KR101723185B1

KR101723185B1 - 한우 마블링 예측을 위한 폴리뉴클레오티드 및 그 진단방법

Info

Publication number: KR101723185B1
Application number: KR1020140144525A
Authority: KR
Inventors: 정호영; 김태헌; 조용민; 이현정; 최봉환; 이경태; 박미나; 임다정; 채한화; 박미림; 정경용; 원정미; 최윤정
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2014-10-23
Filing date: 2014-10-23
Publication date: 2017-04-05
Also published as: KR20160048316A

Abstract

본 발명은 한우 마블링 예측을 위한 폴리뉴클레오티드 및 그 진단방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 258번째 염기에서의 삽입 또는 결손을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드 또는 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 73번째 염기가 C 또는 T인 단일염기다형을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드, 조성물, 키트 및 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드를 이용하여 한우 마블링을 예측하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드를 활용하면 한우의 마블링을 효과적이고 실용적인 방법으로 예측할 수 있으며, 이를 토대로 고품질의 한우 고기를 생산하는 종우의 선발이 가능하다.

Description

한우 마블링 예측을 위한 폴리뉴클레오티드 및 그 진단방법 {A polynucleotide for predicting marbling score in Hanwoo and diagnosing method using the same}

본 발명은 한우 마블링 예측을 위한 폴리뉴클레오티드 및 그 진단방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 258번째 염기에서의 삽입 또는 결손을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드 또는 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 73번째 염기가 C 또는 T인 단일염기다형을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드, 조성물, 키트 및 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드를 이용하여 한우 마블링을 예측하는 방법에 관한 것이다.

종래의 전통적인 한우 마블링 및 육질 측정 기술은 표현형 측정치에 의존하고, 이를 통해 선발된 후보종모우의 자손들의 성장 및 도체 형질을 검정하여, 다시 후보종모우를 선발하는 것이었다. 하지만, 이를 통한 한우의 육질 측정은 많은 시간이 소요될 뿐 아니라, 부모의 육종가에 근거하여 평가하기 때문에 평가의 정확성이 낮다. 또한, 두 세대를 거쳐 많은 후보종모우를 사육하게 되므로, 인건비, 사육비, 시설 관리비 등을 지출하게 되어 사육자에게 경제적인 부담을 줄 수 있다.

이와 같은 문제를 해결하기 위해, 최근에는 육질의 유전적 능력을 추정할 수 있는 유전자 마커에 대한 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 예를 들어, PCR 기술을 이용하는 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism), AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 및 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 등 다양한 DNA 분석기법을 이용하여 가축의 주요 경제형질과 관련된 분자표지를 선별해왔다. 이러한 분자표지들 중 가장 널리 활용되는 분자표지는 단일 염기 다형성, 즉 SNP (Single nucleotide polymorphism) 표지이다. SNP가 표현형에 영향을 미쳐 가축의 주요 경제형질이 달라진다면 상기 SNP는 가축의 경제형질 예측 마커로서 활용될 수 있다. SNP 마커를 사용하는 종래 기술은 공개특허 제10-2012-0011728호 (2012.02.08.)로서, 한우의 육량 또는 육질의 조기 선발에 유용한 단일염기다형성 마커에 관한 것이다.

아디포넥틴(ADIPOQ)은 몇몇의 포유류 종에서 백색지방조직에 의해 분비되는 가장 풍부한 단백질이고, 아디포넥틴의 분비는 지방조직질량과 역비례관계에 있다. 최근의 연구에서, 아디포넥틴은 갈색지방조직과 골격근에서도 생성되고, 지방질 생합성과 글루코스 신생합성을 억제한다는 것이 밝혀졌다. 또한, 아디포넥틴은 지방산 산화를 증가 및 포도당 흡수와 인슐린 민감성을 조절에 관혀한다는 것이 밝혀졌다. 이러한 연구 결과는 아디포넥틴이 지방과 탄수화물 신진대사의 조절에서 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다.

이와 같은 기술적 배경 하에서, 본 발명자들은 한우의 마블링 형질 예측용 폴리뉴클레오티드 및 진단방법을 개발하기에 이르렀다.

결국, 본 발명의 목적은 실용적이고 신속한 마블링 예측을 가능하게 하는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 한우 마블링 예측용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 한우 마블링 예측용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드를 이용한 한우 마블링 예측 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 더욱 명확하게 된다.

