JP5551684B2

JP5551684B2 - ３−アミノカルバゾール化合物，それを含む医薬品組成物及びその製造方法

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Publication number: JP5551684B2
Application number: JP2011508882A
Authority: JP
Inventors: アレッサンドラアリシマリア; カッツォーラニコラ; コレッタイザベラ; ドラゴーネパトリッツィア; フルロッティグイド; ガロファロバーバラ; ググリエルモッティアンジェロ; マンガーノジョルジーナ; マウゲリカテリーナ
Original assignee: Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco ACRAF SpA
Current assignee: Angelini Acraf SpA
Priority date: 2008-05-14
Filing date: 2009-05-11
Publication date: 2014-07-16
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Description

本発明は，新規な３−アミノカルバゾール化合物，それを含む医薬品組成物，その製造方法及びプロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の産生に伴う障害，例えば，炎症，疼痛，発熱，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症の治療に有用な薬品の製造のためのかかる化合物の使用に関する。

より具体的には，本発明は，プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の産生に伴う障害，例えば，炎症，疼痛，発熱，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症の治療又は予防に有用な３−アミノカルバゾールの新規なベンゾイル誘導体に関する。

プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の価値は，アラキドン酸から代謝的に産生された他のプロスタノイドと一緒に生体制御剤として、また炎症メディエーターとして果たす役割から生じる。

プロスタノイドは、プロスタグランジン，トロンボキサン及びプロスタサイクリンを含む一群の化合物である。プロスタノイドは，それらの放出サイトに隣接する細胞に対し局所的ホルモンとして作用する脂質メディエーターである。プロスタノイドは主にアラキドン酸からシクロオキシゲナーゼ活性化酵素的酸化によって産生される。シクロオキシゲナーゼ（プロスタグランジンＧ／Ｈ合成酵素）は，アラキドン酸からのＰＧＧ₂及びＰＧＨ₂の連続的な形成を触媒する。その後，ＰＧＨ₂は特定の酵素によって多種のプロスタノイドに転換される。プロスタグランジンＤ₂（ＰＧＤ₂），プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂），プロスタグランジンＦ_2α（ＰＧＦ_2α），プロスタグランジンＩ₂（ＰＧＩ₂）及びトロンボキサンＡ₂（ＴＸＡ₂）をこのようにして形成される。

精液を除いて，プロスタノイドは蓄積されない。種々の刺激（炎症性，免疫性，ホルモン性，紫外光線，抗腫瘍剤及びまた機械的攪拌）に続いて，これらは合成され，細胞外間隙内に放出され，そこから血漿，尿及び他の生体液中へと通過する。

プロスタノイドは，臓器の機能の防御機構において、また身体の統合において重要な役割を果たす。このことは，消化管での細胞保護的な機能，腎機能及び毛細血管循環の調節，血小板凝集及び血液凝固の調節，免疫細胞の分化及び創傷修復における関与，骨代謝及び排卵によって立証される。

特に，血管性緊張を維持し，内皮レベルでの血栓塞栓症及びアテローム硬化症を予防するために不可欠なＰＧＩ₂の血管保護作用，ＰＧＤ₂及びその代謝物１５ｄ−ＰＧＪ₂の抗炎症性及び抗増殖性作用は，ＰＰＡＲγ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ）核内受容体の活性化によって抗炎症性効果を発現可能である（Inoueら，2000，「ＰＰＡＲガンマを通じたシクロオキシゲナーゼ−２発現のフィードバック制御」 J. Biol. Chem. 2000，275（36）: 28028-28032）ことを強調すべきである。

従って、プロスタノイドはバイオレギュレーターであるばかりか，炎症及び他の症状の重要なメディエーターである。

特に，ＰＧＥ₂は，炎症部位に豊富に存在し，急性及び慢性炎症，例えば，浮腫，紅斑症の形成，炎症性疼痛，関節性炎症及び発熱の種々の病理学的な態様に関与する。実際に，ＰＧＥ₂は強力な炎症誘発及び痛覚発生剤である。抗ＰＧＥ₂抗体は抗炎症性活性を有し，ＰＧＥ₂受容体を欠損する動物では炎症性刺激への応答低減（Portanovaら，「プロスタグランジンＥ₂の選択的中和は，炎症，痛感過敏及び生体内でのインターロイキン６産生を遮断する」，J. Exp. Med. 1996，184（3）:883，Uenoら，「疼痛知覚の内毒素誘発亢進におけるプロスタノイド受容体ＩＰ及びＥＰ（３）の主要な役割」 Biochem. Pharmacol. 2001 ，62（2）: 157-160）が見られ，また発熱性刺激に発熱反応しない（Ushikubiら，「プロスタグランジンＥ受容体サブタイプＥＰ３欠損マウスにおける損なわれた熱性応答」 Nature 1998，395:281 -284）。

現在使用中の非ステロイド系抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）及び選択的ＣＯＸ−２薬は，シクロオキシゲナーゼ１及び２への阻止作用の理由で，エイコサノイド（ＰＧＥ₂，ＰＧＤ₂，ＰＧＦ_2α，ＰＧＩ₂及びＴＸＡ₂）産生の非選択的阻止によって炎症関連の症状を低減する（Fitzgerald and Patrono，2001）。

特に，最近上市された選択的ＣＯＸ−２薬は，従来の非ステロイド系抗炎症性薬（ＮＳＡＩＤ）と比較した場合，胃腸毒性を低減する。しかしながら，前記選択的ＣＯＸ−２薬は、血管性プロスタサイクリン（ＣＯＸ−２から主に産生されるＰＧＩ₂）の産生を低減して，血栓形成促進（ＣＯＸ−１から主に産生されるＴＸＡ₂）のために血栓形成促進性及び抗血栓性エイコサノイド間の通常の平衡を変え，血栓性心血管性発作のリスクを増大させる（S. Malhotra，MD，DM; N. Shafiq，MD; P. Pandhi，MD Medscape General Medicine 6(１)，2004; D. Mukherjee and E.J. Topol 「心血管性リスク及びＣＯＸ−２阻止剤」，Arthritis Res. Ther. 2003，5:8-11-2002）。

種々の３−アミノカルバゾール化合物が，ヒトＹ５受容体と選択的に結合し、その活性を調製する能力に関して研究されてきた。この能力は，食欲及び代謝疾患，例えば，肥満症，神経性過食症，神経性食欲不振症，睡眠障害，モルヒネ依存症及びてんかん発作の治療において有用である（国際特許出願公開ＷＯ０１／０７４０９号Ａ１，ＷＯ０２／０５１８０６号，ＷＯ０２／０９６９０２号及び米国特許第６，３９９，６３１号）。

