KR101649475B1 - 왕호장 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드를 유효성분으로 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 - Google Patents

왕호장 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드를 유효성분으로 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'에 관한 것이다. 본 발명의 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)는 뇌신경세포 보호능을 활성화시켜, 뇌 질환 예방 및 치료 또는 뇌 질환 개선효과를 발휘한다.

Description

왕호장 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드를 유효성분으로 함유하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 뇌 질환 개선용 식품 조성물 {Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of brain disease and food composition for the protection of brain with ergosterol peroxide or the extract of Reynoutria sachalinensis}
본 발명은 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'에 관한 것이다.
최근 생활수준이 향상됨에 따라 평균수명이 연장되어, 노년인구가 차지하는 비중이 높아지고 있다. 한국인의 사망 원인을 살펴보면 뇌졸중, 치매, 정신장애 및 행동장애와 같은 뇌 질환이 암 및 순환기 질환 다음으로 높은 사망원인을 차지하며, 단일 장기의 질환으로 볼 때 가장 높은 사망 원인인 것으로 보고되었다 (한국통계연감, 성·연령계층별사인별 사망자수, 1996).
대표적인 뇌 질환으로는 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke), 허혈장애(ischemia) 등이 있다. 특히, 알츠하이머병, 파킨슨병, 뇌졸중 등을 비롯한 노인성 뇌 질환은 뇌세포 내에서의 라디칼 형성을 수반하는 산화적 스트레스가 주요한 병인에 해당한다 (Smith, M.A., J. Neurochem., 1997, Supp. Sl, 69, 19).
산화적 스트레스는 세포나 조직이 독성 자유 라디칼(toxic free radical)에 의해 손상되는 것을 의미하는 것으로, 산화적 스트레스에 의한 신경 세포 손상(neuronal damage)은 정상적인 노화 과정 중에 발생하는 뇌세포의 손상과 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병, 치매 등 뇌신경조직의 퇴행성 질환 (neurodegenerative disease)에 관련하는 것으로 알려져 있다.
특히, 뇌조직은 자유 라디칼 공격에 대해서 민감한 것으로 알려져 있는데, 이러한 이유는 뇌 신경세포에는 방어 메커니즘이 충분하지 못하며, 산화되기 쉬운 다가불포화지방산(long chain unsaturated fatty acids)이 고농도로 존재하고, 라디칼 형성시 촉매로 이용되는 금속이온(Fe2 +, Cu2 +) 등이 존재하기 때문이다.
퇴행성 뇌신경 질환의 주된 원인은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 축적에 의한 산화적 스트레스에 기인한다는 것으로 보고되어 있으며 (Olney, J. W. et al., Brain Res, 1974, 77, 507-512), 아미노산인 글루타메이트(glutamate)는 중추신경계에서 주요한 흥분성 신경전달물질로 과도한 글루타메이트(glutamate) 농도는 N-아세틸 시스테인(N-acetyl cystein) 흡수를 억제하여 산화적 스트레스를 유발시킨다.
현재까지 세포 내에서 생성되는 산소 라디칼에 대한 항산화 보호 측면에서 여러가지 천연 항산화제의 효과가 보고되었는데, 주로 한약재나 식품성분의 항산화 기능에 관한 것으로, 간 조직에 관한 연구가 대부분이며 (Park, J.C. et al., J. Korean Soc. Food Nutr., 1996, 25, 588-592; Kim, M.R. et al., J. Food. Sci. Nutr., 1997, 2, 207; Kim, Mee Ree, et al., Food Res. Intl., 1999, 31(5), 389-394), 생물자원을 이용한 뇌 보호 목적으로 수행 된 연구는 미비한 실정이다.
왕호장(Reynoutria sachalinensis (F. Schmidt) Nakai (syn: Polygonum sachalinensis and Fallopia sachalinensis, common name: giant knotweed))은 마디풀과로, 예로부터 관절염, 황달, 월경불순, 치아 외상, 감기, 화상 등의 치료에 사용되어 왔다. 그러나, 현재까지 왕호장 및 이로부터 분리한 화합물을 이용한 뇌 질환 예방 또는 치료에 대한 효능은 확인된 바가 없다.