상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위해,

본 발명의 일 측면에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 258번째 염기에서의 삽입 또는 결손을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드가 제공될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 73번째 염기가 C 또는 T인 단일염기다형을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드가 제공될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 한우 마블링 예측용 조성물이 제공될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 상기 조성물을 포함하는 한우 마블링 예측용 키트가 제공될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, (a) 한우의 게놈 DNA를 추출하는 단계;

(b) 상기 (a) 단계로부터 추출한 게놈 DNA를 주형으로, 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트를 이용하여 주형 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및

(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어난 경우가 그렇지 않은 경우에 비하여 한우 마블링 등급이 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법이 제공될 수 있다.

(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CT인 경우가 CC 또는 TT인 경우보다 한우 마블링 등급이 더 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법이 제공될 수 있다.

(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어나고, 서열번호 1의 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CT인 경우를, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어나지 않고, 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CC 또는 TT인 경우보다 한우 마블링 등급이 더 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법이 제공될 수 있다.

본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드를 활용하면 한우의 마블링을 효과적이고 실용적인 방법으로 예측할 수 있으며, 표현형 측정치에 의존한 기존의 기술보다 신속한 진단이 가능하다. 또한, 이를 토대로 고품질의 한우 고기를 생산하는 종우의 선발이 가능하다.

도 1은 본 발명의 일 실시에 의한 ADIPOQ 유전자의 SNPs, 염기서열 삽입 및 결손을 보여주는 아가로스 젤 및 프라이머 세트를 나타낸다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명에 있어, "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드 단위체가 공유결합에 의해 사슬모양으로 이어진 뉴클레오티드 중합체를 의미하며, 뉴클레오티드의 유사체를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어, "ADIPOQ 유전자"는 포도당 레벨 및 지방산 분해를 조절하는 것으로 알려진 아디포넥틴 (adiponectin)을 코딩하는 유전자를 의미한다. 상기 ADIPOQ 유전자는 크로모좀 1에 위치하고 있고, 약 11,429,556 길이의 DNA 염기서열을 갖는다. 상기 ADIPOQ 유전자의 염기서열은 NCBI의 Blast 등 공지의 데이터베이스에서 얻을 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어, "서열번호 1"은 다형성 부위를 포함하는 다형성 서열(polymorphic sequence)이다. 다형성 서열이란 폴리뉴클레오티드 서열 중에 SNP (single nucleotide polymorphism)를 포함하는 다형성 부위 (polymorphic site)를 포함하는 서열을 의미한다. 상기 폴리튜클레오티드 서열은 DNA 또는 RNA 일 수 있다.

본 발명에 있어, "단일염기다형"은 DNA 염기서열에서 하나의 염기서열 (A,T,G,C)의 차이를 보이는 유전적 변화 또는 변이를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 의미하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 상기 프라이머의 길이 및 서열은 연장 산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 상기 프라이머는 바람직하게 15~30 염기쌍의 길이로 이루어져 있다.

본 발명에 있어서, PCR 증폭과정에 적용되는 경우, "키트"는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소 (예컨대, Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermisflavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus (Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있다. 상기 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.

상기 게놈 DNA은 한우의 근육, 표피, 혈액, 뼈, 장기 등 다양한 소스로부터 추출이 가능하고, 가장 바람직하게는 근육 또는 혈액으로부터 얻어질 수 있다.

본 발명의 게놈 DNA 추출 방법은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 실시되는데, 이를 위해 상업용 키트가 사용될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 증폭 단계 (b)는 중합효소연쇄반응(PCR; Realtime PCR을 포함), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재증폭(nucleic acid sequence-based amplification), 전사 기재 증폭 시스템(transcription-basedamplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 Q 복제효소(replicase)를 통한 증폭 또는 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 있다. 상기 PCR은 중합효소를 이용하여 표적 서열에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 서열을 포함하는 유전자를 증폭하는 방법이고, 가장 바람직한 유전자 증폭 방법이다.