国際特許出願公開ＷＯ２００６／１２２６８０号は，プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の産生に関連する障害の治療のための多数の３−アミノカルバゾール化合物の使用を開示する。加えて，国際特許出願公開ＷＯ２００７／０１４６８７号は多数の新規な３−アミノカルバゾール化合物及びプロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の産生に関連する障害の治療のための使用を開示する。

驚くべきことに，特定の新規な３−アミノカルバゾール化合物は，プロスタグランジンＥ₂（ＰＧＥ₂）の産生を選択的に阻止できるほかに，さらに驚くべきことに，優れた生体利用効率及び薬物動態学的特性を示すことを見出した。

これら化合物はＰＧＥ₂の産生を低減することができ，従ってＰＧＥ₂がメディエーターとして作用する全ての病理学的な疾病，例えば，炎症，疼痛，発熱，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症というにおいて活性である。

加えて，これら化合物は，驚くべきことに，生体内での高い代謝安定性，高い吸収及び高い生体利用効率を示した。

かかる炎症の典型例は，浮腫，紅斑症，関節性炎症，関節リウマチ及び関節症である。

かかる腫瘍の典型例は，結腸直腸性及び肺性の癌腫及び腺癌である。

本発明の化合物は，ＰＧＥ₂の合成を選択的に阻止する。この選択性は，炎症，疼痛及び発熱の強力なメディエーターを阻止する一方，ＰＧＦ_2α，ＴＸＡ₂，ＰＧＩ₂及びＰＧＤ₂のようなアラキドン酸カスケードで同時に生ずる他のプロスタノイドの産生を不変のままにする利点を有する。従って、他のプロスタノイドの活性に特有な臓器の機能化及び身体の整合性の全ての防御機構が不変のままである。

従来の非ステロイド系抗炎症性薬と同様に，本発明の化合物は抗炎症性，解熱性及び鎮痛特性を有し，従って，炎症，疼痛，発熱，関節リウマチ及び関節症などの症状に有効である。加えて，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症におけるＰＧＥ₂の関与が文献で既知のため，本発明の化合物もこれら症状の予防及び治療における用途を有する。有利なことに，これらの化合物は，シクロオキシゲナーゼを阻止することによりプロスタノイド類を識別しないＮＳＡＩＤ及び選択的ＣＯＸ−２薬と比較した場合わずかな副作用を示す。

特に，これらの化合物は炎症の治療及び予防の両方で有用である。

特に，本発明の化合物は，低減した消化器系，腎性及び血管性毒性を示す。

第一の態様において，本発明は，下記一般式（Ｉ）：
（式中のＲ1はハロゲン原子，メチル基又はトリハロメチル基，ニトロ基，シアノ基もしくはトリフレート基であり，
Ｒ2は１〜８個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状ヒドロキシアルキル基，又は１〜８個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状カルボニルアルキル基である）を有する３−アミノカルバゾール化合物，もしくはその薬学的に許容し得る塩，多形結晶，立体異性体又は鏡像異性体に関する。

特に，本発明は、Ｒ1がフッ素もしくは塩素原子又はトリフルオロメチルもしくはトリクロロメチル基であり，Ｒ2が１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状ヒドロキシアルキル基又は１〜４個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状カルボニルアルキル基である一般式（Ｉ）の３−アミノカルバゾール化合物に関する。

本発明の目的において，「ヒドロキシアルキル」という用語は一個以上の炭素原子に結合した１〜３個の水酸基（−ＯＨ）を含むアルキル基を意味し，「カルボニルアルキル」という用語は一個以上の炭素原子に結合した１〜３個のオキシ基（＝Ｏ）を含むアルキル基を意味する。

好適な態様によれば，本発明は，Ｒ1及びＲ2が下記表１：

に示した意味を有する一般式（Ｉ）の３−アミノカルバゾール化合物に関する。

上述した式（Ｉ）は，フェニル基がＲ1のほかに，例えば，ハロゲン原子，１〜３個の炭素原子を有するアルキル基，トリフルオロメチル基，ニトロ基，トリフラート基（ＣＦ₃ＳＯ₃−），１〜３個の炭素原子を有するアルキルカルボキシル基（−（ＣＨ₂）_nＣＯＯＨ），アミド基（−ＣＯＮＨ₂），メチルスルホキシ基（−ＳＯ₂ＣＨ₃），Ｎ−メチルスルホンアミド基−ＳＯ₂ＮＨＣＨ₃又はメタンスルホンアミド基ＮＨＳＯ₂ＣＨ₃などの一つ以上の置換基を含有する化合物を含む。

当業者に既知のように，一般式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩は塩基付加塩とすることができる。適当な薬学的に許容し得る塩基の例は，Ｎａ⁺，Ｋ⁺，Ｍｇ⁺⁺，Ｃａ⁺⁺などのアルカリ金属及びアルカリ土類金属並びにトロメタミン，コリン及びリシンのような有機塩基である。

本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物は，一種を超える結晶構造又は結晶形を有するか，又は非晶質形とすることができる。本特性を有する化合物を普通多形と呼ぶ。本化合物の異なる多形は異なる化学的，物理的及び分光学的特性を示すことができる。

加えて，特定の置換基の場合，本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物は，一個以上の不斉炭素原子を有する場合があり，そのため立体異性体及び鏡像異性体の形でありうる。

従って，本発明の化合物はまた，請求項に記載した式（Ｉ）で表される化合物の薬学的に許容し得る塩，多形結晶形，立体異性体及び鏡像異性体も含む。

第二の態様において，本発明は，上記一般式（Ｉ）を有する３−アミノカルバゾール化合物もしくはその薬学的に許容し得る塩の治療的有効用量を少なくとも一種類の薬学的に許容し得る不活性賦形剤と共に含むことを特徴とする医薬品組成物に関する。

好適には，本発明の医薬品組成物を適当な投薬形態に調製する。

適当な投薬形態の例は，経口投与用の錠剤，カプセル，被覆錠剤，顆粒並びに溶液及びシロップ，局所投与用のクリーム，軟膏及び消毒絆創膏，直腸投与のための座薬及び注射投与又はエアロゾルもしくは点眼投与用の無菌溶液である。

有利なことに，これら投薬形態は，上記一般式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の時間と共に制御された放出を確実にするように処方される。特に、治療法の種類に応じて，所要の放出時間を極短期，通常又は長期になしうる。

