KR20130020095A - 멀꿀 추출물을 포함하는 간 보호용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 멀꿀 추출물 또는 간 보호용 조성물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물 또는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 멀꿀 추출물은 식용으로 사용되는 식물 유래 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 간 독성 물질인 사염화탄소 또는 아세트아니모펜(APAP)을 처리한 간독성 유도 실험동물 모델에서 유의적으로 지질과산화를 억제하고, 혈청 중 GOT 및 GPT 수치 증가를 억제하며, 사이토크롬 P450의 mRNA 발현량을 효과적으로 억제하여, 간 보호, 간 손상 예방 및 간 기능 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 간 질환 치료 또는 예방용 의약 조성물 또는 간 기능 개선 또는 간 보호용 식품 조성물 뿐만 아니라, 피로회복 또는 숙취해소와 관련된 다양한 용도로 응용될 수 있다.

Description

멀꿀 추출물을 포함하는 간 보호용 조성물{HEPATOPROTECTIVE COMPOSITION CONTAINING STAUNTONIA HEXAPHYLLA EXTRACT}

본 발명은 간 보호 효과가 있는 식물 추출물, 구체적으로 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다.

간은 인간의 신체 장기 중 생체 내 대사가 가장 활발하게 일어나는 장기로 인체 내 장기 중 가장 큰 장기이기도 하다. 상기 간은 소화기계와 전신순환계 사이에 위치하면서 외부에서 들어온 생체 외 물질로부터 전신을 방어하는 기능을 수행하고 있다. 또한, 상기 간은 각종 대사작용, 해독, 분해, 합성 및 분비를 담당하는 매우 중요한 장기이다.

보다 구체적으로, 상기 간은 에너지 대사를 관리하는 기능이 있어, 음식물에서 흡수된 모든 영양소들이 간에서 에너지를 생산할 수 있는 물질로 대사되어 전신에 공급되거나 저장되며, 약 2,000여종의 효소, 알부민, 응고인자들의 혈청단백, 답즙산, 인지질, 콜레스테롤 등의 지방 등이 간에서 합성되고 저장되며 분배된다. 또한 간은 각종 대사산물을 담관을 통해 십이지장으로 배설하는 기능 및 면역기능이 있어 우리의 생명유지에 중요한 역할을 하고 있다. 또한, 해독 및 분해 기능으로서 간에서 약물, 술, 독성물질 등을 해독시키므로, 간세포는 손상되기 쉽고 따라서 약물성, 독성, 알코올성 간질환 등이 흔히 발생할 수 있다. 또한, 생체 내로 들어온 생체 외 물질은 일단 간을 통과하게 되므로 간은 영양소 이외에도 많은 독성물질에 노출될 위험이 다른 장기 보다 많아 그 만큼 손상될 확률도 매우 높다.

간은 재생능력이 우수한 장기로 약간의 손상이 있을 경우에는 충분히 정상으로 회복되지만, 손상이 지속될 경우에는 간 조직의 일부가 완전히 파괴되고 간 기능도 저하되는 등 정상 간으로의 회복이 어려운 상태가 된다. 이러한 간 손상이 만성화되면 그 원인에 상관없이 간 섬유화 또는 간경화, 간암으로 진행된다. 간 섬유화, 간경화, 간암 등은 현재 뚜렷한 치료제 및 치료법이 없는 질환으로 그 사망률 또한 높은 질환이다. 그러므로, 간 손상이 만성화되기 전에 이러한 간 손상을 예방 및 치료하는 것이 간 섬유화, 간경화 또는 간암으로의 진행을 억제하는데 매우 중요하다.

상기 간질환은 병이 생기는 원인에 따라 바이러스성 간질환, 알코올성 간질환, 약물독성 간질환, 지방간, 자가 면역성 간질환, 대사성 간질환 및 기타 간질환으로 구분된다.

간 질환은 초기에 자각증상이 없고 간 손상 정도가 심한 정도에 이르러서야 자각증상이 나타남으로써 간 질환의 조기 발견은 그만큼 어렵다. 이러한 이유로, 상기 간 질환은 우리나라뿐만 아니라 세계적으로도 사망원인의 수위를 차지하고 있으나, 효과적인 치료제 및 진단방법이 없는 실정이다. 이러한 간 질환의 심각성에도 불구하고 아직까지 간 질환의 효과적인 치료방법이 없는 실정이므로 간 조직의 구조 및 기능을 유지하면서 간 손상을 치료 및 예방할 수 있는 약물 개발이 절실히 필요한 상황이다.