상기 유전자형을 분석하는 방법 (c)은 대립 유전자 특이적 프로브 혼성화 방법 (allele-specific hybridization), 형광 인 시투 혼성화 (FISH), 분자 비콘 (molecular beacons), SNP 마이크로어레이 (SNP microarray), 제한효소단편길이다형성 (Restriction fragment length polymorphism), PCR을 이용한 방법 (PCR-based methods), Flap 엔도뉴클레아제 (Flap endonuclease), 프라이머 신장법 (Primer extension), 5'-뉴클레아제 (5'-nuclease), 올리고뉴클레오타이드 결합 어세이 (Oligonucleotide Ligation Assay), 크기 분석법(size analysis), 단일-가닥 컨퍼메이션 분석 (SSCA), 변성 구배 젤 전기영동 (DGGE) 및 단일 가닥 배좌 다형성법(single-stranded conformation polymorphism)으로 구성된 군에서 선택되는 방법에 의해 수행될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 유전자형의 서열 변화는 단일-가닥 분자내 염기 결합의 차이를 초래하여, 이동성이 다른 밴드를 초래하는데, SSCA는 이 밴드를 검출한다. DGGE 분석은 변성 구배 젤을 이용하여, 야생형 서열과 다른 이동성을 나타내는 서열을 검출한다. 다른 기술들은 일반적으로 본 발명의 SNP를 포함하는 서열에 상보적인 프로브 또는 프라이머를 이용한다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.

실시예 1: 소 도체 형질 측정

농협중앙회 한우개량사업소로부터 국가 전체 중 1954마리의 한우가 무작위로 선출되고, 국가 데이터베이스에 등록된 한우의 고기 샘플들도 한국 동물 상품 평가원 (KAPE)의 9개의 포장 시설로부터 무작위로 선발되었다. KAPE로부터 수집된 자료는 도체무게, 등심 단면적, 등지방두께 및 마블링 등급을 포함한다. 도축 24시간 후에, 근육 샘플의 약 5g이 6번째 갈비뼈 주변의 가슴 최장근으로부터 수집되었다.

실시예 2: 게놈 DNA 추출

게놈 DNA의 추출을 위해, 근육 샘플의 약 1g 이 사용되었다. 샘플을 약간 다진 후, 그 조각들을 추출 버퍼가 들어있는 튜브에 놓고, 게놈 DNA는 제작자의 가이드라인에 따라 상업용의 키트를(Wizard DNA extraction kit, Promega) 사용해 추출되었다.

실시예 3: 증폭

프라이머는 소의 서열에 기초하여 (a GenBank accession number JQ775868) DNAstar versio 6.0의 DNA선별 프로그램을 사용해 디자인되었다. 모든 소 종류에서 충분한 다형성을 가진 프라이머 세트를 선별하기 위해, 정렬(alignment)은 수납 번호를 가진 GenBank로부터 6개의 참조 서열을 (DQ156119, EU296533, EU313339, EU492456, EU492457 및 JQ775868) 가지고 실행되고 8개의 잠재적인 SNP (g.81965420G>C, g.81965993G>C, g.81966286C>A, g.81966690A>G, g.81966775T>C, g.81966798G>A, g.81966940A>G 및 g.81967160T>C)가 발견되었다. 본 발명은 모든 소 품종에 대해 충분한 가변성을 가진 것처럼 보이는 SNP (g.81966377T>C)를 선별해, 상기 SNP를 포함하는 게놈의 부분에 대한 프라이머를 디자인하였다. 정방향 및 역방향 프라이머는 각각 GCAGC TCTAC TTGGC ATCC (서열번호 2, 뉴클레오티드 위치 81966163 - 81966184) 와 CTTGA ATCAG TCGTC CTTAC CC (서열번호 3, 81966410 - 81966429) 이다.

총 20μl의 부피로 2μl의 10X 리액션 버퍼 (10 mM Tris, pH 8.3, 50 mM KCl, 0.1% Triton X-100, 1.5 mM MgCl₂), 2.5mM dNTO, 각 프라이머의 10pmol, 게놈 DNA의 50 ng 및 1 단위의 Taq DNA 중합효소 (Gibco BRL, Grand Island, NY)가 사용되었다. 2분 동안 95℃에서 열을 가한 후에, 변성을 위해 94℃/1분, 가열 냉각을 위해 59℃/1분, 중합을 위해 72℃/1분인 사이클로서, 총 35사이클이 수행되었다 (MJ Research, PT-200, Watertown, MA). 에티듐 브로마이드로 염색된 DNA 밴드는 UV 빛을 통해 검출되었다.