投薬形態はまた，他の従来の成分，例えば，保存剤，安定剤，界面活性剤，緩衝材，浸透圧調節塩，乳化剤，甘味料，色素，香味料などを含むことができる。

加えて，特定の治療法で必要な場合，本発明の医薬品組成物はまた，同時投与が有用である他の薬学的に活性な成分を含むことができる。

有利なことに，本発明の医薬品組成物は，式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを含むことができる。式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは，生物に投与した際に式（Ｉ）の化合物に代謝される実質的に不活性な形の物質である。当業者に既知のように，一般式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは，モノカルボン酸，ジカルボン酸，脂肪酸，アミノ酸，（アルキル）リン酸又は（アルキル）チオリン酸などの酸とＲ2の水酸基を反応させることにより得られたエステル誘導体であってもよい。適当なプロドラッグの例は，酢酸エステル，プロピオン酸エステル，コハク酸エステル，ステアリン酸エステル，パルミチン酸エステル，グリシンエステル，ロイシンエステル，リシンエステル，リン酸エステル，メチルリン酸エステル，メチルチオリン酸エステル及びホスホン酸エステルである。適当なプロドラッグの有用な例は，例えば，Stella V.J.ら，「乏しい水溶性に打ち勝つプロドラッグ戦略」，Advance Drug Delivery Reviews 59 （2007） 677-694に記載されている。また，本発明の組成物は，請求項に記載の式（Ｉ）で表される化合物のプロドラッグの薬学的に許容し得る塩，多形結晶形，立体異性体及び鏡像異性体を含みうる。

医薬品組成物における本発明の化合物の量は，例えば，治療すべき病気の種類，病気の重篤度，患者の体重，投薬形態，選択した投与経路，一日の投与回数及び選択した化合物の効率という既知の要因の関数として広い範囲内で変えることができる。しかしながら，最適量は当業者によって容易にかつ日常的に決定できる。

一般に、医薬品組成物における本発明の化合物の量は，０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日，より好適には０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与レベルを確保するようなものである。

本発明の医薬品組成物の投薬形態は，混合，顆粒化，錠剤化，溶解，滅菌などを含む医薬品化学者に周知の技術に従って調製できる。

第三態様において，本発明は，上記一般式（Ｉ）を有する３−アミノカルバゾール化合物，その薬学的に許容し得る塩，多形結晶，立体異性体又は鏡像異性体の治療的有効用量を，それを必要とする人に投与することを含む哺乳類における炎症，疼痛，発熱，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症の治療又は予防方法に関する。

好適には，上記炎症が浮腫，紅斑症，関節性炎症，関節リウマチ及び関節症を含む群から選択され，上記腫瘍が結腸直腸性又は肺性の癌腫及び腺癌を含む群から選択される。

上記一般式（Ｉ）を有する３−アミノカルバゾールを既知の方法に従って，例えば，酸又はその反応性誘導体を所定のアミンと反応させることによって調製できる（国際特許出願公開ＷＯ０２／０９６９０２号Ａ１，ＷＯ０２／０５１８０６号，J. Med. Chem. 2002 vol. 45，pp. 3509-3523）。反応性誘導体の典型例はカルボン酸ハロゲン化物，無水物，又はエステルである。

第四態様において，本発明は，上記一般式（Ｉ）を有する３−アミノカルバゾールの製造方法に関し，下記段階：
ａ）次式（ＩＩ）：

（式中ｋのＲ２が上記意味を有する）のアミンを次式（ＩＩＩ）：

（式中のＲ１が上記意味を有し，ＺがＣｌ，Ｂｒ，ＯＨ，ＯＲ及びＯＣ（Ｏ）Ｒを含む群から選択され，ここでＲが１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキルである）の化合物と反応させて次式（Ｉ）：
（式中のＲ１及びＲ２が上記意味を有する）の３−アミノカルバゾール化合物を得，
ｂ）かくして得た式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩，多形結晶形，立体異性体又は鏡像異性体を任意に形成することを含むことを特徴とする。

一般に、工程（ａ）を０〜１４０℃の範囲内の温度で０．５〜２４時間の範囲内の時間適当な希釈剤の存在下で行う。反応温度は１５〜４０℃の範囲内が好適である。反応時間は２〜１８時間が有利である。

希釈剤は非プロトン性，極性又は非極性であるのが好ましい。非プロトン性極性希釈剤であることがさらにより好ましい。適当な非プロトン性極性希釈剤の例はジメチルホルムアミド及びジクロロメタンである。

ＺがＣｌ又はＢｒである実施態様では，反応を適当な有機又は無機の酸受容体の存在下で行うことが有利である。適当な有機酸受容体の例は，ジイソプロピルエチレンジアミン，トリエチレンアミン、ピリジン及びジメチルアミノピリジンである。適当な無機酸受容体の例は，アルカリ金属炭酸塩又は重炭酸塩である。

ＺがＯＨである実施態様では，反応を適当なカップリング剤，例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ポリスチレン樹脂上に担持されてもいる）又はカルボニルジイミダゾールの存在下で行うのが好ましい。

下記実施例は本発明をより詳細に説明するために示すが，本発明を限定するものではない。

例１
Ｒ1＝ＣＦ₃，Ｒ2＝ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨである化合物１の調製
ａ）２−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）エタノール
２−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）エタノール（２５ｇ，０．１２モル）の氷酢酸溶液（３７４ｍＬ）に硝酸（６．８ｍＬ，０．１７モル）の氷酢酸溶液（２０ｍＬ）を３０分間にわたり激しく撹拌しながら滴下した。添加完了の５分後，緑色沈殿が析出した。反応混合物をＨ₂Ｏ及び氷（１Ｌ）中に徐々に注ぎ，１時間撹拌し，ろ過し，最後にＨ₂Ｏで洗浄した。析出した固体を先ずＨ₂Ｏ（５００ｍＬ）に取り込み，次いでｐＨ７を得るために１０％炭酸ナトリウム溶液で処理し，最後にろ別した。得られた固体をアセトン／無水エタノール（１：１）溶液から晶出して２−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）エタノール２０ｇを得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 9.16（d，J=2.34Hz，1H），8.40（d，J=7.75Hz，1H），8.33（dd，J=2.34，9.21Hz，1H），7.79（d，J=9.06Hz，1H），7.73（d，J=8.33Hz，1H），7.57（ddd，J=1.24，7.13，8.29Hz，1H），7.33（ddd，J=0.95，7.13，7.86Hz，1H），4.89（t，J=5.90Hz，1H），4.54（t，J=5.41Hz，2H），3.82（q，J=5.41Hz，2H）.

ｂ）２−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）エタノール塩酸塩
上記工程ａ）で得た生成物（１０ｇ，０．０４モル）をテトラヒドロフラン（５５０ｍＬ）に溶解した。塩化第一スズ二水塩（８７ｇ，０．４モル）を添加した。このようにして得た混合物を１６時間還流した。

反応混合物を室温まで冷却し，その後溶媒を減圧下除去した。残渣をＨ₂Ｏ及びジクロロメタン中に取り込み，激しく撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム溶液を添加することによりｐＨを７．５にし，混合物をセライトでろ過し，ろ液を分液漏斗に移した。有機相を分離し，Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。溶媒を減圧下留去し，このようにして得た残渣（９ｇ）をエタノールに溶解し，エタノール性５Ｍ塩化水素溶液を添加することにより対応する塩酸塩に変換した。沈殿した固体をろ別して２−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）エタノール塩酸塩（９ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.41（broad s，3H），8.17（d，J=7.76Hz，1H），8.12（d，J=1.98Hz，1H），7.73（d，J=8.75Hz，1H），7.66（d，J=8.26Hz，1H），7.38-7.56（m，2H），7.23（t，J=7.27Hz，1H），4.70（broad s，1H），4.47（t，J=5.53Hz，2H），3.78（t，J=5.45Hz，2H）.

