KR101721170B1

KR101721170B1 - 3-아미노카바졸 화합물, 이를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 제조 방법

Info

Publication number: KR101721170B1
Application number: KR1020107025951A
Authority: KR
Inventors: 마리아 알레산드라 알리시; 니콜라 카졸라; 이사벨라 콜레타; 파트리치아 드라고네; 구이도 푸로티; 바바라 가로팔로; 안젤로 구글리엘모티; 죠르지나 만가노; 카테리나 마우게리
Original assignee: 아지엔드 키미쉐 리유나이트 안젤리니 프란체스코 에이.씨.알.에이.에프. 에스.피.에이
Priority date: 2008-05-14
Filing date: 2009-05-11
Publication date: 2017-03-29
Also published as: EP2282994B1; JP5551684B2; HK1148272A1; AU2009248177A1; US9249097B2; AR071788A1; CA2721706C; JP2011520829A; IL208832A; DK2282994T3; US10005730B2; WO2009138376A1; US8637682B2; MX2010012445A; US20140107174A1; EA201071298A1; EP2119705A1; CA2721706A1; US20110060025A1; US20160102056A1

Abstract

본 발명은 신규한 3-아미노카바졸 화합물, 이를 포함하는 약학적 조성물, 이를 제조하는 방법, 및 염증 반응, 통증, 열, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증과 같은 프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 생산과 관련된 장애의 치료에 효과적인 약물의 생산을 위한 이런 화합물들의 용도에 관한 것이다.

Description

3-아미노카바졸 화합물, 이를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 제조 방법{3-Aminocarbazole Compound, Pharmaceutical Composition Containing It and Preparation Method Therefor}

더욱 구체적으로, 본 발명은 염증 반응, 통증, 열, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증과 같은 프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 생산과 관련된 장애를 치료 또는 예방하는데 효과적인 3-아미노카바졸의 신규한 벤조일 유도체에 관한 것이다.

프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 가치는 아라키돈산으로부터 신진대사적으로 생산된 다른 프로스타노이드와 함께 생물제어제로서 그리고 염증 매개제로서의 역할을 한다는 것으로부터 발생한다.

프로스타노이드는 프로스타글란딘, 트롬복세인 및 프로스타사이클린을 포함하는 화합물들의 한 종류이다. 프로스타노이드는 이들의 방출 위치에 인접한 세포들에 대한 국소 호르몬으로 작용하는 지질 매개체들이다. 프로스타노이드는 사이클로옥시나아제-활성화 효소 산화에 의해 아라키돈산으로부터 주로 생산된다. 사이클로옥시나아제(프로스타글란딘 G/H 합성)는 아라키돈산으로부터 PGG₂ 및 PGH₂의 연속 형성을 촉매화한다. 그런 후에 PGH₂는 특정 효소들에 의해 여러 프로스타노이드로 변환된다. 프로스타글란딘 D₂(PGD₂), 프로스타글란딘 E₂(PGE₂), 프로스타글란딘 F_2α(PGF₂ _α), 프로스타글란딘 I₂(PGI₂) 및 트롬복세인 A₂(TXA₂)이 이런 방식으로 형성된다.

정액을 제외하고, 프로스타노이드는 축적되지 않는다. 여러 자극(염증 물질, 면역 물질, 호르몬, 자외선, 종양 물질 및 기계적 교반)의 결과로, 프로스타노이드가 합성되고 세포 외 공간으로 방출되고, 세포 외 공간으로부터 혈장, 소변 및 다른 생물학적 유체 속으로 통과한다.

프로스타노이드는 기관의 기능의 방어 메커니즘과 신체의 완결한 상태에 중요한 역할을 한다. 이것은 위장관에서 세포보호 기능, 신장 기능과 모세혈관 순환의 제어, 혈소판 응집 및 혈액 응고의 제어, 면역세포들의 분화와 상처 회복에 대한 관여, 뼈 신진대사와 배란에 의해 입증된다.

특히, 혈관 긴장을 유지하고 내피 수준에서 혈전색전증과 죽상동맥경화증을 예방하는데 필수적인 PGI₂의 혈관보호 작용 및 PPARγ(퍼옥시좀 증식제-활성화 수용체-감마) 핵 수용체(Inoue et al., 2000, "Feedback control of cyclooxygenase-2 expression through PPARgamma" J. Biol. Chem. 2000, 275(36): 28028-28032)의 활성화에 의해 항 염증 효과를 나타낼 수 있는 이의 대사 산물이 15d-PGJ₂인 PGD₂의 항 염증 및 항 증식 작용이 강조되어야 한다.

따라서 프로스타노이드는 생물제어제이나, 염증 및 다른 병인들의 중요한 매개체이다.

특히, PGE₂는 염증 부위에 풍부하고 부종, 홍반 형성, 염증 통증, 관절 염증 및 열과 같은 급성 및 만성 염증의 여러 병적 태양에 대한 원인이다. 사실상, PGE₂는 강력한 전염증(pro-inflammatory) 물질 및 통증유발물질이다. 항-PGE₂ 항체들은 항염증 활성을 가지며 PGE₂ 수용체가 부족한 동물들은 염증성 자극에 감소된 반응을 나타내고 (Portanova et al., "Selective neutralization of prostaglandin E2 blocks inflammation, hyperalgesia, and interleukin 6 production in vivo", J. Exp. Med. 1996, 184(3): 883; Ueno et al., "Major roles of prostanoid receptors IP and EP(3) in endotoxin-induced enhancement of pain perception" Biochem. Pharmacol. 2001 , 62(2): 157-160) 발열성 자극에 대해 발열 반응을 보이지 않는다(Ushikubi et al., "Impaired febrile response in mice lacking the prostaglandin E receptor subtype EP3" Nature 1998, 395:281 -284).

사이클로옥시제나아제 1 및 2에 대한 이들의 억제 작용 때문에(FitzGerald and Patrono, 2001) 현재 사용되는 비-스테로이드 항-염증(NSAIDs) 약물과 선택성 COX-2 약물은 에이코사노이드(PGE₂, PGD₂, PGF₂ _α, PGI₂ 및 TXA₂)의 생산의 비-선택적 억제에 의해 염증과 관련된 증상들을 감소시킨다.

특히 현재 구입할 수 있는 선택성 COX-2 약물은 통상적인 비-스테로이드 항-염증(NSAIDs) 약물과 비교해서 감소된 위장 독성을 가진다. 그러나, 이런 선택성 COX-2 약물은 혈관 프로스타사이클린(주로 COX-2로부터 생산된 PGI₂)의 생산을 감소시켜, 혈전 유발 및 억제 에이코사노이드(eicosanoids) 사이의 정상적인 평형을 혈전 유발 에이코사노이드(주로 COX-1으로부터 생산된 TXA₂)에 유리하게 변형시켜, 혈전성-심장혈관사고의 위험을 증가시킨다(S. Malhotra, MD, DM; N. Shafiq, MD; P. Pandhi, MD, Medscape General Medicine 6(1), 2004; D. Mukherjee and E.J. Topol, Cardiovsacular risk and COX-2 inhibitors, Arthritis Res. Ther. 2003, 5:8-11-2002).