현재 간염, 간경화의 예방 및 치료를 위해 가장 일반적으로 사용하는 약제로는 우르소데옥시콜린산, 면역자극제, 항바이러스제, 실리마린, 운지다당체, 비타민 B군, 메티오닌 등이 사용되고 있으나 이 약제들 중 어느 것도 아직까지 임상적으로 만족스러운 효과를 제공하는 것은 없었다. 따라서, 최근에는 평상시 용이하게 섭취하여 간에 부담을 주지 않으면서도 간손상을 치료할 뿐 아니라 예방할 수 있는 방법을 찾고자 하는 노력이 진행되고 있다.

또한, 현재까지 천연식물에서 추출되어 실제 임상에서 응용되고 있는 간기능 보호제로서는 실리범 마리아넘(Silybum marianum)이라는 식물에서 추출된 실리빈(silybin), 실리디아민(silydiamine), 실리크리스틴(silycristine) 등의 이성체로 구성된 실리마린(silymarin) 제제가 있다. 이와 같이, 천연물로부터 간질환 치료제를 개발하려는 수많은 노력에도 불구하고 실제로 치료제로 현재 사용 중이거나 임상시험 중인 예는 소수에 불과하다.

따라서, 간기능 예방과 관련하여, 항산화 효과가 있어 산화적 스트레스에 의한 간손상을 예방할 수 있고, 간세포를 보호할 수 있으며, 내성이나 안정성에 대한 문제가 대두되어지지 아니한 천연물질 유래의 간 보호 및 간 손상 예방에 유효한 성분과 이를 유효성분으로 하는 간 보호용 조성물, 간 질환 치료 또는 예방용 조성물 또는 간 보호 및 간 손상 예방 에 효과가 있는 기능성 식품 조성물을 개발하는 것이 시급한 실정이다.

기존에 보고된 천연자료, 특히 식물 추출물을 유효성분으로 하는 간 보호용 조성물과 관련하여, 공개특허 제2010-0076277호나 등록특허 제0969170호, 해당 천연자료로부터 유효성분을 분리한 공개특허 제2009-0069723호나 공개특허 제2009-0126843호 등이 제시되어 있으나, 상기 유효성분은 멀꿀과 전혀 상이한 식물에 해당하는 것으로, 멀꿀 추출물을 이용한 간 보호용 조성물에 대한 내용은 아직 제시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 개선하기 위한 것으로, 천연물질을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물, 간 질환 치료 또는 예방용 조성물 또는 간 보호 및 간 손상 예방 에 효과가 있는 기능성 식품 조성물 을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 기능성 식품 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 부작용이나 내성 등의 안정성에 대한 문제가 없는 천연물질 유래의 간 보호용 조성물을 연구하던 중, 식용으로 사용할 수 있어 그 안정성이 보장된 멀꿀 추출물이 실험동물을 이용하여 확인한 결과, 독성을 유발시킨 후, GOT 및 GPT 수치를 확인한 결과 간보호능이 우수한 것으로 확인되었고, 지질과산화 억제능 및 사이토크롬 P450(Cytochrome P450)의 mRNA 발현량을 측정한 결과, 간 보호능이 우수하다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다.

상기 간 보호용 조성물은 의약 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다. 이러한 측면에서, 본 발명은 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호, 간 기능 개선 및/또는 간 손상 예방용 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.

상기 멀꿀(Stauntonia hexapylla)은 쌍떡잎식물 미나리아재비목 으름덩굴과의 상록 덩굴 식물으로, 멀꿀나무라고도 한다. 상기 멀꿀은 암수 한그루로 원줄기는 약 5 m 정도 뻗어가고, 잎은 어긋나며 5개 내지 7개의 작은잎으로 된 손바닥모양 겹잎이다. 작은 잎은 두껍고 달걀모양 또는 타원형이며, 가장자리가 밋밋하다. 잎자루는 길이가 6 cm 내지 8 cm 정도이고, 작은 잎자루는 약 3 cm 정도이다. 꽃은 5월에 피고, 황백색이ㅕ 총상꽃차례에 달린다. 암꽃의 작은 꽃가지는 가을에 적갈색으로 되고, 많은 피목이 있어 거칠다. 열매는 장과로 달걀모양 또는 타원형이고 길이가 5 cm 내지 10 cm이며, 10월에 적갈색으로 익고 과육은 으름보다 맛이 좋다. 종자는 달걀모양의 타원형으로 흑색이다. 상기 멀꿀은 주로 한국, 일본, 타이완 또는 중국 등지에 분포한다. 우리나라에서는 주로 전라남도, 경상남도 및 충청남도 등의 남쪽지방의 계곡이나 숲 속에서 잘 생육한다.

