KR101747690B1 - 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물 및 그 추출방법 - Google Patents

Abstract

아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출방법이 개시된다.
(a) 참두릅을 건조한 후 분쇄하는 단계;
(b)상기 참두릅을 메탄올로 침출하는 단계;
(c) 상기 침출시킨 시료를 초음파로 분해시키면서 추출하는 단계;
(d) 감압흡입여과기를 이용하여 여과하여 용매 추출액을 수득하는 단계;
(e) 상기 용매 추출액에서 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 가하여 재추출하는 단계를 포함하는 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출방법이 제공된다.

Description

아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물 및 그 추출방법{extraction of Aralia elata and its extraction method}

본 발명은 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물 및 그 추출방법에 관한 것이다.

염증성 피부질환이란 피부 상피 내에 일련의 염증 반응을 일으키는 다양한 자극 요인들로 인해 가려움, 부종, 홍반, 벗겨짐 등과 같은 일련의 임상적 징후와 증상이 유발되는 질환을 말한다.

염증성 피부질환으로는 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염(contact dermatitis), 지루성 피부염(seborrhoic dermatitis) 및 여드름 등이 알려져 있다. 아토피성 피부염은 일반적으로 습진(eczema)과 같은 의미로 쓰이는데 아토피 체질인 사람에게 생기는 습진 모양의 피부병변으로서 내인성 습진 또는 베니에 양진이라고도 한다. 아토피성 피부염의 원인은 현재까지 밝혀져 있지 않으며 유전적인 경향이 있는 것으로 알려져 있고 현재는 일종의 자가면역 질환이라는 설이 설득력을 얻고 있다. 보통의 습진이나 피부염과는 달리 특이한 증세와 경과를 나타내는데 소아습진의 70∼80%가 이에 해당하며 최근 들어 성인에게서도 많이 발생한다.

현재까지는 아토피 피부질환의 치료를 위해서 주로 항히스타민제, 비타민 연고, 부신피질호르몬제가 사용되어 왔다. 그러나 이러한 약물은 그 효과가 일시적인 경우가 대부분이고 부작용이 심한 경우도 많다.

특히, 아토피성 피부염의 경우에는 여러 종류의 5-리포키시게나제 저해제가 항알레르기제의 후보 화합물로서 제안되어 왔고, 크로몰린이 알레르겐과 조직 마스트 세포와의 반응을 무효화시키는 작용을 함으로써 증상을 완화하는 것으로 알려져 있으나 상기 물질들도 임상적으로 효과가 뚜렷하지 않는 단점이 있다.

이에 참두릅 추출물로서 아토피성 피부염에 효과가 있음을 증명하고, 이를 특허로서 등록받고자 한다.

한국등록특허 제10-0604219호(지모와 두릅의 혼합 추출물을 포함하는 염증성 피부질환의 예방 및 치료용 조성물)

본 발명은 참두릅 추출물을 이용하여 아토피 질환을 치료하는 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물 및 그 추출방법을 제공하고자 한다.

본 발명의 일측면에 따르면,

(a) 참두릅을 건조한 후 분쇄하는 단계;

(b)상기 참두릅을 메탄올로 침출하는 단계;

(c) 상기 침출시킨 시료를 초음파로 분해시키면서 추출하는 단계;

(d) 감압흡입여과기를 이용하여 여과하여 용매 추출액을 수득하는 단계;

(e) 상기 용매 추출액에서 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 가하여 재추출하는 단계를 포함하는 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출방법을 제공하고자 한다.

또한, 본 발명의 다른 측면에 따르면,

참두릅에서 추출하여 아토피성 피부염에 효과를 나타내는 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물이 제공된다.

본 발명은 참두릅 추출물을 이용하여 아토피 질환을 치료하는 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출물 및 그 추출방법을 제공한다.

이하에는, 본 발명의 바람직한 일 실시예를 상세하게 설명하되, 이는 본 발명에 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로써 본 발명의 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.