여러 3-아미노카바졸 화합물들이 인간 Y5 수용체에 선택적으로 결합하고 이이 활성을 변형시키는 이들의 능력에 대해 연구되고 있다. 이 능력이, 예를 들어, 비만, 신경성 거식증(bulimia nervosa), 신경성식욕부진증(anorexia nervosa), 수면장애, 모르핀 의존성과 간질 발작(epileptic attack)과 같은 식욕 및 신진대사 이상의 치료에 이들이 효과적이게 한다(WO 01/07409A1, WO 02/051806, WO 02/096902 및 US 6 399 631).

특허출원 WO 2006/122 680은 프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 생산과 관련된 장애를 치료하기 위한 여러 3-아미노카바졸 화합물들의 용도를 기술한다. 또한, 특허출원 WO 2007/014 687은 여러 신규한 3-아미노카바졸 화합물들 및 프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 생산과 관련된 장애를 치료하기 위한 여러 3-아미노카바졸 화합물들의 용도를 기술한다.

프로스타글란딘 E₂(PGE₂)의 생산을 선택적으로 억제할 수 있는 것 이외에, 특정 신규한 3-아미노카바졸 화합물들은 놀랍게도 개선된 생체이용가능성과 약동학적 특성을 보여주었다는 것을 놀랍게 발견하였다.

이런 화합물들은 PGE₂의 생산을 감소시킬 수 있어서 PGE₂가 매개체로 작용하는, 예를 들어, 염증 반응, 통증, 열, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증과 같은 모든 병적 이상들에 효과가 있다.

또한, 이런 화합물들은 높은 신진대사 안정성, 높은 생체 외 흡수성 및 높은 생체이용가능성을 놀랍게도 보여주었다.

이런 염증 반응의 전형적인 예들은 부종, 홍반, 관절 염증, 류마티스 관절염 및 관절증이다.

이런 종양의 전형적인 예들은 직장암과 폐암 및 선암종이다.

본 발명의 화합물들은 PGE₂의합성을 선택적으로 억제한다. 이런 선택성은 염증, 통증 및 열의 강력한 매개체를 억제하는 장점을 가지며, 동시에 PGF₂ _α, TXA₂, PGI₂ 및 PGD₂와 같은 아라키돈산 케스케이드에서 동시에 생산되는 다른 프로스타노이드의 생산을 변하게 하지 않는다. 다른 프로스타노이드의 전형적인 활성들인 기관 기능 및 신체의 완결성의 모든 방어 메커니즘은 따라서 영향을 받지 않는다.

통상적인 비-스테로이드 항-염증 약물들과 유사하게, 본 발명의 화합물들은 항-염증, 해열 및 진통 특성을 가지며, 따라서, 염증, 통증, 열, 류마티스성 관절염 및 관절증과 같은 이상들에 효과가 있다. 이것 이외에, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증들에서 PGE₂의 관여가 문헌에 공지되어 있기 때문에, 본 발명의 화합물들은 이런 이상들의 예방과 치료에 사용된다.

이런 화합물들은 NSAIDs와 선택성 COX-2 약물과 비교할 때, 사이클로옥시제나아제를 억제함으로써, 프로스타노이들을 구별하지 못하는 부작용이 거의 없어서 유리하다.

특히, 이런 화합물들은 염증 반응의 치료와 예방 모두에 효과적이다.

특히, 본 발명에 따른 유효한 화합물들은 감소된 위장, 신장 및 혈관 독성을 가진다.

첫 번째 태양에서, 본 발명은 아래 화학식(I)을 가진 3-아미노카바졸 화합물:

(여기서

R1은 할로겐 원자, 메틸기 또는 트라이할로메틸기, 나이트로기, 사이아노기 또는 트라이플레이트기이고,

R2는 1개 내지 8개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 하이드록시알킬기 또는 1개 내지 8개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 카본일알킬기이다)

또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 다형체 결정 형태, 이의 입체이성질체 또는 이의 거울상이성질체에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 R1이 불소 또는 염소 원자 또는 트라이플루오로메틸 또는 트라이클로로메틸기이고 R2가 1개 내지 6개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 하이드록시알킬기 또는 1개 내지 4개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 카본일알킬기인 화학식(I)의 3-아미노카바졸 화합물들에 관한 것이다.

본 발명의 목적을 위해서, "하이드록시알킬"이란 용어는 하나 이상의 탄소 원자에 결합된 1개 내지 3개 하이드록시기(-OH)를 포함하는 알킬기를 의미하고, "카본일알킬"이란 용어는 하나 이상의 탄소 원자에 결합된 1개 내지 3개 옥시기(=O)를 포함하는 알킬기를 의미한다.

바람직한 태양에 따라, 본 발명은 R1 및 R2가 아래 표 1에 제공된 의미를 갖는 화학식(I)의 3-아미노카바졸 화합물들에 관한 것이다.

화합물	R1	R2
1	CF₃	CH₂CH₂OH
2	CF₃	CH₂C(CH₃)₂OH
3	CF₃	CH₂CH₂C(CH₃)₂OH
4	CF₃	CH₂COCH₃
5	Cl	CH₂CH₂OH
6	Cl	CH₂CH₂C(CH₃)₂OH

이미 기술된 화학식(I)은 R1 이외에, 페닐기가, 예를 들어, 할로겐 원자, 1개 내지 3개 탄소 원자를 포함하는 알킬기, 트라이플루오로메틸기, 나이트로기, 트라이플레이트기(CF₃SO₃ _-), 1개 내지 3개 탄소 원자를 포함하는 알킬카복시기(-(CH₂)nCOOH), 아마이드기(-CONH₂), 메틸설폰일기(-SO₂CH₃), N-메틸설폰아마이드 -SO₂NHCH₃ 또는 메테인설폰아마이드기 NHSO₂CH₃와 같은 하나 이상의 치환기를 가진 화합물들을 포함한다.

당업자에게 공지된 대로, 화학식(I)의 화합물들의 약학적으로 허용가능한 염들은 염기-첨가 염들일 수 있다. 적절한 약학적으로 허용가능한 염기들의 예들은 알칼리 금속 및 Na⁺, K⁺, Mg⁺⁺, Ca⁺⁺와 같은 알칼리토금속 및 트로메타민, 콜린 및 리신과 같은 유기 염기이다.

본 발명에 따른 화학식(I)의 화합물들은 하나 이상의 결정 구조 또는 형태를 가질 수 있거나 비결정 형태일 수 있다. 이런 특징을 가진 화합물들은 다형체로 통상적으로 불린다. 이런 화합물의 다른 다형체들은 다른 화학적, 물리적 및 분광 특성을 나타낼 수 있다.

또한, 특정 치환기들의 경우, 본 발명에 따른 화학식(I)의 화합물들은 하나 이상의 비대칭 탄소를 가질 수 있고 따라서 입체이성질체와 거울상이성질체의 형태일 수 있다.

따라서, 본 발명의 화합물들은 청구항에 기술된 화학식(I)로 나타낸 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 다형체 결정 형태, 입체이성질체 및 거울상이성질체를 포함한다.

두 번째 태양에서, 본 발명은 상기한 일반식(I)을 가진 3-아미노카바졸 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 치료적 유효량과 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 불활성 부형제를 함께 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 본 발명의 약학적 조성물들은 적절한 제형으로 제조된다.