상기 멀꿀 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 일 예로 멀꿀의 열매, 꽃, 잎, 가지, 줄기, 뿌리 또는 껍질이나 이의 분쇄물, 바람직하게는 멀꿀의 열매에 추출용매를 가하여 추출함으로써 제조하거나 추출용매로 추출하여 제조한 조추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조된 것일 수 있다.

상기 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 상기 알코올 희석수, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매와 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 알코올 희석수는 알코올을 50 내지 99.9%(v/v)로 물에 희석한 것일 수 있다.

본 발명의 멀꿀 추출물의 추출용매는 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 알코올 희석수 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 더욱 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있으며, 더더욱 바람직하게는 물일 수 있다. 상기 추출과정은 일 예로, 50℃ 내지 150℃, 또는 75℃ 내지 120℃, 또는 90℃ 내지 110℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 상기 추출시간은 특별히 한정되지는 않으나, 10분 내지 12시간, 또는 30분 내지 6시간, 또는 2시간 내지 4시간일 수 있다.

본 발명의 멀꿀 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 구체적으로는 열수추출법을 포함한 열 추출법, 냉침추출법, 온침추출법, 초음파 추출법 등일 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.

또한, 상기 용매로 추출한 추출물은 이후, 부탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매, 바람직하게는 부탄올로 분획과정을 더욱 실시할 수 있다. 상기 분획 시 용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 용매 추출물을 제조할 수 있다

상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 상기 건조는 일예로 동결건조법으로 수행할 수 있다.

본 발명의 멀꿀 추출물, 구체적으로 멀꿀 열매 열수 추출물을 처리한 경우, 멀꿀 추출물은 간 독성 물질인 사염화탄소 또는 아세트아니모펜(APAP)을 처리한 간독성 유도 실험동물 모델에서 유의적으로 지질과산화를 억제하고, 혈청 중 GOT(glutamic oxaloacetic transaminase) 및 GPT(glutamic-pyruvic transaminase) 수치 증가를 억제하며, 사이토크롬 P450(Cytochrome P450)의 mRNA 발현량을 효과적으로 억제하여 우수한 간 보호 효과를 갖는 것으로 확인되었다.

따라서 상기 멀꿀 추출물 및 상기 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물은 간 질환의 치료 또는 예방이나 간 보호, 간 기능 개선 및 간 손상 예방을 위하여 사용될 수 있다.

상기 간 질환은 일반적인 간 질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 간경화, 간암 및 간성 혼수로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 간 보호, 간 기능 개선 또는 간 손상 예방 효과는 피로회복 효과 또는 숙취해소 효과로 응용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 간 보호용 조성물은 간 질환의 치료 또는 예방용 조성물로 응용되거나, 상기 간 보호용, 간 기능 개선용, 간 손상 예방용, 피로회복용 및/또는 숙취해소용 기능성 식품 조성물로 응용될 수 있다. 상기 식품조성물은 일 예로 상기 간 보호 및 간 기능 개선을 위한 건강기능성 식품 조성물, 피로회복을 위한 건강기능성 식품 조성물 또는 숙취해소를 위한 건강기능성 식품 조성물일 수 있다.

상기 건강기능식품은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명의 간 보호용 조성물은 상기 멀꿀 추출물을 전체 조성물 중량의 0.001 중량% 내지 99.9 중량% 또는 0.01 중량% 내지 50 중량% 또는 0.1 중량% 내지 30 중량% 또는 0.1 중량% 내지 15 중량% 포함될 수 있다.

상기 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.

상기 멀꿀 추출물은 상기 간 보호용 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 멀꿀 추출물을 포함하는 조성물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 멀꿀 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다.

이 경우 상기 조성물 내 멀꿀 추출물의 함량은 0.001 중량 % 내지 99.9 중량 %, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.

상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 멀꿀 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 간 질환 치료 효과, 간 보호 효과, 간 기능 개선 효과 등이 있는 것으로 인정된 물질, 일 예로 간세포 보호용 물질, 간 질환 치료제 또는 간 기능 개선제 등으로 사용되는 물질을 더욱 포함할 수 있다.

