KR101740030B1

KR101740030B1 - ScFv 항체 라이브러리, 이의 제조방법 및 이를 이용한 ScFv 항체 스크리닝 방법

Info

Publication number: KR101740030B1
Application number: KR1020150032360A
Authority: KR
Inventors: 남도현; 김석형; 윤엽; 이남경; 주경민; 박현규
Original assignee: 사회복지법인 삼성생명공익재단
Priority date: 2014-03-07
Filing date: 2015-03-09
Publication date: 2017-05-29
Also published as: KR20150105615A; WO2015133882A1

Abstract

본 발명은 ScFv 항체 라이브러리, 이의 제조방법 및 이를 이용한 ScFv 항체 스크리닝 방법에 관한 것으로, 구체적으로 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)을 포함하는 ScFv 항체를 파지 표면에 제시하는 라이브러리, 이의 제조방법 및 이를 이용한 ScFv 항체 스크리닝 방법에 관한 것이다.

Description

ScFv 항체 라이브러리, 이의 제조방법 및 이를 이용한 ScFv 항체 스크리닝 방법 {Single-chain Fv Antibody Library, Method for Preparing Thereof and Screening Method of Single-chain Fv Antibody by Using the Same}

항체의약품은 높은 치료 효과 및 표적 치료성 등으로 인해 바이오 의약품 분야에서도 가장 급속도로 성장 중이다. 항체의약품의 세계 시장 규모는 연평균 10-15%의 성장을 지속하고 있는 가운데, 2010년 447억 달러의 시장을 형성한 것으로 알려져 있다. 항체의약품의 주요 표적이 되는 질환은 대부분이 난치성 암(49%) 및 면역질환(35%)과 같이 특정 질환 적응증에 집중되어 있어, 유사 적응증 제품간의 판매경쟁이 치열한 상황이다. 그럼에도 불구하고, 질환들 내 세분화되는 치료 표적들이 존재하기 때문에 향후에도 항암용 항체치료제 개발 분야는 성장세를 지속할 것으로 판단된다.

아울러, 최근에는 다양한 분석 기술의 발달로 인해 개인 맞춤형 질환치료(personalized medicine) 분야가 확대되고 있는 실정이다. 이러한 맞춤형 질환치료 전략은 기존의 치료제(항체, 합성의약품)를 조합하거나, 신규 표적에 대한 항체치료제를 적용하는 것을 최적인 것으로 평가하고 있기 때문에, 항체 개발 R&D 분야 역시 이에 따른 성장세를 보일 것으로 전망된다.

현재 항체 후보물질의 동정 및 확보에 이용되는 기술은 하이브리도마 세포주를 이용한 키메릭(chimeric) 또는 인간화(Humanized) 항체의 개발, 형질전환 마우스(Transgenic mouse)를 이용하는 방법 및 항체 디스플레이 기술을 이용하는 방법으로 크게 구분할 수 있다.

초기의 항체의약품은 하이브리도마 세포주를 이용한 마우스 단일클론 항체 개발 기술과 함께, 키메릭(인간/마우스) 또는 인간화 단일 클론 항체 형태로 항체공학을 통해 개선하여 개발되었다. 그러나, HAMA(Human-anti-mouse antibody) 반응을 해결하기 위해 CDR-Grafting 기술이 개발되고, 이를 통해 면역원성이 감소되었지만, 개선된 항체의 항원 결합력의 감소에 대한 문제점이 나타났다. CDR-Walking 기술을 통해 인간화 과정에서 저하된 항체의 항원 결합력은 개선되었지만, 면역원성을 감소시키거나 제거하지 못하는 문제가 나타났다.

이러한 약효 감소 및 기술적 어려움으로 인해, 인간항체(Human antibody)를 개발하기 위한 연구가 활발히 진행이 되었다. 인간항체는 100% 인간유래의 항체 서열을 가지고 있어 면역원성에 관한 문제를 완전하게 해결할 수 있어, 이상적인 치료용 항체의 형태이다.

인간항체를 제작하기 위한 기술 분야는 크게 형질전환 마우스 및 항체 디스플레이(파지 디스플레이, 이스트 디스플레이, 리보솜 디스플레이 등)를 예시할 수 있다. 최근 많이 시도되고 있는 형질전환 마우스를 이용한 항체의 개발은 인간항체 유전자를 이식한 형질전환 마우스에 기존의 하이브리도마 기술을 적용시켜 인간 단일클론항체를 제조하는 기술이다. 이 기술은 생체 내 친화도 성숙(in-vivo maturation)이 가능하기 때문에 친화력이 높은 항체를 제조할 수 있으며, 인간항체를 효과적으로 만들 수 있다는 큰 장점이 있으나, 형질전환 마우스의 사용 조건이 비싸고, 제작 노하우(knowhow) 등 기술적 진입이 어려운 측면이 있다.

파지 디스플레이(Phage display), 이스트 디스플레이(Yeast display) 및 리보솜 디스플레이(Ribosomal display) 등의 항체 절편 디스플레이 기술은 인간화 항체의 개발 연구와 맞물려, 항체 후보물질을 발굴하기 위해 현재까지 다양한 전략으로 접근되는 방법이다. 1990년대 후반부터 인간항체 파지 라이브러리(Human Antibody Phage Library) 기술이 개발되어 지금까지 다양한 항체 개발 연구에 이용되고 있다.

이 중, 파지 디스플레이는 박테리오파지의 표면에 항체단편을 발현시켜 항체를 스크리닝하는 기술이며, 기존의 항체개발 기술(하이브리도마를 이용한 키메릭/인간화 항체 개발, 유전자 이식 트랜스제닉 마우스를 이용한 항체 개발)에 비해 단시간에 항원 특이적 항체를 동정할 수 있다는 장점이 있다. 높은 다양성의 라이브러리가 확보되어야 효과적인 항체를 동정할 수 있다는 단점이 있지만, 최근의 유전자 증폭 기술 및 클로닝 기술의 발달로 인해 라이브러리 확보는 상당 부분 해결되고 있다.

인간 유전자 기반의 자연적 라이브러리에 비해, 항체의 상보성결정부위(CDR)에 무작위 합성 서열을 넣어 다양성을 창조한 것을 합성 항체 라이브러리(Synthetic antibody library)라고 한다. 그러나, 합성 항체 라이브러리는 돌연변이나 프레임시프트(frameshift) 등의 영향으로 정상적으로 기능 가능한 항체 단편의 비율이 자연적 인간 라이브러리에 비해 낮다. 최근에는 신규 표적항원을 동정하기 위한 항체 라이브러리 이용 전략이 다양해지고 있으며, 대표적으로 종양 유래 1차세포(Tumor-derived primary cells)를 이용한 셀 패닝(Cell panning)을 통해 신규 항원 특이적 항체를 동정하였다 (Zhu X. et al., Mol. Cancer Res. 2010).

이와 같이, 다양한 접근 전략이 가능하기 때문에 지속적인 항체 후보물질이 확보될 수 있고, 클로닝을 통해 항체를 생산할 수 있기 때문에 파지 디스플레이는 효율적인 접근 전략이라 할 수 있다. 이러한 파지 디스플레이 기술을 응용하여 동정된 다양한 종류의 암을 표적으로 하는 후보 항체의약품들이 임상에 진입하고 있다. 파지 디스플레이 기술의 활용을 위해, 목적하는 항체 동정을 위해서는 항체 가변영역 유전자들의 라이브러리화가 필요하며, 다양한 라이브러리 구축이 필수적이라 할 것이다.

이러한 배경하에서, 본 출원의 발명자들은 특정 구조의 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현된 ScFv 항체를 파지 표면에 제시하는 라이브러리 및 이의 제조방법을 통해, HAMA 반응을 유발하지 않는 인간항체를 편리하면서도 효율적으로 스크리닝할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 질병의 치료 또는 진단에 효과적으로 사용될 수 있는 인간항체를 스크리닝하기 위한 ScFv 라이브러리, 이의 제조방법 및 이를 이용하여 항체를 스크리닝하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 ScFv 항체를 표면에 제시하는 파지를 포함하는 라이브러리로,

상기 ScFv 항체는 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)을 포함하고,

상기 ScFv 항체는 면역 기관 유래 세포에서 추출된 핵산을 주형으로 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 특이적 프라이머를 이용하여 합성된 핵산으로부터 코딩된 것임을 특징으로 하는 라이브러리에 관한 것이다.

상기 ScFv 항체는 핵산이 클로닝된 하기 구조의 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현되어, 형질전환체에 포함된 파지 표면에 제시되는 것일 수 있다:

A-X-B-링커-C-Y-D-E

상기 A~D는 SfiⅠ, NheⅠ, BglⅡ 및 NotⅠ으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제한효소 인식 부위이고,

상기 E는 His tag 또는 HA(Hemagglutinin) tag 삽입 부위이며,

상기 X는 중쇄 가변영역(V_H)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이며, Y는 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이다.

본 발명은 또한, 면역 기관 유래 세포에서 핵산을 추출하는 단계; 상기 추출된 핵산을 주형으로 하고, 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 특이적 프라이머를 이용하여 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 증폭하는 단계; 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 벡터에 클로닝한 다음 형질전환체에 도입하는 단계; 및 상기 형질전환체에서 ScFv 항체를 발현하여, 형질전환체에 포함된 파지 표면에 발현된 ScFv 항체를 제시하는 단계를 포함하는 라이브러리의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명은 더욱이, 상기 라이브러리를 항원과 반응시켜 항원 특이적 ScFv 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 ScFv 항체 스크리닝 방법에 관한 것이다.

본 발명을 통해, 높은 수준의 다양성을 가지는 라이브러리 구축이 가능할 뿐 아니라, ScFv가 인간항체이므로 종래 기술을 통해 스크리닝된 항체와 비교하여 HAMA 반응이 나타나지 않는 항체를 스크리닝할 수 있으며, 질환의 치료 또는 진단에 효과적으로 사용할 수 있는 항체의 개발을 가능하도록 한다.

도 1은 본 발명에 따라 구축된 pSIA23 벡터의 지도이다.
도 2는 본 발명에 따른 pSIA23 벡터를 구축하는 과정을 도시한 모식도이다.
도 3은 프라이머 혼합물을 이용하여 골수/혈액/편도 샘플로부터 수득된 cDNA의 V_H 및 V_Lλ/V_Lκ 유전자 증폭 양상을 확인한 결과를 나타낸 사진이다.
도 4는 T-벡터에 삽입된 V_H 및 V_Lλ/V_Lκ 유전자의 콜로니 PCR 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 콜로니 PCR을 통해 V_Lλ/V_Lκ의 삽입 효율을 확인한 결과를 나타낸 사진이다.
도 6은 인간항체 라이브러리의 구축 과정을 나타내는 모식도이다.
도 7 은 콜로니 PCR을 통해 V_H의 삽입을 확인한 결과를 나타낸 사진이다.
도 8은 아과(subfamily)를 도표화한 그래프이다.
도 9는 KABAT DB를 이용하여, 서열 분석된 항체단편(scFv) CDR-H3의 길이 분포 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 KABAT 위치별 다양한 아미노산의 분포 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 Dot-blot 실험을 통해 항체단편(scFv)의 발현 유무 확인한 결과를 나타낸 사진이다.
도 12는 각 항원에 대한 라이브러리 패닝 결과를 나타낸 표이다.
도 13은 각 항원 특이적 항체단편(scFv)의 스크리닝 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 DLL4_C01 클론의 파지 회수 후, ELISA를 통한 결합 양상을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 항체단편 발현 세포주(TOP10F')로 형질전환 후, 순수한 항체단편의 발현 및 정제를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 16은 DLL4에 대한 항체 단편의 결합양상을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 17은 교모세포종(GBM) 환자 세포인 626T를 이용하여 EGFRvIII 특이적 항체를 동정하는 cell panning 모식도이다.
도 18은 626T 환자 세포에서 EGFRvIII 돌연변이를 확인하고 cell panning을 통해 EGFRvIII 특이적 항체단편들이 농축됨을 나타낸 것이다.
도 19는 본 항체라이브러리에서 동정된 3종의 EGFRvIII 항체의 항원 특이적 결합을 확인하고, 표면플라스몬공명법(Surface Plasmon Resonance)을 통해 결합상수 (SPR analysis)를 측정하고, 세포성장 억제능을 나타낸 것이다.

일 관점에서, 본 발명은 ScFv 항체를 표면에 제시하는 파지를 포함하는 라이브러리로, 상기 ScFv 항체는 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)을 포함하고, 면역 기관 유래 세포에서 추출된 핵산을 주형으로 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 특이적 프라이머를 이용하여 합성된 핵산으로부터 코딩된 것임을 특징으로 하는 라이브러리에 관한 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "항체"는 IgA, IgE, IgM, IgD, IgY 및 IgG로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린으로, 목표 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 경쇄(light chain)와 중쇄(heavy chain) 각각 2개씩 모여 이루어지며, 각각의 사슬은 아미노산 서열이 가변적인 가변영역(variable domain)과 일정한 서열을 가지는 고정영역(constant domain)으로 이루어져 있다. 가변영역의 3차원구조 말단에 항원이 결합하는 부위가 위치하며, 이 부위는 경쇄와 중쇄에 각각 3개씩 존재하는 상보성결정부위(complementarity determining region)들이 모여서 형성된다. 상보성결정부위는 가변영역 중에서도 아미노산 서열의 가변성이 특히 높은 부분이며, 이러한 높은 가변성에 의해 다양한 항원에 대해 특이적 항체가 찾아질 수 있다.

"ScFv (single-chain Fv, 단일사슬단편항체 또는 항체 단편)"는 경쇄 및 중쇄의 가변영역을 연결한 항체이다. 경우에 따라서, 15개 내외의 아미노산이 연결된 펩타이드 사슬로 이루어진 링커(linker, 연결부위)를 포함할 수 있으며, 이 때, ScFv는 경쇄 가변영역-연결부위-중쇄 가변영역, 또는 중쇄 가변영역- 연결부위-경쇄 가변영역의 구조를 가질 수 있으며, 원 항체와 동일 혹은 유사한 항원특이성을 가진다.

"항체(또는 ScFv) 라이브러리"는 서로 다른 서열을 가지는 다양한 항체 유전자들의 집합이다. 항체 라이브러리로부터 임의의 항원에 대해 특이적 항체를 분리하기 위해서는 매우 높은 다양성이 요구되며, 서로 다른 항체 클론들로 이루어진 라이브러리가 구축되어 사용된다. 이러한 항체라이브러리를 이루는 항체 유전자는 예를 들어, 파지미드(phagemid) 벡터에 클로닝되어 형질전환체(대장균)에 형질전환될 수 있다.

