KR101713809B1 - 신이 추출물을 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 - Google Patents
신이 추출물을 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'에 관한 것이다. 본 발명의 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물은 뇌신경세포 보호능을 발휘하여, 뇌 질환 예방 또는 치료 및 뇌 질환 개선 효과를 발휘한다.
Description
본 발명은 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'에 관한 것이다.
최근 생활수준이 향상됨에 따라 평균수명이 연장되어, 노년인구가 차지하는 비중이 높아지고 있다. 한국인의 사망 원인을 살펴보면 뇌졸중, 치매, 정신장애 및 행동장애와 같은 뇌 질환이 암 및 순환기 질환 다음으로 높은 사망원인을 차지하며, 단일 장기의 질환으로 볼 때 가장 높은 사망 원인인 것으로 보고되었다 (한국통계연감, 성·연령계층별사인별 사망자수, 1996).
대표적인 뇌 질환으로는 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke), 허혈장애(ischemia) 등이 있다. 특히, 알츠하이머병, 파킨슨병, 뇌졸중 등을 비롯한 노인성 뇌 질환은 뇌세포 내에서의 라디칼 형성을 수반하는 산화적 스트레스가 주요한 병인에 해당한다 (Smith, M.A., J. Neurochem., 1997, Supp. Sl, 69, 19).
산화적 스트레스는 세포나 조직이 독성 자유 라디칼(toxic free radical)에 의해 손상되는 것을 의미하는 것으로, 산화적 스트레스에 의한 신경 세포 손상(neuronal damage)은 정상적인 노화 과정 중에 발생하는 뇌세포의 손상과 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병, 치매 등 뇌신경조직의 퇴행성 질환 (neurodegenerative disease)에 관여하는 것으로 알려져 있다.
퇴행성 뇌신경 질환의 주된 원인은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 축적에 의한 산화적 스트레스에 기인한다는 것으로 보고되어 있으며 (Olney, J. W. et al., Brain Res, 1974, 77, 507-512), 아미노산인 글루타메이트(glutamate)는 중추신경계에서 주요한 흥분성 신경전달물질로 과도한 글루타메이트(glutamate) 농도는 N-아세틸 시스테인(N-acetyl cystein) 흡수를 억제하여 산화적 스트레스를 유발시킨다.
현재까지 세포 내에서 생성되는 산소 라디칼에 대한 항산화 보호 측면에서 여러가지 천연 항산화제의 효과가 보고되었는데, 주로 한약재나 식품성분의 항산화 기능에 관한 것으로, 간 조직에 관한 연구가 대부분이며 (Park, J.C. et al., J. Korean Soc. Food Nutr., 1996, 25, 588-592; Kim, M.R. et al., J. Food. Sci. Nutr., 1997, 2, 207; Kim, Mee Ree, et al., Food Res. Intl., 1999, 31(5), 389-394), 생물자원을 이용한 뇌 보호 목적으로 수행된 연구는 미비한 실정이다. 또한, 현재 개발된 뇌질환 의약품은 완치보다는 예방이나 진행을 늦춰주는 역할을 하고 있으며, 이러한 약물들은 오심, 구토, 설사 등 위장관 장애와 심장 서맥 유발 등의 부작용을 발생시킨다.
한편, 신이(Magnoliae flos)는 목련과 낙엽관목인 백목련의 '꽃봉오리'를 말하며, 약간 매운 맛이 나기 때문에 한방에서는 '신이화'라고 부른다. 목련은 오래전부터 정원에 심어 꽃을 감상하던 나무로 잎은 중국 악기인 비파를 닮았다. 꽃은 4월에 잎보다 먼저 피며 줄기 끝에 한 송이씩 달리는데, 이 때문에 목련꽃이 떨어지고 나면 줄기 끝에 뭉툭하게 잘린 것 같은 자국이 남는다.