재료 및 방법

1. 참두릅 추출물 및 분획물의 제조

참두릅(Aralia elata)은 2013년 5월 중순경 제주도 한라산에서 채취하여 실험에 사용하였다. 채취한 참두릅의 새순, 잎, 줄기의 추출물을 제조하기 위하여, 상기 참두릅을 음지에서 건조시킨 다음 미세하게 분쇄하여 1000g의 시료당 80% 메탄올 10L를 가하여 24시간 동안 침출시켰다. 침출시킨 시료를 실온에서 24시간 동안 초음파로 분해시키면서 추출하였다. 상기 추출물을 감압흡입여과기를 사용하여 여과하였다 동일한 방법으로 잔사에 대하여 2회 반복 추출 및 여과를 실시하여 용매 추출액을 수득하였다. 여과 후에 얻어진 용액을 모두 합하여 회전감압농축기를 사용하여 농축한 다음 두릅나무의 부위별 추출물 30~150g을 수득하였다.

또한, 참두릅 분획물을 제조하기 위하여, 상기에서 수득한 두릅나무 순의 80% 메탄올 추출물을 분액깔대기를 이용하여 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 가하여 재추출 하였다. 상기 메탄올 추출물 25g을 증류수 1L로 현탁한 다음 여기에 헥산 1L, 에틸아세테이트 1L, 부탄올 1L를 각각 첨가하여 상온에서 재추출 하였다. 이를 3회 반복 실시하였다. 실험결과, 헥산 추출물 2.4g, 에틸아세테이트 추출물 2.5g, 부탄올 추출물 6.8g 및 물 추출물 14.6g을 수득하였다.

이상의 아토피성 피부염 치료용 참두릅 추출방법의 순서를 요약하면,

(a) 참두릅을 건조한 후 분쇄하는 단계;

(b)상기 참두릅을 메탄올로 침출하는 단계;

(c) 상기 침출시킨 시료를 초음파로 분해시키면서 추출하는 단계;

(d) 감압흡입여과기를 이용하여 여과하여 용매 추출액을 수득하는 단계;

(e) 상기 용매 추출액에서 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 가하여 재추출하는 단계이다.

2. 실험동물 및 사육조건

실험동물은 5주령의 수컷 BALB/c 마우스를 (주)오리엔트에서 구입하여 1주간 환경에 순화시킨 후 실험에 사용하였다. 사육환경은 온도 20-22℃, 습도 50-55%이었으며, 명암주기는 12시간 단위로 조절되었다.

3. 아토피성 피부염 유발 및 추출물 투여

실험동물의 등 피부를 2×4 넓이로 제모한 후, 아세톤(acetone)과 올리브 ㅇ오일(ive oil)을 4:1로 혼합한 용액을 용매로 한 1% DNCB (2, 4-dinitrochlorobenzene), 0.2% DNCB 용액을 제조하여 도포함으로써 아토피성 피부염을 유발시켰다. 첫 주에 1% DNCB 용액을 2번 도포하여 감작시킨 후 두 번째 주에 0.2% DNCB 용액을 2번 도포하여 재감작시켰다. 대조군으로써, 감작은 용매로, 재감작은 0.2% DNCB를 도포하였다.

2주간 아토피성 피부염을 유발시킨 후, 참두릅 추출물을 개체당 5, 10, 20 mg씩 하루에 한번, 3주간 도포하였다.

자세한 실험일정 및 실험군은 다음과 같다.

Group	Sensitization	Challenge	Treatment	비고
Ⅰ; Sham control	AOO	0.2% DNCB	Vehicle
Ⅱ; Atopic control	1% DNCB	0.2% DNCB	Vehicle
III; AE 5	1% DNCB	0.2% DNCB	참두릅추출물	5 mg, 도포
IV; AE 10	1% DNCB	0.2% DNCB	참두릅추출물	10 mg, 도포
V; AE 20	1% DNCB	0.2% DNCB	참두릅추출물	20 mg, 도포

4. 관찰항목

1) 체중

아토피 유발 및 추출물의 처치에 의한 일반적인 부작용을 확인하기 위해 일주일에 한번씩 디지털 계량계를 사용하여 측정하였다.