상기 "핵산"은 유전자 또는 뉴클레오티드와 혼용될 수 있으며, 예를 들어 천연/합성 DNA, 게놈 DNA, 천연/합성 RNA, cDNA 및 cRNA로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

"파지미드" 벡터는 파지 디스플레이에 사용되고, 파지복제시작점(phage origin of replication)을 가지는 플라스미드 DNA이며, 통상적으로 항생제내성유전자를 선택 마커(selection marker)로 가지고 있다. 파지 디스플레이에 사용되는 파지미드 벡터의 경우 M13 파지의 gIII 유전자 또는 그 일부가 포함되어 있으며, ScFv 유전자는 gIII 유전자의 5' 말단에 라이게이션(ligation)되어 형질전환체를 통해 발현된다.

"헬퍼 파지(helper phage)"는 파지미드가 파지 입자로 조립되도록 필요한 유전정보를 제공하는 파지이다. 파지미드에는 파지 유전자 중 gIII 혹은 그 일부만이 존재하므로 파지미드로 형질전환된 숙주세포(형질전환체)를 헬퍼 파지로 감염시켜 나머지 파지 유전자를 공급하게 된다. M13K07 혹은 VCSM13 등의 종류가 있으며 대부분 카나마이신(kanamycin) 등 항생제 내성 유전자를 포함하여 헬퍼 파지에 감염된 형질전환체를 선택할 수 있도록 하고 있다. 또한 조립신호(packaging signal)에 결함이 있으므로 헬퍼 파지 유전자보다 파지미드 유전자가 선별적으로 파지입자 속으로 조립된다.

"신호서열"은 유전자의 5' 말단부분에 위치하여, 유전자로부터 코딩된 단백질이 외부로 분비될 때 필요한 신호로 기능하는 염기서열 혹은 그에 상응하는 아미노산 서열이다.

일 실시예에서, 상기 ScFv 항체는 핵산이 클로닝된 하기 구조의 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현되어, 형질전환체에 포함된 파지 표면에 제시되는 것일 수 있다.

A-X-B-링커-C-Y-D-E

상기 E는 His tag 또는 HA(Hemagglutinin) tag 삽입 부위이며,

본 발명에 따른 A-X-B-링커-C-Y-D-E 구조 중 A~D의 제한효소 인식 부위에 대한 유전자 서열은 X 부위에 삽입될 V_H를 코딩하는 유전자 및 Y 부위에 삽입될 V_Lκ 또는 V_Lλ를 코딩하는 유전자의 서열을 고려하여, 각 유전자를 절단하지 않는 범위 내에서 선택되어야 한다.

본 발명에 따른 구조를 포함하는 벡터는 예를 들어, pSIA23 벡터일 수 있으며, 이의 개열지도는 도 1에 도시된 바와 같다. 도 1에 도시된 pSIA23 벡터의 구조를 참조하면, 구조 중 A에서 E 방향 즉, 5'에서 3' 방향으로 SfiⅠ- NheⅠ- BglⅡ- NotⅠ의 제한효소의 인식부위를 포함할 수 있다. 도 1을 참조하면, 상기 A는 SfiⅠ, B는 NheⅠ, C는 BglⅡ 및 D는 NotⅠ 제한효소의 인식 부위일 수 있다.

상기 링커는 앞서 설명한 ScFv에서 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 연결하는 연결부위로, 주로 글리신(glycine)과 세린(serine)으로 이루어진 친수성의 유연한 펩티드 사슬로서 "(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)₃"의 15개의 아미노산 서열 또는 이와 유사한 서열을 코딩하는 유전자가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 구조를 포함하는 벡터를 제조하는 과정은 도 2에 도시되어 있다. 도 2를 참조하면, pCANTAB 5E 파지미드 벡터를 기반으로 중쇄 가변영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 삽입을 위해 제한효소 인식 부위를 구축하고, 주변세포질로의 발현 유도를 위해 신호서열의 하나로 pelB 서열을 추가할 수 있다. 또한, pCANTAB 5E 벡터가 가지는 E-tag보다 광범위하게 쓰이는 His6-tag 및 HA-tag으로 표지 tag를 교체할 수 있다. 이후, 제한효소 인지부위 최적화(optimization)를 통해 X 및 Y를 절단할 수 있는 제한효소는 제외한 제한효소 인지부위를 포함하는 라이브러리 벡터 pSIA23을 제조할 수 있다.

상기 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현된 항체는 형광 마커 등을 통해 태깅된 항원을 통해 표지화 또는 ELISA 등을 통해 확인할 수 있다.

원하는 특성을 보유하는 항체를 발현하는 형질전환체가 동정되면, 항체들을 암호화하는 핵산을 분리하고, 이 핵산이 원하는 생물학적 특성을 보유하는 항체를 암호화하는지 여부를 확인하기 위해 다시 테스트할 수도 있다.

하나의 실시예에서, 본 발명에 따른 ScFv는 미감작 인간항체일 수 있다. 상기 ScFv는 면역 기관 예를 들어, 골수, 혈액 또는 편도에서 유래한 미감작 인간항체일 수 있다. 상기 ScFv의 중쇄 가변영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 유전자는 인간의 면역 기관에서 분리된 세포에서 RNA를 추출하여 수득할 수 있다. 특히, 본 출원의 발명자들은 다양한 B세포 레퍼토리를 가지는 편도 조직을 사용하여 ScFv 라이브러리 구축을 위한 RNA (cDNA)를 확보하였다 (실시예 2).

예를 들어, 인간의 면역 기관에서 분리된 단핵세포로부터 RNA를 추출하여 cDNA를 합성한 다음, 표 1 (서열번호 7 내지 58)의 프라이머 혼합물, 예를 들어 V_H유전자 증폭을 위한 서열번호 7~24로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머 및 V_L 유전자 증폭을 위한 서열번호 25~58로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머를 포함하는 혼합물로 cDNA를 증폭하여 V_H및V_L를 코딩하는유전자를 수득할 수 있다. 중쇄 가변영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)이 100% 인간 유래이기 때문에, 본 발명에 따른 ScFv는 기존의 기술(예. 하이브리도마 등)에서 나타나는 HAMA 반응이 나타나지 않는다.

이 때, 수득된 상기 중쇄 가변영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)은 각각 표 6 및 표 7의 서열(서열번호 63 내지 254)을 가질 수 있다. 구체적으로, 중쇄 가변영역은 서열번호 63-104 (V_H-V_Lλ 중 중쇄 가변영역으로 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 구조를 가짐), 147-200 (V_H-V_Lκ 중 중쇄 가변영역으로 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 구조를 가짐)로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가질 수 있으며, 경쇄 가변영역은 서열번호 105-146 (V_Lλ,FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 구조를 가짐), 201-254 (V_Lκ,FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 구조를 가짐)로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가질 수 있다.

HAMA 반응을 고려하여, 인간항체의 연구/제품 개발이 활발히 이뤄지고 있으며, 본 발명에 따른 라이브러리를 통하여 동정될 ScFv의 경우 항체의 약 1/6 정도의 크기를 가지기 때문에, 조직이나 종양으로의 침투율이 우수하므로, 생체 진단용으로 이용이 가능하다.

경우에 따라서, ScFv를 면역글로불린의 형태로 전환하여 치료용 항체로도 사용 가능하다. 또한, 인체 내에서 반감기가 짧으나, 약물전달 시스템인 페길레이션(PEGylation) 기술을 통해 반감기를 증가시킴으로써 치료용 항체로 개발도 가능하다. 아울러, 이중 특이 항체 등과 같은 새로운 형태의 항체 플랫폼 개발에 적용 가능하다.

본 발명에 따른 라이브러리의 다양성은 높은 수준으로 약 10⁸~10¹⁴의 다양성을 나타낼 수 있으며, 본 발명에 의해 약 10¹⁰수준의 항체 라이브러리를 구축할 수 있다. 경우에 따라서, 클로닝 과정에서 항체의 중쇄 (V_H) 및 경쇄 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 유전자 조합 과정으로 생겨나는 임의의 조합에 의해 다양성을 더욱 증가시킬 수 있다.

다른 관점에서, 본 발명은 면역 기관 유래 세포에서 핵산 추출하는 단계; 상기 추출된 핵산을 주형으로 하고, 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 특이적 프라이머를 이용하여 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 증폭하는 단계; 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 벡터에 클로닝한 다음 형질전환체에 도입하는 단계; 및 상기 형질전환체에서 ScFv 항체를 발현하여, 형질전환체에 포함된 파지 표면에 발현된 ScFv 항체를 제시하는 단계를 포함하는 라이브러리의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명에 따른 제조방법은 면역 기관 유래 세포에서 핵산 추출하는 단계를 포함한다. 하나의 실시예에서, 면역 기관 예를 들어, 골수, 혈액 또는 편도에서 분리된 세포에서 RNA를 추출하여 수득할 수 있다.

본 발명에 따른 제조방법은 상기 추출된 핵산을 주형으로 하고, 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H) 및 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ) 특이적 프라이머를 이용하여 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 증폭하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 추출된 RNA로부터 cDNA를 합성한 다음, 표 1 (서열번호 7 내지 58)의 프라이머 혼합물, 예를 들어 V_H유전자 증폭을 위한 서열번호 7~24로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머 및 V_L 유전자 증폭을 위한 서열번호 25~58로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머를 포함하는 혼합물로 cDNA를 증폭하여 V_H및V_L를 코딩하는유전자를 수득할 수 있다.

이후, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 벡터에 클로닝한 다음 형질전환체에 도입하는 단계를 포함한다. 상기 ScFv 항체는 핵산이 클로닝된 하기 구조의 벡터가 도입된 형질전환체에 도입될 수 있다:

A-X-B-링커-C-Y-D-E

상기 E는 His tag 또는 HA(Hemagglutinin) tag 삽입 부위이며,

상기 X는 중쇄 가변영역(V_H)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이며, Y는 경쇄 가변영역 (V_Lκ 또는 V_Lλ)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이다. 각 구성의 구체적 설명은 앞서 언급한 바와 같다.

본 발명에 따른 제조방법은 상기 형질전환체에서 ScFv 항체를 발현하여, 형질전환체에 포함된 파지 표면에 발현된 ScFv 항체를 제시하는 단계를 포함한다. 상기 형질전환체의 종류는 예를 들어, 대장균이 바람직하다. E.coli DH5a, E.coli JM101, E.coli K12 294, E.coli W3110, E.coli X1776, E.coli XL-1Blue(Stratagene), E.coli B, FMB101, NM522, NM538 및 NM539 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 또한, 상기 라이브러리를 항원과 반응시켜 항원 특이적 ScFv 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 ScFv 항체 스크리닝 방법에 관한 것이다.

상기 스크리닝은 방법은 라이브러리의 형질전환체와 파지를 배양하여 파지 표면에 발현된 ScFv 항체를 항원과 결합시켜 원하는 항체를 발현하는 형질전환체를 스크리닝하고, 선별하는 과정을 포함할 수 있다. 이러한 스크리닝 및 선별 단계는 당 업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 수행될 수 있다.

예를 들어, 상기 라이브러리로부터 패닝(panning) 방법에 의하여 특정 항원에 결합하는 ScFv 항체를 분리하여 제작할 수 있다. 상기 패닝은 특정 항원(target antigen)에 파지를 결합시키고 결합하지 않은 파지를 제거한 후, 결합된 파지를 회수하여 숙주세포에 감염시킴으로써 파지 수를 증폭하고, 이 과정을 2-4회 반복하는 과정을 포함할 수 있다.

본 발명의 스크리닝 방법에 따르면, 자가면역질환 또는 암을 치료하는 ScFv 항체를 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 자가면역질환 또는 암을 유발하는 것으로 공지된 인자에 특이적으로 결합하는 ScFv 항체를 스크리닝할 수 있으며, 스크리닝된 ScFv 항체는 길항제로 작용하여, 자가면역질환 또는 암 유발 타겟의 발현을 억제함으로써 질환을 치료할 수 있다.

자가면역질환은 항체 또는 림프구와 같은 면역계 성분이 이를 생성하는 유기체의 분자, 세포 또는 조직을 공격하거나 유해하게 되는 자가면역 과정에 의해 발병되는 장애를 의미하며, 예를 들어 다발성 경화증, 동종이식 거부반응, 자가면역 갑상선 질환, 염증성 장 질환 (크론병, 궤양성 결장염, 국소성 장염 등), 건선, 류마티스성 관절염 또는 전신성 홍반성 루푸스를 들 수 있다.

암은 신생물성 세포 성장과 증식 및 조절되지 않은 세포 성장/증식에 의해 발병되는 질환을 의미할 수 있다. 암의 예시로는 편평세포 암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평 암종, 복막암, 간세포 암, 위장관 암, 췌장암, 아교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장암, 간암, 전립선 암, 외음부 암, 갑상선 암, 간 암종, 위암, 흑색종, 및 다양한 유형의 두경부암이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.

하나의 실시예에서, 본 발명에 따른 스크리닝 방법에 의해 DLL4 (Delta like ligand 4) 단백질을 타겟으로 하는 ScFv 항체를 스크리닝할 수 있으며, 스크리닝된 ScFv 항체는 DLL4 단백질에 유의적인 결합능이 있음을 확인하였다 (실시예 13-16 참조). 또 다른 실시예에서, EGFRvIII 특이적인 항체를 cell panning 기법을 통해 동정하고, 스크리닝된 ScFv 항체는 EGFRvIII에 유의적인 결합능이 있음을 확인하였으며, 세포성장 억제능을 보임을 확인하였다 (실시예 17-19 참조).

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 항체 라이브러리 제작을 위한 파지미드 벡터 구축

pCANTAB 5E 파지미드 벡터를 기반으로, 벡터 내에 V_H 및 V_L 삽입을 위한 제한효소 인지서열 삽입 및 주변세포질로의 발현 유도를 위한 pelB 서열을 삽입하였다. 추가적으로, 표지 tag 변경을 통해 자체적인 라이브러리 구축용 벡터인 pSIA23 벡터를 도 2의 방법으로 구축하였다. V_L → V_H 의 순차적인 삽입을 통한 라이브러리 구축을 위해, V_H가 삽입될 부위에 제한효소 SfiⅠ, NheⅠ 인지서열, V_L이 삽입될 부위에 BamHⅠ, NotⅠ 인지서열을 삽입하고, pelB 서열도 삽입하기 위해 4가지 올리고뉴클레오티드를 설계하였다. 사용된 올리고뉴클레오티드는 다음과 같다.

서열번호 1: 5'-TAC GCC AAG CTT GGA GCC ATG AAA TAC CTG CTG CCG ACC GCT GCT GCT GGT-3',

서열번호 2: 5'-TCA GCG CAA CAC GCT AGC GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA GGT GGA TCC GGC GGT GGC GG-3',

서열번호 3: 3'-CTG GCG ACG ACG ACC AGA CGA CGA GGA GCG CCG GGT CGG CCG GAG TCG CGT TGT GCG AT-5'

서열번호 4: 3'-TAG GCC GCC ACC GCC TAG CCC TAG GAC ACT TAC CCT GCG CCG GCG TTA AT-5'.