적절한 제형의 예들은 정제, 캡슐, 코팅된 정제, 과립, 경구 투여용 용액 및 시럽; 국부 투여용 크림, 연고 및 약용 플라스터; 직장 투여용 좌약 및 주사 투여용 살균 용액, 에어로졸 또는 안구용 투여이다.

유익하게는 이런 제형은 상기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 시간에 따른 제어된 배출을 할 수 있는 방식으로 제제화된다. 구체적으로, 치료의 형태에 따라, 필요한 배출 시간은 매우 짧아지거나, 보통이거나 연장될 수 있다.

상기 제형은 방부제, 안정제, 계면활성제, 버퍼, 삼투압 조절 염, 유화제, 감미료, 착색제, 향신료 등과 같은 다른 통상적인 성분들을 포함할 수 있다.

또한, 구체적인 치료가 필요할 때, 본 발명의 약학적 조성물은 동시에 투여하는 것이 효과적인 다른 약리학적 활성 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 화학식(I)의 화합물의 프로드럭을 포함할 수 있어서 유리하다. 화학식(I)의 화합물의 프로드럭은 생체에 투여될 때 화학식(I)의 화합물로 신진대사되는 실질적으로 불활성 형태의 물질이다. 당업자에게 공지된 대로, 화학식(I)의 화합물들의 프로드럭은 R2의 하이드록시기를 모노카복실산, 바이카복실산, 지방산, 아미노산, (알킬)인산 또는 (알킬)티오인산과 같은 산과 반응시켜 얻은 에스터 유도체들일 수 있다.

적절한 프로드럭의 예들은 아세틸 에스터, 프로피온일 에스터, 숙신일 에스터, 스테아레이트 에스터, 팔미테이트 에스터, 글리신 에스터, 루신 에스터, 리신 에스터, 포스페이트 에스터, 메틸프로페이트 에스터, 메틸티오포스페이트 에스터 및 포스포네이트 에스터이다. 적절한 프로드럭의 유용한 예들은, 예를 들어, Stella V.J. et al, "Prodrug strategies to overcome poor water solubility", Advance Drug Delivery Reviews 59 (2007) 677-694에 기술된다. 본 발명의 조성물은 또한 청구항에 기술된 화학식(I)로 나타낸 화합물의 프로드럭의 약학적으로 허용가능한 염, 다형체 결정 형태, 입체이성질체 및 거울상이성질체를 포함한다.

약학적 조성물에서 본 발명의 화합물의 양은 치료될 질환의 형태, 질환의 심각성, 환자의 체중, 제형, 선택된 투여 경로, 일일 투여 횟수 및 선택된 화합물의 효능과 같은 공지된 인자들의 함수로서 넓은 범위에서 변할 수 있다. 그러나, 최적의 양은 당업자에 의해 보통의 방식으로 쉽게 결정될 수 있다.

통상적으로, 약학적 조성물에서 본 발명의 화합물의 양은 0.0001 내지 100mg/kg/day 및 더욱 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg/day의 투여 레벨을 확보하기 위한 것이다.

본 발명의 약학적 조성물의 제형들은 혼합, 과립화, 압축, 용해, 살균 등과 같이 약제사에게 주지된 기술들에 따라 제조될 수 있다.

세 번째 태양에서, 본 발명은 상기 화학식(I)을 가진 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 다형체 결정 형태, 이의 입체이성질체 또는 이의 거울상이성질체의 치료적 유효량을 필요한 사람에게 투여하는 것을 포함하여 포유류들의 염증 반응, 통증, 열, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

바람직하게는, 염증 반응은 부종, 홍반, 관절 염증, 류마티스 관절염 및 관절증을 포함하는 그룹으로부터 선택되고 종양은 직장암 또는 폐암 및 선암종을 포함하는 그룹으로부터 선택된다.

상기 화학식(I)을 가진 3-아미노카바졸들은, 예를 들어, 산 또는 이의 반응 유도체를 선택된 아민과 반응시키는 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다(특허출원 WO 02/096902 A1 , WO 02/051806, J. Med. Chem. 2002 vol. 45, pp. 3509-3523). 반응 유도체의 전형적인 예들은 아실 할로겐화물, 무수물 또는 에스터이다.

네 번째 태양에서, 본 발명은 상기 화학식(I)을 가진 3-아미노카바졸을 제조하기 위한 방법에 관한 것으로, 다음 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다:

화학식(I)의 3-아미노카바졸 화합물을 얻기 위해서,

(R1 및 R2는 상기한 의미를 가진다),

a) 화학식(II)의 아민

(R2는 상기한 의미를 가진다)을

화학식(III)의 화합물

(R1은 상기한 의미를 가지며, Z는 Cl, Br, OH, OR 및 OC(O)R(R은 1개 내지 6개 탄소 원자를 가진 직선형 또는 가지형 알킬)을 포함하는 그룹으로부터 선택된다)과 반응시키는 단계, 및

b) 이렇게 얻은 화학식(I)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 다형체 결정 형태, 입체이성질체 또는 거울상이성질체를 선택적으로 형성하는 단계.

통상적으로, 단계 (a)는 0.5 내지 24 시간의 시간 동안 0 내지 140℃의 온도에서 적절한 희석제의 존재하에서 수행된다. 바람직하게는, 반응 온도는 15 내지 40℃이다. 유익하게는, 반응 시간은 2 내지 18시간이다.

바람직하게는, 희석제는 비 양성자성, 극성 또는 비극성이다. 더욱 더 바람직하게는, 희석제는 극성 비 양성자성 희석제이다. 적절한 극성 비 양성자성 희석제의 예들은 다이메틸포름아마이드와 다이클로로메테인이다.

Z가 Cl 또는 Br인 실시예에서, 반응은 적절한 유기산 또는 무기산 수용체의 존재하에서 수행되는 것이 유익하다. 적절한 유기 수용체의 예들은 다이아이소프로필에틸렌다이아민, 트라이에틸렌아민, 피리딘 및 다이메틸아미노피리딘이다. 적절한 무기 수용체의 예들은 알칼리 금속 탄산염 또는 중탄산염이다.

Z가 OH인 실시예에서, 반응은 적절한 결합제, 예를 들어, (폴리스티렌 수지상에 지지된) 다이사이클로헥실카보다이이미드 또는 카본일다이아미다졸의 존재하에서 수행되는 것이 바람직하다.

다음 실시예들은 본 발명을 제한하지 않고 더 상세하게 본 발명을 설명하기 위해 제공된다.

본 발명의 내용 중에 포함되어 있습니다.