ｃ）Ｎ−［９−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル]−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
上記工程ｂ）で得た生成物（２６ｇ，０．１モル）をジクロロメタン（３００ｍＬ）に懸濁した。その後，トリエチルアミン（２８ｍＬ，０．２モル）及び２−トリフルオロメチルベンゾイルクロリド（１５．６ｍＬ，０．１１モル）を上記溶液に添加した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。

溶媒を減圧下留去し，残渣を２ＮＮａＯＨ溶液（２００ｍＬ）に取り込み，生成した溶液を２時間還流した。このようにして得た懸濁液を水に注ぎ，生成物をろ別し，乾燥し，イソプロピルエーテル／イソプロパノール混合物（１：１）から晶出した。

このようにして、Ｎ−［９−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル]−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２４ｇ）を得た。
融点：１７６〜１７７℃
Ｃ₂₂Ｈ₁₇Ｆ₃Ｎ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％６６．１４４．０６６．８５
計算値％６６．３３４．３０７．０３
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.52（s，1H），8.50（d，J=1.75Hz，1H），8.08（d，J=7.31Hz，1H），7.54-7.93（m，7H），7.44（t，J=7.02Hz，1H），7.18（t，J=7.45Hz，1H），4.85（t，J=5.45Hz，1H），4.43（t，J=5.70Hz，2H），3.79（q，J=5.75Hz，2H）.

例２
Ｒ1＝ＣＦ₃，Ｒ2＝ＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₂ＯＨである化合物２の調製
ａ）１−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール
カルバゾール（２０ｇ，０．１２モル）を含むＤＭＳＯ溶液（３００ｍＬ）に５０％水酸化ナトリウム溶液（３００ｍＬ），ベンジルトリメチルアンモニウムクロリド（５．５ｇ，０．０２４モル）を添加し、２−クロロ−２−メチルプロパン−２−オール（３９．１ｇ，０．３６モル）を滴下した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。

混合物をＨ₂Ｏ及び氷（３Ｌ）へ注ぎ，１時間撹拌し，ろ過し，得られた固体をヘキサン／酢酸エチルの混合物（９：１）から晶出して１−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（１５ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 8.07-8.15（m，2H），7.68（d，J=8.33Hz，2H），7.40（ddd，J=1.24，7.13，8.29Hz，2H），7.13-7.20（m，2H），4.64（s，1H），4.26（s，2H），1.21（s，6H）.

ｂ）１−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール
上記工程ａ）で得た生成物（２１ｇ，０．０８８モル）の氷酢酸溶液（４００ｍＬ）に硝酸（５ｍＬ，０．１２３モル）を含む氷酢酸（１５ｍＬ，０．２６３モル）溶液を３０分間にわたり激しく撹拌しながら滴下した。添加完了の５分後，緑色沈殿が析出した。反応混合物をＨ₂Ｏ及び氷（１Ｌ）中にゆっくりと注ぎ，１時間撹拌し，ろ過し，最後にＨ₂Ｏで洗浄した。析出した固体を先ずＨ₂Ｏ（５００ｍＬ）に取り込み，その後ｐＨ７が得られるまで１０％炭酸ナトリウム溶液に取り込み，最後にろ別した。

得られた固体を酢酸エチル／エタノールの混合液（８：２）から晶出して１−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（１９ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 9.15（d，J=2.05Hz，1H），8.38（d，J=7.31Hz，1H），8.30（dd，J=2.48，9.21Hz，1H），7.87（d，J=9.06Hz，1H），7.81（d，J=8.48Hz，1H），7.54（ddd，J=1.17，7.16，8.33Hz，1H），7.31（td，J=0.88，7.60Hz，1H），4.73（s，1H），4.37（s，2H），1.21 （s，6H）.

ｃ）１−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール塩酸塩
上記工程ｂ）で得た生成物（７．９ｇ，０．０２８モル）をテトラヒドロフラン（３５０ｍＬ）に溶解した。その後，塩化第一スズ二水塩（６２．８ｇ，０．２８モル）を添加した。このようにして得た混合物を１６時間還流した。

反応混合物を室温まで冷却し，その後溶媒を減圧下除去した。残渣をＨ₂Ｏ及びジクロロメタンに取り込み，激しく撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム溶液を添加することによりｐＨを７．５にし，混合物をセライトでろ過し，ろ液を分液漏斗に移した。有機相を分離し，Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。溶媒を減圧下留去し，このようにして得た残渣（９ｇ）をエタノールに溶解し，エタノール性５Ｍ塩化水素溶液を添加することにより対応する塩酸塩に変換した。得られた固体をイソプロパノール／水混合物（８：２）から晶出して１−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルプロパン−２−オール塩酸塩（６ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.32（broad s，3H），8.16（d，J=7.60Hz，1H），8.10（d，J=2.31Hz，1H），7.81（d，J=8.92Hz，1H），7.74（d，J=8.26Hz，1H），7.47（ddd，J=0.99，7.10，8.42Hz，1H），7.42（dd，J=2.15，8.75Hz，1H），7.22（t，J=7.43Hz，1H），4.70（broad s，1H），4.30（s，2H），1.20（s，6H）.

ｄ）Ｎ−［９−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル]−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
上記工程ｃ）で得た生成物（３．３ｇ，０．０１１モル）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に懸濁した。その後，トリエチルアミン（３ｍＬ，０．０２２モル）及び２−トリフルオロメチルベンゾイルクロリド（１．７ｍＬ，０．０１２モル）を上記溶液に添加した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。

溶媒を減圧下留去し，残渣を２ＮのＮａＯＨ溶液（２０ｍＬ）に取り込み，生成した溶液を２時間還流した。このようにして得た懸濁液を水に注ぎ，生成物をろ別し，乾燥し，イソプロピルエーテル／イソプロパノール混合物（１：１）から晶出した。

このようにしてＮ−［９−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］−２−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド（２．７ｇ）を得た。
融点：１７９〜１８１℃
Ｃ₂₄Ｈ₂₁Ｆ₃Ｎ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％６７．５１４．８２６．５２
計算値％６７．６０４．９６６．５７
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.50（s，1H），8.49（s，1H），8.06（d，J=7.93Hz，1H），7.56-7.92（m，7H），7.42（t，J=7.76Hz，1H），7.17（t，J=7.43Hz，1H），4.65（s，1H），4.26（s，2H），1.21（s，6H）.

