KR101760433B1 - 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 유자의 골다공증 예방 및 치료 효능의 유효성분을 최대한 파괴하지 않으면서 골다공증 예방 및 치료 효능이 우수한, 최적화된 유자의 알코올 추출 방법에 관한 것이다.

Description

골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING AND TREATMENT OF OSTEOPOROSIS}
본 발명은 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
골다공증은 조골세포와 파골세포의 평형이 무너져 골 흡수가 골 형성보다 항진됨으로서 유발되는 질병이다. 골다공증 발병시 골 조직의 석회가 감소되어 뼈의 치밀질이 엷어지고 그로 인해 골수강이 넓어지게 되며, 증세가 진전됨에 따라 뼈가 약해지기 때문에 작은 충격에도 골절되기 쉽다. 골다공증의 원인으로는 노령, 운동 부족, 저체중, 흡연, 저칼슘 식이, 폐경, 난소 절제 등이 알려져 있는데, 특히 여성의 경우 폐경기에 이르면 호르몬의 변화에 의해 골 감소가 급격히 진행된다.
현재 시판되고 있는 대부분의 골다공증 치료제는 에스트로겐 계통의 물질로서, 이들은 장기 투여할 경우 암, 담석, 혈전증 등의 부작용이 나타나는 문제점이 있다. 골다공증은 약물의 단기 투여만으로는 치료할 수 없고 약물의 장기 투여가 필수적인 질환이므로, 약물을 장기 투여할 때에도 상기와 같은 부작용이 없고 에스트로겐을 대체할 수 있을 만큼 우수한 약효를 갖는 새로운 물질의 개발이 필요하다.
종래 대부분의 골다공증 치료제는 파골세포와 조골세포 사이의 불균형의 조절에만 초점을 맞추고 있다. 그러나 골다공증은 골에 관여하는 세포 외에 골수 유래 지방세포에도 큰 영향을 받는다는 것이 알려지면서, 지방세포 형성을 억제하거나 존재하는 지방세포를 조골세포로 전환할 수 있는 약물 개발을 통한 골다공증의 예방 및 치료가 새로운 목표로 주목 받고 있다. 이는 조골세포와 지방세포는 동일한 전구체를 갖고, 노화가 진행됨에 따라 간엽 줄기세포로부터 조골세포의 분화는 줄어들고 지방세포로의 분화는 증가하는 것에 근거한 것이다.
한편, 유자는 한국, 중국, 일본을 비롯해 동북아시아에서 생산되는 감귤류의 일종이다. 한국산이 가장 향이 진하고 껍질이 두껍다. 국내 주요 산지로는 전라남도 고흥, 제주도 등이다.
유자의 주요 성분으로 비타민 C가 레몬보다 3배 많이 들어 있어 감기와 피부미용에 좋고, 노화와 피로를 방지하는 유기산이 많이 들어 있다. 그밖에 비타민 B와 당질, 단백질 등이 다른 감귤류 과일보다 많고 모세혈관을 보호하는 플라보노이드류 등이 들어 있어 뇌혈관 장애와 풍을 막아준다. 또한, 배농 및 배설작용을 해서 몸 안에 쌓여 있는 노폐물을 밖으로 내보낸다.
이러한 유자의 효능과 관련하여, 한국등록특허 제854,403호에는 유자씨를 에탄올 추출하고, 이를 건조시켜 수득한 건조 분말인 유자씨 추출물 분말과, 세절된 상엽을 에탄올 추출하고 이를 건조시켜 수득한 건조 분말인 상엽 추출물 분말이 3:7 내지 6:4(w/w)로 구성된 조성물을 포함하는 비만억제 효과를 나타내는 식품에 대해 개시하고 있다. 또한, 한국등록특허 제1,492,470호는 항동맥경화능이 증진된 유자씨 기름의 제조방법에 대해 개시하고 있고, 한국등록특허 제1,383,145호는 유자추출물을 포함하는 전립선 비대증 예방 및 치료를 위한 조성물에 대해 개시하고 있다.