실시예 1

화합물 1의 제조

R1 = CF₃, R2 = CH₂CH₂OH

a) 2-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)에탄올

찬 아세트산(374ml) 속 2-(9H-카바졸-9-일)에탄올(25g; 0.12mol)의 용액에 찬 아세트산(20ml) 속에 질산(6.8ml; 0.17mol)을 포함하는 용액을 30분 동안 교반하면서 적하하였다. 첨가 완료 5분 후, 녹색 침전물을 분리하였다. 반응 혼합물을 H₂O와 얼음(1L) 속에 천천히 붓고 1시간 동안 교반하고, 여과하고 마지막으로 H₂O로 세척하였다. 분리한 고체를 먼저 H₂O(500ml)에 흡수시킨 후 10% 탄산나트륨 용액으로 pH 7을 얻었고 마지막으로 여과하였다. 얻은 고체를 아세톤/무수 에탄올(1:1)의 용액으로 결정화하여 20g의 2-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)에탄올을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ9.16 (d, J = 2.34 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 7.75 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 2.34, 9.21 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 9.06 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.33 Hz, 1H), 7.57 (ddd, J = 1.24, 7.13, 8.29 Hz, 1H), 7.33 (ddd, J = 0.95, 7.13, 7.86 Hz, 1H), 4.89 (t, J = 5.90 Hz, 1H), 4.54 (t, J = 5.41 Hz, 2H), 3.82 (q, J = 5.41 Hz, 2H).

b) 2-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)에탄올 염산염

이전 단계 a)에서 기술한 대로 얻은 생성물(10g; 0.04mol)을 테트라하이드로퓨란(550ml)에 용해하였다. 염화주석 이수화물(87g; 0.4mol)을 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 환류하였다.

반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 용매를 감압하에서 제거하였다. 잔류물을 H₂O과 다이클로로메테인에 흡수시키고 격렬히 교반하였다. pH를 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 7.5로 만들고, 혼합물을 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고 여과물을 분별깔때기로 운반하였다. 유기상을 분리하고 Na₂SO₄ 위에서 건조하였다. 용매를 감압하에서 증발시켜 제거하였고 이렇게 얻은 잔류물(9g)을 에탄올에 용해하고 에탄올성 5M 염화수소 용액을 첨가하여 상응하는 염산염으로 변환시켰다. 침전된 고체를 여과하여 2-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)에탄올 염산염(9g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.41 (broad s, 3H), 8.17 (d, J = 7.76 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.75 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 7.38-7.56 (m, 2H), 7.23 (t, J = 7.27 Hz, 1H), 4.70 (broad s, 1H), 4.47 (t, J = 5.53 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.45 Hz, 2H).

c) N-[9-(2-하이드록시에틸)-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드

이전 단계 b)에 기술된 대로 얻은 생성물(26g; 0.1mol)을 다이클로로메테인(300ml)에 현탁하였다. 트라이에틸아민(28ml; 0.2mol)과 2-트라이플루오로메틸벤조일 클로라이드(15.6ml; 0.11mol)를 용액에 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다.

용매를 감압하에서 증발시켰고 잔류물을 2N NaOH 용액(200ml)에 흡수시켰고 결과로 얻은 용액을 2시간 동안 환류시켰다. 이렇게 얻은 현탁액을 물에 붓고 생성물을 여과하고, 건조하고 아이소프로필 에터/아이소프로판올 혼합물(1:1)로 결정화하였다.

이렇게 N-[9-(2-하이드록시에틸)-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드(24g)를 얻었다.

m.p.: 176-177℃

C₂₂H₁₇F₃N₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 66.14 4.06 6.85

계산 % 66.33 4.30 7.03

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.52 (s, 1H), 8.50 (d, J = 1.75 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.31 Hz, 1H), 7.54-7.93 (m, 7H), 7.44 (t, J = 7.02 Hz, 1 H), 7.18 (t, J = 7.45 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 5.45 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.70 Hz, 2H), 3.79 (q, J = 5.75 Hz, 2H).

실시예 2

화합물 2의 제조

R1 = CF₃, R2 = CH₂C(CH₃)₂OH

a) 1-(9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올

DMSO(300ml) 속에 카바졸(20g; 0.12mol)을 포함하는 용액에 50% 수산화나트륨 용액(300ml), 벤질트라이메틸암모늄 클로라이드(5.5g; 0.024mol)를 첨가하고, 2-클로로-2-메틸프로판-2-올(39.1g; 0.36mol)을 적하하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다.

혼합물을 H₂O와 얼음(3L) 속에 붓고, 1시간 동안 교반하고 여과하였고 얻은 고체를 헥세인/에틸 아세테이트 혼합물(9:1)로 결정화하여 1-(9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올(15g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ8.07-8.15 (m, 2H), 7.68 (d, J = 8.33 Hz, 2H), 7.40 (ddd, J = 1.24, 7.13, 8.29 Hz, 2H), 7.13-7.20 (m, 2H), 4.64 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 1.21 (s, 6H).

b) 1-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올

찬 아세트산(400ml) 속 이전 단계 a)에서 기술된 대로 얻은 생성물(21g; 0.088mol)의 용액에 30분 동안 찬 아세트산(15ml; 0.263mol) 속에 질산(5ml; 0.123mol)을 포함하는 용액을 30분 동안 격렬히 교반하면서 적하하여 첨가하였다. 첨가 완료 5분 후, 녹색 침전물을 분리하였다. 반응 혼합물을 H₂O와 얼음(1L) 속에 천천히 붓고 1시간 동안 교반하고, 여과하고 마지막으로 H₂O로 세척하였다. 분리한 고체를 먼저 H₂O(500ml)에 흡수시킨 후 pH 7을 얻었을 때까지 10% 탄산나트륨 용액에 흡수시키고 마지막으로 여과하였다.

얻은 고체를 에틸 아세테이트/에탄올 혼합물(8:2)의 용액으로 결정화하여 1-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올(19g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ9.15 (d, J = 2.05 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 7.31 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 2.48, 9.21 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.06 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.48 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 1.17, 7.16, 8.33 Hz, 1H), 7.31 (td, J = 0.88, 7.60 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.37 (s, 2H), 1.21 (s, 6H).

c) 1-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올 염산염

이전 단계 b)에 기술된 대로 얻은 생성물(7.9g;0.028mol)을 테트라하이드로퓨란(350ml)에 용해하였다. 그런 후에 염화주석 이수화물(62.8g; 0.28mol)을 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 환류하였다.

반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 용매를 감압하에서 제거하였다. 잔류물을 H₂O와 다이클로로메테인에 흡수시키고, 격렬하게 교반하였다. pH는 포화 중탄산나트륨을 첨가하여 7.5로 만들고 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 분별깔대기로 운반하였다. 유기상을 분리하고 Na₂SO₄ 위에서 건조하였다. 용매를 감압하에서 증발시켜 제거하였고 이렇게 얻은 잔류물(9g)을 에탄올에 용해하고 에탄올성 5M 염화수소 용액을 첨가하여 상응하는 염산염으로 변환시켰다. 얻은 고체를 아이소프로판올/물 혼합물(8:2)로 결정화하여 1-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)-2-메틸프로판-2-올 염산염(6g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.32 (broad s, 3H), 8.16 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 2.31 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.92 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J = 0.99, 7.10, 8.42 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 2.15, 8.75 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.43 Hz, 1H), 4.70 (broad s, 1H), 4.30 (s, 2H), 1.20 (s, 6H).

d) N-[9-(2-하이드록시-2-메틸프로필]-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드

이전 단계 c)에 기술된 대로 얻은 생성물(3.3g; 0.011mol)을 다이클로로메테인(30ml)에 현탁하였다. 트라이에틸아민(3ml; 0.022mol)과 2-트라이플루오로메틸벤조일 클로라이드(1.7ml; 0.012mol)를 용액에 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다.

용매를 감압하에서 증발시켰고 잔류물을 2N NaOH 용액(20ml)에 흡수시켰고 결과로 얻은 용액을 2시간 동안 환류시켰다. 이렇게 얻은 현탁액을 물에 붓고 생성물을 여과하고, 건조하고 아이소프로필 에터/아이소프로판올 혼합물(1:1)로 결정화하였다.