例３
Ｒ1＝ＣＦ₃，Ｒ2＝ＣＨ₂ＣＨ₂C（ＣＨ₃）₂ＯＨである化合物３の調製
ａ）エチル３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）プロパノエート
カルバゾール（２０ｇ，０．１２モル）を含むＤＭＦ溶液（１３０ｍＬ）に水素化ナトリウム（５０％懸濁液）（６．７ｇ，０．１４モル）を分割して添加し，このようにして得た懸濁液を室温で３０分間撹拌し，その後，６０℃に加熱した。エチル３−ブロモプロパノエート（１７．９ｍＬ，０．１４モル）を含むＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液を滴下し，混合物を１６時間撹拌した。

混合物をＨ₂Ｏ（０．５Ｌ）に注ぎ，ろ過した。得られた固体を，ヘキサン／酢酸エチル混合物（８：２）を溶離剤として用いるシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して１６ｇのエチル３−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）プロピオナートを得，該生成物を更なる精製なしに次の反応に使用した。

ｂ）４−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルブタン−２−オール
上記工程ａ）で得た生成物（１５．２ｇ，０．０５７モル）のテトラヒドロフラン溶液（２００ｍＬ）に３Ｍのヨウ化メチルマグネシウムのジエチルエーテル溶液（５７ｍＬ，０．１７１モル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。その後，１ＭのＮＨ₄Ｃｌ溶液（５００ｍＬ）を混合物に添加した。生成した混合物を分液漏斗に移し，酢酸エチルで抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し，溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をヘキサン／酢酸エチル混合物（８：２）から晶出して４−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルブタン−２−オール（９ｇ）を得，該生成物を更なる精製なしに次の反応に使用した。

ｃ）２−メチル−４−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）ブタン−２−オール
上記工程ｂ）で得た生成物（７．２ｇ，０．０２８モル）を例１ａ）に記載したものと同様の方法で作用させることで反応させた。得られた生成物を酢酸エチルから晶出して２−メチル−４−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）ブタン−２−オール（６ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 9.17（d，J=2.34Hz，1H），8.41（d，J=7.60Hz，1H），8.36（dd，J=2.34，9.35Hz，1H），7.73（d，J=9.35Hz，1H），7.66-7.71（m，1H），7.56-7.64（m，1H），7.31-7.38（m，1H），4.62（s，1H），4.48-4.58（m，2H），1.79-1.89（m，2H），1.24（s，6H）.

ｄ）４−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルブタン−２−オール塩酸塩
上記工程ｃ）で得た生成物（５．９ｇ，０．０２０モル）の９５°エタノール（８０ｍＬ）の懸濁液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ，０．０００５モル）を添加し，混合物をパール社製水素化装置（３０ｐｓｉ）中で４時間水素化した。反応混合物をろ過し，溶液を減圧下蒸発させ，得られた生成物を酢酸エチルに溶解し，エタノール性５Ｍ塩化水素溶液を添加することにより対応する塩酸塩に変換した。このようにして得た固体をイソプロピルエーテル／イソプロパノール混合物（１：１）から晶出して４−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−２−メチルブタン−２−オール塩酸塩（５．５ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.34（broad s，3H），8.19（d，J=7.60Hz，1H），8.13（d，J=1.98Hz，1H），7.68（d，J=8.92Hz，1H），7.62（d，J=8.20Hz，1H），7.44-7.58（m，2H），7.25（t，J=6.94Hz，1H），4.08-4.83（m，3H），1.73-1.88（m，2H），1.23（s，6H）.

ｅ）Ｎ−［９−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］−２−トリフルオロメチルベンズアミド
上記工程ｄ）で得た生成物（３．９ｇ，０．０１３モル）を例１ｃ）に記載したものと同様の方法で作用させることで反応させた。

得られた固体をエタノールから晶出してＮ−[９−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル]−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（２．３ｇ）を得た。
融点：１８８〜１８９℃
Ｃ₂₅Ｈ₂₃Ｆ₃Ｎ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％６７．７５５．３１６．２３
計算値％６８．１７５．２６６．３６
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.53（s，1H），8.52（d，J=1.98Hz，1H），8.10（d，J=7.60Hz，1H），7.68-7.90（m，4H），7.66（dd，J=2.00，8.70Hz，1H），7.52-7.59（m，2H），7.47（t，J=7.10Hz，1H），7.19（t，J=7.43Hz，1H），4.55（s，1H），4.38-4.51（m，2H），1.71-1.91（m，2H），1.23（s，6H）.

例４
Ｒ1＝ＣＦ₃，Ｒ2＝ＣＨ₂ＣＯＣＨ₃である化合物４の調製
ａ）エチル９Ｈ−カルバゾール−９−イルアセテート
カルバゾール（２０ｇ，０．１２モル）を含むＤＭＦ溶液（１３０ｍＬ）に水素化ナトリウム（５０％懸濁液）（６．７ｇ，０．１４モル）を分割して添加し，このようにして得た懸濁液を室温で３０分間撹拌し，その後６０℃に加熱した。エチル−２−ブロモアセテート（２４ｇ，０．１４モル）を含むＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）を滴下し，生成した混合物を１６時間撹拌した。混合物をＨ₂Ｏ（０．５Ｌ）に注ぎ，ろ過し，得られた固体をヘキサンから晶出してエチル９Ｈ−カルバゾール−９−イルアセテート（２０ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 8.15（d，J=7.60Hz，2H），7.54（d，J=8.20Hz，2H），7.43（td，J=1.02，7.67Hz，2H），7.17-7.27（m，2H），5.33（s，2H），4.14（q，J=7.02Hz，2H），1.20（t，J=7.16Hz，3H）.

ｂ）１-（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン
上記工程ａ）で得た生成物（１４．１ｇ，０．０５６モル）のテトラヒドロフラン溶液（１３０ｍＬ）へ３Ｍのヨウ化メチルマグネシウムのジエチルエーテル溶液（２８ｍＬ，０．０８４モル）を添加した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。その後，１ＭのＮＨ₄Ｃｌ溶液（１００ｍＬ）を混合物に添加した。生成した混合物を分液漏斗に移し，酢酸エチルで抽出した。有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し，溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をヘキサン／酢酸エチル混合物（９５：５）を溶離剤として使用するシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して１−（９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン（８ｇ）を得，該生成物を更なる精製なしに次の反応に使用した。
¹ＨＮＭＲ（300 MHz，DMSO-d₆） δ 8.15（d，J=7.89Hz，2H），7.49（d，J=8.20Hz，2H），7.41（ddd，J=1.10，7.00，8.20Hz，2H），7.21（ddd，J=1.10，7.00，7.89Hz，2H），5.39（s，2H），2.24（s，3H）.