그러나 유자의 골다공증 관련 효능에 대해서는 아직까지 밝혀진 바 없다.
본 발명은 골다공증 예방 및 치료 효능이 우수하고 장기간 복용하여도 부작용이 적은 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공하는 것을 목적으로 한다. 특히, 간엽 줄기세포로부터 지방세포로의 분화를 감소시키고, 조골세포 분화 및 활성을 촉진시킬 수 있는 기술을 개발코자 하였다.
본 발명은 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키는 것일 수 있다.
상기 알코올은 바람직하게 에탄올일 수 있다.
상기 추출물은 알코올 100ml에 대하여 유자의 과피 분말 0.1 내지 20g을 혼합하고, 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 추출하여 수득될 수 있다.
상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 경질 캡슐제, 연질 캡슐제 또는 주사제의 형태로 제형화될 수 있다.
상기 조성물은 희석제, 부형제, 붕해제, 결합제 및 활택제로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 함유할 수 있다.
다른 측면에서 본 발명은, 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
상기 조성물은 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키는 것일 수 있다.
상기 알코올은 바람직하게 에탄올일 수 있다.
상기 추출물은 알코올 100ml에 대하여 유자의 과피 분말 0.1 내지 20g을 혼합하고, 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 추출하여 수득될 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은, (a) 유자의 과피를 동결 건조하여 분말을 얻은 뒤, 알코올 100ml당 유자 분말 0.1 내지 20g을 혼합하는 단계; (b) 상기 혼합물을 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 교반하며 유효성분을 용출시키는 단계; 및 (c) 상기 추출 용액에서 고형분을 제거하고, 상등액만을 모아 농축하는 단계를 포함하는 골다공증의 예방 또는 치료용 유자 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
상기 (a) 단계에서 알코올에 혼합되는 유자 분말의 평균 입자 크기는 0.1 내지 0.5㎛인 것이 바람직하다.
상기 (b) 단계에서 추출 온도는 20 내지 30℃인 것이 바람직하다.
상기 (c) 단계의 농축액을 동결 건조하여 분말을 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 조성물은 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키는 것일 수 있다.
상기 알코올은 바람직하게 에탄올일 수 있다.
본 발명의 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물 및 건강기능식품은 간엽 줄기세포로부터 지방세포로의 분화를 감소시키고, 조골세포 분화 및 활성을 촉진시켜 골다공증 예방 및 치료 효능이 우수하고, 장기간 복용하여도 부작용이 적은 장점이 있다.
또한 본 발명의 유자 추출물의 제조방법은 유자의 골다공증 예방 및 치료 효능의 유효성분을 최대한 파괴하지 않으면서 골다공증 예방 및 치료 효능이 우수한, 최적화된 유자의 알코올 추출 방법에 관한 것이다.
도 1은 본 발명의 유자 추출물이 조골세포 분화 활성에 미치는 영향을 평가한 실시예 1에 따른 실험 결과이다.
도 2 및 도 3은 본 발명의 유자 추출물이 골다공증이 유도된 쥐의 골 형성에 미치는 영향을 평가한 실시예 2에 따른 실험결과이다.
도 4는 본 발명의 유자 추출물이 골다공증이 유도된 쥐의 지질 형성에 미 치는 영향을 평가한 실시예 3에 따른 실험결과이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다.
골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물
일 측면에서 본 발명은 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 유자의 알코올 추출물은 간엽 줄기세포로부터 지방세포로의 분화를 감소시키고, 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키므로, 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
상기 유자의 알코올 추출물의 추출시 사용된 용매는 에탄올일 수 있고, 상기 추출은 구체적으로 알코올 100ml에 대하여 유자의 과피 분말 0.1 내지 20g을 혼합하고, 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 추출하여 수득된 것일 수 있다. 본 발명에서 사용된 유자의 알코올 추출물의 바람직한 제조방법에 대해서는 하기에서 보다 상세히 설명하기로 한다.