이렇게 N-[9-(2-하이드록시-2-메틸프로필]-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드(2.7g)을 얻었다.

m.p.: 179-181℃

C₂₄H₂₁F₃N₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 67.51 4.82 6.52

계산 % 67.60 4.96 6.57

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.50 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.93 Hz, 1H), 7.56-7.92 (m, 7H), 7.42 (t, J = 7.76 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 7.43 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 1.21 (s, 6H).

실시예 3

화합물 3의 제조

R1 = CF₃, R2 = CH₂CH₂C(CH₃)₂OH

a) 에틸 3-(9H-카바졸-9일)프로파노에이트

DMF(130ml)속에 카바졸(20g; 0.12mol)을 포함하는 용액에 수소화나트륨(50% 현탁액)(6.7g; 0.14mol)을 조금씩 첨가하고; 이렇게 얻은 현탁액을 30분 동안 실온에서 교반한 후 60℃로 가열하였다. DMF(20ml) 속에 에틸 3-브로모프로파노에이트(17.9ml; 0.14mol)를 포함하는 용액을 적하하여 첨가하고 혼합물을 16시간 동안 교반하였다.

혼합물을 H₂O(0.5L)에 붓고 여과하였다. 얻은 고체를 용출액으로 헥세인/에틸 아세테이트 혼합물(8:2)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 16g의 에틸 3-(9H-카바졸-9-일)프로파노에이트를 얻었고, 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

b) 4-(9H-카바졸-9-일)-2-메틸뷰탄-2-올

테트라하이드로퓨란(200ml) 속 이전 단계 b)에서 얻은 생성물(15.2g; 0.057mol)의 용액에 다이에틸 에터(57ml; 0.171mol) 속 요오드화 메틸마그네슘의 3M 용액을 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 1M NH₄Cl 용액(500ml)을 혼합물에 첨가하였다. 결과로 얻은 혼합물을 분별깔때기에 옮기고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄ 위에서 건조하고 용매를 감압하에서 증발시켰다. 얻은 잔류물을 헥세인/에틸 아세테이트(8:2)로 결정화하여 4-(9H-카바졸-9-일)-2-메틸뷰탄-2-올(9g)을 얻었고, 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

c) 2-메틸-4-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)뷰탄-2-올

이전 단계 b)에서 얻은 생성물(7.2g; 0.028mol)을 실시예 1a)에서 기술된 것과 유사한 방식으로 작업하여 반응시켰다. 얻은 생성물을 에틸 아세테이트로 결정화하여 2-메틸-4-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)뷰탄-2-올(6g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ9.17 (d, J = 2.34 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 2.34, 9.35 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 9.35 Hz, 1H), 7.66-7.71 (m, 1H), 7.56-7.64 (m, 1H), 7.31 -7.38 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.48-4.58 (m, 2H), 1.79-1.89 (m, 2H), 1.24 (s, 6H).

d) 4-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)-2-메틸뷰탄-2-올 염산염

95°에탄올(80ml) 속 이전 단계 c)에서 얻은 생성물(5.9g; 0.020mol)의 현탁액에 10% Pd/C(0.5g; 0.0005mol)을 첨가하고 혼합물을 4시간 동안 Parr 수소발생기(30psi)에서 수소발생시켜 수소화하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 용액을 감압하에서 증발시키고 얻은 생성물을 에틸 아세테이트에서 용해하고 에탄올성 5M 염화수소 용액을 첨가하여 상응하는 염산염으로 변환시켰다. 이렇게 얻은 고체를 아이소프로필 에터/아이소프로판올 혼합물(1:1)로 결정화하여 4-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)-2-메틸뷰탄-2-올 염산염(5.5g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.34 (broad s, 3H), 8.19 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.92 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.20 Hz, 1H), 7.44-7.58 (m, 2H), 7.25 (t, J = 6.94 Hz, 1H), 4.08- 4.83 (m, 3H), 1.73-1.88 (m, 2H), 1.23 (s, 6H).

e) N-[9-(3-하이드록시-3-메틸뷰틸)-9H-카바졸-3-일]-2-트라이플루오로메틸-벤즈아마이드

이전 단계 d)에 기술된 대로 얻은 생성물(3.9g; 0.013mol)을 실시예 1c)에 기술된 것과 유사한 방식으로 작업하여 반응시켰다.

얻은 고체를 에탄올로 결정화하여 N-[9-(3-하이드록시-3-메틸뷰틸)-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드(2.3g)을 얻었다.

m.p.: 188-189℃

C₂₅H₂₃F₃N₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 67.75 5.31 6.23

계산 % 68.17 5.26 6.36

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) 10.53 (s, 1H), 8.52 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.68-7.90 (m, 4H), 7.66 (dd, J = 2.00, 8.70 Hz, 1H), 7.52-7.59 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.10 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 7.43 Hz, 1H), 4.55 (s, 1H), 4.38-4.51 (m, 2H), 1.71 -1.91 (m, 2H), 1.23 (s, 6H).

실시예 4

화합물 4의 제조

R1 = CF₃, R2 = CH₂COCH₃

a) 에틸 9H-카바졸-9-일 아세테이트

DMF(130ml) 속에 카바졸(20g; 0.12mol)을 포함하는 용액에 수소화나트륨(50% 현탁액)(6.9g; 0.14mol)을 조금씩 적하하고; 이렇게 얻은 현탁액을 30분 동안 실온에서 교반한 후 60℃로 가열하였다. DMF(20ml) 속에 에틸 2-브로모아세테이트(24g; 0.14mol)를 포함하는 용액을 적하하여 첨가하고, 결과로 얻은 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H₂O(0.5L)에 붓고 여과하였고, 얻은 고체를 헥세인으로 결정화하여 에틸 9H-카바졸-9-일 아세테이트(20g)를 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ8.15 (d, J = 7.60 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.20 Hz, 2H), 7.43 (td, J = 1.02, 7.67 Hz, 2H), 7.17-7.27 (m, 2H), 5.33 (s, 2H), 4.14 (q, J = 7.02 Hz, 2H), 1.20 (t, J = 7.16 Hz, 3H).

b) 1-(9H-카바졸-9-일)아세톤

테트라하이드로퓨란(130ml) 속 이전 단계 b)에서 얻은 생성물(14.1g; 0.056mol)의 용액에 다이에틸 에터(28ml; 0.084mol) 속 요오드화 메틸마그네슘의 3M 용액을 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 1M NH₄Cl 용액(100ml)을 혼합물에 첨가하였다. 결과로 얻은 혼합물을 분별깔때기에 옮기고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 Na₂SO₄ 위에서 건조하고 용매를 감압하에서 증발시켰다. 얻은 잔류물을 용출액으로 헥세인/에틸 아세테이트 혼합물(95:5)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 1-(9H-카바졸-9-일)아세톤(8g)을 얻었고, 추가 정제 없이 후속 반응에서 사용하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ8.15 (d, J = 7.89 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 8.20 Hz, 2H), 7.41 (ddd, J = 1.10, 7.00, 8.20 Hz, 2H), 7.21 (ddd, J = 1.10, 7.00, 7.89 Hz, 2H), 5.39 (s, 2H), 2.24 (s, 3H).