ｃ）１−（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン
上記工程ｂ）で得た生成物（５ｇ，０．０２２モル）を例１ａ）に記載したものと同様の方法で作用させることで反応させた。得られた残渣を，８：２ヘキサン／酢酸エチル混合物を溶離剤として使用するシリカ上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製して１-（３−ニトロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン（４．５ｇ）を得，該生成物を更なる精製なしに次の反応に使用した。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 9.20（d，J=2.34Hz，1H），8.42（d，J=7.89Hz，1H），8.33（dd，J=2.34，9.06Hz，1H），7.70（d，J=9.35Hz，1H），7.60-7.67（m，1H），7.54（td，J=1.17，7.75Hz，1H），7.30-7.39（m，1H），5.57（s，2H），2.32（s，3H）.

ｄ）１−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン塩酸塩
上記工程ｃ）で得られた生成物（１．３ｇ，０．００５モル）の９５°エタノール（８０ｍＬ）の懸濁液へ１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ，０．０００５モル）を添加し，混合物をパール社製水素化装置（３０ｐｓｉ）中で４時間水素化した。反応混合物をろ過し，溶液を減圧下蒸発させた。得られた生成物を酢酸エチルに溶解し，エタノール性５Ｍ塩化水素溶液を添加することにより対応する塩酸塩に変換した。析出した固体をろ別して１−（３−アミノ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセトン塩酸塩（１．１ｇ）を得た。
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.39（broad s，3H），8.19（d，J=7.60Hz，1H），8.14（d，J=1.98Hz，1H），7.62（d，J=8.59Hz，1H），7.52-7.58（m，1H），7.40-7.52（m，2H），7.25（ddd，J=0.99，6.94，7.93Hz，1H），5.46（s，2H），2.27（s，3H）.

ｅ）Ｎ−［９−（２−オキソプロピル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
前記工程ｄ）で得た生成物（１．１ｇ，０．００４モル）を例１ｃ）に記載したものと同様の方法で作用させることで反応させた。得られた固体イソプロピルエーテル／イソプロパノール混合物（１：１）から晶出してＮ−［９−（２−オキソプロピル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］−２−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（１．２ｇ）を得た。
融点：２２３〜２２６℃
Ｃ₂₃Ｈ₁₇Ｆ₃Ｎ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％６７．０２３．９１６．７８
計算値％６７．３１４．１８６．８３
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.52（s，1H），8.50（d，J=1.75Hz，1H），8.10（d，J=7.60Hz，1H），7.66-7.91（m，4H），7.61（dd，J=2.05，8.77Hz，1H），7.36-7.53（m，3H），7.20（t，J=6.87Hz，1H），5.38（s，2H），2.24（s，3H）.

例５
Ｒ1＝Ｃｌ，Ｒ2＝ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨである化合物５の調製
ａ）２−クロロ−Ｎ−［９−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］ベンズアミド
例１ｂ）に記載したようにして得た生成物（６．４ｇ，０．０２８モル）をジクロロメタン（７０ｍＬ）に懸濁した。その後，トリエチルアミン（７．９ｍＬ，０．２モル）及び２−クロロベンゾイルクロリド（３．９５ｍＬ，０．０３１モル）を溶液に添加した。このようにして得た混合物を室温で１６時間撹拌した。

溶媒を減圧下留去し，残渣を２ＮのＮａＯＨ溶液（８０ｍＬ）に取り込み，生成した溶液を２時間還流した。このようにして得た懸濁液を水に注ぎ、生成物をろ別し，乾燥し，９５°エタノールから晶出した。

このようにして２−クロロ−Ｎ−［９−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］ベンズアミド（５．５ｇ）を得た。
融点：１６８〜１６９℃
Ｃ₂₁Ｈ₁₇ＣｌＮ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％６８．８３４．６３７．５８
計算値％６９．１４４．７０７．６８
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.47（s，1H），8.55（d，J=1.98Hz，1H），8.08（d，J=7.27Hz，1H），7.39-7.71（m，8H），7.18（t，J=7.43Hz，1H），4.86（t，J=5.45Hz，1H），4.43（t，J=5.78Hz，2H），3.78（q，J=5.83Hz，2H）.

例６
Ｒ1＝Ｃｌ，Ｒ2＝ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₂ＯＨである化合物６の調製
ａ）２−クロロ−Ｎ−［９−（３−ヒドロキシ-３−メチルブチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル］ベンズアミド
例３ｄ）に記載したようにして得た生成物（１．１ｇ，０．００３７モル）を２−クロロベンゾイルクロリド（０．５２ｍＬ，０．００４１モル）と例１ｃ）に記載したものと同様の方法で作用させることで反応させた。得られた固体を酢酸エチルから晶出して２−クロロ−Ｎ−［９−（３−ヒドロキシ-３−メチルブチル）−９Ｈ−カルバゾール−３−イル]ベンズアミド（０．６３ｇ）を得た。
融点：１２０〜１２４℃
Ｃ₂₄Ｈ₂₃ＣｌＮ₂Ｏ₂の元素分析
ＣＨＮ
分析値％７０．５２５．６２６．７１
計算値％７０．８４５．７０６．８８
¹ＨＮＭＲ（300MHz，DMSO-d₆） δ 10.48（s，1H），8.57（d，J=1.98Hz，1H），8.09（d，J=7.60Hz，1H），7.41-7.73（m，8H），7.19（t，J=7.43Hz，1H），4.55（s，1H），4.37-4.51（m，2H），1.73-1.88（m，2H），1.23（s，6H）.

例７
比較化合物Ａの調製
比較化合物Ａは国際特許出願公開ＷＯ２００６／１２２６８０号の化合物１に対応し，該特許出願に記載されたように調製した。

例８
比較化合物Ｂの調製
比較化合物Ｂは国際特許出願公開ＷＯ２００７／０１４６８７号の化合物６に対応し，該特許出願に記載されたように調製した。

例９
比較化合物Ｃの調製
比較化合物Ｃは国際特許出願公開ＷＯ２００７／０１４６８７号の化合物１３に対応し，該特許出願に記載されたように調製した。

例１０
生体内活性の試験
本試験によってＰＧＥ₂の産生に対する阻止能力及びＰＧＦ_2αの産生に対する選択性の評価ができる。

例えばＩＬ−１_βという炎症促進性サイトカインでの刺激に特に敏感で，本刺激への応答において二種類のプロスタノイドであるＰＧＥ₂及びＰＧＦ_2αの産生及び放出に特に活性であるヒト肺性腺癌である株細胞Ａ５４９を使用した（Thoren S. Jakobsson P-J，2000）。