실시예 4: 단일염기다형성의 검출

DNA 샘플들은 PCR 정제 시스템을 사용해 정제되었고, 직접순서결정 분석은 정방향 및 역방향 프라이머를 가지고 모든 샘플들에 대해 NIAS에 있는 ABI3730 XL 유전자 분석기를 이용해서 행해졌다. 직접순서결정법의 조건은 10μl의 총 부피를 (시퀀싱 버퍼 5μl, 1.6 pM 프라이머, 50 ng 게놈의 DNA, 0.5 μl 빅다이 종결부위 및 증류수) 가지고 94℃/10초 와 60℃/4분인 사이클로서, 총 35 사이클이 행해졌다. 상기 실험 결과의 산물에 대한 정제 절차는 78% 이소프로판올과 70% 에탄올로 45분 동안 2,800 rpm으로 원심 분리하는 것을 포함한다. 2시간 동안 상온에서 샘플을 건조한 다음, 이온이 제거된 포름아미드 (10μl)가 첨가되었다. 모든 각각의 서열의 정렬은 DNAstar version 6.0의 SeqMan 프로그램을 가지고 실행되고, 유전자형은 서열 도표의 정점에 따라 결정되었다. 삽입의 유전형질분석을 위해, 1.5%의 아가로즈 젤 전기영동이 실행되고, 유전자형은 빠른 이동성 (276 bp, 결손)과 느린 이동성 (323bp, 삽입) 에 대한 DNA의 밴드 패턴에 기초해 결정되었다 (도 1).

실시예 5: 통계적인 분석

유전자형의 도체형질에 대한 영향을 연구하기 위해 분산분석은 general linear model(GLM) 절차를 가지고 통계 분석 시스템 (SAS, 1990)을 이용해 수행되었다. 최소 제곱 평균은 0.05의 비교 오류율을 가지고 피셔의 최소유의차검정을 사용해 비교되었다.

유전자의 상가효과는 두 개의 동형 접합적 유전자형에 대한 솔루션 사이의 다른 점에 의해 측정되고, 우성 편차는 이형 접합적 유전자형의 솔루션 사이에 다른 점과 두 개의 동형 접합적 유전자형의 솔루션의 평균에 의해 측정되었다. 각각의 형질에 대한 최소 제곱 평균과 표준오차는 다음과 같은 선형 모델을 사용해 측정되었다: Y=μ+G+e, Y는 형질의 관찰 값이고, μ는 각각의 형질에 대한 전체의 평균이고, G는 유전자형의 고정된 효과이고, e는 잔여 오류이다. 대립 유전자 빈도와 하디-웨인버그 평형은 Arlenquin version 3.0을 사용해 측정되었다. 분석을 위해 Haploview의 소프트웨어를 사용해 연관비평형을 측정했다.

실험 결과

하기 표 1은 도체 형질의 기술적 개요를 나타낸다.

증폭은 267 및 323 bp의 게놈의 절편을 생산했다. 본 발명의 분석은 DNA 밴드 패턴의 이동성에 따라 유전자형을 결정했다. 즉, 빠른 DNA 밴드 (267 bp)와 느린 DNA 밴드 (323 bp)는 각각 대립 유전자 D (결손)와 I (삽입)이 할당되었다. 게다가, 서열 분석은 참고 서열에 따라 뉴클레오티드 위치 81966364에서 81966429 사이에 56bp의 삽입을 확증했다. 본 발명의 PCR 분석은 2개의 삽입 이상을 가진 어떤 동물도 발견하지 못했는데, 한우 195 마리 (약 10%)가 상기의 삽입 절편을 가지고 있었다. D와 I에 대한 대립 유전자 빈도의 측정은 각각 0.844와 0.156으로 측정되었다 (도 1).

서열의 정렬은 5의 프로모터 부분에서 81966235 (C>T) 및 81966377 (T>C)의 뉴클레오티드 치환을 입증했다. g.81966235C>T인 SNP는 C (0.828) 및 T (0.172)의 대립유전자 빈도를 보여주는데, 즉, CC는 68.5%, TC는 28.5%, TC는 3%를 차지한다. CC, CT 및 TT에 대한 유전자형 빈도는 각각 47.1%, 43.1% 및 9.8%를 차지하고, g.81966377T>C에 대한 G (0.686) 및 A (0.314)의 대립 유전자 빈도를 보여준다. g.81966364D>I인 SNP는 D (0.844) 및 I (0.156)의 대립 유전자 빈도를 보여주고, DD는 71.2%, DI는 26.5%, II는 2.4%를 차지한다. 하디-웨인버그 평형의 측정으로부터 유의한 이탈은 SNP와 삽입에 대해 발견되지 않았다. 단상형 분석은 삽입 (g.81966364D>I)과 g.81966377T>C 사이에 유의한 연관비평형을 확인했다.