대한민국 공개특허 제10-2014-0115576호(공개일자 2014.10.01)에는, 왕호장의 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 약학 조성물 또는 건강기능식품에 대해 기재되어 있다. 대한민국 등록특허 제10-1093413호(등록일자 2011.12.06)에는, 고구마(Ipomoea batatas) 추출물 또는 그로부터 분리된 2,4-다이-털트-뷰틸페놀(2,4-di-tertbutylphenol)을 포함하는 뇌 질환 예방 및 치료용 조성물에 대해 기재되어 있다.
본 발명은 뇌신경세포 보호 활성이 있는 천연물을 유효성분으로 함유하는 '뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물' 및 '뇌 질환 개선용 식품 조성물'을 개발하여 제공하고자 한다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112015051941628-pat00001
본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)는 바람직하게 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물로부터 분리되는 것이 좋다. 왕호장 추출물로부터 분리된 에르고스테롤 퍼옥사이드는 뇌신경세포 보호능을 발휘한다.
한편, 본 발명은 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 왕호장 추출물은 바람직하게 메탄올을 용매로 하여 왕호장 줄기로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계; 추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후 물에 용해시키는 단계; 및 물에 용해한 후, n-헥산을 첨가하여 분획하는 단계; 로부터 수득한 n-헥산 분획물인 것이 좋다.
또한, 본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 왕호장 추출물은 바람직하게 메탄올을 용매로 하여 왕호장 꽃으로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계; 추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후, 물에 용해시키는 단계; 물에 용해한 후, n-헥산을 첨가하여 분획하고, 1차 물층을 분리하는 단계; 상기 분리한 1차 물층에 클로로포름을 첨가하여 분획하고, 2차 물층을 분리하는 단계; 및 상기 분리한 2차 물층에 에틸아세테이트를 첨가하여 분획하는 단계; 로부터 수득한 에틸아세테이트 분획물인 것이 좋다.
또한, 본 발명의 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 뇌 질환은 일 예로 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나일 수 있다.
본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물에 있어서, 상기 화학식 1의 에르고스테롤 퍼옥사이드 또는 왕호장 추출물은 바람직하게 약학 조성물 대비 0.00001~60 중량% 포함되는 것이 좋다. 0.00001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 60 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으며, 이중 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화 하는 것이 좋다. 구체적인 제형의 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 리모나데제(LEMONADES), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제(ELIXIRS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPENSIONS), 전제(DECOCTIONS), 정제(TABLETS), 좌제(SUPPOSITORIES), 주사제(INJECTIONS), 주정제(SPIRITS), 카타플라스마제(CATAPLSMA), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 트로키제(TROCHES), 틴크제(TINCTURES), 파스타제(PASTES), 환제(PILLS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.
한편, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일 예로, 본 발명의 뇌 질환 예방 및 치료용 약학 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때, 1일 0.00001 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여 가능하다. 그러나 상기의 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며, 복용자의 상태에 따라 의사의 처방에 의해 변화될 수 있다.
한편, 본 발명은 하기 화학식 1의 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112015051941628-pat00002
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)는 바람직하게 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물로부터 분리되는 것이 좋다. 왕호장 추출물로부터 분리된 에르고스테롤 퍼옥사이드는 뇌신경세포 보호능을 발휘한다.
한편, 본 발명은 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌 질환 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 왕호장 추출물은 바람직하게 메탄올을 용매로 하여 왕호장 줄기로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계; 추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후 물에 용해시키는 단계; 및 물에 용해한 후, n-헥산을 첨가하여 분획하는 단계; 로부터 수득한 n-헥산 분획물인 것이 좋다.