상기 조성물이 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.

또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.

더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.

상기 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 일 예로 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 또한, 상기 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 또는 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.

상기 멀꿀 추출물은 바람직하게는 멀꿀 열매 추출물, 더욱 바람직하게는 멀꿀 열매 열수 추출물일 수 있다.

상기 간 질환은 일반적인 간 질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 간경화, 간암 및 간성 혼수로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 간 보호, 간 기능 개선 또는 간 손상 예방 효과는 피로회복 효과 또는 숙취해소 효과로 응용될 수 있다.

상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 간 보호, 일 예로 독성 손상 등 외부 요건 또는 체내의 내부 요건에 의한 간 손상으로부터 간 도는 간 세포를 보호할 수 있으므로, 상기 간 질환의 예방 및 치료의 목적으로 사용가능하다.

상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 상기 유효성분을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 상기 조성물 전체에 대해 0.1 내지 99.9 중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.001 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 일반적이다.

상기 담체 또는 부형제의 일예로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 담체 또는 부형제는 2종 이상 사용될 수 있다.

또한, 기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은, 상기 유효성분 이외에 공지의 간 질환 예방 또는 치료 활성을 갖거나 간 보호활성을 갖는 화합물 또는 식물 추출물을 포함한 물질을 더욱 포함할 수 있으며, 상기 유효성분 100 중량부에 대하여 각각 5 내지 20 중량부로 포함될 수 있다.

상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.

본 발명에 따른 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 예컨대 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로를 통하여 사용될 수 있으며, 이의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일예로, 본 발명의 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나, 상기한 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며 상기 범위에 한정되지는 않는다.

본 발명은 또한, 상기 멀꿀 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 또는 멀꿀 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 식품 조성물은 기능성 식품 조성물 또는 건강기능식품일 수 있으며, 상기 식품 조성물은 간 보호 및 간 기능 개선을 위한 건강기능성 식품 조성물, 피로회복을 위한 건강기능성 식품 조성물 또는 숙취해소를 위한 건강기능성 식품 조성물로 응용될 수 있다.

본 명세서에서 식품 조성물이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 일 예로 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미할 수 있고, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.

본 발명의 유효성분을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품은 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 멀꿀 추출물 또는 간 보호용 조성물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g 또는 5 g내지 12 g이다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 중량부 내지 200,000 중량부 범위에서 선택될 수 있다.

본 발명에서 기능성 음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.

상기 기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 조성물의 유효성분을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g 또는 5 g 내지 12 g일 수 있다.

또한, 상기 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 유효성분의 함량은 전체 식품 중량의 0.0001 중량% 내지 99 중량% 또는 0.001 중량% 내지 50 중량% 또는 0.01 중량% 내지 30 중량% 또는 0.1 중량% 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.0002 g 내지 5 g 또는 0.03 g 내지 1g의 비율로 포함할 수 있다.