신이는 주로 개화 전 채취해서 사용하는데, 폐결핵에 민간약으로 쓰이며 두통에 효능이 있다. 특히 요통에 탁월하며 뼈가 욱신거리거나 쑤시는데 효과가 있다. 또한, 비염에 효험을 보이며 축농증을 치료해주며, 진통제의 약성이 있다고 알려져 있다.
본 발명은 뇌신경세포 보호 활성이 있는 천연물을 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'을 개발하여 제공하고자 한다
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신이(Magnoliae flos) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 신이(Magnoliae flos) 추출물은 바람직하게 용매로 80% 메탄올을 사용하여 추출하는 것이 좋다. 상기 80% 메탄올을 용매로 사용할 경우, 뇌 질환 예방 또는 치료 효과가 다른 용매에 비해 더 우수하다.
본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 뇌 질환은 일 예로, 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나인 것일 수 있다.
본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 신이(Magnoliae flos) 추출물은 바람직하게 약학 조성물 대비 0.000001~90 중량%(건물 기준) 포함되는 것이 좋다. 0.000001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 90 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으며, 이중 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화 하는 것이 좋다. 구체적인 제형의 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 리모나데제(LEMONADES), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제(ELIXIRS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPENSIONS), 전제(DECOCTIONS), 정제(TABLETS), 좌제(SUPPOSITORIES), 주사제(INJECTIONS), 주정제(SPIRITS), 카타플라스마제(CATAPLSMA), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 트로키제(TROCHES), 틴크제(TINCTURES), 페이스트제(PASTES), 환제(PILLS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일 예로, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때, 1일 0.000001 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여 가능하다. 그러나 상기의 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며, 복용자의 상태에 따라 의사의 처방에 의해 변화될 수 있다.
또한, 본 발명은 신이(Magnoliae flos) 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 신이(Magnoliae flos) 추출물은 바람직하게 용매로 80% 메탄올을 사용하여 추출하는 것이 좋다. 상기 80% 메탄올을 용매로 사용할 경우, 뇌 질환 개선 효과가 다른 용매에 비해 우수하다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 뇌 질환은 일 예로 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나일 수 있다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 신이 추출물은 바람직하게 뇌 질환 개선용 식품 조성물 대비 0.000001~90 중량%(건물 기준) 포함되는 것이 좋다. 0.000001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 90 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물은 일 예로, 육류, 곡류, 카페인 음료, 일반음료, 초콜렛, 빵류, 스낵류, 과자류, 사탕, 피자, 젤리, 면류, 껌류, 유제품류, 아이스크림류, 알코올성 음료, 술, 비타민 복합제 및 그 밖의 건강보조식품류 중 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물은 뇌신경세포 보호능을 발휘하여, 뇌 질환 예방 또는 치료 및 뇌 질환 개선 효과를 발휘한다.
도 1은 해마유래 세포 HT22 cells에서 글루타메이트(glutamate)에 의해 유도되는 세포사멸에 대한 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물, 100% 메탄올 추출물, 80% 에탄올 추출물, 100% 에탄올 추출물 및 물 추출물의 뇌 신경세포 보호 활성 그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 2는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 ROS량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 3은 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포내 칼슘 이온량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 4는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포막 전위 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 5는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 글루타티온 환원효소(Glutathione reductase) 활성그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 2는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 ROS량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 3은 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포내 칼슘 이온량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 4는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포막 전위 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
도 5는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 글루타티온 환원효소(Glutathione reductase) 활성그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 또는 실험예를 들어 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[
제조예
1 : 신이 80% 메탄올 추출물 제조]
신이(Magnoliae flos) '100 g 당 1 L'의 농도가 되도록 80% 메탄올을 첨가하여 실온에서 90분간 3회 반복 추출하였다. 추출 후, 건조하여 신이 80% 메탄올 추출물을 제조하였다.