또한, 본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 왕호장 추출물은 바람직하게 메탄올을 용매로 하여 왕호장 꽃으로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계; 추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후, 물에 용해시키는 단계; 물에 용해한 후, n-헥산을 첨가하여 분획하고, 1차 물층을 분리하는 단계; 상기 분리한 1차 물층에 클로로포름을 첨가하여 분획하고, 2차 물층을 분리하는 단계; 및 상기 분리한 2차 물층에 에틸아세테이트를 첨가하여 분획하는 단계; 로부터 수득한 에틸아세테이트 분획물인 것이 좋다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 뇌 질환은 일 예로 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나일 수 있다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 화학식 1의 에르고스테롤 퍼옥사이드 또는 왕호장 추출물은 바람직하게 대사성 질환 개선용 식품 조성물 대비 0.00001~60 중량% 포함되는 것이 좋다. 0.00001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 60 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
본 발명의 뇌 질환 개선용 식품 조성물은 일 예로, 육류, 곡류, 카페인 음료, 일반음료, 초콜렛, 빵류, 스낵류, 과자류, 사탕, 피자, 젤리, 면류, 껌류, 유제품류, 아이스크림류, 알코올성 음료, 술, 비타민 복합제 및 그 밖의 건강보조식품류 중 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물 또는 이로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)는 뇌신경세포 보호능을 발휘하여, 뇌 질환 예방 또는 치료 및 뇌 질환 개선 효과를 발휘한다.
도 1은 왕호장 추출물로부터 분획물을 얻는 과정을 보여준다.
도 2는 왕호장 각 부위의 분획층(분획물)에 의한 뇌신경세포 보호 활성을 측정한 그래프이다. 'H'는 n-헥산(n-헥산(n-hexane) 분획물이고, 'C'는 클로로포름(CHCl3) 분획물이고, 'E'는 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물이며, 각 결과는 3회 실시한 것의 '평균값±표준편차'로 나타내었다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001)
도 3은 MTT assay를 통해 왕호장으로부터 분리된 화합물의 뇌신경세포 보호 활성을 측정한 그래프이며, 각 결과는 3회 실시한 것의 평균값±표준편차로 나타내었다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 또는 실험예를 들어 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[ 제조예 1 내지 4: 왕호장 부위별 추출물 제조]
왕호장을 줄기, 잎, 꽃, 뿌리 부위로 나누어, 줄기는 2.8 kg, 잎은 1.2 kg, 꽃은 0.19 kg, 뿌리는 0.59 kg을 준비하였다.
상기 각 부위별 왕호장 '100 g 당 1 L'의 농도가 되도록 80% 메탄올을 첨가하여 실온에서 90분간 3회 반복 추출하였다. 추출 후, 건조하여 하기 표 1과 같이 왕호장 부위별 추출물을 제조하였다.
왕호장 부위별 추출물 추출물의 양(g)
제조예 1 왕호장 줄기 추출물 258.55
제조예 2 왕호장 잎 추출물 101.64
제조예 3 왕호장 꽃 추출물 27.45
제조예 4 왕호장 뿌리 추출물 65.96
[ 제조예 5 내지 16 : 왕호장 줄기 분획물 제조]
상기 제조예 1 내지 4에서 수득한 왕호장 줄기 추출물 258.55 g, 왕호장 잎 추출물 101.64 g, 왕호장 꽃 추출물 27.45 g, 왕호장 뿌리 추출물 65.96 g을 각각 '100 g 당 증류수 1 L'의 농도가 되게 증류수에 현탁시킨 후, 극성이 낮은 n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸아세테이트(EtOAc) 순으로 차례대로 분획하였다.
이때, 부위별 추출물과 n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl3), 에틸아세테이트(EtOAc)은 1:1의 비율로 사용하여 분획물을 수득하였다.
'줄기 추출물'의 경우, n-헥산(n-hexane) 38.45 g, 클로로포름(CHCl3) 1.26 g, 에틸아세테이트(EtOAc) 6.76 g의 분획물을 수득하였고, '잎 추출물'의 경우, n-헥산(n-hexane) 7.21 g, 클로로포름(CHCl3) 9.67 g, 에틸아세테이트(EtOAc) 29.41 g을, '꽃 추출물'의 경우, n-헥산(n-hexane) 0.59 g, 클로로포름(CHCl3) 0.6 g, 에틸아세테이트(EtOAc) 6.73 g을, '뿌리 추출물'의 경우, n-헥산(n-hexane) 1.06 g, 클로로포름(CHCl3) 0.87 g, 에틸아세테이트(EtOAc) 17.56 g을 각각 수득하였다 (도 1, 표 2 참조 요망).