본 명세서에서 용어 골다공증은 뼈의 양이 감소하고 질적인 변화로 인하여 뼈의 강도가 약해진 상태를 의미하고, 골다공증의 예방, 개선 및 치료라 함은 골 밀도 저하, 골 손실로 인한 각종 질병을 모두 포함하는 것으로 해석된다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며, 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 각각 통상적인 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 멸균 주사용액, 사전 충전식 주사 용액제의 형태 또는 동결건조된 형태로 제형화할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
제형화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 유효 성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제조할 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에도 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제도 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 통상적으로 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 다양한 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 함께 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등이 포함된다.
본 발명의 조성물은 상기 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 증상의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 조성물은 유효 성분이 1일 0.2㎎/㎏ 내지 200㎎/㎏으로 투여되도록 하는 것이 최적의 효능을 위해 바람직하다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고 수회 나누어 투여할 수도 있으나, 이에 한정되지 않는다.
골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품
다른 측면에서 본 발명은, 유자의 알코올 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
상기 유자의 알코올 추출물은 간엽 줄기세포로부터 지방세포로의 분화를 감소시키고, 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키므로, 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.
상기 유자의 알코올 추출물의 추출시 사용된 용매는 에탄올일 수 있고, 상기 추출은 구체적으로 알코올 100ml에 대하여 유자의 과피 분말 0.1 내지 20g을 혼합하고, 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 추출하여 수득된 것일 수 있다. 본 발명에서 사용된 유자의 알코올 추출물의 바람직한 제조방법에 대해서는 하기에서 보다 상세히 설명하기로 한다.
본 발명의 건강기능식품은, 비제한적으로 각종 음료, 껌, 차, 과자, 비타민 복합체, 건강 보조식품 등의 형태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품은 골다공증 개선을 목적으로 건강식품에 첨가되는 경우 또한 포함하며, 식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강기능식품의 바람직한 섭취량은 섭취자의 상태 및 체중, 증상의 정도, 식품 형태, 섭취 기간에 따라 다르며 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 유효 성분이 1일 0.2㎎/㎏ 내지 200㎎/㎏으로 섭취되도록 하는 것이 최적의 효과를 위해 바람직하다.
골다공증의 예방 또는 치료용 유자 추출물의 제조방법
또 다른 측면에서 본 발명은, (a) 유자의 과피를 동결 건조하여 분말을 얻은 뒤, 알코올 100ml당 유자 분말 0.1 내지 20g을 혼합하는 단계; (b) 상기 혼합물을 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 교반하며 유효성분을 용출시키는 단계; 및 (c) 상기 추출 용액에서 고형분을 제거하고, 상등액만을 모아 농축하는 단계를 포함하는 골다공증의 예방 또는 치료용 유자 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 유자 추출물의 제조방법을 단계별로 설명하면 다음과 같다.
우선, (a) 유자의 과피를 동결 건조하여 분말을 얻은 뒤, 알코올 100ml당 유자 분말 0.1 내지 20g을 혼합한다.
상기 유자 분말은 유자 과피를 동결 건조하여 수득되는데, 알코올에 혼합되는 유자 분말의 평균 입자 크기는 0.1 내지 0.5㎛인 것이 바람직하고, 0.25㎛ 내외인 것이 보다 바람직하다. 0.1 내지 0.5㎛의 평균 입자 크기를 갖는 유자 분말을 사용하는 경우 골다공증 예방의 유효성분의 파괴를 최소화하면서 단시간의 저온 추출에도 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있는 장점이 있다. 한편, 동결 건조하여 수득된 유자 분말의 입자 크기의 조절하기 위하여 분쇄기로 분말을 분쇄하거나 유자 분말을 체에 통과시켜 원하는 크기의 입자만을 선별하여 단계가 추가될 수 있다.
추출 용매로서 사용되는 알코올은 이에 제한되는 것은 아니나, 1 내지 4의 저급 알코올 또는 다가 알코올일 수 있고, 이들의 혼합물일 수도 있다. 바람직하게 상기 알코올은 에탄올이다. 에탄올을 추출 용매로 사용할 경우, 유효성분을 보다 효과적으로 추출함과 동시에 추출된 화합물의 복잡성을 줄일 수 있으며, 값이 싸고 독성이 적으며 제거하기 쉬운 장점이 있다.