4가지 올리고뉴클레오티드를 이용한 어셈블리 PCR(Assembly PCR)을 통해 삽입할 주형을 완성하고, HindIII, NotⅠ으로 절단된 뼈대 벡터(pCANTAB 5E)에 삽입을 완료하였다. 기존 pCANTAB 5E 벡터가 가지는 E-tag보다 광범위하게 쓰이는 His6-tag, HA-tag을 삽입하였다. 표지 tag 교체를 위해 양 말단에 제한효소 NotⅠ, EcoRⅠ인지 서열이 도입된 프라이머 세트를 합성하여 pCOMB3X 파지미드 벡터로부터 His₆-HA-Amber codon-pIII 서열을 증폭을 시켰다. 사용된 프라이머는 다음과 같다[서열번호 5(F-프라이머(NotⅠ)) : 5'-TTT GCG GCC GCC ACC ATC ACC ATC ACC ATG G-3', 서열번호 6(R-프라이머(EcoRⅠ)) : 5'-CGG AAT TCA GAC TCC TTA TTA CGC AGT ATG TTA GC-3']. 이를 NotI/EcoRI으로 절단된 pSIA23 벡터 내에 삽입하였다. 초기 벡터 설계에 사용된 BamHⅠ의 제한효소 인지서열이 경쇄 서열 내부에 존재함을 문헌상에서 확인한 후, BamHⅠ을 BglⅡ로 변환을 하여, 도 1에서와 같이 최종 라이브러리 벡터(pSIA23)의 구축을 완료하였다.

실시예 2: ScFv 라이브러리 구축을 위한 각 장기 조직 및 cDNA 확보

골수(20명)/혈액(40명)/편도(16명) 유래 항체의 가변영역 유전자 추출은 다음과 같이 진행하였다. 본 발명의 라이브러리는 다양한 B세포 레퍼토리를 가지는 편도 조직을 사용하여 ScFv 라이브러리 구축을 위한 RNA (cDNA)를 확보하였다는 점에서, 기술적 차별성을 가지며 특이하다.

건강한 기증자의 골수를 STEMCELL Technologies를 통해 동결 1차 세포(~1.5 x 10⁷ cells/vial, 총 20 vial)의 형태로 확보하였다. Ficoll gradient를 이용하여 단핵세포만을 확보한 후, 다음과 같이 RNA 추출을 진행하였다. 1mL의 Tri-reagent(Molecular Research Center) 첨가 및 반복적인 피펫팅 후 상온에서 5분간 정치하고 세포를 용해시킨 후, 100μL의 BCP(biphasic calcium phosphate)를 첨가하고, 15초간 수 차례 흔들어 주었다. 4℃, 13,000rpm에서 15분간 원심분리 후, 조심스럽게 상층액만 분리하여, 500μL의 isopropanol을 첨가한 후, 상온에서 10분간 정치하였다. 15℃, 13,000rpm에서 10분간 원심분리하여 RNA 알갱이를 획득하였다. 얻은 RNA의 순도를 높이기 위해, 75% EtOH 1mL로 부유하고 및 강하게 흔들어 섞어준 후 15℃, 13,000rpm에서 5분간 원심분리하였다. EtOH을 버린 후 알갱이를 상온에서 건조(약 10분)한 다음, RNase-free water(DEPC-treated) 50μL로 부유시키고, Bioanalyzer (Nanodrop)를 이용하여 RNA 농도를 측정하였다. 혈액의 경우, 건강한 기증자의 혈액 10mL을 PBS 10mL에 혼합한 후, Ficoll gradient로 단핵세포를 확보하고 위와 같은 방식으로 RNA가 추출되었다. 편도의 경우, 편도 조직 200mg에 Tri-reagent (Molecular Research Center) 2mL을 넣은 후, 조직 파쇄를 진행하였다. 파쇄된 조직에 200μL의 BCP를 투입 후, 실험 방법은 위와 같이 진행하였다. 준비된 각 조직의 RNA 5μg 을 이용, superscript III cDNA synthesis kit(Invitrogen)으로 cDNA를 합성하여 항체의 가변영역 유전자 증폭에 이용하였다.

실시예 3: V _H 및 V _L (λ/κ) 유전자 증폭

골수/혈액/편도 3가지 조직에서 합성한 cDNA 혼합물을 주형으로 하고, 중쇄 14종 및 경쇄 28종(kappa 13, lambda 15)의 프라이머를 이용하여 PCR을 실시하였다. V_H, V_Lκ, V_Lλ 단편의 증폭을 위한 프라이머 세트는 다음 표 1과 같이 설계 및 합성하여 이용되었다.

[표 1]

구축된 pSIA23 파지미드 내 가변영역 유전자 클로닝을 위해 삽입된 제한효소 서열은 SfiⅠ-NheⅠ(V_H 삽입용), BglⅡ-NotⅠ(V_L 삽입용)이다. 이에 맞게, 표 1에서와 같이 증폭되는 V_H 단편의 양 말단에는 SfiⅠ-NheI을 삽입하고, V_L 단편의 양 말단에는 BglⅡ-NotⅠ을 삽입하는 형태로 프라이머를 제작하였다. 중쇄 가변영역 유전자 증폭은 각 14종의 F-프라이머 및 4 종의 R-프라이머가 이용되었으며, 합성된 프라이머는 가변영역 하위집단의 유전자 발현 정도 차이로 나누어, 표 2와 같이 V_H는 총 5세트 V_H1(서열번호 7-10), V_H3(서열번호 13-15), V_H5(서열번호 18), V_H6(서열번호 19), V_H2+4+7 (서열번호 11-12, 16-17, 20) F-프라이머로 나누고, JH₁₂, JH₄₅, JH₃, JH₆ (서열번호 21-24) R-프라이머가 동일 몰수로 혼합된 프라이머를 사용하였다.

[표 2]

경쇄 가변영역 유전자 증폭 역시 카파 증폭용 13종의 F-프라이머 (서열번호 25-37), 람다 증폭용 15종의 F-프라이머(서열번호 38-52)를 각각 4종의 F-프라이머 세트로 나누어, 각각에 해당하는 R-프라이머 혼합물(카파: 서열번호 53-54, 람다: 서열번호 55-58)과 동일 몰수로 혼합하여 증폭을 실시하였다. V_H/V_L 증폭을 위한 PCR 조건은 다음과 같다. 95℃, 5분; (95℃, 30초 - 56℃, 30초 - 72℃, 45초) 30회 반복; 72℃, 7분. 증폭 완료시 V_H 단편은 SfiⅠ, NheⅠ를 포함한 약 400bp, V_L 단편은 BglⅡ, NotⅠ site를 포함한 약 360bp크기로 증폭되었으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3을 참조하면, 다양한 V_H및 V_Lλ/V_Lκ 유전자가 성공적으로 증폭되는 양상을 확인하였다. 증폭된 PCR 결과물은 PCI 추출 후 EtOH 침전을 통해 정제 및 농축하였다. 농축된 PCR 결과물은 2% 아가로즈 젤에서 전기영동 후, 해당 크기(V_H=~400bp, V_Lλ/V_LK=~350bp)를 확인하고, 회수된 각 단편은 DNA 농도 측정 후 클로닝을 위해 -20℃에서 보관하였다.

실시예 4: V _H 및 V _L(λ/κ) 유전자 T-벡터로 서브클로닝

항체 라이브러리 구축을 진행하기 전에, 삽입된 가변영역의 서열에 문제가 없는지 확인하기 위해 T-벡터 서브클로닝을 진행하였다. T-벡터: V_H&V_Lλ/V_Lκ단편의 몰 수 비율을 1:3으로 하여 각각 100ng, 40ng을 이용, 16℃, 밤샘배양 조건에서 결찰을 실시하였다. 65℃, 10분간 두어 효소 불활성화를 한 후, microcon centrifugal filter devices(Millipore)를 이용하여 dH₂O에 10μL로 용출하여 정제 및 농축을 진행하였다. 항체 가변영역 유전자가 삽입된 T-vector, 5μL와 electro-competent cell(E. cloni 10G, Lucigen) 25μL를 혼합 후 0.1cm electro-cuvette에 옮겨 1.8kV에서 형질전환을 실시하였다. 형질전환된 숙주를 1mL S.O.C. 배지에 부유하여 37℃에서 1시간 배양 후, 10μL 순차적인 희석 (10^-2~10^-6)을 통해 적정하고, 잔여 배양된 형질전환체들은 15cm 플레이트(LB/암피실린/0.5% 글루코오스)에 도말하여 37℃, 밤샘배양함으로써 성장한 숙주세포들을 확보한 후, 분주하여 -80℃에 보관하였다. 결과적으로, 표 3에서와 같이 10회의 T-벡터-V_Lκ 형질전환을 통해 V_Lκ T-벡터 라이브러리 (총 ~1.29x10⁸ cfu)를 얻었으며, 8회의 T-벡터-V_Lλ 단편 형질전환을 통해, V_Lλ T-벡터 라이브러리 (총 ~1.05 x10⁸ cfu)를 얻었다. 또한, 6회의 T-벡터-V_H 형질전환을 통해 V_H T-벡터 라이브러리 (총 ~3.03 x10⁸ cfu)를 얻었다.

[표 3]

실시예 5: V _H 및 V _L(λ/κ) 유전자의 성능 평가

V_H 및 V_L(λ/κ) 단편이 서브클로닝된 형질전환 콜로니 내 T-벡터를 주형으로 이용하여, 플라스미드 내 특정 부위를 인식하는 프라이머를 이용한 PCR을 수행하여, V_H 및 V_L(λ/κ) 단편이 제대로 삽입되어 있는지 확인하였다. V_H 및 V_L(λ/κ) 형질전환 후, 콜로니를 팁으로 찍어 PCR 혼합물에 섞어주었다. 콜로니 PCR에 사용된 프라이머 서열은 다음과 같다

서열번호 59 (F-프라이머 (M13-F)): 5'-ACA GGA AAC AGC TAT GAC-3',

서열번호 60 (R-프라이머 (M13-R)): 5'- GTT TTC CCA GTC ACG A-3'.

PCR을 진행하고, 2% 아가로스 젤을 이용하여 제대로 삽입이 되어 있는지를 확인하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4를 참조하면, 대부분이 문제없이 제대로 삽입되어 있음을 확인하였다. V_H 및 V_L(λ/κ) 형질전환하고, 개별 콜로니의 플라스미드를 획득한 후, M13 F-프라이머를 이용하여, 클로닝된 V_H 및 V_L(λ/κ) 서열을 분석하여 기능적으로 문제가 없는 ScFv가 발현이 할 수 있는지를 확인하였다. DNA 서열 분석 후 VBASE2 DB (http://www.vbase2.org)를 이용하여, 항체의 germ-line 서열(상보성 결정부위, 뼈대부위)를 분석하였다. 다음 단계로 넘어가기 전에 간단한 체크를 하는 단계이므로, 여기서 분석된 서열은 방대하게 나타내지 않고, 클론의 개수 및 정상적으로 작동 가능한 클론의 비율만 나타내었다. 중쇄 가변영역 총 77개 클론이, 경쇄 가변영역은 총 140개 클론이 분석되었으며, 'VBASE2' antibody germ-line seq. DB를 통한 서열 분석 결과, 'out of frame' 14건, 'stop codon insertion' 13건, 'problematic chain' 9건 총 36건의 문제있는 서열들이 확인되었다. 결과적으로, 217개 클론 중 181개 클론이 올바른 서열을 가지고 있는 것으로 확인되어 약 83.4% 가량이 유효 클론임을 확인하였다. 인간 면역조직을 이용한 라이브러리 구축할 경우, 유사 유전자나 유효하지 않은 뼈대부위 유전자, PCR 에러 비율 등 가변부위의 정상적인 서열 유지에 영향을 미치는 원인을 고려하였을 때, 83.4% 정도의 유효 V_H 및 V_L(λ/κ) 유전자를 가지는 T-벡터 하위 라이브러리는 적절히 제작되었다고 판단된다.

실시예 6: pSIA23-LC(경쇄) 구축

파지 디스플레이 기술을 이용하여 항원 특이적 항체 단편을 동정하기 위해서는 라이브러리 구축용 벡터(pSIA23)에 V_H 및 V_L(λ/κ) 유전자를 삽입하여, 적절한 대장균 숙주(예, TG1, ER2537)를 통해 ScFv 형태로 M13 박테리오파지의 표면에 발현되어야 한다. pSIA23 벡터에 V_L(λ) 유전자 와 V_L(κ) 유전자를 각각 삽입하여 2개의 하위 라이브러리를 만든 후, 각각의 경쇄 유전자들이 pSIA23 벡터에 제대로 삽입됨을 확인한 후, V_H 유전자를 삽입하고자 한다. T-벡터-V_L(λ)와 T-벡터-V_L(κ)를 가진 숙주들을 각각 500mL LB/암피실린에서 37℃, 밤샘배양 조건으로 키운 후 Maxi-prep을 진행한다.

pSIA23 벡터, T-벡터-V_L(λ), T-벡터-V_L(κ)에 제한효소 BglⅡ, NotⅠ 각각 5U/μg 처리하여 37℃ 한밤 배양을 통하여 절단을 진행하였다. 제한효소 절단을 반복적으로 진행하여 대량의 V_L 유전자 및 절단되어 다음 단계에서 V_L 유전자가 삽입 가능한 pSIA23 벡터 획득하였다. T4 리가아제를 16℃ 한밤배양으로 pSIA23 벡터에 V_L 유전자를 삽입하고, 생성된 pSIA23-V_L을 Microcon centrifugal filter devices (Millipore)를 이용하여 최종부피 10μL로 pSIA23-V_L을 농축하였다. 농축된 pSIA23-VL 5μL와 electro-competent cell (E. cloni 10G, Lucigen) 25μL를 혼합한 후, 0.1cm electro-cuvette에 옮겨 1.8kV에서 형질전환을 실시하였다. 형질전환된 숙주를 1mL S.O.C. 배지에 부유하여 37℃에서 1시간 배양 후, 10μL 순차적인 희석(10^-3~10^-7)을 통해 적정하고, 약 1mL의 형질전환체들은 15cm 플레이트(LB/암피실린/0.5% 글루코오스)에 도말하여 37℃, 밤샘배양 배양하여 형질전환된 숙주를 확보 후, 분주하여 -80℃에 보관하였다. 9회의 pSIA23-V_Lλ의 형질전환을 통해, pSIA23-V_Lλ 라이브러리 (총 ~6.44x10⁸ cfu)를 표 4와 같이 획득하였다.

