KR101759436B1 - 광곽향 추출물을 포함하는 간 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
광곽향 추출물을 포함하는 간 질환 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 간 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있는 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 광곽향 추출물을 이용하여 혈중 ALT, IL-6 농도 및 간장 내 TLR 4 단백질 발현양을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 구체적으로 확인하였는바, 간 질환의 예방 또는 치료에 있어서, 보다 근본적으로 접근하여 타겟 치료를 할 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 포함하는, 간 질환 예방 또는 치료용 조성물로서, 보다 구체적으로는 광곽향 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
간은 우리 몸에서 지질 등의 대사 작용, 해독, 담즙의 배설, 각종 영양소의 저장, 조혈이나 혈액 응고, 및 순환 혈액량의 조절 등 다양한 역할을 담당하고 있으며, 생명 유지를 위한 필수적인 장기 중 하나이다.
간의 기능을 보다 구체적으로 살펴보면, 우선, 에너지 대사를 관리하는 기능이 있어 음식물에서 흡수된 모든 영양소들이 간에서 에너지를 생산할 수 있는 물질로 대사되어 전신에 공급되거나 저장된다. 둘째, 간은 약 2,000 여종의 효소, 알부민, 응고 인자들의 혈청 단백질, 담즙산, 인지질, 콜레스테롤 등의 지방 등을 합성하고 저장하며 분배하는 기능이 있다. 셋째, 해독 및 분해 기능으로서 약물, 술, 독성물질 등을 해독시키므로 간세포가 손상되기 쉽고 따라서 약물성, 독성, 알코올성 간 질환 등이 흔히 발생하게 된다. 또한, 각종 대사산물을 십이지장으로 배설하는 기능 및 면역기능이 있어 생명 유지에 중요한 역할을 하고 있다.
한편, 일반적으로 간에 염증이 생기는 간염이 간질환의 대부분을 차지하며, 양상에 따라 급성 간염과 만성 감염, 원인에 따라 바이러스성 간염, 알콜성 간염, 약물성 간염 등으로 나눌 수 있다. 또한, 이런 이상으로 유발되는 간질환에는 지방간, 간염, 간경변증, 간암 등이 있다. 간질환의 진행 과정의 기전은 완전히 밝혀지지는 않았으나 일차적으로 지방간이 발생된 후 이차적인 세포 손상이 수반되어 지방간염 및 간경화 등의 진행성 간질환으로 발전하는 것으로 알려져 있다. 또한, 간 질환은 초기에 자각증상이 없어 상당히 진행되어서야 발견되기 때문에, 국내뿐만 아니라 세계적으로 사망원인의 수위를 차지하고 있는 실정이다.
현재, 일반적으로 이용되고 있는 간 질환의 치료방법은 크게 식이요법과 약제요법으로 구분되며, 대부분의 경우에 이 두 가지 방법을 병용하고 있다. 간질환에 대한 약제요법에서는 간질환의 발병 원인 및 종류에 따라 다양한 작용기전을 갖는 약제들이 이용될 수 있는데, 예를 들면 우루소데옥시콜린산 (ursodexoycholic acid), 실리마린 (silymarine), 바이페닐디메틸디 카복실레이트 (biphenyldimethyldicarboxylate, DDB), 글루타티온 (glutathione), 오로트산 카르니틴 (carnitine orotate), 글리시르히진(glycyrrhizin), 종합 비타민제 등과 같은 간세포 재생 촉진제 및 간 기능 보조제, 아시클로바 (acyclovir)와 같은 항바이러스제, 코티코스테로이드 (corticosteroid), 6-머캅토퓨린 (6-mercaptopurine, 6-MP), 아자티오프린 (azathioprine) 등과 같은 면역억제제, D-페니실아민 (penicillamine) 같은 섬유화 억제제 등의 약제가 일반적으로 사용되고 있다. 그러나, 이들 약제들의 제한적인 간 보호 효과와 부작용 등에 의해 근본적인 간 질환 치료에 어려움을 겪고 있다.