추출 용매와 유자 분말의 비율은, 알코올 100ml당 유자 분말 0.1 내지 20g인 것이 바람직하고, 알코올 100ml당 유자 분말 5g 내지 15g, 특히 10g 내외를 사용하는 것이 보다 바람직하다.
다음으로는, (b) 상기 추출 용매와 유자 분말의 혼합물을 20 내지 60℃의 온도에서 12 내지 36시간 동안 교반하면서 유자로부터 골다공증 치료의 유효성분을 용출시킨다. 이 때, 추출 온도는 20 내지 30℃인 것이 보다 바람직하며, 25℃ 내외의 실온에서 추출하는 것이 가장 바람직하다. 추출 온도가 상기 범위보다 지나치게 높은 경우 유효성분이 파괴될 우려가 있고, 추출 온도가 낮은 경우 추출시간이 길어져 경제성이 떨어진다. 추출 시간은 추출 온도에 따라 변형될 수 있으나 24시간 전후인 것이 가장 바람직하다.
추출이 완료되면, (c) 상기 추출 용액에서 고형분을 제거하고, 상등액만을 모아 농축한다. 고형분과 상등액의 분리는 예를 들어 여과지를 이용하여 수행될 수도 있고, 원심분리하여 수행될 수도 있다. 추가로, 상기 (c) 단계의 농축액을 (d) 동결 건조하여 분말을 수득하는 단계를 포함할 수 있다.
이하, 하기 제조예 및 제제예를 통하여 본 발명의 유자 추출물의 제조방법 및 그의 약학 조성물 및 건강기능식품으서의 응용에 대해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 제조예 및 제제제예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
< 제조예 >
제조예 1. 유자 추출물의 제조
유자의 과피를 건조한 다음 분쇄기를 이용하여 분말화하였다. 이 때, 유자 분말의 평균 입자 크기는 0.1 내지 0.5㎛이다. 유자 분말 100g에 70부피%의 에탄올 수용액 500ml를 가하고 25℃에서 24시간 동안 교반하면서 추출한 후, 30분 동안 8,000℃에서 원심분리기(Beckman, 미국)를 이용하여 고형분을 제거하였다. 원심분리된 상등액만을 모아 감압농축한 후 동결건조하여 분말화하였다.
< 제제예 >
제제예 1: 산제의 제조
유자 분말(제조예 1) ----------------------------------- 300 mg
유당 ------------------------------ 100 mg
탈크 ------------------------------ 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2: 정제의 제조
유자 분말(제조예 1) ------------------------------------ 50 mg
옥수수전분 ------------------------------ 100 mg
유당 ------------------------------ 100 mg
스테아린산 마그네슘----------------------------- 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3: 캡슐제의 제조
유자 분말(제조예 1) ------------------------------------- 50 mg
*옥수수전분 ------------------------------ 100 mg
유당 ------------------------------ 100 mg
스테아린산 마그네슘----------------------------- 2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4: 주사제의 제조
유자 분말(제조예 1) ------------------------------------ 50 mg
주사용 멸균 증류수--------------------------- 적량
pH 조절제 ----------------------------- 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5: 액제의 제조
유자 분말(제조예 1) ----------------------------------- 100 mg
이성화당 ------------------------------ 10 g
만니톨 ------------------------------ 5 g
정제수 ------------------------------적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6: 건강 식품의 제조
유자 분말(제조예 1) ----------------------------------- 1000 ㎎
비타민 혼합물 ------------------------------ 적량
비타민 A 아세테이트-------------------------- 70 ㎍