[
비교예
1 내지 4 : 신이 100% 메탄올, 80% 에탄올, 100% 에탄올 및 물 추출물 제조]
신이(Magnoliae flos) '100 g 당 1 L'의 농도가 되도록 100% 메탄올, 80% 에탄올, 100% 에탄올 및 물을 각각 첨가하여 실온에서 90분간 3회 반복 추출하였다. 각각 추출 후, 건조하여 신이 100% 메탄올 추출물 (비교예 1), 80% 에탄올 추출물 (비교예 2), 100% 에탄올 추출물 (비교예 3) 및 물 추출물(비교예 4)을 제조하였다.
[
실험예
1 : 신이 80% 메탄올 추출물의
뇌신경세포
보호 활성 측정]
본 실험예에서는 신이 추출물의 뇌신경세포 보호 활성을 측정하고자, 상기 제조예 1에서 제조한 신이 80% 메탄올 추출물을 사용하여 'MTT assay'를 실시하고자 하였다.
'MTT assay'는 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 'MTT tetrazolium'을 청자색을 띄는 비수용성의 'MTT formazan (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)'으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하여, 살아있는 세포를 염색한 후 녹여내 흡광도를 측정하는 검사법이다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% 'penicillin/streptomycin', NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
그 후, HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 제조예 1의 신이 80% 메탄올 추출물, 100% 메탄올 추출물 (비교예 1), 80% 에탄올 추출물 (비교예 2), 100% 에탄올 추출물 (비교예 3) 및 물 추출물 (비교예 4) 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, MTT 용액을 첨가하였다. 첨가 3시간 후, DMSO에 용해하고, 'ELISA reader'를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 'relative protection(%)'로 나타내었다.
실험 결과, 마우스 해마 유래 세포주인 HT22 cell에서 신이 80% 메탄올 추출물이 가장 높은 뇌신경세포 보호 활성을 나타내었으며, 비교예 1 내지 4의 추출물은 활성을 보이지 않았다 (도 1). 도 1은 해마유래 세포 HT22 cells에서 글루타메이트(glutamate)에 의해 유도되는 세포사멸에 대한 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물, 100% 메탄올 추출물, 80% 에탄올 추출물, 100% 에탄올 추출물 및 물 추출물의 뇌 신경세포 보호 활성 그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[
실험예
2: 신이 80% 메탄올 추출물의 활성산소(Reactive oxygen species,
ROS
) 억제 효과 측정]
본 실험예에서는 신이 80% 메탄올 추출물의 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 억제 효과를 측정하고자 하였다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% 'penicillin/streptomycin', NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
그 후, HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 제조예 1의 신이 80% 메탄올 추출물 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 량을 측정하였다 (Possel, H., Noack, H., Augustin, W., Keilhoff, G., & Wolf, G. (1997). 2, 7-Dihydrodichlorofluorescein diacetate as a fluorescent marker for peroxynitrite formation. FEBS letters, 416(2), 175-178). 측정값은 'Fluroescence(% of control)'로 나타내었다.
실험결과, 신이 80% 메탄올 추출물은 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 억제 효과를 보이는 것으로 확인되었다. 또한, 신이 80% 메탄올 추출물의 농도가 높을수록 더 우수한 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 억제 효과를 보이는 것으로 확인되었다 (도 2). 도 2는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 ROS량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[
실험예
3: 신이 80% 메탄올 추출물의 세포 내 칼슘
이온량
억제 효과 측정]
본 실험예에서는 신이 80% 메탄올 추출물의 세포 내 칼슘 이온량 억제 효과를 측정하고자 하였다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% 'penicillin/streptomycin', NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
그 후, HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 제조예 1의 신이 80% 메탄올 추출물 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, 세포내 칼슘 이온량을 측정하였다 (Field, M. L., Azzawi, A., Styles, P., Henderson, C., Seymour, A. L., & Radda, G. K. (1994). Intracellular Ca2 + transients in isolated perfused rat heart: measurement using the fluorescent indicator Fura-2AM. Cell calcium, 16(2), 87-100). 측정값은 'Fura-2 Fluroescence(% of control)'로 나타내었다.