또한, 상기 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물의 섭취량은 섭취하고자 하는 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 식품 조성물은 유효성분을 기준으로 1일 0.0001 g/kg(유효성분의 양/체중) 내지 12 g/kg(유효성분의 양/체중) 또는 0.01 g/kg 내지 9 g/kg으로 투여될 수 있다. 투여방법은 하루에 한번 투여할 수 있고, 수회 나누어 투여할 수 있으며, 상기 투여량 및 투여방법은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 멀꿀 열매 추출물은 식용으로 사용되는 식물 유래 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 간 독성 물질인 사염화탄소 또는 아세트아니모펜(APAP)을 처리한 간독성 유도 실험동물 모델에서 유의적으로 지질과산화를 억제하고, 혈청 중 GOT(glutamic oxaloacetic transaminase) 및 GPT(glutamic-pyruvic transaminase) 수치 증가를 억제하며, 사이토크롬 P450(Cytochrome P450)의 mRNA 발현량을 효과적으로 억제하여, 간 보호, 간 손상 예방 및 간 기능 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 멀꿀 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 조성물은 간 질환 치료 또는 예방용 의약 조성물 또는 간 기능 개선 또는 간 보호용 식품 조성물 등 간 보호 및 간 기능과 관련된 다양한 용도 및 피로회복 또는 숙취해소와 관련된 용도로 응용될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 간 보호, 간 기능 개선 및 간 질환 치료 또는 예방과 관련된 의료산업 및 식품산업의 분야에서 널리 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 실험동물을 이용하여, 사염화탄소를 처리한 경우 멀꿀 열매 추출물의 간 보호능을 GOT 및 GPT 값으로 나타낸 것으로, 상기 그래프에서 +는 사염화탄소 또는 추출물을 처리한 것을 의미하고, -는 처리하지 않은 것을 의미하며, 가로축의 SH 수치는 멀꿀 열매 열수 추출물의 투여량(mg/mL)을 나타내는 수치이다. 상기 도 1a는 GOT 값을 측정한 결과이고, 상기 도 1b는 GPT 값을 측정한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른, 실험동물을 이용하여, 아세트아니모펜을 처리한 경우 멀꿀 열매 추출물의 간 보호능을 GOT 및 GPT 값으로 나타낸 것으로, 상기 그래프에서 +는 아세트아니모펜 또는 추출물을 처리한 것을 의미하고, -는 처리하지 않은 것을 의미하며, 가로축의 SH 수치는 멀꿀 열매 열수 추출물의 투여량(mg/mL)을 나타내는 수치이다. 상기 도 1a는 GOT 값을 측정한 결과이고, 상기 도 1b는 GPT 값을 측정한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른, 실험동물을 이용하여, 사염화탄소를 처리한 경우 멀꿀 열매 추출물의 간 보호능을 MDA 값으로 나타낸 것으로, 상기 그래프에서 +는 사염화탄소 또는 추출물을 처리한 것을 의미하고, -는 처리하지 않은 것을 의미하며, 가로축의 SH 수치는 멀꿀 열매 열수 추출물의 투여량(mg/mL)을 나타내는 수치이다
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른, 실험동물을 이용하여, 아세트아니모펜을 처리한 경우 멀꿀 열매 추출물의 간 보호능을 MDA 값으로 나타낸 것으로, 상기 그래프에서 +는 아세트아니모펜 또는 추출물을 처리한 것을 의미하고, -는 처리하지 않은 것을 의미하며, 가로축의 SH 수치는 멀꿀 열매 열수 추출물의 투여량(mg/mL)을 나타내는 수치이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른, 멀꿀 열매 추출물의 간 보호능을 사이토크롬 P450의 mRNA 발현량을 이용하여 확인한 것으로, +는 추출물을 처리한 것을 의미하고, -는 처리하지 않은 것을 의미하며, 가로축의 SH 수치는 멀꿀 열매 열수 추출물의 투여량(mg/mL)을 나타내는 수치이다. 도 5a는 전기영동 사진이고, 도 5b는 전기영동 사진을 분석한 그래프이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 구체적인 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 보다 상세히 설명하기로 한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확하기 이해시키기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 하기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 보호 범위는 특허청구범위에 의하여 해석되어야 하고, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

< 실시예 1> 멀꿀 열매추출물 및 분획물의 제조

멀꿀(Stauntonia hexaphylla)의 열매, 잎 및 줄기 각각 2,100g 을 열수 40L를 이용하여 100℃에서 열수추출법을 수행하여 열수 추출물을 제조하였다.

보다 구체적으로, 증류수로 수세한 멀꿀 열매, 잎 및 줄기 각각 2,100g에 증류수 40L를 가한 후, 전기약탕기를 이용하여 100℃에서 3시간 동안 가열하면서, 열수추출을 수행하였다. 상기 추출을 수행한 후, 400 메쉬 여과포로 여과한 다음, 수득한 여액을 감압회전농축기를 이용하여 농축하였다. 여과 후 남은 잔사에 다시 동량의 증류수를 사용하여 동일 과정으로 2번 더 추출, 여과 및 감압과정을 수행하였다. 상기 과정을 통해 제조된 멀꿀 부위별 열수추출액을 동결건조기(Freeze dryer)에서 동결건조 하였다. 상기 동결건조를 통하여, 148 g의 멀꿀 열매 열수 추출물을 얻었다(수율 7%).