이와 같은 배경 하에서, 오늘날 생체 적합성이 우수하고, 부작용의 우려가 적은 천연물 유래 간질환 치료제에 대한 관심이 고조되고 있으며, 주요한 과제의 대상이 되고 있으나, 대다수의 천연물의 경우, 유효 용량뿐 아니라 정확한 약리효과에 대한 기초연구 결과가 미약하여 간 질환 치료제로의 이용에 어려움을 겪고 있다.
한편, 꿀풀과에 속하는 광곽향은 "Pogostemonis Herba"라는 학명으로 필리핀, 인도, 중국 남부 등에서 널리 재배되고 있다. 광곽향은 다년생 초목인 Pogostemon cablin Bentham의 지상부를 건조한 것으로서, 파코울리 알코올(pachouli alcohol), 유제놀(eugenol), 신나믹 알데히드(cinnamic aldehyde), 파고스톨(pagostol), 파코울리 피리딘(pachouli pyridine) 등의 정유를 약 1.5% 정도 함유하는 것으로 알려져 있으며, 궤양성 대장염 (ulcerative colitis) 또는 크론병 (Crohn's disease)과 같은 염증성 장 질환의 치료 효과에 대해 보고된 바 있으나 (한국공개특허 10-2010-0136636), 간 질환과 관련된 치료효과는 보고된 바가 미미하다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 광곽향 추출물에 의한 혈중 ALT, IL-6 농도 및 간장 내 TLR4 단백질 발현양 감소 효과를 확인하고 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명의 목적은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 광곽향 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상 용매로 추출할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 간 질환은 간염, 간독성, 담즙울체, 지방간, 간경변, 간 허혈, 알코올성 간 질환, 간 농양, 간성 혼수, 간 위축증 및 간암으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 혈중 ALT (alanine aminotransferase) 및/또는 IL-6 (interleukin 6) 농도 증가를 억제시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 조성물은 간장 내 TLR(Toll-like receptor) 4 단백질 발현양의 증가를 억제시킬 수 있다.
본 발명은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 간 질환의 치료방법을 제공한다.
본 발명은 간 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약제를 생산하기 위한 광곽향 추출물의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하며, 상기 광곽향 추출물을 이용하여 혈중 ALT, IL-6 농도 및 간장 내 TLR4 단백질 발현양을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 구체적으로 확인하였는바, 간 질환 예방 또는 치료하기 위한 약학 조성물로 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 광곽향 추출물 투여 (25, 50 mg/kg)에 따른 혈중 ALT (alanine aminotransferase) 활성 변화를 비교한 결과이다.
도 2는 광곽향 추출물 투여 (25, 50 mg/kg)에 따른 혈중 IL-6 (interleukin 6) 농도 변화를 비교한 결과이다.
도 3은 광곽향 추출물 투여 (25, 50 mg/kg)에 따른 간장 내 TLR (Toll-like receptor) 4 단백질 발현양 변화를 비교한 결과이다.
도 2는 광곽향 추출물 투여 (25, 50 mg/kg)에 따른 혈중 IL-6 (interleukin 6) 농도 변화를 비교한 결과이다.
도 3은 광곽향 추출물 투여 (25, 50 mg/kg)에 따른 간장 내 TLR (Toll-like receptor) 4 단백질 발현양 변화를 비교한 결과이다.
본 발명은 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.
특히, 본 발명은 천연물로부터 추출하여 장기간 복용해도 종래 치료제가 지닌 부작용이 미미하며, 간세포 괴사 및 간 손상에 따른 염증반응 억제효과를 가지므로 효과적으로 간 질환을 예방하거나 치료할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "광곽향 (Pogostemonis Herba)"은 꿀풀과에 속하며, 필리핀, 인도, 중국 남부 등에서 널리 재배되고 있는 식물로서, 다년생 초목인 Pogostemon cablin Bentham의 지상부를 건조한 것을 일컫는다. 또한, 파코울리 알코올 (pachouli alcohol), 유제놀 (eugenol), 신나믹 알데히드 (cinnamic aldehyde), 파고스톨 (pagostol), 파코울리 피리딘 (pachouli pyridine) 등의 정유를 약 1.5% 정도 함유하는 것으로 보고된 바 있다. 한편, 광곽향과 유사한 학명을 갖는 곽향 (Agastache rugosa; 배초향)은 그 기원종 속과 종이 전혀 다른 것으로서, 배초향 (곽향)은 일년생 초목인 배초향의 전초를 건조시킨 것이다.