[표 4]

V_L(λ) 유전자가 라이브러리 구축용 벡터에 제대로 삽입되었는지 확인 하기 위해 다음의 프라이머를 이용하여 콜로니 PCR을 진행하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

서열번호 61 (F-프라이머 (pelB-F)): 5'-ATG ATT ACG CCA AGC TTG GAG CC-3',

서열번호 62 (R-프라이머 (pelB-R)): 5'-GGA ACC AGA GCC ACC ACC GGA A-3']

도 5를 참조하면, 93.8%가 제대로 삽입되었음을 확인하였으며, 서열분석에서 90%가 상보성 결정부위와 뼈대부위에 문제가 없음이 확인하였다. 9회의 pSIA23-V_Lκ를 이용한 형질전환을 통해, pSIA23-V_Lκ 라이브러리 (총 ~5.23x10⁸ cfu)를 얻었다 (표 4). 위와 같은 방식으로 콜로니 PCR을 진행하여, 87.5%가 V_L(κ) 유전자가 제대로 삽입되었음을 확인하였으며, 서열 분석을 통해 90%에서 상보성 결정부위와 뼈대부위에 문제가 없음이 확인되었다.

실시예 7: pSIA23-ScFv(V _H -V _L ) 구축 및 숙주세포(TG1) 내로 삽입을 통한 라이브러리 구축 완료

앞서 구축된 pSIA23-V_L에 V_H 유전자를 삽입하여, pSIA23-ScFv(pSIA23-V_H-V_L)를 구축하기 위한 준비 작업으로 T-벡터-V_H를 가진 대장균과 이전 단계에서 획득한 pSIA23-V_Lλ & pSIA23-V_Lκ로 형질전환된 대장균을 각각 500mL LB/암피실린에서 37℃, 밤샘배양 조건으로 키웠다. Maxi-prep을 진행하여 대규모의 플라스미드를 확보한 후, pSIA23-V_Lλ & pSIA23-V_Lκ, T-벡터-V_H를 다음의 조건으로 제한효소 절단을 반복적으로 진행하였다. 제한효소 절단 조건이 다르기 때문에, NheⅠ 절단(5U/ug, 37℃, 한밤배양)을 먼저 진행하고, 이어서 SfiⅠ(5U/ug, 50℃, 한밤배양) 절단을 진행하였다. 대량의 V_H 유전자 및 제한효소 절단된 pSIA23-V_Lλ & pSIA23-V_Lκ을 획득하고, 이를 반복적으로 진행하였다. 다음의 조건으로 pSIA23-V_L 벡터에 V_H 유전자를 삽입하고, 생성된 pSIA23-ScFv(pSIA23-V_H-V_Lλ, pSIA23-V_H-V_Lκ)을 Microcon centrifugal filter devices (Millipore)를 이용하여, 최종 부피 dH₂O 10μL로 pSIA23-ScFv를 농축하였다. 이러한 경쇄와 중쇄의 순차적인 삽입을 하였기 때문에, 기존의 PCR방법(SOE-PCR)을 통해 만든 라이브러리에 비하여, 경쇄 셔플링(shuffling)에도 활용이 가능하다. 특히, Overlap Extension PCR을 통해 라이브러리를 제작하는 경우, 경쇄-링커-중쇄의 조합을 한번에 파지미드벡터에 삽입을 시키므로, HC-shuffling이나 LC-shuffling 기술 적용이 불가능하다. 그러나, 본 발명에 방법에 따라 제작된 라이브러리의 경우 경쇄와 중쇄 서열을 순차적으로 삽입하였고, 경쇄와 중쇄서열 양 끝에 제한효소 서열이 있기 때문에, 필요하다면 경쇄와 중쇄 서열 각각을 분리할 수 있다. 이러한 경우에 HC-shuffling이나 LC-shuffling을 적용한 친화도 성숙(Affinity Maturation)을 통해, 최종적으로 결합능이 더 우수한 항체단편을 획득할 수 있다. 본 발명에 따라 구축된 pSIA23-ScFv 라이브러리의 모식도를 도 6에 나타내었다.

pSIA23-ScFv 5μL와 electro-competent cell(TG1, Lucigen) 25μL를 혼합 후 0.1cm electro-cuvette에 옮겨 1.8kV에서 형질전환을 실시하였다. 형질전환된 숙주를 1mL S.O.C. 배지에 부유하여 37℃에서 1시간 배양 후, 10μL를 순차적인 희석(10^-3~10^-7)을 통해 적정하고, 잔여 배양액은 15cm 플레이트(LB/암피실린/0.5% 글루코오스)에 도말하고, 37℃, 밤샘배양 배양하여 형질전환된 대장균을 확보 후, 분주하여 -80℃에 보관하였다. pSIA23-ScFv를 TG1에 44회의 형질전환을 통해, pSIA23-V_H-V_Lλ(~6.14x10⁹ cfu), pSIA23-V_H-V_Lκ(~5.64x10⁹ cfu)를 표 5와 같이 얻었다.

[표 5]

두 개의 하위-라이브러리(Sub-library)를 합친 최종 라이브러리의 다양성은 1.18x10¹⁰ cfu이다. 라이브러리의 크기는 그 라이브러리의 품질을 평가하는 가장 중요한 요소 중 하나이다. 라이브러리의 크기가 클수록 다양한 항체를 보유하게 되고, 최종적으로 원하는 항원에 특이적인 항체를 동정할 수 있는 확률이 높아지게 된다. 추가적으로, V_H-V_L 유전자가 제대로 삽입되었는지 확인하기 위해, 앞서 사용된 pelB 프라이머를 이용한 콜로니 PCR에서, 92.2% (pSIA23-V_H-V_Lλ) 93.8% (pSIA23-V_H-V_Lκ)가 제대로 삽입되었음을 확인하였으며, 그 결과를 도 7에 나타내었다. 제대로 삽입되었을지라도 서열에 프레임시프트(frameshift) 등과 같은 돌연변이가 있다면, 정지코돈이 있어서 단백질 발현이 제대로 안 될 수 있으며, 발현이 되더라도 항체의 기능을 할 수 없는 단백질이 발현될 수 있다. 다음의 서열분석을 통해 기능적으로 문제없는 항체 클론의 수를 분석해보고자 한다.

실시예 8: 항체 라이브러리 서열 분석

1.18x10¹⁰ 수준의 형질전환체를 가지는 인간 미감작 항체 라이브러리 (Human Naive ScFv Library)의 가변영역 서열 분석을 위해, 임의의 형질전환체 배양하여 각각의 플라스미드 획득한 후 서열 분석을 수행하였다. 그 결과를 표 6 및 표 7에 나타내었다. 분석된 pSIA23-V_H-V_Lλ 64개 중 42개(65.6%) (V_H: 서열번호 63-104, V_Lλ: 서열번호 105-146)가 정상적인 상보성 결정부위와 뼈대부위의 서열을 가지는 것을 확인하였다. VH-VL(λ)의 조합에서 02, 15, 48 클론은 중쇄의 가변영역상에 종결 코돈을 가지고 있기 때문에 scFv와 같은 항체의 형태로 발현될 수 없다. 24 클론의 경우에는 항체 중쇄 D, J 유전자 단편이 서열상에 존재하지 않는 것으로 분석되어 항체의 기능을 할 수 없다. 05, 46, 54의 경우 항체 중쇄 가변영역에 염기서열의 삽입, 결실, 돌연변이 등의 현상으로 항체 고유의 염기 서열이 아니기 때문에 항체의 기능을 수행 할 수 없다. 32, 59 클론 중쇄의 염기서열이 항체의 서열이 아니기 때문에 제외하였다. 06, 07, 38 클론의 경우에는 항체 경쇄 가변영역에서 종결코돈이 확인되었다. 09, 21, 58 클론은 항체 경쇄 서열에 염기서열의 삽입, 결실, 돌연변이 등의 현상으로 항체 고유의 서열을 가지지 못한다. 22, 50번 클론의 경우 경쇄의 서열이 항체의 서열이 아니다. 27 클론의 경우에는 항체 중쇄 D, J 유전자 단편이 서열상에 존재하지 않는 것으로 분석되어 항체의 기능을 할 수 없고, 경쇄 역시 항체로서의 역할을 할 수 없는 클론이다. 33, 59 클론의 경우 항체 중쇄와 경쇄 모두가 항체 서열을 나타내지 않는다. 63 클론의 경우 항체의 중쇄와 경쇄 모두에서 종결코돈이 발견되었다.

또한, 분석된 pSIA23-V_H-V_Lκ의 78개 중 54개(69.2%) (V_H: 서열번호 147-200, V_Lκ: 서열번호 201-254)가 정상적인 상보성 결정부위와 뼈대부위의 서열을 가지는 것을 확인하였다. VH-VL(κ)의 조합에서 30, 40, 45, 51, 59 클론은 중쇄의 가변영역상에 종결 코돈을 가지고 있기 때문에 scFv와 같은 항체의 형태로 발현될 수 없다. 21, 24, 56 클론의 경우 항체 중쇄 가변영역에 염기서열의 삽입, 결실, 돌연변이 등의 현상으로 항체 고유의 염기 서열이 아니기 때문에 항체의 기능을 수행 할 수 없다. 43, 55, 69, 75 클론 중쇄의 염기서열이 항체의 서열이 아니기 때문에 제외하였다. 71 클론의 경우에는 항체 경쇄 가변영역에서 종결코돈이 확인되었다. 14, 21, 27, 44, 61, 65, 66, 77 클론은 항체 경쇄 서열에 염기서열의 삽입, 결실, 돌연변이 등의 현상으로 항체 고유의 서열을 가지지 못한다. 08번 클론의 경우 경쇄의 서열이 항체의 서열이 아니다. 16 클론의 경우 항체 중쇄와 경쇄 모두가 항체 서열을 나타내지 않는다. 64 클론의 경우 항체의 중쇄와 경쇄 모두에서 종결코돈이 발견되었다.

[표 6]

[표 7]

라이브러리의 기능적 다양성은 실제로 항체로 발현할 수 있는 클론의 비율에 의해 결정된다. 이러한 정상적인 기능을 못하거나 발현되지 않는 클론들은 대부분 라이브러리 구축 과정에서 PCR 과정의 오류로 인한 것으로 판단된다. 라이브러리 구축 특성상 많은 PCR작업이 수행되고 이러한 오류가 축적이 되면서 결국 제 기능이 가능한 클론의 비율은 약 69%정도로 확인되었다.

최종적으로 1.18x10¹⁰ cfu 수준의 형질전환체를 가지는 인간 미감작 항체 라이브러리를 확보하였으며, 이 중 8.10x10⁹ cfu가 정상적인 ScFv로 발현이 될 수 있음을 확인하였다. 일반적으로 최소 10⁸ 이상의 정도가 되면 사용에 무리가 없다고 인식되고 있기 때문에, 본 발명에 따른 라이브러리는 적절하게 구축되었다고 판단할 수 있다.

추가로 가변영역의 아과(subfamily) 분포와 상보성 결정부위 서열 다양성을 확인하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다. 가변영역의 아과 분포를 확인할 수 있는 중쇄는 총 135개 클론이, 경쇄는 총 134개(kappa 74개, lambda 60개) 클론이 분석되었으며, 'VBASE2' DB 를 통한 서열 분석 결과, V_H 영역은 V_H1, V_H4 아과의 분포가 다소 높지만, 비교적 고른 V_H1~V_H5의 분포를 보였다. V_Lλ 영역은 V_λ3 아과가 높은 경향을 보이며, V_Lκ 영역은 V_κ1 아과가 78%로 존재하는 것이 확인되었다.

또한, 도 9를 참조하면 항체 라이브러리의 다양성을 유지하는데 중요한 부위인 CDR-H3 영역의 아미노산 길이 및 분포 역시 기존의 여러 라이브러리에서와 같이 약 4~25 개의 다양한 길이를 보이며 98.4%가 KABAT DB에서 권장하는 올바른 CDR-H3의 길이를 가진다. 도 10을 참조하면, CDR-H3 영역의 KABAT 위치(H95-H102)의 아미노산의 분포 역시 다양하게 존재함을 확인하였다. CDR-H3는 항원 인지에 중요한 역할을 하고, 위의 결과에서와 같이 CDR 루프의 위치 별 다양한 아미노산 조성과 아미노산 길이의 다양성으로 인해, 항원과 결합하는 과정에서 상당히 중요한 입체구조의 변화를 일으켜서 여러 항원을 인지하는데 적합할 것으로 판단된다.

실시예 9: Dot-blot 분석

도 11에 도시한 바와 같이, 구축된 라이브러리가 ScFv 형태로 제대로 발현할 수 있는지를 확인하기 위해 Dot-blot 분석을 수행하였다. 제작된 라이브러리로부터 임의로 96개의 클론을 선정하여, 96웰 플레이트에서 200μL SB/암피실린 배지에서 37℃에서 배양한다. O.D 600에서 흡광도가 0.5~0.8 정도 되었을 때, IPTG를 최종 농도가 1mM이 되도록 투입하고 30℃, 밤샘배양으로 배양하였다. 다음 날, 원심분리를 하여 상층액(배양액)을 획득하고, 침전된 대 장균은 1X TES 40μL로 섞어준 후, 0.2X TES 60μL을 투입하여 용균시켰다. 원심분리를 통하여 찌꺼기들을 침전시키고 상층액(주변세포질 추출물)만 취하였다. pSIA23 벡터에 pelB 리더 서열이 있기 때문에, 발현되는 ScFv는 주변세포질로 이동하게 된다. 니트로셀룰로오스 막에 배양액과 주변세포질 추출물을 1μL씩 처리한 후, 상온에서 1시간 건조하였다. 5% 탈지유(TBS-0.1% tween 20)를 이용하여 블로킹 한 후, 항-HA-HRP를 처리하여 감지하였다. 도 11을 참조하면, 분석된 96개 중 64개의 클론이 제대로 HA-Tag이 감지됨을 확인하였다. 이를 통해, 항체단편이 제대로 발현됨을 확인하였다.