멀꿀 열매 열수 추출물의 분획물은 상기 열수 추출물 40g을 25배의 증류수 즉, 1 L의 증류수에 완전히 용해시킨 후, 분획여두에 넣고 헥산(Hexane) 1L를 첨가하고 섞은 후에 분획하여, 헥산 층과 헥산 불용성층인 수층을 분리하고, 헥산 층만을 수득함으로써, 헥산 분획액을 제조하였고, 나머지 용액(수층)에 클로로포름 1L를 첨가하고 섞은 후에 분획하여, 클로로포름 층과 클로로포름 불용성층인 수층을 분리하고, 클로로포름 층만을 수득함으로써, 클로로포름 분획액을 제조하였으며, 나머지 용액(수층)에 에틸아세테이트 1L를 첨가하고 섞은 후에 분획하여, 에틸아세테이트 층과 에틸아세테이트 불용성층인 수층을 분리하고, 에틸아세테이트 층만을 수득함으로써, 에틸아세테이트 분획액을 제조하였으며, 나머지 용액(수층)에 부탄올 1L를 첨가하고 섞은 후에 분획하여, 부탄올 층과 부탄올 불용성층인 수층을 분리하고, 부탄올 층만을 수득함으로써, 부탄올 분획액을 제조하였으며, 상기 얻어진 각각의 분획액을 감압여과 장치로 여과하여 농축한 후, -20℃에서 동결건조하여 용매를 완전히 제거한 뒤 본 실험에 사용하였다. 상기 과정을 통하여 0.1 g의 헥산 분획물, 0.6 g의 클로로포름 분획물, 2 g의 에틸아세테이트 분획물, 15 g의 부탄올 분획물을 수득하였다.

상기 수득한 추출물 및 분획물은 실험에 사용하기 전까지 냉동보관하였다.

< 실시예 2> 실험동물을 이용한 간 보호능 확인1

상기 실시예 1에서 제조된 멀꿀 열매 열수 추출물의 간 보호능을 확인하기 위하여, 실험동물을 이용하여 간 보호능을 확인하였다.

상기 실험동물은 체중이 15 g 내지 20 g 내외의 흰색 수컷 생쥐(ICR mouse, male)를 샘타코 사에서 40마리씩 구입하여, 각각 10개 군으로 나누고, 각 군당 4마리씩 배치하여 사육하였다. 상기 실험동물의 사육은 20℃ 내지 24℃의 온도 조건, 60% 내지 70%의 습도조건 및 12시간 주기의 주야조명 조건으로 수행하였고, 물과 식이는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 상기 식이는 고형사료(삼양사료, 대한민국)를 이용하였다. 상기 실험동물은 상기 조건으로 7일간 사육하여 실험실 환경에 적응시킨 후, 실험에 사용하였다.

상기 실험동물 중 5군을 구분하여, 이 중 3개의 실험군에 대해서는 실시예 1에서 제조된 멀꿀 열매 열수 추출물을 시료와 함께 50 mg/kg(추출물/실험동물), 100 mg/kg 및 200 mg/kg씩 3일간 경구 투여하였다. 상기 3일째 최종투여하고 3시간이 경과한 후, 5개군의 실험동물 중 4개 군에 대하여 간독성 유도 물질인 사염화탄소(CCl₄)를 투여하였다. 상기 CCl₄의 투여는 CCl₄와 옥수수유를 부피비를 기준으로 1:4(CCl₄ : 옥수수유)로 혼합한 혼합액을 실험동물의 체중 100g당 0.2 ml를 복강 내 투여하는 방법으로 수행하였다. 상기 복강내 투여 후, 18 시간 동안 절식시키고, 에테르를 이용하여 실험동물을 마취시켰다. 상기 마취된 실험동물을 개복하여 복부 대동맥에서 혈액을 채혈하였다. 상기 채혈한 혈액은 상온에서 30분간 방치한 후, 3,000 rpm의 조건으로 5분간 원심 분리하여 혈청을 분리하였다.

상기 분리된 혈청은 혈액분석기 Express PLUS(FUSIFILM, USA)를 이용하여 GOT 및 GPT를 측정하였다.

구체적으로, 상기 혈청 중 GOT 및 GPT 활성측정은 Reitman-Frankel의 방법(Reitman, S. and Frankel, S, Am, J. Clin. Pathol. 28:58-63(1957))에 따라 조제된 시약 Kit(아산제약, 대한민국)를 사용하여 측정하였다. 보다 구체적으로, GOT 및 GPT 기질액 1.0 ml을 시험관에 가하여 37℃에서 5분간 방치한 다음, 혈청 0.2 ml을 넣어 잘 혼합하고, GOT는 37℃에서 60분, GPT는 37℃에서 30분간 반응시킨 뒤 정색시액 1.0 ml을 첨가하여 잘 혼합하고 실온에서 20분간 방치하여 반응을 종결시켰다. 상기 반응을 종결시킨 반응액에 0.4N NaOH용액 10 ml을 가하여 잘 혼합한 다음 실온에서 약 10분간 방치하였다가, 60분 이내에 505 nm에서 증류수를 대조로 흡광도 변화를 측정하였다. 혈청 중 GOT 및 GPT 활성도는 작성한 표준검량곡선에서 산출하였으며, 혈청 1ml당 IU/l로 나타내어 도 1에 나타내었다.