본 발명에서, 광곽향 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 본 발명에서 광곽향 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상 용매를 사용하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 물을 사용할 수 있다. 물은 보건부 기준하여 음용 기준에 적합한 물을 말하는 것으로, 일반적으로 여과기나 정수기 등으로 여과시킨 정제수, 멸균수, 음이온수 등의 물이나 수돗물, 생수 등을 사용할 수 있다. 광곽향 추출물을 추출하는 방법은 열수 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 초음파 추출 등의 다양한 방법을 통하여 추출할 수 있지만, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
상기 제조된 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 용매로 추출한 추출물은 이후, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 분획과정을 더욱 실시할 수도 있다. 상기 분획 시 온도는 4℃ 내지 120℃일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
한편, 본 발명의 조성물에 의한 개선, 예방 또는 치료 대상 질병인 "간 질환"은 간이 수행하는 여러 가지 기능 중 한 가지 이상의 기능에 문제가 생겨 정상적으로 대사를 수행할 수 없는 것을 말한다. 간질환에서 가장 많이 나타나는 것은 간염으로 급성 간염과 만성 간염으로 나뉘며, 일반적으로는 급성 간염이 치료하기 쉽고 양성에 속한다. 급성간염은 원인별로 바이러스성 간염, 알코올성 간염, 중독성 간염 등이 있으며, 간질환 중 현재 가장 많이 발견되는 것은 바이러스에 의한 간염이다. 상기 간질환은 본 발명의 광곽향 추출물을 이용하여 치료될 수 있는 간질환은 제한 없이 포함될 수 있으나, 그 예로 간염, 간독성, 담즙울체, 지방간, 간경변, 간허혈, 알코올성 간 질환, 간 농양, 간성 혼수, 간 위축증 및 간암일 수 있다.
본 발명의 광곽향 추출물은 혈중 ALT (alanine aminotransferase) 및/또는 IL-6 (interleukin 6) 농도 증가의 억제를 통해 간 질환의 치료 또는 예방을 수행할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "ALT (alanine aminotransferase)"는 알라닌 아미노전이효소라고도 하며, 간세포에 다량 존재하는 효소로 간질환에 특이적인 지표가 되는 효소이다. ALT의 정상범위는 혈청 1 리터당 7~56 단위이다. 상기 효소는 아미노 그룹을 공여 분자에서 수여분자로 전이시키는 세포내의 화학반응을 촉매하며, 간세포에 다량 존재하므로 간 상태를 나타내는 특이적인 지표로 이용된다.
또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "IL-6 (interleukin 6)"는 지방세포나 대식세포 등에서 생성되는 염증성 사이토카인의 하나로서, 염증반응의 생물학적 지표로 이용된다.
본 발명의 광곽향 추출물은 간 조직에서 TLR (Toll-like receptor) 4 단백질 발현양 증가의 억제를 통해 간 질환의 치료 또는 예방을 수행할 수 있다.
또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "TLR (Toll-like receptor) 4 단백질"은 세균, 바이러스, 기생충 등의 병원체에 대한 초기단계의 생체방어의 자연면역에서 병원체를 구성하고 있는 성분의 특유한 분자패턴을 직접, 인식하는 수용체의 하나로서, 그람음성세균유래 지질다당(LPS)을 인식하는 지표로 이용된다.
한편, 본 발명에서 사용되는 용어, "예방"은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 간 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명에서 사용되는 용어, "치료"는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 비만 또는 지질관련 대사성 질환에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 100 내지 500 mg을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에서는 간 허혈을 유발시킨 후, 재관류 시킨 실험동물에 광곽향 추출물을 투여함으로써, 간 손상에 따른 치료 효과를 확인하고자 하였다 (실시예 1 참조). 그 결과, 광곽향 추출물을 투여한 군에서, 간 손상 및 염증반응을 나타내는 지표인 혈중 ALT, IL-6 농도 및 TLR 4 단백질 발현양의 감소를 확인하였는바, 간 질환 치료를 위한 조성물로 매우 유용하게 사용될 수 있음을 구체적으로 확인하였다 (실시예 2 내지 4 참조).