실시예 10: 라이브러리 증폭 및 ScFv 발현하는 박테리오파지의 회수

대장균 숙주 TG1 내에 도입되어 있는 pSIA23 벡터를 증폭하기 위해, V_H-V_Lλ, V_H-V_Lκ 두 개의 하위 라이브러리를 각각 1L의 배양배지(SB/암피실린/2% 글루코오스) 내에 첨가하여 37℃, 220rpm에서 약 5시간 동안 배양하였다. O.D 600에서 흡광도가 0.5~0.8정도 배양된 숙주 세포들은 5,000g에서 20분 동안 원심분리하여 상층액을 제거 후, 침전된 숙주세포들을 SB배지에 부유시키고, 0.5 부피의 50% 글리세롤을 완전하게 섞은 후, 1mL씩 분주하여 -80℃에 보관하였다. 앞서 증폭된 V_H-V_Lλ, V_H-V_Lκ 두 개의 하위 라이브러리를 각각 400mL 배양배지(SB/암피실린/2% 글루코오스)에 OD 600이 0.5가 될 때까지 배양하였다. 원심분리를 하여 상층액을 제거하고 400 mL의 글루코오스가 제거된 배양배지(SB/암피실린) 내에 부유시킨 다음, 10¹² pfu(plaque forming unit)의 VCSM13 헬퍼파지(Helper phage)를 첨가하여 37℃, 80rpm 1시간 동안 재배양하였다. 이후 카나마이신 항생제(헬퍼 파지 내 도입된 항생제 유전자)를 최종 농도 70μg/mL 농도로 첨가한 후, 30℃에서 밤샘 배양을 통해 파지 라이브러리가 숙주 세포 외로 만들어질 수 있도록 하였다. 이후 원심 분리된 배양 상층액은 PEG8000 (polyethylene glycol) 용액을 이용하여 파지 입자만 침전시킴으로써 파지 라이브러리를 회수하였다. 각 하위 라이브러리로부터 회수된 파지를 계수하기 위해 각 샘플을 희석한 다음 다시 숙주세포(TG1)에 감염시켜 LB/암피실린 배양배지에서 계수하였다. 이후 10¹²~10¹³ pfu 수준의 ScFv를 발현하는 파지 입자들을 패닝에 이용하였다.

실시예 11: Biopanning을 통한 항원 특이적 항체 동정

파지 디스플레이 스크리닝은 반복 회차 패닝을 통해 실시하였다. 계수된 하위 라이브러리를 약 4.0 x 10¹³ pfu(V_H-V_Lλ: 약 2.0 x 10¹³ pfu, V_H-V_Lκ: 약 2.0 x 10¹³ pfu) 수준이 되도록 취합한 후, PBS 내 5μg/mL 수준으로 희석된 9종의 항원(c-Met, HGF, ANG2, DLL4, EGFR, TNF-a, NRP1, VEGF, VEGFR2)이 코팅된 면역튜브에 처리하였다. 처리 전 면역튜브 및 파지 입자는 PBS 내 3% 탈지유를 함유하는 블로킹 용액을 1시간 처리하여 항원 외 비특이적인 결합을 방지하였다. 1시간 동안 파지 라이브러리를 항원이 코팅된 면역튜브에 처리한 후, PBST(0.1% Tween 20) 세척 용액으로 면역튜브를 세척한 다음 100 mM 트리에틸아민 1 mL을 첨가하여 10분간 정치함으로써, 항원에 결합한 파지 입자들을 회수하였고 1M Tris-Cl (pH 7.4)를 이용해 중화하였다. 회수된 파지(output) 수를 확인하기 위해 회수용액을 희석하여 숙주세포에 감염시킨 후 배양배지에서 계수하였다. 잔여 회수용액은 15 cm 배양배지에 도말하여 배양 후, 5mL의 SB 배양배지(50% 글리세롤)를 첨가하여 콜로니들을 회수 및 보관(-80℃)하였다.

계속되는 패닝 회차를 위해 보관된 전 회차 파지 용액 중 50μL를 취해 파지 입자 증폭 작업을 수행하였다. 숙주세포에 배양 후 VCSM13 헬퍼 파지(10¹¹~10¹² pfu)를 첨가하여 회수된 파지 입자들은 PEG 침전을 통해 준비되었고, 이를 이용하여 다음 회차 패닝을 전 회차 패닝과 동일한 방법으로 진행하였다. 패닝은 항원에 대하여 총 3~4회차까지 진행하였으며, 파지 디스플레이 패닝 결과는 도 12와 같다.

실시예 12: 항 항원 ScFv 후보 선별을 위한 ELISA 선별

각 항원에 대한 총 3~4회의 패닝이 종료된 후, 최종 회차에서 회수된 파지 입자들은 숙주세포(TG1)에 감염을 통해 배양배지에서 콜로니로써 확인되었다. 이 콜로니들을 임의로 취하여 200μL SB/암피실린 배양배지가 담긴 96웰 플레이트 내 각각 접종 후 배양하였다(37℃, 3시간 이내). 이후 ScFv-pIII 단백질의 발현 유도를 위해 각 웰에 최종농도 1mM의 IPTG를 처리하고 30℃, 220rpm에서 밤샘 배양하였다. 이후 배양 플레이트는 원심분리 및 상층액 제거 후 각 웰 내 배양세포의 주변세포질(periplasm) 부위를 회수하기 위하여 40μL의 4℃로 유지해 두었던 1XTES 용액(20% w/v 수크로오스, 50mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8.0)을 처리하여 4℃에서 30분 동안 정치함으로써 세포를 용해시켰다. 이후 다시 0.2XTES 용액 60μL를 처리하여 30분 동안 정치하였고, 최종적으로 플레이트를 원심분리한 후 상층액을 회수함으로써 ScFv-pIII 단백질을 소규모로 생산하였다. 한편, 항원이 코팅된 96웰 플레이트를 동시에 준비한 다음 회수된 주변세포질 부위 중 25μL를 취하여 각 웰에 첨가 후 1시간 동안 결합시켰다. 대조군으로는 BSA 단백질을 이용하였다. 이후, TBST를 이용, 3-4회 세척 과정을 거친 다음, HRP가 결합된 항 HA 항체를 1시간 결합시킨 후 다시 세척 및 발색반응(TMB substrate)을 유도한 후 O.D 450 nm에서 그 값을 측정하였다. 결합능 배수가 2이상인 클론의 개수를 분석하여 그 결과를 도 13에 나타내었다. 도 13을 참조하면, 여러 항원에 대하여 결합능력을 가지는 ScFv들이 회수됨을 확인하였다.

실시예 13: Phage ELISA

도 13 중 DLL4를 항원으로 진행한 패닝 결과에서 유독 강한 신호를 보이는 C01 클론을 선택하여 후속 실험을 진행하였다. DLL4_C01 ScFv는 파지 디스플레이 스크리닝을 통해 선별되었기 때문에 파지의 구조에 발현된 채로 DLL4에 대한 농도 의존적인 결합능을 보임을 확인하였다. DLL4_C01 클론을 발현하는 숙주세포에서 파지 입자를 개별적으로 회수작업을 수행하여, 계수하였다. 이후 DLL4가 코팅된 96웰 플레이트에 각각의 파지 입자를 희석하여 그 농도에 따라 처리하여 항 파지 항체를 이용한 ELISA 분석을 통해 그 결합능을 확인하였으며, 그 결과를 도 14에 나타내었다.

그 결과, 파지 입자수의 감소에 따라 결합능이 감소하는 양상을 확인할 수 있었으며, 특정 입자 수 이상에서는 신호가 포화됨을 확인하였다. 이를 통해 파지 입자수에 의한 DLL4에 대한 특이성을 검정할 수 있었다. 따라서 스크리닝 과정에서 DLL4에 대한 결합능을 기반으로 선별된 ScFv들은 파지 구조체에 표지된 형태로도 DLL4에 대한 결합능을 보임을 검정할 수 있었다.

실시예 14: 단백질 발현 균주 TOP10F'을 이용한 ScFv 생산 및 정제

ScFv 단독의 결합력 및 기능을 확인하기 위해 단백질 발현 균주(TOP10F')를 이용하여 발현 및 정제과정을 거쳤다. 파지미드 벡터의 기본 구성은 도 1에서 확인할 수 있으며, 스크리닝된 파지미드를 보유한 숙주세포(TG1)는 ScFv와 파지의 pIII 단백질 사이에 존재하는 전사억제 코돈(amber codon(UAG))을 억제하는 숙주로써 ScFv 단독 발현이 불가능하기 때문에, 비억제 숙주(non-suppressor strain)인 발현균주(TOP10F')를 이용하였다.

ScFv를 코딩하는 파지미드는 숙주세포로부터 회수된 후 발현균주 내로 형질도입 되었다. 이후 DNA 서열분석을 통해 각 파지미드가 성공적으로 도입된 발현균주를 확인하였으며, 각 ScFv가 도입된 발현균주들은 단일 콜로니를 취한 다음 LB/암피실린 배양배지 3mL에 접종 후 37℃, 220rpm에서 밤샘배양 되었다. 밤샘배양 후 배양액은 400mL의 배양배지(SB/암피실린)로 옮겨진 후, OD₆₀₀에서 0.5-0.8이 될 때까지 추가로 배양되었고, 최종 농도 1 mM의 IPTG를 첨가하여 30℃, 220rpm에서 다시 밤샘배양 되었다. 배양액은 원심분리 후 1X TES 용액 16mL을 이용하여 세포를 부유시키고, 0.2X TES 24 mL을 추가로 투입하여, 발현숙주를 용해시킨 다음 원심분리를 통하여 주변세포질 부위만을 회수하였으며, 회수된 배양액은 0.45μm 필터를 통해 여과되었다.

여과된 용해용액 내 ScFv 단백질은 His-tag 정제를 위해 Ni-NTA 비드(Qiagen) 1mL이 첨가되어 4℃에서 1시간 동안 결합되었다. 이후 중력 컬럼(gravity column, Bio-rad)에 패킹되어 PBS(with 10mM 이미다졸)을 이용하여 세정하고, PBS(with 200mM 이미다졸)을 이용하여 ScFv 형태로 회수 되었다. 정제된 ScFv는 SDS-PAGE 및 쿠마시 염색(coomassie blue staining)을 통해 확인되었으며, 그 결과를 도 15에 나타내었다. 도 15를 참조하면, 각각의 ScFv는 약 28 kDa 크기를 가짐을 확인할 수 있었다. 각 정제 ScFv 단백질들은 브래드포드(Bradford) 단백질 측정 방법을 통해 농도 측정 후 보관 및 추후 실험에 이용되었다.

실시예 15: DLL4에 ScFv의 농도별 직접 결합양상 확인

생산된 ScFv의 DLL4 단백질에 대한 결합능은 농도별 ELISA를 통해 확인하였다. 96웰 플레이트에 4μg/mL 농도로 코팅된 DLL4에 생산된 농도별로 ScFv를 처리하고, HRP가 결합된 항 HA 항체를 1시간 처리하여 DLL4와 결합중인 ScFv를 탐지하였으며, 그 결과를 도 16에 나타내었다. 그 결과, DLL4_C01 ScFv는 농도 의존적으로 결합양상이 나타남을 확인하였으며, 대조군(BSA)에 비해 DLL4 단백질에 대해 유의적인 결합능이 있음을 확인할 수 있었다.

실시예 16: GBM환자 유래 세포를 이용한 EGFRvIII 특이적 항체 스크리닝

EGFRvIII는 암세포에서 EGFR이 과발현 및 증폭되면서 생기는 돌연변이로 6-273의 아미노산이 결손된 암세포 특이적인 항원이다. Cetuximab, Panitumumab등과 같은 기존의 EGFR 항체 치료제들의 경우 대부분 EGFR의 310-480 아미노산 사이에 결합한다. 일반적인 EGFR 항체 치료제들은 EGFR과 EGFRvIII 모두에 결합하여서 특이적으로 EGFRvIII를 표적할 수가 없고, EGFRvIII 돌연변이 암환자들에게는 효과가 없는 것으로 보고된다. 또한, EGFRvIII 항원은 정상세포에서는 발현되지 않고 암세포에서만 발현되는 암 특이적 항원이기 때문에 ADC(Antibody-drug conjugates) 개발에 최적화된 항원이다.

EGFRvIII에 결합하는 항체 개발을 위해 EGFRvIII 과발현된 환자유래세포를 이용하여 도 17에서 나타낸 방식으로, 실시예를 통해 제조된 라이브러리에서 cell panning 기법으로 항체를 동정하였다. 정제된 재조합 단백질(항원)은 단백질의 3차원 구조를 재연하지 못하기 때문에 기존의 panning법은 효율적으로 항체를 동정할 수 없다. 그러나, cell panning법은 환자세포에 과발현된 암항원을 이용하기 때문에 자연상의 형태를 인지하는 항체를 더 효율적으로 개발할 수 있다. Cell panning을 이용하여 EGFRvIII 특이적인 항체를 개발하기 위해 교모세포종(Glioblastoma, GBM) 암환자들에게서 암세포를 확보한 후, 도 18과 같이 EGFRvIII의 발현 정도를 RT-PCR과 Western blot을 이용하여 확인하고, EGFRvIII의 발현이 가장 높은 626T 교모세포종 환자세포를 최종 항체개발을 위한 세포로 선정하였다. EGFRvIII 발현을 EGFRvIII shRNA를 이용하여 억제하고, 환자유래세포에서 음성 선택 후 EGFRvIII 특이적 항체를 반복된 panning을 통해 EGFRvIII 특이적 항체들의 비율이 증가함을 확인하였다. 도 19에서 최종적으로 3종의 후보 항체들을 확보한 후, EGFRvIII 특이적인 결합능을 ELISA 분석을 통해 확인하였다. 결합상수를 측정하기 위해 Biacore T100을 이용한 표면플라스몬공명법(Surface Plasmon Resonance)을 수행하였다. 3종의 scFv들이 수십 nM 수준의 결합능이 보임을 확인하였다. 동정된 3종의 후보항체들이 626T 교모세포종 환자세포의 세포성장을 효율적으로 억제할 수 있는지를 확인한 결과, 도 19에 나타낸 바와 같이 1B07N이 효율적으로 성장을 억제함을 확인하였다.