용매 왕호장 부위별 분획물 분획물의 양(g)
제조예 5 n-헥산(n-hexane)
왕호장 줄기
n-헥산 분획물		 38.45
제조예 6 왕호장 잎
n-헥산 분획물		 7.21
제조예 7 왕호장 꽃
n-헥산 분획물		 0.59
제조예 8 왕호장 뿌리
n-헥산 분획물		 1.06
제조예 9 클로로포름
(CHCl3)		 왕호장 줄기
클로로포름 분획물		 1.26
제조예 10 왕호장 잎
클로로포름 분획물		 9.67
제조예 11 왕호장 꽃
클로로포름 분획물		 0.6
제조예 12 왕호장 뿌리
클로로포름 분획물		 0.87
제조예 13 에틸아세테이트
(EtOAc)		 왕호장 줄기
에틸아세테이트 분획물		 6.76
제조예 14 왕호장 잎
에틸아세테이트 분획물		 29.41
제조예 15 왕호장 꽃
에틸아세테이트 분획물		 6.73
제조예 16 왕호장 뿌리
에틸아세테이트 분획물		 17.56
[ 실험예 1 : 왕호장 추출물의 뇌신경세포 보호 활성 측정]
본 실험예에서는 왕호장 추출물의 뇌신경세포 보호 활성을 측정하고자, 상기 제조예 5 내지 16에서 제조한 왕호장 분획물을 사용하여 'MTT assay'를 실시하고자 하였다. 'MTT assay'는 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 'MTT tetrazolium'을 청자색을 띄는 비수용성의 'MTT formazan (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)'으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하여, 살아있는 세포를 염색한 후 녹여내 흡광도를 측정하는 검사법이다.
생쥐 해마 유래 세포주인 HT22 세포는 서울대학교로부터 분양받아 사용하였다. HT22세포는 10%(v/v) fetal bovine serum (FBS), 1% penicillin/streptomycin, NaHCO3 2 mg/ml 및 15 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)가 포함된 DMEM 배지를 5% CO2배양기 내에서 37℃에서 배양하여 사용하였다.
HT22 cell을 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 처리 전, 상기 제조예 5 내지 16의 왕호장 부위별 분획물 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml와 양성대조군(positive control)인 트롤록스(Trolox) 50 uM를 각각 첨가하였다. 첨가 후, 1시간 배양하고, 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다.
처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, MTT 용액을 첨가하였다. 첨가 3시간 후, DMSO에 용해하고, 'ELISA reader'를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 'relative protection(%)'로 나타내었다.
실험 결과, 왕호장 부위별 분획층 중 '줄기 부위의 n-헥산층 (제조예 5)'과 '꽃 부위의 에틸아세테이트층 (제조예 15)'의 뇌신경세포 보호 활성이 좋은 것으로 확인되었다 (도 2). 도 2는 왕호장 각 부위의 분획층(분획물)에 대한 뇌신경세포 보호 활성을 측정한 그래프이다. 'H'는 n-헥산(n-헥산(n-hexane) 분획물이고, 'C'는 클로로포름(CHCl3) 분획물이고, 'E'는 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물이며, 각 결과는 3회 실시한 것의 평균값±표준편차로 나타내었다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001)
[ 제조예 17 : 왕호장으로부터 단일 화합물의 분리]
본 실험예에서는 상기 '줄기 부위의 n-헥산층 (제조예 5)'에 대해 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography, Sephadex LH20 column chromatography, MPLC)를 적용하여 '에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)', '1-데카놀(1-decanol)'을 얻었으며, 상기 '꽃 부위의 에틸아세테이트층 (제조예 15)'에 대해 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography, Sephadex LH20 column chromatography, MPLC)를 적용하여 '아이소퀘르시트린(isoquercitrin)'을 수득했다. 상기 수득한 화합물은 NMR 스펙트럼 데이터를 통해 그 구조를 확인 및 동정하였다.