これら細胞をＩＬ−１_β（１ｎｇ／ｍＬ）で刺激し，同時に３７℃及びＣＯ₂濃度５％の培養器において５％子牛胎児血清及びＬ−グルタミン（最終４ｍＭ）が追加された適切な培地（ＤＭＥＭ，ダルベッコ変法イーグル培地）中試験化合物で２２時間処理した。

培養後，上澄み中に産生、放出されたＰＧＥ₂及びＰＧＦ_2αの量をＥＩＡキット（カイマン・ケミカル社製造販売）を用いて検定した。

使用した比較化合物は，ＰＧＥ₂及びＰＧＦ_2αを共に等量で阻止する非ステロイド系抗炎症薬である濃度１０ｎＭでのインドメタシン（シグマ・アルドリッチ社）であった。

ＩＣ_5O値，すなわち，刺激されているが同一の化合物で処理されていない細胞に関してＰＧＥ₂及びＰＧＦ_2αの産生の５０％を阻止する化合物濃度として表わされる結果を表２に示す。ＰＧＦ_2αの生合成に対する化合物の不活性又は活性低下は，ＰＧＥ₂の産生に対する選択性の指標であり，したがってｍＰＧＥＳ−１の選択的阻止の指標である。

例１１
生体内活性の試験
試験化合物をマウスにおける酢酸誘発ライジングのモデルにおいて評価した（Stock J. L.ら，J. Clin. Inv. 2001 ，107: 325-331）。本試験により炎症性疼痛のモデルにおける本発明の化合物の抗侵害受容性活性の評価ができる。体重２５〜３０ｇのメスのＣＤ−１マウスを試験に使用した。かかる動物をメチルセルロース（ＭＴＣ）に懸濁した試験化合物（０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ）で腹腔内処理した。対照動物は，同一経路を介して上記賦形剤（ＭＴＣ）だけで処理した。上記処理の一時間半後，酢酸（生理食塩水中０．７％ｖ／ｖ，１６μｌ／ｇ体重）の腹腔内注射を前記動物にして炎症性疼痛を誘発させ，侵害受容応答に対する試験化合物の効果を確かめた。

酢酸投与直後と、続く２０分間後に，受容応答の評価用パラメーターを示すもがき回数を測定した。

表３に示すように，本発明の化合物は，ＭＴＣだけで処理した動物と比較して，用量依存型で酢酸投与に続く２０分間でもがき回数の低減を生起した。

例１２
ヒト及びラット肝ミクロソームにおける代謝安定性の試験
本試験により，ラット及びヒトにおける本発明の化合物及び比較化合物の代謝安定性の評価ができる。

試験化合物をヒト肝ミクロソーム（ドナープール，ゼノテック社）及びスプラーグドーリーラットからの肝ミクロソーム（ドナープール，ゼノテック社）で培養し，種々の化学種における代謝安定性を評価するためにアプライドバイオシステムズ社製の４０００ＱＴｒａｐ質量分析計でＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いて，試験化合物を比較すべく計測した。

０及び１μＭの最終濃度で分析すべき化合物を，９６穴プレート中のミクロソームのプールを含む懸濁液に最終濃度０．５ｍｇ/ｍＬおよび最終体積２００μｌで静置した。リン酸塩緩衝液（７５ｍＭ，ｐＨ７．４）及びＮＡＤＰＨ再生系（ＭｇＣｌ₂：３．３ｍＭ，Ｇ６Ｐ：３．３ｍＭ，Ｇ６ＰＤ：０．４Ｕ/ｍＬ，ＮＡＤＰ＋：１．３ｍＭ）で試験を標準化した。参照化合物ワルファリン，プロプラノロール及びテストステロン（シグマ社）を試験化合物用の混合液として培養、処理した。試料を加湿培養器において３７℃で培養した。０及び６０分間後，内部標準物（メトプロロール０．２μＭ及びジクロフェナク０．４μＭ）を含むアセトニトリル１００μｌを添加して反応を停止した。

試料を分析前に遠心分離した。ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析は，正イオン化及びＳＲＭ（単一反応モード）でのエレクトロスプレーイオン源を用いて行った。クロマトグラフィー条件としては，ＸＤＢ−Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ，アジレント社）及び０．１％ギ酸を含む水中で５％〜９１％のアセトニトリルの勾配の使用（総実行時間は６分間である）を必要とし，流速は０．５ｍＬ／分であった。

試験化合物のピーク面積を積分し，結果を分析物面積／内部標準物（ＰＡＲ）面積比として表わした。各回二つの試料を分析し，平均値を計算した。残留化合物の百分率値を下記式：
未代謝化合物％＝１００×（平均ＰＡＲ_Tfinal／平均ＰＡＲ_T0）
により計算した。

化合物１〜６の結果を，比較化合物Ａ，Ｂ及びＣ及び参照化合物の結果と併せて表４に示す。本発明の化合物は，比較化合物と比べて改善した代謝安定性を示した。

例１３
生体外吸収の試験
本試験により，腸管障壁の生体外モデルとしてＣａｃｏ−２株細胞を用いて本発明の化合物及び比較化合物の腸管障壁による吸収量の評価ができる。Ｃａｃｏ−２細胞での透過性試験は、薬品の生体内腸管吸収の予測及び評価として認可された生体外システムを表す。Ｃａｃｏ−２細胞を多孔質フィルター上で約２１日間培養する場合，腸細胞に分化する能力がある。実際，本期間中に，Ｃａｃｏ−２細胞が頂端面上に明確な「刷子縁」を有する分極細胞単層の形成をもたらし、また細胞間の「密着結合」を形成する自発性の形態及び生化学的変化を受け，したがって薬の腸管透過性分析に適するモデルを示す。

下記材料の材料を用いて試験を行った。
ルシファーイエロー（シグマ社）
ハンクス平衡塩液（ＨＢＳＳ）（インビトロジェン社）
放射性参照基準（パーキンエルマー社）
Ｃａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ，アメリカ培養細胞系統保存機関）
Ｃａｃｏ−２Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（登録商標）プレート（ミルポア社）
アプライドバイオシステムズ社製の４０００ＱＴｒａｐ質量分析計を用いたＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ
０．２μＭのメトプロロールを内部標準物として含むアセトニトリル

試験実施化合物を１０ｍＭのＨＢＳＳ貯蔵液から最終濃度１０μＭまで希釈した。かかる系は２１〜２８日間培養液中で融合性細胞単層からなる。参照化合物（ルシファーイエロー，アテノロール，プロプラノロール及びジゴキシン）を品質管理としてかつ試験実施化合物との比較のために各試験に含めた。