본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

<110> SAMSUNG LIFE WELFARE FOUNDATION <120> Single-chain Fv Antibody Library, Method for Preparing Thereof and Screening Method of Single-chain Fv Antibody by Using the Same <130> P14-B017 <150> KR 14/027212 <151> 2014-03-07 <160> 254 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide for Structuring Phagimid Vector <400> 1 tacgccaagc ttggagccat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg t 51 <210> 2 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide for Structuring Phagimid Vector <400> 2 tcagcgcaac acgctagcgg tggaggcggt tcaggcggag gtggatccgg cggtggcgg 59 <210> 3 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide for Structuring Phagimid Vector <400> 3 ctggcgacga cgaccagacg acgaggagcg ccgggtcggc cggagtcgcg ttgtgcgat 59 <210> 4 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligonucleotide for Structuring Phagimid Vector <400> 4 taggccgcca ccgcctagcc ctaggacact taccctgcgc cggcgttaat 50 <210> 5 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer for Amplifying His6-HA-Amber codon-pIII <400> 5 tttgcggccg ccaccatcac catcaccatg g 31 <210> 6 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer for Amplifying His6-HA-Amber codon-pIII <400> 6 cggaattcag actccttatt acgcagtatg ttagc 35 <210> 7 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 7 aattaggccc agccggccat ggcccaggtk cagctggtgc ag 42 <210> 8 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 8 aattaggccc agccggccat ggcccaggtc cagcttgtgc ag 42 <210> 9 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 9 aattaggccc agccggccat ggccsaggtc cagctggtac ag 42 <210> 10 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 10 aattaggccc agccggccat ggcccaratg cagctggtgc ag 42 <210> 11 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 11 aattaggccc agccggccat ggcccagatc accttgaagg ag 42 <210> 12 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 12 aattaggccc agccggccat ggcccaggtc accttgargg ag 42 <210> 13 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 13 aattaggccc agccggccat ggccgargtg cagctggtgg ag 42 <210> 14 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 14 aattaggccc agccggccat ggccgargtg cagctggtgg ag 42 <210> 15 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 15 aattaggccc agccggccat ggccgaggtg cagctgttgg ag 42 <210> 16 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 16 aattaggccc agccggccat ggcccagstg cagctgcagg ag 42 <210> 17 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 17 aattaggccc agccggccat ggcccaggtg cagctacagc ag 42 <210> 18 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 18 aattaggccc agccggccat ggccgargtg cagctggtgc ag 42 <210> 19 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 19 aattaggccc agccggccat ggcccaggta cagctgcagc ag 42 <210> 20 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Forward Primer <400> 20 aattaggccc agccggccat ggcccaggts cagctggtgc aa 42 <210> 21 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Reverse Primer <400> 21 aattatctag agacrgtgac cagggtgc 28 <210> 22 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Reverse Primer <400> 22 aattatctag agacggtgac cagggttc 28 <210> 23 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Reverse Primer <400> 23 aattatctag agacggtgac cattgtcc 28 <210> 24 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Reverse Primer <400> 24 aattatctag agacggtgac cgtggtcc 28 <210> 25 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 25 aattaagatc tgmcatccag ttgacccag 29 <210> 26 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 26 aattaagatc tgmcatccag ttgacccag 29 <210> 27 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 27 aattaagatc tgccatccrg atgacccag 29 <210> 28 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 28 aattaagatc tgtcatctgg atgacccag 29 <210> 29 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 29 aattaagatc tgatattgtg atgacccag 29 <210> 30 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 30 aattaagatc tgatrttgtg atgactcag 29 <210> 31 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 31 aattaagatc tgaaattgtg ttgacrcag 29 <210> 32 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 32 aattaagatc tgaaatagtg atgacgcag 29 <210> 33 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 33 aattaagatc tgaaattgta atgacacag 29 <210> 34 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 34 aattaagatc tgacatcgtg atgacccag 29 <210> 35 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 35 aattaagatc tgaaacgaca ctcacgcag 29 <210> 36 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 36 aattaagatc tgaaattgtg ctgactcag 29 <210> 37 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Forward Primer <400> 37 aattaagatc tgatgttgtg atgacacag 29 <210> 38 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 38 aattaagatc tcagtctgtg ctgactcag 29 <210> 39 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 39 aattaagatc tcagtctgtg ytgacgcag 29 <210> 40 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 40 aattaagatc tcagtctgtc gtgacgcag 29 <210> 41 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 41 aattaagatc tcagtctgcc ctgactcag 29 <210> 42 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 42 aattaagatc ttcctatgwg ctgactcag 29 <210> 43 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 43 aattaagatc ttcctatgag ctgacacag 29 <210> 44 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 44 aattaagatc ttcttctgag ctgactcag 29 <210> 45 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 45 aattaagatc ttcctatgag ctgatgcag 29 <210> 46 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 46 aattaagatc tcagcytgtg ctgactcaa 29 <210> 47 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 47 aattaagatc tcagsctgtg ctgactcag 29 <210> 48 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 48 aattaagatc taattttatg ctgactcag 29 <210> 49 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 49 aattaagatc tcagrctgtg gtgactcag 29 <210> 50 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 50 aattaagatc tcagactgtg gtgacccag 29 <210> 51 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 51 aattaagatc tcwgcctgtg ctgactcag 29 <210> 52 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Forward Primer <400> 52 aattaagatc tcaggcaggg ctgactcag 29 <210> 53 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Reverse Primer <400> 53 aattagcggc cgctaggacg gtsascttgg tcc 33 <210> 54 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VK Reverse Primer <400> 54 aattagcggc cgcgaggacg gtcagctggg tgc 33 <210> 55 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Reverse Primer <400> 55 aattagcggc cgctttgatt tccaccttgg tcc 33 <210> 56 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Reverse Primer <400> 56 aattagcggc cgctttgatc tccascttgg tcc 33 <210> 57 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Reverse Primer <400> 57 aattagcggc cgctttgata tccactttgg tcc 33 <210> 58 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Vlamda Reverse Primer <400> 58 aattagcggc cgctttaatc tccagtcgtg tcc 33 <210> 59 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward Primer For Colony PCR <400> 59 acaggaaaca gctatgac 18 <210> 60 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse Primer For Colony PCR <400> 60 gttttcccag tcacga 16 <210> 61 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward Primer For Colony PCR <400> 61 atgattacgc caagcttgga gcc 23 <210> 62 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse Primer For Colony PCR <400> 62 ggaaccagag ccaccaccgg aa 22 <210> 63 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Sequence of VH-VL (lambda) from Clone 01 <400> 63 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Ile Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Gly Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Ser Ser Thr Gly Asp Asn Asn Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 64 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 03 <400> 64 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ala Ser Val Ser Arg Trp 20 25 30 Ser Trp Asn Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Gln Thr Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Tyr Val Leu His Ser Gly Ser Thr Gln Tyr Asp Pro Ser Leu Glu 50 55 60 Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Pro Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Met Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Ala Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly His Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 65 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 04 <400> 65 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Phe Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Asn Lys Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Gln Gln Lys Leu Gly Asn Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val <210> 66 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 10 <400> 66 Lys Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Arg Glu Gly Thr Val Thr His Phe Val Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Leu Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Gln Gly Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asn Thr His Tyr Gly Ser Ser Ala Leu Glu Tyr Tyr Asp 100 105 110 Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 125 <210> 67 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 11 <400> 67 Asp Ser Pro Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Pro 20 25 30 Ser Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Asn Lys Trp Phe Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Asn Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Gly Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala His Gly Ala Gly Trp Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val 115 <210> 68 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 12 <400> 68 Arg Phe Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Leu Thr Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Thr Ile Tyr Trp Asn Asn Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Gly Ser Arg Leu Thr Ile Ala Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Ile Val Thr Tyr Met Asn Pro Ala Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Gly His Arg Arg Arg Val Asn Glu Gly Gly Lys Gly Gly Phe Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 69 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 13 <400> 69 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Gly Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Gly Asn Asp Asp Ser Val Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asn Gly Leu Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 70 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 14 <400> 70 Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Asp Met Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Glu Asp Gly Thr Glu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Ser Ser Val Tyr 65 70 75 80 Leu His Met Asn Asn Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Phe Ala Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 <210> 71 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 16 <400> 71 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly 1 5 10 15 Pro Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser His Ile Ser Gly Ala Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Arg Tyr Phe Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val 115 <210> 72 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 17 <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Cys 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Ile Ala Ser 65 70 75 80 Leu Gln Trp Gly Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu His Thr Gly Gln His Leu Val Gly Asp Trp Tyr Phe Asp 100 105 110 Ile Trp Gly Arg 115 <210> 73 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 18 <400> 73 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Phe Ile Ser Ser Thr 20 25 30 Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Asn Ile Tyr His Thr Gly Asn Thr Tyr Ser Asn Ala Ser 50 55 60 Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Ala Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Gln Ala Cys Tyr Arg Gly Ser Cys Tyr Ser Arg Ala Thr 100 105 110 Tyr Phe Asp Gln Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 74 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 19 <400> 74 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Ala Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Ala Arg Tyr Ser Leu Ser Phe 50 55 60 Arg Gly Gln Val Ser Met Ser Val Asp Lys Ser Ile Ala Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Tyr Ile Pro Asn Leu Lys Ala Ser Asp Ser Gly Met Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Val Gln Pro Val Tyr His Tyr His Tyr Leu Asp Val Trp 100 105 110 Gly Thr Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 75 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 20 <400> 75 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Glu Thr Thr Val Asn Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 76 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 23 <400> 76 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Asp Ser Val Gly Ser Gly 20 25 30 Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Lys 35 40 45 Trp Ile Val Tyr Ile Tyr Tyr Asp Gly Arg Thr Arg Glu Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Val Ser Gln Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Arg Leu Asn Tyr Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Thr Gly Val Glu Ala Gly Ser Gln Gly Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 25 <400> 77 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Asp Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Ala Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Val Pro Ile Phe Asp Arg Thr Glu Tyr Ala Gln Arg Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp His Arg Asp Gly Tyr Lys Tyr Tyr Phe Asp Ser Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 78 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 26 <400> 78 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Val Ser Cys Gln Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Val Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Ile Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Ile Gly Gly Ala Thr Ser Ile Ala Gln Thr Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ser Ser Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val 115 <210> 79 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 28 <400> 79 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Arg Leu Val Glu Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Val Arg Gln Arg Ala Gly Lys Gly Leu Glu Cys Leu 35 40 45 Gly His Ile Tyr Pro Thr Gly Lys Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Ala Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Leu Glu Phe Gly Val Arg Phe Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val 115 <210> 80 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 29 <400> 80 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Ala Lys Val Ser Cys Gln Thr Ser Gly Phe Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Lys Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Asn Met Thr Arg Asp Met Ser Ile Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Gly Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Leu Arg Ser Gly Tyr Pro Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val <210> 81 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 30 <400> 81 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Leu Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Asn Thr Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Ser Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Ala Ile Ser Val Tyr Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gln Tyr Ser Ser Ser Arg Tyr Thr Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val 115 <210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 31 <400> 82 Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Met Lys Pro Ser 1 5 10 15 Gly Thr Leu Ser Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser 20 25 30 Thr Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Asn Arg Val Thr Met Ser Val Asp Met Thr Gly Asn Lys Phe 65 70 75 80 Ser Leu Arg Val Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Val Val Arg Gly Arg His Gln Phe Ile Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 83 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 34 <400> 83 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Arg Thr Val Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Val Asp Thr Gly 20 25 30 Ala Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Phe Gly Asp Gly Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Asn Asn Arg Leu Thr Ile Ala Lys Asp Thr Phe Lys Asp Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Ile Asp Met Asp Leu Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala His Thr Asp Leu Lys Tyr Gly Asp Phe Ser Phe Asp Asp Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 84 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 35 <400> 84 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Asn Tyr 20 25 30 Asn Tyr His Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Phe Thr Tyr Ser Gly Asn Ile Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Val Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Ser Leu Ile Leu Lys Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Asn Tyr Leu Arg Gly Asn Gly Gly Arg Gly Pro Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 85 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 36 <400> 85 Pro Gly Ala Val Val Glu Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Phe Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Val Asn Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Ile 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Ser Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Ile Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Phe Ser Ser Tyr Cys Phe Ser His Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 86 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 37 <400> 86 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Asp 20 25 30 Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Met Ser Ala Asp Lys Ser Leu Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Gly Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Thr Phe Cys Gly Gly Asp Cys Asp Ala Phe Asp Ile Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 87 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 39 <400> 87 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Ser Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Pro Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Pro Val Ala Thr Ile Gly Thr Trp Val Leu Phe 100 105 110 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 88 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 40 <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Ile Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Val Asp Ser Gly 20 25 30 Arg Asn Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ser Ser Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Phe Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Phe Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Ala Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Arg Thr Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Asp Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Ser Pro Val Ala Gly Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 89 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 41 <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Gln Asp Gly Asn Glu Gln Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Leu Leu Arg Leu Val Ser Ser Ser Trp Ala Gly His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 90 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 42 <400> 90 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Glu Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Trp Cys Asp Gly Ser His Gln Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Ser Ser Gly Ile Leu Gly Pro Asp Thr Phe Asp Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 91 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 43 <400> 91 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Ser Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Val Ser Asn Ile Gly Ser Pro Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Arg 50 55 60 Thr Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Val Leu Ala Leu Ser His Gly Asp Phe His Phe Asp Ser Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 92 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 44 <400> 92 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Leu Leu Ser Glu His 20 25 30 Gly Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Ala Ile Ser Lys Asp Thr Thr Glu Arg Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Ala Asn Val Asp Pro Ser Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Arg Ile Phe Ser Ser His Asn Gly Lys Leu Trp Phe Pro Tyr 100 105 110 Lys Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 93 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 47 <400> 93 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Ala Arg Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Thr Ile Pro Arg Gly Arg Ala Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Pro Val Thr Ile Ser Thr Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Gln Thr Gly Glu Arg Ala Phe Asp Val Trp Gly Pro Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val 115 <210> 94 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 49 <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile His Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Thr Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Gln Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Thr Val Thr Gly Asp Arg Pro Ile Ala Gly Asp Gly Phe Gly 100 105 110 Leu Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 <210> 95 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 51 <400> 95 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Phe Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Phe Tyr Pro Gly Asp Ser Ala Ser Thr Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Leu Val Thr Met Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Thr Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ser Tyr Cys Thr Ala Gly Val Cys Thr Thr Asp Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 96 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 52 <400> 96 Ala Glu Val Gln Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Gln Thr Asn Tyr Gly Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser His Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Gln Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Phe Asp Tyr Asp Asp Arg Gly Asn Pro Thr Pro Asp 100 105 110 Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 97 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 53 <400> 97 Lys Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Lys 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Leu Trp Tyr Asp Gly Thr Thr Glu Tyr Tyr Leu Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Glu Ser Glu Lys Val Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ala Ala Leu Tyr Phe Cys 85 90 95 Thr Arg Ile Ser Asn Arg Trp Gly Gly Asp Tyr Phe Gly Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 98 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 55 <400> 98 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Arg Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Arg 20 25 30 Gly Glu Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Phe Ile Tyr Trp Asp Asp Val Glu Gly Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ile Lys Asp Ile Ser Asn Lys Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Arg Lys Ile Ile Ile Thr Asn Val Ser Arg Lys Val Leu Val 100 105 110 Pro Tyr Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 99 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 56 <400> 99 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Phe Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala His Asn Gly Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Ser Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Phe Ser Ser Tyr Tyr Phe Pro Leu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 100 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 57 <400> 100 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Met Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Pro Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Ala 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ser Ala Gly Lys Gly Leu Glu Phe Leu 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Asn Ser Ala Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ser Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Met Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Glu Ile Glu Asp Thr Ala Ala Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Thr Asp Arg Asp Tyr Ala Phe Gln Ile Trp Gly His Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val 115 <210> 101 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 60 <400> 101 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Pro 20 25 30 Arg Leu Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Gln Leu Phe Ser Asp Asp Glu Lys Ser Tyr Asn Ala Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Ser Leu Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Thr Asn Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Phe Ser Ala Tyr 100 105 110 Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 102 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 61 <400> 102 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Cys Val 35 40 45 Ala Asn Ile Asn Lys Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Leu Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Ala Asp Tyr Gly Asp Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 103 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 62 <400> 103 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Ser Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Val Ser Asp Ser 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val 35 40 45 Gly Tyr Ile Phe Pro Ser Ala Ser Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Asn 50 55 60 Asn Arg Val Ser Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Ser Thr Ser Leu Ser Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val 115 <210> 104 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (lamda) from Clone 64 <400> 104 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Thr 20 25 30 Gly Met Ser Val Ser Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Phe Ile Asp Trp Asp Asn Asp His Asn Tyr Ile Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Ser Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Gly Thr Phe Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ala Thr Ser Asp Ser Trp Ser Gly Tyr Arg Asn Tyr Tyr 100 105 110 Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 105 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 01 <400> 105 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Pro Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Thr Asn Thr Ile Arg Ser Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Leu Ser Arg Asp Ile Thr Ala Asn Tyr 85 90 95 Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 106 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 03 <400> 106 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 107 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 04 <400> 107 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Asp His Val Gly Ser Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Thr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Ile Ile Tyr Glu Gly Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gln Ser Gly Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Val 85 90 95 Ala Ile Phe Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 108 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 10 <400> 108 Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Asn Gly 20 25 30 His Tyr Pro Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Ile Arg Ala 35 40 45 Leu Ile Tyr Ser Thr Ala Lys Lys Asn Thr Trp Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Val Ser Gly Val 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Leu Phe Tyr Gly Gly 85 90 95 Ala Gln Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 109 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 11 <400> 109 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Phe Gly 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Arg Ser Gly Asn Thr Val Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Gly Ala Gly His 85 90 95 Pro Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 110 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 12 <400> 110 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Ser Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Lys His Phe Ala 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Asp 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Asp Ser Tyr 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 111 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 13 <400> 111 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr 100 <210> 112 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 14 <400> 112 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Pro Trp Asn Ser Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 113 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 16 <400> 113 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Leu Glu Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asp Arg 85 90 95 Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 114 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 17 <400> 114 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr 20 25 30 Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Val Ile Tyr Asp Val Ile Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Tyr Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Val Gly Ser 85 90 95 Tyr Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 115 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 18 <400> 115 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Lys Lys Tyr Ala 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Glu Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu 65 70 75 80 Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Thr Asp Ser Ser Gly Lys His 85 90 95 Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 116 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 19 <400> 116 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Lys Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 117 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 20 <400> 117 Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Ile Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Ser 20 25 30 Phe Val Ser Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Glu Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Asp Thr Ser Ala Thr Leu Asp Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Gln 85 90 95 Ser Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 118 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 23 <400> 118 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 119 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 25 <400> 119 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Leu Leu Gly Asp Asn Tyr Val 20 25 30 Cys Trp Tyr Gln Gln Met Pro Gly Gln Ser Pro Val Val Val Leu Tyr 35 40 45 Glu Asn Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Ala Ser Ser Thr Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 120 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 26 <400> 120 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Leu Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Ser Ile Thr Gly Ser Gly Asp Asn Leu Gly Lys Arg Tyr Ala 20 25 30 Cys Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Val 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Thr Thr Asp Tyr 85 90 95 Val Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 121 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 28 <400> 121 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 122 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 29 <400> 122 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 123 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 30 <400> 123 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Ser His Ala 20 25 30 Ile Ala Trp His Gln Gln Gln Ser Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Lys Leu Ser Ser Asp Gly Ser His Asn Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Pro Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Trp Gly 85 90 95 Asp Gly Val His Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 124 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 31 <400> 124 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Lys Lys Tyr Ala 20 25 30 Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Glu Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Asn Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Cys Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Gly Ser Gln 85 90 95 Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 125 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 34 <400> 125 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Gly Gly Asn His 85 90 95 Gln Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 126 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 35 <400> 126 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ala Gly Ile Ser Ser Asp Phe Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Phe Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Val Ser Trp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr 85 90 95 Tyr Thr Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 127 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 36 <400> 127 Gln Thr Val Val Thr Gln Pro Pro Pro Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Arg Gln Gln Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asn Arg Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Tyr Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asp Thr Ala Ala Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Asp Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Glu His 85 90 95 Tyr Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 128 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 37 <400> 128 Gln Ala Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Ala Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Ser Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Trp Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 85 90 95 Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 129 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 39 <400> 129 Gln Ser Val Val Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 130 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 40 <400> 130 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Leu 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 131 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 41 <400> 131 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 132 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 42 <400> 132 Gln Ala Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Ala Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Leu Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Arg Leu 85 90 95 Ile Val Gly Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 133 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 43 <400> 133 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asn Gly Val Gly Arg Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Asn 35 40 45 Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Gly Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp His Thr Thr Thr Asn Arg 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 134 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 44 <400> 134 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Pro Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Thr Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Met Val Leu 35 40 45 Ile Tyr Lys Asp Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Thr Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 135 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 47 <400> 135 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Trp Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95 Tyr Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 136 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 49 <400> 136 Glu Ile Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Arg Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 <210> 137 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 51 <400> 137 Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Arg Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Tyr Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala 35 40 45 Leu Met Cys Ser Thr Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ala Thr Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Asp Asp Glu Arg Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Tyr Val Gly Asn 85 90 95 Gly Ile Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 138 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 52 <400> 138 Gln Ser Val Val Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 139 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 53 <400> 139 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Gly Ser Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asp Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Gly Asp Tyr Phe Cys Gln Val Arg Asp Gly Leu Thr Asp Gln 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 140 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 55 <400> 140 Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Tyr Ser Pro Asn Trp Phe Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Thr Asn Ile Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu His Leu Ser Ser 85 90 95 Gly Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 141 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 56 <400> 141 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Ile Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Arg Gly Val Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 142 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 57 <400> 142 Gln Pro Val Leu Thr Gln Ala Pro Ser Val Ser Ala Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Asp Asn 20 25 30 Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asn Gly Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Arg Ser Gly Ala Ser Ala Ser Arg Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr His Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 143 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 60 <400> 143 Ser Tyr Glu Leu Met Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Leu Leu Ala Lys Lys Cys Val 20 25 30 Arg Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Ala Ser 50 55 60 Thr Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Ala Ala Asp Tyr Lys Ile Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 144 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 61 <400> 144 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Asp Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Val Leu 35 40 45 Ile Tyr Thr Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 145 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 62 <400> 145 Gln Ser Val Leu Thr Gln Asp Pro Thr Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 146 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (lamda) from Clone 64 <400> 146 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ile Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Asp Val Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr His Cys Cys Ser Tyr Gly Gly His 85 90 95 His Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 147 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 01 <400> 147 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Gln Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Ile Ser Cys Arg Gly Tyr Gly Tyr Lys Phe Thr Gly Phe 20 25 30 Trp Val Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Asp Asp Ser His Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Phe Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu His Trp Asn Ser Leu Glu Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Thr Gly Gly Ala Phe Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val <210> 148 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 02 <400> 148 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gly Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val His Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Ala Asn Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Leu Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Gly Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Asp Ala Asp Asn Val Val Val Thr Ala Leu Ala Phe Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 149 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 03 <400> 149 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Val Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Asp Asp Ser Cys Ala 100 105 110 Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 150 