[ 실험예 2 : MTT assay 를 통한 분리 화합물의 뇌신경세포 보호 활성 측정]
본 실험예에서는 상기에서 분리한 화합물들의 뇌신경세포 보호 활성을 측정하고자, 상기 실험예 2의 왕호장으로부터 분리한 에르고스테롤 퍼옥사이드, 1-데카놀, 아이소퀘르시트린을 사용하여 'MTT assay'를 실시하였다.
HT22 세포를 48 웰 플레이트(well plate)에 3×104 cell/well을 시딩(seeding)한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 독성물질인 글루타메이트(glutamate) 처리 전, 에르고스테롤 퍼옥사이드, 1-데카놀, 아이소퀘르시트린을 1 uM, 10 uM, 100 uM 씩 각각 첨가하였다. 양성대조군(positive control)으로는 트롤록스(Trolox) 50 uM를 첨가하였다.
상기 각 시료 첨가 후, 1시간 배양하고, 글루타메이트(glutamate) 30 mM를 30 ㎕ 처리하였다. 처리 후, 24시간 동안 37℃에서 배양하고, MTT 용액을 첨가하였다. 첨가 3시간 후, DMSO에 용해하고, 'ELISA reader'를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 'relative protection(%)'로 나타내었다.
실험 결과, 본 발명의 '에르고스테롤 퍼옥사이드' 10 uM 처리 샘플에서 가장 우수한 뇌신경 세포 보호 활성을 나타내는 것으로 확인되었다 (도 3). 도 3은 왕호장으로부터 분리된 에르고스테롤 퍼옥사이드(ergosterol peroxide)의 뇌신경세포 보호 활성을 측정한 그래프이며, 각 결과는 3회 실시한 것의 평균값±표준편차로 나타내었다 (*ｐ<0.05, **ｐ<0.01, ***ｐ<0.001).
[ 실시예 1: 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 제조]
본 실시예 1에서는 하기와 같이 뇌 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제조하였다.
(1) 산제 제조
왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 1 g에 유당 2 g을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
(2) 정제 제조
왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 또는 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.
(3) 캡슐제 제조
왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 100 ㎎, 옥수수전분 100 ㎎, 유당 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 2 ㎎을 혼합한 후 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
[ 실시예 2: 뇌 질환 개선용 식품 조성물 제조]
본 실시예 2에서는 하기와 같이 뇌 질환 개선용 식품 조성물을 제조하였다.
(1) 선식 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 검정콩, 검정깨 및 들깨 각각을 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 후 배전 및 분쇄하여 입도 60메쉬의 분말로 준비하였다. 이후, 현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%, 찹쌀 9중량%, 들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%, 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 3중량%, 영지 0.5중량% 및 지황 0.5중량%을 혼합하여 선식을 제조하였다.
(2) 츄잉껌 제조
껌 베이스 20중량%, 설탕 76.9중량%, 향료 1중량%, 물 2중량% 및 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 0.1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.
(3) 캔디 제조
설탕 60중량%, 물엿 39.8중량%, 향료 0.1중량% 및 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 0.1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.
(4) 비스킷 제조
박력 1급 25.59중량%, 중력 1급 22.22중량%, 정백당 4.80중량%, 식염 0.73중량%, 포도당 0.78중량%, 팜쇼트닝 11.78중량%, 암모니움 1.54중량%, 중조 0.17중량%, 중아황산나트륨 0.16중량%, 쌀가루 1.45중량%, 비타민 B1 0.0001 중량%, 비타민 B2 0.0001중량%, 밀크향 0.04중량%, 물 20.6998중량%, 전지분유 1.16중량%, 대용분유 0.29중량%, 제일인산칼슘 0.03중량%, 살포염 0.29중량% 및 분무유 7.27중량%와 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 비스킷을 제조하였다.