실험결과, 신이 80% 메탄올 추출물은 세포내 칼슘 이온량 억제 효과를 보이는 것으로 확인되었다. 또한, 신이 80% 메탄올 추출물의 농도가 높을수록 더 우수한 세포내 칼슘 이온량 억제 효과를 보이는 것으로 확인되었다 (도 3). 도 3은 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포내 칼슘 이온량 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[
실험예
4: 신이 80% 메탄올 추출물의
세포막 전위 측정
]
본 실험예에서는 신이 80% 메탄올 추출물의 세포막 전위를 측정하고자 하였다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% 'penicillin/streptomycin', NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
그 후, HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 제조예 1의 신이 80% 메탄올 추출물 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, 세포막 전위를 측정하였다 (Scaduto, R. C., & Grotyohann, L. W. (1999). Measurement of mitochondrial membrane potential using fluorescent rhodamine derivatives. Biophysical journal, 76(1), 469-477). 측정값은 'Rho. 123 fluroescence(% of control)'로 나타내었다.
실험결과, 신이 80% 메탄올 추출물은 세포막 전위를 증가시키는 것으로 확인되었다 (도 4). 도 4는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 세포막 전위 측정그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[
실험예
5: 신이 80% 메탄올 추출물의 글루타티온 환원효소(
Glutathione
reductase)의 활성 효과 측정]
본 실험예에서는 신이 80% 메탄올 추출물의 글루타티온 환원효소의 활성 효과를 측정하고자 하였다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% 'penicillin/streptomycin', NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
그 후, HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 제조예 1의 신이 80% 메탄올 추출물 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, 글루타티온 환원효소의 활성을 측정하였다 (Carlberg, I., & Mannervik, B. (1984). Glutathione reductase. Methods in enzymology, 113, 484-490.). 측정값은 'Glutathione reductase(% of control)'로 나타내었다.
실험결과, 신이 80% 메탄올 추출물은 글루타티온 환원효소의 양을 증가시키는 것으로 확인되었다 (도 5). 도 5는 신이(Magnoliae flos) 80% 메탄올 추출물 및 글루타메이트(glutamate) 처리된 HT22 cell 에서의 글루타티온 환원효소(Glutathione reductase) 활성그래프이다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[
실시예
1: 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 제조]
본 실시예 1에서는 하기와 같이 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제조하였다.
(1) 산제 제조
신이 80% 메탄올 추출물 1 g에 유당 2 g을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
(2) 정제 제조
신이 80% 메탄올 추출물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 또는 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.
(3) 캡슐제 제조
신이 80% 메탄올 추출물 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
[
실시예
2: 뇌 질환 개선용 식품 조성물 제조]
본 실시예 2에서는 하기와 같이 뇌 질환 개선용 식품 조성물을 제조하였다.
(1) 선식 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 검정콩, 검정깨 및 들깨 각각을 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 후 배전 및 분쇄하여 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 이후, 현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%, 찹쌀 9중량%, 들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%, 신이 80% 메탄올 추출물 3중량%, 영지 0.5중량% 및 지황 0.5중량%을 혼합하여 선식을 제조하였다.
(2) 츄잉껌 제조
껌 베이스 20중량%, 설탕 76.9중량%, 향료 1중량%, 물 2중량% 및 신이 80% 메탄올 추출물 0.1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.
(3) 캔디 제조
설탕 60중량%, 물엿 39.8중량%, 향료 0.1중량% 및 신이 80% 메탄올 추출물 0.1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.