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 04 <400> 150 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Thr Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val <210> 151 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 05 <400> 151 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Phe Asn Pro Asn Ser Asn Asp Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Gly Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Pro Ser Thr Pro Cys Thr Gly Gly Ser Cys His Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 152 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 06 <400> 152 Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro 1 5 10 15 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Glu Asp Gly Ala Glu 20 25 30 Thr Phe Tyr Leu Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp 35 40 45 Asn Ser Lys Asn Ser Leu Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 50 55 60 Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asp Phe Gly Val Val Arg 65 70 75 80 Thr Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 85 90 95 Thr Val Thr Val 100 <210> 153 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 07 <400> 153 Val Gln Leu Gln Gln Glu Ser Gly Pro Gly Met Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Asn Val Tyr Gly Ala Asn Ile Ser Gly Thr 20 25 30 Ser Asp Tyr Trp Ala Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Gly Ser Leu Arg Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Glu Gln Phe 65 70 75 80 Ser Val Ser Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gln Ala Val Glu Gly Arg Trp Tyr Gly Gly Arg Arg Val 100 105 110 Tyr Cys Pro *** Gln Leu Leu Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 115 120 125 Val <210> 154 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 09 <400> 154 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Pro Ile Ser Ser Thr 20 25 30 Thr Phe Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Met Gly Ser Val His His Thr Gly Ser Ser Asp Tyr His Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Phe Ala Asp Ala Ala Lys Asn Asp Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Glu Thr Gly Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gln Arg Arg Gly Thr Ser Ser Trp Ser Ser Arg Arg Leu 100 105 110 Gln Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 155 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 10 <400> 155 Gln Leu Gln Gln Val Gln Ser Gly Ala Val Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Ala Asp Thr Phe Ser Arg Phe 20 25 30 Ala Val Ser Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Thr Gly Lys Asp Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Thr Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Ser His Tyr Tyr Gly Ser Asp Ala Asp Pro Ala Trp His Phe 100 105 110 Gly Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 156 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 11 <400> 156 Pro Gly His Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Leu Arg Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ala Ser Thr 20 25 30 Gly Met Cys Val Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Glu Asp Thr Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Ala Ala Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Thr Asn Leu Asp Val Leu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Gly Arg Ile Gln Pro Gln Arg Gly Ile Asp Phe Trp Gly Pro Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 157 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 12 <400> 157 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Thr Gln Gly Ala Ser Gly Tyr Ser Tyr Gly Tyr Val Phe 100 105 110 Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 158 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 13 <400> 158 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Arg Cys Asn Val Ser Gly Gly Ser Ile Gly Ser Phe 20 25 30 Ser Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Ser Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Ala Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Phe Arg Asp Tyr Asn Ser Gly Thr Tyr Glu Val Tyr Asn Gly 100 105 110 Ser Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 159 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 15 <400> 159 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Ser 20 25 30 Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Leu Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Met Leu Tyr Arg Tyr Tyr Phe Gln Thr Ser Gly Leu Asp 100 105 110 Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 160 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 17 <400> 160 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ala Tyr 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr His Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Thr Arg Leu Thr Met Ser Ile Asp Met Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Val His Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ser Gly Ser Arg Val Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val <210> 161 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 18 <400> 161 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Gly Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile His Val Tyr Asp Gly Lys Thr His Tyr Gly Gln Asn Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Phe Thr Thr Asp Thr Leu Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Val Thr Asn Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Leu Leu Gly Gly Gly Thr Thr Leu Tyr Pro Arg Asp Glu 100 105 110 Ser Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 125 <210> 162 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 19 <400> 162 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Thr Met Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Pro 20 25 30 Gly Ala Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Leu Ile His Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Phe Leu Met Thr Asp Val Asp Pro Leu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Gly Arg Phe Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val 115 <210> 163 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 20 <400> 163 Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asp Ser Val Ser Asn Thr Arg Ala 20 25 30 Ser Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Gly Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Arg Ala Phe Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Tyr Glu Tyr Ala Val Ser 50 55 60 Val Lys Gly Arg Ile Ala Ile Ile Pro Asp Thr Ser Met Asn His Phe 65 70 75 80 Ser Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Ala Thr Ile Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Arg Pro Tyr Gly Val Tyr Asn Asp Tyr Phe Gly Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 164 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 22 <400> 164 Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Thr Gln Thr Leu Thr Leu Thr 1 5 10 15 Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Phe Asn Thr Gly Gly Val Gly Val Gly 20 25 30 Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Cys Leu Gly Leu Ile 35 40 45 Phe Trp Asp Asp Glu Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser Arg Leu 50 55 60 Thr Ile Ala Lys Asp Thr Ser Ser Ser Gln Val Val Leu Arg Met Thr 65 70 75 80 Asp Met Asp Pro Ala Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Tyr Phe Gly 85 90 95 Ala Leu Gly Phe Gly Phe Lys Asp Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val <210> 165 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 23 <400> 165 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gly Ile Phe Thr Asp Phe 20 25 30 Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Met Ser Gly Ser Ser Lys Tyr Ala Gln Asp Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Gly Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Arg Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Arg Ser Arg Ser Trp Phe Lys Met Ser Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 <210> 166 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 25 <400> 166 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Arg 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Gly Phe Ser Val Asn Cys Asp 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Ile Ile Phe Trp Asp Gly Asp Lys Arg Leu His Ala Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Ser Ile Thr Met Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Lys Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Gly His Ser Leu Arg Gly Pro Gly Cys Arg Gly Gly Ala Cys Tyr 100 105 110 Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 <210> 167 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 26 <400> 167 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Arg Ser Val Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Val Asn Thr Gly 20 25 30 Ala Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Phe Gly Asp Gly Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Asn Asn Arg Leu Thr Ile Ala Lys Asp Thr Phe Lys Asp Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Val Thr Asp Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala His Thr Asp Leu Asn Tyr Gly Asp Phe Ser Phe Asp Asp Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 168 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 28 <400> 168 Pro Gly Ala Ala Gly Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Ala 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Arg Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Tyr Ser Ala Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Ser Ala 50 55 60 Ala Val Arg Gly Arg Phe Ser Met Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ala Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Leu His Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Thr Asp Arg Asp Tyr Ala Phe Gln Val Trp Gly His Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val 115 <210> 169 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 29 <400> 169 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser 20 25 30 Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Glu Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Gln Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Glu Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Ile Met Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Met Cys Gly Tyr Tyr Asp Thr Ser Ser Gly Tyr Asp Glu 100 105 110 Ala Ser Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 125 <210> 170 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 31 <400> 170 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Thr Tyr 20 25 30 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ser Leu Glu Cys Ile 35 40 45 Gly Asn Ile His Ser Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Arg Val Leu Val Gln Gly Thr His Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 <210> 171 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 33 <400> 171 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Glu Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Tyr Thr Pro 20 25 30 Arg Met Gly Val Gly Trp Ile Cys Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Trp Asp Asn Asp Glu Arg Tyr Ser Pro Pro 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Met Ile Arg Asp Ile Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Leu Thr Asn Met His Pro Val Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala His Ser Gln Tyr Phe Gly Ser Asn Asn Asp Ala Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 172 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 34 <400> 172 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Ser 20 25 30 Thr Tyr Asn Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Val Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Leu Tyr Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Gln Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Ile Ser Arg Val Ser Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Arg Leu Arg Ser Ala Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Thr Asp Ser Asn Asn Val Val Pro Ala Ala Arg Gly Leu Thr 100 105 110 Phe His His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 173 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 35 <400> 173 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asp Thr Phe 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Val Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Thr Asn Arg Val Thr Val Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Leu Thr Ser Val Glu Pro Ala Asp Thr Gly Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Tyr Thr Tyr Asn Thr Gly Ser Ile Asp Trp Phe Asp Pro Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 174 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 36 <400> 174 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Glu Thr Thr Val Asn Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 175 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 37 <400> 175 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Arg Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Asp Gly Asp Ser Phe Gly Leu Met Asp Tyr Tyr Tyr Ala 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 <210> 176 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 38 <400> 176 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Gly Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Ser Pro Leu Asp Trp Tyr His Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val 115 <210> 177 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 39 <400> 177 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Asn Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Gly Thr 20 25 30 Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Leu Phe Asn Thr Asp Gly Ile Gln Tyr Lys Ala Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Ala Thr Ile Phe Gly Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Ala Tyr Gln Ser Thr Ser Tyr Tyr Arg Pro Phe Glu Asp Trp 100 105 110 Gly His Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 178 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 41 <400> 178 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Glu Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Ala Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Gly Ser Ala Pro Tyr Tyr Leu Pro Phe 100 105 110 Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 179 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 42 <400> 179 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ile Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Gly Ser Phe Ala Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp Leu Arg Gln Ser Ala Gly Lys Glu Met Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Arg Val Tyr Phe Thr Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Glu Asn Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Pro Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Val Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Val His Ser Ser Ser Ser Gly Gly Arg Ala Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 180 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 46 <400> 180 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Ala 20 25 30 Asp Asp Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Lys Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ser Ser Trp Phe Ser Tyr Tyr Phe Gln 100 105 110 Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 181 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 47 <400> 181 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Asn Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Asp 20 25 30 Lys Val Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Ser Asn Tyr Asp Lys Asn Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Arg Arg Thr Leu Thr Ile Arg Lys Asp Thr Ser Lys Asn His Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Leu Thr Asn Val Asp Pro Leu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Val Phe Arg Ser Ile Arg Leu Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val 115 <210> 182 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 48 <400> 182 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Arg Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Gly Ser Glu Ser Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Arg Tyr Ser Ser Thr Trp Phe Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val 115 <210> 183 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 49 <400> 183 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser Thr 20 25 30 Leu Tyr Tyr Trp Ala Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Ser Tyr Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Glu Asn Lys Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Asp Ser Val Thr Ala Ser Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asn Glu Pro Asn Trp Asn Tyr Val Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Ile Ala 115 120 <210> 184 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 50 <400> 184 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ala Met Arg Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asn Pro Asn Arg Gly Asp Thr Asn Tyr Ser Arg Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Ile Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Val Gly Tyr Cys Arg Gly Gly Thr Cys Tyr Ser Asn 100 105 110 Ala Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 125 <210> 185 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 52 <400> 185 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Ser Asp Ala Ile Cys Ser Gly 20 25 30 Ser Asp Tyr Trp Ser Trp Ile Gln Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Arg Lys Ser Phe Val Val Arg Gly Gly Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 125 <210> 186 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 53 <400> 186 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Cys Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asp Asn Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Ala Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Met Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Ala Tyr Leu Pro Gly 100 105 110 Ala Phe Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 125 <210> 187 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 54 <400> 187 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Lys Asn Asp Glu Thr His Tyr Ala His Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Met Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Val Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Gly Ser Ser Ser Ala Thr Asn Asn Trp Phe Asp Pro 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 <210> 188 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 57 <400> 188 Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Asn Ser Tyr Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ser Ile Tyr Tyr Leu Tyr Asn Arg Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro 50 55 60 Ser Leu Asn Ser Arg Val Thr Met Ser Leu Asp Thr Ser Asn Asn Gln 65 70 75 80 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ser Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Gln Val Val Pro Ser Ala His Asp Pro Phe 100 105 110 Tyr Met Trp Gly His Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 189 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 58 <400> 189 Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu 1 5 10 15 Ser Leu Thr Cys Ala Leu Ser Gly Asp Ser Val Phe Ser Asn Ala Ala 20 25 30 Ser Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ile Lys Trp Phe His Asp Tyr Ala Leu Ser 50 55 60 Val Arg Arg Arg Met Thr Val Thr Ala Asp Thr Ser Gln Asn Arg Phe 65 70 75 80 Ser Leu Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ala Leu Leu Asn Gly His Phe Asp Tyr Trp Gly Pro Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 190 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 60 <400> 190 Val Gln Leu Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Thr Thr Ser 20 25 30 Ser Ser Phe Trp Gly Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Leu Tyr Tyr Asn Glu Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Met Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Val Arg Pro Arg Asp His Gly Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val 115 <210> 191 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 62 <400> 191 Gln Val Thr Leu Arg Glu Thr Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ala 20 25 30 Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Arg Thr Tyr 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Ser Met Thr Asp Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Arg Ala Met Gly Met Arg Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Met 100 105 110 Asp Val Trp Gly Asn Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 192 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 63 <400> 192 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Val Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Ile Cys Ser Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Trp Asn Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Ser Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu 65 70 75 80 Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Arg Ser Gly Thr Tyr Tyr Thr Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Met Val Thr Val 115 <210> 193 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 67 <400> 193 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Asn 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Phe Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Phe Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala His Met Gly Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 194 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 68 <400> 194 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Leu Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asn Glu Gln Trp Ala Val Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ala Ser Gly 115 120 <210> 195 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 70 <400> 195 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Leu Ile Asp Tyr 20 25 30 Trp Leu Ala Trp Trp Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ala Phe 50 55 60 Glu Gly Arg Val Thr Val Ser Ala Asp Asn Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Glu Ala Ser Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Arg Asp Tyr Ser Arg Ser Ser Ser Leu Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 196 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 72 <400> 196 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Gly Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Tyr 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Ala Lys Gly Gly Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 197 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 73 <400> 197 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Arg Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Leu His Gly Ala Ser Phe Asn Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ala Met Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Thr Pro Arg Gly Glu Val Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Thr 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Val Asn Thr Tyr Asp Arg Asp Ile Gly His His Pro Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val 115 120 <210> 198 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 74 <400> 198 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu 50 55 60 Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Arg Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Gly Tyr Cys Asn Gly Asn Ser Cys Ser Asn Phe Tyr Ser 100 105 110 Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 125 <210> 199 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 76 <400> 199 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Asn Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Asp Thr Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Ser Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Thr Thr Thr Ser Tyr 65 70 75 80 Leu Gly Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Trp Asp Pro Val Asp Ala Ala Arg Pro Asp Ala Phe Asp 100 105 110 Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 <210> 200 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of VH-VL (kappa) from Clone 78 <400> 200 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Asp Asp Ser Asp Val Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Arg Ala Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ser His Asn Trp Asn Asp Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val 115 <210> 201 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 01 <400> 201 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Trp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Gly Phe Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 202 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 02 <400> 202 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Thr Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Val Ser Arg Trp 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Glu Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu Gln Pro 65 70 75 80 Arg Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Leu Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 203 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 03 <400> 203 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Asn Ile Ser Cys Arg Ala Gly Gln Thr Ile Thr Thr Lys 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Gly Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Val Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Glu Thr Glu Phe Thr Leu Val Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Tyr Gly Ile Trp Thr Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 204 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 04 <400> 204 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Thr Ile Asn Met Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Ser Asn Leu His Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Tyr Tyr Ile Phe 85 90 95 Ser Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 205 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 05 <400> 205 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asp Ile Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Asn Val Ala Ser Thr Leu Asp Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ile Ala 50 55 60 Ala Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Ala Asp Leu Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 206 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 06 <400> 206 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 207 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 07 <400> 207 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Leu Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Asp Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Pro Ile Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ile Gly Ser Tyr Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 208 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 09 <400> 208 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Leu Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 209 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 10 <400> 209 Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro Ala Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Val Arg Tyr 20 25 30 Val Asn Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly 50 55 60 Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Thr Asp Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Pro Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Ser Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 210 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 11 <400> 210 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Ile Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Lys Ala Ser Ser Pro Asn Phe Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Thr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Ser Pro 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 211 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 12 <400> 211 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Thr Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Val Ser Arg Trp 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Glu Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asp Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asp Lys Met Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 212 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 13 <400> 212 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Thr Ser 20 25 30 Ser Asn Gly Asn Asn Phe Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Val Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 213 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 15 <400> 213 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Pro Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Asn Arg Asn 20 25 30 Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ser Ala Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Gln Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 214 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 17 <400> 214 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Tyr Thr Lys Lys Met Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Met Arg Trp Ala Ser Ile Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Ala Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Gly Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 215 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 18 <400> 215 Glu Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Val Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His Tyr His Asp Trp Pro Gln 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 216 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 19 <400> 216 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Cys Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Arg Tyr Gln Glu Gly Pro Gly Ile Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Ser Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Pro 85 90 95 Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 217 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 20 <400> 217 Asp Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 22 <400> 218 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Asn Met Ser Ala Tyr Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Arg Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 219 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 23 <400> 219 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Asn Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg His Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Ala Ala Ser Thr Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Phe Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 220 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 25 <400> 220 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Lys Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Val Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 221 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 26 <400> 221 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Arg Ala Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Pro Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 222 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 28 <400> 222 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Leu 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln His Lys Pro Pro Met Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 His Ala Val Ser Tyr Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Glu Ser Gly Gly Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Leu Tyr 85 90 95 Ser Phe Gly Gln Gly Thr Ser Gly Asn Gln 100 105 <210> 223 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 29 <400> 223 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Cys Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Val Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Leu Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 224 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 31 <400> 224 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Ser Asp Arg 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Phe Gly Thr His Phe Thr Phe Ile Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Gln Gln His Asp Asp Val Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 225 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 33 <400> 225 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Ser Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ser Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Asp Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Pro Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Gln 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 226 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 34 <400> 226 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Ser His Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Phe Gly Thr Lys Phe Leu Leu Ser Ile Arg Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Gly 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Thr Xaa 100 105 <210> 227 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 35 <400> 227 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Leu Asn Ser 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ser His Val Leu Glu Asn Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Tyr Met Ser Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 228 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 36 <400> 228 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Phe Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp *** Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln His Ile Thr Asp Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Glu Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ile Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Trp Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ile Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asp Asp Leu Pro Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 229 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 37 <400> 229 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 His Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Phe Gly Tyr Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 230 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 38 <400> 230 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Arg Asp Ile Ser Asn His 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asn Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Val Pro Pro 85 90 95 Ala Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 231 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 39 <400> 231 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Val Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Ser Val Val Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Gln Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Gly Leu Lys Thr Gly Val Ser Ser Arg Phe Gly Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Phe Thr Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr His Asp Val Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 232 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 41 <400> 232 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Arg Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Val Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Leu Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 233 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 42 <400> 233 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Gly Gln Ser Val Arg Arg Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 234 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 46 <400> 234 Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asp 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Trp Arg Ser Xaa 100 105 <210> 235 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 47 <400> 235 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Arg 1 5 10 15 Lys Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Met 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Asp Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Thr Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 236 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 48 <400> 236 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Glu Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Ala Ala Ala Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Ala Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Cys Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ile Thr Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 237 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 49 <400> 237 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 238 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 50 <400> 238 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Gly Pro Trp 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln His Arg Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Ser Thr Ser Thr Leu His Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Thr Asn Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Phe Cys Leu Gln Ser Tyr Ser Phe His Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 239 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 52 <400> 239 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Val Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 240 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 53 <400> 240 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Ala Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Cys Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Asp Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 241 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 54 <400> 241 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Asn Phe Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys *** Tyr Gln 100 105 <210> 242 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 57 <400> 242 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Phe 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Leu Tyr Gly Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 243 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 58 <400> 243 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Ala Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 244 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 60 <400> 244 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Asn Tyr Leu Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 245 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 62 <400> 245 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Pro Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Pro Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 246 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 63 <400> 246 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile His Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Phe Ser 20 25 30 Ser Thr Asn Lys Thr Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Pro Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Gly Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Ser Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 247 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 67 <400> 247 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Glu Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Lys Ala Pro Glu Leu Val Ser 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Asn Leu Glu Cys Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Thr Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 248 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 68 <400> 248 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Thr Ala Ser Thr Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Thr Phe Gly His 85 90 95 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 <210> 249 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 70 <400> 249 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Thr Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 250 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 72 <400> 250 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Asn Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 251 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 73 <400> 251 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Lys 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Glu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Val Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Asp 50 55 60 Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Tyr Asn Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 252 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 74 <400> 252 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ala Gly Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 His Lys Thr Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Glu Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Leu Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 253 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 76 <400> 253 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Gly Ile Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 254 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of VH-VL (kappa) from Clone 78 <400> 254 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Leu Ser Pro Leu Ser Ala Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Ala 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims

scFv 항체를 표면에 제시하는 파지를 포함하는 라이브러리로,
상기 scFv 항체는 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H)및 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)을 포함하고,
상기 scFv 항체는 면역 기관 유래 세포에서 추출된 핵산을 주형으로 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H)및 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)특이적 프라이머를 이용하여 합성된 핵산으로부터 코딩된 것이며,
상기 scFv 항체는 pCANTAB 5E 파지미드 벡터를 기반으로 구축된 하기 구조의 pSIA23 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현되고, 상기 벡터는 주변세포질로 중쇄 가변영역(V_H)및 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)의 발현을 유도하기 위해 pelB 신호서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 라이브러리:
A-X-B-링커-C-Y-D-E
상기 A는 SfiⅠ, B는 NheⅠ, C는 BglⅡ 및 D는 NotⅠ인 제한효소 인식 부위이고,
상기 E는 His tag 또는 HA(Hemagglutinin) tag 삽입 부위이며,
상기 X는 중쇄 가변영역(V_H)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이며, Y는 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이다.
제1항에 있어서, 상기 면역 기관은 골수, 혈액 및 편도로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 라이브러리.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 ScFv 항체는 인간항체(human antibody)인 것을 특징으로 하는 라이브러리.
제1항에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 7~24로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머 및 서열번호 25~58로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는 라이브러리.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 63-104 및 147-200로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 라이브러리.
제1항에 있어서, 상기 경쇄 가변영역은 서열번호 105-146 및 201-254로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 라이브러리.
제1항에 있어서, 상기 라이브러리의 다양성은 10⁸~10¹⁴인 것을 특징으로 하는 라이브러리.
면역 기관 유래 세포에서 핵산을 추출하는 단계;
상기 추출된 핵산을 주형으로 하고, 면역 기관 유래 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H)및 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)특이적 프라이머를 이용하여 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 증폭하는 단계;
상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산을 벡터에 클로닝한 다음 형질전환체에 도입하는 단계; 및
상기 형질전환체에서 scFv 항체를 발현하여, 형질전환체에 포함된 파지 표면에서 발현된 scFv 항체를 제시하는 단계를 포함하고,
상기 scFv 항체는 pCANTAB 5E 파지미드 벡터를 기반으로 구축된 하기 구조의 pSIA23 벡터가 도입된 형질전환체에서 발현되고, 상기 벡터는 주변세포질로 중쇄 가변영역(V_H)및 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)의 발현을 유도하기 위해 pelB 신호서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 라이브러리의 제조방법:
A-X-B-링커-C-Y-D-E
상기 A는 SfiⅠ, B는 NheⅠ, C는 BglⅡ 및 D는 NotⅠ인 제한효소 인식 부위이고,
상기 E는 His tag 또는 HA(Hemagglutinin) tag 삽입 부위이며,
상기 X는 중쇄 가변영역(V_H)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이며, Y는 경쇄 가변영역 (V_Lκ또는 V_Lλ)을 코딩하는 유전자 삽입 부위이다.
제10항에 있어서, 상기 면역 기관은 골수, 혈액 및 편도로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 제조방법.
삭제
삭제
제10항에 있어서, 상기 ScFv 항체는 인간항체(Human Antibody)인 것을 특징으로 하는 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 7~24로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머 및 서열번호 25~58로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 프라이머를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 63-104 및 147-200로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제10항에 있어서, 상기 경쇄 가변영역은 서열번호 105-146 및 201-254로 표시되는 서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
제1항, 제2항 및 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 라이브러리를 항원과 반응시켜 항원 특이적 scFv 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 scFv 항체 스크리닝 방법.
제18항에 있어서, 자가면역질환 또는 암 유발 인자에 특이적으로 결합하는 ScFv 항체를 스크리닝하는 것을 특징으로 하는 방법.
제18항에 있어서, DLL 4 (Delta like ligand 4) 단백질에 특이적으로 결합하는 ScFv 항체를 스크리닝하는 것을 특징으로 하는 방법.