비타민 E ------------------------------ 1.0 ㎎
비타민 B1 ------------------------------ 0.13 ㎎
비타민 B2 ------------------------------- 0.15 ㎎
비타민 B6 ------------------------------ 0.5 ㎎
비타민 B12 ------------------------------ 0.2 ㎍
비타민 C ------------------------------ 10 ㎎
비오틴 ------------------------------- 10 ㎍
니코틴산아미드 ------------------------------ 1.7 ㎎
엽산 ---------------------------------- 50 ㎍
판토텐산 칼슘 ------------------------------ 0.5 ㎎
무기질 혼합물------------------------------- 적량
황산제1철 ------------------------------ 1.75 ㎎
산화아연 ------------------------------ 0.82 ㎎
탄산마그네슘 ------------------------------ 25.3 ㎎
제1인산칼륨 ---------------------------- 15 ㎎
제2인산칼 ------------------------ 55 ㎎
구연산칼륨 -------------------------- 90 ㎎
탄산칼슘 -------------------------------- 100 ㎎
염화마그네슘------------------------------- 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7: 건강 음료의 제조
유자 분말(제조예 1) ----------------------------------- 1000 ㎎
구연산 ------------------------------ 1000 ㎎
올리고당 ---------------------------- 100 g
매실농축액 ----------------------------- 2 g
타우린 ------------------------------ 1 g
정제수를 가하여 전체 ------------------------ 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요 계층이나, 수요 국가, 사 용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이하, 하기 실시예를 이용하여 본 발명에 따른 유자의 알코올 추출물이 갖는 골다공증 치료 및 예방 활성 효과를 보다 상세하게 설명한다.
< 실시예 >
실시예 1. 조골세포 분화 활성에 미치는 영향 측정
(1) 세포의 생존률
유자 추출물의 농도에 따른 조골세포의 생존에 미치는 영향을 측정하기 위하여, 마우스 유래의 MC3T3-E1 세포에 50㎍/ml, 100㎍/ml, 200㎍/ml, 400㎍/ml의 유자 추출물을 첨가하고 48시간 후 생존률을 측정하였다. 실험 결과 유자 추출물을 첨가한 모든 군에서 증가된 세포 성장률을 나타냈고, 특히 100㎍/ml 이상의 유자 추출물을 첨가한 군에서 현저히 증가된 세포 성장률을 나타내었다 (도 1A 참조).
(2) ALP 활성 효과
ALP(alkaline phosphate) 활성을 측정함으로써 유자 추출물이 조골세포 활성에 미치는 영향을 알아보았다. 먼저, 조골세포 분화를 유도하기 위해 24-well plate에 세포를 well당 5X104로 seeding하여 2일 동안 배양한 다음 분화유도배지 (50 ㎍/mL L-ascorbic acid와 10mM β-glycerophosphate)에 샘플을 함께 넣고 배양하였다. 3일 마다 배지 교환시, 분화유도제와 유자 추출물을 농도별로 함께 처리하였다.
분화 유도가 종료되면, PBS로 2회 세척하고, 0.2% Triton-X-100 lysis buffer (kit제품 사용)를 well당 80 ㎕를 넣은 다음 lysis하였다. 10분간 4°C에서 교반 추출 후 2500 X g에서 10분간 원심분리를 하여 상등액을 분리하였다.
상등액은 20 ㎕씩 96-well plate에 분주한 상등액에 pNPP solution(kit제품)을 20ul씩 well에 첨가하였다. 첨가한 후 37℃ incubator에서 30분간 반응 후 stop solution을 15ul씩 넣어 반응을 중지하고 405 nm에서 흡광도를 측정하여 ALP 효소에 의해 p-nitrophenol로 전환된 양을 산출하였다. 세포수에 의해 ALP 활성도에 영향을 미칠 수 있으므로, 총 단백질의 양을 측정하여 ALP 활성도를 조정하였다.