2) 임상증상의 관찰

매일 일정한 시각에 실험동물의 등 피부를 관찰하여 충-출혈 및 가피, 염증성 반응 등을 확인하였다.

3) 스크래칭(Scratching) 횟수 측정

실험 14일 째와 35일 째에 실험동물을 투명한 케이지 내에서 30분간 적응시킨 후, 목, 등 부위를 긁는 동작의 수를 측정하였다.

4) 혈장내 항체 수준 측정

실험 종료 후 (35 Day)에 복대정맥에서 채취하였다. 3,000 rpm으로 15분간 원심분리하여 혈장을 분리하였고, IgE 및 IgG1, IgG2a 수준을 Sandwich ELISA 법으로 측정하였다.

5) 림프구(Lymphocyte) 배양액 내 시토카인(cytokine) 분비 수준 측정

실험 종료 후 (35 Day), 비장을 적출하여 비장세포를 분리하였다. T 림프구(T-Lymphocyte)만을 활성화시키는 anti-mouse CD3e mAb로 코팅시킨 플레이트(plate)에서 40시간동안 배양한 후, 배양액만을 취하여 IL-4, IFN-γ 분비 수준을 Sandwich ELISA 법으로 측정하였다.

6) 피부 조직에서의 COX-2 단백 발현 측정

실험 종료 후 (35 Day), 등 피부를 박피하여 무게를 측정하였고 무게의 5 배 부피의 homogenation buffer (320 mM sucrose, 5 mM Tris-HCl, 175 ㎍/㎖ PMSF, 25 ㎍/㎖ aprotinin, 10 ㎍/㎖ leupeptin)로 피부 조직을 균질화시켰다. 4℃, 800 g에서 15분간 원심분리하여 상층액을 얻어 다시 10,000 g에서 20분간 원심분리하여 상층액을 분리하였다. 피부 조직의 호모게네이트(homogenate)에서 COX-2 단백의 발현을 웨스턴 블롯 분석법(western blot analysis)로 확인하였다. 단백질 정량법(Bradford assay)으로 단백정량하여 20 ug의 단백을 mini-gel system (Bio-Rad Laboratories, USA)을 사용하여 8% SDS-polyacrylamide electrophoresis하였다. Polyvinylidene difluoride membranes (PVDF)으로 단백을 트렌스퍼(transfer)하여 일차항체는 anti-rabbit COX-2 항체(1 : 500 dilutions; Santa Cruz Biotechnology)를 사용하였고 이차항체는 HRP-conjugated goat anti-rabbit IgG (1 : 5,000 dilutions; Santa Cruz Biotechnology)를 사용하였으며, ECL system으로 확인하였다.

5. 통계학적 분석

모든 데이터는 Mean ± S.E.M.로 표시하고, one-way ANOVA를 사용하여 유의성 검정을 실시하였다. 여러 군과의 비교를 위하여 다중검정법인 던컨 검증(Duncan test) 및 LSD를 실시하였으며, p 값이 0.05 미만일 때를 유의성이 있는 것으로 판단하였다.

실험 결과

1. 체중 변화

실험기간 동안 각 군간의 체중 변화는 도. 1과 같다. 대조군과 시험군의 각 동물은 실험이 진행됨에 따라 전체적으로 체중이 증가하는 경향을 보였으며, 참두릅추출물(AE)을 각각 5mg, 10mg 및 20mg씩 처리한 군간의 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.

도 1. 체중 변화 그대프(Effects of samples on changes of body weight)

Data are mean ± S.E.M.

