육이 우수한 류코노스톡 메센테로이드 균주 및 이를 포함하는 김치 | |
| KR100454591B1 (ko) | 바이셀라속 신균주 바이셀라 코리엔시스 균주 및 그를이용한 김치 제조방법 | |
| KR19990083667A (ko) | 루코노스톡시트리움아이에이치22균주를이용하여제조한채김치및김치쥬스. | |
| CN112458003B (zh) | 一株产双乙酰植物乳杆菌及其在泡菜中的应用 | |
| KR20140022652A (ko) | 신규한 류코노스톡 사이트리움 및 이를 함유한 식품 | |
| JP7204092B2 (ja) | 野菜ペーストの製造方法およびそのための菌株 | |
| CN106011025A (zh) | 食品发酵用的乳酸菌菌株、发酵剂及其应用 | |
| KR20220012567A (ko) | 대량생산 가능한 제빵용 효모 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| GRNT | Written decision to grant |