그 결과 유자 추출물을 MC3T3-E1 세포에 50㎍/m, 100㎍/m, 200㎍/ml 첨가하였을 때, 첨가하지 않은 경우에 비해 모든 농도에서 농도 의존적으로 ALP 활성이 증가하였고, 특히 50㎍/ml 이상 첨가한 경우에는 양성 대조군(에스트로겐 100nM로 처리)보다도 ALP 활성이 우수함을 확인할 수 있었다(도 1B 참조). ALP는 조골세포의 분화에 발현되는 바이오 마커로써 유자 추출물이 조골세포의 분화를 촉진하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
(3) 골석회화 형성능
분화 유도된 세포를 4% formalin으로 상온에서 10-30분간 또는 4℃에서 overnight 고정한 다음 증류수로 2-3차례 씻어냈다. Alizarin Red (0.4g/20mL, pH 4.6) 용액을 각 well에 넣고 5분간 염색을 실시하였다. 증류수로 수차례 씻어낸 다음 1mM sodium phosphate에 녹인 10% acetylchloride 1mL을 넣고 shaker에서 20분간 shaking하여 Alizarin Red 염색을 녹여 낸 후 562nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험 결과 유자 추출물은 농도에 비례하여 Alizarin 염색과 흡광도가 증가하는 것을 확인하였다. 골석회화 형성능은 조골세포의 분화에 중요한 바이오 마커로서 Alizarin은 무기질화된 세포의 기질에 염색되므로 석회화된 양과 염색정도가 상호 비례하는 바, 본 발명의 유자 추출물에 조골세포의 석회화 형성능이 있음을 확인할 수 있었다 (도 1C 및 도 1D 참조).
실시예 2. 골다공증에 미치는 영향 측정
유자 추출물이 골다공증이 유도된 쥐의 골 형성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 2개월의 암컷 쥐를 정상군(SHAM), 골다공증을 유도한 난소 절제군(OVX), 여성호르몬(17-beta-estradiol)을 주입한 난소 절제군(OVX+Es), 상기 제조예 1에서 수득한 유자 추출물을 5%/kg d1et/day씩 사료에 섞어 10주간 식이한 난소절제군(OVX+유자)의 4개군의 쥐를 준비하고, 다음과 같은 실험을 수행하였다.
(1) 골다공증 유도 쥐의 몸무게, 섭취량 및 자궁 무게 변화
상기 4개 군의 쥐에 대하여, 10주 후 몸무게의 변화, 섭취량 및 섭취 효율, 간의 무게, 지방의 무게, 자궁의 무게를 측정하고 그 결과를 표 1에 나타내었다.
- SHAM OVX OVX + Es OVX +유자
초기 체중(g) 206.0±56 212.3±37 207.3±72 211.2±37
최종 체중(g) 374.0±68 436.5±65### 276.1±58*** 399.4±26**
섭취량(g) 15.9±38 16.5±68 11.7±31 16.5±86
섭취 효율
(FER, %)		 13.7±99 17.2±58 14.9±70 13.4±10.51
간(g) 11.08±68 10.48±47 9.18±29* 9.95±0.61
지방(g) 32.5±2 44.2±7# 26.5±0*** 38.4±0.9*
자궁(g) 1.81±25 0.16±01### 0.76±03*** 0.24±0.01**
1) SHAM: 정상군
2) OVX: 난소 절제군
3) OVX+ES: 여성 호르몬(17-beta-estradiol)을 주입한 난소 절제군
4) OVX+유자: 유자 추출물을 주입한 난소절제군
# p < 0.05, ### p < 0.001 OVX vs. SHAM; * p < 0.05, * * p < 0.01, *** p < 0.001, OVX +Es, OVX+유자 vs. OVX.
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따라 유자 추출물을 주입한 군(OVX+유자)에서는 난소를 절제한 군(OVX)에 비해 증가한 체중이 유의하게 감소하는 것을 관찰하였다. 또한, 난소를 절제한 군에서 감소된 자궁의 무게는 유자 추출물이 투여된 군에서 유의하게 회복되는 것을 확인할 수 있었다.