2. 임상증상

DNCB의 감작 및 재감작에 의해 충혈 및 피부경화, 가피 형성 등의 임상증상이 관찰되었다. 3주간의 시료와 vehicle 투여 후, 아토피군에서 가피는 탈락되었지만 충혈, 피부경화, 거친 피부 등의 증상이 지속됨을 확인하였고, 참두릅추출물 도포군에서는 이러한 증상이 완화되었다.

3. 스크래칭(Scratching) 횟수

마지막 재감작 이후 (14 Day)와 실험 종료 후 (35 Day)에 측정한 스크래칭(Scratching) 수는 도 2와 도 3과 같다. 재감작 이후에는 아토피 유발군이 대조군에 비해 10배 이상 (P<0.01)의 목 및 등을 긁는 동작을 보였다. 실험 종료 후, 아토피군에서 절대적인 수치가 떨어지는 경향을 보였지만, 대조군에 비해 유의성있는 증가 (P<0.01)를 나타내었고, 모든 참두릅추출물 도포군에서 호전 증상을 보였다.

도 2. 14일 동안 긁은 횟수( Frequency of scratching on 14 day) Data are mean ± S.E.M. ^** P<0.01 vs. Control.

도 3. 35일 간 긁은 횟수(Effects of samples on frequency of scratching on 35 day. )

Data are mean ± S.E.M. ^** P<0.01 vs. Control; ⁺⁺ P<0.01, ⁺⁺⁺ P<0.001 vs. Atopy.

4. 혈장내 IgE 수준

IgE는 아토피성 피부염시, T helper 2 cell의 면역반응이 과도하게 나타나 과량 분비되는 면역글로불린(Immunoglobulin)으로, 그 결과는 Fig. 4와 같다. 아토피군에서 대조군에 비해 혈장내 IgE 수준이 약 4배 가량 증가 (P<0.01)하였고, 참두릅추출물 처리군에서는 5, 10, 20mg의 용량의존적으로 IgE 수준이 감소되었다.

도 4. Effects of samples on plasma IgE level.

Data are mean ± S.E.M. ^** P<0.01 vs. Control; ⁺ P<0.05, ⁺⁺ P<0.01, ⁺⁺⁺ P<0.001 vs. Atopy.

5. 혈장내 IgG1, IgG2a 수준

IgG1 및 IgG2a는 각각 T helper 2, T helper 1 cell의 면역반응을 대표하는 면역글로불린으로, 아토피성 피부염시, T helper 2 cell의 면역반응이 과도하게 나타나므로, 이 두 면역글로불린의 비율을 비교함으로써, 효능을 확인할 수 있다. Fig. 5에서 대조군에 비해 아토피군의 비율이 약 2배 증가 (P<0.05)한 것을 확인할 수 있었고, 참두릅 추출물 투여군에서는 비율이 감소 (P<0.05)하였다.

도 5. Effects of samples on ratio of IgG1 and IgG2a level.

Data are mean ± S.E.M. ^* P<0.05 vs. Control; ⁺ P<0.05 vs. Atopy.

6. Cytokine (IL-4, IFN-γ) 분비 수준

IL-4, IFN-γ는 각각 T helper 2, T helper 1 cell의 면역반응을 대표하는 시토카인(cytokine)으로, 이 둘의 분비수준을 비율로써 비교하였다. Fig. 6에서, 아토피군이 대조군에 비해 증가하였고, 모든 추출물 도포군에서 감소(P<0.01)한 것을 확인하였다.

도 6. Effects of samples on ratio of IL-4 and IFN-γ level.

Data are mean ± S.E.M. . ^* P<0.05 vs. Control; ⁺⁺ P<0.01 vs. Atopy.