이에, 본 발명의 다른 양태로서, 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공 할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개선"이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이때, 상기 기능성 식품 조성물은 간 질환의 예방 또는 개선을 위하여 해당 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "건강기능식품"이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 이는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
상기 광곽향의 양은 전체 건강기능식품 중량의 0.001 중량% 내지 90 중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 40 중량%로 포함할 수 있고, 장기간 섭취 용도일 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으나, 유효성분이 안전성 면에서 아무런 문제가 없어 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있기 때문에 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학적/식품 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 간 질환의 치료방법을 제공한다. 본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 실험준비 및 실험방법
1-1. 광곽향 추출물 추출
표준품 규격의 광곽향 (한약재나라) 100 g을 준비하였다. 상기 광곽향을 3차 증류수를 추출용매로 이용하여 6시간 동안 55~60℃에서 환류하여 온침을 3회 실시하였다. 추출액을 여과 후, 감압농축을 통하여 3차 증류수를 제거하고 광곽향 추출물을 수득하였다. 최종 광곽향 추출물의 수득률은 8%였다.
1-2. 실험 동물
실험 동물은 ㈜ 대한바이오링크로부터 ICR계 웅성 생쥐 (27-29 g)를 공급받아 1 주일 동안 순화시킨 후 실험에 사용하였다. 모든 실험 동물은 온도 및 12시간 간격으로 명암이 조절되는 실험실에서 순화하였으며, 고형 사료 (대한바이오링크) 및 물은 자유롭게 섭취시켰다. 모든 동물 실험은 성균관대학교 약학 대학 동물 실험 윤리위원회의 승인을 받았으며, National Institutes of Health의 가이드라인 (NIH publication No. 86-23, revised 1985)에 따라 실험하였다.
1-3. 간 허혈 수술
생쥐를 18시간 동안 절식시킨 후 케타민 (ketamine, 6 mg/kg) 및 자일라진 (xylazine, 8 mg/kg)으로 마취시켰으며, 복부 정중선을 따라 개복하여 문맥의 왼쪽분지와 간장 내 산소 공급에 주된 역할을 하는 간동맥 및 담관을 클램핑하여 60분간 허혈을 유발시킨 후 클램프를 제거하여 재관류를 일으켰다. 재관류 5시간에 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취하고 간의 좌엽 및 중앙엽을 적출하여 -80℃에 보관 후 분석에 사용하였다. 대조군은 문맥의 왼쪽분지, 간 동맥 및 담관에 클램프만을 놓지 않고 모든 시험법을 위와 동일하게 시행하였다. 광곽향 추출물은 수술 2일 전부터 1일 1회 동일한 시각에 경구 투여하였으며 (간 허헐 수술 전 48시간 및 24시간), 수술 당일에는 수술 전 1시간에 경구 투여하였다.
1-4. 통계분석
모든 실험결과는 평균 ± 표준오차로 나타내었고 자료 분석은 unpaired student's t-test를 이용하여, P<0.05 수준에서 통계학적 유의성을 검정하였다.
실시예 2. 광곽향 추출물이 간 허혈 및 재관류 시 혈중 ALT 활성에 미치는 영향 확인
광곽향 추출물 투여에 따른 혈중 ALT (Alanine Aminotransferase) 활성 변화는 IVDLab kit (아이비디랩, 한국)를 사용하여 분광광도계 (spectrophotometer, UV-1601, Simadzu, 일본)로 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 간세포 괴사의 지표인 혈청 내 ALT 활성은 대조군 (sham)에서 44.0 ± 12.5 U/L 였던 반면, 간 허혈을 유발시킨 후, 재관류 시킨 군 (IR)에서는 종전 대조군에 비해 242.6배 높은 활성을 나타내었다. 다만, 이러한 ALT 활성은 광곽향 추출물을 25 또는 50 mg/kg 씩 투여한 군에서 유의적으로 억제되었으며, 농도 의존적인 경향을 보였다. 상기 결과는 광곽향 추출물을 투여함으로써, 간세포 괴사를 효과적으로 억제시킬 수 있음을 의미한다.