ADIPOQ 유전자와 SNP 사이의 연관 규칙 분석의 결과는 하기 표 2에서 보여진다. g.81966337T>C의 유전적인 영향은 MAR와 LEA (P<0.05) 및 BFT와 CAW (P<0.01)의 유의한 표현형 차이를 설명했다. 유전형 CC (6.054) 및 TC (5.944)를 가진 동물은 유전형 TT (5.130)를 가진 동물들보다 유의하게 더 높은 MAR를 가지고 있었고, 유의한 유전자의 상과효과를 보여주었다. 반면에, 반대의 패턴이 관찰되었는데, 대립 유전자 T를 가지고 있는 동물들은 대립 유전자 C를 가지고 있는 동물들 보다 더 높은 BFT, LEA 및 CAW의 값을 보여주었다. 분석은 또한 LEA는 단지 유의한 상가 효과로 인식되는 반면, BFT 및 CAW에 대한 상가 및 우성효과를 확증했다. g.8196235C>T 및 g.81966364D>I의 주요한 대립 유전자 (major allele)의 유전자형 (대립 유전자 C 및 D (결손))은 각각 다른 대립 유전자보다 더 낮은 MAR 등급을 보여주었고, 상기 분석은 우성 (g.8196235C>T) 및 상가 (g.81966364D>I) 효과를 확증했다. MAR 이외에 다른 형질에 대한 유의한 연관성은 g.8196235C>T와 g.81966364D>I에서 발견되지 않았다 (표 2).

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION <120> A marker for predicting marbling score in Hanwoo and diagnosing method using the same <130> NPF-26785 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 267 <212> DNA <213> Bos taurus coreanae <400> 1 cttgaatcag tcgtccttac cctcaggtgt ggaatcagag ccacagactt cagtcagggt 60 ggaagtagga ggcgatggcg cagcctcagc agctcggtac tcatggggac aagcagcccc 120 cgccccaccg ccgtcccttc ccattggcca gcacagtgag agccagagac caatgggtag 180 acacgtgccc ctggcagctc ctttggcttg ccactccagg gaacctggtg caacccagtt 240 cgggcttggg atgccaagta gagctgc 267 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Bos taurus coreanae <400> 2 gcagctctac ttggcatcc 19 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Bos taurus coreanae <400> 3 cttgaatcag tcgtccttac cc 22 <210> 4 <211> 56 <212> DNA <213> Bos taurus coreanae <400> 4 tttggcttgc cactccaggg aacctggtgc aacccagttc gggcttggga tgccaa 56

Claims

서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 258번째 염기에서의 삽입 또는 결손을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드.
제1항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 한우 마블링 예측용 조성물.
제2항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트인 조성물.
제2항 또는 제3항의 조성물을 포함하는 한우 마블링 예측용 키트.
(a) 한우의 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계로부터 추출한 게놈 DNA를 주형으로, 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트를 이용하여 주형 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및
(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어난 경우가 그렇지 않은 경우에 비하여 한우 마블링 등급이 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법.
서열번호 1로 표시되는 ADIPOQ 유전자 유래 폴리뉴클레오티드의 73번째 염기가 C 또는 T인 단일염기다형을 검출할 수 있는 한우 마블링 예측용 폴리뉴클레오티드.
제6항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 한우 마블링 예측용 조성물.
제7항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트인 조성물.
제7항 또는 제8항의 조성물을 포함하는 한우 마블링 예측용 키트.
(a) 한우의 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계로부터 추출한 게놈 DNA를 주형으로, 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트를 이용하여 주형 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및
(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CT인 경우가 CC 또는 TT인 경우보다 한우 마블링 등급이 더 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법.
(a) 한우의 게놈 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계로부터 추출한 게놈 DNA를 주형으로, 서열번호 2 및 3의 프라이머 세트를 이용하여 주형 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및
(c) 상기 증폭된 결과를 분석하여, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어나고, 서열번호 1의 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CT인 경우를, 서열번호 1의 258번째 염기서열에서 서열번호 4로 표시되는 폴리뉴클레오티드의 삽입이 일어나지 않고, 73번째 염기서열의 대립유전자형이 CC 또는 TT인 경우보다 한우 마블링 등급이 더 우수한 것으로 판단하는 한우 마블링 예측 방법.