7. COX-2 발현

COX-2는 염증시 유도되는 단백으로, 마우스의 등 피부조직에서 COX-2 단백의 발현을 관찰하였다. Fig. 7에서, 아토피군에서 대조군에 비해 COX-2 단백 발현이 유의적 (P<0.001)으로 증가하였고, 모든 추출물 도포군에서 단백발현이 감소 (P<0.001)하였다.

COX-2

β-actin

도 7. Effects of samples on COX-2 expression in dorsal skin.

Data are mean ± S.E.M. ^*** P<0.001 vs. Control; ⁺⁺⁺ P<0.001 vs. Atopy.

<참두릅 추출물의 용매분획별 아토피성 피부질환 개선효과>

상기에서 제조한 참두릅의 80% 메탄올 추출물 25g을 증류수 1L로 현탁한 다음 여기에 헥산 1L, 에틸아세테이트 1L, 부탄올 1L를 각각 첨가하여 상온에서 재추출 하였다. 이를 3회 반복 실시하였다. 실험결과, 헥산 추출물 2.4g, 에틸아세테이트 추출물 2.5g, 부탄올 추출물 6.8g 및 물 추출물 14.6g을 수득하였다. 이렇게 얻어진 분획물에 대하여 앞에서와 동일한 방법으로 DNCB로 유발시킨 아토피성 피부질환에서의 scratching 횟수 변화를 관찰해 본 결과, 물, 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 분획물을 각각 10mg씩 적용하였을 때, 부탄올 분획물에서 가장 아토피 개선 효과가 탁월한 것을 확인할 수 있었다.

도 8. Effects of samples on frequency of scratching on 35 day.

Data are mean ± S.E.M. ^** P<0.01 vs. Control; ⁺ P<0.05, ⁺⁺ P<0.01, ⁺⁺⁺ P<0.001 vs. Atopy.

<참두릅추출물의 경구투여에 의한 아토피성 피부질환 개선효과>

실험동물: BALB/c (6 weeks, male)

시험군

(1) Normal Control: 감작 및 재감각을 하지 않은 군

(2) Negative Control: 재감작만 한 군

(3) Atopic Control: 감작 및 재감작을 한 군

(4) Treatment: 참두릅추출물 100mg/kg을 경구투여하면서 감작 및 재감작을 한 군

측정지표

(1) Scratching Frequency

(2) Serum IgE

경구투여 실험결과

(1) Scratching Frequency

(2) Serum IgE

<참두릅 추출물의 안전성평가>

1.참두릅 추출물의 단회투여 급성독성시험

상기에서 제조한 두릅나무 80% 메탄올 추출물의 독성을 평가하기 위하여 7주령의 암, 수 ICR계 마우스를 ㈜오리엔트에서 구입하여 사용하였다. 1주일간 실험실에 순화시켰으며, 실험기간 중 사육실의 실내온도는 23±2℃, 상대습도는 50±10%, 조명시간은 12시간 (07:00~19:00)을 유지하였다. 시험물질인 두릅나무 메탄올 추출물을 칭량한 다음 0.2% 메틸셀룰로오스 (methyl cellulose)에 현탁시켜서, 예비실험에서 어떠한 독성도 발견되지 않은 단회 경구독성시험의 투여 한계용량인 2,000mg/kg의 용량을 상회하는 고용량군 (5,000mg/kg)과 저용량군 (2,500mg/kg)의 시험물질을 조제하여 강제 경구 투여하였다.