(4) 비스킷 제조
박력 1급 25.59중량%, 중력 1급 22.22중량%, 정백당 4.80중량%, 식염 0.73중량%, 포도당 0.78중량%, 팜쇼트닝 11.78중량%, 암모니움 1.54중량%, 중조 0.17중량%, 중아황산나트륨 0.16중량%, 쌀가루 1.45중량%, 비타민 B1 0.0001 중량%, 비타민 B2 0.0001중량%, 밀크향 0.04중량%, 물 20.6998중량%, 전지분유 1.16중량%, 대용분유 0.29중량%, 제일인산칼슘 0.03중량%, 살포염 0.29중량% 및 분무유 7.27중량%와 신이 80% 메탄올 추출물 1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 비스킷을 제조하였다.
(5) 건강음료 제조
꿀 0.26중량%, 치옥토산아미드 0.0002중량%, 니코틴산아미드 0.0004중량%, 염산리보플라빈나트륨 0.0001중량%, 염산피리독신 0.0001중량%, 이노시톨 0.001중량%, 오르트산 0.002중량%, 물 98.7362중량% 및 신이 80% 메탄올 추출물 1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 건강 음료를 제조하였다.
(6) 건강보조식품 제조
스피루리나 55중량%, 구아검효소 분해물 10중량%, 비타민 B1 염산염 0.01중량%, 비타민 B6 염산염 0.01중량%, DL-메티오닌 0.23중량%, 스테아린산 마그네슘 0.7중량%, 유당 22.2중량% 및 옥수수전분 1.85중량%와 신이 80% 메탄올 추출물 10중량%를 배합하여 통상의 방법으로 정제형 건강보조식품을 제조하였다.
Claims (6)
- 신이(Magnoliae flos)에 80% 메탄올을 첨가하고 실온에서 추출하여 신이 80% 메탄올 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 뇌 질환은 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer’s disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson’s disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나인 것을 특징으로 하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
- 신이(Magnoliae flos)에 80% 메탄올을 첨가하고 실온에서 추출하여 신이 80% 메탄올 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 개선용 식품 조성물의 제조방법.
- 삭제
- 제4항에 있어서,
상기 뇌 질환은 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer’s disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson’s disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나인 것을 특징으로 하는 뇌 질환 개선용 식품 조성물의 제조방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150132054A KR101713809B1 (ko) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | 신이 추출물을 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150132054A KR101713809B1 (ko) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | 신이 추출물을 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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|---|---|---|---|
| KR1020150132054A KR101713809B1 (ko) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | 신이 추출물을 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 |
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| Country | Link |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100328478B1 (ko) | 1998-10-17 | 2002-09-04 | 한국과학기술연구원 | 항천식효능을가지는신이추출물및신이로부터분리한리그난화합물 |
| KR101079980B1 (ko) * | 2009-02-12 | 2011-11-04 | 숙명여자대학교산학협력단 | 신이로부터 분리된 리그난 성분과 그 용도 |
| KR101100278B1 (ko) * | 2010-04-13 | 2011-12-30 | 주식회사 창성 | 생약재 발효 추출물의 제조 방법 및 이로부터 제조된 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR101320975B1 (ko) | 2011-04-28 | 2013-10-30 | 연세대학교 산학협력단 | 신이 활성 화합물들을 유효성분으로 함유하는 골질환 예방 및 치료용 조성물 |
-
2015
- 2015-09-18 KR KR1020150132054A patent/KR101713809B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100328478B1 (ko) | 1998-10-17 | 2002-09-04 | 한국과학기술연구원 | 항천식효능을가지는신이추출물및신이로부터분리한리그난화합물 |
| KR101079980B1 (ko) * | 2009-02-12 | 2011-11-04 | 숙명여자대학교산학협력단 | 신이로부터 분리된 리그난 성분과 그 용도 |
| KR101100278B1 (ko) * | 2010-04-13 | 2011-12-30 | 주식회사 창성 | 생약재 발효 추출물의 제조 방법 및 이로부터 제조된 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR101320975B1 (ko) | 2011-04-28 | 2013-10-30 | 연세대학교 산학협력단 | 신이 활성 화합물들을 유효성분으로 함유하는 골질환 예방 및 치료용 조성물 |
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