(5) 건강음료 제조
꿀 0.26중량%, 치옥토산아미드 0.0002중량%, 니코틴산아미드 0.0004중량%, 염산리보플라빈나트륨 0.0001중량%, 염산피리독신 0.0001중량%, 이노시톨 0.001중량%, 오르트산 0.002중량%, 물 98.7362중량% 및 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 1중량%를 배합하여 통상의 방법으로 건강 음료를 제조하였다.
(6) 건강보조식품 제조
스피루리나 55중량%, 구아검효소 분해물 10중량%, 비타민 B1 염산염 0.01중량%, 비타민 B6 염산염 0.01중량%, DL-메티오닌 0.23중량%, 스테아린산 마그네슘 0.7중량%, 유당 22.2중량% 및 옥수수전분 1.85중량%와 왕호장 추출물 또는 에르고스테롤 퍼옥사이드 10중량%를 배합하여 통상의 방법으로 정제형 건강보조식품을 제조하였다.

Claims (12)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 뇌질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법으로서,
    메탄올을 용매로 하여 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 꽃으로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계 (A);
    추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후, 물에 용해시키는 단계 (B);
    상기 단계 (B) 후, n-헥산을 첨가하여 분획하고, 1차 물층을 분리하는 단계 (C);
    상기 분리한 1차 물층에 클로로포름을 첨가하여 분획하고, 2차 물층을 분리하는 단계 (D); 및
    상기 분리한 2차 물층에 에틸아세테이트를 첨가하고, 분획하여 왕호장 꽃 에틸아세테이트 분획물을 수득하는 단계 (E);를 포함하고,
    상기 뇌질환은,
    치매, 알츠하이머 병(Alzheimer’s disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson’s disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나인 것을 특징으로 하는 뇌질환 예방 또는 치료용 약학 조성물의 제조방법.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 뇌질환 개선용 식품 조성물의 제조방법으로서,
    메탄올을 용매로 하여 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 꽃으로부터 메탄올 추출물을 추출하는 단계 (A);
    추출된 메탄올 추출물을 농축 또는 건조시켜, 농축물 또는 건조물을 수득한 후, 물에 용해시키는 단계 (B);
    상기 단계 (B) 후, n-헥산을 첨가하여 분획하고, 1차 물층을 분리하는 단계 (C);
    상기 분리한 1차 물층에 클로로포름을 첨가하고 분획하여, 2차 물층을 분리하는 단계 (D); 및
    상기 분리한 2차 물층에 에틸아세테이트를 첨가하고 분획하여, 왕호장 꽃 에틸아세테이트 분획물을 수득하는 단계 (E);를 포함하고,
    상기 뇌질환은,
    치매, 알츠하이머 병(Alzheimer’s disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson’s disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia) 중 선택되는 하나인 것을 특징으로 하는 뇌질환 개선용 식품 조성물의 제조방법.
  12. 삭제
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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JP2011236184A (ja) * 2010-05-13 2011-11-24 Unitika Ltd 脳機能改善剤
KR101093413B1 (ko) 2009-10-05 2011-12-14 고려대학교 산학협력단 뇌 신경 세포 보호 활성을 갖는 고구마 추출물 및 그의 용도
KR20140115576A (ko) 2013-03-21 2014-10-01 강원대학교산학협력단 왕호장 추출물 및 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080088163A (ko) * 2007-03-29 2008-10-02 경희대학교 산학협력단 호장근 분획물을 함유하는 신경 보호용 약학적 조성물
KR101093413B1 (ko) 2009-10-05 2011-12-14 고려대학교 산학협력단 뇌 신경 세포 보호 활성을 갖는 고구마 추출물 및 그의 용도
JP2011236184A (ja) * 2010-05-13 2011-11-24 Unitika Ltd 脳機能改善剤
KR20140115576A (ko) 2013-03-21 2014-10-01 강원대학교산학협력단 왕호장 추출물 및 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Фундаментальные исследования., 2013., Vol.10.* *

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