실시예 3. 광곽향 추출물이 간 허혈 및 재관류 시 혈중 IL-6 농도에 미치는 영향 확인
광곽향 추출물 처치에 따른 혈중 인터루킨-6 (IL-6) 농도 변화는 IL-6 ELISA 키트 (eBiosciences Co., San Diego, CA, 미국)를 사용하여 정량하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 혈중 염증 지표인 IL-6 수준은 대조군 (sham)에서 55.3 ± 2.3 pg/mL 였던 반면, 간 허혈을 유발 시킨 후, 재관류 시킨 군 (IR)에서는 종전 대조군에 비해 17.5배 높은 농도를 나타내었다. 다만, 이러한 IL-6 농도는 광곽향 추출물을 25 또는 50 mg/kg 씩 투여한 군에서 유의적으로 억제되었으며, 농도 의존적인 경향을 보였다. 상기 결과는 광곽향 추출물을 투여함으로써, 간 손상에 의한 염증반응을 최소화시킬 수 있음을 의미한다.
실시예
4.
광곽향
추출물이 간 허혈 및
재관류
시 간장 내
TLR
4 단백질
발현양에
미치는 영향 확인
광곽향 추출물 처치에 따른 간장 내 TLR (Toll-like receptor) 4 단백질 발현양 변화는 하기와 같은 방법으로 확인하였다.
간 조직을 PRO-PREPTM protein extraction solution (iNtRON Biotechnology Inc., 한국)에 10배 부피로 균질화하여 단백질을 추출한 후 10,000 x g, 4℃에서 15 분간 원심분리하여 상층액만을 취하였다. 채취한 상층액을 BCA protein assay kit (Pierce Biotechnology, IL, 미국)를 이용하여 정량한 후, 2 x Western sample buffer와 1:1로 혼합하여 끓는 물에서 7 분 동안 가열 및 변성시켰다. 단백질 샘플을 SDS-PAGE로 분리한 후 Semi-Dry Trans-Blot Cell (Bio-Rad Laboratories, CA, 미국)을 이용하여 polyvinyllidene fluoride membrane (Millipore, MA, 미국)에 전기영동 하였다. 전기영동한 membrane을 TBS/T로 세척한 후 5% (w/v) skim milk를 넣은 TBS/T로 상온에서 1 시간 동안 blocking하였다. 1차 항체와 4℃에서 12 시간, 2차 항체와 상온에서 1 시간 동안 반응시킨 후 ECL detection system (iNtRON Biotechnology Inc.)을 이용하여 발색시켰다. 각각의 밴드는 TOTALLAB TL 120 software (Nonlinear Dynamics Ltd., Newcastle, 영국)을 이용하여 정량하였다. 사용한 1차 항체는 다음과 같다: TLR4 (1:2500 희석, Santa cruz biotechnology Inc., CA, 미국) 및 β-actin (1:5000 희석, Sigma Aldrich, MO, 미국). 평가 결과는 β-actin으로 표준화하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 간 조직 내 TLR4의 단백질 발현양은 대조군 (sham)에 비해 1.6배 현저히 증가하였다. 이러한 TLR4의 단백질 발현양은 광곽향 추출물을 25 또는 50 mg/kg 씩 투여한 군에서 유의적으로 억제되었으며, 농도 의존적인 경향을 보였다. 상기 결과는 광곽향 추출물을 투여함으로써, 간 조직 내 염증반응을 최소화시킬 수 있음을 의미한다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (6)
- 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간허혈 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 조성물은 혈중 ALT (alanine aminotransferase) 또는 IL-6 (interleukin 6)의 농도 증가를 억제하며, 간장 내 TLR (Toll-like receptor) 4 단백질의 발현량을 억제하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 광곽향 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상 용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 광곽향 (Pogostemonis Herba) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 간허혈 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KIM, SUNGPHIL et al., J. Agric. Food Chem. 2012, Vol. 60, pp. 12122-12130, 2012.11.27. 공개* |
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