두릅나무 추출물을 1회 경구투여하여 14일간 관찰한 결과, 모든 투여 용량군에서 사망례는 전혀 관찰되지 않았고 일반적인 임상 증상에서도 아무런 이상 반응이 발견되지 않았으며, 대조군과 비교하여 체중 변화나 모든 생존 동물의 부검 소견에서도 이상이 관찰되지 않았다. 따라서 본 시험 결과는 마우스에 두릅나무 추출물을 5,000mg/kg 용량까지 1회 경구투여시 어떠한 독성 소견도 유발하지 않으므로, 최소 치사량이 5,000mg/kg 이상이라는 것을 의미한다. Hodge & Sterner (1949)의 급성독성 분류에 의하면 반수 치사량이 체중 kg당 5,000mg 이상이면 실질적으로 무독성 물질로 구분하고 있으며, 미국 환경보호청 (US EPA)에서도 경구투여 반수 치사량이 체중 kg당 5,000mg 이상이면 무해한 물질로 분류하고 있다 (1988). 상기한 기준에 의거하여 볼 때, 두릅나무 추출물의 반수 치사량이 체중 kg당 5,000mg을 훨씬 상회한다는 것은 사람에 있어서 전혀 독성이 없는 매우 안전한 물질이며, 부작용의 염려가 없는 의약품이나 기능성식품으로서의 개발 가능성이 높은 소재라는 것을 의미한다.

2. 참두릅 추출물의 4주 반복투여 독성시험

상기 실시예 1에서 제조한 두릅나무 80% 메탄올 추출물의 만성독성을 평가하기 위하여 6주령의 SFP 암, 수 랫트 (㈜오리엔트)를 4주동안 반복 경구투여하면서 독성 변화를 관찰하였다. 1주일간 실험실에 순화시켰으며, 실험기간 중 사육실의 실내온도는 23±2℃, 상대습도는 50±10%, 조명시간은 12시간 (07:00~19:00)을 유지하였다. 시험물질인 두릅나무 메탄올 추출물을 칭량한 다음 0.2% 메틸셀룰로오스 (methyl cellulose)에 현탁시켜서, 고용량군 (1,000mg/kg), 중간용량군 (500mg/kg)과 저용량군 (250mg/kg)의 시험물질을 조제하여 4주간 강제 경구 투여를 실시하면서 독성 변화를 관찰하였다.

SD계통 암, 수 랫트에 시험물질을 각각 1000, 500 및 250mg/kg의 용량으로 주 7회, 4주간 총 28회 반복 경구투여하여 임상증상, 체중변화, 사료섭취량, 음수량, 안검사, 뇨검사, 혈액학적 검사, 혈청 생화학적 검사, 부검 및 장기중량 측정, 병리조직학적 검사 등을 수행한 결과, 시험 종료시까지 암수 모든 동물에서 시험물질에 기인한 사망은 없었으며, 다른 모든 검사에서도 통계적으로 유의한 독성 변화를 관찰할 수 없었다. 이상의 결과로 보아 본 시험에서 두릅나무 추출물의 랫트에서의 4주간 반복 경구투여에 의한 의미있는 독성학적인 변화는 관찰되지 않았으며, 시험물질의 무해용량 (NOAEL, No-observed-adverse-effect level)은 본 시험 조건하에서 1,000mg/kg 이상으로 판단되었다.

3. 참두릅 추출물의 피부자극시험

실험동물은 ㈜오리엔트바이오로부터 2개월령의 수컷 토끼(Yac:NZW(KBL))를 구입하였다. 입수일로부터 8일간 순화기간을 두어 건강한 동물만을 선발한 후 경배부를 제모하여 피부에 이상이 없는 동물만을 실험에 이용하였다. 사육실의 온도는 20±3℃, 상대습도 45~65%, 조명시간 12시간(0.8:00 점등~20:00 소등), 환기일수 10~20회/시간 및 조도 150~300Lux로 설정하여 관리하였다. 사료는 토끼용 고형사료 (퓨리나코리아, 경기, 한국)를 자유롭게 섭취시켰으며, 물은 상수도를 미세여과기와 자외선 유수살균기로 소독시킨 후 자유 섭취시켰다.