三通の各化合物を，ｐＨ７．４で頂側から底側コンパートメント（Ａ→Ｂ）及び底側から頂側コンパートメント（Ｂ→Ａ）の双方向に試験した。

所定時間で収集した試料を正イオン化及びＳＲＭ（単一反応モード）でのエレクトロスプレーイオン源を用いるＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析した。クロマトグラフィー条件としては，０．１％ギ酸を含む水中で５％〜９１％のアセトニトリルの勾配及び流速０．５ｍＬ／分を有するＸＤＢ−Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ，アジレント社）の使用（総実行時間は６．５分間である）を必要とした。メトプロロールを内部標準物として使用した。

濃度データを用いて見かけの透過性値（Ｐ_app）を計算し，Ｐ_appの平均値及び標準偏差を計算した。

流出比をＰ_app（Ｂ→Ａ）／Ｐ_app（Ａ→Ｂ）として計算した。回収率を下記式：
（受液コンパートメント中の量＋ドナーコンパートメント中の量）／基準量
で計算した。

試験化合物のピーク面積を積分し，結果を分析物面積／内部標準物面積比として表わし，試料調製中に使用した希釈因子で修正した。見かけの透過性係数を下記式：
（式中，Ｖ_A は受液ウェル中の容積（Ａ→Ｂの試験に対しては０．２５ｍＬ，Ｂ→Ａの試験に対しては０．０７５ｍＬ）、面積は膜表面の面積（０．１１ｃｍ²）及び時間は全移動時間（３６００秒））を用いて計算し、得られた値を下記評価基準：
低Ｐ_app＜２×１０^-6ｃｍ／秒
中２×１０^-6ｃｍ／秒＜Ｐ_app＜２０×１０^-6ｃｍ／秒
高Ｐ_app＞２０×１０^-6ｃｍ／秒
に基づいて分類した。

化合物１〜６の結果を，比較化合物Ａ，Ｂ及びＣ及び参照化合物の結果と併せて表５に示す。本発明の化合物は，比較化合物と比べて改善した吸収期待値を示す。

例１４
生体内生体利用効率の試験
本試験により本発明の化合物の生体内生体利用効率の評価ができ，従って試験化合物の薬物動態プロファイルの評価及び比較が可能となる。

試験は、カセット法を用いて，すなわち数個の生成物を同一の動物に５ｍｇ／ｋｇの投薬量で同時に経口投与することにより行った。これら生成物をメチルセルロース（ＭＴＣ）中に懸濁した。処理した動物を自動サンプリングシステムにより行う一連の血液試料の採取のためにカテーテル処理した。生成物の血漿濃度をＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって測定した。経時的な血漿濃度プロファイルは，試験生成物の相対的な生体利用効率を速度（Ｔ_max及びＣ_max）及び化学種（ＡＵＣ）の用語で評価するのを可能にした。また，最終部における曲線の勾配は血漿からの化合物の消失速度の比較評価ができ，速度が遅いほど，勾配は緩やかになる。三匹の動物を化合物の組み合わせごとに処理した。良好な生体内吸収速度を示すため，他の化合物と比べより高いＣ_max及びＡＵＣ並びに予測されるＴ_maxを有する化合物を選択した。

使用した比較製品は、限られた吸収を示す化合物Ｃである一方，本発明の化合物１，２及び３は良好な生体利用効率特性を示した。

Ｃ_max，すなわち血漿中で到達した薬の最大濃度，Ｔ_max，すなわち血漿中で薬の最大濃度に到達するのに必要な時間及びＡＵＣ_0-7，すなわち投与後最初の七時間に計測された血漿の薬濃度曲線下の面積として表わした結果を表６に示す。

Claims

下記一般式（Ｉ）：

（式中のＲ１はハロゲン原子，メチル基又はトリハロメチル基，ニトロ基，シアノ基もしくはトリフレート基であり，Ｒ２は１〜８個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状ヒドロキシアルキル基又は１〜８個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状カルボニルアルキル基）を有することを特徴とする３−アミノカルバゾール化合物，もしくはその薬学的に許容し得る塩，多形結晶，立体異性体，鏡像異性体，又は，前記一般式（Ｉ）のＲ２の水酸基を，モノカルボン酸，ジカルボン酸，脂肪酸，アミノ酸，（アルキル）リン酸又は（アルキル）チオリン酸と反応させることによって得られるエステルであるエステルプロドラッグ。
Ｒ１がフッ素もしくは塩素原子又はトリフルオロメチルもしくはトリクロロメチル基であり，Ｒ２が１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状ヒドロキシアルキル基又は１〜４個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状カルボニルアルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の３−アミノカルバゾール化合物。
Ｒ１及びＲ２が下表１：

に示した意味を有することを特徴とする請求項１に記載の３−アミノカルバゾール化合物。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の３−アミノカルバゾール化合物，その薬学的に許容し得る塩，多形結晶，立体異性体，鏡像異性体，又は，前記一般式（Ｉ）のＲ２の水酸基を，モノカルボン酸，ジカルボン酸，脂肪酸，アミノ酸，（アルキル）リン酸又は（アルキル）チオリン酸と反応させることによって得られるエステルであるエステルプロドラッグの治療的有効用量を，少なくとも一種類の薬学的に許容し得る不活性賦形剤と共に含むことを特徴とする医薬品組成物。
下記の工程
ａ）式（ＩＩ）：

（式中のＲ２が請求項１〜３のいずれか一項に記載の意味を有する）のアミンを式（ＩＩＩ）：

（式中のＲ１が請求項１〜３のいずれか一項に記載の意味を有し，ＺがＣｌ，Ｂｒ，ＯＨ，ＯＲ及びＯＣ（Ｏ）Ｒを含む群から選択され，ここでＲが１〜６個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキルである）の化合物と反応して式（Ｉ）：

（式中のＲ１及びＲ２が上記意味を有する）の３−アミノカルバゾール化合物を得る工程と，
ｂ）式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩，多形結晶形，立体異性体又は鏡像異性体を形成する工程とを備えることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の３−アミノカルバゾール化合物の製造方法。
炎症，疼痛，発熱，腫瘍，アルツハイマー病及びアテローム硬化症を含む群から選択された障害の予防的又は治療的処置用の薬品の製造のための請求項１〜３のいずれか一項に記載の３−アミノカルバゾール化合物，その薬学的に許容し得る塩，多形結晶，立体異性体，鏡像異性体，又は，前記一般式（Ｉ）のＲ２の水酸基を，モノカルボン酸，ジカルボン酸，脂肪酸，アミノ酸，（アルキル）リン酸又は（アルキル）チオリン酸と反応させることによって得られるエステルであるエステルプロドラッグの使用。
前記炎症が，浮腫，紅斑症，関節性炎症，関節リウマチ及び関節症を含む群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の３−アミノカルバゾール化合物の使用。
前記腫瘍が，結腸直腸性及び肺性の癌腫及び腺癌を含む群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の３−アミノカルバゾール化合物の使用。