c) 1-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)아세톤

이전 단계 b)에서 얻은 생성물(5g; 0.022mol)을 실시예 1a)에 기술된 것과 유사한 방식으로 작업하여 반응시켰다. 얻은 잔류물을 용출액으로 8:2 헥세인/에틸 아세테이트 혼합물을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 1-(3-나이트로-9H-카바졸-9-일)아세톤(4.5g)을 얻었고, 추가 정제 없이 후속 반응을 위해 사용하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ9.20 (d, J = 2.34 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 2.34, 9.06 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 9.35 Hz, 1H), 7.60-7.67 (m, 1H), 7.54 (td, J = 1.17, 7.75 Hz, 1H), 7.30-7.39 (m, 1H), 5.57 (s, 2H), 2.32 (s, 3H).

d) 1-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)아세톤 염산염

95°에탄올(80ml) 속 이전 단계 c)에서 얻은 생성물(1.3g; 0.0005mol)의 현탁액에 10% Pd/C(0.5g; 0.0005mol)을 첨가하고 혼합물을 4시간 동안 Parr 수소발생기(30psi)에서 수소발생시켜 수소화하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 용액을 감압하에서 증발시켰다. 얻은 생성물을 에틸 아세테이트에서 용해하고 에탄올성 5M 염화수소 용액을 첨가하여 상응하는 염산염으로 변환시켰다. 침전된 고체를 여과하여 1-(3-아미노-9H-카바졸-9-일)아세톤 염산염(1.1g)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.39 (broad s, 3H), 8.19 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.59 Hz, 1H), 7.52- 7.58 (m, 1H), 7.40-7.52 (m, 2H), 7.25 (ddd, J = 0.99, 6.94, 7.93 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 2.27 (s, 3H).

e) N-[9-(2-옥소프로필)-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드

이전 단계 d)에 기술된 대로 얻은 생성물(1.1g; 0.004mol)을 실시예 1c)에 기술된 것과 유사한 방식으로 작업하여 반응시켰다.

얻은 고체를 아이소프로필 에터/아이소프로판올 혼합물(1:1)로 결정화하여 N-[9-(2-옥소프로필)-9H-카바졸-3-일]-2-(트라이플루오로메틸)벤즈아마이드(1.2g)를 얻었다.

m.p.: 223-226℃

C₂₃H₁₇F₃N₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 67.02 3.91 6.78

계산 % 67.31 4.18 6.83

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.52 (s, 1H), 8.50 (d, J = 1.75 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.66-7.91 (m, 4H), 7.61 (dd, J = 2.05, 8.77 Hz, 1H), 7.36-7.53 (m, 3H), 7.20 (t, J = 6.87 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 2.24 (s, 3H).

실시예 5

화합물 5의 제조

R1 = Cl, R2 = CH₂CH₂OH

a) 2-클로로-N-[9-(2-하이드록시에틸)-9H-카바졸-3-일]벤즈아마이드

실시예 1b)에 기술된 대로 얻은 생성물(6.4g; 0.028mol)을 다이클로로메테인(70ml)에 현탁하였다. 트라이에틸아민(7.9ml; 0.2mol)과 2-클로로벤조일 클로라이드(3.95ml; 0.031mol)를 용액에 첨가하였다. 이렇게 얻은 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다.

용매를 감압하에서 증발시켰고, 잔류물을 2N NaOH 용액(80ml)에 흡수시켰고, 결과로 얻은 용액을 2시간 동안 환류하였다. 이렇게 형성된 현탁액을 물에 붓고 생성물을 여과하고, 건조하고 95°에탄올로 결정화하였다.

이렇게 2-클로로-N-[9-(2-하이드록시에틸)-9H-카바졸-3-일]벤즈아마이드(5.5g)를 얻었다.

m.p.: 168-169℃

C₂₁H₁₇ClN₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 68.83 4.63 7.58

계산 % 69.14 4.70 7.68

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.47 (s, 1H), 8.55 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.27 Hz, 1H), 7.39-7.71 (m, 8H), 7.18 (t, J = 7.43 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 5.45 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.78 Hz, 2H), 3.78 (q, J = 5.83 Hz, 2H).

실시예 6

화합물 6의 제조

R1 = Cl, R2 = CH₂CH₂C(CH₃)₂OH

a) 2-클로로-N-[9-(3-하이드록시-3-메틸부틸)-9H-카바졸-3-일]벤즈아마이드

실시예 3d)에 기술된 대로 얻은 생성물(1.1g; 0.0037mol)을 실시예 1c)에 기술된 것과 유사한 방식으로 작업하여, 2-클로로벤조일 클로라이드(0.52ml; 0.0041mol)과 반응시켰다.

얻은 고체를 에틸 아세테이트로 결정화하여 2-클로로-N-[9-(3-하이드록시-3-메틸부틸)-9H-카바졸-3-일]벤즈아마이드(0.63g)를 얻었다.

m.p.: 120-124℃

C₂₄H₂₃ClN₂O₂에 대한 원소 분석

C H N

수득 % 70.52 5.62 6.71

계산 % 70.84 5.70 6.88

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ10.48 (s, 1H), 8.57 (d, J = 1.98 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.41 -7.73 (m, 8H), 7.19 (t, J = 7.43 Hz, 1H), 4.55 (s, 1H), 4.37-4.51 (m, 2H), 1.73-1.88 (m, 2H), 1.23 (s, 6H).

실시예 7

비교 화합물 A의 제조

비교 화합물 A는 특허출원 WO 2006/122 680의 화합물 1에 해당하며 상기 특허출원에 기술된 대로 제조하였다.

실시예 8

비교 화합물 B의 제조

비교 화합물 B는 특허출원 WO 2007/014 687의 화합물 6에 해당하며 상기 특허출원에 기술된 대로 제조하였다.

실시예 9

비교 화합물 C의 제조

비교 화합물 C는 특허출원 WO 2007/014 687의 화합물 13에 해당하며 상기 특허출원에 기술된 대로 제조하였다.

실시예 10

생체 외 활성의 검사

이 검사는 PGE₂의 생산에 대한 검사 화합물들의 억제 능력과 PGF₂ _α의 생산에 대한 선택성을 평가할 수 있게 한다.

인간 폐 선암 세포주 A549를 사용하였고, 예를 들어, IL-1_β와 같은 전염증성 사이토카인에 의한 자극에 특히 민감하고, 이런 자극에 반응해서, 2개의 프로스타노이트: PGE₂ 및 PGF₂ _α의 생산과 배출에 특히 활성이 있다(Thoren S. Jakobsson P-J, 2000).

세포들을 IL-1_β(1ng/ml)로 자극하고 동시에 37℃의 배양기에서 5% 태아 소 혈청과 L-글루타민(4mM 최종) 및 5%의 CO₂ 농도로 충전된 적절한 배지(DMEM - 듈베코 변형 이글 배지)에서 22시간 동안 검사 화합물로 처리하였다.

배양 후, 생산되어 상청액 속에 배출된 PGE₂ 및 PGF₂ _α의 양은 EIA 키트(Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI. USA 제조 판매)를 사용하여 측정하였다.

사용된 비교 화합물은 10nM 농도의 인도메타신(Sigma-Aldrich)이었고, 동일한 수단으로 PGE₂ 및 PGF₂ _α를 억제하는 비스테로이드성 항-염증 약물이다.