시험군은 6마리를 사용하였으며 각 동물의 경배부에 약 2.5x2.5cm 정도의 크기로 척추를 중심으로 좌우 각각 2개소를 설정하여, 좌측구획은 대조구획으로, 우측구획은 시험물질을 도포하는 처치구획으로 정하여 실험하였다. 참두릅 추출물은 0.5% CMC용액에 현탁시켜서 조제하였으며, 찰과 부위당 0.5ml (10mg/100ml w/v 용액)를 경피투여하였다. 시험동물은 전일 제모를 실시한 후 처치구획 및 대조구획으로 구분하였다. 동물 1마리당 찰과부위 2개소와 비찰과 부위 2개소로 하여 우측의 찰과부위 1개소와 비찰과부위 1개소에는 각각 시험물질 0.5ml씩을 도포한 거즈를 적용하였으며, 좌측의 대조구획에는 참두릅추출물이 없는 0.5% CMC용액만을 적용하였다. 적용 후 처치구획 및 대조구획의 증발을 방지하기 위하여 침투성 및 반응성이 없는 비닐로 덮은 후 비자극성 테이프로 잘 고정하여 24시간 동안 적용시켰다. 시험물질 적용 후 증류수를 이용해 적용부위를 부드럽게 세정해 주었다. 참두릅 추출물 적용 후 72시간 까지 매일 일반증상의 변화, 중독증상 및 사망동물의 유무 등 일반증상을 관찰하였고, 시험물질 적용 전 (투여직전)과 적용 후 24시간 및 72시간째에 개체별 체중을 측정하였고, 적용부위의 홍반과 가피형성 및 부종 등의 자극성 유무를 관찰하였다. 피부반응의 평가는 식품의약품안전처고시 '의약품 등 독성시험기준'에 표시된 피부반응의 평가기준에 따라 실시하였다. 또한 결과에 대한 자극성의 정도판정은 일반적으로 많이 사용되는 Draize의 1차 자극지수 (PII, primary irritation index)의 산출방법에 따랐다.

시험결과, 모든 동물에서 참두릅 추출물의 적용과 관련된 어떠한 이상증상도 관찰되지 않았으며, 사망동물도 발견되지 않았다.

체중측정결과, 참두릅 추출물 적용 후 24시간 째의 평균 체중이 적용 전의 평균체중에 비해 다소 감소한 것으로 나타났으나, 72시간 째에는 모두 정상적인 체중증가가 관찰되었다.

참두릅 추출물 적용 후 24시간 및 72시간째에 적용 부위의 피부 자극성을 관찰한 결과, 참두릅 추출물의 적용에 의한 어떠한 이상소견도 관찰되지 않았다. 따라서 Draize의 산출방법에 따른 일차자극지수는 "0"으로 평가되었다.

결론적으로 New Zealand White계 수컷 토끼를 이용한 피부자극시험에서 참두릅 추출물은 어떠한 자극성도 유발하지 않는 매우 안전한 것으로 나타났으며, 따라서 참두릅 추출물은 피부자극독성이 없는 무자극성인 것으로 사료되었다.

이상에서 본 발명의 실시예에 대해서 상세히 설명하였으나, 이는 하나의 실시예에 불과하며, 이로써 본 발명의 특허청구범위를 한정하는 것은 아니다. 본 실시예를 바탕으로 균등한 범위까지 당업자가 변형 및 추가하는 범위도 본 발명의 권리범위에 속한다 할 것이다.

Claims (3)

1. 삭제
2. 참두릅 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.
   
3. 제2항에 있어서, 상기 참두릅 추출물 또는 이의 분획물은,
   (a) 참두릅을 건조한 후 분쇄하는 단계;
   (b) 상기 참두릅을 메탄올로 침출하는 단계;
   (c) 상기 침출시킨 시료를 초음파로 분해시키면서 추출하는 단계;
   (d) 감압흡입여과기를 이용하여 여과하여 용매 추출액을 수득하는 단계; 및
   (e) 상기 용매 추출액에서 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 가하여 재추출하는 단계;를 포함하는 추출방법에 의해 제조된 것인, 아토피성 피부염 예방 또는 치료용 조성물.