따라서 본 발명에 따른 유자 추출물은 골다공증을 갖는 쥐의 체중을 유의하게 감소시키고 작아졌던 자궁을 회복시킴으로써 골다공증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
(2) 골다공증 유도 쥐의 ALP 변화
ALP, 오스테오칼신은 골형성 마커로 사용된다. 상기 4개 군의 쥐에 대하여, 총 혈중 ALP, Bone specific ALP 및 오스테오칼신(osteocalcin) 농도를 각각 측정하였다. 실험 결과, 유자 추출물을 주입한 군(OVX+유자)은 난소를 절제한 군(OVX)에서 증가한 총 혈중 ALP 농도 및 bone specific ALP 농도가 유의하게 하였으며, 양성 대조군인 여성호르몬을 주입한 난소 절제군(OVX+Es)에서도 유사한 결과를 얻을 수 있었다(도 2A 및 도 2B 참조).
이러한 실험 결과로부터 유자 추출물이 골형성을 증가함으로써 골다공증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
(3) microCT 측정을 통한 골밀도와 뼈의 미세구조 변화
본 발명에 따른 유자 추출물이 뼈의 회복에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 상기 4개 군의 쥐에 대하여, 경골부(tibia)를 이용 microCT 촬영을 통해 뼈의 미세구조를 확인하고, 골밀도(bone mineral density; BMD), 골량/총량(bone volume/ total volume; BV/TV), 골소주의 공간(trabecular space; Tb.Sp) 및 골소주 수(trabecular number; Tb.N)를 각각 측정하였다.
실험 결과, 유자 추출물을 주입한 군(OVX+유자)은 난소 절제군(OVX)에서 보여지는 엉성한 뼈의 미세구조가 치밀해진 것을 확인할 수 있었고(도 3A 참조), 낮아진 골밀도(BMD)도 높아진 것을 확인하였다(도 3B 참조). 또한, 유자 추출물을 주입한 군의 경우(OVX+유자) 난소 절제군(OVX)에 비해 유의적으로 (BV/TV)이 높고(도 3C 참조), 골소자간의 간격(Tb.Sp)는 유의적으로 높아졌고(도 3D 참조), 골소주의 수(Tb.N)가 증가하였다 (도 3D 참조).
따라서, 본 발명에 따른 유자 추출물은 골다공증시 약해진 뼈의 골밀도 증가 및 뼈의 미세구조의 회복시킴으로써 골다공증을 회복시킴을 알 수 있었다.
실시예 3. 지질 형성에 미치는 영향 측정
유자 추출물이 골다공증이 유도된 쥐의 지질 형성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 상기 실시예 2에서 준비한 4개 군의 쥐에 대하여 TG(triglyceride), Total-C(Total-cholesterol), HDL-C, LDL-C를 측정하였다. 측정 결과, 유자 추출물을 주입한 군의 경우(OVX+유자) 난소 절제군(OVX)에 비해 TG 및 Total-C, LDL-C 값이 감소하였고(도 4A, 도 4B, 도 4D 참조), HDL-C는 증가한 것을(도 4C 참조) 확인할 수 있었다. 즉, 본 발명에 따른 유자 추출물이 혈중 지질을 감소시킴으로써 골다공증에도 효능을 나타내고 있음을 확인할 수 있었다.

Claims (16)

  1. 삭제
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  11. (a) 유자의 과피를 동결 건조하여 분말을 얻은 뒤, 알코올 100ml 당 평균 입자 크기가 0.1 내지 0.5㎛인 유자 분말을 5 내지 15g 혼합하는 단계;
    (b) 상기 혼합물을 20 내지 30℃의 온도로 12 내지 36시간 동안 교반하며 유효성분을 용출시키는 단계; 및
    (c) 상기 추출 용액에서 고형분을 제거하고, 원심분리 후 상등액만을 모아 농축한 농축액을 동결 건조하여 분말을 수득하는 단계를 포함하는 골다공증의 예방 또는 치료용 유자 추출물의 제조방법.
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 제 11항에 있어서, 상기 추출물이 조골세포 분화 및 활성을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 유자 추출물의 제조방법.
  16. 제 11항에 있어서, 상기 알코올이 에탄올인 것을 특징으로 하는 유자 추출물의 제조방법.

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Non-Patent Citations (1)

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최은미 등. 덕성여자대학교 식물자원연구소 논문집. 2009. Vol. 8, pp. 25-37*

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