IC₅₀ 값, 즉, 자극되었으나, 동일한 화합물로 처리되지 않은 세포들에 대한 PGE₂ 및 PGF₂ _α의 양의 50%를 억제하는 화합물의 농도로서 표현된 결과들은 표 2에 제공된다. PGF₂ _α의 생체합성에 대한 화합물의 불활성 또는 감소된 활성은 PGE₂의 생산에 대한 선택성을 나타내어 mPGES-1의 선택적 억제를 나타낸다.

화합물	IC₅₀[μM]
화합물	PGE₂	PGF₂ _α
1	2.9	>100
2	2.3	>100
3	1.4	>100
4	5.6	>100
6	0.6	>100
인도메타신	0.005	0.003

실시예 11

생체 내 활성의 검사

검사 화합물을 쥐(Stock　J.L.　et al., J　Clin Inv 2001, 107: 325-331)에서 아세트산 유도-기지개의 모델에서 평가하였다. 이 검사는 염증성 통증의 모델에서 본 발명의 화합물들의 항통각 활성을 평가할 수 있게 한다.

25-30g의 암컷 CD-1 쥐를 검사에 사용하였다. 동물들을 메틸셀룰로오스(MTC)에 현탁된 검사 화합물(0.1-10mg/kg)로 복강내로 치료하였다. 대조군 동물들을 동일한 경로를 통해 부형제 단독(MTC)으로 치료하였다.

치료 30분 후, 염증성 통증을 유발하고 항통각 반응에 대한 검사 화합물의 효과를 확인하기 위해서 동물들에게 아세트산(생리 식염수 속 0.7 v/v, 체중의 16㎕/g)의 복강 주사를 놓았다.

아세트산의 투여 후 즉시 및 이후 20분 동안, 통각 반응의 평가에 대한 변수를 나타내는 기지개(stretches)의 수를 측정하였다.

표 3에 보고된 대로, 본 발명의 화합물은, 복용량-의존 방식으로, MTC 단독으로 치료한 동물들과 비교하여 아세트산의 투여 후 20분 후 기지개의 감소를 유도하였다.

치료	복용량(mg/kg)	기지개의 수	억제 %
부형제	-	48.4±3.66	-
화합물 1	0.1	38.4±3.99	21
	1	31.5±5.72	35
	10	12.8±2.46	74

실시예 12

인간 및 쥐 마이크로솜에서 신진대사 안정성의 검사

이 검사는 쥐와 인간에서 본 발명의 화합물들과 비교 화합물들의 신진대사 안정성을 평가하게 한다.

검사 화합물들은 인간 간 마이크로솜(donor pool, Xenotech) 및 스프라규-달리 쥐(Sprague Dawley rats)(donor pool, Xenotech)의 간 마이크로솜에서 배양하였고 검사 화합물의 비교는 Applied Biosystems 4000 QTrap 질량 분광계를 가진 HPLC/MS/MS를 사용하여 다양한 종들에서 신진대사 안정성을 평가하기 위해 측정하였다.

0과 1μM의 최종 농도에서, 분석될 화합물들은 96웰 판에, 200μL의 최종 부피에서 0.5mg/mL의 최종 농도로 마이크로솜의 풀을 포함하는 현탁액에 놓았다. 검사를 인산염 버퍼(75mM, pH 7.4)와 NADPH 재생 시스템(MgCl₂: 3.3 mM; G6P: 3.3 mM; G6PD: 0.4 U/mL; NADP+: 1.3 mM)으로 표준화하였다. 기준 화합물인 와파린, 프로파놀올 및 테스토스테론(Sigma)을 칵테일로서 배양하고 검사 화합물에 대해 처리하였다. 샘플들을 가습 배양기에서 37℃에서 배양하였다. 0시 및 60분 후, 내부 표준(0.2μM의 메토프롤올과 0.4μM의 다이클로페낙)을 포함하는 아세토나이트릴의 100μL를 첨가하여 반응을 정지시켰다.

샘플들을 분석 전에 원심분리하였다. HPLC/MS/MS 분석을 양성 이온화에서 전자스프레이 이온 소스와 SRM(Single Reaction Mode)을 사용하여 수행하였다. 크로마토그래피 조건은 XDB-C18 컬럼(2.1 x 50mm, Agilent) 및 0.1% 포름산을 포함하는 물속의 5% 내지 91%의 아세토나이트릴의 구배 사용을 포함하고(전체 런타임은 6분이다); 유속은 0.5ml/minute이었다.

검사 화합물들에 대한 피크의 면적을 적분하고 결과들을 분석물 면적/내부 표준(PAR) 면적 비율로 표현하였다. 매 시간마다, 두 샘플을 분석하고 평균값을 계산하였다. 잔존하는 화합물의 값의 백분율은 다음과 같이 계산하였다:

% 신진대사되지 않은 화합물 = 100*(평균 PAR_Tfinal/평균 PAR_T0).

화합물 1 내지 6 에 대한 결과는 표 4에, 비교 화합물 A, B 및 C와 기준 화합물에 대한 결과들과 함께 제공된다. 본 발명의 화합물들은 비교 화합물들에 대해 개선된 신진대사 안정성을 보여주었다.

화합물	쥐	인간
1	58%	81%
2	68%	82%
3	65%	77%
4	58%	7%
5	63%	76%
6	74%	65%
A	0.2%	51%
B	0.4%	55%
C	4.0%	22%
와파린	97%	103%
프로프라놀올	0.4%	66%
테스토스테론	0%	27%

실시예 13

생체 외 흡수의 검사

이 검사는 장벽의 생체 외 모델로서 Caco-2 세포주를 사용하는 본 발명의 화합물들 및 비교 화합물들의 장벽에 의해 흡수된 양을 평가하게 한다. Caco-2 세포들에 대한 흡수 검사는 약물의 생체 내 장 흡수를 예측하고 평가하기 위해 승인된 생체 외 시스템에 해당한다. Caco-2 세포들이 다공성 필터에서 약 21일 동안 배양될 때, 이들은 장관내 상피세포(enterocyte)로 분화할 수 있는 능력을 가진다. 실제로, 이 기간 동안, Caco-2 세포들은 정점 표면에 잘 형성된 "브러시 보더"(brush border)를 가지며 세포들 사이에 "밀착 결합"(tight junctions)를 형성하는 극성 세포 단층을 형성하는 연속적인 형태학적 및 생화학적 변화를 일으켜서, 약물들의 장 흡수의 분석을 위한 적절한 모델에 해당한다.

다음 재료들을 사용하여 검사를 수행하였다:

루시퍼 옐로우(Sigma)

인공체액(Hank's balanced saline solution)(HBSS)(Invitrogen)

방사능활성 참조 표준(radioactive reference standard)(Perkin Elmer)

Caco-2 세포들(ATCC)

Caco-2 MultiScreen^TM 플레이트(Millipore)

Applied Biosystems 4000 QTrap 질량 분광계를 가진 HPLC/MS/MS

내부 표준(internal standard)으로서 0.2μM의 메토트롤올을 포함하는 아세토나이트릴.