또한, 상기 구분되지 않은 5개 실험군에 대해서는 상기와 같은 방법으로 3개 군을 분리하여 멀꿀 열매 열수 추출물을 투여한 후, 상기 멀꿀 열매 열수 추출물 투여군을 포함한 4개 군에 대해 아세트아니모펜(APAP)을 처리하고, 상기와 같은 방법으로 혈액을 채취하였다. 상기 혈액을 상기와 같은 방법으로 원심분리한 후, 혈청을 분리하고 혈액분석기를 이용하여 GOT 및 GPT를 측정하였다. 상기 측정한 결과를 상기와 같이 표준검량곡선에서 산출하여, 혈청 1ml당 IU/l로 나타내어 도 2에 나타내었다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 멀꿀 열매 열수 추출물을 투여하지 않은 경우, 사염화탄소를 처리하지 않은 대조군에 비하여 현저하게 GOT 및 GPT 상승이 관찰되었으나, 멀꿀 열매 열수 추출물을 투여한 경우, 농도의존적으로 GOT 및 GPT 상승억제효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서, 간독성 물질인 사염화탄소로 유발된 간독성에 대한 간보호 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

또한, 상기 도 2에 나타낸 바와 같이, 멀꿀 열매 열수 추출물을 투여하지 않은 경우, 아세트아니모펜을 처리하지 않은 대조군에 비하여 현저하게 GOT 및 GPT 상승이 관찰되었으나, 멀꿀 열매 열수 추출물을 투여한 경우, 농도의존적으로 GOT 및 GPT 상승억제효과가 있는 것으로 나타났다. 따라서, 간독성 물질인 아세트아니모펜으로 유발된 간독성에 대한 간보호 효과가 우수한 것으로 확인되었다.

< 실시예 3> 실험동물을 이용한 간 보호능 확인2

상기 실시예 2에서 희생시킨 실험동물의 간 조직 0.2 g을 1.5 ml 에펜도르프 튜브(EP tube)에 옮긴 후, PBS buffer 1 ml을 첨가하고, 균질화 시켰다. 균질화시킨 후, 72% TCA 195ul(final conc. 10%)를 넣고, 4℃ 및 12,000 rpm 조건에서 15분 동안 원심분리하였다. 상기 원심분리 후, 상층액을 새 에펜도르프 튜브에 옮기고 원심분리를 한번 더 실행하였다. 상기 원심분리 후, 상층액 0.6 ml을 새 에펜도르프 튜브 에 옮기고, 0.8% TBA 272 ul(final conc. 0.25%)를 첨가한 후, 95℃에서 끓였다. Control 색깔이 분홍색으로 바뀌면 얼음에서 반응을 정지시켰다. 상기 반응을 정지시킨 반응액의 상층액 100 ul를 96well plate에 옮기고 생성된 MDA(말론알데하이드)의 양을 532nm에서 흡광도를 통해 측정하였으며, 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.

상기 도 3에 나타낸 바와 같이, 사염화탄소를 처리하지 않은 대조군의 경우 낮은 MDA 분비량이 확인되었고, 사염화탄소를 처리한 실험군의 경우 지질과산화가 유발됨으로써 MDA의 함량이 현저하게 증가하는 것이 확인되었다. 또한, 멀꿀 열매 열수 추출물을 처리한 경구, 사염화탄소 처리에도 불구하고, 상기 멀꿀 열매 열수추출물의 농도의존적으로 MDA 분비량이 감소되었다. 따라서, 멀꿀 열매 열수 추출물이 MDA 생성을 억제 즉, 지질과산화 활성 억제효과가 있는 것으로 확인되었다.