검사가 진행중인 화합물들을 HBSS에서 10mM 원료 용액으로부터 10μM의 최종 농도까지 희석하였다. 시스템은 21-28일 동안 배지에 있는 융합성 세포 단층으로 구성되었다. 참조 화합물(루시퍼 옐로우, 아테놀올, 프로프라놀올 및 다이고신)을 품질 대조군으로서 그리고 검사가 진행중인 화합물들과 비교하기 위해 각 검사에 포함시켰다.

각 화합물을 pH 7.4에서, 정점에서부터 아래 측면 부분(A→B)으로 그리고 아래 측면으로부터 정점 부분(B→A)으로 양방향으로 3회 검사하였다.

정해진 시간에 수집한 샘플들을 양성 이온화에서 전자스프레이 이온 소스와 SRM(Single Reaction Mode)을 사용하는 HPLC/MS/MS에 의해 분석하였다. 크로마토그래피 조건은 XDB-C18 컬럼(2.1 x 50mm, Agilent) 및 0.1% 폼산을 포함하는 물속의 5% 내지 91%의 아세토나이트릴의 구배 사용(전체 런타임은 6.5분이다)과 0.5ml/minute의 유속을 포함하였다. 메토프로올을 내부 표준으로 사용하였다.

농도 데이터를 사용하여 겉보기 투과율 값(P_app)을 계산하였고, P_app의 평균 및 표준 편차를 계산하였다.

유속비를 P_app(B→A)/P_app(A→B)으로 계산하였다. 회수율을 다음과 같이 계산하였다:

(수용 분실의 양 + 제공 분실의 양)/적은 양

검사 화합물들의 피크들의 면적을 적분하고 결과들을 분석물 면적/내부 표준(PAR) 면적 비율로 표현하였고 샘플을 제조하는 동안 사용된 희석 인자에 대해 보정하였다. 겉보기 투과율 계수들은 다음 식을 사용하여 계산하였다.

V_A 수용하는 웰의 부피(A→B 검사의 경우 0.25mL, B→A 검사의 경우 0.075mL)

면적 막 표면의 면적(0.11cm²)

얻은 값들을 다음 평가 기준을 기초로 분류하였다.

낮음 P_app < 2 x 10^-6 cm/sec

중간 2 x 10^-6 cm/sec < P_app < 20 x 10^-6 cm/sec

높음 P_app > 20 x 10^-6 cm/sec

화합물 1 내지 6 에 대한 결과는 표 5에, 비교 화합물 A, B 및 C와 기준 화합물에 대한 결과들과 함께 제공된다. 본 발명의 화합물들은 비교 화합물들에 대해 개선된 흡수의 기대치를 보여주었다.

화합물	흡수
1	높음
2	높음
3	높음
4	높음
5	높음
6	높음
A	낮음
B	낮음
C	중간
루시퍼 옐로우	낮음
아테놀올	낮음
프로프라놀올	높음
디고신	낮음

실시예 14

생체 내 생체이용가능성의 검사

이 검사는 본 발명의 화합물들의 생체 내 생체이용가능성을 평가하게 하여, 검사 화합물들의 약동학적 프로파일을 평가하고 비교할 수 있게 한다.

검사들은 카세트 방법, 즉, 경구에 수회 생성물들을 투여하고 동시에 동일한 동물에게 5mg/kg의 복용량을 투여하여 수행하였다. 생성물들을 메틸셀룰로오스(MTC)에 현탁하였다. 처리된 동물들에 자동 샘플링 시스템에 의해 수행된 혈액 샘플들의 연속 수집을 위해 카테테르를 삽입하였다. 생성물들의 혈장 농도는 HPLC/MS/MS에 의해 측정하였다. 시간에 따른 혈장 농도의 프로파일은 속도(t_max 및 C_max)와 종들(AUC)의 관점에서 검사 생성물들의 상대 생체이용가능성을 평가할 수 있게 한다. 마지막 부분에서 곡선의 기울기는 혈장으로부터 화합물들의 제거 속도를 비교 평가할 수 있게 하였고, 속도가 느리면 느릴수록 기울기도 낮았다. 3마리 동물들을 화합물들의 각 조합에 대해 검사하였다. 다른 것들에 비해 더 높은 C_max 및 AUC 및 예상 t_max를 가진 화합물을 선택하였는데, 이는 이 화합물이 우수한 속도의 생체 내 흡수를 보여주었기 때문이다.

사용된 비교 생성물은 화합물 C이었고, 제한된 흡수를 보여준 반면, 본 발명의 화합물 1, 2 및 3은 우수한 생체이용가능성을 보여주었다.

C_max, 즉, 혈장에 도달한 약물의 최대 농도, Tmax, 즉, 혈장에서 최대 약물 농도에 도달하는데 필요한 시간 및 AUC_0-7, 즉, 투여 후 처음 7시간 후 시간에 따른 약물의 혈장 농도의 곡선 아래 면적으로 표현된 결과들은 표 6에 제공된다.

화합물	C_max ng/ml	T_max h	AUC₀ _-7 ng/ml^*h
1	1200	1.5	5754
2	984	4.3	5403
3	457	1.8	2668
C	165	1.7	751

Claims

화학식(I)

(여기서
R1은 할로겐 원자, 메틸기 또는 트라이할로메틸기, 나이트로기, 사이아노기 또는 트라이플레이트기이고,
R2는 1개 내지 8개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 하이드록시알킬기 또는 1개 내지 8개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 카본일알킬기이다)을 갖는 것을 특징으로 하는, 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 입체이성질체, 또는 이의 거울상이성질체.
제 1 항에 있어서,
R1이 불소 또는 염소 원자 또는 트라이플루오로메틸 또는 트라이클로로메틸기이고 R2가 1개 내지 6개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 하이드록시알킬기 또는 1개 내지 4개 탄소 원자를 포함하는 직선형 또는 가지형 카본일알킬기인 것을 특징으로 하는 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 입체이성질체, 또는 이의 거울상이성질체.
제 1 항에 있어서,
R1 및 R2가 아래 표 1에 제공된 의미를 갖는 것을 특징으로 하는 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 입체이성질체, 또는 이의 거울상이성질체.
[표 1]
화학식(I)의 3-아미노카바졸 화합물을 얻기 위해서,

(R1 및 R2는 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 제공된 의미를 가진다),
a) 화학식(II)의 아민

(R2는 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 제공된 의미를 가진다)을
화학식(III)의 화합물

(R1은 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 제공된 의미를 가지며, Z는 Cl, Br, OH, OR 및 OC(O)R(R은 1개 내지 6개 탄소 원자를 가진 직선형 또는 가지형 알킬)을 포함하는 그룹으로부터 선택된다)과 반응시키는 단계, 및
b) 이렇게 얻은 화학식(I)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염, 입체이성질체 또는 거울상이성질체를 선택적으로 형성하는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 입체이성질체, 또는 이의 거울상이성질체의 제조 방법.
염증 반응, 통증, 열, 종양, 알츠하이머 병 및 죽상동맥경화증을 포함하는 그룹으로부터 선택된 장애의 예방 또는 치료를 위한, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 3-아미노카바졸 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 입체이성질체, 또는 이의 거울상이성질체의 치료적 유효량과 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 불활성 부형제를 함께 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 염증 반응은 부종, 홍반, 관절 염증, 류마티스 관절염 및 관절증을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 종양은 직장암과 폐암 및 선암종을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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