또한, 상기 도 4에 나타낸 바와 같이, 아세트아니모펜을 처리하지 않은 대조군의 경우 낮은 MDA 분비량이 확인되었고, 아세트아니모펜을 처리한 실험군의 경우 지질과산화가 유발됨으로써 MDA의 함량이 현저하게 증가하는 것이 확인되었다. 또한, 멀꿀 열매 열수 추출물을 처리한 경구, 아세트아니모펜 처리에도 불구하고, 상기 멀꿀 열매 열수추출물의 농도의존적으로 MDA 분비량이 감소되었다. 따라서, 멀꿀 열매 열수 추출물이 MDA 생성을 억제 즉, 지질과산화 활성 억제효과가 있는 것으로 확인되었다.

< 실시예 4> 실험동물을 이용한 간 보호능 확인3

상기 실시예 3에서 분리된 간 조직 0.2 g을 균질기를 이용하여 잘 분쇄한 다음 GIT solution(easy BLUE Total RNA extraction kit, ㈜ 인트론바이오테크놀러지)으로 용해(lysis)시키고, 실온에서 10,000 rpm 조건으로 5분간 원심분리한 후, 상등액을 제거하고 펠렛(pellet)을 수득하였다. 상기 펠렛에 0.1% DEPC solution(Sigma, USA) 1 ml을 첨가하고, 12,000 rpm 조건으로 2분간 다시 원심분리를 하여 상등액을 제거한 후, 펠렛을 수득하였다. 상기 수득한 펠렛에 구아니디움(guanidinium) 0.5 ml을 첨가하여 볼텍싱(vortexing)하였다. 추가로, phenol/chloroform/iso-amylalchol 혼합용액(25:24:1)을 0.5 ml 첨가하고, 볼텍싱한 후, 12,000 rpm의 조건으로 3분간 원심분리하여 상등액을 수득하였다. 상기 상등액과 동량의 이소프로필알코올(iso-propylalcol)을 첨가하고 잘 혼합한 후, -20℃에서 30분간 방치시켰다. 이 후, 12,000 rpm으로 10분간 원심분리를 하여 상등액을 제거시킨 후, 펠렛을 70% 에탄올 수용액으로 씻어 내고(washing), 진공 하에 건조시켜 RNA를 분리하였다.

상기 분리된 RNA는 0.1% DEPC용액 1 ml에 녹여 염증 관련 사이토카인의 mRNA 함량을 측정하기 위해 사용하였다.

상기 RNA 2 μg을 주형으로 사용하였으며, MgCl₂ (2.5 mM), 10xRNA PCR buffer, RNase free distilled H₂O, dNTP (10 mM), reverse transcriptioase , Oligo dT (2.5 pmol/μl)가 되게 넣고 total volume을 20 μl가 되게 해서 혼합한 후 30℃에서 10분간 반응시키고 42℃에서 30분간 annaling시킨 후 95℃에서 5분, 5℃에서 5분간 1 cycle을 실시 하였다. 합성된 cDNA는 sense 및 antisense primer (10 pmol) 각각 1 μl 첨가하고 10x PCR buffer 5 μl, 2.5 mM dNTP 1 μl, taq polymerase 1 μl를 첨가한 다음 멸균된 3차 증류수로 total volume 50 μl가 되도록 PCR tube에서 혼합한 후, 95℃에서 5분간 95℃에서 1분 간 denaturation 후 68℃에서 1분간 annaling시키고, 72℃에서 1분 30초 동안 35 cycle 반응시킨 다음 72℃에서 5분 동안 elongation시켰다. 각각의 PCR product는 10 μl 씩 1.5% ETBR stained agarose gel 상에서 loading하여 전기영동을 시행하여 분석하였다. 상기 분석한 결과를 도 5에 나타내었다.

상기 도 5에 나타낸 바와 같이, 멀꿀 열매 열수추출물을 처리한 군에서 CYP2E1의 발현이 농도의존적인 감소를 나타내었으며, 이로부터 멀꿀 열매 열수 추출물이 CYP2E1의 발현을 억제시키는 것으로 확인될 수 있다.

Claims (7)

1. 멀꿀(Stauntonia hexaphylla) 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물.
2. 상기 멀꿀은 멀꿀 열매인 간 보호용 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 멀꿀 추출물은 멀꿀을 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 추출용매로 추출한 것인 간 보호용 조성물.
4. 제3항에 있어서,
   상기 멀꿀 추출물은 멀꿀 추출물에 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 부탄올, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나를 분획용매로 분획한 분획물인 간 보호용 조성물.
5. 제1항의 간 보호용 조성물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 간 질환은 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 간경화 및 간암으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나인 간 질환 치료 또는 예방용 조성물.
7. 제1항의 간 보호용 조성물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물.
   

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